Вы находитесь на странице: 1из 3

Международный медицинский журнал, 2011,  № 2

УДК 616.831.9-002.3-07:577.213.3

Полимеразная цепная реакция в диагностике острых


менингитов бактериальной и вирусной этиологии
Доц. П. В. Нартов

Харьковская академия последипломного образования

Показана эффективность полимеразной цепной реакции для выявления в цереброспинальной жидко-


сти Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae и Haemophilus influenzae b, Enterovirus, Herpes
simplex 1/2, Epstein — Barr virus, Cytomegalovirus, Humаn herpes virus 6 как метода диагностики
острых менингитов, который позволяет значительно повысить частоту расшифровки этиологии
гнойных и серозных менингитов.
Ключевые слова: полимеразная цепная реакция, цереброспинальная жидкость, гнойный менингит,
серозный менингит.

Инфекционные заболевания нервной системы менингитов (ВМ) большинство авторов считают


представляют собой особую область клинической энтеровирусные. Все представители энтеровирусов
медицины, находящуюся на стыке интересов ин- вызывают менингиты, но наиболее часто — вирусы
фекционистов и  невропатологов. В  структуре Коксаки и ЕСНО. Нередко причинами ВМ явля-
общей патологии нервной системы удельный вес ются вирусы семейства герпес (простой герпес 1-го,
инфекции составляет около 40 %. При этом ме- 2-го типа, ветряная оспа, цитомегаловирус, вирус
нингиты различной этиологии являются наиболее Эпштейна  — Барр, вирус герпеса человека 6-го
частыми клиническими формами нейроинфекци- типа), а также парамиксовирусы (эпидемический
онных заболеваний. Клиническая картина острых паротит, парагрипп, респираторно-синцитиальный
менингитов (ОМ) различной этиологии характе- вирус), арбовирус (менингеальная форма клеще-
ризуется, как правило, выраженной тяжестью те- вого энцефалита), ареновирус (лимфоцитарный
чения, частотой развития неотложных состояний, хориоменингит) [5–8].
высоким процентом летальности [1–4]. Традиционно для лабораторной диагностики
По определению В. С. Лобзина [4], под тер- БМ используют метод культивирования микроор-
мином «менингит» следует понимать полиэтиоло- ганизмов из образцов ЦСЖ или крови больного.
гическое инфекционное заболевание, характеризу- Оставаясь «золотым стандартом» диагностики,
ющееся воспалением мягкой мозговой оболочки этот метод имеет серьезные ограничения, обуслов-
и  сопровождающееся явлениями общей инфек- ленные применением антибактериальной терапии
ционной интоксикации, синдромом повышенно- на догоспитальном этапе. Согласно данным Цен-
го внутричерепного давления, менингеальным трального научно-исследовательского института
синдромом, а  также воспалительными измене- эпидемиологии (Россия), в  группе больных, по-
ниями в  цереброспинальной жидкости (ЦСЖ). лучавших антибиотики на догоспитальном этапе,
Менингиты классифицируются по характеру из- бактерии высевались из ЦСЖ в  30 % случаев,
менения ЦСЖ, типу возбудителя инфекции, про- а у пациентов, не получивших антибиотики,— как
исхождению (первичные, метастатические), тече- минимум в 60 %. Кроме того, бактериологическая
нию и  анатомической локализации. Наибольшее диагностика занимает не менее 48  ч [5, 7, 8].
практическое значение имеет деление менингитов Трудности этиологической расшифровки ВМ
по этиологии заболевания и  типу ликворных из- связаны со сложностью и длительностью лабора-
менений: гнойные (ГМ) (бактериальные) и  се- торных исследований. Вирусологический метод
розные (СМ) (чаще вирусные). Формулирование является дорогостоящим, трудоемким и  в основ-
диагноза менингита только по характеру ликво- ном применяется в научных целях. Серологическая
ра (гнойный или серозный) без идентификации лабораторная диагностика имеет существенные
причины заболевания на сегодняшний момент недостатки: IgM могут циркулировать в крови от
рассматривается как неудовлетворительная диа- нескольких месяцев до нескольких лет, у иммуно-
гностика. Если клинический диагноз менингита скомпрометированных пациентов при рецидивах
чаще всего не представляет для врача особых за- вирусной инфекции антитела к вирусу (как IgM,
труднений, то ранняя расшифровка его этиологии так и  IgG) могут не выявляться [3, 6, 9].
остается в  большинстве случаев нерешенной за- Таким образом, установление этиологической
дачей. Этиологической причиной гнойных бакте- роли конкретного возбудителя при ОМ являет-
риальных менингитов (БМ), как правило, более ся непростой задачей и  в условиях ограничения
чем в 80 % случаев являются Neisseria meningitidis, стандартных методов диагностики обосновывает
Streptococcus pneumoniae и  Haemophilus influenzae необходимость внедрения в клиническую практику
тип b. Одним из частых видов серозных вирусных новых методов идентификации заболевания [2, 5].

©  П. В. Нартов, 2011 85
Инфекционные болезни

В последние годы определенные перспективы в  56 случаях: выявлено присутствие ДНК N.  me­
в  этиологической диагностике нейроинфекций nin­gitidis у  38 больных, Str. pneumoniae  — у  17
связывают с развитием молекулярно-генетических и  H.  influenzae типа b  — у  1 больного.
технологий детекции нуклеиновых кислот возбу- Из 100 обследованных СМ (вторая группа)
дителей инфекционных заболеваний в  ликворе, методом ПЦР расшифрована этиология менингита
в частности технологии полимеразной цепной ре- у  49 больных: в  26 случаях был диагностирован
акции (ПЦР), которая позволяет получить резуль- энтеровирусный менингит, в 23 — герпесвирусный
тат через несколько часов от начала исследования, менингит. Этиологическая структура герпесвирус-
не требует присутствия живых микроорганизмов ных менингитов была распределена следующим
в  исследуемом материале, а  только остатков их образом: HSV-1/2 — 9 больных, EBV — 4, CMV —
генетического материала, имеет чувствительность 5 и  HHV-6  — 5 больных.
и специфичность, достигающие 100 %. ПЦР широ- Все образцы ЦСЖ больных контрольной
ко используется для диагностики ОМ в зарубеж- группы были отрицательными по методу ПЦР на
ных странах, но этот метод пока еще не получил ДНК N. meningitidis, Str. pneumoniae и H. influenzae
значительного распространения в Украине [8, 10]. типа b, HSV-1/2, CMV, EBV, HHV-6 и РНК EV
Целью нашей работы была оценка на клиниче- (таблица).
ском материале диагностической эффективности
метода ПЦР для выявления в ЦСЖ N. meningitidis, Диагностическая эффективность
Str. Pneumoniae, H. influenzae типа b, Enterovirus ПЦР-исследования ЦСЖ больных ОМ
(EV), Herpes simplex 1/2 (HSV-1/2), Epstein  —
Barr virus (EBV), Cytomegalovirus (CMV), Humаn Первая Вторая Третья
группа, группа, группа,
herpes virus (HHV-6). Вирус
n = 85, n = 100, n = 9,
Было исследовано 194 образца ЦСЖ, взя- абс. ч. (%) абс. ч. (%) абс. ч. (%)
тых у  больных при госпитализации в  клини-
ку кафедры инфекционных болезней ХМАПО N. meningitidis 38 (22,6) — 0
с  диагнозом ГМ и СМ. Образцы ЦСЖ забирали Str. pneumoniae 17 (10,1) — 0
в  объеме 0,5 мл у  больных при госпитализации H. influenzae 1 (0,6) — 0
в  стационар в  рамках обычной диагностической
EV — 26 (26) 0
спинномозговой пункции. Для предотвращения
ложноположительных результатов использовали HSV-1/2 — 9 (9) 0
одноразовые пункционные иглы и  стерильные EBV — 4 (4) 0
апирогенные одноразовые пробирки типа «Эппен- CMV — 5 (5) 0
дорф». Возраст больных колебался в пределах от
HHV-6 — 5 (5) 0
18 до 65 лет. Больные были распределены на три
группы на основании результатов традиционного
(бактериологического, вирусологического и серо- Исследования ЦСЖ 185 больных ОМ мето-
логического) исследования: дом ПЦР позволили установить этиологический
первая группа (n  =  85) — больные ГМ неуста- диагноз в  105 случаях (56,8 %). Положительные
новленной этиологии (культура ЦСЖ и крови — результаты ПЦР были получены в  56 случаях
отрицательная); (30,3 %) ГМ и  49 (26,5 %) СМ. Важно отметить,
вторая группа (n  =  100)  — больные СМ не- что чаще всего ГМ неустановленной этиологии
установленной этиологии (серологические и  ви- был вызван N. meningitidis (67 %), а СМ  — EV
русологические исследования — отрицательные); (52 %), что имеет как клиническое, так и  эпиде-
третья группа (n  =  9)  — контрольная груп- миологическое значение.
па, больные гнойным БМ, у  которых культура Таким образом, выявление ДНК и РНК ин-
ЦСЖ была положительной для Staphylococcus фекционных агентов с  использованием ПЦР яв-
aureus (n  =  4), Staphylococcus saprophyticus (n  =  1), ляется одним из наиболее достоверных методов
Staphylococcus epidermidis (n  =  2), Neisseria mucosa лабораторной диагностики инфекционных забо-
(n  =  1), Klebsiella pneumoniae (n  =  1). леваний. ПЦР позволяет быстро и  эффективно
Для проведения ПЦР ДНК-праймеры к генам- обнаружить присутствующий в  клиническом об-
мишеням S16 рРНК N. meningitidis, Str. pneumoniae разце фрагмент генома возбудителя и  обладает
и  H. influenzae типа b были подобраны с  исполь- определенными преимуществами перед другими
зованием программы GeneRunner 3.0 и синтезиро- методами лабораторной диагностики ГМ и СМ.
ваны фирмой «Литех» (Россия). При выявлении Применение ПЦР улучшает диагностику ГМ
РНК EV и ДНК герпесвирусов (HSV-1/2, CMV, и СМ, выявляя в ЦСЖ микроорганизмы бакте-
EBV и  HHV-6) методом ПЦР с  обратной транс- риальной и  вирусной этиологии, содержащиеся
крипцией с гибридизационно-флуоресцентной де- в  единичных количествах или в  нежизнеспособ-
текцией продуктов амплификации использовали ном состоянии. Результаты ПЦР-исследований
наборы реагентов «Амплисенс» (Россия). позволяют ставить вопрос о  включении данного
При исследовании ЦСЖ 85 больных первой метода в  алгоритм обследования больных с ОМ
группы ПЦР-диагностика была положительной различной этиологии.

86
Инфекционные болезни

Литература
1. Этиология и лабораторная диагностика гнойных бак- 7. Венгеров  Ю.  Я., Нагибина  М.  В., Мигманов  Т.  Э.
териальных менингитов / И. С. Королева, Г. В. Бело- Актуальные проблемы диагностики и  лечения бак-
шицкий, И. Н. Лыткина, Г. Г. Чистякова // Эпидемиоло- териальных менингитов // Лечащий врач.— 2007.—
гия и инфекционные болезни.— 2005.— № 3.— С. 5–9. №  9.— С.  31–35.
2. Королева  И.  С., Белошицкий  Г.  В. Менингококковая 8. Обзор практических рекомендаций по ведению паци-
инфекция и  гнойные бактериальные менингиты  / ентов с бактериальным менингитом Американского
Под ред. В. И.  Покровского.— М.: Мед. информ. общества инфекционных болезней  / И. А. Карпов,
агентство, 2007.— 112  с. А. С. Иванов, И. В. Юркевич и др. // Клин. микро-
3. Сорокина М. Н., Скрипченко Н. В. Вирусные энцефали- биол. антимикроб. химиотер.— 2006.— Т.  8, №  3.—
ты и менингиты у детей.— М.: Медицина, 2004.— 416 с. С.  217–242.
4. Лобзин Ю. В., Пилипенко В. В., Громыко Ю. Н. Менин- 9. Современные методы иммуно- и  генодиагностики
гиты и энцефалиты.— СПб.: Фолиант, 2003.— 128 с. в клинической практике / С. В. Сучков, О. В. Моска-
5. Мікробіологічна діагностика менінгококової інфек- лец, Н. Е. Черепахина и др. // Тер. архив.— 2004.—
ції та гнійних бактеріальних менінгітів: Методичні №  4.— С.  78–83.
вказівки, затверджені Наказом МОЗ України № 170 10. Carbonnelle E. Laboratory diagnosis of bacterial menin-
від 15.04.2005 р.— К., 2005.— 42  с. gitis: usefulness of various tests for the determination
6. Деконенко  Е.  П. Заболевания нервной системы, вы- of the etiological agent // Med. Mal. Infect.— 2009.—
зываемые вирусами герпеса // Клин. неврология.— Vol.  39, №  7–8.— P.  581–605.
2007.— №  4.— С.  32–37.

Полімеразна ланцюгова реакція в діагностиці гострих менінгітів


бактеріальної та вірусної етіології
П. В. Нартов

Показано ефективність полімеразної ланцюгової реакції для виявлення в цереброспінальній рідині


Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae і  Haemophilus influenzae b, Enterovirus, Herpes
simplex 1/2, Epstein  — Barr virus, Cytomegalovirus, Humаn herpes virus 6 як методу діагностики
гострих менінгітів, що дозволяє значно підвищити частоту розшифровки етіології гнійних і сероз-
них менінгітів.
Ключові слова: полімеразна ланцюгова реакція, цереброспінальна рідина, гнійний менінгіт, серозний
менінгіт.

Polymerase chain reaction in diagnosis of acute meningitis


of bacterial and viral origin
P. V. Nartov

The efficacy of polymerase chain reaction in revealing Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae
and Haemophilus influenzae b, Enterovirus, Herpes simplex 1/2, Epstein – Barr virus, Сytomegalovirus,
Human herpes virus-6 in the cerebrospinal fluid as a method of diagnosis of acute meningitis allowing
to increase the frequency of deciphering the etiology of purulent and serous meningitis is shown.
Key words: polymerase chain reaction, cerebrospinal fluid, purulent meningitis, serous meningitis.
Поступила 15.03.2011

87