EXTRACCIÓN Y VALORACIÓN DE LÍPIDOS POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA

FINA.
Pachajoa D1, Yama JM1, Rosero MM 2
1
Estudiantes de tercer semestre del programa de ingeniería Agroindustrial de la
Universidad de Nariño, Pasto (Colombia)
2
Estudiante de quinto semestre del programa de ingeniería Agroindustrial de la
Universidad de Nariño, Pasto (Colombia)

RESUMEN

Los lípidos son componentes esenciales dentro de la existencia como seres vivos,
se los puede entender como sustancias orgánicas de naturaleza química muy
variada. Es por ello que existen variados tipos de lípidos y que cada uno de ellos
cumplen una función específica dentro de los organismos vivientes. En nuestra
existencia se sabe que interfieren en múltiples funciones biológicas como ser
componentes estructurales de las membranas celulares, forman depósitos
celulares de reserva energética, actúan como precursores de hormonas y
vitaminas liposolubles e intervienen en el transporte de la energía metabólica. Por
lo general los seres humanos obtenemos lípidos de la dieta diaria, por esta razón
es de suma importancia reconocer el contenido de los lípidos en los alimentos que
se están consumiendo constantemente. Para este reconocimiento se ha
designado a una práctica de cromatografía por capa fina donde es un método muy
conocido para dicho reconocimiento de dichos lípidos donde la palabra
cromatografía significa literalmente “escribir en colores”, ya que cuando fue
desarrollada, los componentes separados eran colorantes. Se trata de una técnica
o método físico de separación de dos o más solutos presentes en una mezcla
basada en la velocidad de desplazamiento de los mismos. En ella participan dos
fases, una móvil (líquida o gaseosa) y otra estacionaria (sólida o líquida).Para el
presente artículo se realizó la extracción de lípidos con cromatografía por capa
fina donde se utilizó determinados disolventes en los cuales cada clase de lípido
se reconocerá de acuerdo a su naturaleza y serán observados mediante un
componente revelador el cual en este caso es el yodo sublimado. Siendo esta
técnica una de las más usadas se tiene en cuenta que es la más eficiente y que
los valores de referencia de los Rf serán próximos o similares en comparación con
los valores experimentales, como un referente de la cantidad de lípidos presentes
en una sustancia organica.Los resultados de dicha práctica mostrara que la clase
de lípidos que existen en una sustancia vegetal son diferentes clases de lípidos
encontrados en una sustancia animal.1
INTRODUCCION
Se puede definir lípidos como un
grupo heterogéneo de moléculas
complejas que tienen como
característica común ser insoluble en
agua y por el contrario ser solubles
en disolventes orgánicos. En ellos
incluimos las grasas, las cuales se
habla en términos químicos como
ácidos grasos. En la grasa animal
encontramos fundamentalmente en
forma de triacilgliceridos y en
repercusión nutricional también se
incluyen el colesterol, diacilglicéridos,
fosfolípidos, glucolípidos, esteroles
como el colesterol. Éstas moléculas
tienen origen en la dieta aunque
muchas células poseen la capacidad
de sintetizarlos. Para la
determinación de éstos existe una
técnica denominada cromatografía
donde en cualquier cromatografía el
objetivo es la separación de los
componentes(lípidos en grasa de
pollo)en base a la diferencia de
propiedades físicas de aquellos , es
una técnica analítica de separación
de materiales que utilizan la
distribución de las sustancias entre
dos fases una móvil y otra
estacionaria. La primera, también
conocida como eluyente, de
naturaleza líquida o gaseosa tiene
como misión arrastrar las sustancias
a través de la fase fija. En la
estacionaria o fija se verifica la
separación de la mezcla. Según la
naturaleza de las dos fases se habla
de diversas formas de cromatografía,
para el caso del reconocimiento de
los lípidos se realizó la cromatografía
de capa fina, el cual es uno de los
procedimientos más empleados para
separar e identificar lípidos en
materiales bilógicos como tejidos
animales y aceites vegetales. Dicho
procedimiento se realiza con una
placa de aluminio recubierta con una
capa delgada de gel de sílice, que se
activa mediante calefacción en una
estufa, los lípidos extraídos
previamente del tejido mediante
disolventes orgánicos, se “puntean” a
unos 2cm del borde inferior de la
placa. Una vez evaporado el
disolvente, se introducen las placas
en cubetas cerradas, donde la fase
móvil de la cromatografía asciende
por capilaridad a través del
adsorbente (gel de sílice).Cuando el
frente de la fase móvil va llegando al
borde superior de la placa, se saca
ésta de la cubeta y una vez
evaporado el disolvente, se determina
la posición de los distintos tipos de
lípidos mediante algún tipo de
reacción química (revelado) que en
este caso se realizara con yodo
sublimado. Una vez realizada la
cromatografía se puede identificar
que en los lípidos de tipo animal se
diferencian de los lípidos o grasas
vegetales por la presencia o ausencia
de componentes grasos específicos
en ellos. Para el caso de los lípidos
de origen animal tiene alto contenido
en triacilgliceridos y en colesterol
entre otros los cuales corresponden a
grasas saturadas.2
METODOLOGIA
En primer lugar se realizó la
extracción de lípidos de la grasa de
origen animal en este caso del pollo,
depositando 0,5g de este en un
mortero y 10 mL de etanol al 95%,
luego se maceró durante 5 minutos,
se añadió 15 mL de éter de petróleo y
se maceró durante otros 5 minutos
para disolver los lípidos.
A continuación se filtró a través de un
algodón y se recogió el filtrado, se
transfirió a un embudo de
decantación, se añadió 5 mL de agua
destilada y finalmente se agitó; por
consiguiente se observó la aparición
de dos fases: la inferior, compuesta
de H2O-etanol, mientras que la fase
superior orgánica contenía los lípidos.
Después la placa se introdujo en un
beaker de 100 ml que contenía una
mezcla de disolventes (hexano-éter
etílico-ácido acético 80:20:1), que
constituía la fase móvil de la
cromatografía.
Después de dejar que el disolvente
se desplazara por la placa hasta
llegar a 0.5 cm antes de la parte
superior, se sacó ésta del beaker y se
dejó evaporar. En seguida se
procedió al revelado donde la placa
se introdujo en una cubeta que
contiene yodo sólido que, al
sublimarse, queda fijado a los lípidos,
apareciendo unas manchas de color
amarillento en las zonas que
contenían lípidos.
RESULTADOS

Posteriormente se pasó la fase

superior a una capsula de porcelana
y se llevó a evaporar a sequedad
hasta que quedó la sustancia de
contextura viscosa.

Luego se tomó una placa de sílica gel

de 10cm por 7cm y se realizó una
marca suave con lápiz a un 1 cm del
borde inferior de la placa, esta marca
se la dividió en 4 segmentos donde
se depositó respectivamente las
En la parte inferior izquierda se
muestras de: colesterol 0.2% en
muestra el primer patrón donde se
etanol 96%, lecitina en etanol 90%,
tomó como referencia el colesterol al
ácido palmítico 1% en etanol y la
0.2%en etanol al 96% detectando los
muestra obtenida; con la ayuda de un
estrés de colesterol donde subió de
capilar y haciendo una aplicación tipo
manera considerable aunque no se
punción tres veces en cada punto.
nota mucho porque se lo pudo haber
sacado en el momento donde apenas
podría haber realizado su máximo
recorrido, además según la placa se
pudo haber encontrado solapado con
los triacilgliceridos que corresponden
al número 3 donde se ubica una
posición más debajo de los estrés de
colesterol; ahí se puede observar que
está junto con los esteres de
colesterol y que no se alcanzó a
separar porque falto un poco más
tiempo de reacción con el yodo
sublimado. Luego se utilizó un patrón
de lecitina en etanol al 90% donde
este corresponde a los fosfolípidos lo
cual la grasa de pollo no posee
muchos fosfolípidos por eso se
encuentra en un nivel bajo no subió
mucho como se podría haber
esperado; en seguida se utilizó un
patrón de ácido palmítico al 1% en
etanol donde tampoco se observó
que subiera lo cual significa que las
grasas animales como la grasa de
pollo es poco importante la parte de
ácidos grasos libres puesto que estos
ácidos grasos, se mezclar con los
esteres de colesterol para formar los
triacilgliceridos, por esto no se
LIPIDO Rm Rs
Esteres de 3,1cm 6cm
colesterol
TAG 2,3 cm 6cm
(Triacilgliceridos
)
Lecitina 0cm 6cm
(fosfolípidos,
(ácidos grasos)
Acido palmítico 0cm 6cm
(ácidos grasos)
En esta tabla se hace la comparación
de algunos lípidos que se
identificaron con la extracción de
lípidos en cromatografía con capa
muestra un recorrido de éstos; para
finalizar se comparó la muestra
(grasa de pollo)con los anteriores
patrones donde sin excepción
predominan los triacilgliceridos y los
esteres de colesterol, que son
relativamente superiores en
comparación con los fosfolípidos y los
diacilgliceridos (los diacilgliceridos
que no se encuentran en mayor
proporción puesto que algunos OH
quedan sin esterificar pero son muy
pocos en comparación con el
colesterol.
Hay que tener en cuenta que entre
más carbonos posee los lípidos o
grasas son más polares.3
MEDICION DEL Rf EXPERMENTAL
Y COMPARACION CON LOS Rf
TEORICOS:
Para la medición de los Rf
experimentales se tiene en cuenta la
medición del Rm y del Rs donde:
Rm= rango de la muestra
Rs=rango del solvente
Rf= resultado de la división entre el
Rm/Rs rango que corresponde a
cada lípido en grasas de animales.
Rfexperimental Rfteorico
(Rm/Rs)
0.5 0.10
0.3 0.3-0.4
0cm 0,18
0cm 0,18
fina, tomando datos experimentales
dados en el laboratorio y datos
reales.4
Al parecer los datos no coinciden de
amucho con los estrés de colesterol
puesto que al determinar dichos
estrés de colesterol se interrumpió el
recorrido correcto por lo que difiere
de los datos teóricos, mientras que
los otros datos experimentales si son
cercanos a los datos teóricos
proporcionados.
CONCLUSIONES:
Loa lípidos son compuestos
orgánicos, aquellos que contienen
carbono, hidrogeno y oxígeno, los
cuales e los encuentra en plantas,
animales y microorganismos.
Los lípidos se los puede separar a
base de disolventes orgánicos.
Los lípidos tienen en común que son
insolubles en medios polares y
solubles donde la polaridad es baja.
El método de la extracción de lípidos
por cromatografía de capa fina ayuda
a entender de manera concreta que
no todos los lípidos son de una
misma fuente o composición química,
puesto que para cada lípido se arrojó
diferentes resultados.
Se observó que para cada lípido
corresponde una Rm que es el
recorrido que hace el lípido de
acuerdo al solvente y también tiene
un diferente Rf que se determinó por
la división de Rm/Rs(recorrido de la
muestra /recorrido del solvente),
donde se ha demostrado una vez
más que hay diferentes clases de
lípidos.
Loa lípidos de las tejidos animales
son diferentes en cuanto a los lípidos
de la grasa vegetal, puesto que el
colesterol en exceso es perjudicial
porque se acumula en las arterias y
dificulta el tránsito de oxígeno a
través de la sangre lo que dificulta el
funcionamiento del corazón y el
cerebro, por esta razón es muy
importante conocer las propiedades
de los lípidos de origen animal y
vegetal con el fin de consumir con
más frecuencia lípidos de origen
vegetal para la buena salud del
organismo
BIBLIOGRAFIA
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