INFORME DE LABORATORIO N°3

CROMATOGRAFÍA DE CAPA DELGADA (CCD) SEPARACIÓN DE LOS

PIGMENTOS DE UNA PLANTA

QUIMICA ORGÁNICA

PROFESOR: JAVIER MARTINEZ

PRESENTADO POR:

GENERITH BOLAÑO PATERNINA

LEIDER LUIS LOPEZ HERNÁNDEZ

MARIANA VERGARA GOMEZ

JUAN CAMILO TIRADO IBARRA

UNIVERSIDAD DE CORDOBA

FACULTAD DE EDUCACION Y CIENCIAS HUMANAS

LIC. CIENCIAS NATURALES Y EDU. AMBIENTAL

TERCER SEMESTRE

MONTERIA

AÑO 2020
 CROMATOGRAFÍA DE CAPA DELGADA (CCD): SEPARACIÓN DE LOS
PIGMENTOS DE UNA PLANTA

OBJETIVO GENERAL

 Conocer la técnica de CCD, sus características y los factores que en ella

Intervienen.
OBJETIVOS ESPECIFICOS

 Adiestramos en el manejo de la técnica de cromatografía de capa delgada, aplicada

en el proceso de separación de los pigmentos de una planta (espinaca).
 Observar que tan eficiente es este proceso para la separación de los pigmentos de
una planta.
 Calcular los valores de RF de las sustancias separadas.

TEORÍA RELACIONADA
La cromatografía es la técnica más utilizada para separar los varios tipos de compuestos,
que integran las mezclas y se basa fundamentalmente en una distribución entre dos fases. El
método envuelve la remoción selectiva de los componentes de una fase a medida que esta
fluya a través de una segunda fase estacionaria. La remoción de un componente por la fase
estacionaria es un equilibrio y las moléculas de ese componente vuelven a entrar a la fase
móvil. Se separación se debe a que los distintos componentes de la mezcla son atraídos con
distinta fuerza por la fase estacionaria a medida que fluyen a través de ella. Aquel
componente que es atraído con mayor fuerza por la fase estacionaria va quedándose atrás
mientras que el componente atraído con menos fuerza va más adelante que los demás a
medida que va fluyendo a través de la fase estacionaria.
Las distintas velocidades de flujo de los componentes de la mezcla permiten que ellos se
vayan separando en zonas o manchas a medida que la mezcla fluya a través de la fase
estacionaria. la separación entre las zonas de los componentes es proporcional a la distancia
recorrida por la fase móvil sobre la fase estacionaria. Así entre mayor sea la distancia
recorrida mayor será la separación entre las zonas de los componentes.
La cromatografía es un método físico de separación en el que los componentes que se han
de separar se distribuyen entre dos fases, una de las cuales está en reposo (fase estacionaria,
F.E.) mientras que la otra (fase móvil, F.M.) se mueve en una dirección definida.
Hay 3 métodos principales de cromatografía: frontal, de desplazamiento y de elución. Sólo
consideraremos este último, que es el más habitual, al menos en Bioquímica y Biología
Molecular.

Tipos de cromatografías
Cromatografía de gases
En esta prueba generalmente se utiliza un gas inerte como el helio o el nitrógeno. El gas
ayuda a transportar las moléculas de la muestra y ello depende de la fuerza de adsorción,
que a su vez depende del tipo de molécula. Los diversos componentes de la mezcla de una
muestra se separan a medida que tienen contacto con el gas. Se utiliza un detector para
controlar la corriente de salida y por lo tanto, se puede determinar la cantidad de ese
componente. En general, las sustancias se identifican por el orden en que emergen.
En papel
Se procede a dejar caer una pequeña gota de la solución que contiene la muestra a una tira
de papel especial para esta táctica la cual se adsorbe. Es muy útil y fácil ya que la muestra
se puede poner en contacto con el papel, sin embargo hay sustancias que reaccionan al
papel y no pueden someterse a esta técnica. La técnica común consiste en tomar el papel y
sumergirlo en un disolvente como etanol o agua para luego guardarlo dentro de un
recipiente sellado.
En capa fina
Esta técnica se compone de un material absorbente de capa delgada que se encuentra sobre
una superficie generalmente una placa de vidrio. El absorbente el cual puede ser un gel de
sílice o también extracto de sulfato de calcio se unta sobre la superficie del vidrio y se
somete a altas temperaturas. El proceso es el mismo para la que es en papel.
Cromatografía de intercambio iónico
Funciona bien para separar moléculas porque cada tipo diferente presenta una adherencia
en particular. Para que esta funcione, el tipo de adherencia que poseen las moléculas debe
coincidir con el tipo de adherencia de la superficie o material que se utilizará.
De líquidos
Es una técnica que se utiliza para separar una muestra por cada uno de sus componentes.
Esta separación se produce en función de las interacciones químicas o físicas de la muestra.
Debido a que hay muchas combinaciones de fases estacionarias o móviles que pueden
emplearse al separar una mezcla, hay varios tipos que se clasifican según los estados físicos
de esas fases.
Cromatografía líquida de alta resolución
Se usa frecuentemente en bioquímica. La muestra es sometida a una alta presión, lo que
disminuye el tiempo en que los componentes ya separados permanecen en la fase
estacionaria Los disolventes utilizados incluyen cualquier combinación miscible de agua o
varios líquidos orgánicos como alcoholes, acetonitrilo, diclorometano y otros. A menudo,
se utiliza un gradiente para separar las mezclas.
Hay cuatro clases importantes de cromatografía las cuales se basan en los principios
mencionados anteriormente. Estas son: cromatografía de columna, cromatografía de capa
delgada, cromatografía de papel y cromatografía de gases.
Los pigmentos naranjados y rojos en las plantas consisten de hidrocarburos llamados
Carotenoides. Los pigmentos verdes consisten principalmente de Clorofila A y Clorofila B.

MATERIALES Y REACTIVOS

1 probeta 1 erlenmeyers de 50 ml metanol

2 gotero 1 placa cromatográfica Cloroformo
1 capilar 1 papel filtro espinaca(hojas)
1 vaso de 400ml 1 embudo de separación eter de petróleo
1 mortero 1 beacker gaza.
PROCEDIMIENTO
 RESULTADOS
1. EXTRACIÓN DE LA ESPINACA

Se le agrega el metanol y se muele Solvente: metanol

junto con las espinacas hasta
extraer la mayor parte del solvente.

La solución de metanol extraída se

desecha.
Se le agregó 5 ml de metanol y 5 ml
de éter de petróleo a la muestra de
espinaca resultante.
Se vuelve a moler, este proceso se
hace con el fin de extraer la mayor
parte de los pigmentos
orgánicos en la fase de éter de
petróleo.

2. Aquí inicia el proceso de aplicación de la muestra.

Cultivando una gota pequeña de solución en el centro de la
placa cromatografía. El instrumento usado para tomar la
pequeña muestra es una aguja capilar.
3. PROCESO DE CROMATOGRAFÍA

3.1 Se sumergió el extremo inferior 3.2 La fase móvil asciende por

en la fase móvil. capilaridad y se va produciendo la
separación de los componentes.

3.3 se marca el frente de avance del

cloroformo y se deja secar la placa.
4. REVELADO DE LA PLACA.

La placa se introduce en un recipiente cerrado

de Yodo. Con el fin hacer el revelado de las
manchas.

Di
Df1

Df2

Df3
O

Resultado final: observaciones

de los componentes y
medidas respectivas.
Datos obtenidos de las medidas de las distancias de las manchas observadas en la placa, están
descritas en cm y para el cálculo de la RF se tiene en cuenta la distancia de cada sustancia de la
espinaca y la distancia recorrida del solvente (cloroformo). Como se muestra en la siguiente tabla:

Df
RF=
Di
Sustancia de la Distancia recorrida Distancia recorrida
espinaca/ Componente por la sustancia Df por el solvente Valor de la RF
(en cm) (en cm)
Carotenoide (Xantofila) 3,9 4,1
Df1 Df 3,9
RF= = =0,95
Di 4,1
Carotenoide 2,2 4,1
(Xantofilas) Df2 2,2
RF= =0,53
4,1
Clorofila Df3 1,0 4,1
1,0
RF= =0,24
4,1
Carotenoide (Caroteno) 0,4 4,1
PO 0,4
RF= =0,09
4,1

ANÁLISIS DE RESULTADOS

Para la primera parte del laboratorio, se trabajó la cromatografía de capa fina con una
hoja de espinaca. Primero, se marcó con lápiz una línea de aplicación en la placa
de sílice y al punto central (origen) se le aplicó con un capilar una gota de la disolución,
luego se tuvo que esperar hasta que estas gotas se secaran para luego sumergirla en un
recipiente con 5 ml de cloroformo, Al sumergirla placa en la cámara de desarrollo, se debió
esperar hasta que el disolvente se desplazara hasta el punto marcado como frente de
disolvente, todo esto por capilaridad. Luego se debió esperar hasta que se secara la placa
y luego se llevó a revelar en el recipiente cerrado de yodo en donde se marcaron las
manchas observadas para lograr luego la obtención del Rf.
Análisis de los pigmentos observados en la placa
Al tomar en cuenta los datos obtenidos en el cuadro I podemos destacar los siguientes
puntos:
 la sustancia carotenoide llamada Xantofila, fue el pigmento que tuvo un mayor
desplazamiento recorrido, esto implica que es la sustancia que obtuvo un valor
mayor de Rf, el cual es 0,95. Esta sustancia se puede distinguir por su color amarillo
o anaranjado como lo indica la imagen de la placa final. En el valor de Rf de 0,53
(Df2) también hay presencia de xantofila, que en la imagen de la placa final se
puede evidenciar notablemente presentando un color anaranjado, pero no obtuvo
tanto recorrido, esto pudo posiblemente ocurrir a factores externos o concentración
de las sustancias. También es probable que los pigmentos de xantofilas de la parte
inferior estén enmascarados por componentes clorofílicos.
Las xantofilas son derivados oxigenados de los carotenoides. Abundan en los vegetales,
siendo responsables de sus coloraciones amarillas y anaranjadas, aunque a menudo están
enmascaradas por el color verde de la clorofila. También se encuentran las xantofilas en el
reino animal, como pigmentos de la yema de huevo (luteína) o de la carne de salmón y en
el exoesqueleto de crustáceos (cantaxantina). Las xantofilas son carotenoides polares,
funcionales con diversos grupos oxigenados como hidroxilas o cetonas, Mientras más
polar sea una sustancia en un disolvente con una polaridad relativamente parecida, va a
presentar una mayor afinidad hacia la fase móvil. Observando minuciosamente la imagen
de la placa podemos deducir entonces que las xantofilas fueron los pigmentos con más
recorrido.
 Un poco más en la parte inferior de la xantofila está la mancha de clorofila, del que
se obtuvieron 0,24 en su valor Rf. Solo tuvo un recorrido de 1 cm de distancia en la
placa con respecto a la distancia recorrida del cloroformo, situándose un poco más
abajo que el pigmento carotenoide. Esta mancha se caracteriza por su color verde,
propio de ella.
La clorofila es una biomolécula extremadamente importante, que participa en la
fotosíntesis, proceso que permite a las plantas y algas producir energía a partir de la luz
solar, además es la sustancia que le da el color verde a las hojas de muchas plantas.
 Por último, los pigmentos situados muy cerca del punto de origen de la placa, son
carotenoides específicamente carotenos, distinguidos por su color amarillo y porque
obtuvieron un valor de Rf de 0,09 el más bajo de todos los pigmentos observados.
Los carotenos son pigmentos orgánicos encontrados en las plantas y microorganismos
como algas y hongos. Son esenciales para la vida y ningún animal puede sintetizarlos, por
eso deben ser ingeridos en la dieta. También existen carotenos de color amarillo (beta-
caroteno) o naranja (neurosporaxantina). Son sustancias formadas por carbono e hidrógeno,
como por ejemplo el beta-caroteno (pro-vitamina A) o el licopeno. Ambas son moléculas
altamente apolares. Es por eso que debido a su apolaridad presentan una menor afinidad
hacia la fase móvil, es decir se van a desplazar en menor frecuencia que los demás
pigmentos.
 PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS

1) Analizar y explicar los resultados de sus cromato placas. Puede dibujar las placas y
las posiciones de las manchas de los compuestos antes y después de la cromatografía.

Xantofilas (Carotenoides) son polares y

su RF es el más alto de todos los
pigmentos.

Clorofila (pigmento verde) con valor de

RF más bajo que las xantofilas.

Caroteno (Carotenoide) es el pigmento

con el valor de RF más bajo. Son
sustancias apolares

2). En la cromatografía de capa delgada, ¿Cuál es la fase estacionaria y cuál es la fase

móvil?

Fase estacionaria
La fase estacionaria es una de las dos fases que forman un sistema cromatográfico.
Puede ser un sólido, un gel, o un líquido. Si es un líquido, puede estar adherido sobre
un sólido. Este sólido puede o no contribuir al proceso de separación. El líquido
también se puede unir químicamente al sólido (fase unida químicamente) o
inmovilizarse sobre él (fase inmovilizada). La expresión lecho cromatográfico o
sorbente, se puede emplear como término general para denominar cualquiera de las
diferentes formas en las que se presenta la fase estacionaria.
 Fase móvil
Es un fluido que penetra a través o a lo largo del lecho estacionario, en una dirección
determinada. Puede ser un líquido (cromatografía de líquidos) o un gas
 (cromatografía de gases) o un fluido supercrítico (cromatografía de fluidos
supercríticos). En cromatografía de gases se puede utilizar la expresión gas portador
para designar la fase móvil, y en cromatografía de elución se puede utilizar la palabra
eluyente para designar esta misma fase.
3). explique cómo y por qué se separan los componentes de la mezcla de pigmentos.
¿Cuál de los pigmentos es atraído con más fuerza por la silica? ¿Por qué?

R/ La separación se debe a que los distintos componentes de la muestra son atraídos con
distintas fuerzas por la fase estacionaria a medida que fluyen a través de ella, aquel
componente que por sus características es atraído con mayor fuerza por la fase estacionaria
va quedando atrás mientras el que no es atraído demasiado fuerte va desplazándose hasta
más delante de la placa.

4) ¿Qué solvente o mezcla de solventes recomendaría usted para hacer que el

desplazamiento de las manchas desde su posición original fuera menor que el
observado por usted en la práctica?

R/ En la práctica de laboratorio se usaron distintos solventes para el proceso de

cromatografía, pero el solvente que recomendaríamos para hacer que el desplazamiento de
las manchas sea menor es el hexano. En el caso de compuestos poco polares, los cuales se
desplazan del origen con bastante facilidad, se utiliza un disolvente apolar, generalmente el
hexano.

5). Usted tiene un compuesto impuro y quisiera saber cuántas sustancias están
contaminando su compuesto. Explique como lo haría utilizando cromatografía de
capa Delgada.

R/ Al realizar el procedimiento respectivo para una cromatografía de capa delgada la cual

separa compuestos orgánicos de una muestra sirve para determinar si el compuesto
orgánico esta impuro y que sustancias lo están contaminando por consiguiente en la capa
cromatográfica de capa delgada al mirar el extendido de las sustancias en la placa , se
mostraran puntos o manchas al ser absorbidas o atraídas con mayor fuerza por la fase
estacionaria , por ende entre menos manchas haya en el extendido menos impuras serán
esas manchas , corresponderán a las sustancias que contaminan.
 CONCLUSIONES
Esta práctica de laboratorio se culminó con éxito y con los resultados obtenidos
evidenciamos que nos adiestramos en el manejo de la técnica de separación descrita en este
informe, en donde se aprendió a utilizar los materiales o instrumentos necesario para la
realización de esta práctica de nivel básico de química orgánica.
Al realizar este informe de laboratorio referente a la separación de compuestos por medio
de una cromatografía de capa delgada de una hoja de espinaca, tuvimos como conclusión la
separación de los pigmentos de la hoja al realizar el respectivo procedimiento planteado en
la guía, además de un buen entendimiento al comprender y adiestrarse en el manejo de la
técnica descrita. Al realizar esta práctica de laboratorio concluimos que la técnica es
apropiada y bien fundamentada para la separación de compuestos orgánicos la cual al
aplicarse a nuestra hoja (espinaca) problema evidenciamos la extracción de los pigmentos
en la placa.
Mientras más polar sea una sustancia en un disolvente con una polaridad relativamente
parecida, va a presentar una mayor afinidad hacia la fase móvil como en el caso de las
xantofilas cuyo valor de RF es más alto que los demás componentes (pigmentos).
Se logró la obtención de valores de relación frontal en diferentes tipos de componentes de
la hoja de espinaca.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Anderson Guarnizon F, Pedro N. Martinez. Experimentos de química orgánica (con
enfoque en ciencias de la vida)
Tomado de: https://es.slideshare.net/SusMayen/prctica-6-cromatogra

Universidad Nacional (escuela de química)

Tomado de: https://www.studocu.com/es/document/universidad-nacional/quimica-
organica-i/informe/reporte-cromatografia/3750399/view

http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/6.-CROMATOGRAFIA_26249.pdf