Eur J Trauma Emerg Surg DOI 10,1007

/ ARTIGO ORIGINAL

s00068-017-0767-9

Redução da força de centrifugação relativa dentro injectável plaquetas ricos em fibrina

(PRF) concentra próprias células inflamatórias avanços dos pacientes, plaquetas e
factores de crescimento: a primeira introdução ao conceito de centrifugao a baixa
velocidade

J. Choukroun 1,2  · S. Ghanaati 2  

Recebidos: 26 de outubro de 2016 / Accepted: 23 de janeiro de 2017

© O autor (es) de 2017. Este artigo é publicado com acesso aberto na Springerlink.com

Abstrato
propósito O objectivo deste estudo foi analisar de forma sistemática a influência da
força de centrifugação relativa (RCF) em leucócitos, plaquetas e a libertação do
factor de crescimento dentro de matrizes de fibrina rico em plaquetas (PRF) de
fluido.
materiais e métodos Sistematicamente usando sangue periférico a partir de seis
voluntários saudáveis, o RCF foi reduzida quatro vezes para cada um dos três
protocolos experimentais (I-
III) dentro do espectro (710-44 g), mantendo ao mesmo tempo um tempo de
centrifugação constante. A citometria de fluxo foi aplicado para determinar as
plaquetas, o número de leucócitos. A concentração do factor de crescimento foi
quantificado 1 e 24 h após a coagulação por meio de ELISA.
Discussão Com base nos resultados, foi demonstrado que é possível enriquecer
matrizes fluidos baseados em PRF com leucócitos, plaquetas e factores de
crescimento por meio de uma alteração gle pecado das configurações de
centrifugação dentro da rotina clinica- cal.
conclusões Postulamos que o conceito de centrifugao a baixa velocidade chamado
(LSCC) enriquece selectivamente citos leuko-, plaquetas e factores de crescimento
dentro de matrizes à base de PRF de fluido. São necessários estudos adicionais para
avaliar o efeito do crescimento de células e factor de enriquecimento na cicatrização
de feridas e regeneração de tecidos ao comparar os concentrados de sangue obtidas
por alta e baixa RCF.

Resultados Reduzindo RCF, em conformidade com o protocolo-II (177 g) levado a um Palavras-chave Inflamação · Leucócitos · As plaquetas · fibrina rico em
plaquetas e citos leuko- significativamente mais elevados números em comparação plaquetas · A engenharia de tecidos · Dor · A centrifugação · A-PRF + ·
com o protocolo-I (710 g). Protocolo III (44 g) mostrou um aumento altamente I-PRF
significativo de leucócitos e plaquetas número, em comparação com -I e -II.
concentração de VEGF e TGF-β1 dos factores de crescimento foi significativamente abreviaturas
maior no protocolo de-II em comparação com -I, enquanto que o protocolo-III exibiu PRF Plaquetas ricas em fibrina LSCC Baixo conceito

significativamente maior concentração do factor de crescimento em comparação com centrifugação velocidade

os protocolos-I e -II. Estes achados foram observadas entre 1 e 24 h após a

coagulação, bem como a concentração do factor de crescimento acumulada ao longo
de 24 h. Introdução

Nos últimos anos, vários conceitos foram introduzidos para a engenharia de

tecidos clinicamente relevantes por meio de abordagens mally invasivos mini-.
* J. Choukroun Atualmente, els mo- bem aceite incluir a aplicação biomaterial pura [ 1 - 4 ] E a
joseph@a-prf.com combinação de biomateriais com aspirados de medula óssea autólogo [ 5 , 6 ] ou
* S. Ghanaati de osso morfogenética teínas pró recombinantes (BMPs) [ 7 , 8 ]. Apesar de ser
shahram.ghanaati@kgu.de menos invasivos do que o transplante autólogo de osso, as metodologias de

1 Privado Prática, Dor Therapy Center, Nice, França aspirado de medula óssea minimamente invasiva anteriormente mencionadas
ainda estão reservados apenas para cirurgiões experientes, dado que estes
2 Departamento de Oral, Cranio-maxilo-facial e Plástica Facial
métodos também podem ser associados a complicações tais como a dor,
Cirurgia, FORM (Frankfurt Orofacial Regenerative Medicine) Laboratory,
University Hospital Frankfurt Goethe University, Theodor-Stern-Kai 7, 60590
Frankfurt am Main, Alemanha

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Vol.:(0123456789)

infecção, e danos aos órgãos adjacentes durante a recuperação de medula
óssea. Além disso, a concentração óptima do factor de crescimento tem de ser
determinado para o uso das BMPs.
Para resolver esses problemas, concentrados a partir do sangue periférico foram
recentemente propostas como potenciais apoiantes em engenharia de tecidos
complexos. Neste contexto, vários sistemas de concentrado de sangue foram
introduzidas, tais como factores de crescimento ricas em plasma (PRGF) [ 9 ] E de
plasma rico em plaquetas (PRP) [ 10 ]. Ambos os sistemas exigem a adição de
anticoagulantes não-autólogos para gerar concentrados sanguíneos dos fluidos depois
de centrifugação [ 9 ]. Em adição aos anticoagulantes, multi-passo de centrifugação é
necessária para obter o PRP [ 11 ]. Além disso, PRGF e foco PRP sobre as vantagens
de plaquetas e os factores de crescimento libertados para a regeneração do tecido de
suporte em diferentes campos da medicina e destinam-se a eliminar os leucócitos a
partir de concentrados de sangue finais [ 12 ].
A introdução de plaquetas ricos em fibrina (PRF) em 2001 exemplificado o
primeiro passo para a geração de matrizes derivadas de PRF O sangue que não
exigem agentes antico- agulation adicionais [ 13 ]. A centrifugação dentro de
ligações de tubos à base de vidro específico para a activação da cascata de
coagulação fisiológico e, portanto, a formação de um coágulo de fibrina
enriquecido com células no sangue periférico ou seja, permite que placa- e
leucócitos.
Desenvolvimentos recentes em biologia celular e molecular e pesquisa
contínua aumentaram a compreensão dos processos de cicatrização e
regeneração. Assim, o papel crucial dos leucócitos e seus subgrupos como
protagonistas principais para modular as várias fases durante a cicatrização de
feridas tornou-se óbvio [ 14 ]. Além disso, as plaquetas, bem como a rede de
fibrina são conhecidos por desempenhar um papel importante no processo de
cicatrização de feridas [ 15 ]. Leucócitos participar na angiogênese e
lymphogenesis, enquanto que a fibrina trabalho NET- é um jogador-chave nos
estágios iniciais de cicatrização tornando seus efeitos sinérgicos com plaquetas
e ao da sua fun- como um reservatório de citocinas [ 16 - 18 ].
No entanto, para gerar PRF a aplicação de forças centrífugas elevadas
relativos (RCF) (708 g) durante o processo de ugation centrif- foi descrito como
essencial. Além disso, as análises histológicas anteriores do coágulo PRF
demonstraram que as plaquetas e células inflamatórias no interior da fibrina scaf-
dobrar acumulam principalmente na porção proximal do coágulo PRF [ 19 ].
Portanto, questionamos até que ponto ajustamento ing o RCF aplicada pode
influenciar a distribui- ção celular dentro da matriz PRF sólida, com o objetivo de
gerar protocolos de centrifugação cados modi- para aumentar a capacidade
regenerativa de matrizes à base de PRF. Desse modo, o ajuste fino do processo
de centrifugação, em termos de redução RCF e ligeiro aumento do tempo de
centrifugação resultou em uma PRF avançado com números de leucócitos,
granulócitos melhoradas pHILIC especialmente neutro-. Além disso, as plaquetas
e leucócitos dentro da PRF avançado foram uniformemente distribuída ao longo
de todo o coágulo em comparação com PRF [ 19 ].
13
J. Choukroun, S. Ghanaati
Com base nestes resultados, foi levantada a questão em que medida uma
redução sistemática RCF dentro de matrizes de PRF de fluido pode ter qualquer
influência sobre o aumento de placa- permite e leucócitos, assim como factores de
crescimento dentro dos concentrados de sangue obtidas.
Neste contexto, o presente estudo demonstra uma análise
sistemática da influência RCF em matrizes à base de PRF de fluido.
Com base na PRF introduzido pela primeira vez, que metade das
revoluções por minuto (rpm), que de acordo com o raio do
respectivo centrífuga (110 mm) levou a uma redu- ção do RCF por
quatro vezes em uma abordagem em etapas para examinar uma
ampla gama RCF (isto é, 710-44 g) incluindo o alto, médio e baixo
RCF, sistematicamente. Simulta- neamente, o tempo de
centrifugação foi mantida constante para excluir o seu impacto.
Para o melhor de nosso conhecimento, o presente estudo é o
primeiro a analisar o impacto RCF em centrates con- sangue
humano para determinar o número de leucócitos e de plaquetas,
bem como o potencial de liberação do fator de crescimento dentro
de matrizes baseadas PRF-. O objectivo do estudo foi o de
determinar em que medida uma redução controlada do RCF,
Materiais e Métodos protocolos sistemáticos de matrizes
à base de PRF
Para avaliar o espectro de alta, média e baixa-RCF, três protocolos experimentais
diferentes de centrifugação para as séries de análise sistemática foram
estabelecidos por decreas- ing o RCF dentro de uma vasta gama de (710-44 g) com
um tempo de centrifugação constan- con-. Com base na PRF (708 g), uma redução
de passo-sábio do número de rotações ao meio e, deste modo, uma redução do
RCF quatro vezes foram realizadas para cada protocolo como se segue: I:
710 g; 2400 rpm; 8 min II:
177 g; 1200 rpm; 8 min III:
44 g; 600 rpm; 8 min
preparação PRF
Para esta experiência, o sangue de seis voluntários saudáveis ​(três machos
e três fêmeas) foi coletado para cada um dos protocolos avaliados. Os tubos
foram colocados imediatamente na centrífuga e preparado de acordo com o
pré-riormente mencionados protocolos estabelecidos. A Duo centrífuga
(Processo de PRF, Nice, França) foi utilizado para realizar o procedimento
de centrifugação. A centrífuga tem um rotor de ângulo fixo com um raio de
110 mm. consentimento informado por escrito foi obtido de voluntários para
as suas amostras a ser
Redução da força de centrifugação relativa dentro injectável rico em plaquetas-fibrina (PRF) ...
utilizado na pesquisa. Todos os dadores eram livres de qualquer doença infecciosa
e não têm qualquer consumo anormal de otine NIC-ou álcool. Nenhum dos sujeitos
utilizados quaisquer drogas para anticoagulação.
Tubos para coleta de sangue
Para a finalidade destas experiências, tubos de plástico estéreis (Processo para a
PRF, Nice, França) com um volume de 10 ml foram usadas para gerar os
concentrados de sangue de fluido de acordo com os protocolos anteriormente
descritos. Este método foi utilizado porque uma matriz fluida foi necessário para
citometria de fluxo. O sangue foi colhido por meio de um método de recolha de
sangue clinicamente aprovado mas- terfly. A centrifugação para cada protocolo
iniciada após o último tubo deste grupo foi coletada ao longo de um tempo total de
2-3 minutos no máximo.
contagem de células automatizado
As matrizes de fluidos recolhidos de cada protocolo foram anti-coagulado usando
uma vacutainer BD com 4 ml de ácido diaminotetracético de etileno (EDTA). Este
anticoagulação foi realizada apenas para fins de pesquisa, como nenhuma medida
de contagem de células seria possível de outra maneira. As amostras foram ainda
analisadas com ADVIA ® LabCell ® Automation Solution (Siemens, França), um
laboratório médico (laboratório zur Laba-, Nice, França) para detectar o número de
citos leuko- e plaquetas por microlitro. Uma contagem de células automatizado foi
realizada por meio de citometria de fluxo. Este método permite uma análise de
múltiplos parâmetros do número de células sus- pended dentro de um líquido. A
suspensão de células passa através de um feixe de laser, em que uma célula por
unidade de tempo conduz a dispersão de laser em sentidos diferentes de acordo
com os tamanhos de célula e propriedades. A luz dispersa é detectada por um lado
e um sensor para a frente. A dispersão para a frente é aproximadamente
proporcional ao tamanho da célula, enquanto dispersão lateral é causado pelas
características celulares, tais como granularidade e complexidade estrutural [ 20 ].
Estes dados são automaticamente analisados ​para detectar mais o número total de
leucócitos e de plaquetas dentro da suspensão de células, ou seja, as matrizes de
PRF de fluido.
factor de crescimento quantificação com ELISA
Após centrifugação, a PRF líquido recolhido a partir de cada protocolo foi
transferido para uma placa de cultura celular. A placa foi colocada na incubadora
a 37 ° C grau até que todas as amostras formado um coágulo. Em seguida, de
Dulbecco Modified Eagle Médium (Biochrom GmbH, Berlim, Alemanha) foi
adicionado a todos os coágulos e adicionalmente incubadas em 37 graus C para
permitir a libertação do factor de crescimento. O sobrenadante (5 ml) foi recolhido
após 1 h e congelado. O tant superna- recolhido foi substituído por um meio
fresco de células e ainda mais incu- bated durante 24 h. No último ponto de
tempo, os sobrenadantes
foram coletados. As amostras recolhidas em ambos os pontos de tempo foram
analisados ​para o factor humano vascular epitelial crescimento (VEGF) e factor
de crescimento transformante humano (TGF-β1). quantificação das proteínas foi
realizada por meio de ELISA (DuoSet ® sistema RND ELISA) de acordo com as
instruções do fabri- cante. A densidade óptica foi determinada usando um leitor
de microplacas a 450 e 570 nm. Os dados medidos a 570 nm foram subtraídos
dos dados de medida a 450 nm para uma correcção de densidade óptica. As
medições foram realizadas em triplicado para cada protocolo e dador.
Finalmente, os dados quantitativos foram analisados ​estatisticamente.
A análise estatística
A análise estatística foi realizada utilizando Prism versão 6 (GraphPad
Software Inc., San Diego, La Jolla, EUA). Os dados são expressos como a
média e desvio padrão. A significância das diferenças entre os meios foram
analisados ​utilizando unidireccional e duas análises de variância (ANOVA)
com o teste de Tukey comparações múltiplas ( α  = 0,05). Desse modo, as
diferenças significativas foram marcadas como se significativa P os valores
foram inferiores a 0,05 (* P < 0,05) e signifi- altamente signi- se P os valores
foram inferiores a 0,01 (** P < 0,01), 0,001 (*** P < 0,001) ou 0.0001 (**** P < 0,0001).
Resultados Número total de
leucócitos
O número total de leucócitos foi analisada dentro dos protocolos PRF imental
exper-. Geralmente, a redução do RCF levou a um aumento detectável claramente
do número total de leucócitos dentro das matrizes à base de PRF. O primeiro
protocolo-I (710 g), que foi centrifugado com a maior RCF, mostrou o menor
número de leucócitos entre os três protocolos experimentais avaliadas. O segundo
protocolos I-II (177 g), usando um tempo de quatro mais lento do que o protocolo
RCF-I, mostrou um significantemente maior número de leucócitos em comparação
com o protocolo-I ( P < 0,001). Finalmente, o terceiro protocolo-III (44 g) com quatro
vezes menor do que RCF protocolo-II e 16 vezes menos do que RCF protocolo-I
revelou o maior número de leucócitos, que era estatisticamente altamente
significativo em comparação com o protocolo-I ( P < 0,0001) e protocolo-II ( P < 0,0001)
(Fig.  1 uma). O número total de leucócitos doador-relacionada mostrou Resultados
semelhantes em cada indivíduo. Todas as amostras analisadas apresentou a
mesma progressão da curva como uma observação frequente de um aumento do
número de leucócitos com reduzida RCF (Fig.  1 b).
Número total de plaquetas
O número total de plaquetas como resultado da contagem de células automatizado
mostrou uma tendência para o aumento total de
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A Fig. 1 um Número de leucócitos dentro das diferentes matrizes experimentais baseadas em PRF. b número
de leucócitos doador-relacionadas dentro das diferentes matrizes experimentais baseadas em PRF
plaquetas com número redução RCF dentro das matrizes à base de PRF. O
primeiro protocolo experimental-I (710 g) exhib- ited o menor número de plaquetas
em comparação com todos os outros grupos INED exem-. Olhando para o segundo
protocolo de II (177 g), um aumento significativo no número total de plaquetas foi
detectado em comparação com o protocolo-I ( P < 0,0001). Moreo- ver, uma
redução adicional RCF resultou no maior número placa- deixar total na protocolo-III
(44 g). A análise estatística mostrou números de plaquetas significativamente mais
elevados em protocol- III em comparação com o protocolo-II ( P < 0,0001) e
protocolo de I ( P < 0,0001) (Fig.  2 uma).
Os valores relacionados com o dador mostraram reacções muito semelhantes
à influência RCF exposto nas várias matrizes à base de PRF. A forma curva foi
reproduzido dentro das amostras de dadores individuais, mostrando um aumento
do número de plaquetas com RCF reduzida (Fig.  2 b).
concentração de VEGF
A concentração de VEGF foi quantificado 1 e 24 h após a coagulação. Em
ambos os pontos de tempo, observou-se uma tendência clara. A
concentração do factor de crescimento aumentada reduzindo o RCF aplicada.
Uma hora após a coagulação, a concentração de VEGF no protocolo-I, com o
mais alto RCF
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J. Choukroun, S. Ghanaati
Fig. 2 uma Número de plaquetas dentro das diferentes matrizes baseadas PRF- experimental. b número
de plaquetas doador-relacionada dentro das diferentes matrizes experimentais baseadas em PRF
apresentou a menor concentração em comparação com o RCF gama média e
baixos protocolos gama RCF. Ao mesmo ponto de tempo, o protocolo II, dentro do
intervalo médio de RCF, mostraram um aumento da concentração de VEGF.
Estes resultados foram altamente significativos em comparação com o protocolo-I
( P < 0,0001). Moreo- ver, protocolo de III com o menor aplicação RCF revelaram a
concentração mais elevada de VEGF. Estes dados foram altamente significativos
em comparação com o protocolo-I ( P < 0,0001) e proto-col-II ( P < 0,0001) (Fig.  3 uma).
Resultados semelhantes foram detectados 24 h após a coagulação. Neste ponto
de tempo, o protocolo-I apresentou a menor concentração de VEGF. Juntamente
com ção RCF redu-, a concentração de VEGF aumentou significativamente no
protocolo II. A análise estatística demonstrou um aumento altamente significativo
no protocolo-II em comparação com o protocolo-I ( P < 0,0001). Finalmente, o
protocolo-III, o qual foi preparado usando o menor RCF, apresentou a maior
concentração de VEGF que foi altamente significativa em comparação com o
protocolo-I ( P < 0,0001) e protocolo-II ( P < 0,0001) (Fig.  3 b). A concentração de
VEGF acumulada ao longo de 24 h foi calculado nos protocolos examinados. As
concentrações de VEGF libertado em todos os protocolos aumentou de 1 a 24 h.
Em 24 h, a concentração acumulada no protocolo I foi a mais baixa dentro dos
grupos testados. Protocolo-II mostrou um significativamente maior acumulado
VEGF concentra- ção em comparação com o protocolo-I ( P < 0,01). Além disso, o
Redução da força de centrifugação relativa dentro injectável rico em plaquetas-fibrina (PRF) ...
A Fig. 3-A concentração de VEGF dentro das matrizes à base de PRF diferente experimental 1 h
após a coagulação. b concentração de VEGF dentro das matrizes à base de PRF diferente
experimental 24 h após a coagulação. c
concentração de VEGF acumulado dentro das diferentes matrizes experimentais à base de mais
de 24 h PRF
concentração de VEGF acumulado no protocolo-III foi a mais elevada, a qual foi
altamente significativa em comparação com o protocolo-I ( P < 0,0001) e
protocolo-II ( P < 0,0001) (Fig.  3 c).
TGF-β1 concentração
A concentração do factor de crescimento por TGF-β1 humano foi medida 1 e 24 h
após a coagulação. A tendência geral foi observada em ambos os momentos. A
redução do RCF aplicada aumentou a concentração de factor de crescimento.
Olhando para os resultados de 1 h após a coagulação, o protocolo-I apresentou a
menor concentração de TGF-β1 entre todos os protocolos testados. Desse modo,
o protocolo-II, o qual foi preparado dentro da gama média RCF, revelou um
significativamente maior TGF-β1 concentra- ção quando comparada com o
protocolo-I ( P < 0,0001), que foi
A Fig. 4 um TGF beta-1 a concentração dentro da diferente experimentalmente matrizes baseadas
em PRF Tal 1 h após a coagulação. b TGF-β uma concentração dentro das matrizes à base de PRF
diferente experimental 24 h após a coagulação. c Acumulado TGF concentração β-1 dentro das
diferentes matrizes experimentais baseadas em PRF longo de 24 h
preparado dentro da gama alta RCF. Além disso, proto- col-III, que representa a
gama baixa RCF, apresentou a maior concentração de TGF-β1 entre os protocolos
analisados. Esta concentração foi altamente significativa em comparação com o
protocolo-I ( P < 0,0001) e protocolo-II ( P < 0,0001) (Fig.  4 uma). Vinte e quatro horas
após a coagulação, o TGF-β1 foi da detecção de poder em todos os protocolos. No
entanto, o protocolo-I apresentou a menor concentração em comparação com os
protocolos-II e -III. O primeiro passo para a redução RCF protocolo-II dentro do
intervalo médio de RCF revelaram um aumento muito significativo da concentração
de TGF-β1 em comparação com a gama alta RCF em I protocol- ( P < 0,0001). A
redução adicional RCF para a gama baixa RCF no protocolo-III alcançou o mais
alto TGF-β1 concen- tração entre todos os protocolos testados. Desse modo, este
aumento foi altamente significativo em comparação com o protocolo-I ( P < 0,0001)
e protocolo-II ( P < 0,0001) (Fig.  4 b).
13

A concentração de TGF-β1 acumulado aumentou de 1 a 24 h, em todos os
protocolos. No entanto, o protocolo-I apresentou a menor concentração de
TGF-β1 acumulados entre todos os protocolos testados. Considerando que no
protocolo II, o qual foi pré-pared dentro do intervalo médio de RCF, um nível de
TGF-β1 significativamente maior acumulada em comparação com o protocolo-I
foi observada. Finalmente, o protocolo-II, que representa a gama baixa RCF,
mostrou o TGF-β1 maior acumulado con- centração. Este valor foi
estatisticamente altamente significativa em comparação com os protocolos-I e II
(Fig.  4 c).
Discussão
O presente estudo analisou o número de plaquetas e de leucócitos total, bem como a
libertação do factor de crescimento dentro de matrizes de PRF de fluidos com
diferentes preparações de configurações. Para o melhor de nosso conhecimento,
este estudo é o primeiro a inves- tigate a influência de RCF no número de células e
crescimento liberação fator em matrizes de sangue humano baseada PRF fluidos.
Usando protocolos de centrifugação específico experimentais, que eram
modificações sistemáticas da PRF descrito pela primeira vez [ 13 ], Foram geradas
matrizes fluidos baseados em PRF com di- ferentes proporções de plaquetas e
leucócitos. Além disso, uma relação entre a redução do RCF e libertação de factor
de crescimento foi evidenciado. Os presentes dados fornecem uma nova visão sobre
o potencial do processo de centrifugação na geração de números totais de células
diferentes e níveis de factor de crescimento de libertao dentro do mesmo volume de
sangue apenas em relação com a quantidade de exposição a RCF específica.
Três protocolos experimentais foram estabelecidos com um tempo de
centrifugação constante para focar o impacto de RCF em vários intervalos,
incluindo alta, média e baixa. Adaptando o espectro de RCF (710-44 g) com base
no protocolo PRF descrito pela primeira vez [ 13 ], Uma redução sistemática do
RCF foi realizado por uma redução RCF quatro vezes para cada protocolo (I-III)
como uma consequência da gradual reduzir para metade o número de rotações
(rotações por minuto), porque o raio de centrifugação usado neste estudo foi de
110 mm.
contagem de células automatizado por meio de citometria de fluxo foi
realizada para determinar o número total de leucócitos e plaquetas. Os
resultados mostraram que a diminuição RCF até 16 vezes menos do que o
primeiro PRF descrito conduziu a um aumento significativo nos números de
leucócitos e plaquetas dentro dos ge- rado PRF-matrizes. O primeiro protocolo-I
(710 g) apresentou o menor número detectável de leucócitos e plaquetas entre
todas as amostras testadas. Interessantemente, a redução de RCF em
protocolo-II (177 g) resultou num número significativamente maior de leucócitos
e de plaquetas em comparação com o protocolo-I (710 g). Além disso, a
segunda redução RCF passo para protocolo-III (44 g) revelou um aumento
significativo do número de leucócitos e de plaquetas, com o total de alto valor
est em comparação com todos os outros grupos. Estes dados
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J. Choukroun, S. Ghanaati
enfatizar que as modificações de RCF contribuem para uma alteração claramente
significativo do número de leucócitos e de plaquetas para as faixas inferiores RCF
(177-44 g).
A centrifugação é uma técnica amplamente utilizada para separar uma
mistura biológica dentro de uma fase líquida. Os princípios desta técnica
baseiam-se na utilização da força centrífuga, que é muito maior do que a
gravidade. Durante a centrifugação, as forças diferentes interagir e
influenciar o movimento das partículas no interior do líquido, incluindo força
centrífuga, força gravitacional e a força de arrasto das partículas, isto é,
células. Este processo resulta na migração de partículas em função do seu
tamanho, densidade e massa [ 21 ]. Os presentes resultados sugerem que a
massa, tamanho e densidade gama de leucócitos e plaquetas requerem
uma RCF baixa, o que é suficiente para taxa de sepa--los a partir dos
componentes sanguíneos descanso enquanto não caus- ing agregação
para o fundo do tubo. No entanto, são necessários mais estudos para
demonstrar em que medida maior ou menor do que a intervalos de RCF
espec- tro actualmente investigada pode ter em quaisquer benefícios em
relação às células e acumulação de factores de crescimento no interior das
matrizes de PRF de fluido. Assim, a redução de RCF pode ser utilizado
como uma “ferramenta” que gener- comeram matrizes à base de PRF de
fluido enriquecido com leucócitos e plaquetas. Este fenômeno é de alta
relevância científica e clínica, 18 , 22 ]. Os leucócitos são também conhecidos
por estarem envolvidos na comunicação entre as células precursoras
mesenquimatosas e células no que respeita à formação de osso [ 23 - 26 ].
Por conseguinte, sem leucócitos, comunicação célula-célula sofisticado para
a regeneração dos tecidos não é possível. Além disso, as plaquetas são
conhecidos por conter factores de crescimento potentes (PDGFs) e factores
de crescimento derivados de plaquetas para a regeneração de tecidos, tais
como o factor de crescimento endotelial vascular (VEGF) e trans formação
do factor de crescimento beta (TGF-beta) [ 17 , 27 - 29 ], Que pode ser
libertado apenas após a agregação de plaquetas [ 30 , 31 ]. Além disso, as
plaquetas não são os únicos jogadores na regeneração de tecidos, eles
exigem leucócitos para um melhor desempenho na sua capacidade para a
regeneração de tecidos [ 32 - 34 ].
Além disso, o presente estudo demonstrou que a redução sistemática dos
resultados de RCF aplicada em uma clara tendência aumentada na
concentração do factor de crescimento. Assim, os factores de crescimento
VEGF e determinados de TGF-? 1 eram os mais baixos em protocolo de I, que
foi preparado dentro da gama alta RCF. No entanto, a redução RCF para a
gama média RCF conduziu a um aumento significativo de VEGF e TGF-β1
concentrações no protocolo II. Além disso, a redução RCF apresentou a maior
VEGF e TGF-β1 em proto- col-III, no espectro de baixa RCF. Esta observação
foi evidenciado em 1, 24 h, bem como para o factor de crescimento acumulada
ao longo de 24 h. Estas descobertas estão em correlação com os resultados
mostrados através do aumento do número de plaquetas e
Redução da força de centrifugação relativa dentro injectável rico em plaquetas-fibrina (PRF) ...
leucócitos. Neste contexto, o aumento da concentração do factor de crescimento
dentro das gamas de média e baixa RCF está provavelmente relacionada com o
aumento do número de plaquetas e leucócitos, como estas células são importantes
fontes de factores de crescimento. Além disso, pode ser que a aplicação de uma alta
RCF não somente resulta em um menor número de plaquetas e leucócitos, mas
também afecta a capacidade destas células para factores de crescimento libertação.
Por conseguinte, aumentando as concentrações do factor de crescimento dentro das
matrizes à base de PRF de fluido reflecte a melhoria da capacidade de regeneração
das matrizes à base de PRF de fluido como um factor de crescimento reservatório
autólogo. O VEGF é um dos mais moléculas de sinalização importantes para a
neoangiogénese, que é altamente necessárias durante a cicatrização de feridas [ 35 ].
Mais- mais, contribui TGF-p1 a regeneração do tecido tornando o recrutamento de
queratinócitos, especialmente na ferida fase inicial [cura 36 - 38 ].
Até à data, não há dados que mostram quantas leucócitos e plaquetas dentro
das matrizes à base de PRF são suficientes para ter a melhor condição fisiológica
possível ACORDO COM para o qual uma condição ideal para a cicatrização de
feridas ou uma base para um tecido mole bem sucedido e regeneração óssea
pode ser gerado. Os resultados do presente estudo destaque, no entanto, que a
redução de RCF pode ser uma ferramenta clínica aplicável, a fim de adaptar a
quantidade de leucócitos dentro dos concentrados de sangue derivadas de PRF
de acordo com a indicação necessário.
Com base nos dados presentes, segundo o qual a redução de RCF resultados
em PRF-matrizes enriquecidas com leucócitos e plaquetas e maior libertação de
factor de crescimento, que pos- tulated o chamado LSCC, que pode ser usado para
gerar matrizes à base de PRF de fluido enriquecido com células e proteínas
plasmáticas do sangue periférico como uma fonte para um autólogo a regeneração
do tecido inteligente em engenharia de tecidos complexos.
Num cenário clínico, existe uma necessidade de aumentar o potencial operatória
regen- de materiais substitutos de osso ou de membranas de bio-mem-. Isto pode ser
conseguido através da adição de sistemas de fluidos de engenharia de tecidos
autólogos. Por conseguinte, o apresentado tubos tic plas- e a redução RCF permitido
para a geração de um líquido à base de matrizes de PRF injectáveis ​(i-PRF), sem a
utilização de anticoagulantes. Esta i-PRF, preparado de acordo com o LSCC, é
altamente enriquecido com plaquetas, leucócitos e factores de crescimento, o que
poderia fornecer um AFE be- significativa para o processo de regeneração.
Recentemente, o nosso grupo demonstrou que a adição de apenas
monócitos isolados a partir de sangue periférico contribui para aumentar a
vascularização in vivo de materiais substitutos de osso sintético [ 39 ].
Consequentemente, olhando para PRF como um sistema complexo “fisiológica”,
que pode ser ge- rado por um um passo de centrifugação, presume-se que
neste sistema, monócitos e todas as outras substâncias e as células podem ser
enriquecido. Este poder do sistema, portanto, ser capaz de contribuir para uma
condição de cicatrização de feridas melhorada juntamente com vascularização
reforçada, mantendo-se dentro
seu nicho específico de célula. Estes dados sublinhado que as matrizes à base de
PRF de fluido, obtidos por RCF reduzida, pode ser usado para funcionalizar
biomateriais por meios de uma fonte autóloga, ou seja, concentrados de sangue
periférico para promover a regeneração de tecido.
Recente trabalho ex vivo do nosso grupo demonstrou que alerta o RCF
dentro de matrizes à base de PRF sólido avança a distribuição celular e
aumenta o número neu- trophilic granulócitos como um subgrupo leucócitos
dentro do coágulo PRF avançado [ 19 ]. No entanto, são necessários mais
estudos para demonstrar o papel de redução RCF no número de células e
libertação de factor de crescimento em matrizes baseadas PRF- sólidos.
A composição do sangue é específica e individualmente de acordo com o doador
em particular. Ainda assim, os valores relacionados com doadores dentro das
diferentes matrizes baseadas em PRF eram aproximadamente semelhante em todos
os grupos em relação à distribuição let placa- bem como os leucócitos. Estes
resultados indicam que, antes de tudo, matrizes à base de PRF são sistemas ducible
Repro- e individualmente aplicáveis ​independentemente das características dos
doadores. Em segundo lugar, os resultados também esta- ês a reprodutibilidade do
LSCC em várias amostras de sangue quando se comparam os seis doadores de
sangue diferentes.
Neste estudo, os dados demonstram que é possível aplicar o LSCC para o
enriquecimento de concentrados sanguíneos com plaquetas, leucócitos e factores
de crescimento. A combi- nação de leucócitos e plaquetas desempenha um papel
importante na regeneração dos tecidos [ 40 , 41 ]. Assim, a capacidade de controlar o
conteúdo da célula dentro de matrizes à base de PRF de fluidos derivados do
sangue alterando apenas as definições de centrifugação, tal como a rotação, isto é,
mudando a exposição a uma RCF específica, pode servir como um passo
importante ter pessoal-ized medicina para cell- engenharia de tecidos com base
clinicamente aplicável generalizada. Desse modo, utilizando RCF como uma
ferramenta para controlar o número de células incluídos poderia ser usada para
ajustar o protocolo de preparação para as necessidades específicas de cada
paciente de acordo com as indicações clínicas.
Com base na presente resultado, o LSCC ajuda a mostrar que o número de
vários componentes do sangue, responsáveis ​pela regeneração de tecido, isto
é, plaquetas, citos leuko- e factores de crescimento, podem ser enriquecidos
selectivamente através da aplicação de um sistema clinicamente aplicável
através de um único parâmetro dentro o processo de centrifugação. Con-
Sidering a complexidade de isolamento de células e de cultura em laboratórios
sob condições estéreis, o sistema PRF incorpora uma ferramenta relativamente
simples para influenciar o número destas células. Neste contexto, ainda mais
sistemático in vivo e clínicos estudos que avaliam o benefício deste sis- tema,
ou seja, aumentando a capacidade de regeneração autólogo, são necessárias
para avaliar a correlação entre a célula enriquecimento mento e a melhoria
potencial da regeneração de tecidos e cicatrização de feridas .
13

conclusões
No presente estudo, a libertação do factor de crescimento e o kocyte leu- e o
número total de plaquetas foram analisadas em rela- ção à variação
sistemática da exposição força centrifugação relativa (RCF) para a primeira
vez. Os presentes dados demonstraram que a redução do RCF de uma alta
gama para um espectro de baixa dentro autólogas matrizes à base de PRF
conduz a um aumento significativo do número de leucócitos e de plaquetas,
bem como a concentração do factor de crescimento (VEGF e TGF-β1). Com
base nestes resultados, nós postulamos o conceito de centrifugao a baixa
velocidade (LSCC) aumenta o potencial de regeneração de matrizes à base
de PRF de fluido. Em consequência, a redução da RCF pela aplicação de
LSCC abre novos caminhos para a PRF-matrizes avançadas, em que a
comunicação célula-célula entre plaquetas e leucócitos e que destas células
dentro do tecido destinatário pode resultar na melhoria da cura de feridas e
regeneração de tecidos melhorado. Assim, novos estudos pré-clínicos e
clínicos são necessários para avaliar este conceito para optimizar os
benefícios clínicos.
Agradecimentos Os autores gostariam de agradecer aos membros da forma de
laboratório para o suporte gráfico deste manuscrito.
Conformidade com as normas éticas
Conflito de interesses Joseph Choukroun e Shahram Ghanaati de- clare que eles têm
nenhum conflito de interesse. Choukroun é o proprietário de PROCESSO. Nenhum dos
presentes protocolos foram ainda aprovados para aplicação clínica.
Acesso livre Este artigo é distribuído sob os termos da Creative Commons
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Que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que
você dê crédito apropriado ao autor original (s) e a fonte, fornecer um link para a
licença Creative Commons, e indicar se as mudanças foram feitas.
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