UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA

QUÍMICA FARMACÉUTICO BIOLÓGICA

Laboratorio de Evaluación de Fármacos y Medicamentos I

Bioensayo de toxicidad en Artemia salina L

Grupo 2602/Equipo 9

Karen Giselle Delgado Hernández

Marco Daniel Islas Pérez
Alfonso López Arteaga
Fernando Daniel Luna Martínez
Oscar Ramírez Martínez
 OBJETIVO

Determinar la toxicidad de diferentes

sustancias mediante el cálculo de su
potencia en un bioensayo en
Artemia salina L.
¿Qué es un bioensayo?
Un bioensayo de toxicidad es una herramienta fundamental en
ecotoxicología, un campo de la farmacología, que combina las técnicas
ecológicas y la química para determinar los efectos de que una
sustancia puede tener en un organismo.

Los bioensayos de toxicidad involucra la exposición de organismos a

una serie de diferentes concentraciones de la sustancia y determinando
la respuesta del organismo. La respuesta del organismo usualmente
depende de la especie y el tipo de prueba, y puede incluir una reducción
del crecimiento o supervivencia.
CL50 y DL50
DOSIS LETAL MEDIA: CONCENTRACIÓN LETAL
Dosis individual de una MEDIA: es la concentración que
sustancia que puede causa la muerte de la mitad de
provocar la muerte del la población expuesta al tóxico
50% de la población
animal debido a la
exposición a la sustancia
por cualquier vía excepto
la inhalación.
Artemia Salina L.
● Crustáceo perteneciente a la Subclase Branchiopoda.
● Orden: Anostraca.
● Cuerpo: delgado, alargado y está cubierto por un caparazón blando.
○ Cabeza
○ Tórax
○ Abdomen
● Su longitud y aspecto:
● Tamaño: oscila entre 7 y 12 mm de longitud.
● Capacidad de adaptación y tolerancia a diversas situaciones.
○ Aguas salinas
○ amplio rango térmico
Artemia Salina L.
❖ Crustáceo perteneciente a la Subclase Branchiopoda
❖ Son camarones minúsculos de cuerpo blando, de color
carmelito y transparentes a la luz.
❖ Estas especies se encuentran distribuidas en todo el mundo
en aguas de elevada salinidad, pueden crecer a
temperaturas entre 6 y 35ºC.
❖ Se alimentan de algas y bacterias y son fuente de alimento
para peces, pájaros y varios invertebrados.
❖ Cuerpo: delgado, alargado y está cubierto por un caparazón
blando. (Cabeza, tórax, abdomen).
Aplicaciones Artemia salina L.
➔ Programas de descubrimiento y desarrollo de
nuevos plaguicidas y medicamentos de origen
natural.
➔ Sustitución de animales superiores en la
evaluación de extractos vegetales para el
descubrimiento de compuestos con actividad
antitumoral y citotóxica.
➔ Es un indicador de la toxicidad frente a plagas de
insectos.
➔ Resultó preponderante en el descubrimiento de
una nueva clase de compuestos conocidos como
acetogeninas, reconocidas por sus efectos
biológicos diversos.
Selección de los organismos de prueba.

1) El organismo debe ser representativo de un grupo ecológico importante.

2) El organismo ocupa una posición dentro de una trama trófica
precedente al hombre o alguna otra especie de importancia.
3) Amplia disponibilidad, accesible para pruebas de laboratorio, de fácil
mantenimiento o de poblaciones genéticamente estables.
4) Amplio conocimiento de la fisiología, genética, taxonomía y ecología del
organismo.
Organismo usados en bioensayos
a) Bacteria: Photobacterium.
b) Algas: Selenastrum, Chlorella.
c) Plantas: varias plantas que se
cultivan (terrestres), Chichicastle
(acuáticas).
d) Insectos terrestres: cucarachas,
moscas, ácaros
e) Acuáticos:
● Oligoquetos benticos.
● Moluscos.
● Zooplancton: Daphnia, Ceriodaphnia.
● Larvas de insectos (Chironomidos, mosquitos).
● Crustáceos (Artemia Salina L, camarones, anfípodos, langostinos)
f) Vertebrados:
● Terrestres: Mamíferos (rata, conejo, conejillo de indias, hamster; mink,
hurón).
● Aves: Pollo, faisán, codorniz.
● Acuáticos: peces pequeños.
Campos de aplicación de las pruebas de
toxicidad
Las pruebas de toxicidad son útiles para determinar:
● Factores favorables y desfavorables del ambiente (O.D., T°C, pH, etc).
● Efectos de los factores ambientales sobre la toxicidad de
contaminantes.
● Toxicidad de los contaminantes sobre una determinada especie.
● Sensibilidad de los organismos acuáticos.
● Magnitud que ha de tener el tratamiento de los desechos para no
causar efectos negativos sobre los organismos.
● Efectividad de estos métodos de tratamiento.
● Concordancia entre las normas de calidad de agua y los permisos de
descarga.
● Las pruebas de toxicidad aguda tienen cierto poder predictivo (a través
de un factor de aproximación):
○ 0.01 toxicidad ambiental.
○ 0.001 toxicidad humana.
○ 1x10-6 cancer.
● Las CL50 son interpretables desde el punto de vista legal.
Ventajas de su uso
❖ No hay necesidad de mantener una colonia viva de
forma permanente
❖ Se dispone siempre de un número suficiente de
individuos de la misma edad y condiciones fisiologicas
❖ Económico
❖ Amplia distribución e importancia comercial
❖ Alta disponibilidad
Prueba Screening
Consiste en identificar en la
población general a personas
afectadas por una enfermedad o
anomalía que hasta entonces
pasaba desapercibida mediante
test diagnósticos, exámenes u otras
técnicas de aplicación rápida
Características
● La enfermedad debe suponer un importante problema
de salud, con una evolución conocida y bien definida.
● La prueba debe ser sencilla, segura y aceptada tanto
por los pacientes como por los profesionales sanitarios
que la llevarán a cabo.
● Debe presentar una buena relación coste-efectividad,
resultando el balance entre el riesgo y el beneficio
positivo.
Ventajas y Desventajas
★ El incremento de las posibilidades de ★ Posibilidad de que se produzcan
tanto falsos positivos como falsos
éxito en la administración de un
negativos.
tratamiento
★ Pueden producirse efectos
★ La disminución de las complicaciones secundarios
★ La disminución de la mortalidad en
determinadas patologías
★ La disminución de la morbilidad
Organismos utilizados para Screening
●

○
○
○
○
○
○
○
Clasificación
★ cualitativos: ofrecen información sobre si una sustancia
se encuentra en una muestra o no.
★ cuantitativos: ofrecen información sobre la
concentración de una sustancia en una muestra.
★ semicuantitativos: ofrecen una cuantificación de un
compuesto de manera no numérica, por ejemplo:
positivo (++), posible positivo (+), posible negativo (-),
negativo (–).
Ejemplos
★ Test de embarazo

★ Tiras reactivas para

TSOH: test de
sangre oculta en
heces
 MATERIAL, REACTIVOS Y EQUIPO
Material Reactivos Instrumentos y equipo
✔ Huevecillos liofilizados ✔ Agua de mar artificial ✔ Termómetro para pecera
de Artemia salina L ✔ Anticloro (tiosulfato de ✔ Balanza analítica
✔ Pecera de vidrio sodio al 1 %) ✔ Aireador con manguera y
capacidad 2 L ✔ Disolución de cloruro de filtro
✔ 10 Tubos de ensaye mercurio (II) al 1%
✔ Pipetas de vidrio ✔ Disolución de sulfato de
✔ Jeringas de 1 mL plata al 1%
✔ Foco sumergible de 5 W ✔ Disolución de nicotina al
✔ Pecera de 500 mL 1%
✔ Matraz Erlenmeyer de 1 ✔ Disolución de acetato de
L plomo al 1%
✔ Vasos de precipitados de ✔ Disolución de tiocianato
100, 500 mL de potasio al 1%
✔ 5 Pipetas Pasteur con ✔ Disolución de dicromato
bulbo de potasio al 1%.
✔ Gradilla
PROCEDIMIENTO
Cloruro de mercurio II
Sulfato de plata
Nicotina
Dicromato de potasio
Tiocianato de potasio
 Etanol
El etanol puede afectar al sistema nervioso central, provocando
estados de euforia, desinhibición, mareos, somnolencia, confusión,
ilusiones (como ver doble o que todo se mueve de forma
espontánea). Actúa sobre los receptores ácido γ-aminobutírico de
tipo A (GABAa) como modulador alostérico positivo aumentando el
flujo de iones transmembrana lo que induce a un estado de
inhibición neuroquímica (efecto ralentizador).
Cálculo de DL 50
Análisis PROBIT
●
●
●

●
Ejemplo
Farmaco: Cloruro de Mercurio (II), Sulfato de plata
Dosis (mg/kg) Numero de Numero de Probabilidad %E=p*100
individuos indivudios P=r/n
(n) muertos (r)
0.0702 6 1 0.16 16
0.0948 6 2 0.33 33
0.1547 6 3 0.5 50
0.1764 6 4 0.66 66
0.1907 6 5 0.83 83
0.222 6 6 1 100
InCo %E
-2.657 16
-2.356 33
-1.866 50
-1.735 66
-1.657 83
-1.505 100
InCo Unidad PROBIT
-2.657 4.01
-2.356 4.56
-1.866 5
-1.735 5.41
-1.657 5.95
-1.505 8.09
Cálculo DL50
RESULTADOS
 Referencias
●