I.1.

CONCEPTO DE CRECIMIENTO BACTERIANO

Según Silva (2018), el crecimiento bacteriano implica la división celular, llevando a
un aumento exponencial del número de células iniciales de una población.
Las bacterias pueden crecer individuamente por fisión binaria (la célula se alarga
hasta dividirse en dos) o en el contexto de una población (las células duplican su
tamaño y se forma un septum, que consiste en el crecimiento de la membrana
celular y de la pared celular hasta la separación de las dos células).

Cuando una célula se separa dando origen a dos nuevas células se dice que
ocurrió una generación, designándose como tiempo de generación la duración de
todo ese proceso.

Los tempos de generación varían mucho de una especie a otra, dependiendo

también del medio de crecimiento y de las condiciones de cultivo. Un crecimiento
exponencial es definido por la duplicación del número de células durante un
intervalo de tiempo constante. En este tipo de crecimiento el número de células
aumenta lentamente, pasando poco después a un aumento muy rápido,
resultando en un elevado número de células.

Ilustración 1. División binaria de células procariotas

 1. El cromosoma circular está unido a un punto de la membrana plasmática.
2. El cromosoma se duplica. Las dos copias están fijas a la membrana en
puntos cercanos.
3. La célula se alarga, se agrega nueva membrana plasmática entre los
puntos de unión.
4. La membrana plasmática crece hacia el interior.
5. La célula original se ha dividido en dos células hijas.

La imagen corresponde al corte transversal de una célula procariota durante la

fisión binaria en una etapa similar a la fase 4 descripta.

I.2. CINÉTICA DEL CRECIMIENTO EXPONENCIAL

Teniendo en cuenta que existe una relación entre el número inicial de células y el
número de células tras un período de tiempo de crecimiento exponencial (puesto
que una célula da origen a dos y esas dos se van a dividir en 4 células y así
sucesivamente), existe una expresión matemática que resume esa relación:

N t =2n × N i

En donde:

N i: Número de células en el tiempo inicial

N t : Número de células en el tempo final

n: Número de generaciones

El tiempo de generación (g) puede ser calculado a través de la siguiente

fórmula: g = t/n, en donde t representa el tiempo de crecimiento transcurrido.
Existen otras expresiones relacionadas con el crecimiento exponencial que
también pueden ser determinadas, mientras que sea conocido el tiempo de
crecimiento transcurrido y el número de generaciones: µ define la tasa específica
de crecimiento y k designa la tasa de crecimiento (número de generaciones por
unidad de tiempo).[ CITATION Kno18 \l 10250 ]
 I.3. CICLO DE CRECIMIENTO BACTERIANO
El crecimiento de un cultivo bacteriano puede ocurrir en un sistema cerrado o en
un sistema abierto. En el primero no ocurre renovación de los nutrientes y las
sustancias tóxicas se acumulan en el medio, al contrario de lo que sucede en un
sistema abierto. Un ciclo de crecimiento en un sistema cerrado presenta 6 fases
diferentes.

I.3.1. Curva de crecimiento

Construir una curva de crecimiento para determinado cultivo bacteriano consiste
en inocular un medio líquido con una pequeña cantidad de bacterias que
provengan de un medio donde han desarrollado hasta saturación, y determinar el
número de bacterias viables (sembrando en placas o midiendo el crecimiento por
turbidimetría) a intervalos regulares de tiempo. Luego se gráfica el logaritmo del
número de células viables (Y) en el tiempo (X), obteniendo una curva que
podemos dividir en seis fases:

Gráfico 1. Curva de crecimiento

 Tabla 1. Fases del crecimiento bacteriano

Fuente: http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/microgeneral/wp-content/uploads/2017/02/04-CULTIVO-
DE BACTERIAS.pdf

En un cultivo en sistema continuo (o abierto) ocurre la renovación constante de

nutrientes y la eliminación de productos del metabolismo. La entrada del nuevo
medio se da una tasa igual a la salida de medio de cultivo usado con
microorganismos. Este tipo de cultivo es habitualmente realizado en un
quimiostato en el cual la densidad celular y la tasa de crecimiento pueden ser
controladas, a través de la tasa de disolución (que corresponde a la tasa de salida
del medio del cultivo y de entrada del nuevo medio) o de la restricción de un
nutriente esencial.[ CITATION Kno18 \l 10250 ]

I.4. DETERMINACIÓN DEL CRECIMIENTO BACTERIANO

El crecimiento de bacterias puede ser calculado a través de la contabilización del
número de células o de componentes celulares, como el peso seco. La
determinación del crecimiento envuelve generalmente dos características
celulares: el número de células y la turbidez.

I.4.1. Métodos microscópicos 

Incluyen el conteo de células presentes en el cultivo o en una muestra a través del
microscopio o de la citometría del flujo. Constituyen una forma simple y rápida,
pero con numerosas limitaciones, tales como la necesidad de colorar las células
viables y no viables, dificultad en visualizar células pequeñas, poca precisión,
dificultad en visualizar células de cultivos con baja densidad, necesidad de
inmovilizar células móviles, fragmentos presentes en la muestra pueden ser
confundidos con células.

I.5. FACTORES QUE AFECTAN EL CRECIMIENTO MICROBIANO

Existen también condiciones ambientales que influyen en el crecimiento, tales
como:

 Solutos y actividad del agua: La presencia de solutos en el ambiente

externo afecta a la disponibilidad del agua para los microorganismos. Sin
embargo, existen organismos adaptados a condiciones de menor
disponibilidad de agua como los que viven en ambientes marinos o aquellos
que sintetizan solutos compatibles;
 pH: a pesar de que existen organismos que crecen en ambientes ácidos,
neutros y básicos, alteraciones en este parámetro acarrean consecuencias
para el crecimiento celular;
 Temperatura: Tanto temperaturas altas como temperaturas bajas pueden
interrumpir el crecimiento bacteriano e incluso causar muerte celular. La
tolerancia a alteraciones de temperatura depende de un organismo a otro;
 Concentración de oxígeno: El oxígeno no es un factor esencial para el
crecimiento bacteriano, puesto que existen microorganismos que pueden
vivir en ambientes anaerobios y otros que apenas crecen en esas
condiciones, así como especies que apenas sobreviven en ambientes
aerobios;
 Presión: Puede afectar a la estructura de las proteínas, causar alteraciones
en la membrana celular o en la estructura del citoesqueleto. Sin embargo,
existen igualmente organismos adaptados a ambientes con elevadas
presiones, como los que habitan el fondo de los océanos;
 Radiación: Interfiere con la cadena de ADN, llevando a la muerte celular. La
radiación UV es un método bastante eficaz de esterilización.
 I.6. MEDIOS DE CULTIVO
Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es
observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el
laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es
el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se
han preparado más de 10.000 medios de cultivo diferentes.[ CITATION Van09 \l
10250 ].

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial

debe reunir una serie de condiciones como son:

 Temperatura

 grado de humedad

 presión de oxígeno adecuadas

 así como un grado correcto de acidez o alcalinidad.

Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento

necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante. La mayoría
de las bacterias patógenas requieren nutrientes complejos similares en
composición a los líquidos orgánicos del cuerpo humano. Por eso, la base de
muchos medios de cultivo es una infusión de extractos de carne y Peptona a la
que se añadirán otros ingredientes como:

Agar: El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparación de

medios de cultivo. Se licúa completamente a la temperatura del agua hirviendo y
se solidifica al enfriarse a 40 grados. Con mínimas excepciones no tiene efecto
sobre el crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en
él.

La Gelatina es otro agente solidificante, pero se emplea mucho menos ya que

bastantes bacterias provocan su licuación. [ CITATION Van09 \l 10250 ].
En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de
enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los
hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para
incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentación
de los microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa
se añaden para promover el crecimiento de los microorganismos menos
resistentes.

I.6.1. Condiciones generales para el cultivo de microorganismos

Según Murgueytio (2014), el desarrollo adecuado de los microorganismos en un
medio de cultivo se ve afectado por una serie de factores de gran importancia y
que, en algunos casos, son ajenos por completo al propio medio.

1. Disponibilidad de nutrientes adecuados

Un medio de cultivo adecuado para la investigación microbiológica ha de
contener, como mínimo, carbono, nitrógeno, azufre, fósforo y sales
inorgánicas. En muchos casos serán necesarias ciertas vitaminas y otras
sustancias inductoras del crecimiento.
2. Consistencia adecuada del medio
Partiendo de un medio líquido podemos modificar su consistencia
añadiendo productos como albúmina, gelatina o agar, con lo que
obtendríamos medios en estado semisólido o sólido. Los medios
solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos
microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas
inferiores al punto de fusión de este solidificante y de que otros tienen la
capacidad de licuarla.
3. Presencia (o ausencia) de oxígeno y otros gases
Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmósfera con tensión de
oxígeno normal. Algunas pueden obtener el oxígeno directamente de
variados sustratos. Pero los microorganismos anaerobios estrictos sólo se
desarrollarán adecuadamente en una atmósfera sin oxígeno ambiental.
4. Condiciones adecuadas de humedad
 Un nivel mínimo de humedad, tanto en el medio como en la atmósfera, es
imprescindible para un buen desarrollo de las células vegetativas
microbianas en los cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas
condiciones mínimas en las estufas de cultivo a 35-37ºC proporcionando
una fuente adecuada de agua que mantenga la humedad necesaria para el
crecimiento de los cultivos y evitar así que se deseque el medio.
5. Luz ambiental
La mayoría de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad
que en presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sería el
caso de los microorganismos fotosintéticos.
6. PH
La concentración de iones hidrógeno es muy importante para el crecimiento
de los microorganismos. La mayoría de ellos se desarrollan mejor en
medios con un pH neutro, aunque los hay que requieren medios más o
menos ácidos. No se debe olvidar que la presencia de ácidos o bases en
cantidades que no impiden el crecimiento bacteriano pueden sin embargo
inhibirlo o incluso alterar sus procesos metabólicos normales.
7. Temperatura
Los microorganismos mesófilos crecen de forma óptima a temperaturas
entre 15 y 43ºC. Otros como los psicrófilos crecen a 0ºC y los termófilos a
80ºC o incluso a temperaturas superiores (hipertemófilos). En líneas
generales, los patógenos humanos crecen en rangos de temperatura
mucho más cortos, alrededor de 37ºC, y los saprofitos tienen rangos más
amplios.
8. Esterilidad del medio
Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estériles para
evitar la aparición de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o
incluso impedir el crecimiento microbiano normal del o de los especímenes
inoculados en dichos medios. El sistema clásico para esterilizar los medios
de cultivo es la autoclave (que utiliza vapor de agua a presión como agente
esterilizante).
 I.7. CULTIVO DE BACTERIAS
Para la elección del medio de cultivo y condiciones de incubación, debemos tener
en cuenta las siguientes características de las bacterias:

a. Si son aerobias, anaerobias o microaerófilos.

b. Si son autotróficas o heterotróficas.
c. Si son heterótrofas, considerar si son exigentes o no.
d. Si son psicrófilos, mesófilas o termófilas.
e. Si tienen algún otro requerimiento específico.

I.7.1. Clasificación:
Según su consistencia:

 Sólidos (contienen del 1 al 2% de agar).

 ü Semisólidos (contienen del 0,3 al 0,7% de agar).
 ü Líquidos (sin agregado de agar).

Según su composición química:

 Sintéticos o químicamente definidos: Son los que provienen de mezclas de

productos
 naturales y que su composición es perfectamente conocida.
 Naturales o semisintéticos: Son los que contienen extractos o infusiones de
productos naturales y que su composición química no está perfectamente
conocida.

Según su utilidad:

 Medios Nutritivos: Son medios simples que contienen los nutrientes básicos
para permitir el crecimiento de muchas bacterias heterótrofas.
 Medios enriquecidos: La adición de componentes como sangre, suero,
vitaminas, amino ácidos u otros componentes ricos en campus orgánicos
provenientes de animales o plantas, al caldo o agar nutritivo, les
proporciona sustancias nutritivas complementarias que permiten el cultivo
de organismos heterótrofos exigentes.
  Medios selectivos: Añadiendo al agar nutritivo ciertos productos especiales,
puede impedirse el desarrollo de algunos grupos bacterianos sin inhibir
otros.
 Medios diferenciales: La adición de ciertas sustancias químicas a los
medios de cultivo trae como resultado determinado tipo de crecimiento
bacteriano o cambios, permitiendo diferenciar distintos tipos de bacterias.
 Medios diferenciales: La adición de ciertas sustancias químicas a los
medios de cultivo trae como resultado determinado tipo de crecimiento
bacteriano o cambios, permitiendo diferenciar distintos tipos de bacterias.

I.8. MORFOLOGÍA COLONIAL BACTERIANA

Según Ayón (2013), las colonias son masas visibles de células que se forman por
división de una o varias células. El desarrollo de colonias sobre superficies de agar
permite al observador identificar las bacterias porque las especies forman a
menudo colonias con una forma y aspecto característico.

El tamaño, forma, textura y color de una colonia es propio de cada organismo. La

morfología de la colonia de una bacteria puede variar según el medio en que
crezca la bacteria.

Ilustración 2. Morfología de las colonias