Laboratorio 1 de Biología Molecular

Extracción de ADN de Cebolla

Materiales a utilizar:
 2 cebollas
 6 filtros de café
 1 cuchillo
 1 frasco de jabó n liquido
 1 esponja usada
 Agua estancada
 4 ligas

A: Describir paso a paso las actividades llevadas a cabo en

el laboratorio.

1. Cortar cebolla en pedazos y depositar en vaso químico

con agua.
2. Licuar, romper el tejido por acció n mecá nica, separació n
de células.

3. Romper la pared y membrana celular por acció n del

jabó n, incubar 10 minutos.
4. Colar; separar solidos de solució n. El ADN se encuentra
en la solució n.

5. Resuspender en alcohol al 95%

 ¿Qué sucede?

En la parte superior del vaso aparecen unas fibras blancas

que son el ADN de la cebolla.

Introducción

En este informe de laboratorio se realizarán diferentes actividades para la extracción del

ADN en una cebolla. La extracción de ADN requiere hacer varias series de etapas básicas.
En primer lugar, tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmática para
poder acceder al núcleo de la célula. Después debe romperse igual la membrana nuclear
para dejar libre el ADN. Por último, hay que proteger el ADN de enzimas que puedan
disminuirlo y para aislarlo hay que hacer que se precipite en alcohol. El ADN es soluble en
agua, pero cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interface entre
el alcohol y el agua. Además de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros
componentes celulares, los cuales son dejados en la solución acuosa.

También se desarrollarán los pasos correctos para el cultivo de bacterias, en el cual para
lograr el objetivo principal se debe seguir los pasos con mucha precisión para evitar alterar
los posibles resultados. Se denomina cultivo al proceso de propagar los microorganismos,
proporcionándoles las condiciones ambientales adecuadas. Los microorganismos en fase
de crecimiento realizan réplicas de sí mismos y requieren de los elementos que se
encuentran en su composición química. Se le deben brindar los elementos nutritivos en
una forma accesible desde el punto de vista metabólico. Además, los microorganismos
requieren energía metabólica con el objetivo de sintetizar macromoléculas y conservar los
gradientes químicos esenciales a través de sus membranas. Durante el crecimiento se
deben regular los factores nutricionales (carbono, nitrógeno, azufre y fósforo, elementos
trazas y vitaminas) y los factores físicos (pH, temperatura, oxigeno, humedad, presión
hidrostática, presión osmótica y radiación)
Cultivo Bacteriano
1. Cámara de flujo laminar, mantiene las condiciones del trabajo estériles.

2. Sembrado de bacterias en cultivo nutritivo:

 Agua estancada
 Esponja de lavar platos
 Piel
 Tos
 Cabello
 Saliva
3. Incubar a 37ºC por 4 días y revisar crecimiento.
B. Expliqué el concepto de esterilización y los diferentes modos para
obtenerla.

Proceso por el cual se obtiene un producto libre de microorganismos viables.

Los métodos mediante los cuales se realiza la esterilización pueden ser
clasificados de dos tipos: Físicos y Químicos, en dependencia de que el agente
utilizado para ello sea físico o químico.

MÉTODOS FÍSICOS
1. Calor seco (estufa u horno)
2. Calor Húmedo (autoclave)
3. Radiaciones ionizantes (gamma, beta y ultravioleta)
4. Ondas supersónicas (microondas odontológico)
5. Filtración
6. Ebullición
7. Flameo
8. Microesferas de Vidrio
AGENTES QUÍMICOS
1. Óxido de etileno
2. Plasma de peróxido de hidrógeno
3. Pastillas de formol
4. Soluciones químicas

C. Describa el proceso por el cual el jabón rompe las membranas celulares.

Lisis celular por medio de detergentes
Es una manera más suave de romper la membrana celular. Los detergentes
rompen la barrera lipídica solubilizando las proteínas e interrumpiendo la
interacción lípido-lípido, lípido-proteína y proteína-proteína. Los detergentes, al
igual que los lípidos, se asocian entre ellos y se unen a superficies hidrofóbicas. Al
romperse las membranas celulares se permite la salida del ADN al exterior.

D. Explique que es agar y describa al menos tres tipos.

Medio de cultivo (comúnmente agar además de nutrientes) usada en microbiología
para cultivar microorganismos o pequeñas plantas. Se pueden agregar
compuestos como antibióticos, para hacer el medio selectivo.
Tipos:
 Según su consistencia:
a) LIQUIDOS: se denominan caldos y contienen los nutrientes en solución
acuosa.
b) SOLIDOS: se preparan añadiendo un agar a un medio liquido (caldo) a
razón de 15g/litro. El agar es una sustancia inerte polisacárida (hidrato de
carbono) que se extrae de las algas. Como esta sustancia no es digerida
por las bacterias no constituye ningún elemento nutritivo. Este conjunto
convenientemente esterilizado puede ser vertido en placas de Petri o en
tubos de ensayo y presentan la posibilidad de aislar y diferenciar bacterias,
"procesos que antes no eran posibles en medio liquido".
 c) SEMISOLIDOS: contienen 7,5 g de agar /litro de caldo. Se utilizan para
determinar la motilidad de las especies en estudio. Actualmente se
encuentran disponibles comercialmente con el agregado de agar.

E. Mencione al menos 3 especies de bacterias que encontramos en el cuerpo

humano.
 La Streptococcus pneumoniae, que es una de las causantes de la
sinusitis, la otitis y la neumonía. A veces provoca enfermedades más
graves, como la septicemia o la meningitis. Resiste los antibióticos que se
acostumbran a usar para tratarlas: penicilina y macrólidos.
 La Enterococcus sp, que forma parte de la flora intestinal y puede originar
infecciones en el tracto urinario y, además, endocarditis, peritonitis y
abscesos intraabdominales. 
 La Escherichia coli, que es la primera causante de infecciones del tracto
urinario y de la septicemia. Las formas resistentes a los antibióticos tipo
penicilina, cefalosporina y aminoglicosida son cada vez más habituales.
Conclusión:

Al realizar el procedimiento adecuadamente, resulta que las fibrillas de ADN

comenzaron a salir, de un color blanco precipitado por sobre el alcohol (mezcla
Heterogénea). Con un alambre doblas y obtenemos y sacamos del tubo de ensayo
el ADN. Si quieres conservar el ADN puede dejarse secar sobre un papel de filtro.
En caso de que el ADN de la Muestra Vegetal no se pueda apreciar muy
claramente. Tenemos que agitar el tubo un poco para poderlo apreciarlo mejor.
Si se tiene problemas con el filtro, que no está bien hecho y que no filtra bien, por
lo tanto hay que hacer otro. También puede haber complicaciones con la forma de
poner el alcohol de manera que cayera por las paredes del tubo de ensayo.
Con esto podemos saber cómo es el procedimiento del extracto del ADN, así
como si estructura de una forma fácil y sencilla.

Una vez que ya tenemos los medios de cultivo preparados, hay que inocularlos, y
para ello se necesita:
Medio de cultivo.
Condiciones óptimas de incubación como temperatura, pH, presión, condiciones
atmosféricas (concentración de O2). Estos medios de cultivo son sólidos (cultivos
en reposo), o líquidos (para cultivos en agitación) Al realizar una siembra
de microorganismos, debemos tener en cuenta que técnica se va a utilizar, debido
a que estas varían respecto a las características del microorganismo a tratar.
También debe tenerse en cuenta la forma, espacio y el objetivo al que se quiere
llegar, pues dependiendo de esto la técnica de siembra es diferente. Un
microorganismo se puede sembrar en un medio líquido o en la superficie de un
medio sólido de agar. Un cultivo de bacterias o de hongos es con el fin de aislarlas
en el medio para lograr un mejor estudio de ellos.