Identificación de microorganismos presentes en

lixiviados de desechos domésticos

Valeria Tabares , Jose David Pereiro , Jose Luis Parra

a a a, b

vale-tabares@hotmail.com, josedavidpereiro@gmail.com, joseparra1997@gmail.com

a
Departamento de Ingeniería Bioquímica, Universidad Icesi, Cali, Colombia
b
Departamento de Ingeniería Industrial, Universidad Icesi, Cali, Colombia

Laboratorio de Microbiología Industrial

Santiago de Cali, 6 de septiembre de 2019

ABSTRACT

Tomando aproximadamente 20ml de lixiviados de desechos de cocina se realizó una técnica de

siembra en cinco medios de cultivo diferentes con el objetivo de reconocer la presencia de distintos
microorganismos. Luego de 72 horas, se identificaron diversas poblaciones microbianas tales como
bacterias coliformes, amilolíticas, proteolíticas, y pseudomonas. Además, mediante la preparación de seis
diluciones, se realizó un recuento en superficie de la población microbiana presente en la muestra del
lixiviado; con el cual se concluyó la necesidad de diluir aún más las muestras debido a la incapacidad de
ejecutar el recuento a raíz del desmesurado crecimiento microbiano. Lo anterior da muestra, y permite
inferir el elevado número de microorganismos presentes en el lixiviado de desechos de hogares comunes
de la ciudad de Cali. Para cuestiones experimentales también se realizaron tinciones Gram que evidenciaron
que Escherichia coli es un bacilo Gram negativo, y Staphylococcus aureus un coco Gram positivo.

Palabras Clave: Siembra, Cultivo, Bacterias, Lixiviados, Tinción de Gram.

Introducción
Los medios de cultivo se componen de
soluciones que contienen los nutrientes
imprescindibles para permitir el crecimiento
tanto de microorganismos, células, virus o tejidos
biológicos en general. Dependiendo del tipo de
cultivo que se quiera llevar a cabo, el medio
constará de nutrientes y condiciones específicas
para tal fin. Estos medios de cultivo se pueden
obtener comercialmente o se pueden preparar en
el laboratorio (Barrero, s.f).
Los medios de cultivo hacen posible el análisis de
muestras de interés industrial, como lo son los
lixiviados. Los lixiviados son líquidos oscuros
producto de la descomposición de materia
orgánica qué, con la precipitación de agua, son
disueltos o arrastrados al fondo de los
contenedores de desechos. Es importante
mencionar que la degradación de los residuos
orgánicos ocurre tanto en procesos aeróbicos
como anaeróbicos por parte de microorganismos.
La descomposición de estos compuestos
mediante los procesos mencionados produce
numerosas cantidades de toxinas perjudiciales
para otros organismos o para el medio ambiente,
como lo son por ejemplo el amoniaco, y el ácido
sulfhídrico. Por tales razones, y dado el acelerado
crecimiento demográfico, es de carácter
prioritario el mejoramiento de los servicios
sanitarios, lo cual implica nuevas tecnologías y
mejores métodos del procesamiento de los
desechos del hogar (De Jesús, 2018). Lo anterior
abre un gran campo tanto investigativo como
aplicativo para la microbiología y la ingeniería
bioquímica, ya que un método alternativo para la
eliminación de residuos es el compostaje, el cual
implica identificar los posibles microorganismos
capaces de degradar estos residuos. Por lo
anterior, este estudio se basa en las bacterias que
son los descomponedores más importantes y
abundantes en la tierra, las cuales poseen una
amplia gama de enzimas capaces de romper
químicamente una gran variedad de compuestos
orgánicos, que representan casi el 60% del total
de residuos sólidos que se crean (Laich, 2011).
Como objetivo, este estudio pretende distinguir,
observar, aislar y caracterizar diferentes colonias
de bacterias presentes en los desechos orgánicos
de la basura doméstica, con el fin de determinar
cuáles microorganismos actúan en el proceso de
compostaje y que compuestos orgánicos son
factibles para ser degradados. También
corroborar la presencia de microorganismos que
podrían ser responsables de la emisión de
sustancias tóxicas y/o enfermedades. Además, se
buscó constatar la utilidad que tienen los medios
de cultivos utilizados en el estudio para el
aislamiento e identificación de bacterias
(Programa de Ingeniería Bioquímica 2019-2).
Metodología
Siembra y recuento en placa
Con el fin de preparar las disoluciones se
tomaron 10mL de lixiviado proveniente de
desechos domésticos. Se adicionaron en 90mL de
caldo Casoy estéril, se agitaron uniformemente
por 5 segundos; a esta muestra se le asignó
dilución 10-1 siendo esta la dilución de mayor
concentración. Luego se tomó 1mL de la dilución
descrita anteriormente y se agregó a un tubo de
ensayo con 9mL de agua peptonada al 0,1%
estéril. Se rotuló como dilución 10 -2 siendo esta
la segunda muestra. Se repitió el procedimiento
hasta la disolución 10-6, siendo la dilución de
menor concentración de lixiviado en su medio.
Después de esto se tomaron 0,1mL de cada
dilución y se inocularon con un asa metálica
esterilizada con un mechero, en la superficie de
cajas de Petri con agar Casoy, correspondientes
para cada dilución. Las siembras se incubaron a
35 ± 2°C durante 72 horas bajo condiciones
aerobias.
Tinción de Gram
Para lograr diferenciar algunas morfologías y
características de la muestra de lixiviado, y de
unos cultivos anteriormente preparados de
Staphylococcus aureus y Escherichia Coli; se
tomó una pequeña porción de muestra y se
homogeneizó en una lámina con una gota de agua ANÁLISIS DE RESULTADOS
destilada, dejando secar al lado de un mechero.
Posteriormente, a cada lámina se le añadieron de
5 a 10 gotas de Cristal Violeta y Lugol dejando Para las diferentes diluciones de la
actuar durante 1 minuto cada una. Seguidamente muestra de lixiviado se obtuvieron un número
se le añadió la misma cantidad de alcohol acetona elevado de colonias que no permite su recuento
dejando actuar durante 30 segundos y fucsina como se puede apreciar en la Imagen 1. Por lo
dejando actuar durante 1 minuto. A cada uno de cual, para esta situación en específico, se puede
estos pasos se le realizó un respectivo lavado de afirmar que es necesario realizar más diluciones
la lámina para eliminar el exceso de reactivo. para así poder alcanzar el rango necesario y
Finalmente, se observó en el microscopio. especificado que es de 30 a 300 colonias. Así
sería posible reportar el recuento en UFC/mL. Por
lo tanto, se reporta que el recuento en placa de las
Siembra por aislamiento o agotamiento colonias de todas las diluciones dio mayor a 300.
Se dice que hay más de 300FD x10 UFC/mL,
Para la siembra por aislamiento se utilizó la donde FD es el factor de dilución, siguiendo la
dilución 10-1, la cual fue preparada previamente. ecuación 1; donde cabe destacar que en este caso
Se tomó la muestra de la dilución con un asa se está haciendo una siembra por superficie
metálica esterilizada con un mechero, y se añadió (sembrando 0,1mL).
al medio en ¼ de la caja Petri. En la Figura 1 se
explica la técnica de estriado, que consiste en No. de colonias x FD x 10
tomar el asa metálica y mediante un movimiento Ecuación 1. Cálculo UFC/mL
ondulatorio distribuir la muestra en otra cuarta
parte de la caja Petri. Se repitió lo anterior hasta
completar los espacios restantes del agar,
finalizando con una última estriada hacia el
centro de la caja Petri. Este procedimiento de
siembra por aislamiento o agotamiento se realizó
en 5 medios de cultivos los cuales fueron
Cetrimide para Pseudomonas aeruginosa,
Chromocult para bacteria coliformes, Baird
Parker para Staphylococcus aureus y almidón y
leche para el aislamiento de bacterias productoras
de enzimas. Todos los procesos descritos
anteriormente se incubaron a 35 ± 2°C durante 72
horas bajo condiciones aerobias.

Figura 1. Bonilla, M., Pajares, S., et al. (2016).

Técnica de siembra por estrías

Imagen 1. Diluciones de 10-2 hasta 10-6 en Agar

Casoy.
El recuento de los medios de cultivo de la Imagen
1, se reporta como >3x 107UFC/mL, esto se
debió al origen de procedencia de lixiviado, ya
que fue extraído de un centro de recolección de
desechos de todo un conjunto residencial; en
donde es característico encontrar residuos de
verduras, carne, frutas, huesos y cáscaras de
huevo, alimentos. Los dos últimos residuos
orgánicos mencionados poseen una gran cantidad
de carbonato de calcio (CaCO3). Este reacciona
con ácidos en el medio para ajustar el valor del
pH cuando este alcanza una saturación de H +,
absorbiéndolo y haciendo tender el potencial de
hidrógeno, pasando de un medio ácido a neutro.
Esto es benéfico para la proliferación de las
diferentes bacterias de la muestra (Biktasheva, et
al. 2017); como se observa en la Imagen 1 el agar
Casoy se presta para que crezcan colonias de
diferentes tamaños y colores, así mismo, como el
crecimiento fue tan exuberante se vio como si el
agar estuviese manchado o lleno de colonias. Lo
anterior se debe a que el agar tiene nutrientes
ricos en carbono y nitrógeno que permiten el
crecimiento de una amplia variedad de bacterias.
Este medio es utilizado para el desarrollo y
aislamiento de microorganismos no exigentes.
Las tinciones de Gram se hicieron con el fin de
poder distinguir las morfologías de las diferentes
bacterias presentes en la muestra de estudio
(lixiviado) comparándolas con muestras de
bacterias ya sembradas, los resultados se
muestran en la tabla 1.

Tabla 1. Morfologías vistas desde el microscopio de tres cultivos después de la tinción de Gram.
NOMBRE DE LA DESCRIPCIÓN FOTOGRAFÍA DEL
MUESTRA MICROSCOPIO

Lixiviado Cantidad de microorganismos

incapaces de distinguir por su alta
densidad de población microbiana.
Se vieron las dos morfologías:
cocos y bacilos y también los dos
tipos de bacterias según su pared,
Gram (-) y Gram (+).

Bacilos Gram negativos, morados

Escherichia coli por posible error en la tinción de
Gram. Se cree que fue por el tiempo
de la solución alcohol-acetona.

Cocos Gram positivos de color

Staphylococcus aureus violeta
 El error experimental que tuvimos en las
tinciones de Gram fue que para el cultivo de E.
coli nos tenía que dar la muestra un color más
claro, tendiendo a rosado, esto se pudo dar por
diversos factores en la práctica, como por
ejemplo: no hacer un buen lavado en la muestra
del colorante, la muestra pudo estar infectada, la
calidad del colorante pudo no haber sido la mejor,
la solución de alcohol acetona pudo no haber
sacado todo el cristal violeta haciendo que
cuando se aplique la fucsina no se tiña la muestra
como debe ser, entre otros.
Luego de esto, se realizaron cinco siembras por
aislamiento con diferentes medios, con el fin de
determinar la presencia o ausencia de diferentes
microorganismos, los resultados se presentan en
la Tabla 2.
Cada uno de los diferentes medios de cultivos
utilizados a lo largo de la práctica poseen
diferentes condiciones (nutrientes, consistencia
adecuada del medio, pH, entre otros) que
estimulan el crecimiento de un tipo específico de
bacterias, aunque todas comparten una
característica en general y es su brillo a simple
vista.
Si bien, el agar Chromocult es un medio selectivo
y diferencial que permite la diferenciación y
enumeración de E.coli y bacterias coliformes;
este medio contiene una combinación de dos
sustratos cromogénicos lo cual hace posible la
detección simultánea de los dos tipos de bacterias
coliformes como se puede apreciar en la Imagen
2.

Tabla 2. Resultados de siembras por

aislamiento en diferentes medios de cultivo.

NOMBRE PRESENCIA O OBSERVACIONES

DE LA AUSENCIA
MUESTRA

Agar Presencia de Colonias rosadas y una

Chromocult E.coli y morada, planas,
Coliformes circulares.

Agar Presencia de Colonias redondas de

Cetrimide Pseudomonas color blanco con un
aeruginosa halo amarillento.

Agar Presencia de Colonias notorias por

Almidón amilasas la presencia del Lugol, Imagen 2. Agar Chromocult con presencia de
blancas, redondas con bacterias coliformes y E.coli.
un halo translúcido
En este agar se observaron colonias fucsias
Agar leche Presencia de Colonias distribuidas por todo el agar y, así mismo, se
bacterias protuberantes, de color encontró una colonia púrpura o morada. En este
proteolíticas y/o blanco, circulares con caso, las colonias fucsias indican la presencia de
ácido lácticas un halo translúcido. coliformes. Puesto que, por medio de la
producción de la enzima β-D-galactosidasa que
Presencia de Colonias redondas, de es característica de las bacterias coliformes se
Agar Baird- Staphylococcus tamaño pequeño de escinde un sustrato (salmon-GAL) y esta produce
Parker aureus color negro brillante. una reacción cromógena (cambio de luz) que se
evidencia por el color en las colonias (fucsia). Por
otra parte, también permite ver la presencia de E.
coli en la muestra, debido a que esta bacteria
produce una enzima característica conocida como piocianina o fluoresceína que se produce cuando
β-D-glucuronidasa que junto a la acción de la β- hay escasez de moléculas de hierro para permitir
D-galactosidasa se obtienen colonias púrpuras o la quelación de estas.
moradas. También es importante recalcar que en
este agar se vieron colonias incoloras, es decir,
colonias sin el color fucsia o púrpura
característico de los coliformes o E. coli
permitiendo afirmar que hay colonias no
coliformes. Las bacterias coliformes totales y
Escherichia coli se consideran indicadores
bacterianos en cuanto a la protección de la salud
pública. Los coliformes totales detectables
indican una posible contaminación asociada con
el sistema de distribución de agua, mientras que
E. coli es un indicador de contaminación fecal (
Zhang, et al., 2015). Como el lixiviado provino
de residuos domésticos, es posible encontrar
desechos de todo tipo donde se desarrollen estas
bacterias, como carne cruda, leche cruda, frutas y
verduras contaminadas por el contacto con las
heces de animales domésticos o salvajes en algún
momento durante su cultivo o manipulación
(Organización mundial de la salud, 2018).
Además, desechos sanitarios de mascotas, bebés
Imagen 3. Agar Cetrimide con Pseudomonas
y ancianos. aeruginosa, con exposición a luz UV

Por otro lado, el Agar Cetrimide se caracteriza

por identificar bacterias productoras de
piocianina o fluoresceína que es característico de
las bacterias pertenecientes a la familia
Pseudomonadaceae. Como se muestra en las
Imágenes 3 y 4, se vieron colonias grandes e
incoloras con producción de un pigmento
difusible al medio (amarillo) evidenciándose la
producción del sideróforo o compuesto
fluorescente por medio de la radiación UV. De las
condiciones que caracteriza este agar es que
ayuda al crecimiento selectivo de Pseudomonas
aeruginosa, debido a que la cetrimida (bromuro
de cetil trimetil amonio) es una sal de amonio
cuaternario, que actúa como un detergente
catiónico cuando entra en contacto con las células
bacterianas; causando la liberación de nitrógeno
y fósforo, que a su vez tiene efectos
desnaturalizantes en las proteínas de la membrana
de las células bacterianas (Rijal, 2015). No
obstante, también es importante discutir que el
crecimiento en este agar no es tan exuberante, lo
cual está asociado con el antimicrobiano
agregado al medio que inhibe el crecimiento de Imagen 4. Agar Cetrimide con Pseudomonas
otras especies y así mismo, a la producción de la aeruginosa, sin exposición a luz UV.
Las Pseudomonas aeruginosa son un
microorganismo ubicuo. La mayoría de las
personas están en contacto diariamente con este
tipo de bacteria, dado que se encuentran
ampliamente en el ambiente, tanto en alimentos,
suelos, aguas dulces o saladas, como en plantas y
animales. Sin embargo, estas solo representan un
riesgo sanitario para las personas cuyo sistema
inmunológico es deficiente. Este tipo de bacterias
son denominadas patógenos oportunistas puesto
que rara vez originan enfermedades en individuos
sanos, pero como dicho anteriormente, si lo hacen
en personas inmunosuprimidas (Martín, 2004).
Para los aislamientos de las bacterias productoras
de enzimas, se obtuvieron los resultados de las
imágenes 4 y 5.
Imagen 5. Agar leche con bacterias proteolíticas y/o
ácido lácticas
Imagen 6. Agar almidón con bacterias amilolíticas
En el agar de almidón se observaron dos tipos de
colonias. Una con el halo transparente y la otra
sin el halo, mostrando dos características de las
bacterias presentes como se puede apreciar en la
Imagen 5. Las bacterias que producen la enzima
amilasa (exoenzima) que permite la hidrólisis del
almidón y productos afectan la composición de
este compuesto y, por esta razón, no se produce
el halo con el Lugol, debido a que no se forma el
complejo color púrpura-negro. Las bacterias que
no producen esta enzima no hidrolizan el almidón
y por esta razón al agregar el Lugol no se ve el
halo transparente; puesto que, sí se forma el
complejo almidón-Lugol que presenta la
coloración característica. Esto permite evidenciar
la diversidad microbiana que hay en la muestra
del lixiviado de bacterias amilolíticas y bacterias
no amilolíticas. Las bacterias amilolíticas
fermentan hidratos de carbono, participando
enzimáticamente en varias etapas del proceso de
compostaje (Guano, 2017).
Por otra parte, en el agar de leche, se observaron
colonias grandes y pequeñas, unas colonias de
color blanco y otras de color amarillo como se
puede apreciar en la Imagen 6. Así mismo,
también se observaron colonias con el halo
traslúcido o transparente, característico de las
bacterias proteolíticas y/o ácido lácticas.
También se observaron colonias sin el halo. Este
agar se basa en la capacidad que tienen algunas
bacterias de producir proteinasas que hidrolizan
ciertas proteínas y en este caso serían las
proteínas de la leche. La formación de este halo
está asociada con el rompimiento de las proteínas
que hay en el medio y este es un medio rico en
glucosa, leche, triptona y extracto de levadura, lo
que las hace ser más notorias a simple vista. Al
disminuir la concentración de estas en el medio,
causa un cambio en la concentración y esto
permite que no esté el compuesto que en
propiedades normales absorbe luz a la longitud de
onda visible y por esta razón es que atraviesa la
luz y da una apariencia transparente o traslúcida.
Estas bacterias junto con otros microorganismos
se han caracterizado por aumentar la calidad del
compost (Yánez, 2016). Además de esto, se
pueden encontrar en todos los hábitats incluidos
alimentos y el cuerpo humano. Es por esto que
resulta normal encontrar este tipo de bacterias en
nuestro cultivo. Entre otras funciones, se utilizan
como probióticos: microorganismos que
ingeridos vivos y en cantidad adecuada ejercen
un efecto beneficioso para la salud. Existen en el
mercado bifidobacterias que se presentan
liofilizadas, es decir, en forma de polvo que se
rehidrata antes de su ingestión, y son de uso
clínico. También se utilizan en la fabricación de
leches fermentadas, tipo yogur, que tienen gran
aceptación por su menor acidez, y a su vez
ejercen el papel de “alimento funcional” (Nácher,
2015).
Adicionalmente vemos que el agar Baird-Parker,
tiene una selectividad moderada y diferenciación
para aislar y hacer el recuento de Staphylococcus
aureus, en este caso, no hubo tanto crecimiento
como se evidencia en la Imagen 7, pero se vieron
algunas colonias características (color negro y
brillante).
Imagen 7. Agar Baird-Parker con presencia de
Staphylococcus aureus.
Este aislamiento se basa en la capacidad que tiene
esta bacteria (Staphylococcus aureus) para
reducir el telurito a telurio y a detectar dos
enzimas: la lecitinasa a partir de la lecitina del
huevo y las lipasas por el alto contenido de ácidos
grasos en el medio. En este caso se obtuvieron
colonias negras que está relacionado con la
producción del telurio a partir del telurito.
También se observaron unas zonas pequeñas
transparentes alrededor de las colonias
encontradas (negras) y también zona de
precipitación en el agar para confirmar la
presencia de lipasas. S. aureus posee una gran
capacidad para sobrevivir en un ambiente adverso
y, por la acción de sus determinantes de
patogenicidad (cápsula mucoide polisacárida,
componentes antigénicos de la pared, producción
de enzimas como catalasa; coagulasa,
hialuronidasa, estafiloquinasas, lipasas, β -
lactamasas, o la secreción de diversas toxinas
como la exotoxina epidermolítica; enterotoxinas
o la toxina del síndrome de shock tóxico), acaba
produciendo infección tanto de origen
comunitario como hospitalario, convirtiéndose en
la principal especie patógena de su género;
causando brotes de infección nosocomial
(Camarena., Sánchez, 1999).
CONCLUSIONES
La existencia de diversos microorganismos en los
lixiviados de los desechos domésticos podrían ser
un problema de salud pública dada la presencia
de E. coli, S. aureus y P. aeruginosa; pues son
patógenos oportunistas. Se evidenció que estos
microorganismos son un bacilo Gram negativo, y
coco Gram positivo respectivamente.
La imposibilidad de hacer un recuento en
superficie dada la desmedida carga microbiana
impidió hacer la caracterización morfológica, y,
además da muestra de las altas concentraciones
de microorganismos presentes en los desechos de
los hogares de un edificio.
Mediante los cultivos en distintos agares y la
tinción de Gram se dilucidó la relación entre los
nutrientes asociados a los microorganismos, el
metabolismo, y las características de las colonias.
Se concluyó que las bacterias productoras de
enzimas como las amilolíticas y proteolíticas
pueden ser una alternativa sostenible para la
degradación y manejo adecuado de desechos
orgánicos.
Referencias bibliográficas
[1] Barrero, L. (s.f.). Microbiología Clínica.
Editorial Síntesis. Madrid, España. Recuperado
de:
https://www.sintesis.com/data/indices/97884907
73185.pdf
[2] Benavides, K. (2010). Caracterización
microbiológica de lixiviado de materias primas
para la fabricación de un compostaje de material
ruminal. Universidad católica de
Manizales. Manizales, Colombia. Recuperado
de:
repositorio.ucm.edu.co:8080/jspui/bitstream/han
dle/10839/74/Karen%20Adriana%20Benavides.
pdf?sequence=1&isAllowed=y
[3] Biktasheva, L., et al. (2017). Fungal and
bacterial successions in the process of co-
composting of organic wastes as revealed
by 454 pyrosequencing. NCBI. Kazan Federal
University. Kazan, Russia. Recuperado de:
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC
5653195/
[4] Bonilla, M., Pajares, S., Vigueras, J., et al.
(2016). Manual de prácticas de microbiología
básica. Universidad Autónoma Metropolitana.
Cuajimalpa, México. Recuperado de:
www.cua.uam.mx/pdfs/conoce/libroselec/23Ma
nual%20de%20microbiologia_09diciembre2016
.pdf
[5] Camarena, J. J., & Sánchez, R. (1999).
Infección por Staphylococcus aureus resistente a
meticilina. Departamento de Microbiología.
Hospital Universitario Doctor Peset. Valencia.
[6] Cortázar, A., González C., Coronel, C., et al.
(2010). Biotecnología aplicada a la degradación
de colorantes de la industria textil. Universidad y
Ciencia. Cuernavaca, México. Recuperado de:
http://www.scielo.org.mx/pdf/uc/v28n2/v28n2a9
.pdf
[7] De Jesús, M. (2008). Sistemas de tratamientos
para lixiviados generados en rellenos sanitarios.
Universidad de Sucre. Sincelejo, Colombia.
Recuperado de:
https://repositorio.unisucre.edu.co/bitstream/001
/304/2/628.44564C797.pdf
[8] Guano, F. (2017). Evolución de las
actividades celulasa, ß-celulasa, ß-glzucosidasa
y amilasa durante el compostaje de lodos de
depuradora y restos vegetales. Universidad de
Almeria. Almeria, España. Recuperado de:
http://repositorio.ual.es/bitstream/handle/10835/
5905/15384_TFM%20Fernanda%20Elizabeth%
20Guano%20Andrade.pdf?sequence=1&isAllo
wed=y
[9] Laich, F. (2011). El papel de los
microorganismos en el proceso de compostaje.
Universidad de Microbiología Aplicada.
Tenerife, España. Recuperado de:
https://www.icia.es/biomusa/en/jornadas-y-
actividades/jornada-tecnica-sobre-calidad-y-
fertilidad-del-suelo/65-el-papel-de-los-
microorganismos-en-el-proceso-de-
compostaje/file
[10] Martín, I. (2004). Riesgo sanitario por
presencia de Pseudomonas aeruginosa en el
agua para consumo. Universidad Nacional
de General Sarmiento. Buenos Aires, Argentina.
Recuperado de:
observatorioconurbano.ungs.edu.ar/Tesis%20de
%20ecologia/2004_IreneMartin.pdf
[11] Montesinos, A. (2015). Evaluación del
tratamiento integral del lixiviado de
vertedero de residuos sólidos urbanos.
Universidad Da Coruña. La Coruña, España.
Recuperado de:
https://ruc.udc.es/dspace/bitstream/handle/2183/
16182/VilarMontesinos_Almudena_TD_2015.p
df?sequence=4
[12] Nácher, M., et al. (2015). Dextranos de
bacterias lácticas aisladas de productos
cárnicos: caracterización y aplicaciones.
Universidad de Valencia. Valencia, España.
Recuperado de:
digital.csic.es/bitstream/10261/129967/1/TESIS
%20Montse%20Nácher%20corta.pdf
[13] Navia, C., Zemanate, Y., Morales, S., et al.
(2013). Evaluación de diferentes formulaciones
de compostaje a partir de residuos de cosecha de
tomate (Solanum lycopersicum). Scielo, 1-9.
Universidad del Cauca. Cauca, Colombia.
Recuperado de:
http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_a
rttext&pid=S1692-35612013000300019
https://microbeonline.com/cetrimide-agar-
composition-principle-preparation-uses/
[17] Yánez, W. (2016). Effects of enriched
compost with efficient microorganisms on
the germination of recalcitrant
seeds of breadfruit (Parkinson) Fosbertg and
Theobroma cacao L. Research Gate. Recuperado
de:
https://www.researchgate.net/publication/31743
4748_Effects_of_enriched_compost_with_effici
ent_microorganisms_on_the_germination_of_re
calcitrant_seeds_of_breadfruit_Parkinson_Fosbe
rg_and_Theobroma_cacao_L
[18] Zhang, Y., Hong, P., LeChevallier, M., Liu,
W. (2015). Phenotypic and Phylogenetic
Identification of Coliform Bacteria
Obtained Using 12 Coliform Methods
Approved by the U.S. Environmental Protection
Agency. NCBI. University of Illinois. Illinois,
Estados Unidos de América. Recuperado de:
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC
4551242/
[19] Zhao, K., et al. (2016). Development of a
novel compound microbial agent for degradation
of kitchen waste. Beijing Forestry University.
Beijing, China. Recuperado de:
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/2827960
0

[14] Organización mundial de la salud (2018). E.

coli. WHO. Recuperado de:
https://www.who.int/es/news-room/fact-
sheets/detail/e-coli

[15] Programa de Ingeniería Bioquímica (2019,

2019-2). Laboratorio de microbiología industrial,
Bacterias. Cali: Universidad Icesi.

[16] Rijal, N. (2015). Cetrimide Agar:

Composition, Principle, Preparation and
Uses. Microbeonline. Recuperado de: