Biologia Molecular e Celular II:

Transporte através da membrana

 Princípios do transporte

•  Há diferenças entre a
composição dentro e fora
da célula;

•  A distribuição de íons
dentro e fora da célula é
controlada por proteínas
integrais de membrana
(transportadoras e de
canal) e, em parte, pelas
características de
permeabilidade da própria
bicamada.
As bicamadas são impermeáveis a solutos e íons ...

•  A taxa de difusão relativa de uma substância qualquer

através da bicamada é proporcional:

•  Ao seu gradiente de concentração pela bicamada;

•  À sua hidrofobicidade e seu tamanho
•  Para moléculas carregadas, o potencial elétrico da
membrana também influi.
Em geral:
Quanto menor e + hidrofóbico, > taxa de difusão
Quanto > o gradiente de [ ], > taxa de difusão
•  Transportadores proteicos são necessários!!
 As proteínas de membrana podem ser:

•  Proteínas transportadoras (carreadoras):

–  Podem mediar o transporte passivo e ativo.
–  Carregam moléculas específicas
↓
encaixe no sítio de ligação e transferência através da membrana
por alteração conformacional.

Bombas ativadas por ATP

–  ATPases que usam a energia da hidrólise de ATP para o
transporte de íons e peq. moléculas através da membrana

•  Proteínas de canal
–  Formam poros hidrofílicos e fazem transporte passivo
–  Se o canal está aberto, moléculas de tamanho e carga
apropriados podem passar.
 Transporte passivo ou ativo?
–  TRANSPORTE PASSIVO = moléculas fluem de regiões ↑ [ ] para ↓[ ]
–  TRANSPORTE ATIVO = moléculas vão contra um gradiente de [ ]
 Para moléculas carregadas...

A maioria das membranas possui uma diferença no

potencial elétrico entre cada lado

Potencial de membrana

Essa diferença de potencial exerce uma força

em qualquer molécula eletricamente carregada...
Em geral:
o lado citoplasmático está com potencial negativo em
relação ao exterior,
Há uma tendência a “atrair” cátions e impelir ânions, mas o soluto
também tende a mover-se de acordo com seu gradiente de [ ].
 Assim:

•  As forças do gradiente de [ ] + potencial de membrana

geram

Gradiente eletroquímico de soluto (força motriz líquida)

Determina a direção do transporte passivo

através da membrana

O transporte ativo move solutos contra seu gradiente

eletroquímico
 Proteínas transportadoras (=carreadoras)
•  Transportam moléculas orgânicas pequenas (açúcares,
aminoácidos, nucleotídeos, etc.);
•  Altamente seletivas;
•  Cada membrana têm seu conjunto próprio;
•  Facilitam transportes ativo e passivo;

Carreador de glicose: mudança conformacional da proteína carreadora pode

mediar o transporte passivo da glicose a favor do gradiente de concentração
Transportador de glicose da membrana plasmática
de células hepáticas de mamíferos

•  Numa conformação, expõe sítios de ligação p/ glicose

no exterior da célula, noutra expõe sítios no interior...

•  Embora passivo, o transporte é seletivo!

•  A direção é dada pelo gradiente de [ ] (pode ser
reversível)
É uniportador: transporta um único tipo de molécula
 Transportadores uniporte

From
Structural biology: Bundles of insights into sugar transporters
Peter J. F. Henderson & Stephen A. Baldwin
Nature 490, 348–350 (18 October 2012) doi:10.1038/490348a
 Transportadores acoplados
•  Proteínas transportadoras nas quais o movimento favorável do 1o
soluto fornece energia para o transporte desfavorável do 2o soluto.
É dito transporte ativo secundário ou acoplado.
•  SIMPORTADOR (ou cotransportador) = se as 2 moléculas vão para
a mesma direção
•  ANTIPORTADOR (ou permutador) = se deslocam-se em direções
opostas

Bicamada
lipídica

UNIPORTE SIMPORTE ANTIPORTE

transporte acoplado
Lactose permease de
E. coli: um simporte de
lactose dirigido por H+
Science 1 August 2003:
Vol. 301 no. 5633 pp. 610-615
DOI: 10.1126/science.1088196
 O transporte ativo
Se dá em 3 formas principais:
–  Transportadores acoplados: ligam o transporte desfavorável de um
soluto ao transporte favorável de outro soluto;
–  Bombas ativadas por ATP: acoplam o transporte desfavorável à
hidrólise de ATP;
–  Bombas movidas à luz: unem o transporte desfavorável a uma
entrada de energia luminosa.
 Bombas ativadas pelo ATP

•  Todas são proteínas transmembrana com um ou + sítios

de ligação para o ATP na face citosólica da membrana;

•  ATPases que normalmente não hidrolisam ATP a não

ser que os íons ou outras moléculas sejam
transportados simultaneamente.

•  São enquadradas em classes principais:

Bombas de Classe-P, Bombas de Classe- F e

Transportadores ABC
Classes de bombas ativadas pelo ATP

Bombas classe-P

subunidades catalíticas que ligam ATP

+ subunidades regulatórias

Uma subunidade α é fosforilada e os

íons movem-se através dela;

Podem ser: bombas de Na/K, H+/K e

Ca++
 Bomba de Ca++

Mecanismo de ação da Ca++ATPase

Berg JM, Tymoczko JL, Stryer L. Biochemistry. 5th edition. New York, 2002.
 ATPase muscular de Ca++ :
bombeia Ca++ do citosol para o R.Sarcoplasmático
 Bomba de Na /K
+ +

http://www.uic.edu/classes/bios/bios100/lectures/NaKpump.htm
Transporte transcelular de glicose

Alberts et al. Biologia Molecular da Célula, 2010.

 Comparação de concentrações de íons no interior e
exterior de uma célula típica de mamífero.

COMPONENTE CONCENTRAÇÃO CONCENTRAÇÃO

INTRACELLULAR (mM) EXTRACELLULAR (mM)

Cations
+
  Na 5-15 145
+
 K 140 5
2+
  Mg 0.5 1-2
2+ -4
  Ca 10 1-2
+ -5 -5
 H 7 × 10 4 × 10
-7.2 -7.4
(10 M ou pH 7.2) (10 M ou pH 7.4)
Anions*
-
  Cl 5-15 110
 Gradientes de H+

•  São utilizados para impelir o transporte de membrana

em plantas, fungos e bactérias, pois
estes não possuem bombas de Na+/K+

Contam com um gradiente eletroquímico de H+ no lugar de Na+

Criado por bomba de H+ na membrana plasmática

A captura de muitos açúcares e aminoácidos para o interior das células

bacterianas é conseguido por simportadores de H+
As bombas classes F transportam H+

•  Presentes na membrana plasmática

bacteriana, membrana mitocondrial
interna e nas membranas dos
tilacóides;

•  São ATPases de transporte

trabalhando em sentido reverso: ATP
sintases!

•  O gradiente de H + sustenta a síntese

de ATP
 Transportadores ABC (ATP Binding Cassete):
Bombas ativadas pelo ATP
•  Transportam aminoácidos,
peptídeos, acúcares, íons
inorgânicos, polissacarídeos e até
proteínas.

•  “Flipam” lipídeos;

•  Em E. coli 5% dos genes

codificam transportadores ABC
para importação e exportação

•  Em eucariotos a maioria é
exportador. Ex. MDR =
transportador ABC que dá
resistência a multidrogas
 Proteínas de canal
CANAIS hidrofílicos = forma + simples de permitir que uma
molécula hidrossolúvel atravesse a membrana;

-  algumas formam grandes poros, muito permissivos

-  p.e. porinas (na membrana ext. bacteriana,
mitocondrias e cloroplastos);
-  Junções comunicantes (gap junctions)
- Certas toxinas bacterianas.

•  Porém, a maioria das proteínas de canal é seletiva e de

poros estreitos…quase todas são canais iônicos (Na+,
K+, Cl- e Ca+)
 Canais iônicos

Poros estreitos e altamente seletivos;

-  Não estão continuamente abertos...

estados aberto/fechado alternam por mudança conformacional.

-  Taxa de transporte é muito mais rápida que aquela das proteínas

carreadoras (até mil vezes >),

-  mas não fazem transporte ativo...

-  O transporte segue a favor do gradiente eletroquímico.

- São seletivos (filtro de seletividade)!

Estrutura do canal de K

Somente o íon de tamanho e

carga apropriados pode passar

Filtro de seletividade.
Mecanismo de seletividade e
transporte iônico
Modelo para o controle do
canal de K+ bacteriano
 Canais iônicos

•  Há mais de 100 tipos de canais iônicos;

•  Diferem quanto 1) seletividade iônica

2) condições que influenciam na abertura

O controle da abertura-fechamento pode ser por: voltagem, ligação

de ligante ou pressão mecânica
Canais iônicos
Receptor de acetilcolina: um canal iônico
controlado por ligante (neurotransmissor)
 O movimento da água
•  A pressão osmótica causa o movimento da água através das
membranas;
•  As bicamadas lipídicas puras são semi-permeáveis à água, que
atravessa por osmose

parte das membranas celulares tem

proteínas de canal de água (aquaporinas) que aumentam a
permeabilidade da biomembrana à água

Aquaporinas:
são seletivas para água
 Estrutura da aquaporina

Modelo estrutural da proteína

homotetramérica: cada subunidade
forma um canal de água.
Um dos monômeros é mostrado com a
superfície molecular destacando o poro.
Vista lateral do poro em uma
única subunidade
 Expressão de aquaporina por oócitos de rã
(acima) e controle (abaixo) em solução hipotônica
Pesquisa funcional com proteínas de membrana

•  Dificuldades
–  Proteínas devem estar na membrana!
–  Há muitas proteínas de membrana diferentes numa
dada membrana;
–  Geralmente, estão em baixas concentrações
relativas;

O que fazer:
1) Extrair, purificar e reincorporar em lipossomos; ou
2) expressar o gene de interesse