Universidad Nacional de Colombia

Química básica para ciencias de la salud

Edgar Acuña Ortegón Carlos Andrés Nieto Patarroyo
Santiago Alvarado Mesa Jineth Stephania Niño Vargas
Jose Luis Garcia Christian David Otalora
Jose Manuel Giraldo Tovar Daimer Camilo Pacheco Arias
David Alfonso Lizarazo Perez Jorge Sandoval
José Joaquín Lombana Carlos Alberto Rodríguez
Joanle Mora Plata

DETECCIÓN DE MUTACIONES EN PACIENTES CHINOS CON ENFERMEDAD DE

ALZHEIMER FAMILIAR MEDIANTE SECUENCIACIÓN DEL EXOMA COMPLETO

Para empezar, la enfermedad de Alzheimer (EA) es “la forma más común de trastorno
neurodegenerativo, se caracteriza por la pérdida irreversible de la memoria y del deterioro
cognitivo”. Principalmente se presenta espontáneamente en personas con una edad
superior a las 65 años, presentándose muy poco en personas de edad inferior a ella. Para la
enfermedad familiar de Alzheimer (EFA) “los pacientes tienen un patrón de herencia
dominante en gran medida autosómico y comúnmente se agregan en pacientes con
enfermedad de Alzheimer de inicio temprano” (Jiang et al., 2019).

Figura 1. Esquema de la formación del ARN mensajero a través de intrones y exones de un gen

Los genes que han sido detectados en los estudios como los responsables en gran medida
de la EFA, son el gen de la proteína precursora del amiloide (PPA) localizado en el
cromosoma 21, que contiene 18 exones para codificar el PPA; el gen presenilina 1 (PSEN1)
que está localizado en el cromosoma 14 con 12 exones y el gen presenilina 2 (PSEN2) el
cual está localizado en el cromosoma 1 con 13 exones. Los exones son partes codificantes
de un gen, estas están separadas por cadenas de ADN que no codifican llamadas intrones,
cuando se unen los exones se da la expresión completa del gen (Jiang et al., 2019).

Estos estudios que se han realizado analizando principalmente poblaciones europeas como
la francesa y la inglesa, en donde la prevalencia de las mutaciones del APP, PSEN1 y
PSEN2, es considerablemente alta “Reino Unido (21/31, 68%) (Janssen et al., 2003) y
Francia” (24/34, 71%) (Campion et al., 1999). Sin embargo los estudios realizados en la
población china, indican una poca presencia de mutaciones de los tres genes antes
mencionados, con una incidencia de 8.2% (5/61) de 61 pacientes analizados con EA y
18.75% (6/32) de 32 familias con EFA. Estos resultados sugieren que en la población china
hay otros genes más relacionados con la EFA (Jiang et al., 2019).
Para la investigación de los genes que tienen un papel importante y de los que
probablemente tengan incidencia en la aparición de EFA, existen muchos métodos como
pueden ser la “secuenciación directa de Sanger y secuenciación dirigida de próxima
generación”, pero el mejor y más eficiente método para este caso es la secuenciación del
exoma completo (SEC) (Jiang et al., 2019).

En la investigación se “realizó el cribado de mutaciones en 15 pacientes sin parentesco de

familias chinas con EFA usando la SEC. Además, las correlaciones genotipo-fenotipo en
pacientes con mutaciones o posibles variantes patógenas con EFA fueron determinados”.
Los pacientes se encontraban en una edad al iniciar el estudio menor a 65 años, además el
diagnóstico de los pacientes participantes se dio a través de la comparación con dos
criterios (DSM-IV-TR y NINCDS-ADRDA), junto con un análisis de la “historia familiar
asociada con la herencia autosómica dominante” (Jiang et al., 2019).

Se extrajeron fragmentos de ADN de los participantes, siendo leídos, analizados y en

comparación con el “genoma humano de referencia (UCSC hg19)”, todos las
inconsistencias y datos relevantes eran anotados por un software especializado llamado
ANNOVAR, también eran comparadas las variantes con la población en general, para esto
se usaron varias bases de datos, por último para confirmar las variantes genómicas se usó
el método de secuenciación directa de Sanger (Jiang et al., 2019).

En los resultados, se identificaron diversas variantes, la secuencia completa del exoma fue
extraída de 15 pacientes sin relación alguna que padecen de EFA. Se detectaron
aproximadamente 39.729 variantes de los genes registradas en sus respectivas tablas. Se
utilizaron algunos criterios con el fin de clasificar de una manera correcta las variantes, entre
ellos se encuentran que la frecuencia en la variación tiene que estar presente en menos del
1% de la población, se excluye variantes repetidas, así como se incluyen variantes que
afectan genes codificantes (Jiang et al., 2019).

Después de la revisión mediante el método de secuenciación de Sanger se identificaron 12

variantes (p.V717I; PSEN1: p.M139I, p.T147I, p.L173W, p.F177S y p.R269H; PSEN2:
p.V139M) de las cuales 7 ya habían sido reportadas, 3 variantes no reportadas (p.T297M,
p.D332G; PSEN1: p.R157S), y 2 variantes nuevas (p.D244G, p.K687Q). Ninguna de estas
variantes fue detectada en la población china (Jiang et al., 2019).

Se identificaron 5 variantes de PPA en 6 casos índice, de las cuales dos fueron nuevas
variantes (Jiang et al., 2019). Las variantes y sus características clínicas se describen a
continuación:

● La variante novedosa p.K687Q en PPA se detectó en los casos índice de las familias
1y 2 y afectó el mismo aminoácido que la patología c.2061 informada anteriormente.
Los fenotipos clínicos de los portadores se vieron reflejados en síndromes
amnésicos típicos (déficit cognitivo, disminución de la memoria de corto plazo y
habilidades de cálculo) y no se presentó ningún otro fenotipo atípico.
 ● Otra de las variantes novedosas fue la p.D244G en PPA la cual fue encontrada en
una mujer de 55 años. Ella presentaba déficit progresivo de memoria y su madre
reportaba características clínicas similares.

● La variante de la PPA p.T296M se detectó en un hombre de 54 años. Sus síntomas

se relacionan con la disminución progresiva de las capacidades de aprendizaje y
concentración. Su madre y hermanos presentaron casos clínicos semejantes.

● La variante p.D332G se identificó en un hombre de 47 años cuyas características

clínicas son de diversas índoles, incluyendo deterioro de la memoria de corto plazo,
disminución de las capacidades de construcción visual, déficit en habilidades de
cálculo y cambios leves en su personalidad. Sus estudios mostraron atrofia en los
lóbulos temporal y parietal e hipocampo. Su madre presentaba síntomas similares.

● La variante de PPA p.V717I ya se había informado previamente en la población

China, reportando fenotipos como demencia, deterioro del lenguaje, ataxia,
paraplejia y síndromes de tipo esquizofrénico. En el estudio en cuestión, se encontró
mutaciòn en el caso índice de la familia 7, la cual presentó déficit de memoria,
convulsiones ocasionales y problemas al tragar. Se reportó un fenotipo parecido
para su madre.

Respecto al PSEN1 y PSEN2 se identificaron seis y una variante respectivamente (Jiang et

al., 2019):

● Una de ellas fue detectada en una persona de 62 años, cuya memoria empezó a
tener problemas a los 60. Esta progresivamente iba empeorando junto con un
aumento en la irritabilidad, la cual fue informada por los familiares 2 años después,
cuando se le detectó la variante. A pesar de eso se observó que podía llevar una
vida normal, pues no fueron comprometidos otros factores neurológicos.

● La variante p.F177S de PSEN1 fue encontrada en un hombre de 30 años de edad

cuando tuvo pérdida de memoria, sin embargo también tuvo manifiesto de otros
síntomas, como movimientos involuntarios, dificultades del habla y ataxia cerebelar.
Según los resultados de la resonancia, tenía signos evidentes de atrofia cerebral
general. Además, dos de sus familiares murieron a temprana edad por problemas
neurológicos.

● Para la PSEN2 se reportó el caso de la variante p.V139M por primera vez en un

paciente chino. Sin embargo respecto al primer caso mostrado en Italia, este tuvo
cambios fenotípicos, como pérdida de memoria temprana y gradual. Destacar
también que su padre presentó los mismos síntomas en la década de 1940 pero no
estuvo disponible para su estudio genético.

Ahora bien la EA es una enfermedad de orden multicausal por tal motivo el origen de esta
enfermedad es difícil de determinar más sin embargo los descubrimientos dados en
pacientes con EFA han aportado información indispensable acerca de los mecanismos
celulares de la enfermedad (Selkoe y Hardy, 2016).
Mas sin embargo a pesar de los enormes esfuerzos que se han hecho en las últimas
décadas para buscar el origen del Alzheimer Todavía se desconoce los mecanismos de la
degeneración de las células en esta enfermedad y por tanto no hay el conocimiento
suficiente para un rápido diagnóstico y efectivo tratamiento de la enfermedad (Scheltens et
al., 2016).

Los genes PPA, PSEN1 y PSEN” son los tres genes autosómicos que determinan la
dominancia de la EFA y según la base de datos de ALZFORUM hay 52, 241 y 45
mutaciones respectivamente en cada uno de los genes; pero más sin embargo en los
estudios realizados para verificar las variantes que causaban el EFA en los pacientes chinos
mostró que las mutaciones en el PSEN1 eran la principal fuente hereditaria de esta
enfermedad a tal punto que desde el primer reporte de una mutación en este gen en el 2005
(p.s169del), en la región del norte de China, se han detectado a lo largo del tiempo otras
seis mutaciones de este gen en diferentes familias a lo largo de China, en contraposición
sólo se han encontrado cuatro mutaciones del gen PSEN2 y dos del gen PPA.

A diferencia de los otros estudios que se han realizado anteriormente indicado la poca
presencia de mutaciones en los 3 genes antes mencionados, en relación con la población
china, en el estudio del que se hace referencia se ha encontrado una gran presencia de
estas mutaciones en estos genes (8 of 15, 53.3%), asemejándose a los resultados
encontrados en los estudios en poblaciones europeas. El por qué de los diferentes
resultados en los estudios se puede deber a muchos factores pero al que más se puede
prestar atención, es el método, en el estudio actual se utilizó la SEC y confirmó los
resultados utilizando la secuenciación directa de Sagner, en contraste el estudio pasado
solo utilizó la secuenciación directa e Sagner, la cual no es muy confiable en sus resultados,
debido entre otros al "error humano" (principalmente malinterpretar secuencia) (Jennings y
Kirschmann, 2016).

Otras de las causas de las diferencias entre los resultados de los estudios, es que el
tamaño de la muestra fue comparativamente pequeño en ambos estudios, lo que también
puede tener efectos sobre los resultados. También se hace necesario mencionar que para
la clasificación de las mutaciones es necesario tener los datos de los miembros familiares
para el análisis genético, y también la detección de variaciones en el número de copias es
necesaria para que con la SEC se puedan encontrar los genes que probablemente son los
que producen la enfermedad y todas sus variantes.

Ahora se debe tener en cuenta que cualquier mutación, sea o no en el mismo codón de los
genes causantes de la EFA, provocará un cambio en el fenotipo. Hablando específicamente
de la mutación (p.V717I) del gen PPA, encontrada y descrita en el estudio, demostró
provocar déficit de memoria, convulsiones ocasionales, problemas para tragar, así como
fenotipos clínicos relativamente típicos del EFA. “La variante p.V717I en APP se encuentra
cerca del sitio de desdoblamiento de g-secretase. Puede aumentar la hidrofobicidad del
dominio APP TM y elevar el Ab42 por encima de la relación Ab40” (De Jonghe et al., 2001;
Murrell et al., 2000), esto puede provocar diferentes consecuencias que se verán reflejadas
en el fenotipo del paciente.

Se ha informado de una serie de mutaciones, en diferentes localizaciones y tiempos, de

PSNE1, la primera reportada por una familia francesa con EFA. Los fenotipos se
caracterizan por ser de una edad temprana de inicio, espasticidad de las extremidades y
afasia expresiva, los cuales se han encontrado en la investigación añadiendo la amnesia.
Otras mutaciones de PSNE1 han sido reportadas por familias alemanas y estadounidense
con EFA. Aparte de las características anteriores de la variante de la p.F177S se descubre
ataxia cerebelosa y atrofia cerebelosa en la RMN cerebral, esto en un estudio que informa
también sobre otros síntomas, ninguno especial en el paciente objeto de estudio con la
mutación p.R269H. Así siendo estudiadas y descritas mutaciones relacionadas.

Finalmente, se puede concluir que se analizó e informó de la detección de ciertas

mutaciones en cierta población de pacientes chinos utilizando el método de la SEC, y
también se ha identificado una variable patogénica probable el p.K687Q en el gen PPA.

Bibliografía

Jiang, B., Zhou, J., Li, H., Chen, Y., Cheng, H., Ye, L., . . . Wu, Z. (2019). Mutation screening
in Chinese patients with familial Alzheimer’s disease by whole-exome sequencing.
Neurobiology of Aging, 76(215), 15–21. Recuperado de
https://www.journals.elsevier.com/neurobiology-of-aging

Scheltens, P., Blennow, K., Breteler, M.M., de Strooper, B., Frisoni, G.B., Salloway, S., Van
der Flier, W.M., 2016. Alzheimer’s disease. Lancet 388, 505e517.

Selkoe, D.J., Hardy, J., 2016. The amyloid hypothesis of Alzheimer’s disease at 25 years.
EMBO Mol. Med. 8, 595e608.