Informe – Laboratorio de Análisis Químico Instrumental

TALLER-INFORME Cromatografía
SANDRA LILIANA MOLINA CORREA
Universidad de La Sabana

1. De acuerdo al enunciado determinar los parámetros cromatográficos posibles a partir de los datos suministrados.

2. Se separan 2 compuestos por cromatografía de gases, el valor de to es de 2 min. Para un valor de k’2=16 y α=1.03,
calcular el valor de N para obtener Rs=1.5. Calcular para este mismo cromatograma: tr2, k’1, tr1. Colocar en la
escala de tiempo del cromatograma los valores correctos

3. La determinación de cafeína y ácido acetilsalicílico en cafiaspirina, se lleva a cabo por medio de cromatografía
usando como fase estacionaria una columna de RP-18 y la fase móvil una mezcla metanol: agua 70:30. Se
realizaron las mediciones de patrones de diferentes concentraciones de ambos componentes de forma separada
y se determinó el área bajo la curva. Adicionalmente una tableta de cafiaspirina fue disuelta en una mezcla de
100 mL de metanol:agua 70:30. Para el análisis de la muestra problema y de las mezclas patrón se tomó 10
microlitos de las soluciones (Los datos del área bajo la curva de las soluciones patrón y problema se encuentran
en la carpeta denominada problema 1). Determinar la cantidad de cafeína y ácido acetilsalicílico presente en la
pastilla, y comparar el resultado obtenido con el indicado por el fabricante.

4. El tequila comercial “Herradura”, indica que el contenido de etanol en este licor es del 40%. El análisis se llevó a
cabo por cromatografía de gases a 70°C y se realizaron corridas a diferentes concentraciones de etanol (2, 4, 6, 8,
10%v/v) usando acetona como patrón interno a una concentración constante del 6%v/v (la separación en
cromatografía de gases se realiza de acuerdo a los puntos de ebullición de los componentes, el de menor punto
de ebullición en salir de la columna hacia el detector). La medición de cada concentración se hizo por triplicado y
los cromatogramas obtenidos se observan en el archivo: problema 2.
Se tomó una alícuota de 1,5 mL del tequila y se llevaron a 10 mL, teniendo en cuenta la cantidad de acetona
necesaria para que en la solución quedará de una concentración del 6%. Las medidas tomadas de la muestra
problema se resumen en la siguiente tabla:
 N° replica Área Acetona Área de Etanol
1 250005 300005
2 213666 288804
3 230556 294464

Determinar el porcentaje de etanol y comparar con el valor indicado por el fabricante

5. El contenido en etanol de una cerveza comercial se determinó usando cromatografía de gases y 1-propanol como
patrón interno. Para ello se utilizó el siguiente procedimiento: a cada uno de una serie de seis matraces aforados
de 100.0 ml se añadió 3.00 ml de 1-propanol. A cinco de dichos matraces se les añadió, respectivamente 1.00,
2.00, 3.00, 4.00 y 5.00 ml de etanol puro, llevándose la solución a 100.0 ml con agua destilada. El propanol del
último matraz se le añadió una alícuota de 80 mL de cerveza y se completó a volumen con agua destilada.Las seis
disoluciones fueron analizadas, midiéndose las áreas de los correspondientes picos cromatográficos. Calcular el
porcentaje en volumen de alcohol en la muestra de cerveza.

Volumen etanol (mL) Área del pico de etanol (u2) Área del pico de 1-propanol (u2)
1,00 1500 4685
2,00 2817 4410
3,00 4715 4900
4,00 6020 4700
5,00 7000 4350
Muestra 5516 4500

6. A continuación, se muestra un cromatograma obtenido en la separación de cinco sustancias (A, B, C, D, E) usando

la técnica de HPLC en fase reversa. De acuerdo con lo anterior, organice las moléculas de la más polar a la menos
polar.

7. El siguiente cromatograma corresponde a: y la columna es d

a) Cromatografía de intercambio iónico/resina aniónica
b) Cromatografía de intercambio iónico/resina catiónica
c) Cromatografía de exclusión por tamaño/ sephadex
d) Cromatografía de adsorción/ silica

8. El siguiente cromatograma fue obtenido en una columna capilar polar de 30 m de longitud. Con base en esta
información diga EN ESTE MISMO ORDEN, tipo de cromatografía, compuesto más polar y compuesto menos polar.

a) Cromatografía de gases/etanol/hexanol
b) Cromatografía Líquida/ etanol/hexanol
c) Cromatografía de gases /hexanol/etanol
d) Cromatografía líquida/hexanol/etanol

9. Una cromatografía en capa fina se lleva a cabo en una placa de silicagel en un eluyente de polaridad contraria a la
polaridad de la fase estacionaria. Sí los componentes de la muestra A, B, C, D tienen la siguiente relación de
polaridad: C < A< D < B, ordene los componentes de la muestra según el orden creciente de los Rf

10. ¿En qué tipo de cromatografía líquida la separación depende de las interacciones entre el soluto, la fase móvil y
la fase estacionaria líquida inmovilizada?

a) Adsorción
b) Partición o reparto
c) Intercambio iónico
d) Exclusion por tamaño

11. En cromatografía de gases:

a) Únicamente los inyectores pueden alcanzar temperaturas superiores a 300o C

b) Solo las columnas pueden alcanzar temperaturas superiores a 300o C
c) Los inyectores y las columnas pueden trabajar a temperaturas superiores a 300 oC
d) Los inyectores trabajan a temperatura ambiente

12. En el estudio de la composición de los pigmentos apolares de una muestra vegetal se realizó una extracción con
éter de petróleo y posteriormente un estudio en cromatografía en capa delgada (CCD) usando como fase
estacionaria silica gel y como fase móvil hexano-acetona 9:1 obteniendo el siguiente resultado (ver figura). ¿Cuál
de las siguientes afirmaciones es verdadera respecto a la CCD de los pigmentos?

a) Las clorofilas b y a son más polares que las xantofilas y los carotenos, presentan mayor afinidad con la fase
estacionaria y por lo tanto bajos índices de retención
b) Los carotenos presentan menor polaridad y son desplazados rápidamente por la fase móvil, evidenciando
bajos índices de retención.
 c) Las clorofilas b y a son más polares que las xantofilas y los carotenos, presentan baja afinidad con la fase
estacionaria y altos índices de retención
d) Los carotenos poseen mayor polaridad por lo tanto tienen alta afinidad con la fase móvil e índices de
retención altos

13. En el estudio de la composición de los pigmentos polares (antocianinas) de las cascaras de uvas isabellas, se obtuvo
un extracto etanólico y este fue analizado por cromatografía líquida de alta eficiencia (HPLC). Se empleó una fase
reversa (C-18) y una fase móvil polar (acetonitrilo-agua). Obteniendo el siguiente cromatograma. De acuerdo a los
resultados es válido afirmar que:

a) En la cromatografía de fase reversa el tiempo de retención es mayor para las moléculas de naturaleza apolar, por
lo tanto, la quercetina es el componente de mayor polaridad en la muestra
b) En la cromatografía de fase reversa el tiempo de retención es mayor para las moléculas de naturaleza apolar, por
lo tanto, la apigenina es un pigmento altamente polar
c) En la cromatografía de fase reversa el tiempo de retención es menor para las moléculas de naturaleza polar, por
lo tanto, la quercetina es el componente de mayor polaridad en las uvas
d) En la cromatografía de fase reversa el tiempo de retención es menor para las moléculas de naturaleza polar, por
lo tanto, la apigenina es el pigmento de menor polaridad en las uvas

14. Características importantes de una cromatografía en fase reversa son:

a) La fase estacionaria es hidrófoba, los componentes de la muestra son polares, la fase móvil es hidrófila.
b) La fase estacionaria es polar, los componentes de la muestra son de baja polaridad, la fase móvil es apolar
c) La fase estacionaria es apolar, los componentes de la muestra son polares, la fase móvil es polar, es una
cromatografía de gases
d) La fase estacionaria es hidrófila, los componentes de la muestra son de baja polaridad, la fase móvil es
hidrófoba, es una cromatografía HPLC

15. En cromatografía líquida HPLC normalmente se usan:

a) Gases a alta presión
b) Una mezcla de agua y disolventes orgánicos como fase móvil
c) Columnas capilares de 30 m
d) Columnas capilares de 90 cm
16. Una mezcla de fenil metil cetona A, nitrobenceno B, metil benceno C y benceno D se separa en una columna C18
con una fase móvil metanol: agua 60:40. En estas condiciones la cetona A eluye primero.

¿Cuál es el orden de elución de los otros solutos?

17. Disponemos de microesferas de polietileno con grupos sulfónico unidos covalentemente. ¿Para qué tipo de
cromatografía podremos utilizarlas como fase estacionaria?
a) De exclusión
b) De intercambio aniónico
c) De intercambio catiónico
d) De reparto

18. Una de las aplicaciones frecuentes de la cromatografía de exclusión molecular es la determinación de la masa
molecular de proteínas globulares. Para ello es preciso disponer de proteínas patrón de masa conocida.
Tras un proceso de purificación que partió de un extracto celular, el cromatograma de exclusión obtenido con la
muestra resultante indicó la presencia de dos proteínas diferentes. Calculo cuál es su masa molecular o el rango,
a partir de los datos de volumen de elución obtenidos con la mezcla de proteínas patrón que fueron sometidas a
las mismas condiciones de cromatografía que la muestra problema.