Вы находитесь на странице: 1из 18

Медицинская Иммунология

2009, Т. 11, № 4-5


© 2009, СПб РО РААКИ

Онкоиммунология, гемобластозы

ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ нении с раковым плевритом, хотя реальная клиническая


ПЛЕВРАЛЬНЫХ ВЫПОТОВ ПРИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ценность этого показателя для дифференциации различ-
НОВООБРАЗОВАНИЯХ ных видов плевритов невысока.
В целом обнаруженные нами изменения иммуно-
Белая Е.В., Базарный В.В. логических параметров ПЖ  носят относительно не-
Уральская государственная медицинская академия, специфический характер. Однако при  индивидуаль-
г. Екатеринбург, Россия ном анализе соотношений различных параметров нами
Свердловская областная клиническая больница № 1, было отмечено заметное различие в  величине индекса
г. Екатеринбург, Россия СРБ/ TNF между группами. Диагностическая эффектив-
ность (при Se 80%) этого параметра достаточно высока,
Лабораторные характеристики плеврального выпота
что позволяет применять его вместе с рутинными мето-
недостаточно специфичны и часто позволяют лишь под-
дами при установлении различий опухолевых плевритов
твердить воспалительный характер процесса. Цель дан-
и плевритов при ЛПЗ.
ной работы заключалась в определении диагностической
ценности иммунологических особенностей плевральной
жидкости (ПЖ) при гемобластозах в сравнении с опухо- ИЗМЕНЕНИЯ КЛЕТОЧНОГО и ГУМОРАЛЬНОГО
левыми плевритами другой этиологии. ИММУНИТЕТА У БОЛЬНЫХ с ОНКОЗАБОЛЕВАНИЯМИ
Проведен ретроспективный анализ результатов ла- III-IV СТАДИЙ в РЕЗУЛЬТАТЕ СОЧЕТАННОГО
бораторных исследований 30  госпитальных пациентов. ПРИМЕНЕНИЯ ПРЕПАРАТА «ЦЫГАПАН» и МЕТОДА
Первую группу составили 18  больных с  лимфопроли- ИЗБИРАТЕЛЬНОЙ ХРОНОФОТОТЕРАПИи
феративными заболеваниями (ЛПЗ), преимуществен-
Гусева О.А., Борисов В.А.
но  – с  В-клеточным вариантом ХЛЛ, 2-ю (группу срав-
нения) – 12 пациентов с опухолевыми плевритами, при- ГУ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН, Москва, Россия
чиной которых были метастазы рака яичника (Т3N0M1) Центр избирательной хронотерапии, Москва, Россия
и  недифференцированный плоскоклеточный рак глав-
Онкологические заболевания манифестируются раз-
ного бронха (T3N0M2). Диагнозы были установлены
личными видами иммунологических дефектов. К  со-
на основании стандартных критериев.
жалению, имеющиеся методы традиционной терапии
Исследование ПЖ  включало комплекс тестов: стан-
(лучевая, хирургическая, химиотерапия), как прави-
дартный химико-микроскопический анализ, содержание
ло, усугубляют иммунологические срывы, приводящие
острофазовых реактантов (С-реактивный белок, церуло-
к развитию различных форм иммунодефицитов. В таких
плазмин, иммуноглобулины), фактор некроза опухолей α
случаях больным после курса традиционной терапии
(TNFα). Использованы унифицированные тесты, для показано проведение реабилитационных мероприятий,
автоматической регистрации результатов использованы направленных на восстановление нарушенных функций
биохимический анализатор «Ciba corning Express plus» иммунной системы. С этой целью успешно применяется
(Вayer) и фотометр «MultiScan» (Финляндия). Статисти- метод избирательной хронофототерапии (ИХФТ), спо-
ческая обработка данных была проведена с  использова- собствующий восстановлению механизмов противоопу-
нием программного пакета «Statistica». холевой защиты и  устранению иммунодефицитных со-
При проведении рутинного исследования ПЖ не было стояний. Вместе с  тем имеются положительные резуль-
выявлено существенных различий в  показателях между таты комплексного применения препарата «Цыгапан»
группами, за  исключением несколько более высокого у  больных с  разными формами патологий, в  том числе
уровня общего белка у пациентов с ЛПЗ. Концентрации и  при онкологии для предотвращения тяжелых послед-
иммуноглобулинов у  большинства больных находились ствий химиотерапии.
в  пределах нормальных значений. Уровень СРБ в  ПЖ Цель исследования заключалась в  изучении влияния
обеих групп не  различался, но  превысил границы рефе- препарата «Цыгапан» на клеточное и гуморальное звено
рентных интервалов (более 22,8 мг/л). В группе с раковы- иммунитета при  его сочетанном применении с  ИХФТ
ми плевритами в  ПЖ имелась тенденция к  повышению у больных с онкозаболеваниями III-IV стадии.
в  3  раза уровня церулоплазмина (р  >  0,05). У  пациентов Было сформировано две группы больных, проходив-
с  плевритом вследствие ЛПЗ нами выявлена тенденция ших курс реабилитации после традиционной терапии.
к повышению содержания TNFα в 2 раза (р > 0,05) в срав- Контрольную группу (I  группа) составляли больные,

426
2009, Т. 11, № 4-5 Онкоиммунология, гемобластозы

проходившие только ИХФТ (15  человек), во  II  груп- отношений и динамику иммунных изменений. Исследо-
пу входили лица, получавшие вместе с  ИХФТ препарат вания цитокинового профиля у  детей с  лимфопролифе-
«Цыгапан» в суточной дозе 3600 мг (14 человек). Состоя- ративными заболеваниями представляют значительный
ние клеточного иммунитета определяли по  содержанию интерес в связи с внедрением методов определения цито-
клеток, экспрессирующих CD3, CD4, CD8, CD16, CD19, кинов в диагностическом процессе.
CD56, CD38, CD54, CD71, CD95. Гуморальный иммуни- Цель исследования. Анализ изменений цитокинового
тет оценивали по концентрациям сывороточных иммуно-
профиля, включающего показатели сывороточного TNFα
глобулинов классов A, M ,G.
и эритропоэтина у детей с ОЛЛ, в зависимости от нали-
Согласно полученным нами данным, состояние
Т-клеточного иммунитета у больных II группы в период чия диагностически значимых титров антител к  Candida
реабилитации практически не  отличалось от  такового albicans и Aspergillus fumigatus в сыворотке крови.
у больных I группы. Во всех случаях отмечался достовер- Материалы и методы. Контингент исследования – дети
ный рост Т-лимфоцитов за счет увеличения ЦТЛ, а также с  диагнозом ОЛЛ, первично активная стадия, в  возрас-
NK-клеток, несущих CD56. те от 3 до 17 лет. Общее количество детей в исследуемой
Вместе с  тем, у  больных II  группы значительно воз- группе составило 43 ребенка. Численность контрольной
растало количество В-лимфоцитов. Это коррелировало группы – 20 человек (условно здоровые).
с  повышением экспрессии CD38 на  15-20% по  сравне- Исследование цитокинов сыворотки крови TNFα
нию с  первоначальным уровнем. У  больных I  группы и эритропоэтина проводили методом твердофазного им-
уровень экспрессии CD38 повышался лишь на  5-10%. муноферментного анализа с  использованием реактивов
У 80% больных обеих групп экспрессия CD38 до начала группы компаний Биохиммак BCM «BIOSOURCE».
курса реабилитации была на 10% ниже средней физиоло- Антитела IgG к  грибам Candida albicans и  Aspergillus
гической нормы.
fumigatus определяли методом ИФА и применением диа-
При исследовании гуморального звена, отмечалось
гностических тест систем производства «Вектор-бест».
значительное возрастание концентраций IgA и IgG в сы-
воротке больных II  группы по  сравнению с  I группой. Статистическая обработка полученных данных про-
Так, при  сочетанном применении препарата «Цыгапан» водилась с  использованием программ «Statistica 6.0»
и  ИХФТ уровень иммуноглобулинов данных классов и Microsoft Excel.
в  1,5-2,5  раза превышал первоначальные показатели. Результаты. Нами было проведено исследование уров-
Следует заметить, что в  обеих группах до  начала курса ня сывороточных цитокинов у 43 детей с ОЛЛ в зависи-
реабилитации концентрации IgA и IgG были ниже физи- мости от выявленных диагностически – значимых титров
ологической нормы. Но, применение только ИХФТ обе- антител к грибам Candida albicans и Aspergillus fumigatus.
спечивало повышение их концентраций лишь до нижней Выявлено достоверное снижение концентрации
границы физиологической нормы. эритропоэтина у  детей с  ОЛЛ по  сравнению с  группой
Исходя из полученных нами данных, можно сделать вы- условноздоровых в  2,6 раза. У  детей с  ОЛЛ в  сыворотке
вод о воздействии препарата «Цыгапан» прежде всего на гу- которых выявлялись АТ  к  вышеназванным инфекциям,
моральное звено иммунитета. Это дает основания предпо- концентрация эритропоэтина была с  высокой степенью
лагать целесообразность применения этого препарата со-
достоверности снижена более чем в 3 раза.
четано с  ИХФТ у  онкологических больных III- IV  стадий
Сывороточная концентрация TNFα, в отличие от эри-
с выраженной недостаточностью гуморального иммуните-
та, а также с нарушениями В-клеточного звена. тропоэтина, была повышена у детей с ОЛЛ по сравнению
с контрольной группой условно здоровых детей. Так, по-
вышение в  4,3  раза отмечалось у  детей с  ОЛЛ, имевших
ПРОГНОСТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ ОПРЕДЕЛЕНИЯ IgG-антитела против Candida albicans (p < 0,01), повыше-
СЫВОРОТОЧНОГО TNFα И ЭРИТРОПОЭТИНА У ДЕТЕЙ ние в 4,3 раза отмечалось у детей с ОЛЛ, имевших IgG- ан-
С ОСТРЫМ ЛИМФОБЛАСТНЫМ ЛЕЙКОЗОМ титела против Aspergillus fumigatus.
Ермаков Г.А. Заключение. Таким образом, выявлена инверсия соот-
ношения TNFα и эритропоэтина у детей с ОЛЛ при на-
Амурская государственная медицинская академия, личии диагностически значимого титра антител к грибам
г. Благовещенск, Россия рода Candida albicans и Aspergillus fumigatus, что может быть
Введение. Известно, что параметры цитокиновой ре- использовано при решении прогностических задач у де-
гуляции отражают состояние системы межклеточных тей с ОЛЛ.

Таблица. Содержание TNFα и эритропоэтина в сыворотке крови детей с ОЛЛ (к тезисам Ермакова Г.А.)
Эритропоэтин, мМЕ/мл TFNα, пг/мл
Группы детей с ОЛЛ n
(M±m) (M±m)
Контроль 20 64,91±3,8 6,37±3,2
IgG к Candida albicans 9 18,34±3,06* 39,29±4,91*
IgG к Aspergillus fumigatus 4 14,92±2,49* 32,09±4,01*
Дети с ОЛЛ без Ат к возбудителям 11 24,2±2,41* 33,82±3,71*
Примечание. * – р < 0,01 по сравнению с контрольной группой условно здоровых детей.

427
«Дни иммунологии в СПб 2009» Медицинская Иммунология

ИЗУЧЕНИЕ ЦИТОТОКСИЧЕСКОГО ПОТЕНЦИАЛА NK-клеток, но не за счет CD45+CD3+CD8+Perforin+ цито-


ЭФФЕКТОРНЫХ ЛИМФОЦИТОВ ОНКОЛОГИЧЕСКИХ токсических Т-лимфоцитов.
БОЛЬНЫХ Таким образом, анализ цитотоксического потен-
циала эффекторных лимфоцитов показал, что у  пер-
Заботина Т.Н., Бокин И.И., Короткова О.В., вичных больных раком яичников по  сравнению с  до-
Борунова А.А., Очеева Н.Ю., Жорданиа К.И., норами цитотоксическая активность повышена,
Паниченко И.В., Сельчук В.Ю., Кадагидзе З.Г. но  представлена преимущественно неспецифическими
Государственное учреждение «Российский CD45+CD3-CD16+CD56+NK-клетками.
онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина
РАМН», Москва, Россия
ПОКАЗАТЕЛИ ХЕМИЛЮМИНЕСЦЕНЦИИ
Введение. Одним из  основных механизмов осущест- ЦЕЛЬНОЙ КРОВИ у ДЕТЕЙ БОЛЬНЫХ ОСТРЫМ
вления цитотоксической функции эффекторных лим- ЛИМФОБЛАСТНЫМ ЛЕЙКОЗОМ
фоцитов является экзоцитоз литических гранул, в  част-
ности, перфорина и гранзимов, с последующим осмоти- Кадричева Т.Г.1, Манчук В.Т.2, Кадричева С.Г.2
ческим «взрывом» и гибелью клеток мишеней. Известно, 1
КГБУЗ «Красноярская краевая детская больница»,
что действие тандема этих молекул необратимо. Пред- г. Красноярск, Россия
ставляет интерес, какова специфичность данной реак- 2
НИИ медицинских проблем Севера СО РАМН,
ции, поскольку функционирование цитотоксических г. Красноярск, Россия
эффекторных Т-лимфоцитов является антигенспецифи-
ческим, в то время как NK-клетки не обладают иммуно- Несмотря на очевидные успехи в терапии острых лим-
логической памятью и  проявление их  функциональной фобластных лейкозов (ОЛЛ) у детей, нельзя не отметить
активности не связано с антигенами главного комплекса значительное количество инфекционных осложнений
гистосовместимости. во время химиотерапии, а также связанные с ними случаи
Целью данной работы явилось выявить особенности смертности. В связи с этим целью исследования явилось
цитотоксического потенциала эффекторных лимфоцитов изучение одного из  звеньев неспецифического иммуни-
первичных больных раком яичников. тета у пациентов с ОЛЛ.
Под наблюдением находилось 12  детей (9  мальчиков
Материалы и  методы. В  исследование включены
и 3 девочки) в возрасте от 3,2 до 17,2 года, средний воз-
35  первичных больных раком яичников, средний воз-
раст составил 8,9 года. У 11 больных впервые диагности-
раст которых составил 53,9  года. В  контрольную груп-
рован ОЛЛ, у 1 – второй рецидив ОЛЛ. Из наблюдаемых
пу вошли 11  практически здоровых женщин в  возрасте
пациентов индукционную химиотерапию получали  11,
от 25 до 58 лет. Исследовали иммунофенотип лимфоцитов
поддерживающую химиотерапию  – 1 больная. У  всех
периферической крови до и через 2 недели после хирур-
пациентов дважды производился подсчет гемограммы
гического лечения с применением МКА, конъюгирован-
и  хемилюминесцентный анализ цельной крови во  вре-
ных FITC, PE, PE-Cy5, PC5, Per-CP («Beckman Coulter»,
мя инфекционных осложнений: на  фоне нейтропении
«BD Biosciences»). Для изучения цитотоксической состо-
и после восстановления количества нейтрофилов. Хеми-
ятельности клеток-эффекторов использовали коммерче-
люминесцентный анализ цельной крови позволяет оце-
скую тест-систему, содержащую антитела к  внутрикле- нить функциональную активность фагоцитов, а  именно
точному перфорину («BD Biosciences»). Многопараметро- их  бактерицидность и  завершенность фагоцитоза. Оце-
вый количественный проточно-цитометрический анализ нивалась спонтанная и  зимозан-индуцированная хеми-
проводили c  применением стратегии последовательного люминесценция. В  качестве индуктора «дыхательного
«гейтирования» на  цитометре «FACSCalibur» («Becton взрыва» использован онсонизированный зимозан. Оце-
Dickinson»). нивались следующие характеристики хемилюминограм-
Результаты. Анализ линейных маркеров, характерных мы: время выхода кривой на  максимум, максимальное
для основных популяций лимфоцитов (Т+В+NK- клет- значение интенсивности свечения, площадь кривой све-
ки), выявил значительные нарушения этого баланса чения. Статистическая обработка проведена с  помощью
в  группе больных до  операции в  пользу CD45+CD3- статистической программы «Statistica 7.0».
CD16+CD56+NK-клеток и  составил 30,5±4,8% по  срав- Среди инфекционных осложнений наблюдались сле-
нению с  контролем  – 16,5±2,1%. После лечения уро- дующие: мукозит – в 4 случаях, герпетический стоматит –
вень NK-лимфоцитов составил 23±1,8%. Количество в 1, энтеропатия – в 1, инфекция мочевыводящих путей –
CD45+CD3+CD8+ цитотоксических Т-лимфоцитов, на- в 1, фебрильная нейтропения – в 5 случаях. Количество
против, было снижено по  сравнению с  донорами как лейкоцитов колебалось от 0,2 до 39,4 тыс/ мкл (среднее –
до  лечения, так и  после (26,5±2,9, 21,9±3,1, 19,8±1,4% 3,9  тыс/мкл), нейтрофилов  – от  0 (при подсчете лейко-
соотв.). Число перфоринсодержащих лимфоцитов стати- цитарной формулы в мазке не выявлены) до 0,6 тыс/мкл
стически достоверно повышено у больных по сравнению (в среднем 0,1  тыс/мкл). После купирования инфекци-
с  контролем независимо от  проведения хирургического онных осложнений и восстановления показателей гемо-
лечения и  составило у  доноров  – 25,4%, до  операции  – граммы содержание лейкоцитов составило от 2,8 тыс/ мкл
35,6%, после операции  – 32,4%. Однако при  изучении до 12,6 тыс/мкл (в среднем 7,7 тыс/мкл), нейтрофилов –
субпопуляционного распределения перфорина оказа- от 1,3 до 11,8 тыс/мкл (в среднем 4,6 тыс/ мкл). Все боль-
лось, что нарастание пула лимфоидных клеток, содер- ные получали антибактериальную, по показаниям – про-
жащих внутриклеточный перфорин, происходило пре- тивогрибковую, противовирусную терапию, гранулоци-
имущественно за  счет CD45+CD3-CD16+CD56+Perforin+ тарный колониестимулирующий фактор.

428
2009, Т. 11, № 4-5 Онкоиммунология, гемобластозы

Проведение хемилюминесцентного анализа цельной Т-лимфоцитов обнаружен у  лиц на  III стадии заболева-
крови в период нейтропении у детей с ОЛЛ и после уве- ния. Только на  III  и  IV стадиях заболевания выявляется
личения числа нейтрофилов не показало достоверных от- статистически достоверное повышение абсолютного со-
личий характеристик хемилюминограммы. держания CD4+ и CD8+ лимфоцитов.
Таким образом, хемилюминесцентный анализ цель- Независимо от  стадии заболевания у  больных раком
ной крови показал, что после купирования инфекцион- желудка в  периферической крови наблюдается повыше-
ного осложнения и  восстановления количества нейтро- ние относительного и  абсолютного содержания CD16+
филов у больных ОЛЛ на фоне проводимой химиотерапии и  HLA-DR+ лимфоцитов. Относительное и  абсолютное
восстановления цитотоксической функции гранулоцитов количество CD72+ лимфоцитов независимо от  стадии
не происходит. патологического процесса и достоверно выше у больных
раком желудка относительно величин аналогичных по-
казателей контрольной группы. Выявляются значитель-
ОСОБЕННОСТИ СОСТОЯНИЯ ИММУННОГО СТАТУСА ные изменения и в состоянии гуморального иммунитета.
в ЗАВИСИМОСТИ ОТ СТАДИИ РАКА ЖЕЛУДКА Так, на  II, III и  IV  стадиях заболевания у  обследуемых
Казакова Н.Н., Савченко А.А., Яцинов М.В., лиц снижается концентрация IgG и повышается уровень
Дыхно Ю.А. ЦИК. При этом уровни относительного синтеза имму-
ноглобулинов у больных снижены. Причем установлено,
НИИ медицинских проблем Севера СО РАМН, что уровни относительного синтеза IgA и  G понижены
г. Красноярск, независимо от  стадии заболевания, тогда как уровень
Красноярский государственный медицинский относительного синтеза IgM снижен только у  больных
университет, г. Красноярск, Россия на III и IV стадиях патологического процесса.
По степени распространенности рак желудка занима- Таким образом, у  больных раком желудка
ет в России среди онкологических заболеваний второе ме- на  II,  III  и  IV  стадиях заболевания выявляется сниже-
сто после рака легкого у мужчин и рака молочной железы ние относительного содержания общих Т-лимфоцитов
у  женщин. В  большинстве случаев рак желудка диагно- и CD4+ клеток. В то же время в иммунном статусе боль-
стируют на поздних стадиях и он имеет плохой прогноз. ных выявляются и  компенсаторные процессы, характе-
Рост опухоли сопровождается изменением активности ризующие активацию противоопухолевого иммунитета:
функционального состояния иммунной системы. Ряд ис- повышение содержания NK-клеток на всех наблюдаемых
следователей отмечают, что опухоль дополнительно ин- стадиях заболевания и  увеличение количества цитоток-
дуцирует иммуносупрессию, что, в  частности, приводит сических Т-лимфоцитов на  III и  IV стадиях. Повышен-
к неэффективности противоопухолевой иммунотерапии. ный уровень В-лимфоцитов в  периферической крови
Целью исследования явилось изучение иммунного больных раком желудка не зависит от стадии заболевания
статуса и  фенотипического состава лимфоцитов крови и определяется функционально незрелыми клетками. Ре-
больных раком желудка в  зависимости от  стадии разви- акция гуморального иммунитета характеризуется только
тия опухоли. снижением концентрации IgG в  сыворотке крови боль-
На базе Красноярского краевого онкологического ных на  всех исследуемых стадиях заболевания. Повы-
диспансера обследовано 56  пациентов, страдающих ра- шенный уровень ЦИК может определяться пониженной
ком желудка, в  возрасте 32-64  лет. В  качестве контроля реактивностью фагоцитирующих клеток. Следовательно,
при разработке методов иммунотерапии необходимо учи-
обследовано 106 здоровых человек аналогичного возрас-
тывать, что при наличии иммунодефицитного состояния
та. Популяционный и  субпопуляционный состав лим-
у  больных раком желудка в  целом, тем не  менее, могут
фоцитов крови оценивали с  помощью метода непрямой
развиваться реакции противоопухолевого иммунитета.
иммунофлуоресценции с  использованием моноклональ-
ных антител CD3, CD4, CD8, CD16, HLA-DR и  CD72.
Концентрацию иммуноглобулинов класса А, М, G в сы- АНАЛИЗ МОРФОЛОГИЧЕСКИХ
воротке крови определяли методом иммунодиффузии и ИММУНОФЕНОТИПИЧЕСКИХ ХАРАКТЕРИСТИК
по  Манчини. Состояние гуморального иммунитета ха- ЛИМФОЦИТОВ ПРИ В-КЛЕТОЧНОМ ХРОНИЧЕСКОМ
рактеризовали также уровнем относительного синтеза IgA ЛИМФОЛЕЙКОЗЕ
(IgA/CD72+), IgM (IgМ/CD72+) и IgG (IgG/CD72+).
Установлено, что процентное содержание лимфоци- Наумова Е.В.
тов у больных раком желудка при II и III стадии достовер-
но выше, чем у лиц контрольной группы. В то же время Кафедра КЛД РМАПО, Москва, Россия
у больных на IV стадии заболевания процентный уровень Характер экспрессии антигенов опухолевыми лим-
лимфоцитов снижается до  диапазона нормы. Независи- фоцитами может меняться как в сторону увеличения, так
мо от  стадии заболевания у  больных в  периферической и в сторону снижения плотности рецепторов. Интенсив-
крови статистически достоверно снижено относитель- ность флюоресценции клетки, регистрируемая проточ-
ное содержание и  повышено абсолютное количество ным цитофлюориметром, зависит от количества меченых
CD3+-  лимфоцитов. При этом максимальное содержа- моноклональных антител (МАТ), связавшихся со специ-
ние Т-лимфоцитов выявляется у  больных на  III  стадии фическим поверхностным антигеном. Средняя интенсив-
заболевания. Также независимо от  стадии рака легко- ность флюоресценции MFI (mean fluorescence intensity),
го в  периферической крови больных снижено относи- может служить при  соблюдении стандартных условий
тельное количество CD4+- клеток. В  то же  время мак- измерений количественным критерием, характеризую-
симальный процентный уровень данной субпопуляции щим плотность рецепторов на клетках. При хроническом

429
«Дни иммунологии в СПб 2009» Медицинская Иммунология

лимфолейкозе опухолевый субстрат представлен морфо- –– III группа  – больные на  стадии прогрессирова-
логически зрелыми лимфоцитами, однако встречаются ния заболевания, в крови которых определялось более
случаи заболевания с морфологией атипичных лимфоци- 10% пролимфоцитов n = 20 (12 мужчин и 8 женщин).
тов, но с характерным для этого заболевания иммунофе- Экспрессия CD19 недостоверно уменьшается на хро-
нотипом. Поиск более ранних признаков прогрессиро- нической стадии заболевания по сравнению со здоровы-
вания заболевания способствует назначению адекватной ми людьми, а затем, по мере развития и прогрессирования
терапии, улучшению качества жизни пациентов. болезни, приближается к нормальным значениям. В про-
Задачами исследования явились оценка фенотипа опу- цессе развития заболевания, особенно в стадии прогрес-
холевых клеток у больных с В-ХЛЛ в зависимости от осо- сирования, наблюдается увеличение экспрессии CD20.
бенностей морфологии опухолевого субстрата и  стадии Но эта величина все равно остается достоверно ниже та-
заболевания. В  работе были использованы данные об- ковой у доноров. Величина экспрессии CD23 постепенно
следования 140 больных с диагнозом В-ХЛЛ. Для группы снижается по мере развития заболевания, однако данное
сравнения при  оценке характера экспрессии антигенов снижение не достоверно.
исполизовалась периферическая кровь 20 доноров. Таким образом, экспрессия основных В-клеточных
По морфологии опухолевого субстрата среди больных антигенов при  В-ХЛЛ не  зависит от  морфологических
с ХЛЛ были выделены две группы: особенностей опухолевых клеток, а определяется стадией
–– I группа (102 пациента: 56  мужчин и  46 женщин) заболевания и, следовательно, может быть использована
с морфологией малого лимфоцита; в оценке динамики опухолевого процесса и как дополни-
–– II группа (38 пациентов: 24 мужчины и 14 женщин) тельный прогностический критерий развития ХЛЛ.
с морфологией опухолевых клеток, схожей с широко-
цитоплазменными лимфоцитами (результаты приведе- ЭКСПРЕССИЯ МОЛЕКУЛЯРНЫХ МАРКЕРОВ ИММУННОЙ
ны в таблице). СУПРЕССИИ FOXP3, TGFβ и TGFβ-RII в ЛИМФОЦИТАХ
У пациентов с классической морфологией опухолево- ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ У БОЛЬНЫХ
го субстрата наблюдалось недостоверное снижение экс- с РАЗЛИЧНЫМИ ИММУННЫМИ ПАТОЛОГИЯМИ
прессии CD19 по сравнению с донорами и второй груп-
пой. Экспрессия CD20 была значительно ниже у пациен- Олейник Е.К., Олейник В.М., Чуров А.В.
тов с ХЛЛ, чем у доноров (при этом у пациентов первой
группы это снижение было значительнее). Экспрессия Институт биологии КарНЦ РАН, г. Петрозаводск,
CD23 незначительно ниже у пациентов со вторым типом Россия
морфологии опухолевых клеток, но в обоих случаях ниже, Целью настоящей работы было изучение уровня экс-
чем у доноров. прессии молекулярных маркеров иммунной супрессии
Достоверных различий в  экспрессии анализируемых FOXP3, TGFβ и TGFβ-RII в лимфоцитах периферической
антигенов при различных морфовариантах В-ХЛЛ выяв- крови у  больных с  различными иммунными патология-
лено не было, а по отношению к донорам эти изменения ми. При развитии опухолей, при  хронических вирусных
носили одинаковый характер, в  дальнейших исследова- инфекциях, как и при аутоиммунных процессах, антиген
ниях пациентов по  морфологии опухолевого субстрата длительное время присутствует в  организме, что, есте-
не разделяли. ственно, должно оказывать влияние на функции иммун-
В зависимости от стадии заболевания всех пациентов ной системы и приводить к иммунной модуляции. К тому
разделили на три группы: же как вирусные, так и опухолевые антигены характери-
–– I группа – больные на стадии А (по Binet) – n = 98 зуются высокой изменчивостью, которая позволяет опу-
( 56 мужчин и 42 женщины); холевым клеткам и  вирусам успешно преодолевать им-
–– II группа – больные на стадии в и с (по Binet) – мунологический барьер, формируя иммунологическую
n = 22 (12 мужчин и 10 женщин); толерантность. Можно предположить, что при  развитии
таблица (к тезисам наумова Е.В.)
II группа
I группа (морфология Больные Больные cтадии
Доноры (атипичная
ПАРАМЕТРЫ малого лимфоцита) стадии А в и с
(n = 20) морфология)
(n = 102) (n = 98) (n = 22)
(n = 38)
Х±∆X Х±∆X Х±∆X Х±∆X Х±∆X

CD19+, % 10,34±1,00 74,47±2,70 73,73±3,65 71,97±2,37 75,16±8,07

CD19, (MFI) 77,09±6,00 45,8±2,39*,** 62,64±5,36 52,2±2,76* 48,5±9,1*


CD20+, % 11,16±1,98 70,01±2,50 70,43±3,43 68,11±2,11 66,72±7,61
CD20, (MFI) 361,02±23,30 61,1±3,3*,** 97,9±14,0* 66,11±5,3* 64,1±5,2*

CD23+, % 4,24±0,59 64,06±2,62 57,04±5,53 63,95±2,32 63,25±7,64


CD23, (MFI) 80,77±10,05 69,0±5,12 66,0±9,2 70,58±5,7 73,7±6,7
Примечание. p < 0,05 * – сравнение с донорами; ** – сравнение фенотипов морфовариантов между собой.

430
2009, Т. 11, № 4-5 Онкоиммунология, гемобластозы

опухолевых заболеваний, при хронических вирусных ин- КОЛИЧЕСТВЕННЫЕ ПАРАМЕТРЫ КЛЕТОК ОПУХОЛИ


фекциях и  в  процессе аутоиммунизации происходят на- КАК ФАКТОРЫ ПРОГНОЗА у БОЛЬНЫХ РАЗЛИЧНЫМИ
рушения в  дифференцировке и  функционировании тех НОВООБРАЗОВАНИЯМИ ЯИЧНИКОВ
или иных субпопуляций лимфоцитов-супрессоров Treg,
Паниченко И.В., Богатырёв В.Н., Кузнецов В.В.,
которые могут оказывать регулирующее воздействие
Нечушкин М.И., Анурова О.А., Жорданиа К.И.
на иммунный ответ.
Экспрессия молекулярных маркеров иммунной су- Государственное учреждение «Российский
прессии была изучена у 21 больного с онкологическими
онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина
РАМН», Москва, Россия
заболеваниями (11 больных раком легкого и 10 больных
колоректальным раком), у 14 больных с хронической па- Введение. Своеобразие клинического течения и труд-
пилломавирусной инфекцией (НPV16 и 18) и у 7 больных ности при определении прогноза у больных раком яични-
ревматоидным артритом, а контролем были 12 практиче- ков (РЯ) заставляют вести поиск объективных критериев,
ски здоровых лиц. отражающих течение заболевания.
Цель исследования. Оценка использования метода
Определение уровня экспрессии молекулярных мар-
ДНК-проточной цитометрии у  больных РЯ  для опреде-
керов лимфоцитов проводили методом полимеразной
ления важных объективных факторов, имеющих прогно-
цепной реакции в  реальном времени с  обратной транс-
стическое значение.
крипцией (Real-Time RT-PCR). Относительный уровень Материалы и  методы. В  исследование включены
экспрессии генов TGFβ-1, TGFβ-RII и FOXP3 определя- 309 больных РЯ I-IV стадий, которым проведено лечение
ли по уровню мРНК референсного гена GAPDH. в  ГУ РОНЦ им.  Н.Н.  Блохина РАМН с  1993 по  2002  гг.
Полученные результаты представлены в таблице. Исследования ДНК в  клеточной популяции проводили
Сравнение уровней экспрессии молекулярных мар- на  лазерном проточном цитофлуориметре «EPICS-XL»
керов регуляторных лимфоцитов Treg в  разных группах («Coulter», СШA). Полученные данные были проана-
показало, что у  больных с  онкологическими заболева- лизированы при  помощи программы «MultiСycle», ис-
ниями наблюдается наиболее значительная активация пользуемой для анализа плоидности и числа опухолевых
лимфоцитов-супрессоров. При этом усиление экспрес- клеток в  каждой фазе клеточного цикла («Phoenix Flow
сии FOXP3 и TGFβ было выше у больных раком легкого Systems», СШA).
по сравнению с колоректальным раком. В группе больных Результаты. Содержание ДНК в  опухолевых клетках
с вирусной инфекцией также отмечено возрастание уров- было изучено у 309 больных РЯ, из них только у 77 (24,9%)
ней экспрессии цитокина-ингибитора TGFβ и  транс- выявлен диплоидный тип опухоли и у 232 (75,1%) – анеу-
плоидный. При этом группа анеуплоидных новообразо-
крипционного фактора FOXP3. У больных с аутоиммун-
ваний (n  =  232) крайне неоднородна по  своему составу:
ным заболеванием существенных изменений данных
у  53 (22,8%) в  опухолях отмечена анеуплоидия с  поте-
показателей иммунной супрессии не обнаружено. Таким
рей хромосом (ИДНК<  1,0), у  146 (62,7%)  – анеуплои-
образом, механизмы формирования иммунной супрес- дия в  пределах митотического цикла (ИДНК  =  1,1- 1,9),
сии в онкогенезе, а также при хронической вирусной ин- у  8 (3,4%)  – тетраплоидные опухоли (ИДНК  =  2,0),
фекции могут быть связаны с  активацией регуляторных у 7 (3,0%) – гиперанеуплоидные опухоли (ИДНК > 2,1),
лимфоцитов Treg с фенотипом FOXP3+TGF-β+. и  у  18 (7,7%)  – многоклоновые опухоли. Анеуплоидные
Работа поддержана Программой Президиума РАН опухоли достоверно чаще определялись у  пациентов
«Фундаментальные науки – медицине» и РФФИ-Карелия с III-IV стадиями заболевания, в серозных или светлокле-
№ проекта 08-04-98838. точных аденокарциномах, а  также в  опухолях с  низкой
Таблица. Уровень экспрессии генов молекулярных маркеров (TGFβ, F-βRII, FOXP3) Тreg
при различных иммунопатологиях (ОНКО – онкобольные, КРР – колоректальный рак, РЛ – рак
легкого, АИЗ – аутоиммунные заболевания, ВИ – вирусные инфекции) (к тезисам Олейника Е.К. и др.)
TGFβ TGFβ-RII FoxP3
Контроль
1,00±0,08 1,00±0,10 1,00±0,06
(n = 12)
ОНКО
1,28±0,03* 1,13±0,05 1,45±0,10*
(n = 21)
КРР
1,21±0,05* 1,05±0,08 1,22±0,10*
(n = 10)
РЛ
1,34±0,04* 1,20±0,05 1,66±0,13*
(n = 11)
АИЗ
1,11±0,15 0,97±0,20 1,02±0,10
(n = 7)
ВИ
1,30±0,13* 0,98±0,11 1,25±0,12*
(n = 14)
Примечание. * – различия между опытом и контролем достоверны, p < 0,05.

431
«Дни иммунологии в СПб 2009» Медицинская Иммунология

степенью дифференцировки. Среди больных с  анеупло- Материалы и  методы. Клиническое обследование


идными новообразованиями полный эффект от проводи- больных с направляющим диагнозом FHL и формирова-
мой химиотерапии достигнут в 97 (57,0%) наблюдениях, ние выборки проводилось на базе Федерального научно-
в  то время как среди больных с  диплоидными опухоля- клинического центра детской гематологии, онкологии
ми – у 46 (83,6%) пациенток (р < 0,05). Вместе с тем про- и  иммунологии. Эту группу составили образцы крови
грессирование основного заболевания отмечено только 18  FHL пациентов (16  мальчиков и  2 девочки) с  диа-
у 4 (7,3%) больных с диплоидными опухолями, в то вре- гнозом, полностью соответствующим международным
мя как у каждой четвертой пациентки с анеуплоидными клиническим критериям HS  1991. Возраст манифеста-
опухолями отмечено прогрессирование основного забо- ции заболевания составил 18,5+8  месяцев (от 19  дней
левания на фоне проводимого лечения – 44 (25,9%) боль- до 12 лет). Группу пациентов с направляющим диагнозом
ные. При сопоставлении отдаленных результатов лечения XLP составили 18  мальчиков, обследованных в  различ-
больных РЯ с количественными параметрами клеток опу- ных клинических центрах России. ДНК выделяли с по-
холей оказалось, что среди 77 больных РЯ с диплоидны- мощью набора DNA Prep 200 DIAtomTM из  образцов
ми опухолями в  течение 5  лет наблюдения были живы периферической крови и  мазков костно-мозговых пун-
66,8±6,6% женщин, в то время как среди 232 пациенток ктатов. Исследование кодирующих последовательностей
с  анеуплоидными опухолями  – всего лишь 24,4±3,3% генов проводили методом прямого автоматического сек-
больных (p < 0,05). венирования.
Заключение. Использование метода ДНК-проточной Результаты. Исследованы кодирующие области PRF1,
цитометрии показало, что злокачественные эпителиаль- UNC13D и  STX11 во  всех 18  образцах крови больных
ные новообразования яичников отличаются между со- с  направляющим диагнозом FHL. Мутации выявлены
бой не только по своему клиническому течению, но и по в  12  образцах. У  одного пациента найдены 2  мутации
количественным характеристикам клеток опухоли, что в гене PRF1. У десяти пациентов найдены мутации в гене
UNC13D, и  у  одного  – в  гене STX11. У  трех пациентов
имеет большое значение для прогнозирования течения
выявлена только одна мутация в гетерозиготном положе-
заболевания клиницистом и выработки индивидуальной
нии, а оставшиеся девять либо являются носителями двух
лечебной тактики.
патологических мутаций, либо одной в гомозиготном со-
стоянии. Среди выявленных мутаций 7 являются ранее
ИССЛЕДОВАНИЕ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКОЙ не описанными. Среди мальчиков с направляющим диа-
ПРИРОДЫ CЕМЕЙНОГО ГЕМОФАГОЦИТАРНОГО гнозом FHL, у которых не обнаружено мутаций в генах,
ЛИМФОГИСТИОЦИТОЗА (FHL) и X-СЦЕПЛЕННОГО ответственных за развитие FHL, выявлен один носитель
ЛИМФОПРОЛИФЕРАТИВНОГО СИНДРОМА (XLP) мутации в гене SH2D1A, ответственном за развитие XLP.
в ГРУППАХ РОССИЙСКИХ БОЛЬНЫХ В группе больных с направляющим диагнозом XLP про-
ведено исследование кодирующей последовательности
Полтавец Н.В.1, Масчан М.А.2, Забненкова В.В.1, генов SH2D1A и BIRC4, выявлено пять носителей мута-
Поляков А.В.1, Масчан А.А.2, Новичкова Г.А.2 ций в гене SH2D1A. В кодирующей последовательности
гена BIRC4 мутаций не обнаружено ни в FHL, ни в XLP
1
Медико-генетический научный центр РАМН, группах.
Москва, Россия Выводы. Мутации в  FHL группе выявлены на
2
ФГУ «Федеральный научно-клинический центр детской 21  из  34  исследованных хромосом (62%). Мутации
гематологии, онкологии и иммунологии», в XLP группе обнаружены на 6 из 18 хромосом (30%).
Москва, Россия
Введение. Гемофагоцитарные лимфогистиоцитозы
ВЫЗЫВАЕМЫЕ ДЕКСАМЕТАЗОНОМ ИЗМЕНЕНИЯ
(ГЛГ)  – группа заболеваний, основой патогенеза кото-
ИММУНОФЕНОТИПА ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК ПРИ
рых является патологическая активация и  пролифера-
CD10-ПОЗИТИВНЫХ В-ЛИНЕЙНЫХ ОСТРЫХ
ция макрофагальных клеток. Основными клиническими
ЛИМФОБЛАСТНЫХ ЛЕЙКОЗАХ У ДЕТЕЙ
проявлениями являются лихорадка, гепатоспленоме-
галия и  панцитопения. Наиболее частой генетически- Попов А.М., Вержбицкая Т.Ю., Цаур Г.А.,
обусловленной аутосомно-рецессивной формой ГЛГ Шориков Е.В., Савельев Л.И, Фечина Л.Г.
является FHL. Основой патогенеза FHL является нару-
шение цитотоксической функции NK- и Т-лимфоцитов. Областная детская клиническая больница № 1,
В настоящее время описаны три гена, мутации в которых г. Екатеринбург, Россия
проводят к FHL: PRF1 (FHL2), UNC13D (FHL3), STX11 ГУЗ Центр организации специализированных видов
(FHL4). Более редкой формой наследственных ГЛГ яв- медицинской помощи институт медицинских
ляется XLP, Х-сцепленное заболевание, развивающее- клеточных технологий, г. Екатеринбург, Россия
ся вследствие нарушенного иммунного ответа на  вирус Уральская государственная медицинская академия,
Эпштейна–Барр. Описаны два гена, мутации в  которых г. Екатеринбург, Россия
приводят к развитию XLP: SH2D1A и BIRC4. В разверну- Введение. Иммунофенотип опухолевых клеток из-
той фазе заболевания FHL и XLP клинически практиче- меняется под действием химиопрепаратов индукцион-
ски неразличимы. ной терапии, прежде всего кортикостероидов, что часто
Цель: поиск мутаций в кодирующей последовательно- осложняет мониторинг минимальной остаточной болез-
сти генов, ответственных за развитие FHL и XLP в груп- ни (MRD) методом проточной цитометрии. В  настоя-
пах российских больных. щее время описаны лишь изменения иммунофенотипа,

432
2009, Т. 11, № 4-5 Онкоиммунология, гемобластозы

вызванные преднизолоном, в  то время как во  многих сти к  неточному подсчету содержания остаточных бла-
протоколах лечения ALL, в том числе в российском про- стов в костном мозге. Важно отметить, что к 36-му дню
токоле ALL-MB, в качестве глюкокортикоида в индукци- экспрессия некоторых антигенов имела тенденцию
онной терапии применяется дексаметазон. к восстановлению, хотя и частичному. Тенденции, опи-
Цель исследования: оценить изменения экспрессии санные для преднизолона, сохраняются и  при приме-
опухолевыми клетками антигенов CD19, CD10, CD34, нении дексаметазона, с  той разницей, что экспрессия
CD20, CD58, CD45, CD38 при  CD10-позитивных ALL CD58, считавшаяся стабильной, также снижается, а не-
из  В-линейных предшественников (BCP-ALL), проис- которое восстановление экспрессии маркеров зачастую
ходящие во время индукционной терапии по протоколам начинается быстрее. C  другой стороны, значительное
ALL-MB 2002 и ALL-MB 2008. повышение как экспрессии CD20 опухолевыми клетка-
Методы. В  исследуемую группу вошли 24 MRD- по- ми, так и  количества CD20-позитивных бластов делает
зитивных пациента с  первично диагностированным остаточные опухолевые клетки чувствительными к  со-
BII-ALL в  возрасте от  11  месяцев до  14  лет, получавшие временным методам иммунотерапии.
индукционную терапию по  протоколам ALL-MB 2002
Заключение. Изменения иммунофенотипа под воз-
и  ALL-MB 2008. Исследовали 24  диагностических об-
действием дексаметазона во  время индукционной тера-
разца, 18 MRD-позитивных образцов 15-го дня терапии,
пии аналогичны таковым при применении преднизолона
а также 13 MRD-позитивных образцов 36-го дня терапии
и  серьезно осложняют мониторинг MRD методом про-
(окончание индукционной терапии). Среднюю интен-
точной цитометрии.
сивность флюоресценции (MFI) в  образцах 15-го или
36- го дня сравнивали со значением на момент диагности-
ки того же пациента. Кроме того, сравнивали изменение ДИНАМИКА ПОПУЛЯЦИИ NKT-КЛЕТОК В ПРОЦЕССЕ
распределения клеток на  точечных графиках интенсив- СТАНОВЛЕНИЯ РЕМИССИИ У БОЛЬНЫХ
ности флюоресценции, а  также процентное содержа- с В-КЛЕТОЧНЫМИ ЛИМФОПРОЛИФЕРАТИВНЫМИ
ние позитивных по данному маркеру опухолевых клеток ЗАБОЛЕВАНИЯМИ
на момент диагностики и во время терапии.
Результаты. В  результате проведенного исследова- Розанова О.Е., Чубукина Ж.В., Глазанова Т.В.,
ния было выявлено четыре типа изменения иммуно- Павлова И.Е., Акинфиева О.В., Бубнова Л.Н.
фенотипа опухолевых клеток: повышение экспрессии Российский НИИ гематологии и трансфузиологии,
маркеров, снижение экспрессии маркеров, изменение Санкт-Петербург, Россия
распределения клеток на графиках с гомогенного на ге-
терогенное, а также с гетерогенного на гомогенное. Сре- В последние годы особое внимание исследователей
ди пациентов, вошедших в группу исследования, у всех уделяется популяции лимфоцитов, получивших назва-
наблюдались повышение или снижение экспрессии ние NKT-клеток. Эти лимфоциты экспрессируют как
маркеров, применяемых для мониторинга MRD. Основ- маркеры NK-клеток (CD16, CD56), так и  Т-клеточные
ными тенденциями, выявленными в  результате иссле- дифференцировочные антигены (CD3, CD4, CD8) и, как
дования, оказались снижение экспрессии CD10, CD58 полагают, вовлечены в  регуляцию различных процессов
и  CD34, повышение экспрессии CD20 и  CD45. Экс- при  защите организма от  патогенов, при  аутоиммунных
прессия CD38 и  CD19 также часто изменялась, однако и опухолевых заболеваниях. Однако роль NKT-клеток (их
каких-либо закономерностей в  случае этих маркеров количество, динамика) в  опухолевых заболеваниях лим-
выявить не  удалось. Важно отметить, что изменялось фоидных тканей практически не изучено.
не  только количество молекул антигенов на  мембране В связи с этим в задачу настоящего исследования вхо-
опухолевых клеток, но также и количество позитивных дило изучить динамику NKT-клеток в процессе специфи-
по данному маркеру бластов, что, в свою очередь, при- ческого лечения В-клеточных лимфопролиферативных
водило к изменению распределения опухолевых клеток заболеваний (В-ЛПЗ).
на  точечных графиках. Таким образом, лейкозные бла- Материалы и  методы. Обследовано 126 боль-
сты приближались по своему иммунофенотипу к зрелым ных В-ЛПЗ в  динамике противоопухолевой терапии
лимфоцитам, с которыми их и приходится дифференци- (флюдарабин-содержащие режимы), которые по  мере
ровать при мониторинге MRD во время индукционной нормализации уровня Т-клеток были разделены на  две
терапии. И хотя различия в экспрессии антигенов между группы: 1-я  (76  человек) с  относительным содержанием
нормальными лимфоцитами и бластами чаще всего со- CD3+ клеток в  периферической крови >  55% (нижняя
хранялись, такое «созревание», естественно, усложня- граница нормы), 2-я (50 человек), в которой содержание
ет мониторинг MRD. Зачастую на  точечных графиках CD3+ клеток было менее 55%. Иммунологический фено-
крайне сложно провести четкую границу между нор- тип лимфоцитов определяли методом двухпараметриче-
мальными и  опухолевыми клетками, что может приве- ской проточной цитометрии («Beckman Coulter» FC500)
Таблица (к тезисам Розановой О.Е. и др.)
Группа CD3+ CD4+/CD3+ CD8+/CD3+ CD19+ CD16/56+/CD3- NKT
1 76,8±6,2 33,3±4,5 38,9±5,3 5,9±1,3 13,2±3,6 10,6±2,1
2 29,7±3,4 13,0±3,1 16,9±2,9 50,1±5,2 13,6±4,0 3,9±0,9
P1-2 < 0,001 < 0,001 < 0,001 < 0,001 > 0,05 < 0,001

433
«Дни иммунологии в СПб 2009» Медицинская Иммунология

с  использованием моноклональных антител «Beckman дрогеназ в лимфоцитах проводили биолюминесцентным


Coulter», США. методом.
Полученные результаты представлены в таблице. Результаты. При исследовании состояния клеточно-
Известно, что В-ЛПЗ изначально характеризуются го иммунитета у  больных раком легкого в  зависимости
выраженным доминированием экспрессии В-клеточных от  метастазирования обнаружено значительное сход-
маркеров и  редукцией Т-клеточного клона. Как следует ство изменений величин исследуемых показателей от-
из представленных в таблице данных, в процессе достиже- носительно контроля в  группах больных без метастазов
ния ремиссии на  фоне снижения уровня В-лимфоцитов и  с  метастазами в  лимфоузлы. Так, независимо от  мета-
(CD19+) и  нормализации содержания CD3+ клеток от- стазирования в  лимфоузлы у  больных мужчин повыша-
мечалась сохраняющаяся инверсия соотношения им- ется концентрация лейкоцитов в периферической крови,
мунорегуляторных субпопуляций Т-клеток (соотноше- снижается относительный уровень общих лимфоцитов,
ние CD4+ и  CD8+ составило 0,85 и  0,77 соответственно понижается относительное и  абсолютное содержание
для 1-й и 2-й групп). При этом существенно повышался CD3+ и CD4+ клеток. Кроме того, также независимо от ме-
уровень NKT-клеток. Особо следует подчеркнуть, что тастазирования у больных относительно контрольных зна-
при достижении ремиссии количество NKT-клеток пре-
чений у больных повышается относительная концентрация
вышало нормальный уровень (4,8%) более чем в  2  раза.
CD16+ лимфоцитов и процентный и абсолютный уровень
Также представляют интерес полученные нами данные
CD72+ и HLA-DR+- клеток. Только у больных с метастази-
о  возрастании в  ремиссии содержания CD3+/HLA-DR+
рованием в  лимфоузлы понижается относительная и  аб-
лимфоцитов (10,6 и 4,3% в 1-й и 2-й группе соответствен-
солютная концентрация CD8+-лимфоцитов. Независимо
но, при норме 1,8%), подтверждающие появление клона
активированных Т-клеток. от  метастазирования у  больных мужчин относительно
Заключение. Таким образом, становление клинико- контрольных значений повышается концентрация IgA
гематологической ремиссии у  больных В-ЛПЗ сопрово- и снижается уровень IgG и ЦИК в сыворотке крови. Также
ждается достоверным ростом популяции NKT-клеток независимо от метастазирования в лимфоузлы снижается
и других активированных Т-лимфоцитов. уровни относительного синтеза IgA, IgM и  IgG. Одна-
ко только у больных раком легкого с метастазированием
в  лимфоузлы корня легкого статистически достоверно
ЗАВИСИМОСТЬ СОСТОЯНИЯ ИММУННОГО повышается сывороточная концентрация IgМ. При ис-
СТАТУСА и МЕТАБОЛИЗМА ЛИМФОЦИТОВ следовании состояния метаболического статуса иммуно-
ОТ МЕТАСТАЗИРОВАНИЯ ПРИ НЕМЕЛКОКЛЕТОЧНОМ компетентных клеток крови у больных раком легкого об-
РАКЕ ЛЕГКОГО наружены более выраженные особенности в зависимости
Савченко А.А., Дыхно Ю.А., Лапешин П.В. от метастазирования в лимфоузлы. Так, только у больных
мужчин без метастазирования в  лимфоцитах крови ста-
НИИ медицинских проблем Севера СО РАМН, тистически достоверно снижается активность глюкозо-
Красноярский государственный медицинский 6-фосфатдегидрогеназы и  повышается уровень глутати-
университет, г. Красноярск, Россия онредуктазы. Только у больных раком легкого с метаста-
Метастазы злокачественных опухолей значительно зированием повышается активность НАДФН-зависимой
осложняют течение заболевания. При этом метастази- глутаматдегидрогеназы. Активность изоцитратдегидроге-
рование развивается не  только на  поздних стадиях раз- назы и глутаматдегидрогеназы снижены у больных раком
вития опухоли, но в ряде случаев уже на ранних стадиях легкого относительно контрольных диапазонов, однако
заболевания метастазы обнаруживаются в региональных у  больных без метастазирования понижение активности
лимфоузлах. Особенно актуальны исследования иммун- данных ферментов в лимфоцитах крови более выражено,
ных механизмов при метастазировании у больных раком чем у  больных с  метастазированием в  лимфоузлы. Неза-
легкого. Связано это с  тем, что в  настоящее время рак висимо от метастазирования снижается внутриклеточная
легкого занимает первое место в  структуре онкологиче- активность малик-фермента, глицерол-3- фосфатдегидро-
ских заболеваний в  России, причем значительную часть геназы и малатдегидрогеназы.
больных выявляют уже на IV стадии заболевания, то есть Заключение. Состояние иммунного статуса у  боль-
в условиях метастазирования опухоли. ных раком легкого определяется как иммунодефицитное
Цель исследования: изучить состояния иммунной си- и практически не зависит от отсутствия или наличия ме-
стемы и метаболизма лимфоцитов крови у больных раком тастазов в лимфоузлах корня легкого. При исследовании
легкого в зависимости от метастазирования опухоли. метаболического статуса лимфоцитов крови обнаруже-
Материалы и методы. На базе торакального отделения ны изменения, характерные для больных раком легко-
Красноярского краевого онкологического центра об- го вообще и специфические для групп больных с отсут-
следовано 126  больных мужского пола с  раком легкого. ствием и наличием метастазов в лимфоузлах. Наиболее
Кровь на  исследование забиралась на  следующий день выраженными общими особенностями метаболизма
после поступления. Наличие метастазов в  лимфоузлах лимфоцитов при  раке легкого является ингибирование
корня легкого определяли гистологическим методом. анаэробных процессов и  разбалансировка фермента-
в качестве контроля обследовано 106 здоровых мужчин. тивных реакций цикла трикарбоновых кислот. Разли-
Фенотип лимфоцитов крови оценивали с  помощью ме- чия в метаболических реакциях лимфоцитов у больных
тода непрямой иммунофлуоресценции. Концентрацию при  отсутствии и  наличии метастазирования опухоли
иммуноглобулинов класса в  сыворотке определяли ме- определяются уровнем пластических и  антиоксидант-
тодом иммунодиффузии. Определение активности деги- ных реакций.

434
2009, Т. 11, № 4-5 Онкоиммунология, гемобластозы

ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ОСТРЫХ щиты от малигнизированных клеток, и снижение их со-


ЛЕЙКОЗОВ держания на  стадии ремиссии может быть одной из  се-
рьезных причин развития рецидива заболевания [Wu  J.,
Смирнова О.В., Савченко А.А. Lanier  L.L., 2003]. Снижение количества Т-лимфоцитов
НИИ медицинских проблем Севера СО РАМН, у  больных происходит за  счет понижения в  процентном
г. Красноярск, Россия и  абсолютном содержании CD4+ и  цитотоксических
Целью настоящего исследования явилось изучение Т-лимфоцитов. Единственным показателем иммунного
особенностей клеточного и гуморального звеньев имму- статуса, величина которого восстанавливается при  ре-
нитета у больных ОНЛЛ и у больных ОЛЛ в зависимости миссии ОЛЛ, является иммунорегуляторный индекс. При
от стадии заболевания. рецидиве ОЛЛ большинство исследуемых параметров
Материалы. Всего под наблюдением находились иммунного статуса восстанавливается до  контрольного
100  больных ОНЛЛ с  М2 вариантом и  73  больных ОЛЛ уровня. На данной стадии патологического процесса со-
с пре-пре-В вариантом. У 30 больных ОНЛЛ и 25 больных храняется только снижение относительного содержания
ОЛЛ заболевание было выявлено в стадии первичной ата- Т-лимфоцитов. При исследовании состояния гумораль-
ки, у 49 больных ОНЛЛ и 26 больных ОЛЛ – в стадии пол- ного звена иммунной системы обнаружено, что на стадии
ной ремиссии после проведенного лечения, и у 21 боль- первой атаки заболевания никаких отклонений от нормы
ных ОНЛЛ и 22 больных ОЛЛ – в стадии повторного реци- нет. При ремиссии заболевания установлено выраженное
дива. В качестве контроля обследованы 120 здоровых лиц снижение концентрации IgA и  IgG. При рецидиве ОЛЛ
аналогичного возраста. Популяционный и субпопуляци- сохраняется понижение в  содержании IgA, до  уровня
онный состав лимфоцитов крови оценивали с помощью нормы восстанавливается уровень IgG в сыворотке крови
метода непрямой иммунофлуоресценции с  использова- и понижается концентрация IgM.
нием моноклональных антител к CD3, CD4, CD8, CD16, Заключение. Проведенное нами исследование выяви-
CD19, HLA-DR. Концентрация иммуноглобулинов клас- ло, что у  больных ОНЛЛ на  стадии рецидива развивает-
са A, M и G в сыворотке определяли иммуноферментным ся комбинированный иммунодефицит с  поражением
методом. Оценка клеточного и гуморального иммунитета Т-  и  В-систем иммунитета. Снижение соотношения
CD4+ клеток к цитотоксическим лимфоцитам способству-
проводилась при  поступлении больных до  начала пато-
генетического лечения. Описание выборки производили ет появлению первичной атаки у больных ОЛЛ. Особен-
с помощью подсчета медианы (Ме) и интерквартального ностью рецидива ОЛЛ является увеличение количества
размаха в виде 25 и 75 процентилей (С25 и С75). Достовер- NK-клеток. Возникшие Т-иммунодефициты во  время
ность различий между показателями независимых выбо- ремиссии ОНЛЛ и ОЛЛ имеют одинаковый характер, так
рок оценивали по критерию Манна–Уитни. Статистиче- как обусловлены идентичной причиной возникновения.
ский анализ осуществляли в пакете прикладных программ Данные иммунодефициты возникли после проведенного
«Statistica 7.0» (StatSoft Inc., 2004). курса химиотерапии у больных.
Результаты. Состояние клеточного иммунитета
у  больных ОНЛЛ при  первичной атаке характеризу- ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТАБОЛИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ
ется снижением процентной концентрации Т-клеток ЛИМФОЦИТОВ КРОВИ БОЛЬНЫХ ОСТРЫМ
и  CD4+ лимфоцитов, на  стадии ремиссии  – снижени- НЕЛИМФОБЛАСТНЫМ ЛЕЙКОЗОМ
ем абсолютного количества лейкоцитов, абсолютного
и  относительного содержания Т, CD4+, цитотоксиче- Смирнова О.В., Савченко А.А.
ских лимфоцитов, NK-клеток, абсолютного количества
В-лимфоцитов и лимфоидных клеток, экспрессирующих НИИ медицинских проблем Севера СО РАМН,
маркер HLA-DR. При рецидиве ОНЛЛ состояние клеточ- г. Красноярск, Россия
ного иммунитета характеризуется снижением абсолютно- Уровень иммунореактивности определяется не только
го количества лейкоцитов и лимфоцитов в крови, относи- морфологическим составом клеток иммунной системы
тельного и абсолютного содержания Т, CD4+, NK-клеток и концентрацией иммуноглобулинов в сыворотке крови,
и абсолютного количества цитотоксических лимфоцитов но и уровнем метаболических процессов в них, которые
и клеток, экспрессирующих маркер HLA-DR. При иссле- в  значительной степени определяют функциональную
довании состояния гуморального звена иммунной систе- активность иммуноцитов.
мы обнаружено, что на стадии первой атаки заболевания Целью исследования явилось изучение особенностей
никаких отклонений от нормы нет. При ремиссии выяв- метаболического статуса лимфоцитов крови у  больных
лено снижение концентрации IgG в крови. При рецидиве ОНЛЛ в зависимости от стадии заболевания.
снижаются в крови концентрации всех исследуемых им- Материалы и  методы. Всего под наблюдением нахо-
муноглобулинов: IgA, IgM, IgG. Состояние клеточного дились 100  больных ОНЛЛ с  иммунофенотипическим
иммунитета у больных ОЛЛ на стадии атаки характеризу- вариантом М4. У  30  больных заболевание было выяв-
ется повышением абсолютного содержания лимфоцитов лено в  стадии первичной атаки, у  49  – в  стадии полной
и  снижением процентной концентрации Т-клеток. При ремиссии после проведенного лечения, и у 21 – в стадии
ремиссии ОЛЛ на  фоне снижения процентного и  абсо- повторного рецидива. В  качестве контроля обследовано
лютного содержания лимфоцитов в  крови понижаются 120  здоровых лиц аналогичного возраста. Определение
относительное и абсолютное количество Т-лимфоцитов, активности НАД(Ф)-зависимых дегидрогеназ лимфоци-
абсолютный уровень NK-клеток, В-лимфоцитов и  лим- тов крови проводилось биолюминесцентным методом
фоидных клеток, экспрессирующих маркер HLA-DR. при  поступлении больных до  начала патогенетическо-
Популяция NK-клеток является основной в  системе за- го лечения. Данным методом определялась активность

435
«Дни иммунологии в СПб 2009» Медицинская Иммунология

следующих ферментов: глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы гивают углеводный обмен, а при рецидиве – углеводный


(Г6ФДГ), глицерол-3-фосфатдегидрогеназы (Г3ФДГ), и  жировой обмены. Таким образом, изменения, возни-
малик-фермента (НАДФМДГ), НАД- и НАДН-зависимой кающие у больных ОНЛЛ при рецидиве, свидетельствуют
реакции лактатдегидрогеназы (ЛДГ и НАДН-ЛДГ), НАД- об истощении метаболических резервов лимфоцитов.
и  НАДН-зависимой реакции малатдегидрогеназы (МДГ
и  НАДН-МДГ), НАДФ- и  НАДФН-зависимой глута-
матдегидрогеназы (НАДФГДГ и  НАДФН-ГДГ), НАД- ИЗМЕНЕНИЯ МЕТАБОЛИЧЕСКИХ ПАРАМЕТРОВ
и  НАДН-зависимой глутаматдегидрогеназы (НАДГДГ ЛИМФОЦИТОВ КРОВИ БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМИ
и  НАДН-ГДГ), НАД- и  НАДФ-зависимых изоцитратде- ЛЕЙКОЗАМИ
гидрогеназ (НАДИЦДГ и  НАДФИЦДГ соответственно) Смирнова О.В., Манчук В.Т.
и  глутатионредуктазы (ГР). Описание выборки произ-
водили с помощью подсчета медианы (Ме) и интерквар- НИИ медицинских проблем Севера СО РАМН,
тального размаха в виде 25 и 75 процентилей (С25 и С75). г. Красноярск, Россия
Достоверность различий между показателями незави-
Целью исследования явилось изучение особенностей
симых выборок оценивали по  критерию Манна–Уитни.
состояния метаболических параметров лимфоцитов кро-
Статистический анализ осуществляли в пакете приклад-
ви у больных ХМЛ и ХЛЛ в зависимости от стадии забо-
ных программ «Statistica 7.0» (StatSoft Inc., 2004).
левания.
Результаты. При исследовании состояния метаболи-
Материалы и методы. Всего под наблюдением находи-
ческого статуса лимфоцитов крови у больных ОНЛЛ уста-
лось 44  больных ХМЛ и  57 больных ХЛЛ. У  20  больных
новлено, что активность Г3ФДГ снижена относитель-
ХМЛ и 32 больных ХЛЛ заболевание диагностировалось
но контроля и  показателей при  ремиссии заболевания,
в развернутую стадию, а у 24 ХМЛ и 25ХЛЛ – в терминаль-
у  больных при  рецидиве. Активность ферментов ЛДГ,
НАДФИЦДГ, МДГ, НАДИЦДГ снижена относительно ную стадию. В качестве контроля обследовано 120 здоро-
контроля у всех групп больных. Активность НАДН-ЛДГ вых лиц аналогичного возраста. Определение активности
снижена относительно контроля у  больных при  атаке НАД(Ф)-зависимых дегидрогеназ лимфоцитов крови
и рецидиве ОНЛЛ. Активность фермента ГР снижена от- проводилось биолюминесцентным методом при  посту-
носительного контроля у больных при атаке и ремиссии, плении больных до  начала патогенетического лечения.
у  больным при  рецидиве активность данного фермен- Данным методом определялась активность следующих
та достоверно выше, чем у  больных оставшихся групп. ферментов: глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г6ФДГ),
У  больных при  атаке и  ремиссии ОНЛЛ выявляется глицерол-3-фосфатдегидрогеназы (Г3ФДГ), малик-
снижение интенсивности терминальных реакций глико- фермента (НАДФМДГ), НАД- и  НАДН-зависимой ре-
лиза и  уровень концентрации интермедиатов для цикла акции лактатдегидрогеназы (ЛДГ и  НАДН-ЛДГ), НАД-
Кребса. Ингибирование реакций цикла Кребса не  свя- и  НАДН-зависимой реакции малатдегидрогеназы (МДГ
зано с  оттоком субстратов на  реакции аминокислотного и  НАДН-МДГ), НАДФ- и  НАДФН-зависимой глута-
обмена. Особенностью метаболизма лимфоцитов крови матдегидрогеназы (НАДФГДГ и  НАДФН-ГДГ), НАД-
у больных данной группы является снижение перекисных и  НАДН-зависимой глутаматдегидрогеназы (НАДГДГ
процессов в клетках крови, при возможности реагирова- и  НАДН-ГДГ), НАД- и  НАДФ-зависимых изоцитратде-
ния их внутриклеточных антиоксидантных систем. гидрогеназ (НАДИЦДГ и  НАДФИЦДГ соответственно)
У больных при  рецидиве ОНЛЛ снижается интен- и  глутатионредуктазы (ГР). Описание выборки произ-
сивность переноса продуктов липидного катаболизма водили с помощью подсчета медианы (Ме) и интерквар-
на окислительно-восстановительные реакции гликолиза. тального размаха в виде 25 и 75 процентилей (С25 и С75).
Подобное состояние реакций приводит к  ингибирова- Достоверность различий между показателями незави-
нию гликолиза на  терминальных реакциях. В  митохон- симых выборок оценивали по  критерию Манна–Уитни.
дриальный компартмент этих больных поступает пони- Статистический анализ осуществляли в пакете приклад-
женное количество пирувата, что приводит к нарушению ных программ «Statistica 7.0» (StatSoft Inc., 2004).
ферментативных реакций цикла трикарбоновых кислот. Результаты: при исследовании состояния метаболиче-
Особенностью метаболизма клеток иммунной системы ского статуса лимфоцитов крови у больных ХМЛ установ-
у больных данной группы является повышение перекис- лено, что на всех стадиях заболевания снижается актив-
ных процессов в клетках крови и возможность реагирова- ность ферментов Г6ФДГ, ЛДГ, НАДФИЦДГ, НАДИЦДГ,
ния внутриклеточных антиоксидантных систем. ГР. У  больных в  развернутой стадии ХМЛ дополнитель-
Заключение. У больных ОНЛЛ на всех стадиях заболе- но снижается активность МДГ, НАДН-ЛДГ. У  больных
вания регистрируются нарушения метаболического ста- в  терминальной стадии снижается активность фермента
туса лимфоцитов крови. Изменения этого статуса во мно- Г3ФДГ. У  больных в  развернутой стадии ХМЛ сниже-
гом определяют функциональную активность этих клеток на интенсивность гликолиза на  терминальных стадиях
и опосредованно влияют на возникновение и прогресси- и  уменьшен уровень концентрации интермедиаторов
рование заболевание. Проведенное нами исследование для цикла трикарбоновых кислот. Снижена интенсивность
активности метаболических ферментов лимфоцитов по- субстратного потока по  лимонному циклу. У  этих боль-
казало, что у всех больных ОНЛЛ вне зависимости от ста- ных имеется недостаточность метаболических реакций
дии заболевания в  лимфоцитах выявляется функцио- митохондриального компартмента. Особенностью мета-
нальная недостаточность, проявляющаяся уменьшением болизма лимфоцитов крови у больных является снижение
интенсивности метаболических процессов и  снижением перекисных процессов в клетках крови. В терминальную
антиоксидантной защиты клеток, однако в стадии атаки стадию ХМЛ в лимфоцитах крови снижены пластические
и  ремиссии нарушения метаболизма в  основном затра- процессы, интенсивность переноса продуктов липидного

436
2009, Т. 11, № 4-5 Онкоиммунология, гемобластозы

катаболизма на  окислительно-восстановительные ре- 120  здоровых лиц аналогичного возраста. Популяцион-
акции гликолиза. Гликолиз ингибирован на  начальных ный и субпопуляционный состав лимфоцитов крови оце-
реакциях. Снижена наработка пирувата в гликолизе, ин- нивали с помощью метода непрямой иммунофлуоресцен-
гибированы ферментативные реакции цикла трикарбо- ции с  использованием моноклональных антител к  CD3,
новых кислот. Имеется недостаточность метаболических CD4, CD8, CD16, CD19, HLA-DR. Концентрация имму-
реакций митохондриального компартмента и  снижены ноглобулинов класса  A, M  и  G в  сыворотке определяли
перекисные процессы в лимфоцитах. иммуноферментным методом. Оценка клеточного и  гу-
При исследовании состояния метаболического ста- морального иммунитета проводилась при  поступлении
туса лимфоцитов крови у больных ХЛЛ установлено, что больных до начала патогенетического лечения. Описание
на  всех стадиях заболевания снижается активность фер- выборки производили с помощью подсчета медианы (Ме)
ментов ЛДГ, НАДФИЦДГ, МДГ, НАДИЦДГ, НАДН-ЛДГ. и интерквартального размаха в виде 25 и 75 процентилей
У больных в развернутой стадии ХЛЛ дополнительно сни- (С25 и С75). Достоверность различий между показателями
жается активность НАДГДГ, а у больных в терминальной независимых выборок оценивали по  критерию Манна–
стадии  – Г3ФДГ, НАДФМДГ, НАДН-МДГ, НАДН-ГДГ. Уитни. Статистический анализ осуществляли в  пакете
У  больных в  развернутую стадию ХЛЛ снижена интен- прикладных программ «Statistica 7.0» (StatSoft Inc., 2004).
сивность гликолиза и  уменьшен уровень концентрации Результаты. У больных в развернутой стадии ХМЛ сни-
интермедиаторов для цикла трикарбоновых кислот. При жаются относительные уровни Т-лимфоцитов, CD4+ кле-
этом ингибирование ферментативных реакций гликолиза ток, цитотоксических лимфоцитов, повышаются относи-
в  лимфоцитах крови больных осуществляется на  терми- тельное и  абсолютное содержания В-лимфоцитов и  аб-
нальных реакциях. Снижена интенсивность субстратно- солютное количество лимфоцитов, экспрессирующих
го потока по лимонному циклу. У больных в развернутой HLA-DR-антиген. У  больных снижаются лейко-В- кле-
стадии имеются недостаточность митохондриального точный коэффициент и  иммунорегуляторный индекс.
транспорта и нарушения взаимосвязей между реакциями При исследовании состояния гуморального звена иммун-
цикла Кребса и  процессами аминокислотного обмена. ной системы у больных в развернутой стадии обнаружено
У больных в терминальной стадии ХЛЛ снижена интен- снижение уровней относительного синтеза IgA и IgM.
сивность переноса продуктов липидного катаболизма У больных в терминальной стадии ХМЛ обнаружено
на окислительно-восстановительные реакции гликолиза, снижение абсолютных количеств лейкоцитов и  лимфо-
ингибированы процессы липидного анаболизма, глико- цитов в  крови, относительных и  абсолютных уровней
лиз. Снижена наработка пирувата в  гликолизе, что, ин- Т-лимфоцитов, CD4+ клеток, и абсолютных количеств ци-
гибирует ферментативные реакции цикла трикарбоновых тотоксических лимфоцитов, NK-клеток, В-лимфоцитов
кислот. Снижена интенсивность субстратного потока и  лимфоцитов, экспрессирующих HLA-DR  антиген,
по  лимонному циклу. Недостаточность метаболических и  повышение относительного уровня В-лимфоцитов.
реакций митохондриального компартмента также опре- у  больных снижен лейко-В-клеточный коэффициент.
деляется снижением активности вспомогательной деги- При исследовании состояния гуморального звена иммун-
дрогеназной реакции и нарушением взаимосвязей между ной системы у больных в терминальной стадии обнаруже-
реакциями цикла Кребса и процессами аминокислотного но снижение в крови концентрации IgA и IgM.
обмена. У больных в  развернутой стадии ХЛЛ повышают-
Заключение. У всех больных ХМЛ и ХЛЛ наблюдается ся абсолютные количества лейкоцитов, лимфоцитов,
уменьшение интенсивности метаболических процессов Т-лимфоцитов, CD4+ клеток, цитотоксических лимфо-
в  лимфоцитах. По  мере прогрессирования заболевания цитов, NK-клеток, В-лимфоцитов и  лимфоцитов, про-
увеличиваются метаболические нарушения, так в развер- дуцирующих HLA-DR+ антиген, относительные концен-
нутой стадии ХМЛ и ХЛЛ изменения только в углеводном трации лимфоцитов в крови, В-лимфоцитов, снижаются
обмене, то в терминальной стадии – в углеводном и жи- относительные уровни Т-лимфоцитов, CD4+ клеток, ци-
ровом обменах. тотоксических лимфоцитов. В  развернутой стадии ХЛЛ
снижается лейко-В-клеточный коэффициент. При иссле-
довании состояния гуморального звена иммунной систе-
ОСОБЕННОСТИ КЛЕТОЧНОГО И ГУМОРАЛЬНОГО мы у  больных в  развернутой стадии обнаружено сниже-
ЗВЕНЬЕВ ИММУНИТЕТА БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМИ ние концентрации IgA, IgG и  индексов относительного
ЛЕЙКОЗАМИ синтеза IgA, IgM, IgG.
У больных в  терминальной стадии ХЛЛ повышают-
Смирнова О.В., Манчук В.Т. ся относительные уровни лимфоцитов, В-лимфоцитов,
абсолютный уровень В-лимфоцитов, снижаются от-
НИИ медицинских проблем Севера СО РАМН,
носительные показатели Т-лимфоцитов, CD4+  клеток,
г. Красноярск, Россия
цитотоксических лимфоцитов. В  терминальную стадию
Целью исследования явилось изучение особенностей снижаются лейко-Т-клеточный, лейко-В-клеточный ко-
клеточного и  гуморального звеньев иммунитета у  боль- эффициенты и  индекс активации Т-лимфоцитов. При
ных ХМЛ и у больных ХЛЛ в зависимости от стадии за- исследовании состояния гуморального звена иммунной
болевания. системы у  больных в  терминальную стадию обнаружено
Материалы и  методы. Всего под наблюдением нахо- снижение концентрации IgA, IgM, IgG и индексов отно-
дилось 44 больных ХМЛ и 57 больных ХЛЛ. У 20 больных сительного синтеза IgA, IgM, IgG.
ХМЛ и  32  больных ХЛЛ заболевание диагностировалось Заключение. Выявленные изменения иммунного ста-
в  развернутую стадию, а  у  24 ХМЛ и  25ХЛЛ  – в  тер- туса и метаболизма лимфоцитов оказывают значительную
минальную стадию. В  качестве контроля обследовано роль не  только в  появлении, но  и  в  прогрессировании

437
«Дни иммунологии в СПб 2009» Медицинская Иммунология

заболевания. У  больных ХМЛ и  в  развернутую, и  в  тер- и  62,0±7,5%; р  <  0,05), CD11c (37,6±8,2 и  80,0±8,2%;
минальную стадии развивается Т-иммунодефицит. Осо- р < 0,01), CD36 (23,2±5,5 и 70,9±7,3%; р < 0,001) и CD65
бенностью терминальной стадии больных ХМЛ являет- (12,3±4,9 и 42,4±10,2%; р < 0,05). Из этих данных видно,
ся снижение содержания NK-клеток и  В-лимфоцитов. что при  ОМЛ-М4 средние значения относительного со-
У  больных ХЛЛ в  развернутую стадию развивается со- держания CD34+, CD117+, cyMPO+ клеток были выше,
стояние, характеризующееся повышением содержания чем при ОМЛ-М5, и, напротив, при ОМЛ-М5 были выше
Т- , В-лимфоцитов и  NK-клеток. Особенностью терми- средние значения относительного числа CD14+, CD11b+,
нальной стадии ХЛЛ является развивающийся комбини- CD11c+, CD36+ и  CD65+ клеток. Анализ частоты встре-
рованный иммунодефицит с  поражением Т- и  В-систем чаемости этих маркеров показал, что CD34 экспресси-
иммунитета. руется у  75% больных с  ОМЛ-М4 и  у  22% с  ОМЛ-М5,
CD117 – у 100% больных с ОМЛ-М4 и у 32% с ОМЛ-М5,
cyMPO – у 100% больных с ОМЛ-М4 и у 56% с ОМЛ-М5,
ИММУНОФЕНОТИПИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ CD14 – у 25% больных с ОМЛ-М4 и у 100% с ОМЛ-М5,
М4 и М5 ВАРИАНТОВ ОСТРОГО МИЕЛОИДНОГО CD11b – у 75% больных с ОМЛ-М4 и у 100% с ОМЛ-М5,
ЛЕЙКОЗА CD11c – у 80% больных с ОМЛ-М4 и у 100% с ОМЛ-М5,
Сухина И.А., Никитин В.Ю., Цыган В.Н., CD36 – у 69% больных с ОМЛ-М4 и у 100% с ОМЛ-М5,
Иванов А.М., Зюзгин И.С. CD65  – у  17% больных с  ОМЛ-М4 и  у 64% с  ОМЛ-М5.
Из  результатов анализа также видно, что при  ОМЛ-М4
Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова, чаще наблюдается позитивность по  CD34+, CD117+,
Санкт-Петербург, Россия cyMPO+, тогда как вариант ОМЛ-М5 чаще позитивен
Введение. М4 и  М5 варианты острого миелоидно- по  CD14+, CD11b+, CD11c+, CD36+ и  CD65+ антиге-
го лейкоза (ОМЛ) довольно сложно дифференцировать нам. По количеству клеток, экспрессирующих антигены
друг от друга. Оба этих типа ОМЛ характеризуются поли- CD13 (у 88% больных с ОМЛ-М4 и у 100% с ОМЛ-М5),
морфным иммунофенотипом и экспрессируют антигены CD33 (у 100% больных с ОМЛ-М4 и у 100% с ОМЛ-М5),
свойственные гранулоцитарной и  моноцитарной лини- HLA- DR (у 88% больных с ОМЛ-М4 и у 100% с ОМЛ-М5),
ям. Изучение соотношения экспрессируемых антигенов CD16+56 (у 60% больных с ОМЛ-М4 и у 75% с ОМЛ-М5),
каждого из вариантов может помочь провести дифферен- CD4 (у 20% больных с ОМЛ-М4 и у 28% с ОМЛ-М5) раз-
циальную диагностику между ними. личий не было обнаружено.
Цель: для дифференциальной диагностики между М4 Заключение. Таким образом, для ОМЛ-М4 харак-
и М5 вариантами ОМЛ выявить их иммунофенотипиче- терен иммунофенотип: CD13++/ CD33+++/ HLA-DR++/
ские особенности. CD16+56+/ CD4+/−/ CD34++/ CD117+++/ cyMPO+++/
Задачи. 1. Определить количественный состав клеток, CD14+/ CD11b++/ CD11c++/ CD36+/ CD65+/−, где (+/-) 10-
экспрессирующих антигены гранулоцитарной и моноци- 25% позитивных лейкозов; (+) 25-70% позитивных лей-
тарной линий у больных с ОМЛ-М4 и ОМЛ-М5. 2. Про- козов; (++) 70-90% позитивных лейкозов; (+++) 90-100%
вести сравнительный анализ между М4 и М5 вариантами позитивных лейкозов, а для ОМЛ-М5: CD13+++/ CD33+++/
ОМЛ по  количеству клеток, экспрессирующих сходные HLA-DR+++/ CD16+56++/ CD4+ CD34+/−/ CD117+/ cyMPO+/
антигены. 3. Определить иммунофенотип характерный CD14+++/ CD11b+++/ CD11c+++/ CD36+++/ CD65+++. Наи-
для каждого варианта. 4. Выявить наиболее информа- более информативными для дифференциальной диагно-
тивные маркеры для дифференциальной диагностики стики М4 и М5 вариантов ОМЛ являются CD34, CD117,
М4 и М5 вариантов ОМЛ. cyMPO (выше у ОМЛ-М4), CD14, CD11b, CD11c, CD36
Материалы и методы. У 8 пациентов с окончательным и CD65 (выше у ОМЛ-М5) антигены.
диагнозом ОМЛ-М4 и  у 9  пациентов с  ОМЛ5 был про-
веден статистический анализ результатов иммунофено- АКТИВНОСТЬ ПРОТИВООПУХОЛЕВОГО ИММУНИТЕТА
типирования костного мозга. Необходимо отметить, что у ЖЕНЩИН С ПРЕДРАКОМ и РАКОМ ШЕЙКИ МАТКИ,
из  9  больных с  М5 6  человек (66,7%) имели ОМЛ-М5b АССОЦИИРОВАННЫМ С ВИРУСОМ ПАПИЛЛОМЫ
вариант, 1  человек  – ОМЛ-М5а и  2  человека  – неопре- ЧЕЛОВЕКА, В ЧЕЛЯБИНСКОЙ ОБЛАСТИ
деленный вариант ОМЛ-М5. Иммунофенотипирование
выполнялось на  проточном цитометре «Facscan» фирмы Телешева Л.Ф., Батурина И.Л., Орнер И.Ю.,
«Becton Dickinson» с использованием следующих комби- Абрамовских О.С.
наций прямых моноклональных антител той же  фирмы:
CD45/CD14, IgG1/IgG2/CD45, CD5/CD7/CD45, CD10/ НИИ иммунологии ГОУ ВПО «ЧелГМА Росздрава»,
CD20/CD45, CD34/CD117/CD45, CD13/CD33/CD45, г. Челябинск, Россия
CD16+56/CD45, CD3/CD19/CD45, HLA-DR/CD11b/ Введение. Точка зрения о сущности противоопухоле-
CD45, HLA-DR/CD11c/CD45, CD65/CD4/CD45, CD36/ вого иммунитета в  настоящее время изменилась. Ранее
CD2/CD45, CD61/CD235a, cyTdT, cyMPO. за  основу противоопухолевого иммунитета была взята
Результаты. Сравнительный анализ с  применением теория Т-клеточного надзора (по типу отторжения транс-
t-критерия Стьюдента показал, что варианты ОМЛ-М4 плантата). Сейчас большинство иммунологов придержи-
и  ОМЛ-М5 статистически значимо отличались по  ко- вается концепции иммунного надзора Ф.М. Бернета, со-
личеству клеток, экспрессирующих CD34 (42,7±10,6 гласно которой противоопухолевый иммунитет форми-
и  9,3±5,6%; р  <  0,05), CD117 (46±6,2 и  15,7±4,7%; руется за  счет механизмов естественного и  адаптивного
р  <  0,001), cyMPO (56,9±13,4 и  15,8±4,4%; р  <  0,01), иммунитета (по типу защиты от вирусов и других микро-
CD14 (10,0±4,8 и  31,5±4,6%; р  <  0,01), CD11b (34,0±7,9 организмов). Иммунная система осуществляет контроль

438
2009, Т. 11, № 4-5 Онкоиммунология, гемобластозы

за генетической целостностью организма, за его соматиче- Взаимосвязь рака кожи


скими клетками, в случае появления измененных клеток с HLA-антигенами 1 класса в узбекской
они элиминируются из  организма. Опухоли, вызванные популяции
вирусами, несут вирусные антигены – «опухолеассоции-
рованные трансплантационные антигены». У  человека Холиков Т.К., Мирахмедова Н.Н.
лишь 3  ДНК-вируса тесно связаны с  опухолями: вирус Республиканский онкологический научный центр
Эпштейна—Барр, вызывающий лимфому Беркитта, гер- МЗ РУз, г. Ташкент, Республика Узбекистан
песвирус 8  типа, вызывающий саркому Капоши и  вирус Институт иммунологии АН РУз, г. Ташкент,
папилломы человека (ВПЧ) [Киселев В.И., 2007]. Республика Узбекистан
Цель: определить активность противоопухолевого Из литературных данных известно, что определен-
иммунитета у женщин с предраком и раком шейки матки, ную роль в развитии рака кожи имеют генетические фак-
ассоциированным с вирусом папилломы человека, в Че- торы. В  связи с  этим целью настоящего исследования
лябинской области. явилось изучение распределения HLA-антигенов 1 клас-
Материалы и методы. В НИИ иммунологии Челябин- са у  50  больных раком кожи. Все больные были лицами
ской медицинской академии и  Областном онкологиче- узбекской национальности, не  состоящими в  кровном
ском диспансере г. Челябинска проведено комплексное родстве.
обследование 90  женщин с  заболеваниями шейки мат- Контрольную группу составили практически здоровые
ки, ассоциированными с  ВПЧ, средний возраст кото- лица в количестве 301 человека. Типирование HLA- анти-
рых от 18 до 55 лет. Оценка противоопухолевой реактив- генов проводилось стандартным 2-ступенчатым микро-
ности проводилась по  содержанию в  периферической лимфоцитотоксическим тестом с применением лиофили-
крови СD8+, СD16+ лимфоцитов [Arai  E., 1997], клеток, зированного кроличьего комплемента. В  работе исполь-
демонстрирующих готовность к  апоптозу  – наличием зовалась панель гистотипирующих антилейкоцитарных
Fas(СД95)-рецептора [Nevala  H. et  al., 2001], методом HLA-антисывороток (Санкт-Петербург, РФ). В  ходе ти-
иммунофенотипирования. Для детекции ДНК ВПЧ ис- пирования экспрессировалось 38 HLA-антигенов А, В и С
пользовали метод полимеразной цепной реакции. Все локусов. Сравнительный анализ распределения антигенов
пациенты разделены на 5 групп в зависимости от диагно- выявил ряд особенностей. В группе больных наиболее ча-
за. Первая группа – практически здоровые лица – 10 че- сто встречались следующие антигены: HLA-А25 (22% про-
ловек, средний возраст 33,9±0,6. Вторая группа – 10 че- тив 0,7% в контроле), HLA-А28 (28% против 4,9% в кон-
ловек с  диагнозом персистирующая папилломавирусная троле), HLA-А19 (28% против 11,9% в  контроле). Пока-
инфекция, средний возраст 28,1±8,0. Третья – 20 человек затель относительного риска (RR) для HLA-А25 составил
с  диагнозом тяжелая цервикальная интраэпителиальная 36,7, для HLA-А28 – 5,6 и HLA-А19 – 2,5. Достоверность
неоплазия (CIN3) – 32,2±1,60 года. Четвертая – 20 паци- по точному критерию Фишера (Рс ≤ 0,001) была установ-
енток с диагнозом cancer in situ и микроинвазивным ра- лена для антигенов HLA-A25 и HLA-A28.
ком (Т1NxМх), 35,9±2,15 года. Пятая – 30 человек с мест- Наряду с  часто встречающимися антигенами были
нораспространенными формами рака шейки матки (рак выявлены такие антигены, которые встречались реже
у больных, чем в контрольной группе. Это HLA-A2 (10,0%
шейки матки 2 и 3 стадии), 44,2±1,8 лет.
против 36,9% в контроле) и HLA-В35 (10,0% против 27,2%
Результаты. Ранние проявления патологии шей-
в контроле). Но истинность связи по точному критерию
ки матки (группа  2) сопровождались сохранением
Фишера для них не была установлена.
нормальной или повышенной численности СD8+,
Кроме того, в работе были изучены гаплотипические
СD16+ и СD95+ лимфоцитов. Процентное снижение вы-
ассоциации антигенов  А и  В локусов как в  сравнении
шеперечисленных кластеров дифференцировки и начало
со здоровыми, так и в внутри исследуемой группы. Наибо-
угнетения противоопухолевого иммунитета отмечалось
лее часто встречающимися гаплотипами явились: А1- В13
при  переходе тяжелой интраэпителиальной неоплазии и  А19-В5 с  частотой 4,3%; А3-В18, A24-B17 и  A28-B16
(группа 3) в  микроинвазивный рак шейки матки (груп- с  частотой 2,6%; A10-B27, А19-В15, A28-B13 и  A28-B15
па 4). При II и III опухолевой стадии (группа 5) абсолют- с частотой 1,7%.
ная численность в периферической крови всех клеточных Полученные результаты свидетельствуют о  важном
популяций, обладающих противоопухолевой активно- вкладе HLA-антигенов в риск развития рака кожи.
стью, снижалась по сравнению с таковой во 2, 3, 4 груп-
пах (СD8+ лимфоцитов в  1,6  раза, СD16+  – 1,8  раза,
СD95+ – 1,4 раза). Влияние стволовых мезенхимальных клеток
Выводы. Оценивая состояние противоопухолевой ре- на восСтановление кроветворения у больных
активности в исследуемых группах, определили, что уже гемобластозами с трансплантацией стволовых
на  стадии персистирующей ВПЧ-инфекции, отмечается кроветворных клеток
повышенная экспрессия лимфоцитами рецепторов СD8+, Черных Е.Р., Сергеевичева В.В., Шевела Е.Я.,
СD16+, СD95+, свидетельствующая об адекватной актива- Сахно Л.В., Петровский Я.Л., Останин А.А.,
ции системы противоопухолевого надзора. Хочется отме- Крючкова И.В., Лисуков И.А.
тить, что, именно, при переходе ЦИН 3 в микроинвазив-
ный рак наблюдается угнетение противоопухолевого им- Институт клинической иммунологии СО РАМН,
мунитета. Таким ообразом, снижение СD8+,СD16+СD95+ г. Новосибирск, Россия
является плохим прогностическим признаком и  свиде- Несмотря на широкое внедрение трансплантации пе-
тельствует о начале опухолевой трансформации. риферических стволовых кроветворных клеток (ПСКК)

439
«Дни иммунологии в СПб 2009» Медицинская Иммунология

в  клиническую практику, cерьезными осложнениями СПОНТАННЫЙ и ИНДУЦИРОВАННЫЙ АПОПТОЗ


данного метода по-прежнему остаются неэффектив- у БОЛЬНЫХ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМОЙ
ность приживления ПСКК, приводящая к  возрастанию
сроков критической нейтропении и  развитию тяжелых Чубукина Ж.В., Бубнова Л.Н., Бессмельцев С.С.
инфекционных осложнений, а  также развитию РТПХ Российский НИИ гематологии и трансфузиологии,
при  аллогенных трансплантациях. С  целью предот- Санкт-Петербург, Россия
вращения этих осложнений нами было апробирова-
Цель исследования. Определение значения процес-
но использование мультипотентных мезенхимальных
са апоптоза опухолевых клеток костного мозга больных
стромальных клеток (ММСК) при  аутологичной транс-
плантации ПСКК у  больных гемобластозами и  аутоим- множественной миеломой (ММ) для прогноза течения
мунными заболеваниями, а  также в  небольшой группе заболевания и оценки эффективности проводимой спец-
больных с аллогенными родственными трансплантация- ифической терапии.
ми ПСКК. Обоснованием подобного подхода послужили Материалы и  методы. Обследовано 34  больных
полученные предварительно данные о  том, что ММСК ММ  в  возрасте от  45 до  75  лет с  длительностью заболе-
больных гемобластозами обладают сохранной гемопоэз- вания от  6  до  60  мес. Впервые выявленная ММ  была
стимулирующей активностью. Так, ММСК больных у 15 (34%) больных (1-я группа), у 19 (42%) был установ-
(в  соотношении 1:1 и  1:10) 5-кратно увеличивали коли- лен рецидив заболевания (2-я группа). Содержание плаз-
чество КОЕ-Э и  КОЕ- ГМ в  культурах костно-мозговых матических клеток (ПК) в костном мозге, по данным ми-
мононуклеарных клеток доноров и  больных. Причем елограммы, в  1-й  группе больных составило 11,4- 64,8%
способностью к  стимуляции гемопоэза в  равной степе- (36,2%), во 2-й группе – 8,4-86,4% (27,7%). Исследование
ни обладали ММСК больных ОЛЛ, ЛГМ, НХЛ. Клини- апоптоза проводились до  начала химиотерапии (спон-
ческие испытания по  оценке эффективности и  безопас- танный апоптоз) больных ММ  и  на фоне лечения (ин-
ности совместной котрансплантации ММСК и  ПСКК дуцированный). В  качестве исследуемого материала ис-
были проведены в  группе 63  больных (60  – с  гемобла- пользовали мононуклеарную фракцию костного мозга.
стозами и  3  больных системной красной волчанкой). Определение содержания опухолевых миеломных клеток,
Группу исторического контроля составили 43  пациента находящихся в  апоптозе, проводили в  двухцветном ана-
сходной нозологической структуры и фазой заболевания. лизе мембранных и внутриклеточных маркеров апоптоза
Всем пациентам проводилась стандартная мобилизация, с  помощью экстернализации фосфотидилсерина (ФС)
сепарация и  трансплантация ПСКК после высокодо- по связыванию с аннексином V и визуализацией на про-
зной ПХТ. Среднее количество трансплантированных точном цитофлуориметре «Cytomics FC 500» BECKMAN
CD34+ ПСКК в  группах было близким и  составило COULTER (США).
5,3 х 106/кг. Количество совместно трансплантированных Результаты. В  результате проведенного исследования
ММСК составляло в  среднем 15,8  х  106. Котрансплан- установлено, что у больных 1-й группы средний показа-
тация ММСК позволила сократить продолжительность тель спонтанного апоптоза  ПК костного мозга составил
критической нейтропении с  16 до  10  дней, а  продолжи- 26,4±2,7%. При этом внутри группы процент ПК, находя-
тельность критической тромбоцитопении – с 24 до 6 су- щихся в апоптозе, был неоднороден. Так, у 5 (33%) боль-
ток. Продолжительность нейтропении обратно коррели- ных спонтанный апоптоз был значительно ниже среднего
ровала с дозой трансплантированных ММСК (r = -0,27; показателя по  группе и  составил 15,1±3,4%, а  на фоне
p = 0,021). Наиболее выраженный эффект ММСК на вос- химиотерапии происходило практически трехкратное
становление кроветворения проявляется при количестве увеличение показателя до 43,1±5,1%. Тогда как у 10 (67%)
CD34+ клеток менее 3,5 х 106/кг (p = 0,037). Следователь-
больных ММ  количество апоптотических событий со-
но, котрансплантация ММСК может быть альтернати-
ставило 37,7±1,8%, что было выше среднего показателя
вой повторных мобилизаций ПСКК при неэффективной
по группе, и в процессе терапии сохранялось без видимой
мобилизации и  субоптимальном количестве сепариро-
динамики – 37,8±2,2%.
ванных CD34+ клеток. Относительное количество вы-
Аналогичная картина наблюдалась и  у больных
живших пациентов в  основной и  контрольной группах
2-й  группы, где средний показатель апоптоза составил
через 6, 12 и 18 мес. значимо не различалось. Тем не менее
в  группе с  котрансплантацией ММСК показатели вы- 24,4±3,8%. При этом у  6 (32%) больных ММ  уровень
живаемости на 12 и 18 мес. были несколько выше. Таким спонтанного апоптоза составил 16,1±2,4%. На  фоне ле-
образом, ко-трансплантация ММСК приводила к  уско- чения доля апоптотических клеток достоверно возрастала
рению сроков восстановления кроветворения и не сказы- до  35,1±3,2%. У  13 (68%) больных уровень спонтанного
валась негативным образом на  выживаемости больных. апоптоза составил 32,6±4,3% и на фоне терапии количе-
Котрансплантации ММСК при  проведении аллогенных ство апоптотических клеток не имело видимой динамики
трансплантаций были выполнены у  5  больных с  острым (31,3±3,8%).
миелолейкозом. ММСК получали от  донора СКК и  ко- Мы отметили, что те пациенты, у которых в процессе
трансплантировали в дозе 0,6-1,0 х 106/кг. Котрансплан- терапии отмечалось достоверное увеличение показателя
тация не  сопровождалась развитием ранних постранфу- апоптоза опухолевых клеток костного мозга, отвечали
зионных осложнений. В результате трансплантации у всех на  специфическую полихимиотерапию (ПХТ) и  давали
больных была достигнута полная ремиссия, которая со- положительную клинико-гематологическую динами-
храняется уже в течение года. Острая РТПХ легкой степе- ку, стабилизацию процесса или ремиссию, и,  напротив,
ни отмечалась у 2 больных, хроническая РТПХ – у одно- те пациенты, у которых показатель апоптоза в ходе тера-
го пациента. Ни у одного из пациентов мы не наблюдали пии сохранялся без видимой динамики, не давали поло-
развития острой РТПХ тяжелой степени. жительного ответа на ПХТ, у них развивалась вторичная

440
2009, Т. 11, № 4-5 Онкоиммунология, гемобластозы

химиорезистентность или отмечалась прогрессия заболе- с использованием набора реагентов «YellowSolve» («Кло-
вания. ноген»). Для реакции обратной транскрипции использо-
Заключение. Таким образом, определение спонтанно- вали гексапраймеры и  MMLV-обратную транскриптазу
го и индуцированного апоптоза может быть использовано («Силекс»). Детекцию продуктов амплификации прово-
в качестве прогностического критерия для оценки эффек- дили с  использованием красителя SYBR Green  I («Син-
тивности терапии и дальнейшего течения заболевания. тол»). В качестве референсного гена применяли GAPDH.
Достоверность различий оценивали на основании крите-
рия Стьюдента при p < 0,05.
ОЦЕНКА ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ Изучение уровня экспрессии основного мембранно-
РЕГУЛЯТОРНЫХ Т-ЛИМФОЦИТОВ у ОНКОЛОГИЧЕСКИХ го маркера Treg-лимфоцитов показало, что у  онкологи-
БОЛЬНЫХ ПО УРОВНЮ ЭКСПРЕССИИ CD25, TGFβ-1 ческих больных процентное содержание CD25+-  клеток
и FOXP3 в  периферической крови было примерно вдвое больше
Чуров А.В, Олейник Е.К., Олейник В.М. по сравнению с контролем (31,6±1,7 и 17,9±1,0; p < 0,05).
Исследование экспрессии гена основного ингибирую-
Учреждение Российской академии наук Институт щего цитокина Treg-клеток в  целом выявило повыше-
биологии Карельского научного центра РАН, ние количества мРНК TGFβ-1 у  больных с  опухолями
г. Петрозаводск, Республика Карелия, Россия (1,28±0,03; p  <  0,05) относительно контроля. При этом
Проблема формирования иммунной супрессии уровень экспрессии TGFβ-1 в группе больных РЛ оказался
при  онкологических заболеваниях представляет боль- выше (1,34±0,04), чем в группе больных КРР (1,21±0,05).
шой интерес для исследователей в области клинической Уровень экспрессии гена FOXP3 у онкологических боль-
иммунологии. Одним из  механизмов супрессии в  онко- ных также оказался заметно выше, чем в  контрольной
генезе считается увеличение численности регуляторных группе (1,45±0,10, p  <  0,05). Относительное содержа-
CD4+CD25+ Т-лимфоцитов (Treg) и секреция этими клет- ние мРНК  FOXP3 у  больных КРР составило 1,22±0,10,
ками цитокинов, ингибирующих функции эффекторов а у больных РЛ – 1,66±0,13. Уровень экспрессии FOXP3
иммунного ответа. Основным ингибирующим цитоки- лимфоцитами крови больных РЛ  оказался достоверно
ном Treg-клеток является трансформирующий фактор выше, чем у больных КРР (p < 0,05).
роста-β1 (TGFβ-1). TGFβ-1 способен подавлять про- Таким образом, лимфоциты периферической крови
лиферацию лимфоцитов, блокировать дифференциров- онкологических больных характеризуются увеличением
ку CD8+ ЦТЛ, CD4+Т-хелперов 1 и  2 типа. В  то же  вре- экспрессии маркера активации CD25, ингибирующего
мя, TGFβ-1 может стимулировать дифференцировку цитокина TGFβ-1, а  также транскрипционного фактора
Treg- клеток из наивных CD4+CD25- лимфоцитов перифе- FOXP3. У больных РЛ отмечен наиболее высокий уровень
рической крови и индуцировать в этих клетках экспрес- экспрессии всех исследованных показателей, что свиде-
сию транскрипционного фактора FOXP3 (forkhead box тельствует о более высокой функциональной активности
P3)  – наиболее специфичного из  известных на  сегодня Treg-клеток при РЛ.
маркеров Treg. Работа выполнена в  рамках Программы Президиу-
Целью исследования было изучение функциональной ма РАН «Фундаментальные науки – медицине» и при фи-
активности регуляторных Тreg-лимфоцитов перифери- нансовой поддержке РФФИ (№ 08-04-98838).
ческой крови у онкологических больных по уровню экс-
прессии мембранного маркера CD25, ингибиторного ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МЕТОДА ИММУНОЦИТОХИМИИ
цитокина TGFβ-1, а  также транскрипционного фактора НА МАЗКАХ КОСТНОГО МОЗГА у БОЛЬНЫХ
FOXP3. НЕЙРОБЛАСТОМОЙ
Материалом исследования служили лимфоциты пери-
ферической крови 50 онкологических больных в возрас- Шатинина Н.Н., Байдун Л.В.
те от 29 до 74 лет, из них 11 больных раком легкого (РЛ),
10  больных колоректальным раком (КРР), а  также ГУ «Российская детская клиническая больница
29  больных с  опухолями желудочно-кишечного тракта, Росздрава», Москва, Россия
мочевыделительной, эндокринной и  репродуктивной В детском возрасте большую часть опухолей составля-
систем. В  качестве контроля использовали показатели, ют новообразования, происходящие из  эмбриональных
полученные при исследовании лимфоцитов перифериче- клеток. Опухоли из  симпатической нервной системы,
ской крови 31 здорового донора в возрасте от 31 до 68 лет. к  которым относится нейробластома, составляют при-
Мембранные маркеры лимфоцитов определяли методом мерно 7-11% и  занимают третье место после опухолей
непрямой иммунофлюоресценции. Мононуклеарные ЦНС. При простой световой микроскопии морфологу
клетки крови выделяли центрифугированием на градиен- бывает сложно выявить природу опухоли даже на  ги-
те фиколл-верографин (плотность 1,077). Фенотипирова- стологическом срезе, т.к. нейробластому относят к  об-
ние проводили с использованием моноклональных анти- ширному семейству мелкокруглоклеточных опухолей.
тел, меченных FITC, к молекулам CD3, CD4, CD25. Число В большинстве случаев опухоль состоит из мелких одно-
клеток, на поверхности которых был экспрессирован тот родных круглых клеток с гиперхромным ядром, окружен-
или иной маркер, выражали в процентах от общего числа ных минимальным количеством цитоплазмы. Из  этого
лимфоцитов. Уровень экспрессии мРНК генов TGFβ-1 описания понятна еще большая сложность идентифи-
и  FOXP3 определяли методом ПЦР в  реальном време- кации метастатических клеток этого новообразования
ни, совмещенной с обратной транскрипцией (Real-Time в  костном мозге пациентов с  диагнозом нейробластома.
RT-PCR). Суммарную РНК выделяли из  цельной крови Кроме того, нейробластома принадлежит к той категории

441
«Дни иммунологии в СПб 2009» Медицинская Иммунология

детских опухолей, при которых используются опухолевые Цель исследования: изучение показателей иммунного
маркеры не только для диагностики и прогноза, но и для статуса в процессе интерферонотерапии у больных мест-
мониторинга в процессе лечения. нораспространенным ПКР.
А если учесть то, что по литературным данным до 70% Проведены динамические наблюдения за 81 больным
пациентов на  момент диагностики имеют метастазы местнораспространенным ПКР, которым через 4  недели
в костный мозг, понятна актуальность поиска информа- после радикальной нефрэктомии начата интерфероноте-
тивной иммунофенотипической панели для данного ис- рапия. 1-я группа – 55 пациентов, получали «Реаферон»
следования. 3 раза в неделю в дозе, подобранной с учетом индивиду-
альной клеточной чувствительности in vitro; 2-я группа –
Исследовались мазки костного мозга от  21  ребен-
26 больных, у которых клеточная чувствительность к «Ре-
ка с  диагнозом нейробластома. Средний возраст детей
аферону» in vitro отсутствовала, и лечение осуществлялось
составил 3  года, дети до  1  года составили 36%. В  иссле-
по  стандартной схеме: 3  млн  МЕ «Реаферона» ежеднев-
дуемой группе мальчики составили 55%, девочки – 45%. но. В обеих группах количество инъекций на цикл – 12,
Мазки костного мозга были исследованы с применением перерыв между циклами  – 3 недели, количество циклов
метода традиционной иммуноцитохимии с  оценкой ре- до 4-х. Суммарная доза «Реаферона» в 1-й группе соста-
зультатов методом световой микроскопии (ТИЦ) с  ис- вила 144-384 млн МЕ, во 2-й – 120 млн МЕ. Клеточную
пользованием различных антител. В работе использованы чувствительность к «Реаферону» in vitro определяли хеми-
антитела и системы визуализации фирм «DАКО», «NC», люминесцентным методом [De  Sole et  al., 1983]. Имму-
«BD» и «LabVision». нофенотирирование лимфоцитов осуществляли методом
Сопоставительный анализ полученных данных с дан- непрямой флуоресценции. Концентрацию IgА, IgM и IgG
ными литературы показал принципиальное совпадение определяли по методу Манчини.
информативности спектра использованных нами антител Изменения параметров иммунного статуса у  паци-
для диагностики метастазов нейробластомы в  костный ентов 1-й  группы после I  цикла лечения «Реафероном»
мозг. Кроме того, удалось выделить наиболее информа- характеризовались увеличением количества лейкоцитов
тивные антитела для первичной диагностики не  только и абсолютного содержания CD3+- и CD8+- клеток, отно-
агломератов опухолевых клеток, но и изолированных опу- сительно соответствующего параметра до  начала интер-
холевых клеток при метастазах нейробластомы в костный феронотерапии (p < 0,05). После II цикла лечения наблю-
дается повышение IgА и IgM и снижение IgG в сыворотке
мозг у детей, используя ТИЦ на мазках костного мозга.
крови по сравнению с показателями до начала иммуноте-
Использование представленного перечня анти-
рапии (p < 0,05) на фоне стабильных параметров, харак-
тел CD45, CD56, CD57, CD99, Desmin, NF, Syn., теризующих состояние клеточного иммунитета. После
PGP9,5 & NSE наряду с морфологическим исследовани- III  цикла интерферонотерапии повышено содержание
ем, наиболее информативно при  иммунофенотипиро- лимфоцитов в  сравнении с  исходными показателями
вании для выявления не  только агломератов, но  и  изо- (p < 0,05). Увеличено количество CD3+, CD4+ и CD16+/56+
лированных опухолевых клеток у  детей с  метастазами клеток, ИРИ, а также клеток, несущих на своей поверх-
нейробластомы в костный мозг. Предлагаемый перечень ности активационный маркер HLA-DR+(p < 0,05). Коли-
антител, при  постановке реакций на  мазках костно- чество CD19+- лимфоцитов значительно снижено относи-
го мозга методом традиционной иммуноцитохимии, тельно показателей до начала иммунотерапии (p < 0,05),
в  комплексе с  оценкой результатов методом световой однако уровень IgА, IgM и IgG в сыворотке крови сохра-
микроскопии, расширяет рамки стандартно выполняе- няется на  таком же  уровне, как до  начала лечения. Со-
мых тестов при  исследовании костного мозга, позволяя стояние параметров иммунной системы через 3 недели
уточнить стадию заболевания, прогноз и проведение мо- после IV  цикла иммунотерапии в  целом остается таким
ниторирования. же, как после III, за исключением повышения содержа-
Выражаем глубокую благодарность за  постоянную ния CD19+- лимфоцитов и  снижения количества кле-
помощь в практической реализации детской программы ток, экспрессирующих активационный маркер HLA-DR
(p < 0,05).
«Сердце ребенка» Совету Лютеранской Церкви и ее при-
У пациентов 2-й  группы наиболее выраженные из-
хожанам (Япония, г. Хиросима).
менения в  клеточном звене иммунитета, так же  как
и  в  1-й  группе, наблюдались после III  цикла реаферо-
Динамика иммунологических показателей нотерапии. Установлено увеличение абсолютного числа
лимфоцитов, процентного и  абсолютного содержания
в процессе проведения интерферонотерапии
СD3+ клеток относительно параметров до  начала имму-
у больных раком почки
нотерапии (p  <  0,05). Кроме того, выявлено повышение
Шкапова Е.А., Куртасова Л.М., Зуков Р.А. количества CD8+ клеток и  понижение величины ИРИ
в этой группе обследуемых пациентов (p < 0,05). При ана-
Красноярский краевой онкологический диспансер, лизе показателей гуморального звена иммунитета после
г. Красноярск, Россия II цикла реаферонотерапии отмечены однонаправленные
Красноярский государственный медицинский с  1-й  группой изменения: повышенная концентрация
университет, г. Красноярск, Россия IgА и IgM и сниженный уровень IgG в сыворотке крови
по сравнению с показателями перед I циклом иммуноте-
На сегодняшний день наиболее целесообразным под- рапии (p < 0,05). Однако если в 1-й группе пациентов по-
ходом в лечении местнораспространенного почечнокле- сле III цикла величины IgА, IgM и IgG восстанавливаются
точного рака (ПКР) является комбинированный метод, до нормативных параметров, то во 2-й группе они оста-
включающий наряду с радикальной нефрэктомией имму- ются на прежнем уровне и после IV цикла терапии «Реа-
нотерапию препаратами IFNα-2а. фероном». После IV цикла иммунотерапии во 2-й группе

442
2009, Т. 11, № 4-5 Онкоиммунология, гемобластозы

снижено содержание CD4+ клеток, увеличено количество Таким образом, динамический анализ показателей им-
CD8+ лимфоцитов и клеток, экспрессирующих HLA- DR+ мунного статуса в ходе интерферонотерапии показал, что
относительно аналогичных параметров в 1-й группе боль- у  больных, получавших лечение с  учетом индивидуаль-
ных ПКР (p < 0,05). Кроме того, показатели уровней IgA ной клеточной чувствительности к  «Реаферону» in  vitro,
и  IgM в  1,9 и  2,9  раза соответственно превосходили ве- отмечены более выраженные положительные иммуноло-
личины, зафиксированные в 1-й группе, а концентрация гические изменения по сравнению с группой пациентов,
IgG в 1,5 раза была ниже, чем в группе 1 (p < 0,05). получавших лечение по стандартной схеме.

443

Оценить