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 Histología y citología.

 Vinculación de la evolución del estudio de las células y


los tejidos al desarrollo de la microscopía óptica.
 Las tinciones y las propiedades de la luz como recurso
para la observación detallada de estructuras celulares.
 El microscopio electrónico  salto descomunal.
 Relación entre citología e histología  bioquímica,
fisiología, inmunología, patología, etc.
 Métodos de estudio:
 Morfológico.
 Fisicoquímico.

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 Observación directa del material biológico.
 Ligada al desarrollo de los microscopios:
 Microscopio óptico  siglo XVII
 Microscopio electrónico  siglo XX (1931)
 Técnicas histológicas  conjunto de
operaciones a que se somete una muestra
biológica, a fin de posibilitar su estudio al
microscopio.

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 Objetivo: obtener láminas muy delgadas del material
biológico a estudiar. (Microtomo).
 Fundamento: el examen al microscopio se hace
generalmente por luz transmitida, lo que significa que
la luz debe "atravesar" el objeto a examinar para llegar,
después de haber pasado por las distintas lentes del
aparato, a impresionar a nuestro órgano visual.
 Pasos a seguir:
1. Obtención de la muestra.
2. Fijación.
3. Inclusión.
4. Corte.
5. Tinción y montaje.

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1. Obtención de la muestra:
 El método seleccionado debe ser el adecuado para cada tipo de material.
 En todos los casos el instrumental con el cual se seccionan los tejidos debe
estar muy afilado para evitar aplastar sus elementos, así como se debe
evitar cualquier otro tipo de maltrato en su manipulación.
 Los principales métodos empleados en animales y humanos son:
 - Biopsia: consiste en la extracción de pequeños fragmentos de tejido de un
organismo vivo.
 - Resección quirúrgica: consiste en la extirpación de órganos completos o de
grandes partes de los mismos, a través de un procedimiento quirúrgico.
 - Autopsia o necropsia: el examen de los órganos luego de la muerte.
 Cualquiera sea el procedimiento empleado para la obtención, el material
que resulta del mismo debe ser inmediatamente fijado o congelado para
evitar los procesos de autodestrucción de las células conocidos como
autólisis.

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2. Fijación:
 Objetivo: impedir que el material biológico se autodestruya y mantener en la medida
de lo posible el estado en que se encontraban durante la vida
 En esencia se trata de un método para la preservación de la morfología y la
composición química de las células y los tejidos.
 Consiste en producir la muerte de las células, de manera tal que las estructuras que
poseían éstas en el estado viviente se conserven con un mínimo de modificaciones, a
lo largo del tiempo y de los subsiguientes pasos de la técnica.
 El tratamiento debe aplicarse de inmediato una vez obtenida la muestra.
 Los fijadores:
 Son sustancias químicas o a los agentes físicos que se utilizan para tal fin.
 Insolubilizan las proteínas de los tejidos.
 Fijadores químicos:
 M.o.  Formol al 10%, Alcohol etílico absoluto o de 96% , Alcohol metílico, etc.
 M.e.  fijación doble con glutaraldehido y tetraóxido de osmio.
 Fijadores físicos:
 Calor, desecación y microondas

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3. Inclusión:
 Objetivo: disponer la muestra dentro de un soporte rígido que facilite
la realización de cortes muy finos con el microtomo.
 Se utilizan parafinas o resinas plásticas.
 El proceso es lento pero los preparados son de gran calidad.
 El tejido se impregna en un material que le confiere una consistencia
adecuada para el corte.
 Pasos a seguir.
1. Deshidratación de la muestra  baños de etanol a concentración creciente.
2. Aclaración de la muestra con xilol o benzol.
3. Penetración de la resina fundida a 56-58º C en la muestra.
4. Inclusión definitiva en la resina y formación del bloque con la muestra.
5. Recortamos el bloque con forma de cubo o rectangular para formar el taco
histológico.
 Para m.e.  resinas muy duras de epoxi.
 También se utiliza la técnica de congelación para endurecer los tejidos
y después cortarlos.

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4. Corte:
 Objetivo: reducir el tejido a cortes lo suficientemente delgados como para
permitir el paso de la luz para examinarlo al microscopio.
 Los micrótomos son instrumentos de gran precisión que nos
proporcionan cortes delgados parejos y de espesor graduable. Los cortes
más corrientes son los de 4-6 micras.
 Parafinas  6 a 8 micras.
 Resinas plásticas  1 a 2 micras.
 Para m.e. cortes muy finos  0,02-0,1 micras
 Tipos de micrótomos:
 El de deslizamiento.
 El tipo Minot.
 El de congelación.
 El crióstato o criótomo  evita tener que incluir las muestras.
 Los cortes de parafina se extienden, al obtenerlos del micrótomo, en agua
tibia contenida en un cristalizador para eliminar los pliegues y arrugas
que se producen.

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5. Tinción y montaje:
 Los cortes se rescatan del agua sobre portaobjetos, previamente
desengrasados, cubiertos con una capa de adhesivo.
 Con la ayuda de una aguja histológica, se colocan los cortes sobre el
portaobjetos, se numeran, etiquetan y después se tiñen.
 Objetivo de la tinción: mejorar la resolución óptica de los tejidos y facilitar la
visualización de las estructuras.
 Los colorantes o tintes se fijan a los tejidos y no son arrastrados al lavar con
disolventes.
 Los colorantes pueden ser ácidos o bases:
 Básicos: hematoxilina, azul de toluidina y azul de metileno.
 Ácidos: eosina y fucsina ácida.
 Neutros: sales de plata y oro.
 Doble tinción  hematoxilina-eosina.
 Una vez teñida la muestra se lava para arrastrar los restos del colorante.
 Finalmente se coloca un cubreobjetos y se sella la preparación con Bálsamo de
Canadá.

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 Ponen de manifiesto distintos componentes celulares:
 Técnica del PAS ( ácido peryódico de Schiff) se utiliza para teñir
carbohidratos y revela la existencia del glicocáliz que aparece de
color morado.
 La tinción de Feulgen es específica para el ADN y tiñe el núcleo
de color morado.
 Los lípidos se pueden detectar con tetróxido de osmio (color
negro) o con rojo de Sudán (rojo).
 El almidón se detecta con la solución de Lugol y aparecerá de
color violeta.
 El colorante llamado verde brillante tiñe la lignina.
 Otro tipo son las técnicas de tinción diferenciales que utilizan al
menos dos colorantes distintos; es el caso de la llamada tinción
de gram que permite diferenciar bacterias gram + (color azul) de
bacterias gram – (color rojo).

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Obtención de la muestra. Inclusión y Corte
Fijación.

Montaje

Sellado.
Tinción

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