TECNOLÓGICO NACIONAL DE MÉXICO

INSTITUTO TECNOLÓGICO DE ACAPULCO

DEPARTAMENTO DE INGENIERÍA BIOQUÍMICA

MICROBIOLOGÍA GENERAL
AGENTES FÍSICOS QUE AFECTAN EL CRECIMIENTO
BACTERIANO

GRUPO B
ALUMNO: EDGAR JORDI CLAUDIO RAMIREZ
NO. CONTROL: 16320349
NO. EQUIPO: 1

DOCENTE: M.C. MIGUEL ANGEL DÍAZ ALDAY

ACAPULCO DE JUÁREZ, GRO., A 09 DE MARZO DEL 2019

CONTENIDO
INTRODUCCIÓN..............................................................................................................................................3
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA..............................................................................................................4
JUSTIFICACIÓN...............................................................................................................................................4
OBJETIVO GENERAL......................................................................................................................................5
OBJETIVOS ESPECÍFICOS......................................................................................................................5
MATERIALES Y MÉTODOS.............................................................................................................................5
MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPO....................................................................................................5
METODOLOGÍA........................................................................................................................................ 6
TEMPERATURA......................................................................................................................................6
BAJAS TEMPERATURAS.......................................................................................................................7
RADIACIÓN (ULTRAVIOLETA)..............................................................................................................7
DESECACIÓN.........................................................................................................................................7
PRESIÓN OSMÓTICA............................................................................................................................7
PREPARACIÓN DE LAS CEPAS.............................................................................................................. 8
DETERMINACIÓN DEL PUNTO TÉRMICO MORTAL..............................................................................8
PARA Escherichia coli.............................................................................................................................8
PARA Bacillus subtilis..............................................................................................................................9
DETERMINACIÓN DEL PERÍODO TÉRMICO MORTAL..........................................................................9
PARA Escherichia coli.............................................................................................................................9
PARA Bacillus subtilis............................................................................................................................10
REFERENCIAS...............................................................................................................................................10
INTRODUCCIÓN

Debido a su pequeño tamaño y a su estilo de vida individual, las células procarióticas

sufren los cambios ambientales de un modo mucho más directo e inmediato que las
células de los organismos pluricelulares. A lo largo de miles de millones de años, las
bacterias han estado sometidas a diversas presiones ambientales, y han respondido
evolutivamente creando numerosos mecanismos de adaptación. Actualmente, las
únicas formas de vida existentes en determinados ambientes extremos son
exclusivamente procarióticas. Desafiando a nuestras ideas preconcebidas de lo que es
la vida "normal", encontramos extraordinarios seres vivos unicelulares viviendo a pH
muy ácidos o muy alcalinos, medrando en salmueras y salinas, o reproduciéndose a
temperaturas de más de 100ºC y a grandes presiones. Este capítulo solo estará
enfocado en los factores físicos que puedan intervenir en el crecimiento bacteriano.
Hasta ahora hemos venido considerando el crecimiento de las bacterias en función de
su fondo genético, en relación con los nutrientes, y en unas hipotéticas condiciones
ideales (óptimas). Sin embargo, el trabajo experimental con microorganismos ha de
tener en cuenta los factores ambientales, es decir, una serie de agentes físicos y
químicos que modifican la velocidad de crecimiento, provocando cambios que, a
determinados valores de dichos factores pueden llegar a ocasionar la muerte de
microorganismos; condicionan la distribución de los microorganismos en sus
ecosistemas y hábitats naturales; permiten a los humanos controlar el crecimiento
microbiano, por medio de la fijación de parámetros para: la mutagénesis, la
esterilización y desinfección, la quimioterapia.
No todos los microorganismos toleran del mismo modo un determinado factor
ambiental. Así, unas determinadas condiciones pueden ser nocivas para una especie
bacteriana, y en cambio ser neutras o beneficiosas para otra.
Antes de abordar el estudio de distintos agentes ambientales, conviene distinguir entre
los efectos que un determinado agente puede tener sobre la viabilidad y los efectos que
pueden simplemente afectar al crecimiento, a la capacidad de diferenciación (si la
hubiera) o de reproducción.
Los principales tipos de factores físicos son: temperatura, desecación, radiaciones,
ondas sonoras, presión hidrostática y presión osmótica. Esta práctica de laboratorio
solo estará enfocada en los factores físicos que puedan intervenir en el crecimiento
bacteriano.

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PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

Los microorganismos son vitales para la vida en el planeta, los seres humanos
simplemente no podríamos existir sin ellos. Sin embargo, algunos de ellos tienen
efectos nocivos en nuestra vida diaria, ya sea produciendo enfermedades o
contaminando productos de interés. Es por esta última razón, que los seres humanos
han tratado de encontrar maneras para controlar a los microorganismos, ya sea
matándolos o simplemente deteniendo su desarrollo. Muchas bacterias poseen en su
forma vegetativa (forma metabólicamente activa), una tolerancia limitada a variaciones
en su medio ambiente y poseen poca capacidad de supervivencia ante condiciones
adversas de desarrollo; otras, en cambio, producen estructuras de resistencia a dichas
condiciones adversas denominadas esporas. Los mecanismos de control
microbiológico deben ser capaces ya sea, de eliminar o simplemente limitar el
desarrollo de formas tanto vegetativas como esporuladas. Entre los mecanismos
existentes para controlar el crecimiento microbiano se encuentran los tratamientos
físicos; estos métodos físicos de control se han utilizado ampliamente a lo largo de la
historia de la humanidad, sobre todo, para conservar alimentos (secado y salado son
probablemente las técnicas más antiguas utilizadas por el ser humano). Cuando se
debe seleccionar un método para controlar el desarrollo de los microorganismos, se
debe considerar el (los) efecto(s) que dicho método pueda tener sobre los productos
que se deseen preservar, por ejemplo, ciertas vitaminas y antibióticos en solución
pueden ser inactivados por el calor.
Los factores o agentes físicos se toman como parámetros ambientales de muy estricta
importancia debido a la adaptación de las bacterias u otros microorganismos que se
puedan presentar en el medio. Cada una de ellas tienen una adaptación muy específica
ya que nacen o se reproducen con esas características ambientales, debido que a
cualquier cambio o alteración que presente el medio donde se encuentren puede
afectar mucho su supervivencia en el sistema. Los agentes físicos son un arma de dos
filos para los microorganismos. Con ello el ser humano ha encontrado una manera de
controlar o regular las colonias bacterianas y evitar una sobrepoblación en el medio, es
por ello que dependiendo de la situación que se presente, el ser humano puede dejar
crecer o exterminar las colonias bacterianas. Debido a esto, se deberán tomar los
factores principales de crecimiento bacteriano como lo son la temperatura, la
desecación, la presión osmótica e hidrostática, entre otros.

JUSTIFICACIÓN

Un agente físico es una condición física o propiedad física que causa un

cambio. La temperatura, la presión y la radiación son ejemplos de

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agentes físicos que actúan sobre los microorganismos. Los filtros los
retienen. Mediante los procesos físicos se causan cambios en los
microorganismos, por ejemplo, la esterilización y la incineración que los
conducen a la muerte. En la higienización, por ejemplo, el lavado, los
desprende de los materiales.  La temperatura es uno de los factores
físicos ambientales más importantes, que influyen en el crecimiento
y afecta la sobrevivencia de los microorganismos en dos
formas. Primero, si aumentamos la temperatura, las reacciones químicas
y enzimáticas en la célula se realizan más rápidamente y por lo tanto el
crecimiento es más rápido. Segundo, tanto las proteínas como los ácidos
nucleicos y otros componentes celulares son sensibles a altas
temperaturas y pueden ser irreversiblemente inactivos. Generalmente al
aumentar la temperatura dentro un límite dado, el crecimiento y las
funciones metabólicas aumentan hasta un punto en que se inactivan y
entonces las funciones cesan. Cada organismo tiene sus temperaturas
cardinales que se refieren a la mínima, óptima y máxima a la cual crecen.
La temperatura optima generalmente está más cerca de la máxima que
de la mínima. En base a lo anterior, los microorganismos se clasifican de
acuerdo a su temperatura optima de crecimiento en:
psicrófilos, mesófilos y termófilos. 

OBJETIVO GENERAL

 Aprender e identificar los principales agentes físicos que afectan el crecimiento

bacteriano.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS

 Analizar el efecto de los agentes físicos que afectan el crecimiento de la

bacteria.
 Regular los mecanismos físicos del crecimiento microbiano.
 Aplicar los agentes físicos para tener un control bacteriano.

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MATERIALES Y MÉTODOS

Materiales, reactivos y equipo

 4 placas de Agar Nutritivo.
 Asa bacteriológica.
 Mechero bunsen.
 Pipetas graduadas estériles.
 Tubo de 13x100 con 5 mL de caldo nutritivo.
 4 tubos de 13x100 estériles.
 Gradilla.
 Olla de presión.
 Tubo número 1 de la escala de McFarland
 Incubadoras
 Baños Metabólicos
 Escherichia coli
 Bacillus subtilis

Metodología

Temperatura

La temperatura es uno de los parámetros ambientales más importantes que

condicionan el crecimiento y la supervivencia de los microorganismos. La temperatura
afecta a la velocidad de crecimiento (y, por lo tanto, al tiempo de generación,  g). Cada
bacteria (y suponiendo que el resto de condiciones ambientales se mantienen
constantes) muestra una curva característica de tasa de crecimiento en función de la
temperatura, donde podemos distinguir tres puntos característicos
llamados temperaturas cardinales:
 Temperatura mínima: por debajo de ella no hay crecimiento;
 temperatura máxima: por encima de ella tampoco existe crecimiento;
 temperatura óptima: permite la máxima tasa de crecimiento (o sea, g mínimo).
La aplicación de calor constituye el método más sencillo para esterilizar materiales,
siempre y cuando el material mismo sea resistente al daño por calor. El calor actúa
sobre los microorganismos desnaturalizando las proteínas celulares, los ácidos
nucleicos y desorganizando las membranas celulares. Como es de esperarse, no todas
las células expuestas a un tratamiento microbicida (calor, radiaciones, presión osmótica
alta, etc.) mueren al mismo tiempo, sino que lo hacen de manera exponencial; esto
quiere decir, que el número de células sobrevivientes decae en una unidad logarítmica
por cada unidad de tiempo, esta unidad de tiempo se conoce como tiempo de
reducción decimal o valor-D, y es el tiempo, expresado en minutos, en el cual, el 90%
de una población bacteriana morirá a una temperatura dada. Durante valores D

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subsecuentes, el 90% de las bacterias sobrevivientes será eliminado de manera
consecutiva. Para destrucción térmica, la temperatura utilizada en el tratamiento puede
indicarse en forma de subíndice, por ejemplo, el valor-D a 90°C se escribe D90°C.
Además del valor-D, otros dos términos que son útiles para describir la susceptibilidad
de un determinado microorganismo a la destrucción por calor son el Punto Térmico
Mortal y el Período Térmico Mortal. El Punto Térmico Mortal es la temperatura mínima
requerida para matar todos los microorganismos en una suspensión líquida en 10
minutos. El Período Térmico Mortal es el tiempo mínimo necesario para destruir una
población de microorganismos a una temperatura dada. Tanto el Punto como el
Período Térmico Mortales sirven de guía para indicar el tratamiento térmico requerido
para destruir una población bacteriana en específico.

Bajas temperaturas

Las bajas temperaturas no matan a la mayoría de los microorganismos, de hecho, se

utilizan para conservar cultivos de estos por períodos limitados. Si se mantiene a los
microorganismos a una temperatura por debajo de su valor mínimo de crecimiento,
estos comenzarán a morir lentamente. Por otra parte, al congelar una población
bacteriana, se destruyen algunas células, pero los sobrevivientes permanecen viables
en estado congelado por largos períodos. Debido a que las bacterias son muy
pequeñas, no se logran formar cristales de agua en su interior como ocurren en células
eucariotas; por lo tanto, no sufren destrucción mecánica intracelular. En su lugar, las
bacterias son destruidas debido a la alta fuerza osmótica que se desarrolla conforme el
agua del ambiente se va congelando.

Radiación (ultravioleta)

Las radiaciones tienen diversos efectos sobre las células, dependiendo de su longitud
de onda, intensidad y tiempo de exposición. Existen dos tipos de radiaciones capaces
de matar microorganismos: Las radiaciones ionizantes (rayos gamma y rayos X) y las
no ionizantes (luz ultravioleta).

Desecación

En ausencia de agua los microorganismos no pueden crecer o reproducirse, pero

pueden mantenerse viables por años. Cuando hay agua disponible, los
microorganismos vuelven a crecer y a dividirse. El agua puede eliminarse del medio
ambiente por evaporación o sublimación. La primera casi nunca se utiliza en los
laboratorios debido a que produce cambios químicos. Sin embargo, la sublimación es
ampliamente utilizada en el proceso de liofilización. La resistencia a la desecación
varía de acuerdo a la especie y al medio ambiente en el que se encuentre el
microorganismo.

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Presión osmótica

El uso de altas concentraciones de sal o azúcar para conservar alimentos se basa en

los efectos de la presión osmótica. Las altas concentraciones de estos solutos en el
medio crean un ambiente hipertónico que daña a las células por plasmólisis. Este
método de control se asemeja al de desecación, ya que priva a la célula del agua que
necesita para poder desarrollarse. Este método de control es ampliamente utilizado en
la industria de alimentos.

PREPARACIÓN DE LAS CEPAS.

1.- En un tubo que contenga caldo nutritivo, colocar varias asadas de la cepa E. coli
hasta obtener una suspensión turbia homogénea que corresponda al tubo
número
2.- 1 de la escala de McFarland (aproximadamente una población bacteriana de
3X108 bacterias/mL).
3.- Distribuir a cada equipo, una alícuota de esta suspensión en un tubo de ensaye
estéril.
4.- Etiquetar cuatro tubos estériles para E. coli.
5.- A estos tubos, distribuir volúmenes iguales de caldo nutritivo en condiciones de
esterilidad (a partir del tubo que contiene 5 mL de caldo nutritivo).
6.- Diluir la suspensión bacteriana original en estos tubos a una proporción 1:2
7.- Preparar la cepa de B. subtilis de la misma manera. Para esta cepa, etiquetar los
tubos con los valores de temperatura 80, 90, 110 y 120 °C. Estos pasos serán
realizados por los profesores de laboratorio.

DETERMINACIÓN DEL PUNTO TÉRMICO MORTAL

PARA Escherichia coli

1. Colocar los baños metabólicos a 35, 45, 55 y 65 °C respectivamente.

2. Etiquetar los 4 tubos de la suspensión diluida de E. coli con las temperaturas
indicadas.
3. Dividir una placa de agar nutritivo en seis sectores de la siguiente manera:
Determinación del punto térmico mortal (E. coli).

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 4. Incubar los tubos a sus temperaturas correspondientes durante 10 minutos.
5. Terminado el tiempo, sembrar una asada por estría simple de cada uno de los
tubos en el sector correspondiente.
6. En el quinto sector sembrar una asada de la suspensión original (sin tratamiento
térmico) como control positivo.
7. Dejar el sexto sector sin inocular como control negativo.

PARA Bacillus subtilis

 Realizar el mismo procedimiento que para E. coli, pero a temperaturas de 80, 90, 110 y
120 °C (en este caso, para los dos últimos valores de temperatura se requerirá de ollas
de presión en vez de baños metabólicos).

DETERMINACIÓN DEL PERÍODO TÉRMICO MORTAL.

PARA Escherichia coli
1.- Dividir una placa de agar nutritivo en seis sectores de la siguiente manera:

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 2.- Tomar una asada y sembrar por estría simple en el sector de la placa
correspondiente a 5 minutos.
3.- Volver a colocar el tubo en el baño metabólico por otros 5 minutos (es decir,
completar 10 minutos en total) y sembrar de igual manera en el sector
correspondiente.
4.- Colocar el tubo otros 10 minutos en el baño (20 min en total) y sembrar de igual
manera.
5.- Repetir el procedimiento por 10 minutos más (30 min).
6.- Sembrar una asada de la suspensión original (sin tratamiento térmico) en el
quinto cuadrante.
7.- Dejar sin inocular el sexto cuadrante.

PARA Bacillus subtilis

1.- Realizar el mismo procedimiento que para Escherichia coli utilizando en este
caso la temperatura de 90 °C para el baño metabólico.

Referencias

Madigan, M. T., Martinko, J.M. y Parker, J. (1999). Brock Biología de los microorganismos.
Madrid, España. Editorial Pearson-Prentice-Hall, octava edición.

Gutiérrez Romero, Ana Lilia et. Al. (2017). Manual de Laboratorio de Microbiología General I.
UNAM, Facultad de estudios superiores Zaragoza, Química Farmacéutica Biológica.
Hipertextos del área de la biología. (1998-2007). Acción de los agentes físicos sobre las bacterias
(I). Buenos Aires, Argentina. Biología.edu: recuperado de
http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/micro-ianez/17_micro.htm

Mi página web. (2014-2019). Efecto de factores físicos y químicos sobre el crecimiento

microbiano. microbiologiaitt.es: recuperado de https://microbiologiaitt.es.tl/8-.--Efecto-de-
factores-f%EDsicos-y-qu%EDmicos-sobre-el-crecimiento-microbiano.htm

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