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UNIVERSIDAD LIBRE - SECCIONAL BARRANQUILLA

MORFOLOGÍA CELULAR EN EL LABORATORIO

Docente: Evelyn Mendoza Torres

Estudiantes:

De la Hoz juliao Didier Stick

De la Cruz Forero José Mario


Vergara Moreno María Fernanda
López Rodríguez María Valentina

.
Laboratorio de Biología

Programa de Bacteriología
Taller de laboratorio
Describir el fundamento para el uso de los siguientes colorantes o métodos de
tinción en la observación de células eucariotas:
Azul de metileno
Lugol
Tinción de Wright
Describa tanto el fundamento como el procedimiento de la tinción de Gram para
observación de bacterias en el laboratorio.

El lugol: es utilizado en las células eucariotas como un colorante haciendo que


el núcleo celular sea más visible en microscopías y poder apreciar las
muestras como por ejemplo en la cebolla el lugol reacciona con la cebolla
puesto que está formada por celulosa un tipo de polisacárido.
La ventaja del colorante en este caso el lugol es que permite distinguir mejor
los organelos de las células que a simple vista no se pueden distinguir.
Tinción de Wright
El colorante de Wright va a permitir suministrar un medio para estudiar la sangre y
determinar las variaciones y anormalidades de estructura, forma y tamaño de los
componentes sanguíneos, su contenido de hemoglobina y sus propiedades de
coloración. La información obtenida de un frotis de sangre periférica depende en
gran parte de la calidad del extendido y la coloración.

Azul de metileno

El azul de metileno su fundamento es que tiñe todas las bacterias por igual y se
utiliza para teñir las estructuras en el citoplasma de la célula no es diferencial,
Cuando las células están inmersas en azul de metileno, este
Penetra dentro de las células y las enzimas de las células vivas lo decoloran. Las
Células muertas, donde la enzima es inactiva, esto no ocurre y, por consiguiente,
Permanecen azul. El porcentaje de células no teñidas es entonces una mediada
de la Viabilidad.
fundamento y procedimiento de la tinción de Gram.

Pasos para hacer una tinción de gram:


Recoger la muestra de bacterias a estudio mediante un hisopo (bastón
estéril de algodón).
Extender dicha muestra sobre un portaobjetos y dejarla secar.
Fijar la muestra mediante un alcohol (metanol).
Aplicar el tinte de violeta de genciana sobre el portaobjetos y esperar un
minuto.
Enjuagar la muestra con agua y aplicar un fijador del violeta de
genciana (lugol). El lugol y el violeta de genciana forman un complejo
insoluble en agua capaz de penetrar en la pared de las células
bacterianas.
Lavar de nuevo el portaobjetos con una mezcla de alcohol y acetona
durante unos segundos.
Opcionalmente se puede añadir una tinción de safranina o fucsina para
distinguir las gram negativas que aparecerán bajo el microscopio (en
lugar de incoloras) con un tono rosado o rojo. Lavar con agua.
Ya se puede observar la muestra al microscopio donde se visualizarán
de color violeta las gram positivas y de color rosa-rojizo las gram
negativas.
En el caso de las bacterias gram positivas los complejos insolubles se
quedan atrapados entre las capas de peptidoglicano de la pared
bacteriana, sin disolver y dando la coloración morada característica al
observarlas al microscopio. En cambio, en las bacterias gram negativas
estos compuestos sí que se disuelven y pierden su color. Al
microscopio se verán incoloras o de color rosa-rojo, en función de si se
ha añadido la fucsina al final de la técnica de tinción de Gram.

Entre las bacterias gram positivas más frecuentes se encuentran el


Staphylococcus, el Streptococcus y el enterococo. Ejemplos de
bacterias gram negativas son la Escherichia coli y la Pseudomona
aeuruginosa.

Las limitaciones de la técnica vienen dadas por las características de la


muestra, el protocolo de tinción y además el hecho de que algunas
bacterias no presentan pared celular.
Fundamento de Gram.
Esta es una técnica que presenta 4 pasos fundamentales: tinción,
fijación con el mordiente, decoloración y contra tinción. Por tanto, esta
técnica además de colorear a las bacterias, también permite
diferenciarlas.

El cristal violeta es el primer colorante utilizado. El mismo tiene afinidad


por el peptidoglicano y teñirá de morado a todas las bacterias
presentes, posteriormente se coloca el lugol, que actúa como
mordiente, es decir, inducirá a la formación de complejos insolubles de
cristal violeta-yodo – proteínas ribo nucleares dentro de la célula.

Las bacterias Gram positivas, al tener una pared gruesa de


peptidoglicano, forman más complejos (cristal violeta-yodo), por tanto
retienen el colorante.

Además también influye que la pared de las bacterias Gram positivas


contienen mayor cantidad de ácidos no saturados, los cuales muestran
gran afinidad por los agentes oxidantes (Lugol).

Mientras, las bacterias Gram negativas poseen una capa delgada de


peptidoglicano, lo que hace que las bacterias formen menos complejos
que las Gram positivas.

Posteriormente viene el paso de la decoloración, donde las bacterias


Gram positivas y Gram negativas se comportan de manera diferente.

Las bacterias Gram negativas contienen una membrana externa rica en


lipopolisacáridos que forma parte de su pared celular. Las grasas son
destruidas por el contacto con el alcohol acetona, por lo que la
membrana externa se desestabiliza, siendo liberado el cristal violeta.

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