Вы находитесь на странице: 1из 510

;к мл

A47

Федеральная целевая программа «Культура России»


(подпрограмма «Поддержка полиграфии и книгоиздания России»)

Алексеев Н.А.
47 Анемии /Н.А.Алексеев. СПб.: Г] окраг, 2004 —512 с.
ISBN 5-8232-0243-1
Изложены новейшие сведении о норМАЛЬКОМ Kpoimopi i антенатальном и постна-
тальиом периодах, структуре и функции эрнтрОЦйТО!, мяыбрвнв, синтезе гемоглобина, мета-
болизме, кинетике, антигенном совтвн I I " норм, и при шишки ических состояниях.
С позиции современных данных, достижений В D0AII ш i MIM ммунологни, молекуляр-
ной биологии, генетики и др. изложены ГТИОЛОГИ1 И ЛВТОПИИ рВ1ЛНЧНЫХ форм анемий врож-
денного, наследственного и приобретенного кврввтцы, их клинические гематологические
проявления, течение, лечение и прогно], ЫВДНКО н ч т и ч п и п - консультир< щиiite и нрофилак'
тика этих болезней. Даны подробныееиедгин н <>( | ! поешкеи лечении
различных форм гемохроматоза, ГвНоф1ГОЦНТ1рНО ндрош, гомолитн1 еских анемий, пор-
фирий, гемоглобинопатии и др. Предел и * рын II4II.II Ш I р и л : i ома гологических
параметров (морфологических, культур и 1, ц ынчвокнх, иммунологических и др.),
имеющих важное значение при нос пив | i
Дли практических врачей различных StifUHi'lkHoi и И (полип ipUN, 1'вр а центов, хирургии,
эндокринологов, нефрологов, лаборантов и др.) кя роф#оеордко преподавательско-
го состава при обучении врачей, интернов И i iv 1 пи

УДК 61в. 189.194-07-085(033)


КБК 54.11

О II.Л.Алексеев, 2004 г.
UN 5-8232-0243-1 i ••! иппократ, оформление, 2004 г.
СОДЕРЖАНИЕ

Предисловий 7

Общая часть

ФИЗИОЛОГИЯ ЭРИТРОПОЭЗА

I КМОПОЭЗ 11
Гемопоэтическая стволовая клетка 12
Полипотентные гемопоэтические клетки-предшественницы 16
Олигопотснтные и монопотентные гемопоэтические клетки-предшественни-
цы эритро- и грануломоноцитопоэза 17
Гемопоэтические колониестимулирующие факторы и их рецепторы 19
Линейно-специфические цитокины 20
Многолинейные цитокины 31
Синергическис цитокины 37
Индуктивные цитокины 43
Гомеостаз гемопоэза 47
Ингибиторы пролиферации и дифференциации гемопоэтических клеток 56
КРОВЕТВОРЕНИЕ В ПЕРИОД ВНУТРИУТРОБНОГО РАЗВИТИЯ 64
КОСТНЫЙ МОЗГ 82
ЛПОПТОЗ 87
ЭРИТРОЦИТЫ 93
Морфология и кинетика эритроцитов 94
Структура и свойства мембраны, скелета мембраны и цитоскелета
эритроцитов 97
Гемоглобин 108
W

Биосинтез гема и его регуляция 108


Биосинтез глобина и его регуляция 112
Свойства различных типов гемоглобина 121
Метаболизм в эритроцитах 119
Гемолиз 127
Антигены эритроцитов, их структура и функция 134
Система АВО 130
Система Н 137
Система резус (Rh) 137
Система Lewis 140
1 140
• 141
1 142
К 1*1*1 14?
143
I, . . I 13

и яи ШвТЬ

/ M h 41, 4lft i/'HI/'i 4h i i.M

I I I . M I li ЖЕЛЕЗА В ОРГАНИЗМЕ И ПОСЛЕДСТВИЯ Е Ю НАРУШЕНИЯ . . 153


ОбИЯМ ЖВЛОЭ1 II Dpi ; и п п м с 153
h.iH.im К1Л0Э1 li ОргаХИЭМе » фИЗИОДОГИЧеСКИХ у с л о в и я х 164
Ж *люо дефицитная анемия 169
Аномии ii|nt ю с п а л е я и и 178
I i-MoxpiiMiiioi и гвмосидероз 180
Наследственные формы гемохроматоза 181
ГомохрОЫйТОЗ нонорождснных 192
Наследственный перинатальный (неонаталышй) гемохроматоз 193
Наследственная атрансферринсмия 194
Н•наследственные формы аккумуляции железа в организме 195
Африканский тип перегрузки организма железом 196
M U M И Я НЕДОНОШЕННЫХ ДЕТЕЙ 196
UII МНЯ 11141 ДЕФИЦИТЕ МЕДИ 200
ММ МП II. СВЯЗАННЫЕ С НАРУШЕНИЕМ СИНТЕЗА ДНК И РНК
( M i l АЛОВЛАСТНЫЕ АНЕМИИ) 203
Витамин Hi/ дефицитные анемии 206
МотСниипм витамина Bi2 в организме 206
Наследственные формы витамин Вп-дефицитной анемии 210
Приобретенные формы витамин В12-дефицитной анемии 215
MciiHHiititufiiuiu анемии, связанная с дефицитом фолиевой кислоты 219
Метаболизм фолатов в организме 220
функция фолатов 221
Врожденная мал].абсорбция фолатов 224
Наоледственная мсгалобластная анемия вследствие дефицита
активности дигидрофолатредуктазы 225
Нвсладствениый дефицит активности 5,10-метиленгетрагидрофолатре-
дуктазы 226
Наследственный дефицит метионинсинтетазы 226
Наследственная мсгалобластная анемия вследствие дефицита
активности формиминотранеферазы — цикдодезаминазы 227
Врожденные мсгалобластные и макроцитариые анемии, не связанные с
фолатами и витамином В|2 228
Врожденные мегадобластные анемии, связанные с нарушениями био-
синтеза нуклеиновых кислот 228
Тиаминзависвыая мсгалобластная анемия 231
Синдром Pearson 232
С.ОД1 ГЖАНИ1

Другие могалобластные янвмня 233


Гесты, используемые для диагностики мегадобластных анемий 233

НАСЛЕДСТВЕННЫЕ ДИЗЭРИТРОП О ЭТИЧЕСКИЕ АНЕМИИ 236


Врожденная диззритропоэтическая анемия 1 типа 236
Врожденная диз^ритропоэтическая анемия II типа (HEMPAS) 238
Врожденная дитэритршшмтическая анемия III типа 240

I I МО ЛИРИЧЕСКИЕ АНЕМИИ 243


11аследственные гемолитические анемии, связанные с изменениями мемб-
раны эритроцитов 243
Наследственные гемолитические анемии, связанные с нарушениями
белков мембраны эритроцитов 243
Наследственные гемолитические анемии, обусловленные
нарушениями структуры липидов мембраны эритроцитов 266
Детский (инфантильный) пикпоцитоз 275
Наследственные гемолитические анемии, обусловленные изменениями
активности ферментов в эритроцитах 275
Наследственные гемолитические анемии, обусловленные изменениями
активности ферментов эритроцитов гликолитического цикла 277
Наследственные гемолитические анемии, обусловленные изменениями
активности ферментов глутатионового цикла в эритроцитах 299
Наследственные гемолитические анемии, обусловленные изменениями
активности ферментов, участвующих в метаболизме нуклеотидон в
эритроцитах 303
11
Врожденные гемолитические анемии вследствие аномалий гемоглобина . . . 307
Заболевания, связанные с аномалией структуры гемоглобина 308
Наследственное персистирование HbF 318
Синдромы талассемии 319
, Приобретенные гемолитические анемии 329
Иммунные гемолитические анемии 331
Гемолитические анемии («механические») с фрагментацией
эритроцитов 355
Пароксизмальная ночная гемоглобинурия 366
Приобретенная пароксизмальная ночная гемоглобинурия 367
Врожденная пароксизмальная ночная гемоглобинурия 373
Гемолитическая анемия, связанная с дефицитом витамина Е 373
ЖЕЛТУХИ, СВЯЗАННЫЕ С УВЕЛИЧЕНИЕМ СОДЕРЖАНИЯ НЕКОНЪЮГИ-
ГОИАПНОГО БИЛИРУБИНА 374
Синдром Криглсра — Найяра 375
Синдром Жильбера _Ч77

НАСЛЕДСТВЕННЫЕ И ПРИОБРЕТЕННЫЕ ПОРФИРИИ 378


Эритропоэтические порфирии 387
Врожденная эритропоэтическая порфирия 387
Эритропоэтическая протоиорфирия 389
Печеночные порфирии 391
Острая перемежающаяся порфирия 391
Вариагетная порфирия 393
Наследственная копроморфирия 394
i <>Щ ГЖЛНИ1

Нечомие и профилактика клинико-лабораторных проявлений пор-


ijni|>nii 396
ПорфирИЯ DOSS 393
Поздняя КОЖВЕЯ ворфирая 398
I Vim jo ipn i p o i i u n нчсскаи порфирия 401
Приобретенные норфирии 401
АквМИЯ при отравлении свинцом 401
1ИДЕРОБЛАСТНЫЕ АНЕМИИ 403
Врожденная шдеробластная анемия 404
Приобретенные сидеробластные анемии 406
ШЛАЗИЯ КОСТНОГО МОЗГА 406
Конституциональные анемии 408
Анания Фанкони 408
Врожденная ')ритробластопения 414
СнКДрОМ Шнахмана — Дайемонда 419
Врожденный дискератоз 426
Аплазии костного мозга, сопровождающие другие генетические
синдромы 431
Приобретенные апп;\\ши костного мозга 43!
Лиллаическая анемия 432
Эритробластопении 439
Фичиологическая (анемия) зритробластопенмя у младенцев 440
Приобретенные транзиторные эритробластопении 441
I КМОФАГОЦИТАРЫЫЙ ЛИМФОГИСТИОЦИТОЗ 448
СеиейНЫЙ гемофагоцитарный лимфогистиоцитоз 449
Реактивный, инфекционно- ассоциированный гемофагоцитарный синдром . . 454
АНЕМИИ ПРИ НЕКОТОРЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ 466
АМеМИИ при эндокринных заболеваниях 466
AIUMIUI при болезнях печени 468
Aiu-Mim при почечной недостаточности 469
Анемии при хронических системных заболеваниях 470

ПРИЛОЖЕНИЯ

НОРМАЛЬНЫЕ ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ 475


Библиографический список 492
i писок сокращений 509
ПРЕДИСЛОВИЕ

Термин «анемия» происходит от греческого слова и переводится как


•.-.('юскровие». Однако жизнедеятельность человека (и других млекопитаю-
щих) невозможна при отсутствии крови. Хотя термин и не состоятелен
по смыслу, тем не менее он продолжает фигурировать в медицине. Под
пиемией понимают патологические состояния организма, вызванные
разными причинами, имеющие различные патогенетическое механизмы
развития, характеризующиеся снижением содержания гемоглобина в
пНтице объема крови.
Причины развития анемий разнообразны; они могут быть врожден-
ными, приобретенными и наследственными. Общее для всех анемий, вне
.tneucuMOcmu о т их этиологии и патогенеза,— это снижение содержания
гемоглобина в единице объема крови и как следствие этого — кислород-
i юреносящей функции Эр с развитием гипоксемии и гипоксии.
Достижения в области изучения гемопоэза и его регуляции, полученные
с помощью методов культивирования клеток, биохимических, иммуноло-
гических, молекулярно-генетических и др., позволили существенно обога-
тить наши знания в этом направлении. Благодаря полученным данным
стали понятны этиология и патогенез н&которых заболеваний, разрабо-
таны новые подходы к их лечению, установлены патоеномоничные признаки
различных форм анемий. Достаточно привести пример в отношении
врожденного дискератоза и анемии Фанкони, которые по клинико-гемато-
логическим признакам практически невозможно отдифференцировать друг
от друга. Но благодаря тому, что выявлен ген врожденного дискератоза,
исчезли трудности в дифференциальной диагностике этих двух состояний.
Более того, на основе молекулярно-генетических и биохимических иссле-
дований удается выделить 7 вариантов анемии Фанкони, отличающихся
по клинико-гематологическим проявлениям и прогнозу.
На основе успехов в изучении регуляции гемопоэза получены реком-
бинантные препараты с активирующей и ингибирующей активностью,
которые нашли широкое применение в клинической практике. Локализация
генов, регулирующих гемопоэз, лозеолила не только более точно
диагностировать заболевания, но и разработать новые подходы к лечению,
методы генной инженерии.
Успехи в изучении гемопоэза у эмбрионов и плодов человека позволили
внедрить в практику методы антенатальной диагностики наследственных

7
1114 /ЦП ШЧ\И1

ninio6pt)tnttHHhix MtuHHHuinuu, получения эмбриотип.т./х .'.омипоэти-


9CKUX < nnn>iitutt.t\ luimiiik пик для трансплантации § П00ГПН8твЛЬН0М
Щрцодф, пит и ()/»» .чгптш терапии, при некоторых аномиих, заболевания
тиишных с функционшльной недостаточностью нейтрофилов, метабо
4i4i\hiix зиОоноопниях, иммунодефицитных состояниях (талассемия, X-
тшнный тяжелый комбинированный иммунодефицит, болезнь Ниманна —
liiH.i и dp.).
Истоки многих болезней взрослых лежат в детском возрасте.
Жтенупнрно-генетические методы принципиально изменили подходы к
Ншгностикв и профилактике многих наследственных болезней. Наличие
umti мо<)ико-генетических учреждений, генетическая грамотность мед-
щботников и населения являются залогом предупреждения врожденных и
1,4 подстввнных болезней. Однако многие врачи различных специальностей
/tniiu т.июмы с состоянием молекулярно-генетической диагностики
^следственных заболеваний. Специфической особенностью наследствен-
ных шболФввний является то, что причиной большинства из них являются
ИМ9н»ния ДНК. Использование ДНК-диагностики позволяет подтвердить
.штичоский диагноз или же установить его при отсутствии или слабой
\ыршжшнности симптомов, провести пренатальную диагностику с исполь
ворсинок хориона, клеток амниотической жидкости или крови
П\н)натальная диагностика позволяет предотвратить рождение
i с тяжелыми наследственными заболеваниями, является эффек-
1НШЩ.1М методом их профилактики.
ih)u;ii«) до настоящего времени классические методы цитоморфоло-
ШЯ9СК0В0 и гистоморфологического исследования не утратили своего
1п.1ч<ч1нн и мтимают ведущее место при диагностике патологически
1>( птичий Обычные методы исследования периферической крови и
lyuiKtn.iniii костного мозга остаются незаменимыми.
И ршботе обобщены опубликованные данные и собственный опыт
uidumhi «i соматологии. Мы постарались свести до минимума библиогра-
{чгичкие ^({одония о тех или иных положениях, поскольку в противном
иуч,ч> к/ш.м превратилась бы и по объему, и по цитированным авторам
i ' чраоочник. Мы стремились цитировать авторов работ последних лет,
чч иш> но значит, что ранние работы утратили свое значение — многие
положения стали аксиомой.
1ч> условно, книга не лишена недостатков, и мы с благодарностью
4ptiMt>M замечания, высказанные в наш адрес.

Профессор доктор медицинских наук


Н.А.АЛЕКСЕЕВ
Общая часть

ФИЗИОЛОГИЯ
ЭРИТРОПОЭЗА
ГЕМОПОЭЗ
И данном разделе мы, ограничи- Все клетки организма имеют свой
ЬЯСМСЯ в основном описанием эри- срок жизни, исчисляемый от момента
рропоэза, поскольку руководство по- их рождения до гибели. Это отно-
ШЛЩено анемиям. сится и к клеткам крови — нейтро-
Гемопоэз можно определить как филам, Эр, тромбоцитам, эозинофи-
tin. тему механизмов, обеспечиваю- лам и др., которые еще называют
щую постоянное замещение и регу- терминально-дифференцированными
ичиию различных клеток крови. Ге- клетками. Чтобы поддержать ста-
мопоэз действует как комплексная бильным состояние численность кле-
Система, которая способствует обра- ток в периферической крови интен-
ЮВ&нию клеток крови для восполне- сивность их образования должна
нии убывающих клеток как в норме, соответствовать количеству поги-
iл к и при патологических состояни- бающих клеток. Математически до-
ях. Гемопоэз — это процесс, при ко- казано, что костный мозг ежедневно
Гором форменные элементы крови должен продуцировать около 1010
приобретают определенные феноти- клеток. Но с другой стороны, чело-
пы, и это является следствием коор- веческий организм не является за-
динированной, клеточно-специфиче- стывшей системой, на него постоянно
0X0й экспрессии генов. Экспрессия воздействуют различные экзо- и эн-
Генов в клетке осуществляется кле- догенные факторы, на которые ор-
iочно-специфическими транскрипци- ганизм должен реагировать увеличе-
онными факторами, которые опосре- нием или уменьшением числа опре-
дуют полученные через рецепторы деленных клеток крови. Например,
сигналы клеткой, вызывая ее проли- внедрение инфекции в организм тре-
ферацию или дифференциацию, по- бует увеличения образования нейтро-
этому для понимания процесса диф- филов, но не Эр; при гипоксии
ференциации клеток важное значение требуется увеличение числа Эр, но
имеет знание функций транскрипци- не лейкоцитов. Эта ростково-специ-
онных факторов. У детей старшего фическая гемопоэтическая реакция
ночраста и у взрослых гемопоэз управляется тремя определенного ви-
происходит в плоских костях, в да классами компетенции клеток, в
i емо по этической ткани. Последняя задачи которых входят;
СОСТОИТ из полутвердой экстрацеллю- 1) дать возможность гемопоэти-
ЧЯрНОЙ матрицы (костной ткани, ческим стволовым клеткам увеличить
различных адгезивных молекул, ИЛ), число клеток-предшествешшц опре-
кегемопоэтических клеток и гемопоэти- деленного ростка;
ческих клеток, находящихся на различ- 2) способствовать гемоноэтичс-
ных стадиях дифференцировки. ским клеткам-предшествепницам оп-

П
ФИ тинаии ;»'и;/'о//о мл
и I. и. шин о ростки дифференциро- клеток-предшественниц. Пул г с к на-
•ты я I соотаетствующем направлении; ходится и состоянии «покоя» и ГСК
1) способствовать организму вос- делится периодически, тогда как пул
[ринимвть COOTBOI п аующие сигналы клеток-предшественниц очень динами-
lyu-M их экстра- или интрацеллю- чен. В ответ на сигналы окружающей
1ярно1 о накопления с последующей среды, гемопоэтических цитокинов
iv реализацией кик ингибиторов или клетки-предшественницы пролифериру-
1 И Мул ЯП upon процесса дифферен- ют, дифференцируются или погибают.
т а ими i емопоэтических клеток. ГСК морфологически нельзя отли-
Популяция гем о по этических кле- чить от клеток-предшественниц, но их
01 КОСТНОГО мозга состоит из четы- можно отличить и количественно оп-
п-\ функциональных комиартментов: ределить при клонировании в полу-
I) стволовых клеток, составляю- твердых средах (агар, мети л целлюлоза,
щим 0,05 0,2% от неси популяции сгусток плазмы крови, коллагеновый
гмппинлчеекпх клеток; для них ха- гель). Изучение клеток в образовав-
«ктерпы .' причпака - способность к шихся колониях с помощью методов
urn i слышму самоподдерживанию соб- изучения морфологии, цитохимиии,
iiiriinoii популяции и способность к моноклональных антител, цитогенети-
дифференциации и различные гемопо- ческих, биохимических исследований
ГГичеСКИе ростковые паправления; од- и др. дали возможность более четко
iiiiKo последний признак, полипотент- отделить ГСК от гемопоэтических
notii., присущи клеткам-предшествен- клеток-предшественниц.
инцам; мпрс|юло1 ически стволовая За последние 30 лет достигнуты
пипка не идентифицируется; также успехи в области открытия и
') клвток-предшественнип гемо- изучения свойств большого числа
П0 • л, составляющих около 1% от всей ростовых факторов и ингибиторов,
популяции; они не способны к само- принимающих участие в регуляции
поддержнванию, но обладают высо- процессов пролиферации и диффе-
М1м пролифера гивным потенциалом, ренциации гемопоэтических клеток.
чу|ч гвительны к ростковым факторам; В развитии этого паправления спо-
КОММ ИI ированные клетки-предшест- собствовали исследования гемопоэза
вмницы нс идентифицируются; в условиях in vitro, трансплантаци-
\) пум пролиферирующих, диф- онная биология, изучение химизма
ференцирующихся клеток гемопоэза; белков, молекулярная биология. Роль
ми составляет 2- • 10% от числа всех последней в изучении регуляции ге-
к лотом гемопоэза; эти клетки морфо- мопоэза у человека резко возросла
погичмки распознаваемы, и после в последнее десятилетие.
*111.ких делений образуются зре-
ние клетки, которые быстро элими-
нируются и кровь; ГЕМОПОЭТИЧЕСКАЯ
4) зрелых клеток, составляющих СТВОЛОВАЯ КЛЕТКА
ОКОЛО 90% от всей популяции гемо-
ПОЭТИЧвСКИХ клеток; они морфологи- Фундаментальной основой обос-
чески распознаваемы, не способны к нования наличия и характеристики
делению. ГСК явилась работа J.TU1 и E.McCul-
Образование клеток крови в те- loch (1961). Авторы установили, что
ЧеННв ЖИЗНИ индивидуума зависит от если летально облученным мышам
I < 'К. которая необходима как для ввести внутривенно взвесь костно-
ошмоподдержания, так и для обра-ю- мозговых клеток, то последние миг-
11,1 мпи достаточного количества по- рировали в селезенку и в ней про-
1111 ПО 11-11 1 ПЫХ И КОМ МИТИрОНЛМПЫХ исходила пролиферация клеток с об-

12
tl MO/!O Ki

рвэованием дискретных колонии ге- у мышей. Для идентификации и


мппо п ичсскпх клеток. Эти колонии, селекции клеток, которые экспрееси-
обре зо ванные из одной стол оной руют ростково-специфические марке-
+
i пегки (КОЕ-С), состояли из чистой ры (lineage — Lin ), используют це-
популяции эритроидных или миело- лый набор МА, количество которых
ИДНЫХ клеток, мегакариоцитов, или с каждым годом увеличивается. Ра-
М были представлсшл смешанной ботами N.Uchida и соавт. (1992),
(-ростковой популяцией клеток. I.Weissman и соавт. (1991, 1992) было
I [спользование в качестве маркера установлено, что мышиная ГСК име-
хромосомы Y, определение изофер- ет низкий уровень экспрессии Thy-
MtHTOB Г-6-ФД в клетках этих коло- 1..1-АГ, не обладает линейно-специ-
нии подтвердило, что каждая коло- фическими АГ, и имеет следующую
ния или клон происходит из единст- антигенную характеристику: Thy-
111-цной ГСК. l.H°/Lin—/Sea 1+. На сегодняшний
Проведенные эксперименты под- день невозможно утверждать, что
(шврдили, что образование колоний мышиная ГСК по своей антигенной
клеток происходит из ГСК. В пользу характеристике идентична таковой
uui о свидетельствуют следующие человека. Сделать заключение о фе-
фак гы: нотипе человеческой ГСК возможно
1) большинство колоний содер- лишь при изучении КОЕ в культуре —
-к;п ГСК, которые способны к само- в колониях обнаруживается большое
поддерживанию; число бластных элементов, и послед-
2) ГСК в любой колонии является ние отбираются и многократно куль-
ноиппотентной и способна образо- тивируются.
вывать колонии, состоящие из раз- Используя эти методы и МА,
ПИчных типов кроветворных клеток; L.Terstappen и соавт. (1991) опреде-
3) при длительном росте в дол- лили фенотип этих бластов КОЕ как
i осрочных культурах большинство CD34+/CD38—. Содержание этих кле-
КОЛОНИЙ содержат эритроидные, мис- ток больше в крови из пуповины
1нч|дпые и мегакариоцитарные клет- (14,72%), чем в костном мозге (8,28%)
ки, тем самым лишний раз свиде- и периферической крови (0,67%) [Ма-
рельствуя о полипотентности стволо- urillo L. et al., 1998]. АГ CD 34 — э т о
вой клетки. гликопротеин с молекулярной массой
Исследованиями по изучению 110 килодальтон и его ген распола-
хромосомных маркеров при ТКМ гается на 1-й паре хромосом (Ц32-)
установлено, что существует единая [Molgaard H. et al., 1989]. АГ CD38
ГСК для клеток миелоидиого (Эр, также является гликопротеином с
гранулоциты, моноциты, мегакарио- молекулярной массой 45 килодаль-
циты) и лимфоидного (Т- и В-лим- тон и он экспрессируется на клетках
фоциты) ростков. всех гемопоэтических ростков. По
Морфологически ГСК неиденти- данным L.Realy и соавт. (1995),
фицируема. Существенный прогресс молекула CD34 + , определяемая на
it се изучении наступил в эру появ- ГСК и клетках-предшественницах
пения МА, позволивших охарактери- миелопоэза, играет важную роль в
ювать се антигенный профиль. адгезии этих элементов к стромаль-
С ПОМОЩЬЮ характеристики по- ным клеткам костного мозга.
верхностных ЛГ примитивных клеток L.Terstappen и соавт. (1991) уста-
(CD34) и других поверхностных АГ новили, что при культивировании из
коммнтиров&нных клеток различных одной гемопоэтической клетки
ростхоа гемопоээа удалось выделить CD34WCD38- костного мозга чело-
i ем о по этическую стволовую клетку века через 28—34 дня образуются

/ I
Ч'И.иииниия энипюпп
п и i .•-niin< H I ПРИМИТИВНЫХ держиввмию. По мнению J.Olweye и
itвтоii Волн купы тировать эти соавт. (19%), примитивные г с к мо-
ПЯТКИ it ГСЧОНИв Л м е е , ТО п о с л е гут быть охарактеризованы как
1
I ер осадок них примитивных клеток CD34bnghi/ CD38dnW- / HLA-DR- ™-/
(бри |уются до 5 последовательных CD90+ / CD 117+ lc
/ родословность-/
операций клонов. Дли полной ха- Rhodamine 123 .
иктеристики человеческих ГСК для A.Yin и соавт. (1997) выделили
юложи гельной селекции можно ис- новый АС133-АГ, который является
ЮЛЬЭОвать А Г c-k.it, а для негативной трансмембранным АГ стволовых кле-
• in i мин CD33.CD34+, являясь АГ ток, селективно bri ht
экспрессирующимся
и (пецифическим маркером ГСК и на CD34 e стволовых клетках и на
клеток предшественниц, также экс- клетках-предшественницах. Исполь-
прессируется на эмбриональных фиб- зуя МА к АС133-АГ, можно произ-
робластвх, Плотность этого АГ про- вести селекцию ГСК из крови и
rpeci mum уменьшается по мере диф- костного мозга для трансплантации
феронцировки и со-февания клеток, [Yin A. et al., 1997]. Как указывают
и ПОЛНОСТЬЮ дш|к1)срспцированные авторы, +
в культуре
+
клетки
КЛОТКИ ЯВЛЯЮТСЯ CD34 [Krause D. CD34 AC133 дают рост большого
п ;il., I94()[. II свою очередь, ком- числа разноообразных колоний —
iiiipiMcin сЬ34 ( -клеток представляет КОЕ-ГМ, частично смешанные КОЕ
ообой гетерогенную популяцию, и на и небольшое количество БОЕ-Э. По
некоторых ИЗ них наблюдается экс- данным R.Pettengel +
и соавт. (1998),
пресоия дополнительных антигенных популяция АС133 -клеток более обо-
маркеров, которые позволяют отде- гащена ранними клетками-предшест-
ни 11. пекчммигированиые ГСК от венницами, чем популяция CD34+.
комми I нрованных клеток-предшест- АГ АС 133 экспрессируется 4
только на
исшшп |()lwL-ys J. et al., 1995]. Было клетках CD34 , но не на клетках
\i ГВНОВЛено, что CD34 + /CD38—клет- CD34-[Miraglia С. et al., 1997]. По
ки (копрессируют CD71 (рецептор мнению H.-J.Buhring и соавт. (1998),
1ф) HI ничком уровне, но по мере экспрессия АГ АС+133+ отмечается на
циффоронциации гем о поэтических 99,3—99,8% СО34 -клетках костного +
ик предшественниц экспрессия мозга, менее, чем на 10% CD 10 -клет-
' И М увеличивается [Gross S. et al., ках-предшественницах В-лимфоци-
тов, и почти на 90% клеток, экспрес-
Среди t l>.И 1 -клеток можно так- сирующих рецептор фактора стволо-
ШЧ и i-i делить две популяции — вых клеток H(CD 117). В то же время
C'l)34 Mhi и C D 3 4 . Популяция среди CD34+ клеток только 30—-45%
bn dim
+
i 1» I4 ihi обладает активностью при- были CD 10 и 55—75% были CD 117 .
bt|
Н
м и i и HI i Li к ГСК, и она способна под- АС133 -клетки обогащены |OW
в популя-
low
МржиВК11. u долгосрочных культурах ции клеток +
CD38 , CD71 и
in vitro миелопоэз и В-клеточный CD135 . Около 0,2—0,7% АС133+-
пимфоцитопоэз. In vivo эта популя- клеток являются CD34—, и эти клетки
ции клеток опосредует репопуляцию имеют следующую фенотипическую
мпеломопоцитарных клеток, мегака- характеристику:
+ lo
CD 117~HLA —
рНОЦИТОВ, Т- и В-лимфоцитов [Mur- DR CD71-CD38 w [Buhring H.-J. et
uiy I., et al., 1995]. Поскольку попу- al., 1998].
ininin клеток CD34 b[i i! hl обладает ак- Около 40% CD34+ костномозго-
iiiuiKHiMO примитивных гемопоэти- вых клеток экспрессируют CXCR-4,
'UIIUIX с т о л о в ы х клеток, то она рецептор для фактора 1, выделяемого
пиит-ПН мишенью для изучения СПО- стромальными клетками (SDF-1).
цобнооти н и х элементов к само по д- При культивировании чистой попу-
// M.i//" к

клеток ( I) M'CXCR-41 и данным 11.Shcn и соавт. (W9K), воз-


i I).14'CXCR-4 в среде, в которую можно, обусловлены различной экс-
ИпПиилепы ИЛ-3, ИЛ-6, КСФ-Г, ФСК прессией рецепторов хсмокинов. Так,
и (по, го популяция последних кле- рецептор CXCR-4 чаще выявляется +
мм образовывала разнообразные ко- на поверхности клеток CD34 и
ни КОЕ-ГЭММ, КОЕ-ГМ, CD34+CD38—, выделенных из пери-
KOI Г, КОЕ-Мф, КОЕ-Мег, БОЕ-Э, ферической крови взрослых людей
,i как при культивировании (81,7% и 47,2%, соответственно), не-
i IM-l'C'XCR-41 образования этих ко- сколько реже — из пуповинной кро-
nuiinnii не происходило. Большинст- ви (57,8% и 33,8%), относительно
Ю клеток этой популяции были редко — в костном мозге (41,8% и
I ii n грицательными, а клетки 37,9%). Напротив, клетки CD34+,
i I) ircXCR-4— были c-kit-положи-+ экспрессирующие CCR-5 и CCR-3,
i. ni.iii.iMH. Приобретение CD34 рецепторы для ингибиторного хемо-
• ш гкнми жепрессии CXCR-4 приво- кина стволовой клетки М1Р-1а, оп-
ип к шпоре способности этих клеток ределяются в небольшом количестве +
i образованию миелоидных, эритро- на костномозговых клетках CD34 и
и ИМ.1Х, мегакариоцитарных и сме- не обнаруживаются на этих элемен-
ши шил х колоний, и это заставляет тах, выделен ных из пуповинной и
налагать, что клетки CD34+CXCR- периферической крови.
I иилшо гея полипотентными гемо- По мнению А.И.Воробьева и со-
н(| и ическими стволовыми клетками авт. (1995), нет прямых доказательств
М ihii Т. et al., 1998]. как на наличие в кроветворной сис-
Белок CXCR-4 определяется на теме самоподдерживающихся стволо-
I1U4 1 БОЕ-Э—, По мере созревания вых клеток, так и бесспорных дока-
||нироидмых клеток содержание бел- зательств отсутствия способности к
ки снижается, хотя mPHK CXCR-4 самоподдерживанию у них. По мне-
определяется в дифференцированных нию авторов, родоначальные клетки-
клетках эритроидных колоний. SDF- предшественницы, находящиеся на
I, лиганда для CXCR-4, индуцирует верхних этажах иерархии кроветво-
в костномозговые рения, отличаются от более зрелых
2+
Приток Са
' D34+KIT+ клетки проявляет хемо- клеток по пролиферативному потен-
i аксическую активность против циалу только количественно. Поэто-
( 1)34' БОЕ-Э предшественниц. Эта му условно к компартменту стволо-
реакция SDF-1 уменьшается по мере вых клеток могут быть отнесены все
чифференциации эритроидных кле- мультипотентные клетки-предшест-
иж и появления на них эритроид- венницы, способные дифференциро-
носпецифического маркера — глик- ваться по всем гемопоэтическим на-
офорина A. M.Majka и соавт. (1998) правлениям — в сторону миело- и
полагают, что белок CXCR-4 спо- лимфоцитопоэза. К этому компар-
собствует сохранению ранних кле- тменту гемопоэтических стволовых
нж-мредшественниц в костномозго- клеток А.И.Воробьев и соавт. (1995)
юм гемопоэтическом пуле. относят:
Клетки CD34+, выделенные из 1) пСКК;
различных тканей (костного мозга, 2) LTCIC; колонии, возникающие
пуповинной и периферической крови из этих клеток, состоят из примитив-
ИрОСЛОГО человека), различаются фе- ных клеток, большинство из которых
iioiипически, гемопоэтическои актив- напоминают гемопоэтические ство-
ностью, способностью к колониеоб- ловые клетки; поскольку нет кло-
разованию, пролиферативной актив- нальных методов исследований для
ностью и др. Эти различия, по долговременной репопуляции клеток,

15
ФИШ 4h >l 114 Ч 4li ' I M

трудно высказать мнение относи ПОЛИПОТЕНТНЫЕ


i,пп идс мости I.TCIC и ГС К ГКМОПОЭТИЧЕСКИЕ
[Eaves С, el tl, 1991]; F.Tnraoreau и
ооап. (1998) высказывают мнение, КЛЕТКИ-ПРЕДШЕСТВЕННИЦ^
что I.TCIC являются либо действи-
гмьными родо начальны ми клетками В результате собственной репро-
i вмопоэН) либо промежуточными дукции ГСК образуют дочерние клет-
шеменiими между компартментом ки, которые сохраняют полипотент-
родоначальник клеток и клетками- ность. Итогом этого может быть
предшественницами; следующее:
М CAFC (Cell-stone Area Forming 1) либо обе дочерние клетки
(4*11); in» своим свойствам эти клетки становятся коммитированными в сто-
напоминают LTCIC, но их пролифе- рону одного ростка кроветворения;
ptTHiHan активность выше; 2) либо происходит «асимметрия»
4) ( IM-SI2 м SS (Colony Forming деления, вследствие чего образуется
Cell); ни клетки способны образо- одна коммитированная клетка-нред-
iii.iii;iti. колонии it селезенке через шественпица, а вторая полипотент-
I ' 14 и 7 X дней соответственно ная клетка-предшественница гемопо-
DOOM трансплантации облученным эза.
мышам, Этот феномен назван «квантовым
Общее содержание клеток CD341 митозом» [Ogawa M., 1989].
I костном мозге составляет 1—4%, Образовавшиеся клетки, являю-
но • число этих элементов включены щиеся потомками ГСК, in vitro спо-
как ГСК, так и клетки-предшествен- собны образовывать колонии, со-
ннцы. По мере дифференциации стоящие из клеток одного или не-
ПЛОТНОСТЬ антигенных молекул скольких гемопоэтических ростков.
('1>.И' снижается, и появляются но- Можно выделить но крайней мере
ны с специфические маркеры. Кост- 3 типа полипотентных гемопоэтиче-
иомозговые клетки CD34'/HLA-DR— ских клеток-предшеетвенниц, способ-
/CD IS составляют 0,01% от популя- ных образовывать колонии in vitro:
мпи всех клеток костного мозга, и 1) КОЕ-ГЭММ (син. полипотент-
I. iioi очные элементы с этим маркером ная миелоидная клетка-предшествен-
ПАЯЮТСЯ родоначальными клетками ница); она образует смешанно-кле-
ми-и) к предшественниц миело- и точные колонии, содержащие эрит-
ВИМфоцитопоэза, а также стромаль- роидные, гранулоцитарные, мегака-
иы\ моментов костного мозга [Blan- риоцитарные и моноцито-макрофа-
0h« О. el al., 1995]. гальные клетки; иначе говоря, КОЕ-
Пи основе математической моде- ГЭММ представляет собой коммити-
пи M.Vickers и соавт. (1998) устано- рованную нолипотентную клетку-
вили, что: предшественницу; количество КОЕ-
1) у человека в костном мозге ГЭММ в костном 5 мозге составляет
общее число гемопоэтических ство- 0—4 клетки на 10 мононуклеарных
ловых клеток составляет (O,5...2)xlOfi; клеток, а процент «тимидинового
2) каждая гемопоэтическая ство- самоубийства» КОЕ-ГЭММ —около
повая клетка делится 1 раз в 2—4 10%;
i ода; 2) КОЕ-блает; эта клетка очень
?>) ежедневно делятся около 1000 примитивная, в отсутствие опреде-
гемопоэтических стволовых клеток. ленных гемопоэтических КСФ может
ТАКИМ образом, исследованиями in длительно существовать, не удваива-
vitro и in vivo доказано, что в костном ясь; КОЕ-бласты в условиях in vitro
мчи г человека существует ГСК. способны образовыва п. смешанно*
il Mot in > ;

клеточные колонии при добавлении Считается, что КОЕ-ГЭММ явля-


и кондиционную среду Эпо, ИЛ-3, ется более ко имитированной клет-
КСФ-Г или ИЛ-6; большинство об- кой, чем КОЕ-бласт и КОК-ВПП,
разующихся колоний состоят из этих однако полной ясности о взаимоот-
КС примитивных клеток, но около ношении между двумя последними
20% колоний являются смешанно- клетками нет. Из всех полипотентных
клеточными; это заставляет полагать, клеток-предшественниц более зрелы-
что in vitro гемопоэтическис клетки- ми и более дифференцированными в
предшественницы в течение одного иерархической системе кроветворе-
iрапзиторного клеточного цикла мо- ния являются КОЕ-ГЭММ, чем КОЕ-
Гут коммитироваться в сторону двух бласт и КОК-ВПП.
различных ростков гемопоэза [Row- По мере дифференциации ГСК
k-y S. et al., 1997]; изменяется антигенная структура ге-
3) КОК-ВПП; у человека около мопоэтических комм итир о ванных
70% костномозговых клеток клеток-предшественниц. Среди кле-
(1)344СО38~~экспрессирушт c-mpl; ток CD34+CD38~увеличивается доля
ПО данным G.Solar и соавт. (1998), элементов с экспрессией АГ CD71
при трансплантации приживляемость (рецептор Тф), появляются клетки с
клеток с фенотипической характери- экспрессией CD331 [Gross S. et al.,
стикой CD34+CD38— c-mpl+ лучше, 1997]. Если на гемопоэтических ство-
чем клеток CD34'CD38~c-mpl--; сре- ловых клетках отсутствуют АГ 1а и
ди всех клеток CD34+ костного мозга DR, то на коммитированных гемо-
человека субпопуляция c-mpl+ состав- поэтических клетках-предшественни-
ляет 14% [Hagiwara Т. et al., 1998]; цах (КОЕ-ГЭММ) появляются детер-
различают 2 вида клеток КОК-ВПП — минанты гистосовместимости —
КОК-ВПП] и КОК-ВПП2. HLA-A, HLA-B, HLA-C и HLA-DR
Клетки КОК-ВПП 1 относительно (la-подобный). На 5% КОЕ-ГЭММ
резистентны к 5-флюоурацилу, обла- определяются АГ группы крови А и В.
дают высокой репродуктивной спо-
собностью с образованием in vitro
гигантских, видимых невооруженным ОЛИГОПОТЕНТНЫЕ
глазом, колоний, содержащих в од- И МОНОТТОТЕНТНЫЕ
ной колонии до 50 000 клеток и
более. Некоторые клетки КОК-ВПП1 ГЕМОПОЭТИЧЕСКИЕ
реагируют на ИЛ-1, у других эта КЛЕТКИ-ПРЕДШЕСТВЕННИЦЫ
реакция отсутствует [Bertoncello I. et ЭРИГРО-
al., 1991]. И ГРАНУЛОМОНОЦИТОПОЭЗА
Клетки КОК-ВПП2 также облада-
ют высокой пролиферативной актив- Последующие этапы дифферен-
ностью и являются клетками-предше- циации КОЕ-ГЭММ в костном мозге
ciнеиницами макрофагов. Не исклю- приводят к образованию олигопо-
чается, что КОК-ВППг являются тентных (КОЕ-ГМ и КОЕ-Э-Мег) и
КОК-ВПП|, но при создании специ- монопотентных (КОЕ-Г, КОЕ-М,
фических условий для их роста они КОЕ-Мсг и БОЕ-Э) гемопоэтических
ишмитировапы в сторону образова- клеток-предшественниц. Количество
ния макрофагальпых колоний [Bag- КОЕ-ГМ в костном мозге колеблется
5
by Ci., 1994]. Добавление в кондици- в пределах 10—100 на 10 миелока-
онную среду КСФ-Г + КСФ-ГМ и риоцитов. Линейно-коммитирован-
КСФ-ГМ I ИЛ-3 способствует резкому пые гемопоэтические клетки-предше-
увеличению колониеобразоиапия ственницы содержат популяцию
1 11
МЖ BII1I fMcNiece 1. et al., 10881. CD34' " . которая не обладает долго-

1
1.И. и
ФИЗИО1Ю1ИЯ :)1>И!1'П1Ц>.>.1Л

рочной 1 емопоэтической активно- иы явлено, что (мшогепциальность


,и.Hi in vitTO и in vivo jMurray I,, ct БОЕ-Э исчезаеч в промежутке стадий
БОЕ-Э — КОВ-Э. В опытах in vivo
Kill IM обладает бипотснтной па мышах A.Vannucchi и соавт. (1998)
циффсренцировочноЙ потенцией, кото- установили, что после стимуляции
pil ограничена двумя гемоиоэтически- Эпо или ТПО в костном мозге и
ми росткими с образованием КОЕ-Г и селезенке животных определялись би-
М И м Ьолыиая часть КОЕ-ГМ ак- потентные клетки с бластоподобноЙ
iMHiio пролифсрирует и 30—50% этих морфологией, экспрессировавших
шомскгон иоднержсны «тимидиповому как р-глобин, так и GPIIb (клетки
i dMuvhiiiniiiy». После 2—3 делений 4A5'Terll + ). Поскольку не все ран-
Ки| 1 М наступает необратимая фаза ние БОЕ-Э детерминированы в сто-
КОММИТИрования, и результатом этого рону эритроидного ростка, то их еще
iniiKirioi появление КОЕ-Г и(или) КОЕ- называют «примитивными» БОЕ-Э.
М, KOR I M IIML4-C следующий фенотип: БОЕ-Э обнаруживаются как в кост-
(1)1 W I M v i n n r i ^ K 1 [Blanchet О. ном мозге, так и в периферической
« п1 , 1995] крови.
И процессе дифференциации КОЕ- Поздние («зрелые») БОЕ-Э обра-
I )ММ и культуре костного мозга in зуют in vitro более мелкие колонии,
vih о образуются колонии трех типов: содержащие только эритробласты.
ВОЕ ). КОЕ-Э и БОЭ-Э-Мег. Они обладают низкой пролифератив-
БОВ-Э является наиболее ранней нои активностью, способностью
кIH-Iкой предшес!венницей >ритроб- только к дифференцировке, чувстви-
ШОТОВ Среди БОБ-Э различают ран- тельностью к Эпо, в них определяется
ИИ1 и поздние. Ранние НОЕ-Э in vitro тРНК Эпо [Stopka T. et al., 1997].
обрачушт большие колонии клеток с Из БОЕ-Э образуются КОЕ-Э.
мнмимумом их гемоглобипизации к Колонии клеток появляются in vitro
II М му дню культивирования. Эти через 7 дней после начала культиви-
колонии мультицентричные и их еще рования. Они небольшого размера,
Kiiii.iiiiiini «(iypc га ми». НОЕ-Э о б л а - содержат менее 50 клеток, дифферен-
1.1ИН ВЫСОКИМ пролиферативным по- цируются в сторону эритробласта,
м'нншпшм, они нечувствительны к обладают низкой пролиферативной
1
1мо ИЛИ ИЧ1-111. слабо реагируют на активностью. Их жизнеспособность
НвГО, пи реагируют па другие фак- и дифференциация зависят от нали-
|иры ростн, к прошлом называемые чия в культуральной среде Эпо. Эти
nftypi и I имулирукпцей активностью» клетки обнаруживаются в основном
(Hunt I'romoting Factor): ФСК, ИЛ-3, в костном мозге; их содержание
КС'Ф I М. 1UI «», ПЛ-1 I. Ь о л ь ш а я составляет 5 на 10 000 ядерных эле-
•пи м. них клеток находятся в иерио- ментов. Индекс «тимидипового само-
щ < in КЛВТОЧНОГО цикла деления; они убийства» составляет около 75%.
споообны дифференцироваться в сто- БОЕ-Э имеют фенотип
|Н)му клеток эрнтроидного ростка и CD34+CDH7+(c-kit) CD33+. По мере
иногда мегакариоцитарного [Sebaho- созревания БОЕ-Э теряют маркеры
мм Q,, 1998]. сначала CD33, а затем CD34; CD 117
Экспериментально установлено, определяется вплоть до стадии базо-
'ио существует бипотентная клетка- фильного нормоцита. На клонах
предшественница мегакариоцитарно- эритроидных клеток-предшественниц
гв и >ритроидного ростков. С помо- определяются интегрины, играющие
mi.u) специфических поверхностных важную роль в адгезии клеток Так,
маркеров 4Л5 (мегакариоцитов) и на БОЕ-Э определяется интегрин
1 > i II 1 ' (эритроидные клетки) in viiio а2/р*2 (CDlla / CD 18), сохраняющий-

га
li M<'Mo .1

i n oo стадии КОВ Э, Также опреде Исходя из биологической актив-


Hi ген К'ЛМ (CD54), экспрессия ко- ности, нес КСФ (с долей условности)
юрого постепенно исчезаем по море можно разделить на 4 категории:
шфференциации эритроидных кле- 1) липейпо-специфические;
Ю1 Ни эритроидных клетках-пред- 2) многолинейные;
ип'1 гвонницах определяется адгезив- 3) синергические;
IIIUI молекула VLA4 (Cl)49cl), кон- 4) индуктивные.
фолирующая адгезию этих клеток к Безусловно, такое деление услов-
фибронектину, a CD44 определяется но, так как активность некоторых
ниш>п. до эритробласта. Также вы- цитокинов укладывается более чем в
1Мяются АГ системы HLA классов одну категорию, но главный крите-
I и II; I1LA-DR выявляется на стадиирий отнесения того или иного цито-
liOI'X) и исчезает на стадии КОЕ-Э. кина в ту или иную категорию — это
AI системы Rh определяются на его преимущественное влияние. Фак-
I OF ) и их плотность увеличивается торы, которые синтезируются клет-
пи мерс созревания клеток эритро- ками, называются цитокинами. По
Идного ряда, достигая максимума на своему действию они могут быть:
Ipi iti.i х Э р . — эндокринными, когда цитоки-
II приложении 1 представлены ны секретируются в плазму крови;
nimble о содержании некоторых ге- — паракринньши, когда цитоки-
Мопоэтических клеток-предшествен- ны действуют путем контакта с мем-
ниц в онтогенезе. браной клетки-мишени;
— аутокринными, когда цитокин
секретируется той же клеткой, на
ГЕМОПОЭТИЧЕСКИЕ которую он действует.
КОЛОНИЕСТИМУЛИРУЮЩИЕ Каждый фактор имеет свой спе-
ФАКТОРЫ И ИХ РЕЦЕПТОРЫ цифический рецептор на клетке-ми-
шени. Эти рецепторы характеризу-
Образование колоний и выжива- ются следующими признаками:
ние in vitro гемопоэтических клеток- — наличием трансмембранных
предшественниц во многом зависит белков; на одной клетке определяется
DT наличия в кондиционной среде от 500 до 2000 рецепторов и более;
i емопоэтических факторов роста, — множественностью для разных
КСФ. Некоторые из этих КСФ дей- факторов на поверхности клетки;
пвуют непосредственно на клетку, — они являются продуктом одно-
другие — косвенно, однако большая го гена.
часть КСФ действует обоими путями. В свою очередь, все рецепторы к
Так, некоторые цитокины с гемопо- цитокинам можно разделить следую-
иической активностью стимулируют щим образом:
пролиферацию и дифференциацию не 1-й класс — рецепторы с актив-
один тип клеток, а несколько, но при ностью тирозинкиназы:
пом на одни элементы они действу- — 1-й подкласс — рецепторы
ют непосредственно, а на другие — neu/HER2 протоонкогена и эпидер-
косвенно. Например, КСФ-ГМ сти- мального фактора роста (EGF);
мулирует пролиферацию КОЕ-ГМ и -—2-й подкласс — рецепторы ин-
н то же время он индуцирует экс- сулина и инсулиноподобного факто-
прессию ИЛ-1, т. е. из этого примера ра роста 1 (1GF-1);
иидио, что очень трудно оценить — 3-й подкласс включает в себя
вклад любого цитокина с точки рецепторы для макрофага льного
(рения его биологической актив- КСФ (КСФ-М), ФСК и для фактора
ности. роста, выделяемого тромбоцитами;

19
Фи-лиошмин :)1'И!Г()1Ю 111

niuaiijiiiMii ДЛЯ Ф С К и КГФ-М составе которой определяется около


явля-
ются ii-Hi.i с kii и с I'ms соответствен-
24% карбогидратов. Обе формы име-
но. Рецептор КСФ-М это протеинют одинаковые биологические и ан-
i молекулярной массой 165 кило- тигенные свойства. Сиаловые кисло-
цальтон, экспрессировам на моноци- ты, составляющие около 30% карбо-
1 ;i \ м макрофагах с плотностью гидратов, являются важнейшим ком-
1000 15 000 ма клетку; понентом последних, так как они
' II класс рецепторы для цито- обеспечивают биологический эффект
ккмов [Blanche! О. et al., 1995; Teys- Эпо in vivo. Установлено, что потеря
itei м . ei al., 1998]. Эпо сиаловых кислот сопровождается
утратой эффективного взаимодейст-
вия Эпо с гемопоэтическими клетка-
ЛИНЕЙНО-СПЕЦИФИЧЕСКИЕ ми-предшественницами для образо-
цитокины вания клеток эритроидного ряда и
быстрой элиминацией Эпо без сиа-
К лиiidiмо-специфическим цито- ловых кислот из кровотока печенью
кинам относятся Эпо, КСФ-Г, КСФ- [Fukuda M. et al., 1989].
М, ИЛ-2, ИЛ-5, ИЛ-7. У здоровых людей содержание
ЭритрОПОЭТин. Более 100 лет назад Эпо в плазме составляет
им mi отмечено, что у жителей высо- (13,9+3,9) МЕ/мл [Mursito S. et at.,
КО1 Орья наблюдается эритроцитоз. В 1998]. При содержании Hb в крови
I9()f, г. P.Carnot и O.De Flandre вы- не менее 105 г/л содержание Эпо в
сказалн предположение, что снижен- крови сохраняется в пределах нормы
ное атмосферное давление вызывает [Spivak J., 2000].
увеличение и(или) образование гумо- Содержание Эпо в сыворотке кро-
ралыюго фактора, оказывающего воз- ви первично зависит от уровня его
•ii-iiiчипе на эритропоэз. Эта гипотеза продукции почками. Фундаменталь-
омни подтверждена T.Miyakle и соавт. ным стимулом образования Эпо яв-
it I *> 77 г., которые выделили и полу- ляется гипоксия. Содержание Эпо в
ЧИЛИ очищенный Эпо из мочи больных сыворотке крови увеличивается экс-
\\ Эпо был первым гемопоэтическим потенциально по мере снижения ге-
poi говым фактором, идентифициро- матокрита. По мнению Y.Bcguin и
МННЫМ жепери ментально. Ген Эпо соавт. (1998), общая масса клеток-
расположен на хромосомах 7-й пары предшественниц эритропоэза в кост-
(/.|М 22) [Law M. et al., 1986]. ном мозге также может влиять на
Эпо является главным фактором, содержание Эпо в сыворотке крови
влияющим на эритропоэз, Он спо- путем изменения клиренса Эпо.
собствует выживаемости, пролифера- Фармакокинетические исследова-
ции и конечной дифференциации ния, проведенные на животных, по-
>ритр0ИДНЫХ клеток-предшествеп- казали, что при внутривенном вве-
11Ш1, хо I я известно, что на эти дении Эпо наблюдается двухфазное
процессы влияют и ряд других не- его распределение в сыворотке крови.
|Ч11 ропоэтиновых факторов. В начальную фазу период полужизни
Ч еловеческий Эпо является гли- (Т'/г) Эпо составляет 0,16 ч, а Т'/г
КОПротеином с молекулярной массой фазы элиминации — 4,4 ч. При внут-
\А 39 кмлодальтон. Белок состоит римышечном введении Эпо пик кон-
HI 166 аминокислотных остатков. центрации в крови ниже, чем при
It la виси мо ста от количества сарбо- внутривенном введении препарата,
ГМДраТО! к нем различают дне фор- по Эпо сохраняется в крови на
Mi, i: О-форму, содержащую около относительно высоком уровне в те-
иг,» карбогидратов, и р-фдрму, в чение 24 ч.
II !\U>lln 4

При ПОДКОЖНОМ 1ВСДСНИИ ЗДОрО- Эпо обнаружена в 97% образцах


in.iM ницим рекомбинантного челове- печени плодов 16-—40 нед гестации,
м о ' )ио (rl luEPO) и дозах и в 1 г ткани печени экспрессия
(.lid M I /(Ki псд) пли по 150 MI'VKI тРНК была выше, чем в почках,
l I'd ш it неделю установлено, что: костном мозге, селезенке. Содержа-
li интенсивность абсорбции rHu- ние тРНК Эпо был выше в левой
I |м i не чависит от вводимой дозы; доле печени, чем в правой. Экспрес-
I) 1 увеличением дозы уменьша- сия гена Эпо выявлялась в 93%
1М м к ниренс гНиЕРО; образцах ткани почек у плодов и
\) начиная с 3---4-го дня после новорожденных детей (возраст от
uiii.iuii.tiH препарата содержание ре- 17 нед гестации до 18 мес после
itM ноцитов увеличивается, достигая рождения ребенка); экспрессия тРНК
ИйК( имума к 9-му дню, а затем Эпо в 1 г почечной ткани значитель-
i иижистея, достигая нормальных зна- но увеличивалась у плодов после
*!• мин к 12 14-му дням; 30 нед гестации. Тем не менее коли-
4) оба режима введения rHuEPO чество тРНК Эпо в 1 г почечной
симулируют ретикулоцитоз умерен- ткани у плодов и новорожденных
1 приделах 2—3%: детей составляло 9% от его содержа-
5) при обоих режимах введения ния в печени. Ген Эпо также экспрес-
iНи1 ГО повышение содержания ге- сирован в клетках селезенки (в 96%
ИШлобина было одинаковым [Спе- образцах) и костном мозге (в 81%)
iiiir W . el a l . , 1997]. у плодов и новорожденных детей. В
Как было отмечено, образование большинстве образцах этих тканей
>nu регулируется степенью развития уровень транскрипции Эпо был низ-
ГМПоксии: при ее наличии увеличи- кий [Fandrey J. et al., 1997].
Ц.НЮ1, а при гипероксии — подавля- К моменту рождения ребенка на
ем1 и образование Эпо. Основным долю печени приходится около 80%
Местом образования Эпо являются тотального тРНК Эпо в организме,
почки, но при тяжелой анемии до т. е. у новорожденных детей печень
HI 15% он образуется костномозго- является главным местом экспрессии
н i.i ми макрофагами, гепатоцитами гена Эпо, и переключение образова-
IHralcv Л. et al., 1989]. По мнению ния Эпо с печени на почки проис-
< Vogt и со авт. (1989), костномозго- ходит через несколько месяцев после
iii.il.- макрофаги могут продуцировать рождения ребенка [Dame С. et al.,
•по и количестве, достаточным для 1998].
нормального эритропоэза. В течение последнего триместра
Способность печени продуциро- гестационного возраста образование
II.н I. Эпо в ответ на физиологические Эпо у плода переключается с печени
стимулы, вероятно, обусловлена ее на почки, которые к 40-му дню после
ролью в эритропоэзе и в образовании рождения ребенка становятся основ-
Эпо в антенатальном и раннем по- ным источником образования Эпо
СТметальном периодах. Образование [Dessypris E. et al., 1984]. Однако
Ino li печени плода и у новорожден- даже у взрослых людей печень спо-
ных детей регулируется теми же собна вырабатывать Эпо, но стиму-
механизмами, что и образование Эпо лом для его образования должна
ночками у взрослых, т. е. главным быть более тяжелая гипоксия, чем
ОТИмулом является гипоксия. это наблюдается при стимуляции
Количественное изучение экс- образования Эпо почками [Zanjani E.
црессии ml'HK Эпо в различных et al., 1989].
ГКВ.НЯХ плодов н новорожденных де- Переключение места образования
гей показало, что экспрессия гена Эпо с печени на почки обусловлено

21
I онеп и "нтк и детерминированными щие л cctiH от нескольких сотен до
механизмами. Источником образова- нескольких тысяч клеток (бурстов),
нии Эво в почки мяяются эндоте- и для их образования требуется
пиальные клетки перитубулярных ка- наличие в среде больших концентра-
пилляров, тогда кик гломерулярный ций Эпо (от 1 до 15 ME); макси-
уик'юк почек лишен тРПК Эпо мальное число кластеров появляется
fTirumotO Т. et al., 1998]. Клетки, на 15-й день культивирования
содержащие тРНК Эпо, локализуют- [Eaves С. et al., 1986; Graber S. et al.,
t)i л интерстицин базальной мембра- 1989].
Ni.i грубо чек и корковом слое почек. In vitro ранние БОЕ-Э могут
Высказывается предположение, пролиферировать при отсутствии
<по KI Процесс синтеза Эпо влияет Эпо в культуральной среде, но только
содержание простациклина и цАМФ. если в последней определяется бур-
It ОПЫТАХ на животных было уста- стостимулирующая активность. Этой
Н01Л6КО, ЧТО гипоксия (или ишемия) активностью обладают ИЛ-3, КСФ-
и ночках вызывает освобождение ГМ, но эти цитокины действуют и
прост&глакдина Е, который увеличи- на другие гемопоэтические клетки-
iiari 0OДержание цЛМФ и синтез Эпо. предшественницы. Сравнительный
)iii itnoiii. образованная цАМФ сти- анализ БОЕ-Э, выделенных из кост-
мулирует синтез Эпо [Kurtz A. et al., ного мозга и периферической крови
1988]. взрослых людей, показал, что кост-
Эпо стимулирует пролиферацию номозговые БОЕ-Э менее чувстви-
Я дифференциацию коммитирован- тельны к Эпо, чем БОЕ-Э перифери-
iН.1Ч клеток-предшественниц эритро- ческой крови. Введение рекомбинант-
мп 13Я, пролиферацию морфологиче- ного Эпо больным с ХПН вызывает
ски распознаваемых эритроидных у них увеличение содержания БОЕ-Э
м н и т и синтез в них РНК, регули- в костном мозге [Stone W. et al.,
pyn экспрессию гена Line-1 на про- 1988].
гшфернрующих эритроидных клет- B.Miller и со авт. (1989), изучая
КВЯ предшественницах, играющего влияние Эпо на колониеобразование
ВВЖНую роль и процессе эритропоэза БОЕ-Э, выделенных из крови взрос-
{< in К с( л!.. 1998]. Эпо оказывает лых людей, установили, что на 7-й
Иитогенное действие на БОЕ-Э, про- день культивирования клеток в ме-
фитроб ласты и Гнпофильные эрит- тилцеллюлозе образуются колонии
роблш гы, способствует элиминации больших размеров, состоящие из не-
(сгикулоцитов из костного мозга гемоглобинизированных или слабо
Brilev A. et at, 1989]. В сочетании гемоглобинизированных бластов с
о пк называемой бурстстимулирую- высоким пролиферативным потен-
IIим илИВНОСТЬЮ Эпо способствует циалом; на 10-й день культивирова-
дифференциации БОЕ-Э. Ддя макси- ния появляются колонии, состоящие
мального роста ранних БОЕ-Э in vitro из большого количества зрелых, ге-
гребувТСЯ присутствие в культураль- моглобинизированных клеток, но об-
iioii среде не только Эпо, но и ИЛ-3, ладающих низкой пролиферативной
КСФ-ГМ и КСФ-Г. Однако вопрос о активностью. При добавлении к сре-
степени зависимости пролиферации де, содержащей Эпо, ИЛ-la или
plHHHX БОБ-Э от Эпо остается от- ИЛ-ip, пролиферация клеток-пред-
крытым. Оно увеличивает число и шественниц эритропоэза ингибирует-
ВЫЖДВ*еМ0СТЬ ранних БОЕ-Э, нахо- ся [Schooley J. et al., 1987].
дящихся II клеточном цикле деления. rHuEPO стимулирует рост КОЕ-
II культуре тканей БОБ-Э образуют ГЭММ, индуцирует включение 59 Fe
г потери эритробластов, включаю- в БОР.-Э и КОЕ-Э. При концентрации

22
f ( MUIHKM

kno 5 Mli/мл рост КОЕ-ГМ ингиби- РНК-полимераэы И; через 3 ч после


руется на 40% [Qanzer Л. el al., 1989]. введения препарата повышаются ак-
'Для созрея&ния человечеоких тивность РНК-нолимеразы 1 и синтез
I•
' * »l ') и тритробласты in vitro Tpe- негистоновых белков, а через IS ч
iiyiirn Эпо и ннсули но подобный увеличивается синтез гистонов;
фактор \. Наш в купьтуральной сре- 3) через 4 ч после введения Эпо
щ- отсутствует Эпо, то КОЕ-Э ноги- отмечается увеличение интенсивно-
latOT, 11 культуре тканей КОЕ-Э сти синтеза РНК в ранних эритроид-
обрисуют маленькие колонии, со- ных клетках, находящихся на стадии
к роящие из 8—50 эрктробластов, но между КОЕ-Э и пронормобластом;
Mini их роста требуется внесение в через 4—6 ч происходит транскрип-
вультуралъную среду Эпо, но в мень- ция гена (5-глобина, и через 12 ч
шей дозе (от 0,01 до 1 ME), чем это интенсивность транскрипции увели-
грвбуется для роста БОЕ-Э [Sawa- чивается в 20 раз [Bondurant M. et al.,
th К. et al., 1989]. 1985];
Эпо не только регулирует эритро- 4) Эпо оказывает значительное,
RQ 13, но также стимулирует мегака- но вариабельное действие на синтез
•ноцитопоэз. Введение больным с белков мембраны; так, аккумуляция
Mill рекомбинантного Эпо вызыва- протеина 3 может быть обнаружена
АО у них увеличение в костном мозге в эритроидных клетках лишь после
Содержания КОЕ-Э, БОЕ-Э, КОЕ-Мег воздействия на них Эпо, тогда как
И КОЕ-ГМ [Stone W. et al., 1988]. In синтез снектрина и рецепторов Тф,
Vitro Эпо стимулирует мегакариоци- которые отмечались в клетках еще
ГОПозз. Введение животным реком- до внесения в культуральную среду
Винантного Эпо вызывало у них Эпо, резко увеличивается под дейст-
увеличение числа тромбоцитов. Эпо вием Эпо;
Вызывает дифференциацию бипо- 5) Эпо регулирует экспрессию
1С1ПЧЮЙ клетки-предшественницы ме- гена Line-1 на пролиферирующих
РШКарноцнтов и Эр (UT-7) в эритро- клетках-предшественницах эритроид-
идиом направлении: в 4,5 раза уве- ного ряда, играющего важную роль
инчивается число клеток, экспресси- в эритропоэзе [Cui К. et al., 1998].
рующих гликофорин А, происходит Эпо регулирует также субклеточ-
повышение синтеза (3- и у-глобинов ную локализацию Bcl-З, протоонко-
it несколько раз [McHale С. et al., гена, участвующего в пролиферации
1998]. (но не дифференциации) эритроид-
Каков механизм действия Эпо, ных клеток-предшественниц.
благодаря которому просходит уве- М.-Y.Zhang и соавт. (1998) устано-
личение образования клеток эритро- вили, что под влиянием Эпо проис-
кдного ряда? Изучением гемопоэти- ходит экспрессия Bcl-З, который об-
ческих клеток-предшественниц в разует комплекс с ядерными NK-kb-
культуре тканей установлено, что: белками, включая р52; этот комплекс
1) ключевым моментом действия индуцирует экспрессию специфиче-
Эпо на молекулярном уровне явля- ских генов, вовлеченных в процесс
ется стимуляция синтеза РНК с по- пролиферации эритроидных клеток,
следующим увеличением синтеза в том числе и c-myb, играющего
ДИК, клеточного деления и созрева- важную роль в эритропоэзе.
ния (образование гемоглобина) кле- Как уже отмечалось, экспрессия
ГОК, чувствительных к Эпо; гена Эпо, как и других важных генов,
2) через 30 мин после введения индуцируется, гипоксией. На транс-
мышам Эпо и эритроидных клетках крипционном уровне эти гены регу-
селезенки увеличивается активность лируются гипоксия-индуцирующим

23
ФИ:1ИОП()1ИН

фактором I (llil ; -!). HIF-I это Otp- в о т с у т с т в и и Э п о м и н нее н е р е а г и -


i етеродимерный транскрипционный руют на Эпо, или же могут проли-
фактор, состоящий из 82f> аминокис- ферировать, но не дифференциро-
|Ц)|, м регуляция его активности ваться под действием Эпо — в них
первично определяется стабильно- обнаруживаются только низкоаф-
стью ОС-субъединицы [Huang L. et al., финные рецепторы. Не отмечено
|W7|. H гене Эпо имеемся участок структурных различий между низко-
N Ьр, К которому прикрепляется HIF- и высокоаффинными рецепторами,
I. Н период гипоксии активация хотя между ними имеются функцио-
H i l l первоначально происходит в нальные различия. По мнению S.Sa-
виде увеличения насыщения его субъ- wyer и соавт. (1990), низкоаффинпые
единиц без изменения содержания ЭпоР вовлечены в процесс пролифе-
m P H K H I F - l a и H I F - l p [ G u J. et al., рации зритроидных клеток in vitro и
1997], трансплацентарный транспорт Эпо,
I hi поверхности одной эритроид- тогда как высокоаффинные ЭпоР
iioii клетки-предшественницы имеют- участвуют в процессе дифференциа-
1-я 01 N00 до 1800 рецепторов [Pego- ции КОЕ-Э человека.
I:IIO L, et al., 1988]. По мнению Экстрацеллюлярный участок
S.fCrautz и соавт. (1984), биологиче- ЭпоР прикрепляется к карбоксильно-
гкин (ффект от Эпо наступает при му участку Эпо. Вслед за взаимодей-
Связывании Эпо с 1% рецепторов на ствием Эпо со специфическим рецеп-
к in-1 ке. тором происходит быстрая нейтра-
' >поР обнаруживается не только лизация Эпо, активация сигнальных
пи клетках, ком мнтир о ванных в сто- путей с последующей передачей сиг-
рону фитропоэза, но и на стромаль- налов от рецептора в ядро клетки,
|ц.1ч и лк1 акариоцнтарных клетках увеличение интенсивности синтеза
[Blgby <!., 1994], на гемопоэтических РНК и свободного кальция внутри
i половых клетках эмбриона, клетках клетки, фосфориляция цитозольных
шдон'нин сосудов |Agnastou A et al., белков [Mason J. et al., 1998]. По
I«МО, Heberlcin С. et al., 1992]. Из мнению S.Graber и соавт. (1989),
ивфИIpolio )iичсских тканей (печень, цАМФ может увеличивать чувстви-
и i ичиiin11 MO ii, легкие, скелетные тельность некоторых эритроидных
MI- II-I , плацента) только клетки клеток-предшественниц к Эпо.
типичны содержа! ЭпоР, и благода- На разных этапах дифференци-
ри им Эпо 01 матери может быть ровки эритроидных клеток-предше-
in |и HI > си плоду. ственниц в эритроидном направле-
Среди ЭпоР выделены два вида: нии под действием Эпо происходит
•Ы1 окояффинные и низкоаффинные. включение и выключение различных
Мысокипффинныс рецепторы играют генов, влияющих на многие функции
••ЯСНую роль в процессе дифферен- клеток. Из 268 известных генов в
циации эритроидных клеток-предше- этих клетках 51 из них играет роль
СТВеННИЦ, тогда как пизкоаффинные в процессе эритроидной дифферен-
рецепторы могут быть вовлечены цировки, в том числе 5 из 7 мем-
голько в процесс преобразования бранных протеинов [Gubin A. et al.,
не ipH i роидных промотеров роста. 1998].
ЭпоР плаценты относятся к низкоаф- Активация ЭпоР является сущест-
финному типу, и их роль сводится в венным моментом для регуляции
основном к трансплацентарному выживаемости, пролиферации и диф-
транспорту г)по. й других клетках, ференциации эритроидных клеток-
относящихся к фитроидпому ростку, предшественниц. В этом процессе ак-
которые могут дифференцироваться тивации рецептора важную роль иг-

24
I I Mt >l Н К Ы

ii iHBiiocib комплекса, из кото- Эпо активирует STAT, которые


Hiii и 11 и ибо л ее важным является являю тем активаторами транскрип-
Установлено, что протеинки- ции и участвуют в передаче сигнала
< плияющая ми активность от ЭпоР внутрь клетки. В процессе
I
I i шипы, играет существенную пролиферации зритроидных клеток-
II передаче сигнала от ЭпоР предшественниц, индуцированном
III i|>i. кiifi км [von Lindern M. ct al., Эпо, участвует STATla, но не ST-
г |Р| | i кичынание Эпо с его рецеп- АТЗ. K.Kirito и соавт. (1997), изучая
Гйром на поверхности клетки приво- роль STATlct и STAT3 в процессе
дим I* нктивации, связанной с тиро- дифференциации эритроидных кле-
i (имачой JAK.2 (Januse kinasc). ток-предшественниц, вызванной Эпо,
Цм ||>ик неточный участок ЭпоР со- установили, что и STATla, и STAT3
н р i in X гирозиновых остатков, ко- ингибируют транскрипцию у-глобина
||)осфорилируются после акти- и эритроидно-специфическую б-ами-
рецептора в ответ на связы- полевулиновую синтетазу, и это при-
ниис ииганды [Klingmuller U. et al., водит к уменьшению числа гемогло-
|'|''/| ' ) | и фосфорилированныетиро- бинизированных эритроидных кле-
1ННоиые остатки являются местом ток. Выявлено также, что STATla
| ii.iuonKii белков, вовлеченных в ак- укорачивают период Go/Gi, т. е. и
iiin.uiinii ряда внутриклеточных сиг- STATla, и STAT3 действуют как
N.им,ш.IX путей. К числу этих тиро- негативные регуляторы в процессе
|ИИО»ых остатков ЭпоР относятся: дифференциации эритроидных кле-
SI AT5, фосфатидилинозитол-3-кнна- ток-предшественниц, вызванного
|.| (1*1 1-киназа), CIS, белки тирозин- Эпо.
фосфатазы — РТР1С и PTP1D. В передаче сигналов с рецептора
А к i ивация PI 3-киназы является внутрь клетки важную роль играет
11ЖНЫМ моментом в контроле про- GAB-1, белок, связанный с субстра-
яифервции и жизнеспособности кле- том инсулинового рецептора —
ГОК предшественниц. Эпо модулирует TRSV2. GAB-1 тесно связан с Р1 3-
II i ивацию PI 3-киназы, и, тем са- киназой, SHC, SHP2 и SHIP, которые
мим, она передает различные сигна- содержат сигнальные элементы. Под
iM.i внутрь клетки [Sui X. et al., 1998]. действием Эпо происходит активация
Гранскрипционные факторы — GAB-1, которая действует как адап-
PI t-киодза, МАР-киназы и STAT5 тер ная молекула в передаче сигналов,
цстивируются путем их связывания с вызывает активацию различных сиг-
остатками тирозина ЭпоР. Фосфори- нальных молекул, в том числе PI 3-
ПЯЦИЯ тирозина STAT5 сопровождает- киназы [Lecoq-Lafon С. et al., 1998;
11 гранслокацией активированного Wickrema A. et al., 1998].
ВТАТ5 в ядро клетки [Oda A. et al., S.Mueller и соавт. (1998) устано-
|WX|. Однако эти сигнальные пути вили, что экспрессия активного ЭпоР
внутри клетки могут быть активиро- на поверхности примитивных клеток-
В1ИЫ другими механизмами, без уча- предшественниц эритропоэза увели-
i11ИЯ тирозина рецептора Эпо. Так, чивает их количество и жизнеспособ-
активация 1*1 3-кипазы может проис- ность, и, возможно, это связано либо
М1,||им. через IRS-2. Установлено так- со стимуляцией пролиферативнои ак-
Kt, что ЭпоР может связывать не тивности этих клеток, либо с инги-
и ни,ко положительные регуляторные бированием апоптоза. T.Sato и соавт.
иен кн. но и негативные— РТР1С и (1998), изучая роль ЭпоР в эритро-
CIS; последний может быть отрица- поэзе, установили, что дифференциа-
inn.Mi.iM регулятором STAT5 [Мауе- ция гемопоэтических стволовых кле-
п. Р , 1997; Barber I), et al., 20011. ток и полипотептных клеток-предше-

25
ФИШ НИИ ИИ .)1'И1П >/Л). М Л

(пи-шиш может проходить но имут- in vitro И in vivo [Fujware Y. et


ренней программе, и ЭпоР могут al., 1996]. Транскрипционный кофак-
заменить другие цитокиновые рецеп- тор СВР (Creb-Uinding Protein), при-
itip 1.1, необходимые для проллфера- крепляясь к GATA-1, значительно
цим и дифференциации этих клеток. увеличивает его транскрипционную
it отоутст вие Эпо ФСК, ИЛ-6 и активность [Hung H.- L. et al., 1998].
рясомбинантный растворимый ре- GATA-1 и GATA-2 могут угнетать
ih и i op IIJI-6 вызывают в клетках транскрипционную активность PU.1,
ЖСПроссию nil'IIK Эпо. Если в кон- фактора, необходимого для диффе-
диционную среду добавляли нейтра- ренциации клеток-предшественниц в
iiinyioiuitc Эпо антитеза, то эритро- миелоидном направлении, т. е. взаи-
ПОЭЭ при отсутствии Эпо прерывался. модействие между GATA-1, GATA-2,
I выопоэт ические клетки-предшест- PLJ.1 и другими белками играет
венницы сек ротируют per se Эпо, важную роль в модуляции ГСК в
который связывается на их по вер х- период ее коммитирования в миело-
iMMiii с ЭпоР для передачи эритро- идном или эритроидном направле-
идпы.х дифференцирующих сигналов нии. В процессе коммитирования по-
II клетку [Sato T. c t a t . , 1998]. ли потентной гемопозтической клет-
(!игналы, передаваемые цитокина- ки-предшественницы происходит ин-
мп через рецепторы, в конечном счете дукция экспрессии на ней специфи-
1ДИЯЮТ на (функцию транскрипционных ческих факторов транскрипции
факторов ядра или же па факторы, PU.l/Spi-1 и GATA-1, необходимых
ГОСНО С ними связанными. Вследствие для дифференцировки этих клеток в
этого клетки приобретают линейно-спе- миелоидном или эритроидном на-
цнфичоскне маркер].], выполняют про- правлении соответственно [Zhang P.
граммы репрессии гена [Tsui F.-Y. et et al., 1998].
ai 1997; Scanduro A. el al., 1998]. Транскрипционный фактор
' pr in различных транскрипцион- GATA-1 является также центральным
ным факторов к гемопоэтических регулятором дифференциации бипо-
i к жах важная роль принадлежит тентной клетки-предшественницы ме-
фнктрим семейства GATA: GATA-1, гакариоцитарного и эритроидного
(1Л1Л 2 п ОАТА-3. Факторы транс- ростков кроветворения. Транскрип-
ирииции Ci A1 Л связываются с уча- ционный кофактор GATA-1 — Fog
«itwiMii <|Д1Л и иромотере гена Эпо (Friend of GATA-1) обеспечивает ак-
Н i KJin кия 11 in ymoto T, et al., 1998]. тивность GATA-1 in vivo. Установ-
(IA I Л I высини репрессирован на лено, что Fog играет ключевую роль
>|MI i | и щ н и м \ II | у ч и 1,1 х к л е т к а х , м е - в терминальной дифференциации
i iiiuipiiuiin IHX, Ю ' ш н о ф и л а х , а п а п о - эритроидных клеток [Гsang A. et al.,
IIHIIOTOKI ных I емопоэтических клет- 1997]. Для нормального развития
ки ч иредша гвенницах ничко экспрес- бипотеитпых эритроидных и мегака-
СИрован (iA'I'A-l способствует диф- риоцитарных клеток-предшествен-
ферепщшцин полипотентных гемопо- ниц необходимо наличие ядерных
м кческих клеток-предшественниц в факторов GATA-1 и Fog. Fog, являясь
зритроНДНОМ направлении, но при кофактором GATA-1, взаимодейст-
i-in inepxжепрессии происходит бло- вуя и кооперируя с GATA-1, способ-
када диффвренцировки этих элемен- ствует днфференцировке эритроид-
гов и клетки эритроидного ряда ных и мегакариоцитарных клеток-
[Оашм IV et al., 1997]. При отсутствии предшественниц. При нарушении
(iAIA-l клетки эритроидного ростка этого взаимодействия не происходит
поола отадии эритробласта не спо- экспрессии эритроидного гена [Cris-
ообны дифференцироваться в усло- pino J. et al., 1998].

26
II ио//о;i.i

i 'in MI L- высокой экспрессией указывают, что и ФСК, и Эпо каждый


-..им (1Л1Л .> и большим содержа- по отдельности активируют МАР-ки-
ний! протеина QATA-2 обладаю! пачу (МАРК, KRK.), но при сочетан-
ни H">ii цролиферативной вктивно- ном действии этих двух стимуляторов
сниженной способностью сип- степень активации МАРК резко воз-
1> iil|mii;i | |, о б щ и й ГЛОбиН И KJICTKC растает. Синергичное действие ФСК
III..пи.in | \ et al., 1998]. и Эпо на эритропоэз связано с
11 рикрепление Эпо к соответст- активацией МАР-киназы, и этот си-
|уК)1ИСму рецептору на поверхности нергизм опосредуется PI 3-киназой.
i rii гки-мишени, передача сигналов с Таким образом, Эпо является
I юрой но внутренние структуры важнейшим линейно-специфическим
ЦЛ 91 к и способствую! пролиферации фактором в регуляции эритропоэза,
i iMiтонических клеток-предшест- который образуется в основном в
иц, их дифференциации в эрит- ночках, и степень его продукции, но
•ОИДПОМ направлении. Это сопрово- не абсолютно, зависит от выражен-
i i.incii изменениями внутреннего со- ности гипоксии в организме. Кон-
Ивржиння и клетках. In vitro Эпо центрация Эпо в плазме зависит не
ицличивает 'жепрессию Р- и у-, н 0 только от степени оксигенации тка-
щ U-глобинов в стимулированных ней, но и от сопутствующих состоя-
фитроидных клетках, в 2—5% клет- ний и заболеваний (заболевания па-
МЯ уиеличииается образование НЬ. ренхимы почек, повышенная вяз-
Добавление в кондиционную среду кость крови, инфекционные и хро-
Ь А Л К или гемина увеличивает число нические воспалительные заболева-
i |мо1 лобинсинтезирующих клеток до ни, беременность, недоношенность и
•|U",, ii 70% соответственно с одно- др.), которые угнетают образование
временной терминальной дифферен- эритропоэтина вне зависимости от
циацией этих клеток [Mcliale С. et степени гипоксии. Кроме того, при
til , 1997]. Рекомбипантный Эпо ин- системных заболеваниях отмечается
цуцчрует образование HbF в процее- снижение функционального действия
м- созревания эритроидных клеток, Эпо, и это связано с ингибицией
iimcoGciвует дифференциации БОЕ-Э транскрипции гена Эпо цитокинами
и КОЕ-Э [Blau С. et at., 1993; Nagel R. воспаления (ИЛ-1, ФНО) [Spivak J.,
|j al., 1993]. 2000].
K.Muta и соавт. (1994) отметили Гранул о цитарный КСФ. Грануло-
винергический эффект Эпо и ФСК на цитарный КСФ впервые был обна-
пролиферацию, дифференциацию и ружен у мышей в 1983 г., а его
номинальное созревание клеток- аналог у человека-—в 1985 г. По
предшественниц эритропоэза, однако данным S.Corbacioglu и соавт. (1998),
внутриклеточные механизмы, с по- содержание КСФ-Г в сыворотке кро-
мощью которых ФСК и Эпо коор- ви здоровых людей составляет
динируют спой синергический эф- (51,1±34,6) нг/л.
фвкт, до конца не ясны. Но мнению Человеческий КСФ-Г -— это i ли
ll.Wu и соавт. (1995), механизм си- копротеин с молекулярной массой
Hepi ического эффекта ФСК и Эпо на 19 килодальтон. Ген КСФ-Г распо-
|ритропоэз следующий: ФСК вызы- лагается на 17-й паре хромосом
и;кч фосфориляцию ЭпоР и c-k.it (ген (17ql 1.2-21). Источником цитокипа
рецептора ФС'К). c-k.it вызывает фос- являются клетки стромы, эндотелия,
фориляцию ЭпоР, следом за которой эпителия, макрофаги, которые под
ирппгходи1 индукция пролиферации действием физиологических индукто-
н созревания клеток-предшественниц ров ИЛ-1 и ФНОа и лиионолисаха-
> 11111 ропоээа. X.Sui и сои г. (199К) ридов вырабатывают этот цитокин

27
ФИНН >!Н>1 ИМ ,)ГИ11>()1НКИЛ

[Ogawi v i-i ;il., 1996]. На (I'ilgraslini, Neupogen), который ши-


одном
мги грофиле экспрсссируютс» от 50 роко исиольчуют в клинической
до 500 рецепторов для КСФ-Г, и практике с 1987 г. при многих со-
биологический эффект от КСФ-Г стояниях, протекающих с нейтропе-
наступает при связывании этого ци- нией [Welte К. et al., 1997; Her-
гокина с 5 10% рецепторов на mans М. et al., 1998]. Кроме того,
клетке. цитокин используют для мобилиза-
Мри отсутствии рецептора КСФ-Г ции стволовых клеток перифериче-
пи рем о по этических клетках у мышей ской крови для их использования при
у них развивается хроническая ней- трансплантации. Так, подкожное вве-
гропения с уменьшением в костном дение препарата в течение 7 дней из
мозге содержания клеток миелоидно- расчета 100 мг/м2 увеличивает число
ш ряда. Однако не наблюдается КОЕ-ГМ в крови в 11—104 раза (в
аккумуляции незрелых клеток грану- среднем в 86 раз), а число клеток
поцитврного ряда, и 'JTO заставляет CD34 + — в 10—24 раза [Zarco M. et
ПОЛВГВ11-. что у мышей имеются al., 1998]. Помимо того, что КСФ-Г
клетки-предшественницы гранулоци- стимулирует образование нейтрофи-
гопопа, которые способны диффе- лов, он также влияет и на функцию
ренцироваться в нормальные зрелые этих клеток. Этот цитокип в условиях
игп грофилы. Нейтрофилы мышей с in vivo и in vitro способствует выде-
дефицитом рецепторов КСФ-Г фено- лению арахидоновой кислоты, повы-
типически нормальные, и это лишний шает образование супероксиданиона,
pgl подчеркивает важную роль этого активность щелочной фосфатазы,
рецептора и регуляции грапулоцито- увеличивает экспрессию адгезивных
ПОЭЭИ in vivo, и в то же время молекул (CD I lb/CD 18, L-селектина)
свидетельствует, что существует и и, в отличие от КСФ-ГМ, КСФ-Г, не
независимый от рецептора КСФ-Г ингибирует миграцию нейтрофилов
механизм регуляции гралулоцитопо- в очаг воспаления. КСФ-Г повышает
ИИ |l in К. el al., 1997}. фагоцитоз и бактерицидность ней-
КСФ I стимулирует образование трофилов. Введение рекомбинантно-
м. |11|мн|)1111ои и условиях in vitro и in го КСФ-Г in vivo приводит к дегра-
\ ivn It условиях in vitro колонии, нуляции нейтрофилов путем мобили-
ми шяшно Hi нейтрофилов, образуют- зации секреторных пузырьков
м быстрее при добавлении в культу- (CD I lb), специфических (лактофер-
пяльмуК) i ргду КСФ-Г, чем при до- рина, CD lib и CD66b) и азурофиль-
Авилемин КСФ-ГМ или ИЛ-3. КСФ-Г ных гранул [de Haas M. et al., 1994;
uiiimiM т у п пролиферации КОЕ-ГМ, Young К., 1996].
но иг оюиобен дникмп.по ее поддер- У здоровых людей после введения
ihiiiiiiii, и проявляет спою активность рекомбинантного КСФ-Г (по 7,5—
ВПЛОТЬ W промиелоцита [Blanchet О. 10 мг/(кг/день), подкожно, 6 раз)
el al.. 1995] 11,1иокин стимулирует отмечалось увеличение в плазме кро-
покоящиеся гемопоэтические стволо- ви содержания лактоферрипа в 8 раз,
ш.ц- клетки к вхождению в фазу Gi—S а нейтрофильного липолина (белок
клеточного цикла деления, индуцирует вторичных гранул с молекулярной
миграции) и пролиферацию клеток массой 45 килодальтон) в 6 раз, и
эндотелия сосудов in vitro. В сочетании их содержание оставалось повышен-
С И 'I i КСФ-Г стимулирует образова- ным в плазме крови до 12-го дня.
ние властных и мегакариоцитарных Увеличивалась также активность ще-
КОЛОНИЙ. лочной фосфатазы в плазматической
П настоящее время получен ре- мембране (максимум к 5-му дню);
комбинантный человеческий КСФ-Г содержание ФНОа в плазме крови

28
•itin.iuin ii ."> рич |Xu S. ct n l . , Цитокин индуцирует фагоцитоз, по-
питает киллерность микроорганиз-
Микрофагильный колон иестнмули- мов и опухолевых клеток зрелыми
М| til ф»К1'Ор. К С Ф - М ЭТО ГЛИ- мопопуклеарными фагоцитами, уве-
мм1|и1 и-ни с молекулярном массой личивает секреторную функцию мо-
\\\ чп к ш ю д н л ь т о н . Он стимулирует ноцитов и макрофагов, активность
• |икч)биост[>, п р о л и ф е р а ц и ю и тканевого тромбопластина и актива-
1Нф(|к р п щ и а ц и ю клеток-предшест- тора плазминогена [Pimentel E., 1990;
Шм 1 моионуклеарных фагоцитов. Bagby G., 1994]. Макрофаги, стиму-
1 м I i Ч> М р а с п о л о ж е н на 5-й п а р е лированные КСФ-М, ингибируют
".рпмшпм (5q33.l), он к о н т р о л и р у е т пролиферативную активность лим-
нПрннищмне двух видов г л и к о п р о - фоцитов, т. е. цитокин, вероятно,
(/о 90 к и л о д а л ь т о н и 4 0 — 5 0 играет роль в иммунорегуляторпом
мои). мсха£гизме [Wing E. et al., 1986].
Ill гочником образования этого Интерлейкин-2. ИЛ-2 — это белок
i.i являются большинство ме- с молекулярной массой 23 килодаль-
пим1М1м,|\ клеток, фибробласты, эн- тона. Ген этого цитокина распола-
циоитнп.ныс клетки, моноциты и гается на 4-й паре хромосом (4q26—
рофа1 и. Физиологическими ин- 28). ИЛ-2 образуется Т-лимфоцитами
иуктрими образования КСФ-М яв- (клетками CD4^ и CD8+). Физиоло-
мн.н.н КСФ-ГМ, ИЛ-3, ИЛ-4 и гическими индукторами его образо-
ФМ<)(л Цитокин содержится в крови вания являются липополисахариды,
И выделяется с мочой; у здоровых митогены, AT.
i'ii содержание этого цитокина в ИЛ-2 прикрепляется к гетероди-
им нороткс крови составляет мерному рецептору (р55, р75), экс-
M74t76) ед/мл [Watarik К. et al., прессированному на В- и Т-лимфо-
llw>), хотя K.Shirono и соавт. (1995) иитах, NK-клетках, и сигналы пере-
при поди i большие значения — даются, по крайней мере, через ак-
(7ЛМ147) ед/мл. Человеческий КСФ- тивацию тирозинспецифи ческой и
М iii.ni получен и очищен из клеток кальмодулинзависимой киназ. ИЛ-2
КПрциномы поджелудочной железы индуцирует пролиферацию и диффе-
|Wu M. el al., 1979] и мочи [Votoyo- ренциацию активированных Т- и
Ы 1ч. et al., 1982]. В-лимфоцитов, NK-клеток, экспрес-
Рецептор для КСФ-М, продукт сию ЙЛ-1 и ФНОа на моноцитах и
« lins протоонкогена, обнаружен на макрофагах . Большинство зрелых
микрофагах и некоторых клетках покоящихся клеток периферической
плацентарной ткани. Ген для рецеп- крови не несут на своей поверхности
ГОра этого цитокина (эквивалент рецептор ИЛ-2, в связи с чем они не
• протоонкогена) расположен на способны пролиферировать в ответ
UIHHHOM плече 5-й пары хромосом на ИЛ-2. Однако антигенная или
i Iq33.3). На одной клетке определя- митогенная стимуляция Т-ЯНМфоци-
ем ( ц от 30 000 до 50 000 рецепторов тов приводит к экспрессии рецептора
IPegoraro L. el al., 1988]. на поверхности клеток, и максималь-
КСФ-М индуцирует in vitro рост ная экспрессия наступает через 24
моноцитомакрофагальных колоний у 36 ч от начала стимуляции клеток,
мышей, способствует дифференциа- но через 72 ч происходит постепен-
ции КЧЖ-М у мышей и человека. Он ное исчезновение рецептора ИЛ-2 с
увеличивает образование ИФ и ФИО, поыерхности клеток. С момента на-
II Л-1, К( Ф-Г, а также медиаторов чала экспрессии ИЛ-2-рецептора зре-
воспаления (простагланднны, бакте- лые Т-лимфоциты активно пролифе-
рицидные кислородные метаболиты). рнруют в ответ на эндогенный или

29
ФИШ як у ия : я'и ii'(>1 и к УМ

пк uin.-iiiu.iii, синтезированный сами- Использование ЦИТОКИНа при и м -


ми мкчнами 11Л-2. I[ролнферация мунотерапии приводит к резкому
i яимфоцитов » присутствии и л-2 угнетению хемотаксиса пейтрофилов
мп/ксI поддерживаться длительно. [Klempner M. et al., 1990].
И отличие 01 зрелых Т-лимфоци- Интерлейкин-5. И Л - 5 — э т о белок
loii, (юл 1,1 II и и часть претим о цнтов с молекулярной массой 40 килодаль-
постоянно экспрессируют на своей тон. Ген цитокина расположен на
поверхности рецептор ИЛ-2, и эти длинном плече 5-й пары хромосом
КЛЛ к и споообны пролифернровать (5q31). ИЛ-5 секретируется Т-лимфо-
при внесении в культуральную среду цитами под действием различных АГ,
ИЛ 7 без предшествующей стимуля- форболэстеров и митогенов. Рецеп-
ции н и х клеток. ИЛ-2 также влияет торы этого цитокина (ИЛ-5Ра и
II;I дифференциацию 'Г-лимфоцитов. КСФ-ГМ(3) экспрессируются на В- и
11 редшветвеиники цитотоксических Т-лимфоцитах, эозинофилах. Раство-
пимфоцитов иод влиянием ИЛ-2 пре- римая форма рецептора ИЛ-5 была
врвщвются в зрелые эффекторные клонирована и охарактеризована
клетки. К действию ИЛ-2 чувстви- J.Tavernier и соавт. (1991).
i fin. и i.i также N К-клетки, которые ИЛ-5 играет центральную роль в
ПОД его влиянием повышают свою пролиферации, дифференциации и
пролиферативную и киллерную ак- функциональной активности эозино-
гиакость, способствуя лизису опухо- филов. Специфическое действие это-
iiL-Hi.ix клеток. При активации Т-лим- го цитокина на эозинофилы и гемо-
фоцитоа И Л-2 часть растворимой поэтически тесно связанными с ними
формы рецептора ИЛ-2 выделяется в базофилами регулируется выокоаффин-
крОВЬ, ПОЭТОМУ определение концен- ным рецептором на этих клетках —
грацми растворимой формы ИЛ-2 в ИЛ-5Ра. Линейно-специфическая ак-
крови может служить маркером сте- тивность этих элементов обеспечива-
iKiiii активации Т-лимфоцитов [Mat- ется cis-участком на этом рецепторе.
in г. С el al., 1998|. A.Iwama и соавт. (1998) установили,
Некроз и апоптоз таргетных кле- что R F X 1 , RFX2 и RFX3, относя-
IIIII происходят через иерфорин- и щиеся к семейству RFX-ДНК-связы-
I A S шписимые пути. ИЛ-2 индуци- вагощих белков, in vitro и in vivo
р у п (КОИроссию перфорина на л и м - образуют гомо- и гетеродимеры, ко-
||ич1И1;1ч и и сочетании с а-интерфе- торые специфически связываются с
рПНОМ ' I нмуипрует секрецию ФНОСС cis-участком ИЛ-5Ра, и эти RFX-бел-
н II'Ь/ и III;I4IIK-II].IIO увеличивает ки играют важную роль в генной
iKCiipei i ию п.i л и м ф о ц и т а х Ф Н О а - и регуляции гранулоцитопоэза.
11Фу ш 141К Пимфоциты, а к т и в и р о - ИЛ-5 активирует цитотоксич-
НИНЫ0 ИЛ .' upoi ин опухолевых кле- ность Т-лимфоцитов, индуцирует сек-
и т , ВЫЗЫВАЮТ пс ТОЛЬКО некроз, но рецию иммуноглобулинов, стимули-
п впоптоэ клеток-мишеней [Li С. et рует образование эозинофилов и ак-
al , 1998]. тивирует последние in vitro и in vivo.
11 ролиферацня и дифференциация Хотя цитокин дает синергический
It пимфоцитов в значительной степе- эффект на дифференциацию лимфо-
ни регу л и РУет с я ИЛ-2. Большая часть цитов, его влияние на рост и диф-
;ж I ивнрованных В-лимфоцитов экс- ференциацию клеток эозинофильно-
Прессируют рецептор ИЛ-2. Введение го ростка представляется специфич-
МП 2 обеспечивает способность В- ным.
пимфоцитов синтезировать и секре- Первоначально ИЛ-5 был иден-
i ИрОЯать иммуноглобулины [Mil- тифицирован как фактор, способст-
|« I), el al., 199»; Bagby G., 1994]. вующий пролиферации и дифферен-

Ю
//MU/IN I I

nun u инмфоцитов мышей. Одна- м о ч а . N.Peiclman и соавт. (1998)


г п
itn л и i'i иi4- (!.Sanderson и ооавт. установили, ч ] о цитокип регулирует
||UHft| \" l i l l K H l l U l l l , 4 1 0 ЦИТОКИН ДСЙ- егромалыюс микроокружение кост-
• II.I KJici ки-предшеотвенницы ного мозга путем уменьшения коли-
in iiiii>ii|iii[i()ii к о с т н о г о м о з г а , стнму- чества коллагена, однако неясно,
HMpVM их колоииеобраюнанис. Чело- каков механизм взаимодействия ИЛ-
i nii и М1.ШШШ.1Й ИЛ-5 гомоло- 7 с коллагеном.
i H'HiI.I L минимальным различием в
1
i и > in ii и сте и н о в ы х остатков
|AMIUII С с\ JII., 1986]. МНОГОЛИНЕЙНЫЕ ЦИТОКИНЫ
поскольку ИЛ-5, помимо своего
|НН и ним на (функцию лимфоцитов Эти цитокины либо индуцируют
1
i inn iificii i 1эмулировать образование репопуляцию гемопоэтических поли-
к* tiiH4i|)inH>it у человека в костномоз-
потентных клеток-предшественниц,
ультуре, активировать функ- либо стимулируют пролиферацию
ю шнофилов человека, то можно коммитированных к лето к-предшест-
рцн'рждап., что ИЛ-5 — это эозино- венниц с потенцией более одного
ростка (например, КОЕ-ГМ), либо
Интврлейкин-7. ИЛ-7 — это белок оказывают совместное действие.
t молекулярной массой 17-—25 кило- Многолинейные цитокины увеличи-
IIJfMoii. I сп ИЛ-7 расположен на вают весь пролиферативный потен-
N И пирс хромосом (8q). Цитокин циал всех костномозговых гемопо-
itflpii lyci ея стромальными клетками. этических клеток, на которые они
1''М.итр ИЛ-7 (ИЛ-7Р) экспрессиро- действуют. Однако поскольку поли-
и.i мегакариоцитах, В- и Т-лим- потентные гемопоэтические клетки-
(jtnuii iax, а также на миелоидных предшественницы дифференцируют-
' I ' l l 1 киетках-предшественницах, но ся, то большинство возникших в
импрессии ИЛ-7Р на этих клетках результате этого процесса дочерних
-тс, чем па В-клетках-предшест- клеток теряют способность пролифе-
ицах. Имеете с митогенами ИЛ-7 рировать в ответ на эти цитокины.
Miiin.iiiiaei активность Т-клеток, уве- К числу многолинейных цитокк-
и и чп пае i число аллоспецифических нов относятся КСФ-ГМ, ИЛ-3 и
цитотоксических Т-лимфоцитов, кло- ИЛ-П, ТПО.
iiinn.iM.iii рост пре-В-лимфоцитов, ин- ГрануломоноцитарныЙ колониести-
цупирует секрецию цитокинов мак- мулирующий фактор. КСФ-ГМ явля-
цофнгнми и периферическими моно- ется гликопротеином с молекулярной
iiiiтми, хотя не исключается возмож- массой 22 килодальтон. Ген челове-
ном ь, ч ю эффект на моноциты ческого КСФ-ГМ локализован на 5-й
опосредован другими факторами, ин- паре хромосом (5q23—31). Высоко-
пуцированнышз ИЛ-7 на лимфоид- аффинные рецепторы цитокина с
п I.I r it легки. По данным O.Blanehet молекулярной массой 130 килодаль-
и ооавт. (1995), цитокин влияет на тон обнаруживаются на нормальных
МЯ1Л0ПОЭЗ и частично на мегакарио- и лейкозных клетках миелоидпого
ЦИТОНОЭЗ. In vitro ИЛ-7 действует в ростка.
синергизме и ИЛ-3. ИЛ-7 играет Рецептор цитокина является гетс-
пгп I рАЛЬНуЮ роль в тимоцито- и родимерным протеином, состоящим
пимфоцитопоэзе. из а- и р-субъединиц. а-Субъединица
РОСТ и ди(|и|)ерспциация гемопо- контролируется геном, расположен-
ГТИЧККИХ КЛвТОК обусловлены ком- ным в области псевдоаутоеомпого
ПЛМОИЫМ 1Г(;(имо;(сйствием тгих эле- региона хромосом X и Y [dough N.
(
M9NT0I с микроокружеиием КОСТНОГО el al., 19 Л)|. (i-Субъсдиница является

If
нн
одновременно и |i i убъединицей ге- вание- КОЛОНИЙ и I К( И 1 AIM ВОИ
геродимерных рецепторов дин ИЛ-3 \> и KOB-Mtr.
и ИЛ-5, P2I-ГВ1, шляясь лигандом, Рскомбншш riii.iii человечески!
играет роль в передаче сигналов КСФ-ГМ in vitro может увеличивать
через ЭТОТ рецептор. Передачи КОЕ- образование колоний из КОЕ-Эо, а
ГМ-сигналов опосредуется цитоплаз- в комбинации с Эпо или ИЛ-3 —
ма i ическими тирозинкиназами |Л1- БОЕ-Э. В отличие от КСФ-Г КСФ-ГМ
Shami M. et al., [997]. На одной вызывает увеличение в перифериче-
клетке со держатся ОТ 50 до 1000 ской крови гранулоцитов и эозино-
рецепторов. Биологический эффект филов, увеличивает образование эо-
щ цитокина наступает при его свя- зинофильных колоний из гемопоэти-
зывании с 5—10% рецепторов. ческих клеток-предшественниц кост-
Источником КСФ-ГМ являются ного мозга, появление в крови эози-
моноциты-макро фаги, фибробласты, нофилов с высокоаффинными рецеп-
Т-Лимфоциты, эпителиальные клет- торами КСФ-ГМ, а также повышает
Mi. Современными методами не уда- антителозависимос убийство эозино-
втея определить содержание цитоки- филами.
м,| II сыворотке крови. Фагоцитоз и КСФ-ГМ не только способствует
i i имуляторы воспаления индуциру- образованию моноцитомакрофагаль-
Ю1 экспрессию т Р Н К КСФ-ГМ на ных колоний, но также контролирует
макрофагах через регуляторные ме- специфическую функцию моноцитов
канизмы. В процессе регуляции син- через индукцию транскрипции КСФ-
геэя КСФ-ГМ также вовлечены не- М и стимуляцию Fc-зависимого фа-
ко горые цитокины. Так, ИЛ-1 спо- гоцитоза тканевых макрофагов. Од-
собствует выделению КСФ-ГМ из нако КСФ-ГМ обладает очень сла-
мопопуклеарных фагоцитов, Т-лим- бой, почти никакой активностью в
фоциты, стимулированные ИЛ-1, сек- стимуляции КОЕ-Г и КОЕ-М. КСФ-
ретируют КСФ-ГМ, и это происходит ГМ оказывает физиологическое дей-
па уровне транскрипции гена [Нсг- ствие не только на гемоиоэтические
rman F, el al, 1988]. Н.Quill и соавт. клетки, но и на другие нормальные
(\i)W) установили, что простаглан- и трансформированные негематоло-
iiiii Еа |* синергизме с ИЛ-2 способ- гические клетки (клетки аденокарци-
ствует секреции цитокина Т-лимфо- номы, меланомы и др.). Стимули-
цитами. ФНОСХ, как и ИЛ-1, увели- рующая активность КСФ-ГМ урав-
чпвлг1 гранскрипцию гена КСФ-ГМ новешивается действием ингибитора
[Andreeff M. et al., 1989]. цитокина, выделяющегося из зрелых
К( !Ф-ГМ стимулирует пролифера- гранулоцитов [Pimentel E., 1990].
цию незрелых гемопоэтические кле- Рекомбинантный человеческий
ши п их дифференциацию с образо- КСФ-ГМ был первым цитокипом,
iiiiinn'M зрелых гранулоцитов и мо- внедренным в клиническую практи-
ппмуклеаршлх фагоцитов. При до- ку. При его подкожном введении
бавлении КСФ-ГМ в агаровую куль- период полужизни препарата был
гуру гем о поэтических клеток обра- двухфазным с Т'/г менее 5 мин и Т'/г
[уюкгя КОЕ-ГМ; если же удалить до 150 мин. После подкожного вве-
н о т ЦИТОКНН, то наблюдается нако- дения содержание цитокина в сыво-
пление клеток-предшественниц КОЕ- ротке крови {более 100 нг/л) наблю-
ГМ и фазе Gi, а если вновь добавить дается в течение 15—30 мин, но этот
и среду КСФ-ГМ, то происходит показатель вариабелен и зависит от
прогрессивный переход клеток из введенной дозы. Так, при дозе
фл (1,1 О] и фазу S с log-периодом 10 мкг/кг содержание цитокина в
10 ч. КСФ-ГМ стимулирует образо- сыворотке крови более 1 мкг/л со-
tt:Mt>IH>-U

I'.IIIHпся более 12 ч, i. в. ни roi фитропоэз [Zermati Y. el al., 1997].


pDiiciii», который поддерживает про На ранних БОЕ-Э наблюдается экс-
нифсрацию гемопоэтических клеток- прессия Вс1-3 (протоонкогена), и по
иредШсствснниц in vitro [Cebon J. et мере созревания этих клеток уровень
.1 1988], экспрессии этого протоонкогена сни-
Помимо эффекта на клетки-пред- жается. Вс1-3 вовлечен в процесс
iiicct нении цы гемопоэза, КСФ-ГМ пролиферации, но не дифференциа-
ИЛИЯС1 it на зрелые клетки. Так, ции эритроидных клеток, и КСФ-ГМ,
цитокин увеличивает фагоцитоз бак- как и Эпо модулирует локализацию
Герий и кислородный метаболизм Вс1-3. Ядерная Bcl-З участвует в
Ней i рофилов, стимулирует тумори- транскрипционной регуляции kb-co-
цидность моноцитов периферической держащих генов, вовлеченных в ге-
|рови. КСФ-ГМ непосредственно мопоэз, включая c-myb [Zhang M.-Y.
inui пуст па зрелые нейтрофилы, et al., 1998].
образование последними ИЛ-1, уве- Лечение рекомбинантным КСФ-
личивает образование AT В-лимфо- ГМ больных со злокачественными
цитами, вместе с ИЛ-2 стимулирует новообразованиями (раковые заболе-
рост Т-лимфоцитов [Al-Shami A. et вания, саркома, лейкозы и др.), МДС
ll., 1997]. укорачивает у них период лейкопе-
В условиях in vitro под действием нии в постхимиотерапевтический и
КСФ-ГМ активность неитрофилов у пострадиационный периоды с одно-
Вольных СПИДом повышается. При временным увеличением в перифери-
•ведении этим больным рекомби- ческой крови содержания КОЕ-ГМ и
нантного КСФ-ГМ у них увеличива- БОЕ-Э. Рекомбинантпый цитокин по-
ЮТСЯ цитотоксичность, секреция вышает кислородный метаболизм
ФНО и ИФ моноцитами перифери- неитрофилов и образование суперок-
ческой крови [Wing E. et at, 1989]. сидных анионов, число неитрофилов
Введение больным рекомбинантного и моноцитов в периферической кро-
цитокина может корригировать на- ви, активирует моноциты с одновре-
рушение функционирования нейтро- менным увеличением этими элемен-
филов (фагоцитоз и внутриклеточ- тами ФНОа и ИФ [Jawson M. et al.,
ную киллерность) с одновременным 1990].
повышением числа неитрофилов в Лечение больных АА КСФ-ГМ
периферической крови, хотя и без (по 60—500 мкг/м2, 2 раза в неделю)
клинического улучшения [Groop- увеличивало число лейкоцитов в пе-
man J. et al., 1987]. Цитокин активи- риферической крови в 1,6—10 раз,
рует экспрессию ВИЧ-1 провирусно- неитрофилов — в 1,5—20 раз и мо-
го гена в латентных инфицированных ноцитов в 2—32 раза. Как правило,
мопонуклеарных фагоцитах [Bag- в костном мозге увеличивалось со-
by G., 1994]. отношение М : Э, но постоянного
БОЕ-Э имеют рецептор для КСФ- эффекта не наблюдалось [Vadhan-
ГМ, который утрачивается на стадии Raj. S. et al., 1988].
зрелых БОЕ-Э и эритробласта. КСФ- Цитокин способствует выделе-
ГМ стимулирует пролиферативную нию из плазматической мембраны
активность БОЕ-Э, способствует диф- клеток арахидоновой кислоты в те-
ференциации этих клеток до стадии чение нескольких минут, по-видимо-
эритробласта, но действие КСФ-ГМ му, за счет прямого действия на
проявляется в меньшей степени, чем фосфолипазу С и(или) протеинки-
11JI-3. Сочстанное использование назу С. Он увеличивает также адге-
КСФ-ГМ, ИЛ-3 и ФСК вызывает зивные свойства неитрофилов за счет
выраженный синергизм действия на увеличения экспрессии адгезивных

| Заказ №4(.2
ФИ:№>!Ю1ИН Ш'ИПЧЧН ' I \Л

молекул ('l)i Hi и CD 18, образование предшественниццх мислопозча на-


пвйкотриена u.i. который является блюдается высокая жсиреесия рецеп-
щи ибитором процесса миграции пей- тора ИЛ-3, а экспрессия этого рецеп-
грофилов, и вследствие этого нару- тора на СО34+-клетках-прсдшествен-
нг;п чей МОбИЯИЗАЦИЯ licit I рофилок В ницах В-лимфоцитопоэза выражена
очи ;ix воспаления. умеренно [Waele D. et al., 1998]. In
S.Devereux и соавт. (1990) уста- vivo после внутривенного введения а
новили, что введение больным ре- Т'/г составляет 2,1 мин, а (3 Т7г —
комбинантного цитокина увелнчива- 10 мин [Tomlinson J. et al., 1993].
01 и плазме кропи содержание лак- Ген ИЛ-3 у человека располага-
iоферрина, ТК I и III, при этом ется на длинном плече 5-й пары
повышение концентрации тгих ве- хромосом (5q23—31) на расстоянии
щеотв было доэоэависимым. По- 9 килобаз от гена КСФ-ГМ, но оба
скольку лвктоферрин и ТК содержат- цитокина регулируются различно.
i'H ВО шоричпых гранулах нейтрофи- Хотя и КСФ-ГМ, и ИЛ-3 вырабаты-
901, ГО введение препарата может ваются различными клетками, но
Приводить К гипофункции нейтрофи- даже экспрессия генов на Т-лимфо-
jioit и спя ni с истощением содержи- цитах для ИЛ-3 и КСФ-ГМ регули-
ИОГО вторичных гранул. руется независимо друг от друга.
ВнтерлейкЕШ-З. ИЛ-3 является ИЛ-3 является гликопротеином с
фактором, влияющим на пролифера- молекулярной массой 14—28 кило-
кнк), дифференциацию и активацию дальтон. ИЛ-3 воздействует на поли-,
i еыопоэтических клеток-предшест- олиго- и монопотентные гемопоэтиче-
венниц путем прямого или косвен- ские клетки-предшественницы, на
нош вейотвия о образованием эрит- CD34+ —клетки костного мозга. Клет-
роидных, нейтрофилъных, эозино- ками-мишенями для цитокина являются
|||и и hiН.1.Ч, макрофагальных, мегака- КОК-ВПП, КОЕ-бласт, КОЕ-ГЭММ,
риоцигариых и базофильно-тучнок- КОЕ-ГМ, КОЕ-Г, КОЕ-М, КОЕ-Эо,
m п и ш и \ колоний. I(оскольку глав- КОЕ-Mer, КОЕ-Баз и БОЕ-Э; ИЛ-3
1 функцией цитокинв является стимулирует рост пре-В-лимфоцитов и
и in nine ил дифференциацию тучных клеток, увеличиваег экспрессию
i iшипим.iч клетик, го 1IJI-.1 еще на- КСФ-М на макрофагах. ИЛ-3 более
I ч пилииогентным КСФ. Одна- эффективен в поддержании колониеоб-
ни I |К)| п роли II 'I ' it регуляции, разования нормальных человеческих
MI MI i'h |>1н nit itnи, пролиферации гемопоэтических бластов в 21-дневной
К пм|н|м |1ГМШ111ММИ ПОЛИНОТСНТНОЙ культуре и для ретрансплантации кле-
I <I 'и I ih I > И ИСКСНЫМ, ток. Все это свидетельствует о том, что
111 сочником образования ИЛ-3 ИЛ-3 обладает широким диапазоном
являются I лимфоциты, гучные клет- влияния на различные клетки [Casade-
ки н клатки I ипп. Транскрипция vall N. et a t , 1995].
цитокина определяется в стромаль- Цитокин является потенциаль-
н I*I ч кдп квх. Физиологическим ин- ным фактором роста колоний, содер-
вуктивным активатором образования жащих базофильные и тучные клет-
ИЛ 3 является активация lgE-рецеп- ки-предшественицы. Он действует
II;I клетках. Рецепторами цито- как функциональный регулятор зре-
ЯВЛЯЮТСЯ Ot- и fi-цепочки, пере- лых эозинофилов и моноцитов. При
динццие сигналы внутрь клетки через ведении рекомбинантного ИЛ-3 мы-
активацию p21-ras, raf-i-киназу и шам у последних увеличивается в
гироэинкиназу. На одной клетке со- крови число эозинофилов в 10 раз,
цержатся от 100 до 1000 рецепторов а нейтрофилов и моноцитов — толь-
для ИЛ-Э, На ранних CD34^-клетках- ко в 2—3 раза.

34
II MOiHKKt

I.I и I HI своей поверхности не- порта гексозы, процесса гликолиза и


»vi ' рецептор для ИЛ-э, который содержания ЛТФ внутри клетки, но
pi рич икнется на стадии КОЕ-Э и это процесс обратим, если в культу-
ipiii роялиста. In vitro добавление ti ральную среду ввести ИЛ-3 до гибели
ФИШ'v»i культуру ИЛ-3 увеличивает клетки [Whetton A. et al., 1984].
|П|нппианис ЬОН-Э в 2—4 раза. Интерлейкин-11, Цитокин был
И|)фек1 IU1-3 па ранние гемопо- впервые выделен в 1990 г. Он оказы-
tni'Mi кис клетки-предшественницы вает плеотропное действие на многие
СПАТЬ усилен другими цитоки- клетки тканей. Первоначально этот
Щми MJI-1 и ИЛ-6. Сочетанное цитокин рассматривали как гемопо-
и> ниш. шнание ИЛ-3 и ИЛ-6 приво- этический цитокин с тромбоцитопо-
HII t К синергизму действия, вызывая этической активностью, но в настоя-
и. к i рофилеч мри миелосупрессии. щее время установлено, что он экс-
и,., h миг внутривенно ИЛ-3 и КСФ-Г прессируется и проявляет свою актив-
• I'H'.iM приводит к нейтрофилезу; ность на многие клетки тканей, вклю-
•и |м i 12 ч после инъекции в костном чая гемопоэтические, головного мозга,
Ион с резко уменьшается содержание нейроны спинного мозга, кишки и
||п и i.i х нейтрофилов, отмечаются яичек. Однако физиологическая роль
•• ним» плево клеток нейтрофильно- этого цитокина остается во многом
iи ряда и миелоидиая гиперплазия. неясной р и X. et al., 1997]. Ген
< (дионременно наблюдается резкое человеческого ИЛ-11 состоит из 5
•, ионьшение эритроидных, эозино- эксонов и 4 интронов, и расположен
•ильных и лимфоидных клеток-пред- он на хромосомах 19-й пары (19ql3.3—
ннгшенииц [Ulich Т. et al., 1990]. 19ql3.4). Молекулярная масса цитоки-
Помимо влияния на кинетику на равна 23 килодальтон.
Пролиферации и дифференциации ге- В различных культуральных сис-
Ito поэтических клеток-предшествен- темах ИЛ-11 стимулирует пролифера-
\u\\\, ИЛ-3 может влиять на выжи- цию стволовых клеток, полипотент-
ввемость и функцию зрелых клеток ных и коммитированных клеток-пред-
Ирпни. При введении in vivo реком- шественниц гемопоэза, полученных из
inMiaiinioro человеческого ИЛ-3 в различных источников, в том числе и
Периферической крови увеличивается из пуповинной крови и костного мозга
Количество пейтрофилов, эозинофи- [van den Ven С. et al., 1995], перифе-
10В, моноцитов, тромбоцитов и ре- рической крови [Sato N. et al., 1993].
Шкулоцитов, при этом, если после- Для стимуляции пролиферации раз-
цоввтельно назначать и рекомби- личных ростков кроветворения он
Нвнтный КСФ-ГМ, отмечается выра- действует синергично с другими ци-
кепный сипсргическиЙ эффект, При токинами: с ИЛ-3, ИЛ-4 и лигандом
мт-ипсунрсссии, нымаиной химиоте- FLT3, ИЛ-7, ИЛ-12, ИЛ-13, ФСК и
рапиеЙ, назначение рекомбинантного КСФ-ГМ [Jacobsen S. et al., 1995].
цитокина не вызывает заметного вос- В комбинации с ИЛ-3 или ФСК
I гановлеиия числа неигрофилов, но ИЛ-11 стимулирует пролиферацию и
увеличивается абсолютное количест- дифференциацию примитивных по-
10 базофилов и эозипофилов в пе- липотентных гемопоэтических кле-
риферической крови. ток-предшественниц, а также эритро-
Удаление ИЛ-3 из культуральной идные клетки-предшественницы па
1 роды клеточных линий, выживае- различных стадиях дифференциации.
МОСТЬ которых полиостью зависит от В отличие от ФСК и ИЛ-6 ИЛ-11
н иго ЦНТОКИНа, приводит к сниже- стимулирует пролиферацию БОК-Э
шип метаболизма и этих клетках — даже в отсутствие Эпо и способствует
уменьшается интенсивность транс- росту различных >ригроидных КОЛО»
35
ФИЗИОЛОГИЯ Э! 'И 1Г<>1 Н к), М

пин, включая клетки предшественни- цы мегакарионптопотш [Paul S. et


цы I' шоокой пролифервтивкой спо- al., 1990; Blanchet О. cl al., 1995].
i обноотью, образующих макроскопи- Первоначально ИЛ-11 был выде-
ческие колонии эритробластов. Сам лен из клеток гемопоэтического мик-
н о с е б е II-ii-ll п о д д е р ж и в а е т с о з р е - роокружения. Он может действовать
itiuiiii' К О В О [Quesniaux V. ct al., в этом гемопоэтическом микроокру-
1 11
I»' S6bafaoun Ci., 1998]. ИЛ-11 жении либо как аутокринный (цито-
шляется сиiюрi ическнм фактором кин действует на ту клетку, которая
лия ИЛ-3- или ИЛ-4-за висим ой про- его секретирует), либо как паракрин-
1ифервции примитивных гемопоэти- пый (цитокин действует путем кон-
ческих клеток-предшественниц. такта с мембранной клетки) фактор
А I ввту и ооавт. (1992) высказывают роста [Du X. et al., 1997]. При
предположение о том, что усиление длительном культивировании клеток
пролиферации гемопоэтических кле- костного мозга добавление в конди-
гок предшественниц связано с вхож- ционную среду ИЛ-11 значительно
дением О0-клеток в активный кле- повышает число адгезивных клеток
io4iii.ni никл и укорочением транзи- и увеличивает интенсивность гемо-
горного времени цикла деления [Та- поэза [Keller D. et al., 1993]. При
iiiika К. el al., 1995]. ИЛ-11 увеличи- культивировании клеток костного
и;кч ТИМИДИНОВОе самоубийство че- мозга больных с АА добавление в
повеческия фетальных, но не взрос- культуру ИЛ-11 и ФСК резко увели-
вого человека КОБ-ГЭММ, КОЕ-ГМ чивает образование адгезивных стро-
и БОЕ ' ( Он увеличивает содержание мальных клеток. Это обстоятельство
П ш им. 1х и комм и i иронаипых заставляет предполагать, что, воз-
i tMOiio 11 ичмкия юиток-предшест- можно, использование ИЛ-11 может
игнпнп ii итромально ассоциирован- быть полезным в лечении больных
ных культурах in vitro [1)п X. el al., Л А, у которых имеется дефект в
I 1 ' 1 '! Унии Y c., [995] микроокружении [Krieger M. et al.,
и 'I II модулируя дифференциа- 1995]. В. Schmitz и соавт. (1995)
цию >< uo'ipcHiuinu мислоидных кле- установили, что ИЛ-11 модулирует
in III-IIIHHI It комбинации мегакариоцитарно-зависимую стиму-
• M" I нмулируот образование ляцию фибробластов. Возможно, сле-
И I M.i J | • - M MU.'IIII.IS КОЛОНИИ, дует использовать этот цитокин у
ii|ii iti i н • одержи щих мис- больных с миелофиброзом, имеющих
i H I II И I I I.I I I| H I Д О - аномальный мегакариоцитопоэз.
' inn N среду ИЛ- Введение рекомбинантного ИЛ-11
I и in iM i mi ни миелобластов и после миелосупрсссивной терапии
i рмнушщкiun мож уменьшиться с предупреждает развитие тяжелой
M Miinii.lM уаС ЧСНИСМ I» K0J10- тромбоцитопении, а в сочетании с
M.IK|MH|I;II OH M.Cairo и соавт. КСФ-Г улучшает кинетику нейтрофи-
1УЧ4) vi'ii ii.iii.noi что при введении лов [Grupp S. et al., 1998].
новорожденным мышам ИЛ-11 + Тромбопоэтин. Первоначально
ф( К и КСФ-Г у них в перифериче- считали, что ТПО является главным
ской крови шачительно повышается линейно-специфическим фактором
число нейтрофилов. Цитокин инду- мегакариоцитоиоэза. Последующие
цируеп дифференциацию В-лимфоци- исследования показали, что он обла-
гов (Т лимфоцитоэависимую актив- дает плсотропной активностью и
но, м.) н вместе с ИЛ-3 колонисоб- действует на гемопоэтические клетки
разовАНИС мегакариоцитов. В еинер- разных стадий развития. Хотя уста-
гнчме с ИЛ-3 ИЛ-11 действует на новлено, что ТПО синтезируется в
очень ранние клетки-предшественни- печени, почках, селезенке и легких,

36
И МО/МЯЧ

• I in- MCHefl MCI к о р р е л я ц и и м е ж д у КОЕ-Мвг. Эти КОЕ-Мет и культуре


S | H 4 H H M и м п р е с с и и inl'IIK Т П О it ч и х тканей к 7-му дню культивирования
• • in щ н концентрацией цитокина в образуют колонии, состоящие из зре-
• ыиирпткс кропи или же числом тром- лых мегакариоцитов, тогда как фрак-
f lo/
юн и периферической кропи [Lok ция CD34 c-mpl ~-He образует коло-
i Bl., 1994; Stoffel R. et al., 1996]. нии даже к 14-му дню культивиро-
imuki н еоавт. (1999) установили, вания [Hagawara Т. et a l , 1998]. По
•ми 11К) образуется стромальными данным A. Grossi и соавт. (1997),
• itrtxiiMH костного мозга и играет клетки CD34 f костного мозга и
пивную роль в мегакариоцитопоэзе пуповинной крови отличаются раз-
роных людей и больных с ТТП. личным ответом на стимуляцию
и . и|нччч1я inPHK ТПО определяется ТПО. Это может быть связано с
п i фомальных клетках культуры [Gu- различным уровнем дифференциации
иin iи Л. el al., 1997], и она значительно и экспрессии рецептора ТПО.
юна на этих клетках больных с В культуре косгного мозга добав-
ЛЛ [Sungaran R. ct al., 1997]. У ление ТПО вызывает образование вто-
ццзровых людей содержание ТПО в ричных колоний КОЕ-ГМ и БОЕ-Э, и
ни и ш с крови составляет количество образующихся колоний
f ' ' I Ь8,2) нг/л, а в костном мозге — значительно больше, чем при исполь-
1-6,8) иг/л [Hirayama Y. et al., зовании только КСФ-Г или Эпо [Shle-
I *#*Ж I bak A. et al., 1998]. По мнению
Исследования, проведенные в по- C.Feldman и соавт. (1998), ТПО взаи-
. udiiiie годы, показали, что ТПО модействует непосредственно с ЭпоР
Иллется не только линейно-специфи- на клетках-предшественницах зритро-
•M'liiM ростовым фактором мегака- поэза, поскольку гликофорин А поло-
•Иоцитопоэза, но и обладает широ- жительные клетки не экспрессировали
ким диапазоном стимулирующей ак- c-mpl. Это способствует увеличению
1И1НЮС1И на многие гемопоэтические выживаемости и росту этих клеток в
шцчки-предшественницы. У ста нов ле- культуре костного мозга. Действие
N0, что жепрессия рецептора ТПО ТПО на эритропоэз частично проис-
ii inph очень важна в раннем гемо- ходит через JAK-2-опосредованную
щ i не. У человека около 70% кост- активацию ЭпоР [Takatoku M. et al.,
+
номозговых клеток C D 3 4 C D 3 8 ~ ~ 3 K C - 1998]. ТПО вызывает не только про-
Ироссируют c-mpl. Это указывает на лиферацию эритроидных клеток-пред-
ГО, что ТПО и его рецептор c-mpl шественниц, но и их дифференциацию,
МГракл важную роль в регуляции вплоть до конечной стадии, до Эр [Liu
ранних этапов гемопоэза. ТПО уве- W. et al., 1998]. После введения in vivo
ВМЧИвает пролиферацию и жизнеспо- животным (мышам, обезьянам) у них
I обность клеток CD34+CD38 ~ в куль- происходит экспансия КОЕ-ГЭММ,
Гурв [Solar G. et al., 1998]. ТПО в КОЕ-ГМ и БОЕ-Э [Solar G. et al., 1998.].
Изолированном виде или в комбина-
ции с e-kit лигандом, ИЛ-3 или flt-3
андом стимулирует пролифера- СИНЕРГИЧЕСКИЕ ЦИТОКИНЫ
цию ранних гемопоэтических клеток-
иредшественниц [Borge О. et al., 1997; Некоторые КСФ не способны
Plicibello W. ct al., 1997]. сами по себе вызывать рост гемоно-
Среди клеток CD34 + костного этических колоний, но их внесение
мчи а существуют 2 фракции — в кондиционную среду, содержащую
i I) M'c-nipl 1 и CD34 4 c-mpl l o / -. Фрак- другие цитокины, резко увеличивает
11*i•-1 i 1) M'e-nipl 1 содержит в боль- потенциал клопального роста гемо-
шим количестве 1ЮЕ-Э, КОЕ-Э и иоэтических клеток-предшестиеппиц.

37
ФИ:М( ин а ия . t)/ н). i IA

К чшлу СИ HOD 1 КЧМКИЯ ЦИТОКИНОВ них мнелоидпы.ч СО И*-клетках-


ошиеитси ФСК, IIJ1-4, ИЛ-6 и нши- предшественниц!X, чем ни ранних, а
npiiuii факюр лейкемии. жепрсесия 1того рецептора на
+
Ф)1К1О|) p o m столшш шапок, СО34 -клетках-11редшествепницах В-
ФСК (фактор роста тучных клеток, лимфоцитов более низкая [Walle D.
Sled factor, c-kit-лиганд) проявляет et a]., 1998],
снос действие при связывании с его Цитокин действует на гемопоэти-
рецептором c-kil. Источником обра- ческие стволовые клетки и клетки-
(Ованяя Ф С К ЯВЛЯЮТСЯ ш д о т е л и а л ь - предшественницы; он может дейст-
пые клетки и фибробласты, керати- вовать непосредственно на стволовые
НОЦИТЫ нормальной кожи, ЭПНТСЛИ- клетки, ускоряя их вхождение в
;uifii!i>ic клетки кишки [Lrncnberger M. клеточный цикл [Panzenbock В. et al.,
01 al., 1995; К Umbel G. et al., 1996]. 1998]. Но в основном ФСК действует
UJI-I и ФИО могут резко увеличить на клетки как ко-стимулятор других
образование протеина ФСК стро- цитокинов. Так, в сочетании с ИЛ-3
мальпыми клетками костного мозга. и другими факторами роста он уве-
Ген ФСК расположен на 12-й паре личивает в жидкой культуре число
хромосом (12q22— 12q24). У здоро- колоний из БОЕ-Э, КОЕ-ГМ, КОЕ-Г
ВОГО человека этот цитокин обнару- и КОЕ-ГЭММ в 20 раз [Bernstein I.
живайся в сыворотке крови в виде et al., 1991], а при других сочетаниях
растворимой и трансмембранной (ФСК + Эпо + ИЛ-1 + ИЛ-3) — в 200
форм. Обе формы являются биоло- раз [Brugger W. et al., 1993]. В
гически активными. В нормальных сочетании с Эпо, КСФ-ГМ и КСФ-Г
условиях у человека концентрация ФСК поддерживает рост колоний в
ФСК и сыворотке крови составляет полутвердых средах (КОЕ-ГМ, КОЕ-
к среднем 3,3 мкг/л. Мембранно-свя- Г, БОЕ-Э) [Broudy V. , 1997]. Внесение
форма играет более важное в кондиционную среду ФСК, ИЛ-7 и
и условиях in vivo, но ИЛ-9 способствует росту БОЕ-Э и
ая форма используется для КОЕ-ГМ, клоногенному росту пре-В-
исследований in vivo и in vitro лимфоцитов. Колонии, возникшие из
|l ingley К. el al., 1993]. костномозговых к лет о к-предшествен-
i k il HIM ВИД является лигандой ниц под действием ФСК в сочетании
i ч »i рецептора гирозинкиназного бел- с другими цитокинами, происходят
iui, кодируемого e-kit-протоонкоге- из менее зрелой популяции, чем
IHIM Рецепторы ФСК жепрессируют- колонии, возникшие только под дей-
01 HI iiроманi.iii.ix клетках, БОЕ-Э, ствием одного ФСК [Broxmeyer H.,
К(>К НИМ Рецептор цитокипа c-kit 1993].
обладает гирозинкиназной активно- Прямое ко-стимулирующее дейст-
'П.ю V МЫШей п человека на при- вие ФСК на гемопоэтические клет-
ми iiniiiux гвмопоэтических клетках ки-предшественницы человека было
i нрозинхиназного типа обнаружен доказано в опытах с использованием
еще один рецептор — flk-2 (Foetal чистой популяции гемопоэтических
liven kinase-2) либо его еще называют клеток-предшественниц, изолирован-
п[-} (Foetal liver tyrosine-3) и его ной с помощью AT к поверхностному
щи инд [Small I), et al., 1994; Casade- АГ CD34.
v;ill N. el a!., 1995]. БОЕ-Э несут Биологическая роль ФСК ограни-
рецептор для ФСК, но по мере чивается не только гемопоэзом, но
дифференциации эритроидных кле- он влияет и на оогенез. Существует
ГО1 НОТ рецептор утрачивается на порода мышей, у которых наблюда-
У|)овнс >ри i робластов. Более высокая ется мутация локусов Стиля (локус
экспрессия c-kit отмечается на позд- S1) и локуса W. Локус S1 ответствен
MOIK),);<

щ i ни и i белки фак гора С i иля, а Источником синтеза ПЛ-4 явля-


W 1л o-kit-рецептор. Мута- ются Т-лимфоциты, базофилы, луч-
iiiiн via SI ирииодш к отсутствию ные клегки. И Л-4 — это белок с
i))iiKiopa Стиля, а мутация молекулярной массой 15—19 кило-
,.ii W к отсутствию на поверх- дальтон. Ген цитокина располагается
М1п in клсюк e-kit-рецепторов. При па 5-й парс хромосом (5q23—31).
• ниш шжусов S1 и W у мышей Физиологическими индуктивными
I 1ЦЦ0Ю1 дна генетических мару- факторами образования ИЛ-4 явля-
• |цч i емопотза наблюдается ются IgE и митогены. Рецептор ци-
щ IM.III.III гемоноэз, гипопигмента- токина экспрессирован па моноци-
' hiifini и днегенеч половых желез. тах, макрофагах, базофилах, Т- и
11 М | 1 I имиплотной форме мутации В-лимфоцитах. Число рецепторов на
и (и I сини м i.i in и нежизнеспособны одной клетке колеблется от 100 до
uituiui внутриутробно или вско- 3000. ИЛ-4 отнесен к сипергическим
iHKiic рождения с проявлениями факторам на том основании, что
iiiiii макроцитарной анемии. Ес- лимфоциты становятся более чувст-
i i мыши являются 1 етерозигота- вительными к ИЛ-4 после предвари-
мн, in пни доживают до зрелого тельного воздействия па них других
Ни мни i.i, несмотря на наличие не- факторов.
Iточности костномозгового кро- ИЛ-4 способе] пуст пролиферации
\\\ пшрсьшн. У мышей линии SL / S1J покоящихся В-лимфоцитов, ПОВЫШЕ
III к образуется растворимая форма нию на них экспрессии 1а ЛГ и более-
ф( К, по ист трансмембранной) име- быстрому вступлению в фазу S юн-
• in желая макроцитарная анемия, точного цикла деления Т-лимфоцп
\ MI iii.iiiciio количество тучных кле- тов и фибробластон, ипдуцируе! СП
inh u 1'кипях, мыши стерильны и рецию иммуноглобулинов и ЭКСПрМ
in юн окраски. При мутации локуса сию рецептора ИЛ-2 на Т-ЛИмф0ЦИ
'.I v мышей наблюдается дисфункция тах. Под влиянием цитокина проис-
HIM i иомочговых стромальных кле- ходит экспрессия генов КС'Ф-М и
Мсмбрапная форма ФСК имеет КСФ-Г на моноцитах, ФНООС, ЛГ
Полыпее значение в поддержании гистосовместимости II класса
и м.мюпа, чем растворимая. Эти (МНС II) на В-лимфоцитах и моно-
« itiiii.iv- свидетельствуют о том, что цитах. ИЛ-4 потенцирует действие
•1м К in расг важную роль в течении Эпо на клетках эритроидного и ме-
Внутриутробного развития плода и гакариоцитарного ростков [Blan-
iiMiHitrna IBioudy V., 1997]. che! О. et al., 1995]. Хотя изолиро-
Интерлейкин-4. Цитокин известен ванно цитокин не обладает способ-
КМК С1' нмулятор В-клеток фактор 1. ностью воздействовать на колоние-
I li |пищ;|чалы10 он был идентифици- образование гемопоэтических клеток
йн па основе ко-стимулирующей человека, однако в сочетании с КСФ-
способности повышать иролифе- Г он усиливает образование колоний.
It-лимфоцитов в сочетании с При исследовании колониеобра
и 1ГМ-ЛТ [Oliver R. ct a l , 1985]. зующей способности клеток КОСТНОГО
II il I является высокоплеотропным мозга мышей установлено, что ИЛ-4
Цнтокином, действует на различные в синергизме с другими КСФ (Эпо,
ниш клеток как гемопоэтического, КСФ-Г, КСФ-М, ИЛ-1 и ИЛ-3) уве-
ПК и негемопоэтического происхож- личивает образование эритроидпых,
н пи», включая В- и Т-лимфоциты, мегакариоцитарных, гранулоцитар-
NK клетки, моноциты и макрофаги, ных, тучноклеточных и макрофагаль-
ГучНЫ! клетки, баюфилы, фибробла- ных колоний. Помимо сипергичееко-
I п.! и др, |I'uri R., 1995]. ГО стимулирующего влияния, ИЛ-4

обладав! и и in нбиторными свойст- <>. И И <* ЯВМЯСГСЯ 1 Л И -


ими, Цитокин дейст nyi-i как инги- копротеином о молекулярной массой
битор гвмопоэзя к смешанной куль- 21 26 килодальтон. I (ятокин играет
гурв стромальных клеток костного важную роль » координации систем-
мо (I и мышей. Он ингибирует проли- ной защиты организма от поврежде-
ферацию И лимфоцитов, стимулиро- ний. Он регулирует иммунный и вос-
||. (.1 ч 11 и 2, гормозит индукцию палительный процессы [Lotz M., 1995].
цитокинактивированных N к-клеток ИЛ-6 был впервые выделен из
II ннгибирует синтез ИЛ-1. Как и фибробластов человека. С помощью
п и 13. мл-4 II присутствии стромаль- технологии молекулярного клониро-
ных клеток задерживает образование вания было установлено, что ИЛ-6
остеокластов [Ikeda Т. el al., 1998]. идентичен факторам, прежде описан-
ми -I задерживает экспрессию таких ных как: ИФр2 [Seghal В. et al., 1980],
индуктивных факторов, как ИЛ-1 и фактор дифференциации В-клеток
ФНОо Ом непосредственно тормо- [Hirano Т. van et al., 1986], фактор
зит пролиферативный ответ лимфо- роста гибридом ы-п л азмацитомы
цитов в о I вет на митогены. ИЛ-4 [Danme J. et al., 1987], фактор акти-
действует как антагонист ИЛ-3 на вации Т-лимфоцитов [Garman R. ct
КОЕ 1")ММ и КОЕ-ГМ, задерживая al., 1987], цитолитический клеточный
рСХЯ моноцитарных и макрофагаль- дифференцировочный фактор [Га-
Ш.1Ч колоний и культуре костномоз- kai Y. et al., 1988], фактор роста
говых клеток человека, но в то же В-лимфоцитов человека, выделяемый
время он не задерживает роет КОЕ-Г, моноцитами [Tosato G. et al., 1988]
ВОВ Э и КОЕ-Э. и др. Источником образования ИЛ-6
IЛМ1М образом, in vivo ИЛ-4 являются фибробласты, моноциты и
проявляем себя как ингибитор обра- активированные Т-лимфоциты. Ген
микрофагов и лимфоцитов. ИЛ-6 расположен па 7-й паре хро-
и ;i А действует как фактор, спо- мосом (7р21—-24). Ген цитокина экс-
м inviniiiiiii дифференциации моно- прессировап на различных типах
iii и клеток предшественниц мо- клеток и индуцируется различными
111, усиливая их акцессор- веществами, включая ИЛ-1, ФНОа,
нкгивиость и экспрессию CD 14. ФНОР, митогены и эндотоксин.
t культуре гклиеи клетки- Рецепторами для этого цитокина
нр! H I Mi I В Р ИIIMIii.i МОИОЦИТОПОЭЗЭ являются ИЛ-6Рос и gp-130, которые
1нф||.. р. мнивши и инки, и нрисутст- экспрессируются на стромальных
кс'Ф-ГМ и II Ч 6 Мод влиянием клетках, В- и Т-лимфоцитах, гепато-
11 'I -I ми клетках Паш epi анса, про- цитах. Ген а-цепи рецептора ИЛ-6
ш чшпмиич in моноцитов, увеличива- расположен на хромосомах 1-й пары,
ется (кспрессия СП1я м уменьшается а р-субъединица gp 130 является так-
iKCimeccHN Л1 ( 1 ) 1 4 [Rossi L. ct al., же (З-субъединицей рецептора лейке-
IW3] I Ikedl и соавт. (1998) уста- мического ингибиторного фактора
новили, что и присутствии КСФ-М (LIF) [Szpirer J. et al., 1991]. Более
ИИ I И МИ 13 индуцируют образо- высокая экспрессия рецептора ИЛ-6
вание гигантских многоядерных кле- отмечается на поздних миелоидных
ГОИ in МОНОЦИТОВ периферической CD 34+-клетках-предшествспницах,
кропи человека с последующей диф- чем на ранних, а экспрессия этого
ференциациеЙ тгих клеток в функ- рецептора на СО34+-клетках-предше-
ЦИОН1 т.ио зрелые остеокласты. Та- ственницах В-лимфоцитов более низ-
ким образом, ИЛ-4 и ИЛ-13 влияют кая [Waele D. et al., 1998].
ii.i ранние стадии остеогенеза из По своему действию на гемопоэз
1-1 in ГОВ. цитокин сходен с влиянием ИЛ-! и

40
H i ( i m биологическая активность этических клеток, цитокин оказывает
м.1 широки, ИЛ-0 и синергизме с и отрицательное действие, В культуре
II I A in vitro увеличивает пролифе- моноиуклеарпых клеток костного
пнпшную активность полипотентных мозга человека, которые были сти-
i i iTi ических клеток-предшест- мулированы КСФ-М и ФСК, добав-
им путем укорочения периода ление ИЛ-6 вызывало задержку об-
•... it у< пениях in vivo он укорачивает разования макрофагальных колоний
Hi |uiiMi восстановления костномозго- на 55—73%, т. е. в данной ситуации
кронстпорсния после облучения ИЛ-6 выступает как ингибитор про-
И (KM [Okano A. el а}., 1993]. Вместе лиферации макрофагов, действуя на
. м И \ пн стимулирует рост колоний относительно зрелые клетки-предше-
I <М Мог, КОЕ-ГЭММ и КОЕ-БОЕ-Э, ственницы, и образование ИЛ-6 зре-
и сочетании с КСФ-ГМ индуцирует лыми макрофагами может действо-
ншиеобразование гранулоцитов, а вать по механизму обратной связи
• I i Ф М рост колоний макрофа- [Clutterbuck R et al., 1997].
МИ1 II II 6 и сочетании с ИЛ-4 инду- F.Lin и соавт. (1997) наблюдали
IIMpyci пролиферацию Т-клеток, ко- популяцию мышей, у которых на
илииеобрашвание полипотентных клетках отсутствовали рецепторы к
I и гок предшественниц, секрецию ИЛ-6 и КСФ-Г. Авторами было
иммуноглобулинов В-клетками. В со- установлено, что при отсутствии ре-
ни с КСФ-ГМ способствует об- цептора к КСФ-Г у животных на-
|MI кнчшшо КОЕ-ГМ. Синергическое блюдалась хроническая нейтропения,
:• Iti гиие ИЛ-6 проявляется в сочета- а при утрате рецепторов к КСФ-Г и
i с ИЛ-1 и ИЛ-2-—увеличивается ИЛ-6 она была еще более выражен-
[юрация В- и Т-лимфоцитов, ной. По мнению F.Lin и соавт. (1997),
ышается цитотоксичность Т-кле- ИЛ-6 является независимым регуля-
Гаи In vivo цитокин стимулирует тором гранулоцитопоэза in vivo.
пЯрй'ювание тромбоцитов [Blanc- Ингнбиториый фактор лейкемии.
hll О. el al., 1995]. ИФЛ (LIF, Leukemia Inhibitory Fac-
Рекомбинантный ИЛ-6 не оказы- tor) является гликопротеином с мо-
IIел прямого влияния на гемопоэти- лекулярной массой 58 килодальтон.
4VI кие клетки человека, но он синер- ИФЛ является продуктом гена, рас-
ГИЧССКИ действует со многими цито- положенного на 22-й паре хромосом
i и ними, которые непосредственно (22q). Цитокин образуется активиро-
1ЛИЯЮ1 на пролиферацию гемопоэти- ванными клетками СМФ и стромаль-
Ческих клеток. В комбинации с ИЛ-3 ными клетками костного мозга [Wet-
II )1 6 индуцирует пролиферацию при- zler I. et al., 1991]. Физиологическими
ми i ивных гемопоэтических клеток- факторами, способствующими обра-
f Предшественниц, включая КОЕ-С. зованию ИФЛ, являются липополи-
11|ш добавлении в культуру костно- сахариды, ФИО и ИЛ-1. Рецепторы
Моэговых клеток ИЛ-3 и ИЛ-6 резко ИФЛ — LIF-Ra и gpl3O экспрессиро-
•ОЭрастает образование колоний, со- ваны на мегакариоцитах, макрофа-
* ГОЯЩИХ из бластов, и это может гах, моноцитах, гепатоцитах, эм-
бы I i> связано с укорочением Go — бриональных клетках и др. По сво-
Периода покоящихся гемопоэтиче- ему действию на нормальный гемо-
i ких клеток-предшественниц и, по- поэз и при лейкозе LIF близок к
ни димому, с вхождением этих кле- ИЛ-6 [Casadevall N. et al., 1995].
i * (-и и,1 \ элементов в митотический О биологической активности ци-
ЦИКЛ [Lot2 M., 1995]. токина известно мало, но достоверно
Помимо стимулирующего влия- установлено, что активность ИФЛ у
M;I колониеобразование гемопо- человека и мышей сходна. Цитокин

41
ФИЗИОЛОГИЯ

wwmi'шти-1 пролиферативную ак- количестве гемони и иче* к иг ci поло-


i i i l i n i i n i , ПОЛИПОТВНТНЫХ ГвМОПОЭТИ- вые клегки ivi периферической крови
Ч1чки\ клеток-предшественниц у че- для траисилапгации и ИНЫХ целей
помкК| уоилинеп MOI вкариоцитопо- [Gately M. et al., 1995].
и in vivo, индуцирует дифференциа- ИЛ-12 является одним из основных
цию iK-itKo uii.ix клеток у мышей и регуляторов функции Т- и N К-клеток.
человека, п имудирует резорбцию Цитокин повышает литическую актив-
кости, задерживает дифференциацию ность NK-лимфокин активированных
клеток эмбриональной карциномы киллерных клеток, секрецию ИФу,
jlingby П., 1994; Blanchet О. et al., стимулирует пролиферацию Т- и NK-
1945] клеток, цитолитическую активность
Интерлейкин-12. ИЛ-12 является Т-лимфоцитов [Manetti R. et aL, 1993;
гетеродимерным белком, состоящим Scott P. et a l , 1993].
щ двух дисульфидсвязанных субъе- ИнтерлеЙкин-9. ИЛ-9 у человека
iiniiin (|И0 и р35), имеющих моле- был впервые клонирован и иденти-
куларную массу 40 и 35 килодаяьтон фицирован как митогенный фактор
соответственно, Обе единицы струк- мегакариобластного лейкоза Y.Yang
гурио "и- связаны между собой, и их и соавт. в 1989 г. Впоследствии было
u-iiu у человека расположены на установлено, что мишенями для это-
|KI iiii.iх хромосомах: ген р40 субъе- го цитокина являются эритроидные
ЦИНИЦЫ расположен па 5-й паре клетки-предшественницы, Т- и В-
хромосом (5q31 q33), а ген р35 — лимфоциты, фетальные тимоциты,
ми 1-й паре (Зр12 3ql3.2) [Sieburth D. тучные и другие клетки [Donahue R.
К л\ , 1992]. Ко-жспрессия обеих цс- et al., 1990; Houssiau R. et aL, 1993].
un'Hiv 11)1-12 способствует образова- Ген ИЛ-9 расположен на хромо-
нию 1КТИВНОГО гегеродимера. сомах 5-й пары (5q31—q35), содер-
11II 12 образуется моноцитами и жит 5 эксонов и 4 интронов [Modi W.
цимфоцитами. Цитокин дала синер- ct al., 1992]. Молекулярная масса
IHMOCKHH |ффск1 с ФСК. И присут- цитокина составляет 16 килодаль-
MiuiH последнею in vitro он поддер- тон. Он образуется преимущественно
i и и .и I « n i p . i и ш . ч п н - МИСЛОИДНЫХ И СО34 н -клетками. Цитокин, обладая
м|м И и 11.ни||м.1\ колоний. При ма- плеотропным эффектом на тучные и
iiiiMiui и кондиционной среде ИЛ-3 и Т-клетки, проявляет свою активность
ИИ II пни ПН \ и ФСК ИЛ-12 через специфические рецепторы ИЛ-9
n. i пролиферацию мсгакарио- (IL-9R). IL-9R состоит из лигандос-
фшроидных и тучных клеток, вязанной а-цепочки (1L-9RCC) и IL-
пи HI ючииофилов, 1. е, и присутст- 2RY-ueno4KH [Sliva D. et al., 1998].
вии [фугиИ цитокинов ИЛ-12 может ИЛ-9 стимулирует пролиферацию
in |м 11. роль н pel уляции гемопоэза CD34+HLA-DR+CD33 --клеток, фрак-
[Ploemaohei R. et aL, 1993]. цию, где содержится большая часть
In vivo, KOI ДЯ мышам вводили БОЕ-Э и все КОЕ-Э, способствует
ИЛ-12, it КОСТНОМ мозге животных дифференциации КОЕ-ГЭММ. Цито-
уменьшалось количество НРР-, КОЕ- кин поддерживает выживаемость
ГМ-, БОБ-Э- и КОЕ-Э-клеток. Этот эритроидных клеток-предшественниц
факт указывает на то, что ИЛ-12 в культуре в отсутствие Эпо в течение
индуцирует мобилизацию как зре- по крайней мере 5 дней [Lu M. et
лых, так и незрелых гемопоэтических al., 1992]. Это указывает на то, что
клеток-предшественинц на перифе- в гемопоэтической системе ИЛ-9 яв-
piiin. Это действие ИЛ-12 может быть ляется специфическим регулятором
использовано в тех случаях, когда эритропоэза [Casadevall N . et al.,
необходимо получить и достаточном 1995].

4?
Им п< 1ЧШГММ.1, проведенные с re СИНТвЗИруЮТСЯ как боДЬШИв молеку-
мнп<> иическими клетками-предшест- лы-предшественницы с молекулярной
! • и и и ни ми плода и костного мозга массой 30 килодальтон, а затем они

Нфш'ных июлей, показали, что ци- расщепляются на малые формы, пеп-
• И.и ( M H l l t y C I CU'tpCIUlHHlO И р И - тиды с молекулярной массой 17 ки-
Iд>г. '). Волсе того, добав- лодальтон [Dinarello С. et al., 1991].
И1 Мишкина 11 культуру, содержа- Обе формы ИЛ-1 (ИЛ-la и ИЛ-1Р)
фс I л иьные гемопоэтические обладают той же самой биологиче-
и и предшественницы, вызывает ской активностью. ИЛ-1 образуется
пиршниш' KOli-ГЭММ и КОЕ-ГМ, многими клетками, включая моноци-
м<> >ы иктивность нс отмечается при ты и макрофаги, которые подверг-
и ЦО1ШИИИ клеток костного мозга лись действию эндотоксина, ИЛ-1,
Прошлых нюдей. Это указывает на КСФ-ГМ, ФНОа и ИЛ-2 [Neuhaus Т.
т . чiч спектр действия ИЛ-9 на et al, 1998].
i иi.iiыс i емопоэтические клетки- ИЛ-1 способствует экспрессии ре-
н|н 'IIIHTIиемпицы более широк, чем цептора на различных клетках для
ни клетки взрослого человека различных цитокинов, хотя сам по
IMiillmmk S. et al., l991;Renauld J.-C. себе не обладает стимулирующей
Й •!.. 1995]. активностью на гемопоэз. Рецептор
11)1 ') активирует пролиферацию ИЛ-1 экспрессирован на многих клет-
i у• iiti*i x клеток. Он действует как ках—на Т- и В-лимфоцитах, моно-
i nut-pi ист с ИЛ-4 при синтезе IgE и цитах, макрофагах, стромальных
UKi ивированными В-лимфоцита- клетках костного мозга, эпителиаль-
ио образование этих классов Ig ных клетках. На одной клетке >кс-
Hi происходит при отсутствии ИЛ-4 пресеируются от 100 до 500 рецеп-
JDutius IS. ct a l , 1992]. Цитокин торов [Pegoraro L. et al., 1988]. Для
III минует также плеотроиное дейст- ИЛ-1 существуют два типа рецепто-
ни i умные клетки и Т-лимфоци- ров—ИЛ-1Р1 и ИЛ-1Р11; оба типа
И.1, проявляя свою активность через рецепторов связываются с обеими
II «Ж ISIiva D. et a l , 1998]. формами ИЛ-1. Первый тип рецеп-
тора (ИЛ-1Р1) экспрсссируется на
Т-лимфоцитах, фибробластах и эндо-
ИНДУКТИВНЫЕ ЦИТОКИНЫ телиальных клетках, а второй тип
рецептора (ИЛ-1РП) экспрессируется
Индуктивные цитокины, или фак- на В-лимфоцитах и миелоидных клет-
Горы непрямого действия, иредстав- ках [Boraschi D. et al., 1991].
11ЧНН собой протеины, которые сти- Широкий диапазон активности
Мулируют гемопоэз in vivo и in vitro, ИЛ-1 обусловлен тем, что он вызы-
HU i,'|,1'мегиуя на него косвенно. Эти вает индукцию экспрессии ИЛ и
цитокины влияют на определенные генов КСФ на различных клетках
i петки, стимулируя их синтезировать (КСФ-Г, КСФ-ГМ, КСФ-М, ИЛ-2,
факторы, которые оказывают непо- ИЛ-3. ИЛ-6, ИЛ-7, ИЛ-8, ФИО и
i pi '.ид i ценное, прямое действие на других цитокииов). В большинстве
i •мопоэтические клетки. К числу случаев цитокин действует синерги-
индуктивных цитокинов относятся чески с другими цитокинами [Es-
п и 1 и ФНОа. trov Z. et al., 1995].
И и 11 рлейкин-1. ИЛ-1 существует ИЛ-1 индуцирует пролиферацию
• виде двух молекулярных форм — клеток-предшественниц эритропоэза.
ИЛ-Цх и ИЛ-lp, гены которых рас- Он вызывает экспрессию КСФ-ГМ,
подожены на 2-й паре хромосом КСФ-Г, ИЛ-1 и ИЛ-6 на стромальных
(.'.q!4). Первоначально эти молекулы клетках костного мозга. Он увеличи-

43
• I'll ilh>ih>ltl>i JI'HIPOIIO i \A

пролиферацию Т-лимфоцитов, roi клеточный ЦИКЛ) который более


предварительно подвер! нутых акти- резистлятви к ггучевому вочдействию
inuimi. nil I стимулирует освобожде- [Pegoraro L. et al., 1чхх|.
ния ЛК'М и способствует трапопдо- Фактор некроза онухоличх. Этот
irnii.i п и и т Mm рации нейтрофилов. цитокин образуется В-лимфоцитами,
Вмает! i ИЛ * ни действует синер- N К.-клетками, макрофагами, эндоте-
гичеехи на пролиферацию гемопоэти- лиальными клетками. Его молекуляр-
часких полипотентных клеток-пред- ная масса составляет 17 килодаль-
ннчин-иниц с увеличением образова- тон. Физиологическими индукторами
IIIDI колоний it 30 раз. Более того, в образования этого цитокина являют-
присутствии ИЛ-1 из этих же колоний ся липополисахариды, КСФ-ГМ и
удается ретрансплантировать клетки, ИЛ-3. ФНОа может индуцировать
но крайней мерс, дважды, что может образование ИЛ-1 эндотелиальными
указывать на то, что ИЛ-1 действует клетками, и в то же время оба эти
пи уровне примитивных гемопоэти- цитокина способны стимулировать
4to« и к клеток-предшественниц. синтез ФНОа эндотелиальными клет-
I Sohooley и соавт. (1987) в экспери- ками [Neuhaus Т. et al., 1998]. Ген
Mi'ii it- на мытах установили, что ФНОа располагается на 6-й паре
человеческий и мышиный цитокин в хромосом (6р) поблизости от боль-
культуре подавляет активность Эпо шого гистосовместимого комплекса
и стимуляции пролиферации клеток- МНС [Spies Т. et al., 1989]. На клетках
предшественниц эритропоэза, выде- имеются два рецептора для ФНО:
П9ННЫХ из взвеси клеток селезенки и ФНО-Ра и ФНО-Рр. Рецепторы ФНО
костного мозга. Это заставляет по- экспрессируются почти на всех клет-
лагать, ЧТО ИЛ-1 играет роль в ках тканей и систем.
МТОГенезе ЛЛ. ИЛ-1 способствует Как и ИЛ-1, ФНО обладает мно-
увеличению выживаемости гемопо- гими гетерогенными биологическими
м и'in-MIX клеток-предшественниц in свойствами, и совместно они способ-
vitro И MI vivo. ствуют экспрессии других подчинен-
и II I индуцирует созревание пре- ных генов, которые начинают функ-
И пимфоцитов, жепрессию рсцепто- ционировать как более специфиче-
I II П 2 пл клетках, стимулирует ские регуляторы гемопоэза и имму-
nftpn inn.iiiiii' простагландина Е фиб- нологического ответа на воспаление.
[M.inhii и м и , моноцитами и пейтро- Хотя ФНОа может непосредственно
филами, модулирует экспрессию ре- оказывать ингибиторное влияние на
цемтороа ГФР [Bagby О., 1994]. Ци- гемопоэтические к летки-предшест-
ЮКИ11 способе'] вуеп освобождению венницы, в то же время он может
i i Ф*1 М и КСФ-Г из эндотелиальных индуцировать экспрессию генов
i ш ink кровеносных сосудов челове- КСФ, и это его влияние превалирует
KI, i n фиброблвстов и стромальных над его влиянием как ингибитора
клеток костного мозга. Он стимули- гемопоэза. В особенности это отно-
pyei дополнительное выделение ИЛ-1 сится к лимфо- и гранулоцитопоэзу.
из эндотелиальных клеток сосудов, Цитокин индуцирует на клетках экс-
pQI улирует п р о л и ф е р а ц и ю ф и б р о б л а - прессию КСФ-ГМ, КСФ-Г, ИЛ-1 и
СТОВ. ЕСЛИ д о лечения м ы ш а м в в о - ИЛ-6. Он повышает митогениндуци-
дили цитокин, т о ж и в о т н ы е перено- рованную КСФ-ГМ экспрессию на
си им петальные д о з ы о б л у ч е н и я Т-лимфоцитах, выделение из клеток
[Neta К. el al., 1987]. В о з м о ж н о , ч т о КСФ-ГМ и КСФ-М in vivo. In vitro
ire связано с тем, ч т о ИЛ-1 стиму- ФНО дает ингибиторный эффект на
II и руст гемопоттические с т в о л о в ы е колониеобразование КОЕ-Э челове-
КЛеТКИ, способствуя их переходу в ка; это действие опосредуется ИФ|3

44
II МЧПП. И

ii и • 1 •,. которые действую! кепосред- тора плазминогена и эндотелиальных


. пи пни на КОЕ ') [Means К. е! al., клетках кровеносных сосудов, а так-
же индуцирует экспрессию ИЛ-3 на
чипt(/ ингибирует колониеобра- клетках, способствует трансмиграции
н инн пи- i ем о но:) 1 ичсских клсток- пейтрофилов через эндотелий венул.
М| icci пен ниц, индуцированных Вместе с тем ФНОа ингибирует
I ' -I» I ; и ю же время рост комми- пролиферацию клеток-предшествен-
i пришитых клеток-предшественниц, ниц миело- и лимфоцитопоэза, неко-
Иимулированных ИЛ-3 и(или) КСФ- торых линий лейкемических клеток.
I М, ii также более примитивных Вместе с ИФ цитокин задерживает
I DK НИИ увеличен при низких, но репродукцию некоторых вирусов. Он
и' иыеоких концентрациях ФНОа опосредует гемодинамический и ток-
irii L. et al., 1998]. В низких сический эффекты эндотоксина, уг-
Концентрациях (1 нг/л и меньше) нетает транскрипцию гена тромбо-
ф||()(Х является потенциальным си- модулина на клетках эндотелия кро-
lli'pi ическим стимулятором пролифе- веносных сосудов. Содержание
рации клеток CD34'CD38—; в более ФНОа резко увеличивается при сеп-
ш.н оких концентрациях начинает тическом шоке, и цитокин является
•появляться его ингибиторный эф- одним из главных медиаторов появ-
фск| на эти клетки. Этот эффект ления тяжелой сердечно-сосудистой
иносредуется через р55-рецептор дисфункции при этих состояниях
[Weeks S. et al., 1998]. Как отмечают [Neuhaus Т. et al., 1998]. В норме
it in оры, стимулирующий эффект содержание ФНОа в сыворотке кро-
Ф1Н)и исчезал при внесении в кон- ви менее 20 нг/л [Shirono 1С. et al.,
ЩЦИОнную среду анти-ТФРр AT. Эта 1995].
вифвзная реакция ФНОа заставляет
Полагать, что, с одной стороны,
1еЙетвие цитокина на клетки
1 1)34* CD 38—связано с косвенной Из представленных данных оче-
ВТИмуляцией гемопоэза при низких видно, что фактически все цитокипы,
концентрациях ФНОа, опосредован- обладающие гемопоэтической актив-
ною через аутокринное воздействие ностью, в действительности являются
ГФРР, а с другой стороны—с пря- многофункциональными. Определен-
MI.IM ппгибиторным эффектом, кото- ные КСФ оказывают доминантное
рос более всего выявляется при вы- действие на гемопоэтические клетки-
* оких концентрациях цитокина предшественницы определенного ро-
[Weeks S. et al., 1998]. ФНОа также стка кроветворения, но ни один из
ингибирует рост LTCIC-клеток [Rus- перечисленных цитокинов не дейст-
u-ii I,. 1998]. вует только на единственный росток
ФНОа стимулирует образование гемопоэза или же на определенный
фиброб ластами и нейтро филами тип клеток.
иростагландина Е, повышает цито- Как было сказано, КСФ-Г имеет
юкиичпоегь эозинофилов и макро- высокую степень специфичности на
фйгов, направленную против парази- клетки нейтрофильыого ростка, по и
т н п опухолевых клеток. Он инду- то же время in vitro он влияет ни
цирует экспрессию адгезивных моле- репродукцию примитивных гемопо-
кул на миелоидных и стромальных этических клеток-предшественниц,
клетках костного мозга, а также на Кроме того, цитокины, действующие
эндотелиальных клетках кровенос- на уровне клеток-предшествемниц,
ных сосудов. Цитокин повышает нередко активируют функцию дочер-
пк генсивность образования актива- них клеток этого же ростка. Напри-
ФП ЩЩНЧИЯ .Ч'ИП'Ши •

мер, КСФ ГМ стимулирует клоноген- шает сумму ш»11 активности каждого


иый poi i KO1 ГМ, ко он также отдельного фактора роста, го о таких
ак гивирует функцию большинства цитокинах говорят, что они синер-
гврминально дифференцированных гичны. Механизм синергизма может
фагоцито!, происходящих из КОЕ- быть различен. Так, некоторые сти-
1м нвйтрофилов, макрофагов, мо- муляторы индуцируют транскрип-
НОЦИ nut, Ю (ННОфИЛОВ. цию гена. Например, эндотоксин
Не обязательно, чтобы экспрессия индуцирует транскрипцию гена ИЛ-1
и»ч-\ К( Ф уiрвчивалась по мерс со- [Donnelli R. et al., 1991]. Другие
tpiiiKNi гемо по этических клеток- стабилизируют обычно нестабильные
предшественниц; связывание лигандов молекулы тРНК; например, ИЛ-1
преобразует полностью различный ко- увеличивает период полужизни КСФ-
нг'ми.ш ответ гемо поэтических клеток- ГМ и ИЛ-6-^mPHK [Elias J. et al.,
предшесгвенниц по сравнению с реак- 1990]. Третьи повышают трансфер-
мигп более дифференцированных до- фактор тРНК; например, эндотоксин
черних клеток. Иначе говоря, ответ увеличивает трансфер-фактор ФНОа
м,| i i имуляторы недифференцирован- mPHK [Han J. et al., 1990].
Н1.1Ч и дифференцированных клеток При изучении биологической ак-
будет значительно отличаться. тивности цитокина in vitro клетка-
Действие цитокинов на рецепто- ми-мишенями могут быть либо клет-
I м.1 может быть двояким: в одних ка, которая функционально исследу-
случаях одни цитокины связываются ется, например КОЕ, либо клетки,
I рецептором клетки-предшественни- которые могут быть индуцированы
11ы ним ее потомством, посылая зтим цитокином и которые образуют
биоло] ический сигнал непосредствен- соответствующие белки, непосредст-
но и пи к петке; в других случаях венно способствующие колониеобра-
цитокины гакже прикрепляются к зованию. Эти клетки называют «ак-
и им же рецепторам и к этим же цессорными» или «вспомогательны-
i• и. жам, чтобы заставить эту клет- ми» клетками, и они всегда присут-
KV мн it секретнровать различные ствуют в системах для колониеобра-
им им. и и и Например, К< 'Ф-ГМ ин- зования. Обычно с течением времени
ityiiHpytri иейгрофилы секретировать как in vitro, так и in vivo такими
ttpyiни Мишкины, и один из них — клетками становятся дочерние и по-
н 'I i способен индуцировать экс- томство клеток-предшественниц ге-
I'.i I'MMiiii.ix д о п о л н и т е л ь н ы х мопоэза. Например, появление про-
пиии.мпин. I о отмечается как бы моноцитов и моноцитов в макрофа-
i н i ид продукции цитокинов. Это гальных колониях способствует об-
nfti иш i fin.с inn следует учитывать разованию таких цитокинов, как
при интерпретации полученных дан- КСФ-Г, КСФ-М, ИЛ-1, ИЛ-б, ФНОа,
ных in vivo Это же следует учитывать поэтому нередко биологический эф-
при назначении больному определен- фект того или иного цитокина труд-
ного рвкомбинантного цитокина, так но распознать как in vitro, так и при
кви иод действием назначенного ци- применении рекомбинантных цито-
Г0КИН1 может быть индуцирована кинов in vivo. Однако известно, что
выработка одного или нескольких ИЛ-1 и ФНОа способны индуциро-
нежелательных цитокинов, способст- вать экспрессию множества генов
вующих росту злокачественных но- цитокинов, хотя в действительности
ЮОбразованиЙ [Levy Y et al., 1991; этого не происходит, так как перво-
Segawa K. ct al., 1991]. начально они вызывают экспрессию
Когда суммарная биологическая только одного гена фактора роста
IK1 квность двух цитокинов превы- иерархии. Например, центральную

46
// М1ЧНИ {

pel yiDiiuiii гемопоээа в воспалии сутки составляет (0,85...1,6)х109/кг


чтим ответе играют 2 цнтокина массы тела, li течение 1 ч число
и li i и ФНОа. После возникновения вновь образующихся 1
моноцитов со-
• i и 1 воспаления в организме сразу ставляет 0>1х\0 /кг массы тела, а
щ ПРОИСХОДИТ экспрессия на клетках общий пул этих элементов в пери- 7
II И I и ФМОи. Продукты этих ферической крови составляет 8х10 /кг
I енов вызывают экспрессию массы тела. В течение9 суток у взрос-
i ^ nun рачличных ИЛ и КСФ, которые лых образуется 1x10 гранулоцитов
i ки'1 источником ответа на воспа- на 1 кг массы тела.
N миг ИЛ-1 последовательно стиму- Количество образующихся Эр за-
ПИруеп многие гены цитокинов. Кро- висит от возраста. К моменту рож-
-I' мни, и ответ па воспаление уже дения ребенка суточная продукция
ц ранний его период увеличивается Эр составляет 2,5—3% от общей
ими гнонная экспрессия гена ИЛ-1. массы циркулирующих Эр, или
Увеличение последнего может быть 1,3 мл на 1 кг массы тела ребенка.
Объяснено двумя механизмами: соб- В последующие периоды детства об-
| i юнным продуктом гена или же разование Эр уменьшается до 0,2%
<• ч 1мн, которые являются продук- к 5-му дню жизни и до 0,1%—-к
|пм индуцированного гена ИЛ-1. 10-му дню жизни. К 3-месячному
l .и им сигнальный амплификацион- возрасту продукция Эр составляет 2%
iii.iH механизм может быть либо от общей массы Эр и на этом уровне
Вутокринным, либо паракринным, сохраняется во все периоды детства.
• ним) н тем, и другим. У взрослых в сутки Эр образуется
(2,5...3)х109/кг массы тела.
Тромбоцитов в сутки образуется
9
I ОМЕОСТАЗ ГЕМОПОЭЗА 2,5хЮ /кг массы тела.
Из приведенных кратких данных
Дня поддержания гомеостаза ге- становится очевидным, что в нор-
НОЛ о эти ческой ткани очень важен мальных условиях костный мозг здо-
Контроль за пролиферацией и диф- ровых людей выполняет колоссаль-
фгргициацией в течение созревания ную работу, чтобы компенсировать
1i-моно этических клеток-предшест- гибнущие клетки периферической
ЮНМИД. Регуляция этих процессов крови, сохранить устойчивое равно-
обеспечивается благодаря сбалапси- весие. В поддержании гемоноэтиче-
роввнию стимулирующих и ингиби- ского гомеостаза большой вклад вно-
м'ршлх сигналов. Кроме того, цито- сит популяция гемопоэтических ство-
кипы оказывают различное действие ловых клеток, зрелых акцессорных
ми цикл деления клеток, дифферен- клеток и целый набор гуморальных
цирующую способность последних, регуляторов процесса кроветворения.
Которая зависит и от концентрации Гемопоэз начинает развиваться у
ЦИТОКИН&, и от клетки-мишени, на эмбриона в течение первых недель
которую они действуют. гестации, и в последующем актив-
Тотальный пул нейтрофилов пе- ность кроветворения увеличивается
риферической крови составляет (см. раздел «Кроветворение в период
(3|1...6,5)х108/кг массы тела, и каж- внутриутробного развития»). Здесь
ii.i м час около 10% тотального пула мы хотим лишь подчеркнуть, что у
пси I рофилов покидают сосудистое эмбриона и плода обнаружены гемо-
русло, Общий кругооборот нейтро- поэтическая стволовая клетка, поли-
филов за I ч составляет 2,2x107/кг потентные и коммитированные клет-
массы тела, а и сутки — l,KxiO /Kr ки-предшественницы, как и у людей
lo

МВССЫ тела. Продукция нейтрофилов в постиатальпый период, но по своим

47
•чптчнчия
ФУНКЦИОНАЛЬНЫМ свойствам они не- вый клон гемоио'иических клеток, и
с к о л ь к о рл uiii'iiiiiiu'H, Т а к , р о и БОЕ- в сущности они практически на 100%
i in vitro Hi костномозговых клеток обеспечиваю! устойчивый i емопоэз
взрослых людей происходит » при- [Jordan С, el al., 1490J. ' ) I O T ф е н о м е н
сутствии ''и** и обямтельно второго клоналыюй последовательности хо-
витокина (КСФ-ГМ, ИЛ-3 или ФСК), рошо согласуется с гипотезой о смене
ГОГД1 UK ДЛЯ пЬрлижлмпи колонии «гемо поэтических клеточных пла-
III JTHX ЖС КЛСГОК, ИЫДСЛСИНЫХ ИЗ стов», которая наблюдается на про-
iii-'ii-ini эмбриона или плоди, доста- тяжении всей жизни организма [Во-
гочно только одного Это, Эмбрио- робьев А.И. и др. 1985]. Иначе
inun.Hi.ic БОЕ-Э, в отличие от тахо- говоря, в течение жизнедеятельности
пых взрослых людей, резистентны к организма один клон гемопоэтиче-
кмгмбиторному эффекту ФП()у [Mig- ских стволовых клеток «стареет» и
r.li.u'io Л. et al., 1998]. В колоииеоб- погибает, а его место занимает новый
рвзующих культурах костного мозга клон.
Взрослых людей сипергические свой- Однако до сих пор остается от-
0ТВ1 ФСК и Эпо па рост КОЕ-ГЭММ крытым вопрос: можно ли этот фе-
ПРОЯВЛЯЮТСЯ минимально, тогда как номен, наблюдаемый при ТКМ, пе-
кффекп синергизма максимален ренести на нормальный, устойчивый
изучении взвеси клеток из печени гемопоэз. К сожалению, до сих пор
Плода и этой культуре [Рарауаппоро- нет ясности в деталях регуляции ГСК.
nloii T, ci al., 1991]. Существующая стохастическая тео-
Дли гемопоэтнческих стволовых рия пытается дать объяснение, как
к ЦП пк характерна 'так называемая происходит регуляция процессов са-
клоквльная последовательность, сущ- моподдерживания и коммитирования
КООТЬ которой состоит в следующем. стволовых клеток. Согласно этой
I . ни i гволовые клетки, маркирован- теории, процессы самоподдержива-
т.II ретровирусом, внести летально ния и дифференциации стволовой
облученным реципиентам, то оспов- клетки происходят стохастически.
IUHL МВОМ I СМОПОТТИЧССКИХ СТВОЛ0- Итогом пролиферации и диффе-
1П.1 Ч 1ЧЦЦЩ СОСТОИТ ИЗ 1 ИЛИ 2 КЛОНОВ. ренциации стволовой клетки являет-
tiiHi.Mi некоторые ич них, находя- ся появление дочерних клеток, при
щ и е И II "I CMUIIO VI ИЧССКОЙ ПИШС», этом обе последние могут быть либо
iivivi активными для рспопуляции коммитированы в сторону одного
И Kin I urn о мо и и и необходимое гемопоэтического ростка, либо в ре-
время У of dan C. et al., 19'Л)]. Этот зультате асимметричного деления од-
i|icii4Miii, при котором среди миоже- на из дочерних клеток становится
1
i iни ми 1nu i(iMI.ко I или 2 клона коммутированной к леткой-предшест-
и к к м i n n и пк i и ни I.I ми, п через неоп- венницей, вторая — полипотентной
радалениый промежуток времени по- клеткой-предшественницей. Этот фе-
яннякчеи другие активированные номен называется квантовым мито-
кмпки, называется феноменом кло- зом [Ogawa M. et al., 1989].
и.iMI,пои последовательности (непре- Какие же механизмы и геномы
рЫВНОС]и, преемственности). регулируют этот квантовый митоз?
I [одтверждением существования Если учесть «константность генома»,
кого феномена служат данные при то значит регуляция осуществляется
изучении гемопоэза в долгосрочных с помощью подвижного генетическо-
культурах in vitro, при транспланта- го контролирующего элемента, кото-
ции меченных ретровирусом гемопо- рый, двигаясь по геному клетки,
пических клеток: через А—6 мес по- включает и выключает соответствую-
' на гр»нсплантации появляется но- щий ген пролиферации или ген са-

48
• i. цдерживиния, Однако существу- i положительной реакцией на щелоч-
щ мнение, согласно которому регу- ную фосфатазу. Стволовые клетки и
Мини гемоиоэза ми уровне родона- клетки-предшественницы миелоидного
4inii.in.i\ I смопоэтических клоток- ряда концентрируются в подкорковой
И| есшепииц зависит от структу- области кости в гемопоэтических тя-
| ц и функции гем о поэтических ор- жах. Лимфоциты и макрофаги распо-
ншчи, и которых происходит проли- лагаются вокруг артериальных сосудов.
ф| |i шин и дифференциация гемопо- Строма костного мозга состоит
пимескнх клеток, т. е. от костномоз- из различных клеток, играющих важ-
MiiiiiH е т р о м ы и м и к р о о к р у ж е н и я . ную роль в кроветворении. Это
К концу внутриутробного разви- клетки эндотелия синусов и сосудов,
I и и основным гемопоэтическим ор- адвентиции, жировые клетки и фиб-
ыиим становится костный мозг, и к робласты, остеобласты, механоциты
Моменту рождения ребенка кроветво- и ретикулярные клетки. В окружении
••нис [фактически ограничено кост- (микроокружении) этих клеток рас-
(ii.iM мои ом, который является крас- полагаются кроветворные элементы,
Щ.1М У новорожденного ребенка объ- причем некоторые из них (моноциты,
ем костного мозга составляет 16,4— макрофаги, остеобласты) тесно свя-
•И.1' мл, т. с. (1,4+0,14)% от общей заны с ними.
мии i.i гела, или же по отношению О роли микроокружения в про-
I' общему объему скелета около 40%, цессе кроветворения образно выска-
и v взрослых объем костного мозга зался R.Barr (1988): дефицит гемопо-
0ОС! инляет 4,8% от общей массы тела. эза может быть связан либо с пер-
Приблизительно с 4-летнего возраста вичным изменением свойств гемопо-
и диифизах длинных трубчатых кос- этических стволовых клеток («зер-
ии появляются жировые клетки, объ- на»), либо с аномальным состоянием
VM и количество которых увеличива- состава тканей («почвы»), где распо-
ются, и в возрасте 16—18 лет крас- лагаются гемопоэтические элементы •—
ным костный мозг сохраняется ТОЛЬ- гипотеза «зерна и почвы». Эта гипо-
MI и костях с губчатым строением. теза хорошо обоснована классически-
Костный мозг располагается во ми моделями на животных.
IHIVI[К'пней части кости, разделенной Среди множества видов мышей
I рпбикулами с промежутками между существуют два вида, на примере
ними. Внутри костного мозга опре- которых хорошо обосновывается
1. имстся развитая синусоидальная со- роль «зерна» и «почвы». У мышей
•удистая сеть, а экстраенкусоидально генотипа W / Wv наблюдается абсо-
Р in- полагаются гем о по этические лютный дефицит гемопоэтических
клетки. Кроветворные клетки распо- стволовых клеток («зерна»), а у
н.п вются между синусами сосудов. мышей фенотипа SI / Sld наблюдается
>р 111 роидные элементы располагают- дефект етромы («почвы»). Хотя у
i | вокруг наружной поверхности мышей SI / Sld компартмент гемопо-
I осуди стых синусов в виде островков, этических стволовых клеток нор-
и круженных макрофагами. Внутри мальный, тем не менее в силу дефекта
пн\ островков располагаются менее етромы у этих животных не поддер-
фелые эритроидные элементы. Клет- живается нормальный гемопоэз, у
ки мегакариоцитарного ростка рас- них возникает анемия [Morrison-Gra-
полагаются на поверхности адвенти- ham К. et al., 1989]. Эти аномалии
iiiiii сосудов синусов. Гранулоциты были воспроизведены при долгосроч-
1 концентрированы в гемопоэтиче- ном культивировании клеток костно-
гкп\ тяжах вне сосудов синусов, го мозга этих животных. На этом
евпаны с ретикулярными клетками, основании была обоснована концеп-

N- 4(>2
ФИШ' -п. ЧИН Ч'НПЧЩО " I

IHUI, ЧТО КЛСТКИ КОСТНОГО МО1Г1 111,1,4 ф и ГОР! IHIV'IIU I I.I II Ч1ДОТС-
Ч1ЮТ01» II р^ГуЛИруЮТОЯ нпутрп об- лиальныЙ фактор рост Л (VliCiFA-
риомниЙ, содержащих структурные Л, VaeculaM EndotheUal Orowth Factot
и функциональные элемеи гы. ' кта Л) и плацентарный фактор роста. В
омстеме, поддершшюцдо кроитао- процессе дифференциации \>ритроид-
режнв) была нивам кммероокруже- ных клеток секреция этих факторов
нмем, индуцирующим крокеггаоре- >ритробластами увеличивается, и in
Кие» [Curry J. 9t al., l%7|. vivo они могут способствовать взаи-
Г ер мин «костномозговое окруже- модействию или с макрофагами эрит-
ние» это комплексное понятие, ко- робластических островков и(или) эн-
горое • ключает в себя |Nilsson S. et дотелиальными клетками сосудов.
al., 1998]: Это взаимодействие способствует
I) экстрацелдюлярную матрицу прохождению эритроидных клеток
( о с м е й с т в о к о л л а г е н а т и п о в 1, I I I , I V сквозь эндотелиальный барьер сосу-
и V , фибронектин, ламннин, глико- дов [Tordjman R. et al., 2001].
[фотеины, протеогликаны); Роль микроокружения в поддер-
.') ногемопоэтические клетки ко- жании процессов пролиферации и
СТНОГО мозга, называемые стромаль- дифференциации кроветворных кле-
11и ми (фибробласты, клетки эндоте- ток хорошо известна и обоснована.
пин сосудов, макрофаги, адипоциты); Гепарансудьфат стромальных клеток
3) субстанции, которые образу- и его экстрацеллюлярная матрица
ЮТСЯ (цитокины, молекулы адгезии). являются одним из компонентов мик-
Клетки микроокружения образу- роокружения гемопоэтическои ткани.
м\ специфические «пиши», которые Экспрессия гепарансульфата связана
иоддерживаю1 тесную связь с нахо- с клетками-предшественницами эри-
дящимися в них стволовыми клетка- тропоэза, и она происходит на ран-
ми * 'мы1 ы па мышах, проведенные нем этапе дифференциации эритро-
S.NUnon и соавт. (2001), показали, идных клеток [Just U. et al., 1998].
•ми после введения животным клеток In vivo пролиферация и дифферен-
uui i HOI n мозга наблюдалось нро- циация стволовых клеток обеспечи-
1 фиш Iценное распределение костно- ваются сигналами клеток микроок-
Монпиых моментов. Большая часть ружения. По данным J.Wineman и
I id ION приникали и костный мозг соавт. (S 996), в костном мозге суще-
ч о р е < I ' m lu-iii | i . н и . H I . I C с о с у д ы , а ствуют 3 стромальные клеточные
mi ом к шнисимости от фенотипиче- линии: 1) которые не поддерживают
i' "и принадлежности клетки они функцию стволовых клеток; 2) кото-
pai пр*дш1клись неравномерно. Кан- рые поддерживают, но на очень
•П1 I.MI.I II «стволовые клегки» селек- низком уровне; 3) которые обеспечи-
iiniiiii перераспределялись и их б ы л о вают высокую поддержку функций
иною I участке эндоста. Это указы- примитивных, длительно репопули-
atti ни го, что существуют эндостоа- рующих стволовых клеток. Однако
iii.li1 «пиши» I емопотгических ство- механизмы и стимулы, которые спо-
noiii.ix клеток. Линейно-коммитиро- собствуют образованию КСФ in vivo,
•ВННЫе И зрелые клетки селективно остаются неясными, хотя in vitro
перераспределялись из участка эндо- было установлено, что целый ряд
QTI и определялись преимущественно цитокинов продуцируются клетками
• центральной части костного мозга. микроокружения (ИЛ-1, ФНОа и
)|ш i pобласти синхронно созревали др.). Другим источником КСФ явля-
к »ри i poGjiaei ических островках. ются клетки, вовлеченные в воспа-
Установлено, что ">ритроидные лительную реакцию. Под влиянием
клетки экспрессируют два ангиоген- бактерий, эндотоксина, АГ и других
II МОИМИ

<| рон происходи! активация ми но, что ИЛ-1 является потенциальным


in MI и urn, макрофагов, эндотелиаль- ИНДуктОрОМ образования КСФ-ГМ и
Еця. клеток, и образошыгае этими КСФ-Г стромальными клетками, и
|А1 ючными элементами гвмопоэти- ИЛ-1 стимулирует образование КСФ-Г
>1м1и\ КС'Ф, которые действуют не в долгосрочных культурах костного
t .ко кик активаторы пролифера- мозга человека. Поскольку это так, то
ции гемо по этических клеток-прсдше- макрофаги под действием секретиро-
I гн иц, ко и как активаторы функ- ванного КСФ-М стромальными клет-
ции ирминалыю-диффсренцирован- ками образуют КСФ-ГМ либо вслед-
Имх клеток. ствие непосредственного влияния
I емопоэтические КСФ могут воз- КСФ-М на макрофаги, либо косвен-
" »)> имшать на клетки-мишени в сис- ного, через образование ИЛ-1. Эти
нме микроокружения, если их кон- данные указывают на то, что стро-
ni щриция достаточно высока. Одна- мальные клетки не являются источни-
ии I реальных условиях содержание ком выработки большого количества
I • Ф и циркулирующей крови крайне КСФ, хотя умеренное их образование
ми |кос или не определяется совре- может быть индуцировано.
мшиммн методами, и, учитывая, что Каким же образом стромальные
Нормальные клеточные источники клетки поддерживают микроокруже-
1 I 'I1 (моноциты, лимфоциты, эндо- ние, чтобы оно способствовало ли-
иип.ные клетки и др.) не выделя- нейно-специфической дифференциа-
ип КСФ, если эти клеточные элемен- ции кроветворных клеток? Предпо-
ii.i не стимулированы, то встает лагают, что стромальные клетки мо-
•опрос о роли и месте образования гут селективно адсорбировать КСФ
i ' Ф за пределами костного мозга и локально представлять его клет-
HI vivo. К этому же следует добавить, кам-мишеням. Об этом свидетельст-
•пи гемо по этические клетки-предше- вует тот факт, что КСФ-ГМ связан
•твенницы, культивируемые in vitro с клеточной матрицей компонентов
и отсутствие стромальных клеток, стромы. Следует также помнить о
Нежизнеспособны. Исходя из этого, том, что многие КСФ имеют широ-
Можно полагать, что стромальные кий спектр мишеней среди гемопо-
Клетки микроокружения костного этических клеток, и поэтому конеч-
ми чп нырабатывают небольшое ко- ный результат не ограничивается
ЧИчество КСФ для поддержания про- приложением только к одной линей-
лиферации кроветворных клеток- но-специфической клетке-мишени.
Предшественниц, или же, альтерна- На необходимость микроокруже-
ГИЯНО, цитокины образуются рези- ния для индукции кроветворения
и II гными костномозговыми клетка- указывают данные при изучении дол-
ми пли клетками в каком-то другом госрочного культивирования крове-
Месте, и КСФ концентрируются в творных клеток in vitro в системе
Микроокружении и представляются Декстера. В последней в течение
ремолоэтичеекнм элементам. По дан- длительного времени удается поддер-
iii.iM D.Zipori (1989), стромальные живать гемопоэз всех ростков кро-
клетки не экспрессируют гены КСФ- ветворения. В этой системе, наряду
I М, ИЛ-3 и КСФ-Г, но в то же время с гемопоэтическими клетками, вклю-
ни клеточные элементы секретируют чены компоненты стромы (фиброб-
небольшое количество КСФ-М. Эти ласты, макрофаги, эндотелиалыше и
данные объясняют, почему стромаль- ретикулярные клетки). Для поддер-
с клетки способны поддерживать жания миелопоэза в этой системе
it долгосрочных культурах костного очень важно наличие в ней адгезив-
мозга миелопоэз. Более того, извест- ных молекул.
Н'ИИ'ОНО Ч I

Клетки микроокружения ивляют- 111.1 мн КЛСТКИМИ iin i I- к i n n «I I HIM UX»


i щ иг га лыс о источником К( ч>, но происходя! (вмоподдерживиние сгво-
i |кжс образую! ряд компонентов ловых клетоя и кя дифференциация^
жотряцеллюляркоя матрицы. Неко- которые поддерживаются способно-
ropiit из них молекул, такие как стями и многими функциями стро-
фибронектик, коллагены, паммнин и мальных клеток. К ним относятся
гемоиектин, являются адгезивными •репрессия рецепторов, выработка
белками для кроветворных клеток, •жстрацеллюлярных факторов матри-
гогда как другие, например глико- цы, которые взаимодействуют как с
юамино] ликаны, играют главную ростовыми факторами, так и с фак-
[мни. в связывании и аккумуляции торами, которые способствуют диф-
ростовых факторов. Сульфат глико- ференциации клеток, происходит экс-
(мминогликана клеток стромы ко- прессия интегральных мембранных
СТНОГО мозга мышеи связывает КСФ- белков, которые действуют как юк-
I М и IIЛ-3 и представляет их в стакриновые факторы.
И i И1НОЙ форме гемопоэтическим Интегральные белки мембраны
Клеткам •предшественницам. Молеку- гемопоэтических стволовых клеток
и.i [аминина могут действовать как прикрепляются к белкам мембраны,
адгезивный субстрат для многих ти- экспрессированных на стромальных
IU)и клеток и играют важную роль клетках в гемопоэтических «нишах».
I пролиферации гемопоэтических Например, ФСК и его рецептор c-kit
i ICTOK. являются одновременно интеграль-
Ф;| к горы 1 кс грац ел л юлярной ным мембранным протеином стро-
Матрицы могут регулировать гемо- мальных и гемопоэтической стволо-
щ> it двумя путями: вой клеток. Взаимодействие продук-
I) факторы матрицы могут свя- тов этих двух генов обеспечивает, с
ШВВТЬСЯ V ГСМОИСУГИЧССКИМИ. рОСТО- одной стороны, связывание этих двух
III.IMN факторами, тем самым КСФ клеточных элементов, а с другой —
fly;iVi присутстиовать в оптимальных индуцирование сигналов для проли-
концентрациях и использоваться ге- ферации клеток. Так, у мышей по-
МОПО сгическими клетками. Молеку- роды Steel — Dickie имеется дефект
ч1.i матрицы могут связываться с микроокружения — отсутствует экс-
иш ибитпрцыми факторами крове- прессия мембранно-связанной моле-
ми »|>гмпи (фибршюктин связывается кулы ФСК, и у животных отмечается
. M'1'IW, нарушение процессов пролиферации
'I некоторые молекуль! матрицы и дифференциации ГСК. Такой тип
Muiyi ввтываться непосредственное контакта — зависимого фактора рос-
i i-Miiiin ч ическими клеткам и-предше- та клетка — клетка — называется
' п ш н и ц а м и , находящимися в «гемо- юкстакриновым [Braman С. et al.,
IKI и п'ич кип нише»; например КОЕ- 1991; Dainik N., 1991].
1'М с гемонекгином, КОЕ-Э с фиб- Гемопоэтические стволовые клет-
ронектином, i ромбоепондин с ран- ки и клетки-предшественницы могут
ними i емошптичсскими клетками* экспрессировать адгезивные молеку-
предшесп венницами [Siler U. et al., лы, которые взаимодействуют с бел-
2000]. ками мембан стромальных клеток.
При ипутривсиной инфузии кле- Адгезия гемопоэтических клеток-
ГОК КОСТНОГО мозга или стволовых предшественниц происходит либо не-
клеток эти 'элементы проникают посредственно к стромалышм клет-
СКВОЗЬ стенки сосудов синусов кост- кам костного мозга, либо к экстра-
ного мозга и оседают в так назьт- целлюлярной матрице [Dantel M. et
ВММЫХ нишах имеете со стромаль- al., 1997]. Клетки стромы являются

52
II MO/KM

Hi iочником необходимых факторов клеток и течение «хоминга» |N;ijcr Л.


i i Адгезия клеток позволяет ге- et al., 1998].
М.ПИ1 и и чески м клеткам находиться «Хоминг» гемопоэтических кле-
Вокально и среде с высоким содер- ток-предшествепниц в костном мозге
rioinin'M факторов роста, быть в поддерживается взаимодействием
iiiK'iu с трансмембранными КСФ этих клеток с гемопоэтическим ок-
i'1'i К, КСФ-М). Кроме того, матрица ружением, и центральную роль в
Млксгся резервуаром КСФ (КСФ-ГМ, этом процессе играют (31-интегрины.
II i| \, ингибиторов, ТФР(3). Эти меж- В адгезии гемо по этических клеток с
клеточные контакты (клетка — клег- экстрацеллюлярной матрицей участ-
• i клегка — матрица) происходят с вуют цитоскелетные белки (винку-
Помощью рецепторов-лигандов [Са- лин, талин, тензин, протеинкиназы и
ulrvi.ll N. el al., 1995]. др.), обеспечивающие передачу спе-
Механизм, лежащий в основе цифических интегрин-опосредован-
Мобилизации, и «хоминг» клеток ных сигналов [Levesque I. et al., 1998].
' DM1 в «нишах» костного мозга, ФСК и КСФ-ГМ увеличивают адге-
Недостаточно изучены. E.Weber и зию гемо поэтических клеток-предше-
шт. (1998) установили, что адгезия ственниц к фибропсктину через ак-
кitci'OK CD34+" может происходить тивацию интегринов VLA4 и VLA5.
Ц| |им молекулы ICAM-1 (CD59, внут- Y.Suehiro и соавт. (1998) установили,
риклеточная адгезивная молекула), что MIP-la (CD7H, хсмакин (^-под-
i иторая экспрессирована на эпители- группы) значительно увеличивает ад-
i иных, эндотелиальных и других гезивный фенотип CD341 гемо поэти-
клоках, и является лигандом для ческих клеток, выделенных из кост-
|'.' интегринов. Последние играют ного мозга и пуповипной кроки, но
роль и процессах адгезии и миграций не из периферической крови здоро-
1 [И гок, лежащих в основе «хоминга», вых людей. Этот эффект MlP-lu
Мобилизации клеток CD34*. В этих ингибируется AT, блокирующими ин-
i i процессах важная роль принадле- тегрины, происходит перестройка Ci-
жи i адгезивной молекуле VCAM-1, актина клеток, и все это указывает
1 влсктинам, экспрсссированным на на то, что появление адгезивного
шдотелиальных и других клетках фенотипа этих клеток-предшествен-
[Frcnette P. et al., 1998]. Из всех трех ниц опосредуется путем модуляции
Овлсктинав (L, Р и Е , CD62L, CD62P организации интегрина. Иначе гово-
и CD62E соответственно) только ря, модуляция адгезивного фенотипа
I селектин экспрессирован на гемо- клеток может влиять на их мигра-
110 ч и чески х клетках-предшественни- цию, «хоминг» и мобилизацию.
Ц1К, K.Sackstein и соавт. (1998) иден- Регуляция пролиферации клеток-
гифицировали неизвестный до этого предшественниц происходит при их
Времени L-селектиновый лиганд, ко- адгезии к клеткам стромы через
юрый интегрально связан с мембра- передачу сигналов (32-интегринами.
unii клеток-предшественниц гемопо- Как установил R.Bhatia (1998), кол-
мл, н высказали предположение, что такт клеток CD34+ со стромальпыми
(Т01 шпапд играет роль в опосредо- клетками резко уменьшает как число
шшнн L-селектинзависимой адгезии CD34 4 CD38-, так и CD34*CD38'-
чих клеток с клетками «ниши» ко- клеток, при этом пролифератишшя
i 1 но мозгового микроокружения. Е- активность клеток CD341 не увели-
Li' 10КТИН и его лиганд (ESL1), экс- чивается, так как содержание этих
црессированный па клетках СВ34+, элементов, находящихся в Go/Gi-
ИГрЯЮ1 критическую роль в процессе S-фазах клеточного цикла деления,
грансэндотелиальной миграции -)тих не изменялось. Одним из механизмов
ФИИИО1Ю1ИИ . М ' И / М )//(>. м л

pel уняцин i смопо 131 клетками 6Л()КИруК)1 КИШИМ СИП 1.1 И роСТ 'ЛИХ
роОКружеНИЯ МОЖИ бЫТЬ умен мне- клеток. ЭпиТОП ЮЗВ2ЛЖ10 жепрес-
ние впоптом клеток вследствие опо- сируется | | тябОЛМ примитивных
средованного ;i 111 КВПОПТОЭНОГО СИГ- СП34|-клстках-11ред1местиснпицах
inuni при адгезии кроветворных кле- (CD34io/~СО164{103В2/9Ы0)*), и эта
гок к отромальным. популяция в основном состоит из В-
It регуляции пролиферация и и эритроидных клеток. Экспрессия
дифференциации гемопозтических CD 164 на эритроидных клетках по-
клеток-предшественниц важную роль является раньше других специфиче-
кгряет и ТФРр. Последний является ских маркеров этих клеток-гликофо-
многофункциональным цитокином, ринов А и С и Band 3 [Watt S. et
который регулирует пролиферацию, al., 1997].
диффереренциацию и организацию Роль гемопоэтической стромы в
клеток различных тканей [Massgue J. процессе кроветворения подтвержде-
Ц ;il , 1995]. Действие ТФРр1 возмож- на клиническими наблюдениями. Де-
КО ЛИШЬ при наличии лигандов 1 и фекты индуцирующего влияния ге-
II типов. II тип рецептора на стро- мопоэтического микроокружения на
мальной клетке может связываться с кроветворение наблюдаются у людей
ГФ1'|1 непосредственно, тогда как I при облучении, врожденной и при-
inn рецептора может взаимодейство- обретенной АА и др. Трансплантации
вать с ТФРр только тогда, когда стромальных клеток в сочетании с
ТФРР связан со II типом рецептора гемопоэтическими стволовыми клет-
стромалькоя клетки. Как известно, ками способствуют регенерации ко-
1Ф1'(1 является регулятором синтеза стномозгового кроветворения. В раз-
цитокинов и цигокиновых рецепто- витие учения и роли стромальных
|нч1, адгезивных молекул, иотенци- клеток в кроветворении большой
.1 III.III.IM ингибитором пролиферации вклад внесли работы А.Я.Фриден-
it дифференциации ГСК, КОЕ-ГЭММ, штейна и соавт. (1980).
КОВ-ГМ, КОБ-М, КОЕ-Э, БОЕ-Э, Существуют несколько теорий от-
Которые стимулированы ростовыми носительно дифференциации ГСК.
фа К i прими, ТФ1'[3 ингибирует про- Согласно одной из них, гемопоэти-
ПИферацию И дифференциацию кле- ческие стволовые клетки имеют ре-
iпк ( 1) 1-ГС1НХ костного мозга. цепторы только для одного цитоки-
Поскольку стромальные клетки яв- на, и отсутствуют рецепторы для
им и>loi интегральным компонентом линейно-специфических факторов.
костного мозга и они способны Коммитирование гемопоэтических
i mi 11.1 mi t м и с ГФ1'(1, то в данном клеток происходит лишь после при-
мучая ГФРР сгромальиых клеток обретения стволовой клеткой линей-
мчж1-| оказывать выраженное влия- но-специфических рецепторов. Со-
ниг мл процессы регуляции и диф- гласно этой модели, клетки, комми-
ференциации кроветворных клеток тированные в сторону гранулоцито-
[RobledO М. cl ai., 1997; Weekx S. et поэза, будут экспрессировать на сво-
nl., IWS]. ей мембране не рецепторы к эритро-
И негативной регуляции гемопоэза поэтину, а только рецепторы КСФ-Г
ключевую роль играет муциноподоб- [Heberlein С. et al., 1992]. Согласно
КМ адгезивная молекула CD 164. Из второй модели, попипотентные гемо-
четырех МЛ CD 164 по крайней мере поэтические стволовые клетки экс-
дна МЛ из пих(103В2/9Е10и 105А5) ирессируют на низком уровне рецеп-
оказывают функциональное действие торы для многих цитокинов (много-
на клетки CD34+ костного мозга линейных и линейно-специфических),
человека : 103В2 / 9Е10 и 105А5 и в процессе коммитирования кро-
MOIHKKi

и, imipiii.ix клеток происходи! утратв дополнение к >тим ПОСТОЯННО ЗКС-


i .in кнства этих рвцвгп оров прессированным цитохннаы имеются
.[s.mili L et al., i w i | . ряд факторов роста, которые нахо-
Некоторые исследователи счита- дятся в состоянии прееиптеза либо в
itii, что В коммутировании пула цитоплазматических гранулах лейко-
им о и о этических стволовых клеток в цитов (КСФ-ГМ, ТФРР, ростовой
определенном направлении играют фактор, освобождаемый тромбоцита-
•олъ [шнейно-специфические КСФ. ми), либо они являются интеграль-
и Bagby (1994) высказывает гипоте- ными белками мембран (ФНОа,
iv, согласно которой в некоторых ТФРР), либо эти цитокины образуют
\i ипниях, например когда требуется комплекс с белками на поверхности
«сличение массы каких-то клеток клеток или с экстранеллюлярпой мат-
I )|i, нейтрофнлов, тромбоцитов и рицей (ТФР(3, ИЛ-8) [Massaguc J.
up ), полипотеытные стволовые клет- et al., 1993]. Этот пул непостоянно
| и будут прилагать все усилия, чтобы экспрессированных цитокинов очень
увеличить число дочерних клеток, важен для быстрой реализации отве-
Коммитированных в сторону образо- та организма па стимуляторы. По-
i>.11111м этих элементов. Этот пример следними могут быть различные ин-
кпмми гирования ГСК называется фекционные агенты (бактерии, виру-
киис I руктированием». Альтернатив- сы, грибы и др.), механически*!
но этой модели объяснения является химические, физические, ТОКОКЧМХИС
и у гая, предложенная M.Ogawa и другие стимулы. Кроме ими, но
(1989), согласно которой коммитиро- мимо классических Л Г, инфокцнон
и.нпн- ГСК может быть «стохастиче- ные агенты выделяют неспецифиш
ВХИМ», и чисто линей но-специфиче- ские, цитокининдуцирующие молоку
i мая амплификация возникает только лы, такие как эндотоксин.
| компартменте коммитированных Цитокины также потенциалкпо
i H I iwix-прсдшественницах, увеличи- индуцируют экспрессию других цп
вающихся в количественном отноше- токинов на многих клетках. Некото-
нии л ответ па повышение числа рые из этих цитокинов (ИЛ-!, ФИО,
щпн-йно-епецифических цитокинов. ИФ^) являются потенциальными ин-
11 о вопросу о линейной специ- дукторами цитокин-генной экспрес-
фичности гемопоэтических ростовых сии и относятся к так называемым
факторов с позиций биохимии суще- «противовоспалительным цитоки-
ОТВуют 2 объяснения. По одному из нам» [Corrigan С , 1997].
них полипотентные гемопоэтические Наряду с положительными сти-
Клетки должны экспрессировать на муляторами, существуют ряд медиа-
своей поверхности данный линейно- торов, которые ограничивают либо
i пецифический рецептор, но линей- предотвращают экспрессию цитокк-
но-специфический цито плазматиче- нов, либо ограничивают действие
ски и или ядерный набор имеют цитокинов. Классическим примером
i щи, к о клетки одного ростка. И ингибитора генной экспрессии щи о
т о р о с : клетки только одного ростка кинов являются глюкокортикоиды,
могут жспрсссировать ген для спе- которые широко используются в кли-
цифического КСФ. нической практике. Комплексный
11 L\ гемопоэтических клетках-пред- глюкокортикоидный рецептор при-
шественницах имеется постоянная экс- крепляется ко многим генам цитохм
прессия некоторых цитокинов — нов (ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-3, ИЛ-6, ИЛ-К,
ФСК, КСФ-Г, КСФ-М, ИЛ-6, Эпо, ИФу). Таким же свойством обладают
которые необходимы для поддержа- иммуносупрессорные вещества
нии постоянства гемопотш. По в (циклоспорин А, ранамицин и др.).
ипиинин :м*иI/•! "'•

которые действуют ка гранскрипцию ИЛ-3 иничеи и Аол« эффективным


охииов, отнмулятором ранних полипотентных
Контролировать функцию цито- гемопоэтическиж юиток-предшествен-
к и нон можно путем регуляции про- ниц, таких, как КОЕ-бласт, КОЕ-
цаосд образования их предшествен- ГЭММ. Эффект ИЛ-3 и КСФ-ГМ на
ников, Многие цитокины, включая пролиферацию и дифференциацию
i n la, ИЛ-ip, ТФРр, ФНОа, перво- ранних клеток-предшественниц гемо-
начально образуются как интеграль- иоэза может быть усилен другими
ные белки мембраны, которые не цитокинами, например ИЛ-1 и ИЛ-6.
являются активными, и для их пере- ИЛ-3 и КСФ-ГМ могут стимулировать
вода и активную форму требуется и более линейно-специфические гемо-
протеолитическое расщепление. Аль- ноэтические клетки-предшественни-
i ернативно некоторые цитокины цы—КОЕ-ГЭММ. Однако это влия-
(1Ф1'|1) первоначально синтезируют- ние происходит в синергизме с други-
ся к виде биологически неактивной ми КСФ—КСФ-Г, КСФ-М, КСФ-Эо,
формы, и для превращения в актив- ИЛ-5. Кроме того, ИЛ-3 является
ную форму требуется фермептатив- потенциальным КСФ для базофилов
iiiu- протеолитическое расщепление и тучных клеток. Другие факторы —
IThornbery N. et al., 1992]. КСФ-Г и КСФ-М —являются относи-
Таким образом, различные кле- тельно линейно-специфическими, ко-
гочные элементы (миелоидные и лим- торые поддерживают пролиферацию
фоидные клетки, клетки различных и дифференциацию клеток, уже ком-
гканей) способны выделять или же митированных в стороны образования
индуцировать выделение (образова- нейтрофилов или моноцитов-макрофа-
ние) цитокинов, а также различные гов. Все эти данные поддерживают
индуцирующие стимулы, приводящие гипотезу об иерархическом действии
h этому процессу, способствуют мо- различных КСФ на различные ступени
дуля щи I образования гемопоэтиче- гемопоэза.
uuix КЛСТОК и их функций. При После исчезновения стимула на-
ил пикнических состояниях первона- ступает период образования (хотя воз-
чально внешний стимул (бактерии, можно и во время стимула) и действия
\ I. фи (ические и химические агенты ингибиторных цитокинов, угнетаю-
И Еф ) действуют локально на соот- щих активность КСФ, тем самым
п (уютно клетки различных ор- способствующих приведению гемопо-
и 1 КВНОЙ, и следствием этого эза к нормальному, устойчивому рав-
i и выделение эффекторных мо- новесию. Нарушение этого равновесия
шку;] (И П I. ФИО н др.), которые, приводит к изменению кроветворения,
и tiuuu очередь, генерируют образо- называемого болезнью.
IIНИ! других цитокинов из других
i № ГО| (пни ж е из этих же клеток),
i г. начинается процесс о б р а з о в а н и я ИНГИБИТОРЫ ПРОЛИФЕРАЦИИ
ц и г о к и п о и . lit) эти взаимодействия И ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ
могут ограничиваться только кост- ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ КЛЕТОК
HOMO3J ОВОЙ ПОЛОСТЬЮ.
Обе системы, коротко- и длинно- Клеточный цикл деления необхо-
ДНОТанционная, функционируют еди- дим для самоподдерживания, диффе-
HD | процессе модуляции образова- ренциации и гомеостаза гемопоэти-
ния кроветворных клеток. ИЛ-3 и ческой системы. Это обеспечивается
KI 'Ф I'M являются нолипотентными НТт4, гемопоэтическим регулято-
ЬССФ, с частично дублирующей и ром клеточного цикла деления, ко-
• инер| ической активностями. Однако торый экспрессирован на кроветвор-

V.
ми i IH'IKIIX и птиц с п и tail паре хромосом; к этой подгруппе
С ГСК.
11 |'M повышении экспрессии И'Гт4 относя гея М И Ч а (CD78), МП»-ф
nil клетке происходит остановка кле- (АСТ-2), RANTES и макрофагаль-
Минин о цикла деления в фазе Go/Gi иый хемотаксический и активирую-
||)tmulo .1. с\ ;il., 20021. щий фактор (MCAF, MuJE);
Угнетение процессов пролифера- 2) хемокины а-подгруппы (MIP-
ции и дифференциации гемопоэтиче- 2); ген расплагается на 4-й паре
i кия к петок может осуществляться хромосом; к этой подгруппе относят-
рп шинными путями — либо путем ся GROa (стимулятор роста мелано-
синтеза митогеиных фак- мы, фактор MGSA, MuKC), GROb
пибо факторами, угнетающи- (MIP-2a), GRO7 (МТР-2р), фактор
ми пи! процесс синтеза. Некоторые тромбоцитов 4 (PF4), ИЛ-8 (пептид,
И питые модуляторы кроветворения активирующий нейтрофилы), NAP-1,
I истают синтез митогенных фцкто- NAP-2, ВК-10 [Wolpe S. et al, 1989;
|им1 и одновременно оказывают пря- Oppenheim J. et al., 1991; Schall Y.,
ini ипгибирующее действие на про- 1991; Broxmeyer H., 1993].
нифсрацию клеток. Негативные регуляторы крове-
творения действуют в течение не-
O.Blanchet и соавт. (1995) указы-
ihiun на то, что угнетение кроветво- скольких минут или часов, и их
•1НИЯ контролируется тремя воздей- влияние обратимо. По способу сво-
i i иуцнцими клеточными типами: его действия они влияют более или
1) путем секреции клетками ин- менее специфично на гемопотгиче-
ГИСирующих цитокинов; ские стволовые клетки и клетки-пред-
2) путем цитотоксического деЙст- шественницы либо в период фазы S
1ИЯ определенных клеточных элемен- клеточного цикла, задерживая синтез
Гои (1 -лимфоциты, NK-клетки, мо- ДНК, либо в течение фазы G\,
ноциты-макрофаги); предотвращая переход в фазу синтеза
Ч путем секреции ингибиторных ДНК. Ингибиторные пептиды или
ф.|к горов пролиферации зрелыми протеины влияют на кроветворные
и иг! ками, действующими на собст- клетки в очень незначительных кон-
Ннные клетки (сегментоядерные ней- центрациях— пико- или мономоляр-
фофилы, моноциты, тромбоциты). ных — через высокоаффинные рецеп-
К числу наиболее изученных ин- торы клеток-мишеней, противопос-
iибиторов факторов пролиферации тавляя свое действие активным сти-
И дифференциации гемопоэтических муляторам гемопоэза. Некоторые
клеток относятся ТФР|3 (ТФРр, факторы роста (например, ИЛ-3,
ГФРР), ингибипы и активины, ИЛ-4, КСФ-ГМ) могут ингибировать диф-
ИМ 10, простагландины, ИФ, лакто- ференциацию эритроидных клеток
феррин, ферритин, ФНОа. либо вызывать терминальную диф-
li последние годы определены ряд ференциацию без индуцирования
оупрессорных молекул, действие ко- апоптоза, либо способствовать быст-
ГОрых, по крайней мере, проявляется рой дифференциации и апо птозу
in vitro. Эти супрессорные цитокины, эритроидных клеток (ТФРР), либо
называемые хемокинами, описаны задерживать апоптоз (ФСК).
кик иптеркриновые цитокины. У че- Все гемопоэтические регуляторы
№ века хемокины относятся к группе кроветворения (положительные и от-
(семейству) макрофагальыого протеи- рицательные) действуют согласован-
на (МП1), которые, в свою очередь, но, чтобы обеспечить механизм бы-
подразделяются на две подгруппы: строго, обратимого и специфичного
I) хемокины ^-подгруппы (MIP- пролиферативного ответа па запросы
I), ген которых расположен на 17-й организма.
ФИШЧНЧИЧ ЧЧНПЧИ> IW

I itiiii(-i|m|)iMiipvi(Miviiii фактор роста- Наиболв! н (ученными июформа,*


jk, ГФРР (Tranifbrming Growth Fac- ми являются ГФРр1, ГФР|*2 и ТФРрЗ,
iin \\, ТФРР) эк спросом р о ван на клет- оказывающие am ипролиферативяо^
Kiix MI ни us г какой и органов; этот действие на многие ТИПЫ клеток.
фактор угнотаеп рост клеток либо Этот эффект происходит вследствие
непосредственно, либо косвенно. Ис- угнетения процесса фосфориляции
гочникоы его образования являются Rb-протеина, необходимого для пе-
громбоциты, клетки плаценты н по- рехода клетки из фазы Gi в фазу S
•ик < образование цитокина ТФРр! митотического цикла деления
мдотеляем кровеносных сосудов у»с- [Cheng Т. et al., 1998]. ТФРр является
ПЯЧ И Веется при воспалении. Тромбо- многофункциональным цитокином,
ЦИТЫ содержат ТФРР в 100 раз который регулирует пролиферацию
больше, чем другие клеточные источ- и дифференциацию гемопоэтических
ники Этап фактор представляет го- клеток-предшественниц, организа-
ми л II мер с молекулярной массой цию тканей, ингибирует пролифера-
[3 кнлодальтон, термостабилен. Его цию клеток гемопоэтических ростков
ирг'ми. vi пепин к является гликопро- in vitro и in vivo, пролиферацию
гонном, хотя ТФР|3 не содержит лимфоцитов, клеток-предшественниц
карбогидраты. У позвоночных суще- в долгосрочных культурах [Zhon D.
rmyioi 5 изоформ ТФРр: ТФР$1, et al., 1991; Massagud J. et al., 1995].
ГФР02, ТФРРЗ, ТФРрЧ и ТФРр5. Цитокип является ингибитором
Каждый из генов ЭТИХ изоформ пролиферации и дифференциации
ю к ал изо ван на разных хромосомах: ГСК, КОЕ-ГЭММ, КОЕ-ГМ, КОЕ-М,
I'.l HI I9q, |12 па lq, (S3 — на КОЕ-Э и БОЕ-Э, которые стимули-
i Ь| Глюкокортнкоиды регулируют рованы КСФ. Однако он не влияет
шоп рвесию ТФР|3] на клетках и на нестимулированные гемопоэтиче-
iiiпнич человека, с т и м у л и р у ю т экс- ские клетки-предшественницы [Sing
lipi 11 ми» гена этого цитокина на G. et al., 1988]. В 14-дневной куль-
HI и м п ш л щ . п и х клетках |Jin D. et al., туре, содержащей костномозговые
I'NH| Идеи i ифицированы также 4 клетки человека, он ингибирует КОЕ-
иыиаковффинных рецептора для ци- ГЭММ, КОЕ-ГМ, КОЕ-М и КОЕ-Г.
им. и один из них является В присутствии КОЕ-Г ТФРр не дает
про Кии пикапом |Massague J., 1990]. ингибиторного эффекта ни на коло-
ll/ll turn IIш ического действия ние-, ни на кластерообразование [Ах-
| ф | ' in iHiMwiiiMi.i ИП111НДЫ, Т Ф Р [ 1 - — elrod A., 1990]. Из этих данных
pi пры I и 11 i пил. 1 1 о с л е д н и й очевидно, что ингибиторное действие
мш pyiitfiiiopu МОЖС1 и с и о с р е д с т в е н - ТФРр проявляется только на поли-
iin i ш п ы н и i i.i и с l ( l>l'[i, а р е ц е п т о р потентные и бипотентные гемопоэти-
I i и 11 II МОЖО и i;i ii Mi) д е й с т в о в а т ь с ческие клетки-предшественницы, а не
ним ЦИТОКИНОМ пин.ко тогда, когда на монопотентные.
ои гни in п i' рецептором II типа. Действие цитокина не является
Стромалышс клетки костного мозга линейно-специфическим. Он ингиби-
несу] оба гипа рецепторов, и это рует БОЕ-Э в присутствии КСФ-ГМ,
особенно важно потому, что ТФР|3 ИЛ-3 и Эпо, а также КОЕ-Э — в
типичен регулятором синтеза цито- присутствии Эпо. В долгосрочных
КИНОВ и их рецепторов, а также культурах костного мозга человека
адгезивных молекул, и это является внесение антител, направленных про-
важным звеном в регуляции проли- тив ТФРР, приводит к увеличению
ферации и дифференциации гемопо- числа примитивных БОЕ-Э, которые
ЗТНЧОСКИХ клеток-предшественниц подвержены «тимидиновому само-
[ R o b l e d o M . et al., 1997]. убийству». Эти эксперименты указы-
in M.I po, что цитокнн действует pyei дифференциацию эритроидных
i гоственный ингибитор на эти клеток быстрее и сильнее, чем Эпо.
11 мопс 11 ичвские клетки-пред шест - Однако обладая апоптознои актив-
ицы, имеющие высокий проли- ностью, которая частично может
жи |'.iI niuM.iii потенциал. Он также быть обратима под действием ФСК,
с Й< inyci на KOIi-Mcr в присутствии ТФРР является ингибитором эритро-
ИФ поэза на уровне компартмента эрит-
S Weeks и со а ВТ, (1998) изучали роидных клеток [Zermati Y. et al.,
i D34'CD38 -клетки костного мозга 1997].
Ирослых людей и установили, что Антипролиферативный эффект
дозволение в кондиционную среду р на гемопоэтические клетки-
пиюкина вызывало задержку проли- предшественницы происходит, по
|м I'.nntM этих клеток, но при добав- крайней мере, двумя путями. В пер-
ки пни ;п1ги-ТФР(3-АТ наблюдалась вом случае ингибирование пролифе-
iiимуляция колониеобразования. В рации этих клеток происходит вслед-
Присутствии этих AT также исчезал ствие непосредственного действия
i Симулирующий эффект на пролифе- протеина на соответствующую тар-
р.шпт CD34+CD38—-клеток, при гетную клетку путем угнетения про-
ним и и i ибиторный эффект был до- цессов фосфориляции Rb-протеина и
ш швисимым. дополнительно благодаря способно-
1<1>1'(1 поддерживает в состоянии сти ТФРр угнетать экспрессию на
НОхоя примитивные гемопоэтические клетках рецепторов КСФ-ГМ, КСФ-Г
Мвтки-предшественницы человека и ИЛ-3. Второй путь—это преры-
игре! аутокринный и(или) паракрин- вание цитокином действия индуктив-
мi.iit механизмы. Эффект действия ных факторов гемопоэза (ИЛ-1,
цитокина зависит от его концентра- ФНОа) в стимуляции экспрессии ге-
ции и клетки-мишени. N.Fortune! и мопоэтических ростовых факторов
• u.uti. (1998) установили, что наибо- на акцессорных клетках, в том числе
RM примитивные клетки-предшест- на моноцитах, фибробластах, Т-лим-
ИННИЦЫ (КОЕ-ГЭММ, КОЕ-ГМ и фоцитах и эндотелии кровеносных
Обладающие высокой пролифератив- сосудов [Elias J. et al., 1991; Jacob-
1И.П активностью КОЕ-Г и КОЕ-М) sen S. et al., 1991].
очень чувствительны к ингибирукь ТФРр оказывает ингибируюшее
тему влиянию при низкой концен- действие не только на клетки гемо-
трации (10 мкг/л) цитокина в среде. поэза, он действует также на фиб-
И ю же время низкая концентрация робласты, клетки эпителия, остеоген-
ГФРр не влияла на более поздние ные клетки, вызывает увеличение
КЛС1 ки-предшественницы (КОЕ-Г и образования внеклеточных белков
КОН-М с низкой пролиферативной матрицы, может способствовать фиб-
.пчпишостью), и для проявления ин- розу костного мозга [Shehata M.
i и Пирующего эффекта необходимо et al., 1998].
увеличить концентрацию этого ци- Ингибины и активнны. Ингибииы
гокина в 100 раз и более. ТФРр в и активины являются димериымп
Низких концентрациях угнетает БОЕ- гликопротеинами и относятся к се-
'), л если содержание этого цитокина мейству ТФРр. Биологически актив-
уменьшить в 1000 раз, то наблюда- ная молекула ингибина является iv-
ется стимуляция БОЕ-Э. Это действие теродимером с молекулярной массой
1 Ф1'Р па БОЕ-Э не может быть 32 килодальтона (арА или ОфВ),
объяснено только контролированием состоящая из а-субъединицы (18 ки-
клеточного цикла деления [Fortu- лодальтон) и 2 различных, но отно-
iiel N. el al., 1998]. Цитокин ипдуци- сящихся к Р-субъединицам (14 кило-

$9
цальтон) пибо и |iA, либо к [И*. венно опосредуя си нимфоцитами и
()ии образую1 оя Miini ими клетками моноцитами, большая част ь цирку-
i каней (овртолиевыа клетки яичек, лирующих БОЕ-Э В норме находится
клетки яичников и др.) и влияют на не в ДНК-синтезирующей фазе; до-
многие биологические процессы, бавление в культуру БОЕ-Э активина
включая образование гормонов рос- индуцирует эти клетки к синтезу
га, АКТГ, пролиферацию клеток не- ДНК.
которых линий. H.Broxmeyer и соавт. (1988) уста-
Помимо ЭНДОКРИННОГО эффвКТв, новили, что рекомбинантный
ингибин угнетает образование эрит- активин А увеличивает клональный
роидных колоний in vitro БОЕ-Э и рост КОЕ-ГЭММ и БОЕ-Э, но не
КОЕ-Э костного мозга человека, но влияет на КОЕ-ГМ. Напротив,
ЭТО действие проявляется лишь в том ингибин А блокирует этот эффект
случае, если клетки-предшественни- активина. Если из костномозговой
цы были стимулированы активином взвеси удалить мононуклеарные фа-
[Vale W. et at, 1989]. Если же в гоциты и(или) Т-лимфоциты, то на-
культур ал ьную среду добавить Эпо, блюдаемые эффекты от ингибина и
ЭяО ' рекомбинантный человеческий активина in vitro исчезают. Ингибин
ИЛ-3, КСФ-ГМ или ИЛ-4, го ингибин опосредует свой эффект путем непря-
не угнетает КОЕ-ГЭММ или БОЕ-Э. мого влияния на акцессорные клетки
Активин является гомодимером [Broxmeyer H., 1993].
||\Л|}А, flBfiB), состоящим из двух Интерлейкил 10. ИЛ-10 является
ингибиновых цепочек по 14 кило- плеотропным цитокином, который иг-
дальтон. Активин Л образуется в рает важную роль в регуляции лим-
костном мозге и моноцитами, его фоидных и миелоидных клегок. Он
содержание регулируется цитокина- образуется эндотоксин-индуцирован-
г
.и1 воспаления и глюкокортикоида- пыми клетками СМФ Р е Waal Malefut
ми. ('тромальные клетки костного R. ct al., 1991] и митоген-активиро-
но ч -I человека .жепрессируют 4 ванными CD44 Т-лимфоцитами [Веп-
гранскриита I'll К активина A [Dol- delae A. et al., 1991]. ИЛ-10 секрети-
Ш К •! ;il., 1997]. руется в основном Th2 CD4+ лимфо-
Активин оказывает свое действие цитами. Протеин имеет молекулярную
НИНОЙ Ко специфически, способствует массу 30—35 килодальтон, ген распо-
пролиферации и дифференциации ложен на 1-й паре хромосом.
>ритроидных клеток-предшествен- ИЛ-10 обладает многими биоло-
«hi стимулирует быстро и об- гическими свойствами. Он является
ратимо оинтеэ д и к КОЕ-Э, БОЕ-Э фактором роста для тучных клеток
и II больших дозах действует на и В-лимфоцитов [Rousset F. et al.,
КОВ 1')ММ Это действие активина J992]. Однако действие ИЛ-10 как
блокируется ингибином. Эффект ак- ингибитора превалирует над его дей-
гивин! на эритроидные клетки-пред- ствием как стимулятора, поэтому его
шественницы дозозависим и наблю- еще называют ингибиторным факто-
дается ЛИШЬ it присутствии Эпо, ром синтеза цитокинов (CSIF—Су-
действие которого стимулируется ак- tokine Synthesis Inhibitory Factor).
гивином, и эти эффекты наблюдают- Так, он угнетает синтез ИЛ-la, ИЛ-
ся I! среде, лишенной сыворотки 1(3, ИЛ-6, ИЛ-8, ИФу, ФНОа, обра-
кропи, Это указывает на то, что для зование КОЕ-ГМ и КОЕ-Г [Gruber М.
пролиферации эритроидных клеток- et al., 1994]. Снижение секреции ИФу
предшественниц не требуется допол- является следствием угнетения синте-
ни i пи,пых сывороточных факторов. за ИЛ-10 акцессорными клетками
llu видимому, эффект активина кос- [D'Andrea A. et al., 1993].

60
Mi! It) i n n • u t m p y c i 1997]. In vitro И<1м/, и 11<1>у ингибируюп
I лимфоцитов, клеток ( 1)4' через колониеобразование, в особенности
'тдержку образования И Л-2. Цито- образование эритроидпых колоши!,
мш угнетает моноцито-макрофагаль- путем угнетения продукции Ф1 [ООС
ныи синтез ПФу и ФНОа NK-клет- (прямого ишибигора КОВ-ГМ) вспо-
1Н1МИ, стимулированными ИЛ-2, ИЛ- могательными клетками стромы кост-
•• опосредованную секрецию имму- ного мозга, а также путем экспрессии
III и nntiy.il и нов, индуцированную Т- ИЛ-1 мононуклеарными фагоцитами
КЛВ1 очными независимыми AT [Darris V. et al., 1990].
|ll-.ii 1). el al., 1992]. В синергизме с ИФ|3 и ИФу действуют непосред-
II'I I и ТФР ИЛ-10 ингибирует ци- ственно на БОЕ-Э и К.ОЕ-3 и опо-
ГОТоксичность активированных мак- средуют ингибиторный эффекг ФИО
|)агов (Oswald I. et al., 1992]. и ИЛ-1 на колониеобразовапие
Наряду с ингибиторным эффек- КОЕ-Э. In vitro ингибиторпый эф-
|чм, 11.11-10 обладает функцией ко- фект ИФу, но не ИФ(3 обратим, если
|ТИмулирующйго фактора. Он инду- в кондиционную среду внесен Эпо в
ЦНрует секрецию активированными высокой дозе [Means R. et ah, 1997].
И лимфоцитами lgG, IgM и igA, а в ИФу угнетает нормальные КОЕ-ГМ,
комбинации с И Л -4 способствует БОЕ-Э и КОЕ-Э, при этом более
образованию в бол-ьшом количестве чувствительными к действию цито-
щотипов этих lg [Benjamin D., 1995]. кина являются промежуточные и бо-
II комбинации с ИЛ-4 и ИЛ-3 ИЛ-10 лее зрелые БОЕ-Э, а КОЕ-Э менее
fiUMyjinpyer рост тучных клеток. чувствительны (Dai C.-H. et al., 1998],
Введение рекомбинаптного ИЛ-10 ИФ действуют опосредованно на
щоровым лицам вызывает у них уровне гемопоэтических клеток-пред-
i ромбоцитопению, снижение содер- шественниц. Способность ИФа угне-
пня гемоглобина. Это связано с тать гранулоцито- и эритроиоэз на-
ГУМ, что ИЛ-10 угнетает КОЕ-Мсг; шло практическое применение в кли-
цитокин не влияет на КОЕ-ГЭММ и нической практике. В опытах на мы-
ВОЕ-Э [Sosman J. et al., 1998]. ИЛ-10 шах было установлено, что in vivo
проявляет свое действие как само- цитокин ингибирует экспрессию па
втоятельно, так и в комбинации с клетках генов ИЛ-3 и ИЛ-6 [Ferrari С
другими цитокинами, угнетая КОЕ- et al., 1991].
ГМ, и это его действие дозозависимое Основной эффект на лимфоидные
[Sarria Л. et al., 1993]. клетки дает ИФу. Так, элиминация
Иитсрфсропы. ИФ —это глико- ИФу с помощью МА подавляет про-
иротеины. Источником их образова- лиферацию чистой популяции Т-лим-
ния являются лейкоциты перифери- фоцитов в присутствии ИЛ-2 и ФГА,
ческой крови, фибробласты, клетки а также дифференцировку в цитоток-
различных тканей. Существуют 3 сические эффекторные клетки. Акт
РИпа интерфероиов: И Фа, ИФр и вированные В-лимфоциты также СЛО
II Фу. собны пролнферировать под нлияии
11 Ф индуцируют образование ем ИФу. Воздействие ИФу иа В-кнп
КСФ, по, с другой стороны, они ки, особенно в сочетании с ИЛ-2,
•,| нетают непосредственно гемопо- резко повышаег количество В-лпм
п ические клетки-предшественницы. фоцитов, дифференцирующихся по
II Фу угнетает пролиферацию очень еле активации в иммуноглобулине!и
примитивных гемопоэтических кле- мулирующие клетки. Однако боя*
го к-предшественниц (CD34+CD38—) шие дозы ИФу угнетают как пролн
uyicM увеличения и ускорения созре- ферацию, так и дифференциации»
ввния н и х клеток [Henckierti et. a).. В-лимфоцитов.
:>гин><ин>,чл
1
11 > in- i и11 I.I интерфероном также В н у т р и в в я н м введение н и х вы-
шишки HI гсимфоидные клетки. Гак, зывает быстрое и шачительное уве-
ll'l'l'» М0Ж61 ПОВЫШАТЬ п п м п ЦИТО- личение (В 7 12 pat) числа грану-
KRKOI активированными Т-лнмфоци- лоцитов в периферической крови,
IUMN II эивчитслыю усиливать кил- которые обладают нормальной хемо-
парную активность NK-клеток. ИФа таксической и фагоцитарной актив-
при добавлении и культуру, содер- ностями и адгезивными свойствами,
жащую незрелые Т-лимфоциты, спо- и способностями генерировать пере-
собствуеп рмр&нжировке генов Т- кись водорода. Поэтому цитокин
клеточного рецептора ндифференци- можно использовать для получения
ровке н и х клеток в зрелые цитоток- концентратов гранулоцитов для
сические Т-лимфоциты. И Ф а новы- Трансфузий, а также при наличии
шип цитотоксичность ИЛ-2-активи- дисфункции этих элементов у боль-
рованных лимфоцитов, значительно ных. Вместе с тем под влиянием ИЛ-8
увеличивает активность перфорина мобилизация CD34+ незначительная.
пнмфоцитов, который способствует J.Pruijt и соавт. (1998) выявили, что
некрозу и апоптозу таргетных кле- мобилизация гемопоэтических кле-
rott. It Сочетании с И Л-2 цитокин ток-предшественниц может быть пре-
увеличивает секрецию лимфоцитами дотвращена AT, направленными про-
ФИОос и ИФу и экспрессию на тив (32-интегрина (LFA-1, CD Па /
клетках Ф\Юа и т Р Н К ИФу [Li С. CD18) и металлопротеиназной
о) ill., 19981 желатиназы В (ММР-9). При акти-
И клинической практике ИФ ши- вации нейтрофилов, которые экс-
роки используются для лечения ви- прессируют рецепторы LFA-1 и ИЛ-
руоиых инфекций. 8, под действием цитокина происхо-
I l i i u p iciikiui-S. ИЛ-К образуется дит выделение ММР-9, которая яв-
ОТромальными клетками, макрофага- ляется регулятором мобилизации ге-
ми. I лимфоцитами. Физиологиче- мопоэтических стволовых клеток.
i Ким икдук гором его образования Иначе говоря, нейтрофилы играют
ни ч 11 vi липополисахариды, ИЛ-1, важную роль в ИЛ-8-индуцирован-
ФНОа I [рок-ии имеет молекулярную ной мобилизации гемопоэтических
К ч килодальтон, ген распо- клеток-предшественниц. Кроме того,
и и.i I и парс хромосом (4q). как отметили G.Velders и соавт.
Г' И' и i "|i ни i пк и пи жепрессирован (1998), блокирование LFA-1 приво-
HI и» и i ||.и|н|11.1\ и Т инмфоцитах. дит к увеличению мобилизации гемо-
<мн цитокин действует па р а н - поэтических клеток-предшественниц
кпки предшественницы гемопо- под действием КСФ-Г, причем степень
иа и etiocoAci uyei их самоподдержи- мобилизации гемопоэтических элемен-
ва на на влияет на пролифера- тов не зависит от дозы последнего, и
цию N дифференциацию клеток-пред- это может свидетельствовать о том,
нич I iiriiiiini более поздних стадий. что мобилизация гемопоэтических кле-
Квм I комбинации с другими цито- ток-предшественниц происходит раз-
киилми, ш и самостоятельно ИЛ-8 личными путями.
vi iu-iiu-i колониеобразование клеток- Хемокины подгруппы (3. Хемоки-
предшественниц ниелопоэза, и этот ны — это семейство родственных
|ффск1 дозозавнеим [Blanch et О., белков, которые обладают широкой
1995] И II 8 деИстнует на нейтрофилы биологической активностью, регули-
км кемоаттрактант, способствуя ак- руют миграцию и активацию лейко-
кумуляции этих элементов в тканях цитов в участках воспаления. Они
при воспалительном процессе [Liu F. секретируются активированными
й а!, лейкоцитами, эндотелиальными и

62
импткм
-пии им,!пинами клетками [Schall T, колоннеобразование БОЕ-Э и способ-
• ii . 1994]. Хсмокимы это iепа- ствует колониеобразованию КОЕ-Э
1кнсня?анныс белки с молекулярной человека [Means R. et al., 1997].
мим пи к 12 килодальтон, В зави- Хемокины подгруппы Р угнетают
•ИМости от локализация в молекуле пролиферацию гемопоэтических кле-
рiиv ч цистеинов семейство хсмокинов ток-предшественниц КОЕ-ГЭММ,
Иолрччделяется на две подгруппы: КОЕ-ГМ и КОЕ-Э, которые были
пни цистеины разделены аминокис- стимулированы цитокинами (ФСК,
10ТОЙ, то хемокины относятся к Эпо + ИЛ-3, КСФ-ГМ + ИЛ-3).
unity а-хемокинов (их также (З-хемокины (MIP-la, MCP-1) способ-
mi и.мшюг С—X—С), а если оба ствуют переходу КОК-ВПП в фазу
щи геина соседствуют между собой, Go митотического цикла [Eaves С. et
и» ни хемокины относят к семейству al., 1997]. Хемокины действуют на
\\ Исмокинов (С—С). Ген семейства менее зрелую, быстро пролифери-
щ комокинов располагается на 4-й рующую популяцию гемопоэтиче-
Пирс хромосом (4q 12—21), а семей- ских клеток-предшественниц. Но дей-
. ni.i \\ на 17-й паре (17qll—32) ствие хемокипов подгруппы (3 не
[Nitrusc К. et al., 1996]. ограничивается только последними,
К хемокинам семейства Р отно- они также влияют на гемопоэтиче-
iinni MIP-loc (CD78), MIP-lp (ACT- ские стволовые клетки [Quesniaux V.
') К ANTES, макрофагальпый хемо- et al., 1993]. In vivo на мышах
Иксический и активирующий фактор установлено, что MIP-la угнетает
(М('Л1\ MuJE, exodus) [Hromas R. миэлопоэз и это супрессорное дейст-
.i al., 1997]. вие, с одной стороны, дозозависимое,
MIP-la и MlP-lfi увеличивают а с другой — обратимо [Maze R.
Пролиферативный эффект более зре- et al., 1992]. При назначении мышам
НОЙ популяции КОЕ-ГМ, стимулиро- гидрооксимочевины или цитозинара-
пшпий КСФ-ГМ и КСФ-М. Однако бинозида, MIP-la оказывает защит-
овное их действие —это супрес- ное действие на миелопоз [Dunlop D.
рормое. MIP-la увеличивает количе- et al., 1992].
М1Ш КОЕ-ГМ и в то же время MIP-la также регулирует дви-
уменьшает образование БОЕ-Э, при жение фагоцитов и лимфоцитов,
ним это действие было дозозависи- влияет на миграцию, «ХОМИНГ» и
ммм. Методом поточной цитометрии мобилизацию гемопоэтических кле-
станов л ено, что фракция клеток ток-предшественниц путем модуля-
i 1П41 неоднородна: некоторые клет- ции адгезивного фенотипа этих кле-
ки (034+ экспрессируют рецептор ток [Ericson S. et al., 1998 ; Suchi-
МП' -la (CD34+MR+), а другие не ro Y. et al., 1998].
жспрсссируют его (CD34+MR—). Другие хемокины (MIP-ip,
Клетки CD34^MR^ в 10 раз больше MCAF) как самостоятельно, так и в
п1)|кг(овы в а ют КОЕ-ГМ, чем сочетании с другими хемокипами
i 1) И 1 MR~. f Кроме того, фракция угнетают колониеобразование миело-
Клеток CD34 MR—очень обогащена идных клеток-предшественниц, и
Клетками LTCIC, которые экспресси- этот супрессорный эффект дозоэави-
pvmi рецептор для MIP-la [de Wyn- сим [Sams A. et al., 1993].
Itr E. cl al., 1997]. БОЕ-Э и КОЕ-Э В приложении 2 представлены
репрессируют рецептор CCR1 к данные о содержании в сыворотке
MIP-la. In vitro MIP-la угнетает крови некоторых цитокинов.
ЧЧ1 № ЧН >ПМ 441lfi НИ i I \A

/</•< mi топни* п ип'иод ВНУТРИУПН >Ы/. I / I H - Л тития


и последние а и десятилетия уе- ским примерим (ТОГО феномена яв-
ппи но рщиннвстся понос направле- ляется замена типов гемоглобина;
IIIU' и n t i i i i u i n пересадок органон и 4) количество гем о поэтическая
i iuiiit'ii i рансплантация фетальных клеток-предшественниц в циркули-
i гмпno )i нческих к исток, Эти пере- рующей крови значительно больше
онлки успешно применяют при раз- в течение всего периода внутриут-
IM'IIII.IX шбплсваниях системы кропи робного развития.
(еормовидно-клеточная анемия, сх- и После оплодотворения происхо-
\\ галассемии, ЛЛ и др.) IMaggio A. дит быстрый рост эмбриона, кото-
К ;il , 1997; Touraine J.-L, et al., 1997], рый требует повышенного количест-
каследотвенных нарушениях метабо- ва кислорода. Рост плода требует
IIII |ма и иммунодефици! ных состоя- постоянного увеличения массы Эр.
нии \ (болезнь Ниманнв Пика, X- Низкое парциальное давление кисло-
сщ шиный тяжелый комбинирован- рода при высокой метаболической
ный иммунодефицит, хроническая активности тканей плода требует,
i ранулемап озная болезнь и др.) fWen- чтобы система освобождения кисло-
|1« (.. el ;il., 1997; Wcstgren M. et рода отличалась от таковой у взрос-
ill, 1997] как in utero (c 1988 г.), так лого. В то же время плод, находясь
и постнатально. Как указывают J.- в стерильных условиях, не требует
I fouraine и соавт. (1997), пересадка большого количества нейтрофилов.
фетальных тканей и постнатальном Это может быть удовлетворено ки-
ГИриоде успешна у 67% детей, и это слородпереносящими клетками. По-
особенно важно, если пег возможно- этому уже в ранний период развития
iiii получить гистосовместимые ко- змбриона, приблизительно через 2—
ii ними и иные клетки от доноров для 3 нед после оплодотворения и им-
пересылки. IIог)1 ому краткое озна- плантации яйцеклетки, возникает и
комление с »мбриональным и феталь- начинает развиваться гемопоэтиче-
м i.i м Г#М0П0130М н е о б х о д и м о для ская система.
мимин пи голько патогенеза раз- Ее развитие происходит с разной
витии иоко ю|)|,1х болсшей, но и для степенью интенсивности, со сменой
ni.ipniHMi.it i i p a i c i i i n и т а к т и к и л е - преимущественной локализации
•н ним и' ко I пры к болечней. кроветворения в различные сроки
Гемамои у (мбриона и плода гестации (схема 1). Знание внутри-
т и т л о отличается от такового утробного развития гемопоэза по-
. Bipni 11I.Is < недующими признаками: зволяет клиницистам правильно ин-
И шутриутробно различные ор- терпретировать патологические
i.iin.i опособны поддерживать крове- данные у преждевременно родив-
i impciтс и геченис всего периода шихся детей.
ранития; ITO обусловлено различия- В период внутриутробного раз-
ми i микроокружении, которые обес- вития человека топографически
печивают специфическую регуляцию можно выделить 4 этапа гемпоэза:
iбмопо па; мезоблаетический, печеночный, селезе-
') и гечение развития плода на- ночный и костномозговой (рис. 1).
блюдается относительное различие в Некоторые исследователи исключа-
дифференциации ростков гемопоэза; ют селезеночный этап кроветворе-
ПК, • течение первых 12 нед геста- ния.
IIIMI д о м и н и р у е т >ритропоэз; Первоначальные данные об эм-
\) фенотип эритроидных клеток бриональном гемопоэзе были полу-
HI постоянен во времени; классиче- чены в основном на основании ана-

64
№)Ш 1ШЧНИ1 И ГЛШИМН

I. мини и п мс:ишх1ЛМ(!
хориона,стебле, Распространение гемопоэтических
желточном мешке стволовых клеток по кровеносным
с 19-го дня до 9 нед сосудам
(1-я генерация)

ii i i|..i 1мьр1локапьная
мезенхима Эктодерма
Печень (5 нед)
Гемопоэз с 6 нед
Эмбриобласт -»»- Мезодерма до рождения
(2-я генерация)

Бластомеры Эндодерма

Распространение стволовых клеток


Яйцо по сосудам эмбриона

Костно-мозговая Лимфатические Вилочковая


матрица узлы (11 нед) железа (8 нед)
(ключица — 8 нед, Лимфоцитопоэз Селезенка (8 нед) Лимфоцитопоэз
дпинные кости — 9—10 нед) прогрессирует прогрессирует
гемопоэз прогрессирует с 12 нед с 10 нед
с 10—11 нед

Схема 1. ЭМБРИОНАЛЬНОЕ, ФЕТАЛЬНОЕ РАЗВИТИЕ И ОНТОГЕНЕЗ ГЕМОПОЭЗА


(по E.Keleman u соавт.).

мшпческих и экспериментальных ис- аллантоисе, хорионе и стебле при-


I исдований у птиц и животных. близительно к концу 2-й — началу
I1 оследующие исследования у чело- 3-Й недели после оплодотворения и
1ик.| показали, что эти результаты имплантации яйцеклетки. Желточ-
коррелируют с данными, полученны- ный мешок остоит из эндодермаль-
ми it эксперименте, ных и мезенхимных клеток [Ohls R.
1 [оскояьку предметом освещения et al., 2000],
I.итого руководства является эритро- В мезенхиме появляются темно-
14) II и связанные с ним нарушения, окрашенные клетки, собранные и
го об образовании остальных элемен- кластеры. Эти островки клеточных
Г01 гемопоэза мы упоминаем кратко. элементов являются предшественни-
Мшзоблостинеский тип кроветворе- ками сосудистой и кроветворной сис-
ния возникает и желточном мешке, тем, они тесно связаны с сосудами

N- И , ' 65
ФИ.ИПННЧИЯ ,4-Hirnih' iiI

1 2 3 4 5 6 7 3 9 Рождение 10 20 30 40 50 60
Месяцы антенатального периода Годы постнатального периода

1. Локализация кроветворения в антенаталь- редко определяются КОЕ-Э, которые


ном и постнатальном периодах. атипичны и их число незначительно
I антенатальный период; II— постнатальный пе- [Dommergues M. et al., 1992]. У
риод; а — селезенка, б — печень, в — желточный
мешок, г — голень, д — бедро, е — ребра, ж — гру- эмбриона 4Щ—5 нед гестации в жел-
дина, 3 — позвонки (no Z.Erslev и соавт., 1940). точном мешке обнаруживаются
БОЕ-Э, КОЕ-Э и КОЕ-ГМ. По дан-
желточного мешка. Из клеток, рас- ным E.Keleman и соавт. (1979), при-
познающихся по периферии, обра- митивные эритробласты и макрофаги
ivnoi эндотелий сосудов, развиваю- обнаруживаются у эмбриона на 3—
шгигя сети сосудистой системы, а из 4-й неделе гестации, мегакариоциты
КЛСТОК, располагающихся централь- и тромбоциты — на 5-й неделе, лим-
пи, образуются кроветворные клетки. фоциты -— на 6-й неделе; гранулоци-
Последние по внешнему виду сходны ты обнаруживаются на 3—4-й неделе
О ИШГОЛОбластами, и их н а з ы в а ю т гестации, но авторы не исключают,
приыитиаными >ритробластами. Они что они могут быть материнского
IIMi-id i овальную форму, большие происхождения.
pi (Меры (до 30 мкм в диаметре), их Хотя в мезобластический период
объем достигает 200 фл, цитоплазма кроветворения отмечается преимуще-
базофнльная, ядро нежносетчатой ственно эритропоэз, тем не менее в
структуры, содержит ядрышки. Эти это период можно обнаружить клет-
клетки синтезируют эмбриональный ки-предшественницы всех гемопоэти-
гемоглобин и циркулируют с кровью ческих ростков, включая полипотент-
и период 4—12 нед гестации. Начи- ные стволовые клетки. Так, при
ная с 6-й недели гестации в крови культивировании клеток желточного
эмбриона появляются эритроидные мешка мышей 7—9 дней гестации
элементы без ядра — мегалоциты, обнаруживаются типичные моноци-
объем которых достигает 125 фл. По томакрофагальные, эритроидные, ме-
своему фенотипу эритроидные клет- гакариоцитарные, гранул оцитарные
ки-предшественницы желточного и смешанные колонии [Фрейд-
мешка близки к таковым взрослых лин М.С., 1984; Metcalf D., 1975].
людей. I* желточном мешке опреде- Имплантация клеток желточного
ляются БОЕ-Э в количестве 150—200, мешка летально облученным мышам
Ki'otti пиччти л niivirnvii'dhinut) пл:шимн

нриводип к восстановлению способ • клеток-предшественниц эритроидно


нести клеток вырабатывать 1ц [Тай- 10 ряда было распределено и равной
аи МЛ., I972J. Полипотентные ство- степени среди гемопоэтических кле-
ПОВЫе к легки идентифицируются в ток желточного мешка и эмбриона,
мембране желточного мешка собак тогда как 80% неэритроидных кле-
и человека па 16-й день гестации ток-предшественниц обнаруживались
llukuda Т., 1974; Nothdurfth W. у эмбриона.
«•I i l l . , 1 9 8 1 ] . Эти клетки, обладающие высоким
При культивировании клеток пролиферативным потенциалом, бы-
желточного мешка без эмбриона в ли отнесены к клеткам CD34 1
Культуре обнаруживаются в большом [Huyhn A. et al., 1995].
Количестве клетки-предшественницы В возрасте ЪЧг—4 нед гестаций у
рамопоэза, тогда как при культиви- эмбриона человека первые гвМОПО-
ровании эмбриона без желточного этические стволовые клетки генери-
мешка этого не наблюдается. Эти руются в двух местах: 1) экстраэм-
ценные указывают на то, что жел- брионально, в желточном мешке, и
ГОЧНЫЙ мешок содержит клетки, спо- 2) внутри эмбриона it области ЛГМ
i шпиле дифференцироваться в раз- [ICirzenbaum M. el al., 19')7; D/K-I
'MIиных гемопоэтических направле- zak E., 2001J. В сосудах желтоЧНОГО
ниях. Основываясь на этих опытах, мешка изредка обнаружив! Ю 11 я
Проведенных у экспериментальных CD34 + окру|лыс клетки |l'eaiili И i-l
Животных, полагают, что именно из al., 1995,].
•илточного мешка клетки-предшест- У 5-недельного эмбрион! ЧВЛОВ!
Мнницы гемопоэза мигрируют в дру- ка обнаруживается популяции
1 ие органы. CD45 r CD34 + Lin , тесно связанная о
Для того, чтобы понять началь- эндотелием вентрального отдели Кор
ные, этапы становления гемопоэза в ты околопупочной области. Наличие
гечение онтогенеза у человека, компактных, округлых кластеров
A.lluyhn и соавт. (1995) исследовали CD34 + CD45 f -oeroK, тесно связанных
к fio но генные свойства гемопоэтиче- с аортой, указывает на то, ЧТО гемо-
ских клеток человеческого желточно- поэтическая система развивается внут-
го мешка и у 25—50-дневных эмбрио- ри эмбриона per se и, по-видимому,
КОВ. В отличие от гемопоэтических эти клетки являются истинными го-
к л с гок-предшественниц костного мопоэтическими стволовыми клетка-
мозга взрослых людей при культи- ми человека. Эти CD34+CD45 1 Lin
щрованин клеток желточного мешка клетки ко-экспрессируют гены lal-l/
большинство эритроидных колоний SCL, c-myb, c-kit, flk-1/ KDR, GATA-
содержат клетки гранулоцитарно- 2, GATA-3, обладают высоким про-
макрофагального ростков, и это за- лиферативным потенциалом in vitro.
Ставляет полагать, что, по-видимому, По мнению M.-C.Labastie и co;mi,
клетки желточного мешка являются (1998), типичные гемопоэтичссын-
полипотентными стволовыми клетка- стволовые клетки у эмбрион;! -I
ми, обладающими различным отве- 6 нед гестации имеют следующую
том на цитокины. С другой стороны, фенотипическую характеристику:
имелись неэритроидные клетки-пред- CD34hiCD45^CD31 + CD38 Lin . Эти
шественншщ, которые явились ис- стволовые клетки, происходящие <1с
iочником роста очень больших гра- novo из парааортальной спланхно-
ну иощп омакрофагальных колоний, плевры, являются источником дефи
и некоторые клетки из этих колоний нитивного гемопоэза у человека.
при рекультивировании давали рост С помощью иммуногистохимиче-
фИ I рокдных колоний. Количество ских, элсктро ппо-микроекои и чеек их

6/
•ынтипния J/'И/ГО/Л - 11 i

ii культурялышя методов было ус- 11вчини i I in i н 1 i.шип крове-


иишшгпо, Ч ID. творные островки и желточном меш-
1) кытримбрмошльные гемопо- ке начинаю! регрессировать, пнутри-
п ичоские кластвры, состоящие из сосудистый ГОМОПОЭЗ идет на убыль,
( I) VI' -клеток, наблюдаются у 27— и к 12—15 пед гестации большие
У7 «дневного добриона; ядерные мегалобласты, представляю-
2) эндотелиально-ассоцинрован- щие первую генерацию эритроидных
IM.K- кластеры rcMoiioiiических кле- клеток, исчезают из циркуляции.
юк гакже обнаруживаются в хвосто- Печеночный этап гемопоэза возни-
noii части порты (ниже, чем рудимент кает у эмбриона с 5-й недели геста-
печени) и » пупочно-мезентериалъной ции, и на протяжении 3—6 мес пе-
артерии; чень является главным гемопоэтиче-
1) и долгосрочных культурах веы- ским органом. С 5-го месяца разви-
гральная часть аорты может поддер- тия плода 80% гемопоэтической ак-
/unit.it]. гемопоэз спонтанно благода- тивности связано с печенью и лишь
ри наличию эндогенных клеток-пред- 20% с селезенкой. Печень также
Шветвенниц гемопоэза, чего никогда является местом образования Эпо.
иг отмечается при культивировании Источником кроветворения в печени
дорсальной части сосудов. является гемопоэтическая стволовая
Псе эти факты свидетельствуют о клетка [Моисеева О.И., 1985; Zanja-
гом, что » ранний период эмбриоге- ш Е. et al., 1992].
неза гем о поэтическая стволовая клет- Первоначально гемопоэз в тече-
ка тесно связана с кровеносными ние I триместра направлен в сторону
сосудами эмбриона [Tavian M. et al., эритропоэза; к 9—10 нед гестации
19971. около 90% зрелых клеток составляют
Несмотря на отсутствие у эмбрио- примитивные эритробласты. В отли-
на зрелых гранулоцитов, тем не менее чие от эритроидных клеток желточ-
у нею определяются макрофаги, КОЕ- ного мешка они меньшего размера,
I М Предшественники Т-лимфоцитов встречаются безъядерные формы, со-
i поообны образовывать колонии в держащие НЬА и HbF. Постепенно
yilOTKlXi где происходит закладка примитивные эритробласты замеща-
•КЛОЧКОЙ железы, определяются В- ются вторичными эритробластами, и
ПИМфоциты [Palacios R. et al., 1993]. к 32 нед гестации эритроидные клет-
М панизмы регуляции гемопоэти- ки составляют около 40% [Oguro M.
•ичкнч к iu-1 ок-предшественниц жел- ct al., 1978]. По данным В.А.Бала-
О мешка не установлены. В шовой и соавт. (1984), в фетальной
гемопоэз к желточном мешке печени 6—7 нед гестации эритрока-
гериэуется следующим образом: риоциты составляют 90,3%, при этом
1) хотя имеются гемопоэтические 24,6% из них представлены мегалоб-
тные стволовые клетки, ластными элементами, а возрасте 22
1см не менее кроветворение ограни- и 27 нед гестации — 80,3% и 1,3%
чиаается эритропоэзом; соответственно.
2) эритроидиые клетки-предшест- В фетальной печени обнаружива-
венницы не чувствительны к Эпо; ются все гемопоэтические клетки-
М эритробласты поступают в предшественницы эритроидного ро-
циркулирующую кровь синхронно; стка (БОЕ-Э и КОЕ-Э), гранулоци-
4) терминально дифференциро- тарного (КОЕ-ГМ) и мегакариоци-
•аиные эритрондвые клетки сохра- тарного (КОЕ-Мег и БОЕ-Мег) рост-
няю1 ядро; ков, а также клетки-предшественни-
5) точные механизмы регуляции цы В- и Т-лимфоцитов. Количество
i амопоэзв не установлены. этих клеток быстро увеличивается и

68
кгош пич-пии i\ рл:ши1ия
. габилизируется н течение 5 7 над: 2) одновременная экспрессия гена
1 <Н ) в пределах 200, liOlX) 150 36—16 в клетках желточного мешка
и'КОК-ГМ 10 на 10 гепатоцитов и ранней печени не исключает того,
pomerques M. ct a!., 1992]. Как и что колонизация печени стволовыми
клетки-предшественницы эритропоэза клетками происходит также другой
•ЯЛТОЧНОГО мешка и костного мозга субпопуляцией стволовых клеток,
Прослыв людей, эти элементы фегаль- происходящих из клеток желточного
НОЙ печени не дифференцируются при мешка; в процессе перемещения и
Отсутствии Эпо, У эмбриона и плода «хоминга» человеческих гемопоэти-
Источником Эпо длительно являются ческих стволовых клеток и клеток-
iin;iгоциты, которые способны экс- предшественниц, а также в поддер-
Иресснровать ген Эпо. БОЕ-Э феталь- жании фетального печеночного кро-
пон печени иногда способны диффе- ветворения важную роль играют эн-
ренцироваться при отсутствии ИЛ-3; дотелиальные клетки фетальной пе-
мни резистентны к ингибиторному чени [Shieh J. et al., 1997].
|ффекту ИФу, что отличает их от В 1998 г. M.Kirzenbaum и соавт.
1.< (Е-'З костного мозга взрослых людей определили новый ген —pV18 — и
|1 •jisiidcvall N. et al., 1995]. установили, что его экспрессия наи-
Для понимания молекулярных ме- более высока на гемо по этических
Мнизмов, контролирующих ранний клетках области АГМ и ранней эм-
Гвмопоэз у человека, M.Kirszenbaura бриональной печени (28 дней); по
ii соавт. (1997), M.Teyssier и соавт. мере увеличения сроков гестации
проводили идентификацию ге- экспрессия этого гена снижается. Аи-
дифференцированно экспресси- торами было отмечено, что mPl IК
рованных в клетках гемопоэтической pV18 наблюдается во фракции клеток
Гквни в течение эмбриогенеза. Для CD 34—пуповинной крови и отсутст-
ион» сравнивали экспрессию тРНК вует во фракции клеток CD34'. На
я клетках тканей желточного мешка этом основании авторы считают, что
(•I мед гестации), АГМ (З1/?—4'Уз нед ген pV18 участвует в дифференциа-
ипации), печени (4—7 нед гестации) ции стволовых клеток CD34 -.
и в клетках пуповинной крови. Ав- Для идентификации молекуляр-
горы клонировали 2 гена : 36—10 и ных механизмов, ответственных за
16 16. Один ген (36—10) был высо- пролиферацию и дифференциации!
ыпкепрессирован в клетках тканей в клеток CD34+CD38-H CD34 ( CD38',
области АГМ и в клетках тканей на I.-H. Ohs и соавт. (1998), используя
раннем этапе развития печени; в метод RT-PCR, исследовали эту по-
последующие этапы развития эм- пуляцию клеток в онтогенезе (клетки,
бриона и плода экспрессия этого гена выделенные из фетальной печени,
снижалась и вновь увеличивалась в пуповинной крови и костного мола).
клетках пуповинной крови. Экспрес- Изучалась экспрессия различных
сия другого гена (36—16), напротив, факторов роста, генов рецепторов и
была высокой в клетках желточного факторов транскрипции. Установле-
мешка и ранней печени, а в клетках но, что уровень транскрипции для
ЛI M и пуповинной крови была c-kit, flt-3 и IL-3R(3c был в 2 - 5 раз
низкой. Hi этих данных можно еде- выше в клетках CD38—фетальной
ii 11, 2 вывода: печени, а в клетках CD38* отмеча-
I) одновременная экспрессия гена лось только увеличение в 2—3 рача
16 Ю и клетках тканей АГМ и уровня транскрипции (по сравнению
ранней печени может указывать на с таковыми костного мозга). Уровень
Miii рацию гем о поэтических стволо- транскрипции gp-130 и IL-6Ra был
iii.ix клеток ИЗ ЛГМ; одинаковым в клетках CD34ICI)3S
ФИШ nit нии t \л

*| и.мои печени и костного мозга, жет быть ограничен! ранними ста-


ко юопрессия i' myc и c-myb была диями гемоио т т .
уншмчпы п .'о и 4 pt3S соответст- Эта мо] юкл опальная модель у
венно HI этих клетках фетальной человека отличается от биклональ-
печени но сравнению с аналогичны- ного онтогенеза у птиц, у которых
ми клетками костного мозга. Эти полипотентная стволовая клетка дает
инмнения в уровне транскрипции в сепаративный рост клеток-предшест-
примитивных гемо поэтических клет- венниц кроветворения в желточном
кая могуч лежать к основе их бно- мешке и в печени, с синтезированием
401 ИЧвСКОЙ характеристики. эмбрионального и впоследствии фе-
Рецептер ы тир о зин ки и азы тального и взрослого типов гемогло-
(RTKi) через связывание с лиг ан да ми биновых цепей [Miller D., 1990].
опосредуют клеточный ответ на >кс- У эмбриона 4—5 нед гестации в
i рацеллюлярные сигналы, регули- рудиментах печени обнаруживаются
рующие пролиферацию и дифферен- кластеры, состоящие из эритробла-
цшцню клеток. Протоонкоген c-kit стов, моноцитов и гранулоцитов.
кодирует КТК для фактора стволо- Приблизительно к 9-й неделе геста-
IIi.i х клеток, и оба они играют важ- ции признаки кроветворения в пече-
iiyui роль в процессе роста и диффе- ни выявляются более четко. Остров-
ренцивции гемопоэтических стволо- ки кроветворных клеток обнаружи-
IU, 1ч клеток. М .Kirszenbaum и соавт. ваются в синусоидах печени, они
(1997), M.Tcyssicr и соавт. (1998) быстро разрастаются. Гемопоэз ста-
изучали экспрессию генов, ответст- новится экстраваскулярным.
венных за молекулы c-kit и ФСК, в Гемопоэтические клетки-предшест-
гемопоэтических клетках тканей жел- венницы фетальной печени определе-
i очиш о мешка, \\ участке АГМ и ны как C D 3 4 + C D 3 8 / + [Barcena A. et
г|ш у эмбриона человека 24— al., 1997]. S.Weeks и соавт. (1998)
Ь$ дней i естации. И ми было уста- изучали влияние некоторых цитокинов
+
itoitJiciio, что экспрессия гена c-kit на СО34 СП38-клетки фетальной пе-
иибшолилнсь во всех клеткак иссле- чени. Установлено, что Ф Н О а дает
ИУГМ1.1Ч гкаисИ, но на разном уровне, дозозависимый ингибиторный эффект
•кгмрессия ФСК гена на высоком на эти клетки и его действие опосре-
уронме обнаружен» только в клетках дуется через р55-рецептор. Пролифе-
N.iiiMi ЛГМ (24 дня гестации) и в ративная активность фетальных гемо-
J-.IS печени (28 34 дня геста- поэтических клеток не стимулируется
II нич Kt клетках отмечалась ФНОа или анти-ТФРЗ, и это застав-
iti.ii'ohiix импрессия гена c-kit. ляет + полагать, что пролиферация
Пси колику имеется пространственное CD34 CD38-iureTOK не регулируется
ограничение экспрессии ФСК, отно- аутокринной ингибиторной ТФРр-свя-
сящоося ип времени к началу гемо- зыо [Snoeck H.-W. et a l , 1996]. A.Bar-
п" и.1 и участке ЛГМ и колонизации cena и соавт. (1998) установили, что
печени кроветворными клетками, то некоторые клетки, как CD34+, так и
определение n o i o фактора роста в CD 34—, фетальной печени экспресси-
>ш\ клетках можно использовать для руют СО95-лиганд, связанный с мем-
феноп ипической характеристики ге- бранной клеток (mCD95L). Установ-
мопоэтических клеток АГМ и печени. лено, что эндогенный CD95L дает
Кроме ТОГО, ГСИ ФСК может быть ингибиторный эффект на пролифера-
фенотипическим маркером для миг- цию примитивных гемопоэтических
рирующих гемо по этических ствол о- клеток-предшественниц.
ш.1\ клеток ИЗ ЛГМ к печень. Био- Гемо поэтическим клеткам (Де-
fio есхая роль c-kit-рецептора мо- тальной печени гак же, как и клеткам

70
К/'OH/ tllurtlMt II ИН'ИиД tUtVIIWVII'Ot.HOlO !'Л:ШИ1ИН

Koi inoro мозга постнатального пе- число БОЕ-Э. Фракция клеток


виц дн. свойствен гак называемый CD34'AC133+ содержит большое ко-
•Шаитовый митоз, асимметричное де- личество КОЕ-Мсг по сравнению с
№ИС, когда одна из дочерних клеток популяцией CD34+AC133—и в куль-
i i вновктся коммитнрованной гемо- туре образует большие многолиней-
1)0 пической клеткой-предшественни- ные и(или) мегакариоцитарные коло-
1м и По данным S.Huang и соавт. нии, содержащие более 1000 клеток
(1ЧУ8), асимметричное деление клеток [Berger M. et al., 1998].
t D34'CD38 , выделенных из феталь- Поскольку в настоящее время все
1ни| печени, наблюдается уже в те- большее признание находит генная
чем иг первых митозов, и процент терапия, то для ее решения важной
in им меч рично делящихся клеток тем задачей является получение большо-
с, чем меньше гестационный воз- го числа гемоноэтических стволовых
рисм плода. Добавление в культуру клеток. H.Croizat и соавт, (1998)
i Hi гок фетальной печени различных культивировали гемопоэтические
ростовых факторов (ФСК, Эпо, клетки, полученные из фетальной
I I ГЗ-лиганд, ИЛ-3, ИЛ-6, КСФ-ГМ) печени плодов 19—21 нед гестации.
ичменяет направление коммитирова- Ими было установлено, что на 5хЮ3
ния указанных клеток, но пропорция трансплантированных клеток прихо-
ВМТок с асимметричным делением дится в среднем 610 КОЕ-ГМ, на
in гис'гся неизменной. Это свидетель- БОЕ-Э — 674, на КОЕ-ГЭММ — 246,
i гшует о том, что характер комми- причем 20% последних находились в
i крования клеток CD34+CD38— нахо- активном клеточном цикле деления.
'|||мч под контролем внешних сиг- Во фракции гемопоэтических
Иилов, тогда как асимметричное де- стволовых клеток определяются
1]i-iпк- этих клеток находится под CD34+CD4+. Популяция этих клеток
Контролем внутренних факторов кле- обладает высоким иролиферативным
ши потенциалом, в 1,9 раза больше, чем
До 56,3% клеток CD34+, выделен- фракция CD34+CD4—-клеток. При
ии \ пч фетальной печени, экспресси- изучении в культуре, в кондицион-
|ivitn АГ АС133, и эта фракция ную среду которой добавлены цито-
I» иг| ок содержит значительно боль- кины, фракция клеток CD34+CD4'
шое число примитивных и коммити- на 7-й день культивирования генери-
Вованных КОЕ, чем фракция CD38 ровала CD34+ клеток в 6 раз больше,
[АС133+ ИЛИ АС133-). Фракция чем фракция клеток CD34+CD4 .
1
(D34 АС 133—содержит меньше при- Клетки CD34+CD4* также экспресси-
ми 1ПИП1.1Х и коммитированных КОЕ, ровали АГ CD 13+ и CD33+ [Ми-
«ем фракция CD34+AC133+. По мне- ench M. et al., 1996]. По данным
мшо S.Huang и соавт. (1998), АГ F.Lim и соавт. (1995), в фетальной
ЧС133 является маркером примитив- печени плода человека 14—22 нед
н i.i х и коммитированных клеток- гестации клетки CD34+ составляют
предшественниц. Частота экспрессии 31%.
А1 АС 133 на гемопоэтических клет- Изучая пролиферативную актив-
+
iviix фетальной печени CD34 колеб- ность гемопоэтических стволовых
ИвТСЯ в пределах 14-—79%. клеток фетальной печени (сроки гес-
Популяция гемопоэтических кле- тации 9,2—22 нед), G.Raju и соавт.
ГОН CD34*AC133+ включает боль- (1997) отметили, что в среднем 20,1%
III и пеню I емоноптических клеток клеток находятся в фазе синтеза
CD34*CD38 , содержащих большое ДНК, тогда как у взрослых в костном
количество КОЕ-ГМ, несколько мснь- мозге — 7,6%. При исследовании ко-
Ш К( 1Е"Г! >ММ и незначительное ло и исобразую щей способности

/I
•)11И1Г()П0ЭЗА

КОЕ I ')ММ, КОК ГМ и БОЕ Э) от- гестации некоторые их них элемен-


ичоно, что по (Уравнению с клетками тов были положительными на
ОСТНОГО МОЗГа ВЗрОСЛЫХ л ю д е й ге- CD45R (зрелые Т- и В-лимфоциты),
юпоэтические клетки фетвльной пе- В другие — на CD154 (клетки моно-
ц-ии обриуЮЛ КОЛОНИИ КО голый» циты-макрофаги).
1
большого диаметре (в 2 рвзв больше), В печени плода клетки CD34
и» и раньше (на 10-й день при имеют размеры больших лимфоцитов
^следовании клеток из фетальной с узким ободком цитоплазмы, ядро с
1ВЧ0НИ и на 14-й день при исследо- дисперсным хроматином иногда со-
IIUIIUI клеток костного мозга взрос- держит небольшое ядрышко. Количе-
in.ix) и и 1,5 раза больше колоний, ство этих клеток — менее 0,1% от всех
1 i гемо по этические клетки феталь- гемопоэтических клеток, локализуются
ипи ПШЧеНИ о б л а д а ю т ВЫСОКОЙ н р о - они в основном в паренхиме печени
ииферн I йеной потенцией. и в перисинусоидном пространстве;
Печеночный гемопоэз ориентиро- встречаются также недифференцируе-
вки в сторону эритропоэза. Уже на мые бласты — они имеют узкий обо-
9 6-й педеле гестации у эмбриона док цитоплазмы, округлое ядро с
VHOSOXe обнаруживаются кластеры, нежным хроматином в центре и узким
вовтоцщие из клеток эритроидного ободком конденсированного хромати-
ряда, которые локализуются в сину- на вокруг ядерной мембраны, выра-
соидах и В печеночной связке. В этот женное ядрышко. Эти клетки распо-
вм мриод обнаруживаются макро- лагаются в паренхиме печени, имму-
фаги больших размеров п примитив* ногиетохимически относились к клет-
т.и- мегенхимные клетки с морфоло- кам CD43 4 . У плодов 5 нед гестации
гией и м.'фпiичоскич клеток (по-ви- их содержание составляет около 1%
чимому IiiuniiiitiIi.i). с увеличением от всех гемопоэтических клеток пече-
i |ми.DM Iriiiiiiini содержание этих ни. К началу II триместра гестации
i щ шк унсличиимстся. Общее число их число повышается приблизительно
|)И I роидно! о ряда к 50 100 до 5%, а к концу II триместра
пщ I и ми. ни чем микрофагов, и в содержание этих клеток было менее
Ч III in ii |*оч•НИИ до 93,4% »сех 1% [Timcns W. et al., 1990].
фирм! шили Н1ГМ1Н I пи гемоиотза со- При сроке 6-—7 нед гестации в
' НИШ I Itl 1 К И ||»И I Ц О И Д П О Г О рОСТ- печени плода обнаруживаются клет-
kl 111 ниш, IV" м о о д иммуноцнтохи- ки нейтрофильного ростка, в основ-
мнм W liiti.ii'. п m . п и (1990) уста- ном промиелоциты и миелоциты,
нопилн, чн' v h недельного эмбриона содержание которых до 27 нед гес-
'и мин I II и печени определяются тации остается неизменным и крайне
upупмиг мононуклсирные клетки, низким — около 1%, Содержание
мпрфишни (И относящиеся к мие- зрелых неитрофилов первоначально
iiDMuiiniiiiinpiii.iM элементам, а также низкое (около 0,15%), но с увеличе-
иечипчителыше число незрелых мие- нием сроков гестации их содержание
ыя клеток. Эти клетки локали- увеличивается. В этот же период в
II ОСНОВНОМ В соединитель- печени плода обнаруживаются также
но п iклип портального проетранст- эозинофилы, базофилы, моноциты,
u;i, КОТЯ мт-иомопоцитарные элемен- макрофаги и мегакариоциты, содер-
i I.I определялись во всех участках жание которых, за исключением мак-
печен и i в том числе в синусоидах и рофагов и мегакариоцитов, постепен-
пвриоинусоидальноЙ печеночной но увеличивается к 22—27 нед гес-
онвкв! С увеличением сроков геста- тации. Начиная с 8—9-недельного
пни К0ДКЧ9СТВ0 миеломоноцитарных срока гестации в печени эмбриона
клятоя увеличивалось, и к 16 кед человека обнаруживаются и псболь-

72
топит л ппчпщ nnvuwirohiitHu гл.тишн

том количестве (0,14%) лимфоциты, ни i пи N К-Клеток и взаимоотноше-


содержание которых по мерс увели- нии N К.-коимитированных клеток-
чения сроков гестации повышается, предшественниц с примитивными ге-
и к 22 27-иедельиому сроку они мо поэтическим и клетками-предшест-
востввляют около 10% [Балашо- венницами на различных стадиях
iiii 11. Л. и др., 1984]. П о да1 шым созревания известно мало. M.Muench
O.Aima и еоавт. (1984), у 8-педель- и соавт. (1998) изучали клетки
+
Иого эмбриона до 90% лимфоцитов CD34 Lin—в культуре без добавле-
01 носятся к пре-В-клеткам, опреде- ния к последней клеток стромы и
мются В-лимфоциты, несущие на сыворотки крови и установили, что
По ей поверхности lgM. Приблизи- клетки CD34+CD38- и CD34>CD38-
тельно в возрасте \\Чг нед гестации дифференцировались в NK-клетки
обнаруживаются лимфоциты, на по- при добавлении в культуральную
верхности которых определяются TgG среду ИЛ-15 и c-kit-лиганда.
и 1цЛ. К 14-недельному сроку геста- При культивировании клеток
ним процент лимфоцитов, циркули- CD 344 CD 38 -Lin— в присутствии ци-
рующих с кровью плода и имеющих токинов (Ш3/т1к2-лиганд, kit-лиганд,
каждый класс рецепторов иммуног- ИЛ-7) без добавления в кондицион-
вобулинов, соответствует таковому у ную среду клеток стромы эта попу-
взрослых, однако способность этих ляция клеток образует клетки CD19+
фетальных клеток синтезировать и и CD56+ [Humeau L. et al., 1998].
* екретировать иммуноглобулины При изучении клоногенных
Проявляется только к 20-неделъному свойств гемопоэтических клеток пе-
сроку гестации. В печени плода чени плода человека &—12 нед гес-
14 22 нед гестации определяются тации установлено, что вне зависи-
CD.V-T-лимфоциты (20%), CD56'- мости от возраста число колоний, их
N К-клетки (33%), СО19+-В-клетки размеры и клеточный состав колоний
(31%) [Lim F. et al, 1995]. не отличались от таковых при иссле-
И возрасте 14 нед гестации лим- довании взвеси клеток костного моз-
фоидпые клетки имеют средний раз- га взрослого человека; 92% колоний
мер, а с 16 нед и позднее появляются были гранулоцитарными, 5% — сме-
ппмфоциты малых размеров. На по- шанными и 3% — макрофагальными.
верхности лимфоцитов определяются В гранулоцитарных колониях 65%
гяжелые цепи lg и легкие цепи — к клеточных элементов относились к
и X. В цитоплазме лимфоцитов про- митотическому пулу, а 35% — к по-
межуточного размера определяются стмитотическому. Ультраструктур но
inn, но не определяются цени к и X в миелобластах определялись хорошо
[g, Большие клетки с морфологией развитый пластинчатый комплекс
, моноцитов и макрофагов иммуноги- [Barak Y. et al., 1980].
стохимически окрашиваются как на При клонировании в полутвердой
I/.- и 7-тяжелые цепи, так и на легкие питательной среде взвеси гемопоэти-
к- и Х-цепи Ig. Возможно, что окраска ческих клеток, полученной из печени
этих клеток обусловлена пассивной плода (сроки гестации 6—27 нед),
абсорбцией иммуноглобулинов эти- А.А.Раков и соавт. (1982) установи-
ми клеточными элементами [Tie- ли, что уже на 6-—7-Й неделе гестации
теш W. et ul., 1990]. из суспензии клеток образуются ге-
В печени плода (сроки гестации мопоэгические агрегаты. Наиболь-
6—22 нед) NK-клетки составляют шое количество миелоидных клеток-
J5 70% от всех лейкоцитов эмбрио- предшественниц отмечалось при изу-
на н плода. Их фенотииическая ха- чении взвеси клеток печени при 9- и
рактеристика CD56'CD3 . О раз- 12-недсльных сроках гестации (в не-

73
сколько р:п больше, чем при изуче- тельно к 64j мес внутри/! ровного
нии костного моэгя взрослых людей). развития плода. B.Woli и соавт.(1983)
При первом подъеме (9 под) преоб- считают, что селезенка йграеп роль
н иди ют колонии над кластерами, не столько органа фетального гемо-
миелопоээ носит моноцитомакрофа- поэза, сколько места секвестрации
i влъный кар актер, наблюдается ак- клеток.
гивность клеток-предшественниц Сокращение экстрамедуллярного
(ритропоэз*. К 21-й педеле гестации кроветворения совпадает с появлени-
отмечается второй подъем — преоб- ем первых признаков костномозгового
niuiiiL'i кластер о образование, в агре- гемопоэза. П оследняя анатомическая
i:n;i\ определяются в основном мие- фаза гемопоэза возникает приблизи-
поб ласты и промиелоциты, иногда тельно к 4 мес гестации.
|релыс гранулоциты, спонтанный К 8-недельному сроку гестации
1ри i ропоэз отсутствует. появляются рудименты хряща длин-
I [еченочный гемопоэз достигает ных трубчатых костей с одновремен-
Максимума к 18—20-й неделе геста- ным появлением клеток-предшест-
пнп, а зятем гемопоэтическая актив- венниц остеокластов (CD68 + ), CD341"-
ность печени снижается, и в Ш три- эндотелиальных клеток и преостеоб-
М0С1 ре основной клеточный состав ластов. Костномозговые полости на-
представлен клетками эритроидного чинают формироваться в хрящевых
ростка. К моменту рождения ребенка рудиментах длинных костей вследст-
кроветворение в печени прекращает- вие развития сосудов внутри проме-
ги, котя в течение 1-й недели жизни жутков, сформированных благодаря
ребенка у него в печени могут активности макрофагально-опосре-
обнаруживаться единичные гемопо- дованного хондролнзиса. Между ос-
гтическне элементы (см. рис. 1). сифицирующими трабекулами проис-
('шдлченочный этап кроветворения ходит формирование сосудистых си-
нтникас! с 12-й педели гестации. нусов. Первые признаки эндогенного
111*|ни>н.мм шлю в селезенке опреде- эритро- и гранулоцитопоэза появля-
лит 11 ч 1 рпнуло-, эритро- и мсгака- ются у плода 11-недельного срока
риониюпоп. С 15-псдельного срока гестации в области первично-образо-
iт пиши иояилиштся лимфоциты [Ti- ванного хряща вокруг артериол, в
I W п al., 19Х7|. В возрасте стромальнои мезенхимной области.
!•' !Я нел 'invi риутробного разви- Гемопоэтические клетки ограничены
i и м ПЛОД1 НЭУо клеток селезенки CD 34*-клетками эндотелия. Сосуди-
ii|HVH пшисим клетками лнм(|)оидной стые структуры, включающие эндо-
природы, ионнлнютея лимфоциты с телиальные клетки и гладкомышеч-
ину I рик II*-1 о ч н ы м с о д е р ж а н и е м IgG ные актин-экспрессирующие перици-
и Ij'M ты, представляют на данном этапе
При куимикиропапи клеток селе- главный стромальный компартмент
и-ики ПЛОДО1 IK 24-псдельного воз- зарождающегося костномозгового
p.ui.i в полутвердой среде Howell гемопоэза [Labastie M. et al., 1997].
установлено, что до 80% колоний В развивающемся f
костном мозге
составляют мопоцитомакрофагаль- CD34 -reMOiio3TH4ecKHe клетки не
пые; относительное содержание ком- обнаруживаются [Peault В. et al.,
ми iированных клеток мислоидного 1995]. По данным L.Chen и соавт.
ряда • 5 раз больше, чем в костном (1976), первоначально костный мозг
MOire взрослого человека. Кроветво- возникает в телах позвонков у плода,
рение в селезенке достигает макси- размером 95 мм (13 нед гестации).
мума К 4 мес гестации, а затем идет В.И.Ругаль и соавт. (1987) указы-
ил убыль п прекращается приблизи- вают на то, что у плодов 11 —14 нед

74
Kl'Otil ШО1Ч I Ml H ПП'ИПД Ш1УП'ИУП1О1,Щ)Ю /'Л.1ЛШИЯ

it i шипи и подвздошной кос!и опре- эндотелиалькыми клетками. Эти уча-


деляются незрелые гемопоэтические стки примыкают к aSM актину4
ИЛ9ГКИ и Эр, а возрасте 2 3 - 2 7 иод миоидных клеток.
>•• t.L 11 и11 обнаруживаются элементы IV стадия (гестационныЙ возраст
in гч трех ростков кроветворения па 10,5—15 нед). Определяются началь-
it* i-ч стадиях развития. В возрасте ные признаки гемопоэза. Кроветвор-
I I 14 иод гестации появляются пер- ные клетки обнаруживаются в пер-
iH.ii- очаги кроветворения в диафизах вичных островках, которые увеличи-
ЯЛОчевоЙ и бедренной костей. В ваются в размерах. Эти участки
|О1расте 18—20 нед гестации менее находятся только в диафизе, содер-
Н)'\, костномозговых клеток пред- жат гемопоэтические клетки, прони-
I ршвлено клетками эритроидного ро- заны сосудистыми синусами. Боль-
I'Iiwi, ;i пейтрофильный составляет шинство из этих клеток составляют
мпкт 15%. Появлению гранулоци- CD 15^-миелоциты, редко гликофо-
ГВрных клеток предшествует появле- рин А+ незрелые эритроидные клетки
ние макрофагов (как и в печени и СЭ34+-не эндотелиальные клетки.
и ни да), соотношение макрофагов к Гемопоэтические клетки находились
МЙтрофилам уменьшается обратно- в контакте с aSM актином4 миоид-
Вропорционально срокам гестации ных клеток.
(Ohls R. et al., 2000]. V стадия (гестационныЙ возраст
На основе изучения гистологиче- 16 нед и более) характеризуется
гиих срезов с использованием МА окончательной организацией длин-
Против гемопоэтических и эндотели- ных костей, в которых определяются
1ЛЫ1ЫХ клеток, клеток стромы, фиб- полностью кальцифицироваиные
робластов и клеток гладкой муску- участки и гемопоэз.
Яатуры в течение развития костно- На основании этих данных
мп нового кроветворения у эмбриона P.Charbord и соавт. (1996) считают,
и плода человека выделяют 5 стадий что главными признаками начала
[Charbord P. et al., 1996]. гемопоэза в длинных костях является
+
/ стадия (гестационныЙ возраст отсутствие СО34 -гемопоэтичсеких
<t,d 8,5 нед). Определяются исклю- клеток-предшественниц, превалиро-
чмгелыю хрящевые рудименты. Хон- вание гранулоцитопоэза, исключи-
дроциты расширены и в капиллярах тельно развитое в специфических
+
Обнаруживаются СО34 -эндотели- структурах, которое организовано
1ПМ.ИЫС клетки, располагающиеся в сосудистыми клетками. Можно 4
также
iu-рихондриальнои части мезенхимы. полагать, что клетки CD68 участ-
// стадия (гестационныЙ возраст вуют в процессе хондролизиса, а
К,5 У нед). Происходит активный сосудистые клетки (эндотелиальпые
процесс хопдролизиса, в костномоз- и миоидные) могут быть главными
говых полостях выявляются CD68+- участницами формирования микро-
и гсетки. окружения в период становления
/// стадия (гестационныЙ возраст кроветворения в костном мозге.
9 10,5 нед) характеризуется разви- У плода 13 нед гестации содер-
1 нем сосудистой сети при отсутствии жание в костном мозге клеток
признаков гемопоэза. В средних уча- CD34+CD19+ составляет около 30%,
стках диафиза определяются специ- и к 20-недельному сроку их содер-
фические структуры, в которых на- жание снижается до 10%. В то же
блюдаются маленькие участки соеди- время процент клеток CD34'CD19
нительной ткани, окруженные вокруг в костном мозге в эти периоды
ВртерИОЛ С-1)45 -клетками, отделен- оставался неизменным. К 22 нед гес-
ные от окружающего синуса CD34+- тации содержание гемопоэтических
ФИ.ЧИ(МИНИН : ) С И П Ч И И ) » . ( Л

стволовых к л е ю к и костном мозге более высоким пролиф| р! гивным по-


составляет 1,6%. Эти изменения в тенциалом отмечается попсе высо-
распределении содержании гемопо- кий про ПСЕ II КЛШТОК, находящихся в
тгических клеток в течение развития S- и Ga/M-фазах клеточного цикла
плода следуел учитывать для выбора деления. Высокое активное состояние
времени трансплантации стволовых клеток костного мозга плода будет
к л е т о к in utero [Lim F . ot a l . , 1995]. способствовать увеличению прижив-
Среди костномозговых элементов ляемости этих элементов и является
вы являются клетки С D 344' 1)4h и одним из решающих факторов для
CD34+CD4 . Обе фракции этих кле- их получения для генной терапии,
юк поддерживают рост В-лимфоци- т. е. костный мозг плода обладает
тов и м иелоидных элементов. наибольшей потенцией для восста-
П)34ЧЧ)4 ( также экспрсесировали новления гемопоэза у реципиента
ЛГ CD13 и CD33 [Muench M. et [Casadevail N. et al., 1995; Wul A. et
al.. 1996]. al., 1997].
Как известно, в последние два M.Michejda и соавт. (1997) изуча-
десятилетия успешно развивается но- ли фенотипическую характеристику
иое направление в трансплантологии костного мозга плода, пуповинной
пересадка стволовых клеток in крови и костного мозга взрослых
Utero, получение гемопоэтических людей.
стволовых клеток из органов плодов Костный мозг получали у плода
(печень, костный мозг) для пересадок на II триместре развития. Авторы
к постнатальнлм периоде [Maggio A определяли содержание клеток
0) и)., 1997; Touraine J.-L. et al, 1997; CD34 1 , клоногенный и пролифера-
Wengler G. et al., 1997; Zanjani E. et тивный потенциал и иммунологиче-
nl., W97|, поэтому важное значение скую реактивность (см. приложение).
приобретает изучение не только ло- Установлено, что имеются отчетли-
и.1 ни tiiiuni, свойств и количества ге- вые различия как свойств, так и
мшюи ических клеток, но и их про- числа гемопоэтических клеток кост-
дифервтивный потенциал. Су тест - ного мозга плода от таковых в
шкмi,iи вклад в этот вопрос внесли пуповиннои крови и костного мозга
Л.Wul и соавт. (1997), которые уста- взрослых: по сравнению с последни-
nu ни ли, что клетки костного мозга ми в костном мозге плода во много
ином,! имеют отчетливые преимуще- раз увеличено количество клеток
i гм для грансплантации по сравне- CD34+, клоногенный и пролифера-
нию 1 другими источниками получе- тивный потенциал и низкая иммуно-
нии гамопоэтическнх стволовых кле- логическая реактивность (в 3—6 раз).
РОК, поскольку и фетальном костном Все эти данные дают основание
МО н е : трансплантировать костномозговые
1) более высок процент клеток клетки плода для восстановления
(1)14'; числа стволовых клеток у реципиента
2) более высокая клоногенная и генной терапии, поскольку клетки
способность гемопоэтических клеток; костного мозга плода обладают оп-
3) гемопоэгические клетки обла- тимальными свойствами для прижив-
дают низкой иммунорсактивностью, ления без развития БТПХ [Michej-
ЧТО выявляется в реакции смешанной da M. et al., 1997].
кулмуры лимфоцитов. В возрасте 12—20 нед гестации у
И отличие от стволовых клеток, плода среди лимфоидных элементов
полученных из других источников, преобладают пре-В-клегки. По мерс
(см. приложение I), клетки из фе- развития скелета костномозговое
i ,i fibHOro костного мозга обладают кроветворение играет все большую

76
КГОШ 11Ю1ЧНИ1 /I Illl'iWJt ПНУИ'ИУЧ'оиЮЦ)

u i возрасте 30 над гвстации И гуморальным взаимодейслпнем с


IMMчини мозг представлен всеми ме- клетками тимического микроокруже-
ими гемопоээа, и ом является ния. Наличие интратимических ЛГ,
и, мовным источником образования необходимость их представления, вы-
фирменных элементов крови. сокий пролиферагивный потенциал
С 32-недельного возраста плода кортикальных тимоцитов зависит от
и до рождения ребенка все костно- развития дендритических клеток (ип-
ми и оные полости заполнены гемо- тердигитатных и клеток Лашергац-
ш> п ичеекими клетками, т. е. объем са), макрофагов, эозинофилов и ге-
1ЮСТНОГО мозга равен объему гемо- мопоэтических стволовых клеток.
поэтических клеток. К моменту ро- Некоторые клетки CD341 экспрссси-
КДОМИЯ ребенка кроветворение прак- руют АГ CD4+, а в других клетках
ГИчески полностью ограничено кост- он не определяется. Установлено, что
iii.iM мозгом (см. рис. 1). Однако обе фракции клеток — СО34 4 С04' и
in носи тельный объем костного мозга CD34+CD4— — поддерживают рост
Пдода и новорожденного ребенка Т-клеток в вилочковой железе. Фрак-
iiLi'iii i ельно меньше, чем у детей ция клеток CD34+CD4+ обогащена
Ьо ice старшего возраста и взрослых. гемопоэтическими стволовыми клет-
Это объясняется тем, что большая ками; эта фракция экспрессируег гпк-
Пасть скелета плода является хряще- же АГ CD 13 и CD33 [Muench M. Л
|ОЙ, и длинные кости конечностей а!., 1996]. Небольшое число стволо-
пропорционально меньше. Актуаль- вых клеток находятся в строме ни
II i.i it же объем костного мозга при- лочковой железы. Большая час п.
ыш штелько соответствует общему гемопоэтических стволовых клеток
объему гемопоэтических клеток. По- образуют гранулоцитарные И )риг-
ному единственным путем, которым роидные колонии в межлобулярпой
плод или новорожденный ребенок соединительной ткани железы в тес-
М0Ж61 значительно увеличить гемо- ном контакте клетка с клеткой, с
|ц> 11, - это реактивный или персисти- фибробластами, которые способны к
рукнний экитрамедуллярный гемопо- антигенной презентации. Дифферен-
п, главным образом в брюшной цирующиеся тимоциты образуют
полости (печень, селезенка). Класси- также КСФ, необходимые для созре-
ческим примером является феталь- вания клеток.
ИЫЙ чритробластоз, при котором Опыты по пересадке вилочковой
возникает висцеральный гемопоэз. железы реципиентам с врожденными
Развитие лимфоидной ткани и им му по дефицитными состояниями
IK л очковой железы происходит от- показали нормальную толерантность
носительно рано (см. схему 1). Так, больных, и последние живут до 2- 20
1вча 11си вилочковой железы наблю- лет после трансплантации вилочкой
дши гея уже у 8-недельного эмбриона. железы без признаков иммунодефи-
В течение онтогенеза вилочковая цита. В то же время пересадка
железа млекопитающих участвует в вилочковой железы от плодов 14-пс-
(ритро- и грцнулоцитопоэзе. Унитар- дельных сроков гестации и вОЛЫВ!
ная коцепция, что все клетки крови приводила к смерти болышшОТМ
происходя! из общей ГСК, сомнений реципиентов от БТПХ. Эти данные
in' вызывает, по считается, что в указывают на то, что плод челомк!
внлочковоЙ железе наблюдается осо- становится и мму но коми стен гпым
ныи путь созревания мигрировавших вскоре после 12-нсдельного Bosptm
CD344 -гемоиоугических стволовых [Hobbs J., 1997].
i шч ок, п ЭТО обусловлено главным Лимфоциты вилочкой железы 7
образом с регуляцией клетки клеткой 8-неделыюго эмбриона имени ВДр1
ФНИПИН)1ИЯ Ч' KtA

iii up,иипи.моп фориы с l ( нуклео- робьев и ooBBi (1985) выекичывают


n.iMii и них не определяются т - л г , предиилижгниг. НТО мри сненс ире-
рецепторы к Эр 6e.pt не,, it возрасте имуществвиной органной локализа-
II 12 МД leiiamin ГИМОЦИТЫ име- ции кроветворения происходит не
ни несколько меньшие размеры, по- перемещение одинаковых стволовых
•вляются рецепторы ь Эр барана и клеток из одного органа в другой,
I AI [Райцине С.С, и др., 1979]. а пролиферация на новом месте иной
После 10-недельного срока гестации стволовой клетки. Напротив, D.Mil-
пимфоцитопоэтическая активность ler (1989) считает, что стволовые
вилочковой железы увеличивается. клетки в различных органах и сис-
Кяеп к и эрктроидного ряда, гра- темах плода имеют единое гистоге-
кудоциты и макрофаги обнаружива- нетическое происхождение — из жел-
ются I' пило11копой железе па 10-й точного мешка. D.Linch и соавт.
неделе геста ни и. Эрнтрондные эле- (1982) отмечают, что у 12V2—19-не-
MIIIILI имеют светлое ядро и цито- дельных эмбрионов содержание в
ГСЛВЗМу и находятся на разных ста- крови гемогюэтических клеток-пред-
0И1Х гемоглобинизации. Эозинофилы шественниц грануломоноцитопоэза в
SOKI гшзуются между тимическими 120 раз, а эритроидных — в 50 раз
|ич ккулоэндотениальными клетками, больше, чем у взрослых людей. Эти
и также среди телец вилочковой различия в числе и активности гемо-
КШ1СЗЫ. В ттом же участке обнару- поэтических клеток-предшественниц
живаются сегментоядерные нейтро- на разных стадиях развития эмбрио-
филы и макрофаги. Мегакариоциты, на и плода подтверждают концепцию
i ромбоци IЫ наблюдаются на 14-й о заселении развивающегося костно-
неделе гестации, а моноциты — на го мозга циркулирующими гемопо-
IX и неделе [Bodey E. ei al., 1997]. зтическими стволовыми клетками.
Первые лимфатические узлы по- Эта унитарная концепция об едином
iiiintiiiiи и ни 10-Й неделе г е с т а ц и и , а гистогенетическом происхождении
инмфоидиый аппарат кишечника не- ГСК в различных органах гемопоэза
ичнп.кп иочднсс на 14-16-й неде- у плода и эмбриона у человека не
II V плода И нед гестации в лим- оспаривается никем и подтверждена
||ы i им* t кич учлах обнаруживаются исследованиями M.Muench и соавт.
ipHipufViiui III и макрофаги, а в воз- (1996), M.Kirszenbaum и соавт. (1997),
рйси I ' ш I Iранулоциты и моно- M.Teyssier и соавт. (1998).
инi i.i Нимфоциты наблюдаются у Гемопоэтические полипотентные
|(
I ' HI iii-iti.ntnt) п л о д а . Н а б л ю д а е - клетки-предшественницы мигрируют
1
1 DpiioHii'ittJiitiio м и е л о п о э з в л и м - из печени в костный мозг, вилочко-
фВ1 ических v пи ч искорс сменяется вую железу, селезенку, кровь, но
щмфпни ] ими ) HIM и с этого момента причины и механизмы, регулирую-
про! россивно увеличивается. К мо- щие движение этих клеток в эти
ыенту рождения у ребенка определя- органы, изучены слабо. Высказыва-
ЮТ01 £20 ПММфктИЧеСКИХ узлов. Од- ется мнение, что этот процесс может
нако охочвтельное формирование си- управляться взаимодействием ряда
куеов и стромы лимфатических узлов адгезивных молекул, включая хемо-
происходит в постнатальыом пе- кины. Для подтверждения этой ги-
риоде потезы были проведены ряд иссле-
111 вк, в разные сроки гестации дований. Так, A.Shaaban и соавт.
гемопоэз имеет различную органную (1998) установили, что по мере раз-
ПОХЯЛИЭацию, и » некоторые периоды вития плода происходит утрата ад-
кроветворение происходит одновре- гезивной молекулы VCAM гемопо-
Менно к разных органах. А.И.Во- этической тканью в печени, и это

78
К1Ч)Ш /Ml)/'/ М III riU>JI IIUVIIWVII'DI-Itnio

нрннодит к снижению гемопоэза и пло дин больше, чем в селезенке и


ним органе. Выраженная исспрессия вилочковой железе. Клетки CD341 из
и in глинной молекулы VI,Л-4 на Гв- вилочковой железы обладают боль-
МЧ1Н) и и'к-скнх клетках в печени мо- шей способностью к образованию
-i,i i свидетельствовать о первичной Т-лимфоцитов, чем эти же клетки из
•О Л И этой молекулы в адгезии гемо- других органов [Poznansky M. et al.,
ПО1ТИЧеских клеток к строме печени 1998].
м- Увеличение экспрессии CD44 Все эти данные указывают на то,
ми i емопоэтических клетках может что в процессе миграции гемопоэти-
\<| ,i n.iiia i ь на первичную роль адге- ческих клеток-предшественниц важ-
ш HI теги гемопоэтических клеток к ная роль принадлежит адгезивным
|ЛОТкам костномозговой стромы и молекулам. Мигрировапные клетки-
ни переключение на костномозговой предшественницы, осевшие в соот-
I 1МОПОЭЗ. ветствующих органах, приобретают
М .Poznansky и соавт. (1998) изу- специфические функциональные
•t;iiiit экспрессию адгезивных молекул свойства, которые присущи тканям
CCR-5 и CXCR-4 на клетках CD34 4 , этих органов, лишний раз подтвер-
ui.i деле! [пых у плодов 16—22 нед ждая роль «зерна» и «почвы».
ГЮТации из печени, селезенки, кост- В разные периоды внутриутроб-
и т и мозга, ВИЛОЧКОВОЙ железы и ного развития ребенка у него в крови
кропи и отметили, что во всех определяются клетки, имеющие раз-
Наученных пробах клетки CD34+ экс- личное органное происхождение.
ирсесировали эти молекулы. Однако Наиболее ранними клетками крови
Ответная реакция этих клеток на являются эритроидные, среди кото-
Имокины (SDF-1-фактор, выделен- рых можно выделить 3 генерации:
ный из стромальных клеток, М1Р-1а примитивные, первичные и дефини-
И. М1Р-Р) была различной: наиболь- тивные.
ший хемотаксическиЙ ответ наблю- Показатели красной крови, числа
•длся у клеток CD34 + , выделенных лейкоцитов и тромбоцитов в различ-
in печени (28%) и костного мозга ные сроки гестации представлены в
( 4%); в меньшей степени — и з селе- приложении 3. Принципиальными
|внки (4,1%) и вилочковой железы особенностями эритроидных клеток
(2,8%). Хемокинам принадлежит важ- плода в отличие от таковых постна-
ивя роль в миграции гемопоэтиче- тального периода являются то, что
ских клеток-предшественниц, и при средний глобулярный объем феталь-
оседании последних в различных ор- ной крови более высок, чем у взрос-
i апах они теряют чувствительность лых, и он уменьшается по мере
к хсмокинетическому стимулу, хотя созревания плода.
у этих клеток сохраняется экспрессия Характерно наличие в крови пло-
рецептора к соответствующему сти- да значительного содержания эрит-
мулу. Количество и потенция клеток робластов; увеличение количества Эр
('1)34' в различных органах плодов происходит во И—III триместрах
Id 22 нвд гестациии различаются гестации.
между собой. Так, содержание этих Эритропоэз in utero контролиру-
клеток в селезенке составляет 28%, в ется исключительно эритроидными
ВИЛОЧКОВОЙ железе — 7 % , в костном факторами роста. Эпо не стимулиру-
МОЗге — 22%, в печени — 23%, в кро- ет эритропоэз у плода. Хотя меха-
пи -5%, a CD34+CD38- — 6 % , 7%, низм регуляции эритропоэза в пост-
25%. 27% и 2 3 % соответственно. натальный период у человека извес-
Числи КОЕ (эритроидных и миело- тен, однако на сегодняшний день
ндных) » костном мозге и печени остается открытым вопрос, сущест-

79
it\n ни mi же механизм р а уляции содержание постоям It u увеличивается
В .MI г е н а KUii.iM.iii период. до 23-нсдельиогв возраста плода.
В течение I 11 триместров гес- Эочинофилы обнаруживаются в кро-
гации Эпо образуется в феталькой ви плода, длина которого 64 мм, и
печени, моноцитомакрафагальными их содержание постоянно увеличива-
клеточными элементами. Иногда в ется до 20-недельного срока гестации,
гечение 111 триместра и первых не- и после этого срока количества
дель постнатальной жизни анатоми- эозинофилов составляет
ческий участок образования Эпо пе- (0,1...0,2)х109/л. Число моноцитов в
ремещается из печени в почки. Сти- крови 14-недельного плода составля-
мулы, вызывающие это перемещение, ет 1х10с'/л, а затем постепенно уве-
in- выяснены, но, вероятно, в нем личивается, достигая максимума у
in рает роль изменение парциального плода, длина которого составляет
давления кислорода в артериальной 18—24 см.
Крови, наступающее после рождения Лимфоциты в крови появляются
ребенка. Клинические наблюдения на 7—-8-й неделе гестации и почти
Показывают, что для нормального одновременно в вилочкой железе. В
фатального эритропаээа не обяза- крови содержание лимфоцитов со-
ii-in.но наличие Эпо, секретируемого ставляет 57% от общего числа лей-
мочками; у плодов без почек уровень коцитов. В возрасте 12 нед гестации
Эпо и сыворотке крови и гематок- абсолютное число лимфоцитов со-
ритное число остаются нормальными ставляет 1хЮ9/л, а к 20—25 нед —
[Ohls R. et al., 2000]. 10х109/л. Несколько позднее, чем в
Относительно взаимоотношения крови, лимфоциты обнаруживаются
ЭрИТрОИДНЫХ клеток-предшественниц в лимфатических узлах (10 нед), се-
и факторов роста. БОЕ-Э плодов в лезенке (11 нед), слизистой оболочке
культуре тканей созревают в присут- кишечника (12 пед) и групповых
ВТИН одною Эпо, без добавления лимфатических фолликулах (15—-
других факторов роста в кондицион- 16 нед). У 10-недельного эмбриона
ную среду, тогда как подобные клет- количество лимфоцитов в костном
ки костного мозга взрослых людей мозге составляет 150 000, в селезен-
способны созревать in vitro только ке — 100 000, в вилочковой железе —
при наличии в питательной среде 15 000. К 13-недельному сроку геста-
наряду с Эпо и других факторов ции число лимфоцитов увеличивается
роста, например ИЛ-3, КСФ-ГМ. в 10 раз, а к 16-й неделе — в 100 раз
М егакариобласты обнаружива- [Говалло В.И., 1987]. Т-суирессоры
! у эмбриона 5-недельной геста- обнаруживаются в печени у 8-недель-
i i в возрасте 16—21 нед гестации ного эмбриона, а в периферической
обнаруживаются макротромбоциты. крови — у 14-недельного [Unander A.
Первоначально лейкоциты обна- et al., 1981]. По данным J.Uksila и
ружи веются в центре желточного соавт. (1983), в печени 9-неделыюго
мешка, а затем в печени, селезенке эмбриона обнаруживаются естествен-
II костном мозге. У плода 10—20-не- ные киллерные клетки. Зрелые Т-
цельной гестации число лейкоцитов лимфоциты определяются на 14-й
I кропи составляет (0,7...1)х109/л. неделе гестации. В этот период на
Мислоциты обнаруживаются на 8-й тимоцитах мозгового слоя вилочко-
неделе гестации и в крови плода, вой железы определяется экспрессия
•мшил которого 19 мм, они состав- HLA-A, -В, -С и la-подобного АГ
ПЙЮ1 15% от содержания всех лей- [Githus N. et al., 1983]. A.Bonati и
коцктов. Зрелые нейтрофилы выяв- соавт. (1987) указывают на то, что
ПЯЮТСЯ к \2lh пед гестации, и их к 15-недельному сроку гестации в
кгит пицчшн и tnrnajl tuivii'Hvii'Di.noH) гл:тИ1ИН

HI чсии, костном мозге, •илочковой (2О,2х1О''/л) и в III (18,5хЮ»/л) три-


колею определяются клочки, содер- местрах. Напротив, общее число ге-
i .нине дезоксинуклеотиднлтрансфе- м о поэтических клеток-предшестве-
p'MV В-лимфоциты также поииляюг- ниц нарастает по мере увеличения
Ц рано они обнаруживаются у сроков гестации: в I триместре в
5
^ 7-недельного эмбриона. В возрас- крови определяется 21,5 на 10 ядер-
5
и М 12 пед гестации в лимфоцитах ных клеток, во 11 — 245,9 на 10
Обнаруживаются поверхностные IgM, ядерных клеток и в III—250,6 на
5
Которые можно отнести к пре-В-лим- 10 ядерных клеток. В I триместре у
фоцитам [Asma G. et al., 1984]. плода в крови превалируют КОЕ-
5
Исследование субпопуляции лим- ГЭММ (20,2 на I0 ядерных клеток)
фоцитов крови пупочной вены у пло- и в незначительном числе встреча-
5
т и 14—22 нед гестации с помощью ются БОЕ-Э (0,2 на 10 ядерных
3
МЛ показали, что содержание лимфо- клеток) и КОЕ-ГМ (3,8 на 10 ядерных
1И1 и ж с маркером CD2 составляет клеток); во II триместре число КОЕ
(73±25)%, CD3 — (65±15)%, CD4 — увеличивается и составляет КОЕ-
ИКЧ4)%, CD8 — (17±6)%, CD19 — ГЭММ, БОЕ-Э и КОЕ-ГМ в среднем
5
i !0±9)%, CD34 — ( 6 ± 3 ) % , CD56 — 98,9, 58 и 86,3 на 10 ядерных клеток
i " i 18)% [Lim F et al., 1995; Muller A. соответственно, а в III триместре
M al., 1998]. число этих КОЕ составляет 72,6, 130,8
5
II о данным D.Linch и соавт. и 46,5 на 10 ядерных клеток соот-
(1982), в крови плодов 12—19 нед ветственно. Во все сроки гестации
ичкщии число КОЕ-ГМ в среднем колонии из КОЕ-ГЭММ крупные,
составляет 295 на 105 мононуклеар- число клеток в одной колонии со-
Hi.ix клеток, а БОЕ-Э — 444. Из об- ставляет в среднем 15,5х10-!, 18,7x10'
uici о числа колоний, образованных и 19,6х103 в I, II и 111 триместрах
КОЕ-ГМ, 42—68% представлены мо- соответственно. Эти колонии состоят
I I т и п арными, 2 7 — 4 1 % — нейтро- в основном из эритробластои, ней-
фильнымн и 5—30% — эозинофиль- трофилов и макрофагов. Также ус-
IIi.iми клетками, очень редко обна- тановлено, что у плода I триместра
руживались смешанно-клеточные ко- гестации в циркулирующей крови
нопли. У плодов более поздних сро- определяются стромальные клетки-
КОВ гестации (17—36 нед) общее ко- предшественницы [Campagnoli С.
пичество КОЕ (КОЕ-Э, КОЕ-ГМ, et al., 1998].
KOli-смешанные) снижается и состав- Пуповинная кровь плодов 19—
inici в среднем 8,75 на 106 мононук- 29-недельных сроков гестации содер-
пеарных клеток [Eddleman К. et al., жит значительно больше клеток
1995]. По данным A.Muller и соавт. CD34+, чем кровь новорожденных
(1998), изучавших КОЕ крови плодов детей (в среднем 0,33%), при ЭТОМ
IX —29 нед гестации в метилцеллю- содержание клеток CD34+ в кропи
но чс с добавлением в питательную обратно пропорционально срокам
среду Эпо и ИЛ-3, на 8-й день гестации. Количество ранних клеток-
куныивирования число эритроидных предшественниц (CD 34"1" CD 45 К :illt,
колоний составляет в среднем 28,3 CD34^CD38-Thyl + и CD34+CD38
м;| 10s мононуклеарных клеток, а HLA-DR + ) у плодов больше, чем у
КОЕ-ГМ—38,8; на 14-й день куль- новорожденных детей [Engel II. L-I
i ивирования они составляли 45,3 и al., 1998]. Хотя общее число клеток
60,2 соответственно. CD34+ в крови плода незначительно
Количество ядерных клеток в и это лимитирует их использование
КрОВН плода в 1 триместре больше для аллогенной трансплантации, тем
(I среднем 58,8хЮ9/л), чем во II не менее они могут быть использо-

№• 41>.'
Фиипчкчия ;н>И1п>1Н> ил
м
пимы дни грвнсплантвции и аутоло- творения! ' •" причини преимуще-
i ичной IенноН терапии. ственною образомюи rex ИЛИ иных
hikiiM образом, it различные перио- клеток кроим и желточном мешке,
да nnyipiiyiровною развития человека печени и КОСТНОМ мозге, окончатель-
гемопоэз отличается не только по ло- но не выяснены. К моменту рожде-
кализации, НО и ио характеру преиму- ния ребенка основным гемопоэтиче-
щественного образования различных ским органом является костный мозг,
клеток кропи. Механизмы, ответствен- продуцирующий все клеточные эле-
ные за изменение локализации крове- менты периферической крови.

КОСТНЫЙ МОЗГ
Костный мозг представляет собой полости, исключая терминальные час-
Структуру, в которой происходят ти фаланг пальцев, заполнены гемо-
пролиферация и дифференциация ге- поэтическими клетками. У доношен-
иопоэтических клеток, в конечном ного новорожденного ребенка общий
ИТОГе которых образуются формен- объем костного мозга колеблется от
ные элементы крови. Этот процесс 16,4 до 43,9 мл, а по отношению к
происходит благодаря особенностям массе тела составляет (1,4±0,14)%. Если
васкуляризации костного мозга и пересчитать объем костного мозга на
наличию в нем стромальных клеток, общий объем скелета ребенка, то это
которые регулируют гемопоэз. составляет (39,9+2,6)%. В то же время
Как уже отмечалось в предыду- объем костного мозга у взрослого
щем разделе, у человека выделяют относительно больше, чем у ребенка,
фетальный и эмбриональный гемо- и составляет 4,6% от массы тела.
ПОЭЗ, топически это в желточном Меньший объем костного мозга у
мешке, печени и костном мозге. новорожденного, чем у детей старшего
Каждой стадии развития гемопоэза возраста и взрослых обусловлен тем,
предшествует образование стромаль- что большая часть скелета у ребенка
iii.ix клеток, которые происходят из является хрящевой, длинные кости
•двентиции артерий. относительно малы, а общий объем
Первые признаки костномозгового костномозговых полостей меньше.
кровен ворения возникают приблизи- Иначе говоря, актуальный объем ге-
H'lii.iiD с 4-месячного срока гестации, мопоэтического костного мозга у но-
и и последующие месяцы внутриут- ворожденного равен объему костного
робного развития плода общий объем мозга. Этим и объясняется то обстоя-
К0( мимо мозга быстро увеличивается, тельство, что при ряде патологических
достигая максимума к 30 нед гестации. состояний, когда происходит повы-
It последние 10 нед внутриутробного шенная деструкция клеток крови у
развития плода объем костного мозга детей, нет возможности увеличить
существенно не изменяется. продукцию в костном мозге за счет
Макроскопически активный (ге- его резервов, и поэтому происходит
м о по этический) костный мозг имеет реактивация гемопоэза в других орга-
красную окраску за счет его обога- нах (печень, селезенка и др.) с увели-
щения клетками эритроидного ряда, чением их размеров, т. е. у детей
)|i. Неактивный костный мозг жел- первых месяцев жизни легко возникает
того цвета и состоит в основном из возврат к эмбриональному типу кро-
вдипоцитов. ветворения.
К моменту рождения и до 4 лет Приблизительно с 4-летнего воз-
у ребенка нес кости, костномозговые раста у детей происходит инволюция

82
KOCIIII.IH МО.1»

имоi ч\ участков костного мозга, и стромальными элементами, которые


щифизах длинных трубчатых костей поддерживают остов костномозговой
Появляются жировые клетки, количе- ткани. К стромальным элементам
iiiH) которых постепенно увеличива- относятся фибробласты, адипоциты,
йся. Нарастает объем полостей. В эндотелиальные клетки и остеобла-
Последующие годы этот процесс про- сты. В процессе образования «ниши»
должается, и к 16—18-летнему воз- участвуют молекулы экстрацеллю-
1>лпу красный костный мозг сохра- лярной матрицы (коллаген, лиминин,
Пется только в телах позвонков, фибронектин, протеогликаны и др.)
Мб pax, грудине, костях таза и чере- и цитокины, находящиеся на клеточ-
iiii, it проксимальных частях плечевых ной мембране и экстрацеллюлярной
и оидрепных костей (см. рис. 1). У матрице. Как уже отмечалось, для
ребенка с массой тела 15 кг общая процесса пролиферации и дифферен-
Mtcca костного мозга составляет 1— циации клеток гемопоэза необходим
1.<1 кг, а у взрослого — 1,2—1,5 кг. контакт между клетками стромы и
Наиболее активные участки крове- кроветворными элементами. Этот
i юрения определяются в костях с контакт между ними может быть
большим содержанием губчатого ве- прямым (клетка — клетка) либо кос-
щеотва. венным, путем секреции молекул,
Характерной особенностью кост- регулирующих гемопоэз, Стромаль-
1нп о мозга является его обильная ные клетки также участвуют в про-
и.и'куляризация, способствующая цессе адипо- и остеогенеза. Во взаи-
I п.тжению костного мозга питатель- модействии стромальных и гемопо-
ными веществами, стимулирующими этических клеток важную роль игра-
факторами, проникновению зрелых ют адгезивные сосудистые молекулы
ик-мсптов в кровь. Артерии, которые и интегрины, а также гомологичные
Питают костную ткань, в центре рецепторы на гемопотгических клет-
МСТИ разветвляются. Внутри кости ках при адгезии последних к фиб-
||;ииолагаются крупные венозные си- робластам костного мозга.
нусы, артериолы направлены к пе- Фибробласты костного мозга, их
риферии костномозговых полостей, еще называют миелофибробластами,
кп'юрые оканчиваются капиллярами, клетки ретикулярной стромы, адвен-
чище всего располагающихся в кор- тициальные клетки костного мозга и
R0BOM слое. Эти капилляры транс- другие играют важную роль в гемо-
формируются в синусоиды, а затем поэзе. Они синтезируют молекулы
•НОВЬ возвращаются в костный мозг. коллагена, экстрацеллюлярной мат-
* ппусоиды окружены множеством рицы (протеогликаны, ламипип, фиб-
анастомозов, которые собираются в ронектин). В костномозговой ткани
центральные синусоиды и вены. они образуют сетевидные образова-
При гистологическом исследова- ния в виде колец.
11ип костного мозга хорошо видны В костном мозге определяются
шдотслиальные клетки синусоидов. адипоциты. Их количество может
' Эндотелий капилляров синусоидов увеличиваться при снижении мисло
пронизан гемопоэтическими клетка- поэза (например, при АА) и снижать-
ми-предшественницами. Последние ся при увеличени миелоидных клеток
образуют экстраваскулярно гемопо- (лейкозы).
инческие «ниши». Сквозь эндотелий Экстрацеллюлярная матрица об-
капилляров зрелые элементы прони- разована сетью молекул, которые
кают в циркулирующую кровь. синтезируются стромальными клет-
Клетки, которые образуют гемо- ками. В нормальном костном мочге
I1C и пческие «пиши», представлены редко наблюдаются зрелые нити кол-

83
Фимоптин
•MI i HI 1-ГО 1 mm, т а к как они рас- инческмх Клеток, шк и дня фагоци-
iи»ил иотся исключительно в пери- тоза ядер, выделенных из зрелых
НОКуЯЯрмОЙ ТОНв крупных сосудов. клеток эрИТрОНДНОГО ряда, апоптоз-
Сеть нитей, называемых ретикулина- ных и поврежденных клеток. Мак-
ми, относится к гликопротеинам; их рофаги окружены эритроидными
ПЦ| на ч.таю т коллагеном 3-го типа. клетками разной стадии созревания,
И м п IIях этой ретикулиновой сети, которые тесно прилипают к макро-
которая окружает синусы, раслола- фагам, образуя так называемые эрит-
гаются г*мопоэтические клетки. Кол- робластические островки. Адгезия
Flim 4-io типа, синтезируемый эн- оритроидных клеток к макрофагам
цотелиальными клетками, составляет необходима для окончательного со-
Основу большинства базальных мем- зревания клеток эритроидного рост-
бран, окружает наружную поверх- ка и их энуклеации. В формировании
ность эндотелия сосудов. этих эритробластических островков
Макромолекулы, которые отно- активное участие принимает адгезив-
1 ним к нефибриллярным компонент ная молекула VCAM-1, а на эрит-
ПМ матрицы, составляют экстрацел- робластах — соответствующий ре-
ПЮЛЯрную матрицу. О н и о б р а з у ю т цептор, а также а-интегрин VLA4.
агрегаты И участвуют в перемещении Клетки миелоидного ряда распо-
поды, регулируют так называемый ложены между сосудами эндоста, в
феномен интерстициальной диффу- соприкосновении с адипоцитами и
fiiii, стабилизируют фибриллы кол- клетками костномозговой етромы.
пагена, участвуют в адгезии гемопо- Компартмент пролиферирующих
н ическия клеток-предшественниц к миелоидных элементов располагается
i кани подложке, могут воздейство- эндостально и периэндотелиально.
И11. па факторы роста, увеличивая Эндостальныи юкстатрабекуллярныи
нч щ i ивность in situ. Гликозоами- (рядом с трабекулами) участок более
1 in к а и и могут фиксироваться к богат гемопоэтическими клетками-
Молвкулим же!рацеллюлярной мат- предшественницами и активными
РИЦЫ, И гаким как фибронектин и к стромальными элементами. Это же
19МИИ011 ическим факторам роста относится и к клеткам костного
1МФ1М, ИЛ-3), увеличивая их мозга, прилежащих к эндотелию со-
1ЛНЯНИ1 п.I процесс пролиферации судов.
IfMUlioil'HMCC'KHX клеток. Гепаран- Напротив, центральный участок
вупьфвты игрпюп роль во взаимодей- костного мозга представлен в основ-
i i и и и между клетками е т р о м ы и ном компартментом созревающих
i I'MOIIO ническими клетка ми-предше- клеток миелоидного ростка.
• iно niiiMii Фибронектин обеспе- Гемопоэз лимфоидных клеток в
'iiiinni ujiiriiiio U-MOIIOTI и ч е с к и х кле- костном мозге распределяется в виде
и>к. II ЧВСТНОСТИ клеток э р и т р о и д н о - лимфоидных бугорков.
i о ростка, в гемонектин — клеток Для оценки костномозгового кро-
грануяоцнтариого ростка. Ламиним, ветворения наиболее распространен-
ЯВЛЯЮЩНЙОЯ гни ко протеи ном, опре- ным в клинической практике мето-
'irinu'ifH на Начальных мембранах дом является пункционный со взяти-
клеток; он способствует проникнове- ем аспирата.
нию макромолекул. Из последнего приготавливают
Вблизи синусоидов, в адвентиции мазки, которые окрашивают и про-
К0С1 HOI о моиа в изобилии опреде- изводят парциальный подсчет клеток
пяются макрофаги, происходящие из костного мозга. Нормальные пока-
КОВ I 'M. Макрофаги необходимы затели костномозгового пуиктата
как дня процесса созревания пвмопо- представлены в приложениях 4 S.

84
KOCIIIhlH M<> U

km-1 но uo это вой пункта i пред- рексиса. Однако денуклеация воз-


• г тлен различными клаками, как можна путем кариолизиеа, распада
гшмо"поэтического, гак и не гемопо- ядра; остатки последнего в Эр опре-
ГГИЧсского происхождения. Посколь- деляются в виде телец Жолли, колец
ку морфология тгих клеток описана Кебота, азурофильной зернистости.
mi всех классических руководствах и В приложениях 7 и 8 представле-
Миши рафиях, посвященных гемато- ны данные о морфологии эритрока-
ROI ичееким аспектам и лабораторной риоцитов и эритробластограммы.
miiii носгике, мы на этом вопросе не При оценке состояния кроветво-
in i лпаиливаемся и лишь опишем рения важное значение имеет и ка-
Клетки >ритроидпого ростка, по- чественная, и количественная харак-
Кольку книга посвящена анемиям. теристики клеток пунктата костного
М орфологически распознаваемы- мозга. Процентное содержание кле-
ми клетками эритроидного ряда яв- точных элементов костномозгового
Пиются: пунктата называется миелограммой.
>ритробласт —• первая морфо- Кроме того, определяют абсолютное
101 ически распознаваемая клетка число миелокариоцитов и мегакарио-
фитроидного ряда; его диаметр 15— цитов.
|0 мкм; ядро занимает большую Следует помнить, что на показа-
ч.н 11, клетки, имеет нежно -сетчатую тели миелограммы влияют техника
структуру, содержит несколько нук- взятия костного мозга — чем более
ItOJi; цитоплазма в виде узкого обод- он разбавлен кровью, тем менее
ки окружает ядро, резко базофильна, информативны данные.
iHi просветлений в перинуклеарной У недоношенных детей в возрасте
шне; до 2 мес (см. приложение 4), содер-
пронормоцит — напоминает жание бластных элементов и сотно-
*1>it фобласт, но в отличие от него шение клеток миелоидного ряда со-
диаметр несколько меньше, структу- ответствуют таковым у здоровых
pi хроматина более грубая, местами доношенных детей.
утолщена, более компактна, отсутст- Характерной особенностью мие-
|уют нуклеолы; отчетливо выявляет - лограммы является значительный
i я зона просветления; процент лимфоцитов, содержание ко-
нормоцит базофильный — торых в первые сутки после рожде-
имеет диаметр 16—18 мкм; ядро ок- ния составляет 11,2%, и оно посте-
l»vi ной формы, имеет грубую струк- пенно увеличивается, достигая мак-
туру хроматина с чередованием тем- симума к 1-месячному возрасту. Сле-
ных и светлых участков, напоминая дующей особенностью миелограммы
колесо со спицами; цитоплазма ба- недоношенных детей является высо-
юфильная; кое содержание клеток эритроидного
нормоцит полихроматофиль- ряда, процент которых максимален
Ш.1Й отличается от базофильного в первые сутки после рождения ре-
окраской цитоплазмы; бенка (32%); в последующие дни
нормоцит оксифильный — по процентное содержание эритрока-
величине приближается к Эр, имеет риоцитов уменьшается и колеблется
небольшое пикнотичное ядро, окси- в пределах 9,7—28%.
фильную цитоплазму. У доношенных детей (приложе-
По мере гемоглобинизации цито- ние 5), но данным Ю.Е.Малаховско-
иппшы, которая начинается с пери- го (1963), в отличие от недоношенных
пуклеарпой зоны, происходит инво- детей содержание лимфоцитов в пер-
1ЮЦИЯ ядра, пикноз. Нормоцит чаще вые дни после рождения ребенка
освобождается от ядра путем карио- несколько меньше; в последующий
Фи:мип<)1ИИ

триод проценл лимфоцитов иарас- составляющих, при подозрении HI


lili'i, ДОСТИГАЯ MfiKOHMyMt к мирному организацию атипичны* структур
полугодию, I затем снижается и в (миелреклероз, миелофиброз и др.),
•ОЗрВСТв ДО 3 лог колеблется в пре- оценке полноты ремиссии и др. По-
дай 10,2 17,85%. лучаемый трепанат костного мозга
(Содержание других клеточных имеет вид столбика — по его краям
МИ-МГМНИ1 костного мозга существен- корковые слои кости, а в центре—-
на на различается. У детей возрасте губчатая кость. В зависимости от
»ч 3 ДО б лет и от 7 до 14 лет цели исследования полученный тре-
показа гели миелограммы отличают- панат подвергают соответствующей
ся ТОЛЬКО по содержанию лимфоци- обработке и окраске.
ТОВ, п р о п е т которых более высок у По данным Л.П.Счастливцевой
детей младшей возрастной группы (1967), костный мозг подвздошной
(см. приложение 6). кости здоровых детей в возрасте
It клинической практике исполь- 4—14 лет характеризуется неравно-
iyioi также метод прижизненного мерным распределением костных ба-
гистологического исследования кост- лок, разной их толщиной, и это
iiiiio мозга. Он имеет преимущества отражается на процентном содержа-
перед пункционной аспирационной нии костной ткани в разных нолях
биопсией, так как позволяет рассмат- зрения одного и того же препарата
ривать костный мозг как орган, с (18—44%). У детей младшего возрас-
количественной оценкой резервов та в отдельных костных балках могут
Кроветворения, определить взаимоот- определяться островки хрящевой тка-
ношение отдельных тканей. Изучение ни. Эндост представлен в виде це-
биоптата костного мозга, особенно почки из остеокластов, тесно приле-
КОГДа пунктат беден костномозговы- гающих к костной ткани. Костномоз-
ми элементами, в сочетании с мие- говые пространства имеют различ-
901 рвммой позволяет более полно ную величину, представлены жиро-
ОХВрак i еризовать клеточный состав вой и миелоидной тканью. Распре-
КО( ими о мозга и его структуру. деление клеток миелоидной ткани
Интерпретация биоптата улучшилась неравномерное, и это отражается при
I I M HI г прогрессом иммуногисто- подсчете числа миелокариоцитов в
щ и ни, по шоляющей идентифициро- разных полях зрения (от 143 до 713
N111. i ни клеток в норме и при клеток и более). Среднее количество
ilBTOJioi ических состояниях. Различ- миелокариоцитов с учетом коэффи-
HI.и- клеточные элементы могут быть циента сморщивания (0,2) у детей
0Ц1НЯНЫ и иммупогистхимическими 4—7 лет составляет 261, а у детей
методами I [апример, эритробласга — 8—14 лет —337,7 или 1522 400 и 1
ли пи пикофориновыми AT, гранулоци- 430 000 в 1 мм 3 среза соответственно.
1и .пи it ( |) I.S-, мегакариоциты — Число мегакариоцитов в 1 мм 3 среза
•ИТИ ( 1 1)М , м а к р о ф а г и — а н т и - существенно не различается у детей
(1)(>К-А'!'; и д е т ификация костномоз- в возрасте от 4 до 7 лет (3030+296)
ипи,1\ лимфоидных гемопатий — с и 8—12 лет (3290+251). В окрашенных
помощью CD20 AT (В-клетки) и CD3 гистологических препаратах костно-
(Т-клетки) [Вгуоп Р.-А., 1998]. го мозга у здоровых детей эритро-
Н педиатрии метод трепанобиоп- кариоциты распределяются очагово;
оии используется сравнительно ред- мегакариоциты по полям зрения рас-
ко; обычно ее проводят (не всегда) полагаются неравномерно, а клетки
мри определении степени гипоплазии гранулоцитопоэза — равномерно.
КОСТНОМОЗГОВОГО кроветворения в це- У взрослых соотношение костной
пом пли отдельных ростков его ткани и заполняющего межбалочные

В6
Allollh it

uptu гранства костного мозга различ- росл кн. Более точная дифференциа-
но И губчатой ткани хорошо видны ция клеток костного мозга возможна
кисти ы с пластинки и балки, соеди- лишь в препаратах-мазках, одновре-
ые в различных направлениях. менно приготовленных и окрашен-
Поверхность кости покрыта эндо- ных гематологическими методами,
i HIM. Хорошо ни дна пластинчатая при использовании МА.
В?руктура костной ткани. Простран- В гистологических препаратах
i i па между костными пластинками различимы сосуды. Иногда обнару-
Мполнены костным мозгом. В утол- живаются пучки волокнистой ткани,
iiiriiiiii костной ткани, особенно обычно примыкающие к эндосту, но
шпини коркового слоя, часто онре- ограниченное расположение волокон
Вмяются небольшие полости, запол- позволяет исключить системный ха-
ненные костным мозгом. рактер их происхождения. Если ис-
Нормальная костномозговая ткань пользовать специальные методы ок-
•одержит 30—-55% жира. Жировые раски (пикрофусцином, азокарми-
Клетки не всегда располагаются рав- ном, соли серебра), можно выявить
номерно, иногда они занимают зна- нежную сеть ретикулиновых волокон
ЧИТельную часть гистологических пре- с утолщениями по ходу сосудов и
паратов, приготовленных из трепана- крупных синусов. Редко встречаются
ш, и это может служить поводом для остеокласты или же остеобласты.
ошибочных заключений. Костный Таким образом, знание физиоло-
МО и здоровых людей имеет поли- гии кроветворения, клеточного со-
морфный клеточный состав. Для пол- става костного мозга и его архитек-
ноценного костного мозга характерно тоники с учетом возраста позволяет
Наличие мегакариоцитов во всех полях избежать ошибочных заключений.
фения. Различимы эозинофилы, кото- Использование различных методов
|н.|г имеют тенденцию к отдельным окраски, МА позволяет более точно
Отоплениям; эта же тенденция свойст- охарактеризовать клеточный состав
Мниа и для клеток эритроидного костного мозга.

АПОПТОЗ
Аиоптоз — это запрограммиро- нома, нарушение связей между бел-
ванная гибель клетки, он наблюда- ками клеток [Lin J .-D., 2001 ]. В
ется в нормальных физиологических процессе апоптоза наблюдаются ряд
условиях. Апоптоз впервые был от- морфологически различимых измене-
крыт J.ICerr и соавт. в 1972 г. и с ний в клетке; происходит конденса-
i ох пор интенсивно изучают меха- ция ядра и цитоплазмы, фрагмента-
низмы его развития как в физиоло- ция и фагоцитоз дериватов клетки.
гических условиях, так и при ряде В отличие от некроза при апоптозе
патологических состояний. клетки выглядят сморщенными, в них
11 отличие от некроза, при апоп- хорошо сохранена внутренняя И
Розе гибель клетки запрограммиро- внешняя мембраны, в неЙтрофилих
вана, и этот процесс является физио- сохранены органеллы, включая три
иогическим [Willie A. et al., 1980]. нулы, вокруг клетки нет признаков
•\iiinno3 является активным процес- воспаления. В течение апоптоза про
сом, требует активации генетической исходит фрагментация ДНК ядра HI
программы, последствием которой (олиго)нуклеосомы, тогда как при
являются морфологические измене- некрозе этого не наблюдается, С
ния клетки, фрагментация ДНК ге- помощью FACS-апализа можно оп-

87
ределить число клеток, находящихся ки мышеи, если у ее »мбрионов
и апоптоэе, так как при нем снижается определяется супресоорный опухоле-
флюоресценция ДИК [Burach W. ot al., вый ген р53, происходит выкидыш
1993], In vivo апоптозные клетки бы- плода, а если р53 отсутствует, то
стро поглощаются макрофагами. этого не происходит [Norimura N. el
Лпоптоз генетически регулирует- al., 1996]. В процессе развития им-
ся. В процессе апоптоза схематично мунной и нервной систем у плода
можно выделить несколько стадий: внутриутробно происходит избыточ-
начальную, генетической регуляции ное образование соответствующих
п действия )ффекторных механизмов. клеток, но большая их часть поги-
Пусковыми факторами апоптоза мо- бают путем апоптоза, поскольку
гут быть противоопухолевые препа- клетки не способны обеспечить си-
раты, ультрафиолетовые и у-лучи, наптическую связь и антигенную спе-
утрата ростовых факторов, вызываю- цифичность [Renehan A. et al., 2001].
щих выживание клеток (например, У здорового человека ген р53
ИЛ-1), различные цитокины, активи- может ограничивать пролиферацию
рующие «рецепторы смерти» (напри- клеток с поврежденной ДНК путем
мер, FAS- и ФНО-рецепторы). Все двух механизмов: 1) путем остановки
пи стимуляторы, инициирующие клеточного цикла деления и 2) путем
апоптоз через различные эффекторы, активации апоптоза [Wallace-Brode-
способствуют появлению метаболи- ur R. et al., 1999]. Этот двойной
ческих изменений в клетке. Это при- механизм и комплексная роль гена
водит к деградации геномного ДНК р53 хорошо проявляется при исполь-
с появлением нуклеосомальных фраг- зовании химиопрепаратов; либо уве-
ментов. В регуляции этого процесса личивается апоптоз аномальных кле-
повлечены многие гены [Sperandio S. ток, либо задерживается рост этих
.-1 al, 2000]. клеток и вследствии этого увеличи-
Наиболее хорошо изученными ге- вается резистентность к лекарствен-
iiiiMii яиляется семейство генов bcl-2, ным препаратам [Hamilton A. et al.,
и к апоптоз вовлечены по меньшей 2000]. Некоторые лекарственные
MVpe 20 членов этого семейства. средства, например Vinca alkaloids,
11 екоторые из них являются проапоп- которые не повреждают ДНК клетки,
гоэными, или «генами смерти» (ген могут индуцировать апоптоз клеток
1>л\), а другие — антиапоптозными, через другие пути, независимые от
ним «генами выживания», которые р53. Заболевания, в основе которых
включают в себя собственно ген bcl-2. лежат клетки с отсутствием мутации
Ген супрессии опухоли р53 является гена р53, являются наиболее кура-
апоптозным, и он определяется на бельными [Sjostrom J. et al., 2001].
клетках CD34+ нормального костно- У взрослого человека ежедневно
го мозга. Основными эффекторами погибают до 10 млрд клеток, и для
апоптоэа является семейство протеаз, сохранения баланса необходимо об-
называемых каспазами. разовывать новые клетки из популя-
Лпоитоз проявляется уже на ран- ции стволовых клеток. Это возможно
них этапах развития плода, обеспе- лишь при наличии четкой регулятор-
ЧИвая очертания различных органов. ной системы. Нормальный гомеостаз
Он способствует формированию не является пассивным процессом, он
межпальцевых промежутков на руках регулируется через апоптоз. По мерс
и ногах. Нарушение механизма апоп- развития организма апоптозная ре-
miii является важной детерминантой акция в ответ на повреждение ДНК
и появлении аномальностей у плода. клетки становится менее контроли-
I ;ik, при облучении беременной сам- руемой [Sjogren S. et al., 1996].
AIIOII юз

iipu апоптозе происходи! после- цептора ФИО клетки. Взаимодейст-


цова гсльная активацкя ряда касгт&з, вие ФИО с этим рецептором может
которые являются протеолитичвскими индуцировать гибель клетки путем
ферментами. Существуют два главных активации различных киназных фер-
Пути, которые опосредуют апоптоз, ментов, которые действуют как вто-
активируют каспазы,—-это митохонд- ричные мессенджеры внутри клетки
риальный путь и через поверхностные [Smith С. et al., 1994]. К этой же
рецепторы. Митохондриальный путь группе активаторов каспазы относят-
инляется важным при ответной реак- ся Fas-рецептор и его лиганд — FasL,
ции организма на лечение при наличии молекулы, которые используются эф-
аномальных клеток, и он опосредуется фекторными иммунными клетками
белками семейства bcl-2. Окончатель- для уничтожения клеток-мишеней
ной гибель этих аномальных клеток с [Ju S.-T. et al., 1995; Benoist C. et al.,
деградированной хромосомной ДНК 1997].
происходит под действием каскада Апоптоз играет важную роль в
каспазы, пусковым механизмом кото- жизнедеятельности и жизнеобеспече-
рого является цитохром С, выделяе- нии человека. Запуск апоптоза может
мый из митохондрий [Reed J. et ah, происходить под действием различ-
2000]. ных эндо- и экзогенных факторов,
Каспазы представляют собой разными путями и вовлекать многие
i руппу цистеиновых протеолитиче- функции клеток. Апоптоз защищав!
ских ферментов, под действием ко- организм от неконтролируемой про-
торых происходит расщепление мем- лиферации клеток, которая может
браны ядра клетки. Они играют приводить к неоплазии. Неадекват-
нажную роль в Fas-индуцированной ный апоптоз приводит к несоответ-
гибели клетки. Каспазы активируют- ствующей выживаемости клеток,
ся протеолитическим процессом с вследствие чего происходит повы-
образованием р20/р10 гетеродимеров шенная аккумуляция клеток и в итоге
[Wu D. et al., 1998]. Активация возникают злокачественные опухоле-
каспазы связана с освобождением вые заболевания, хронические воспа-
ряда апоптогенных факторов из ми- лительные болезни, аутоиммунные
тохондрий к лето к, и одним из них заболевания и др. Опухоли возника-
является цитохром С (holo- ют при мутации механизмов, контро-
цитохром С). Выделение последнего лирующих апоптоз и выживаемость
задерживается bcl-2 [Garland J. et al., клеток. Так, при фолликулярной лим-
1997]. К числу ингибиторов каспаз фоме идентифицирован ген bcl-2,
относятся белки семейства ингибито- который блокирует аполтоз [Sjo-
ров апоптоза — cIAP-1, cIAP-2, XIAP strom J. et al., 2001]. Мутация гена
и др. [Roy N. et al., 1997]. p53 также способствует развитию
Каспазы могут активироваться опухоли, так как при развитии му-
специфическими путями и под дей- тации отсутствует белок, который
ствием неспецифических сигналов, «опекает» геном, предупреждает дс-
например, под влиянием цитотокси- лецию путем апоптоза клеток с по-
ческих препаратов, радиации. Роль врежденной ДНК. При хронических
каспазы очень важна в контроле воспалительных заболеваниях (на-
апоптоза — под се действием проис- пример, ревматоидный артрит) уве-
ходит реорганизация клетки, подго- личена выживаемость лейкоцитов,
товка последней к фагоцитозу [Has- которые у здоровых людей за-
lett С. et al., 2001]. программированы погибать апопто-
Второй путь, способствующий ак- зом. В патогенезе аутоиммунных за-
тивации каспазы,— через гибель ре- болеваний (гепатит, СКВ, некоторые

89
•i-n мот чая .ччипчк - - \л

вирусные инфекции и др.) мжную П р о д у к т ы i'-пои иi n n семейства


роль играет дизрегуляция процесса жепрессирошжы па гемопои нчееких
апоптоза клеток различных органов клетках разного уровня. Клетки
+
CD34 костного мозга и перифери-
и ТКаНвЙ, с н и ж е н и е или ИНГИбИЦИЯ
апоптоза. Регуляция апоптоза кле- ческой крови экспрессируют Bcl-2,
ток, которые пролиферируют, может Вах и Bcl-x [Teofili L. et al., 1997].
быть ключом для обратного развития Стимуляция CD34+ клеток человека
про премирования болезней [Kiess W. Эпо в сочетании или без ФСК in vitro
el al., 1998]. Поэтому модуляция уменьшает регуляцию Вах и увели-
процесса апоптоза является одним из чивает Bcl-x, Bcl-2 и Mol 1, т. е.
факторов, способствующих успешно- отмечается увеличение выживаемо-
му лечению. Многие нестероидпые сти клеток CD34+ в культуре [Josef-
противовоспалительные препараты sen D. et al., 1997]. Bcl-2, Bcl-x и
Корригируют уровень апоптоза [Nic- Bag-1, являющиеся антиапоптозными
holson I), et al., 2000; Renehan A. etчленами семейства Bcl-2, экспресси-
al., 2001]. Напротив, активация про- рованы на гемопоэтических клетках-
цесса апоптоза вызывает гибель кле- предшественницах. В процессе диф-
юк, вследствие чего наступает им- ференциации гемопоэтических кле-
мунный дефект, как это имеет место ток продукты этих генов модулиро-
при СПИДе [Haslett С. et al., 2001]. ваны на клетках эритроидного, ме-
Лiюптоз играет важную роль в гакариоцитарного, гранулоцитарно-
гемопоззе как в норме, так и при го и моноцитарного ростков. Bcl-2
патологических состояниях. Гемопо- сохраняется на Эр, моноцитах и
ээ является следствием комплексного мегакариоцитах до окончательного
действия на кроветворные клетки их созревания, тогда как Bag-1 бы-
стимулирующих, ингибирующих и стро исчезает в Эр, моноцитах и
и по точных сигналов. Гемопоэтиче- мегакариоцитах, сохраняясь только
СКИС факторы роста и ингибирующие в гранулоцитах. Bcl-x экспрессирован
ЦИТОКИНЫ регулируют ф у н к ц и ю те- преимущественно на клетках эритро-
мп по и ических стволовых клеток и идного ряда [Testa U. et al., 1997]. В
И iii-i ок предшественниц, опосредуют процессе дифференциации эритроб-
i in налы апоптоза. ласта в ретикулоцит происходит про-
Внутриклеточные механизмы, во- грессивная аккумуляция белка Bcl-x
1Я9Ч0ННЫС и регуляцию апоптоза и его mPHK. Это накопление наибо-
ii-Miiiio этических клеток, продолжа- лее выражено в течение поздних
MI исследован ься и уточняться, но стадий созревания, когда происходит
бесспорно, что центральную роль в быстрый синтез гемоглобина; уро-
I ПО ПТОЗ* играют семейство белков вень экспрессии Bcl-x зависит от Эпо
ПК! !icl-2. К ним относятся собст- [Gregoli P. et al., 1998].
венно hcl-2, который был первым Одним из важнейших механизмов
идентифицирован, Bcl-x, Mol-1, Вах, регуляции эритропоэза является кон-
Hail. Bag-1, Bak, Al и целый ряд троль апоптоза Эпо. In vitro при
других белков; список этих протеи- отсутствии эритропоэтина в конди-
пои с каждым годом пополняется. В ционной среде происходит массив-
зависимости от влияния на апоптоз ный апоптоз КОЕ-Э, т. е. Эпо дей-
выделяют две группы белков семей- ствует на эритроидные клетки-пред-
ства Вс1-2: шественницы поздних стадий разви-
1) ингибирующие апоптоз (Вс1-2, тия как фактор выживания, а не как
Bcl-X, Bag-1, Al, Mol-1); фактор пролиферации [Koury M. et
2) белки, увеличивающие апоптоз al., 1990]. Наличие укороченной фор-
(Вах, Bad , Bak). мы ЭпоР (EPOR-T) предрасполагает

90
Л1 ти ПУЛ

юитроидные клетки к впоптозу. определяется низкая экспрессия этого


M'tiu г экспрессирована преимуще- АГ [Вагсепа A. ct al,, 1996], По
i i юнко на незрелых эритроидных данным К. Nagafuji и соавт. (1995),
kiu-i ках-предшественицах, макеи- ИФу и ФИО индуцируют экспрессию
H
MIHII.HI) на КОЕ-Э, а затем по мере Fas на клетках CD34 .
iи ф е в а н и я к л е т о к э к с п р е с с и я Задержка пролиферации и возник-
I 1'<Н< Т снижается [Takano T. et al., новение цитокин-индуцированного
1'и/|. V.Lacronique и соавт. (1997) апоптоза гемопоэтических стволовых
1ЫЯВИЛИ, что экспрессия Вс1-2 на клеток и клеток-предшественниц мо-
1рИ i роидных клетках-предшествен- жет вызвать ограничение физиологи-
ницах не является необходимым ус- ческой экспансии нормальных гемо-
BOIKCM для дифференциации этих поэтических клеток. В данном случае
t цементов. У здорового человека механизм действия ИФу осуществля-
рецептор c-kit и лиганд c-kit играют ется через Fas-опосредованный апоп-
ИЖную роль не только в регуляции тоз. В апоптозном пуги ключевым
Пролиферации эритроидных клеток- каспазным ферментом является ИЛ-
п|н\чшественниц, но оба эти компо- 1 (3-конвертирующи и фер ма IT (ICE),
нпиа влияют на активность теломе- который активируется через I' as-enc-
рit ii.i и ингибируют апоитоз ранних тему. Увеличение экспрессии 1СВ 00-
h меток-предшественниц [Ratajczak J. провождасгся повышенным впопто
«i al., 1998]. зом лимфоцитов, ПОЯВЛЯЛСЯ inl'll К
In vitro и in vivo система Fas-pe- ICE в клетках CD34 1 . При НАЛИЧИИ I
iini iop/Fas-лиганд играет важную культуре клеток CD34' КСФ ООДСрЖ!
•ОЛЬ и возникновении апоптоза в ние белка \С{\ повышается при добяв
1ЯЗ личных органах и системах лении в питательную среду ИФу и
.In S.-T. et al., 1995]. Перекрестная Fas-агоиистов. Таким образом, К'И
inn п. Fas рецептора с Fas лигандом участвует в регуляции апоптоза к-мп
укрепляет сигнальный комплекс, ин- поэтических кле го к-пред] честен ниц
нуцирующий смерть (DISC), который [Sloan E. et al., 1997|.
состоит из FADD/MORT1 и прокас- Экспрессия Fas, определяемая па
ii.i ii,i 8. Последняя, связанная с DISC, гемопоэтических клетках-предшест-
,iK i инируегся и выделяется в цито- венницах, сохраняется па протяже-
ЮЛЬ. Активная каспаза 8 активирует нии дифференциации эритроидных,
нругие каспазы (3, 6, 7 и др.), которые гранулоцитарных и моиоцитарпых
иышвают биохимические изменения клеток. Экспрессия Fas задержииает
при апоптозе [Hirata H. et al., 1998]. большинство эритроидных клеток на
Рецептор Fas экспрессирован на стадии базофильных нормоблаетон.
Многих типах клеток, но FasL опре- Под влиянием стимуляции Fas про-
целяется главным образом только на исходит апоптоз эритроидных и гра-
1Ктивнрованных Т-лимфоцитах. На нулоцитарных клеток, тогда как ге-
клетках CD34 1 костного мозга экс- мопоэтические клетки-предшес] т-и
прессия CD95 т Р Н К не определяется, ницы в состоянии «покоя», MtrtXI
мшпь единичные CD34+ из нормаль- риоцитарного и моноцитарпого ро-
ною костного мозга экспрессируют стков апоптозу не подвергаются. По-
Pft8, но его экспрессия резко увели- вышенная экспрессия Вс1-2 и licl-x
чена па этих клетках у больных с на эритроидных клетках и Bag-1 па
/\Л IMueijewski J. et al., 1995; Mauril- клетках гранулоцитарного ростка не
lo L. ct al., 1998]. Незрелые клетки- защищают их от Fas-HHjiynHpouaiino-
предшественницы гемопоэза из пече- го апоптоза.
ни плодш также не экспрессируют Fas Значительное образование I asl,
(CD95), по и более зрСЛЫХ клетках происходи] па iрапулоцигарных

91
ФИЗИО1М1ИИ .')/'И П'<>/(.

г
к14 i icii-iii'f ия поздней диф- s. el ul., 199ft; I awion л. et
I'V-iimiamni, ГОГДВ как па к л а к а х al., 1998].
Лих ростко! кроветворения мсс- В нормальном косiпом мозге
JCJCCHI г м Ь отсутствует пли же она содержание апоптозных клеток со-
rfffjb mi исая, Это заставляет пола- ставляет (1,1+0,6)% [Hirase N. et al.,
/ ' , , о потенциальной роли еозрева- 1997]. По данным A.Aprikyan и соавт,
,;'',' миелоцитов гранулоцитов в (1998), в нормальном костном мозге
ii1 .уляции гемопоэза. Взаимодейст- содержание апоптозных клеток
/ ' . l-'as и FaeL дифференцированно CD34^ составляет 20%, CD 34
Гдулируст р» ст гемопоэтичвекнх CD33' — 7%, CD34-CD33-CD15 —
Л о к , их дифференциацию и апоп- 10%. При хранении клеток костного
$ различных клеточных ростков мозга при температуре 37°С количе-
<%ветворения. И в данном случае ство апоптозных клеток увеличива-
^•гема Fas/FasL может являться ется до 65%, 80% и 70% соответст-
Ллчевым механизмом в регуляции венно. По мнению E.Sloan и соавт.
ивжду эффективным и неэф- (1997), число апоптозных клеток
ремопоэзом через эрит- CD34* в костном мозге — менее 1%.
'Г'мчш.ш и гранулоцитарный ростки Количество апоптозных гемопоэти-
| С е т а о р е н £ [Тела U. с* al., 1997]. ческих клеток-предшественниц резко
^ И Фу ингибирует рост и диффе- увеличивается (в 15 раз и более) при
,,щиацию колониеобразующих ряде патологических состояний (ме-
Р^троидных клеток-предшествен- галобластные анемии, анемии при
'L, вызывая их апоптоз. Этот эф- хронических воспалительных заболе-
Йкт дозозависим, поверхностный ре- ваниях, ЖДА, р-талассемия, НЬН и
(APR 1.CD95) запускает апоп- др.), и апоптоз кроветворных клеток
носле активации его лиганда. В играет важную роль в патогенезе
Г
д"рмальном костном мозге только неэффективного эритропоэза при
^большое количество колониеобра- этих заболеваниях [Hirase N. et al.,
|L
,| HHIIX эритроидных клеток экспрес-
(
1997; Centis F. et al., 2000; Poolrakul P.
las и при этом на очень et al, 2000; Yang G. et al, 2001].
уровне. При добавлении ИФу . Если еще недавно было распро-
г
кондиционную среду культуры ко- странено мнение, что нежизнеспособ-
'цомоловых клеток in vitro уже ные нейтрофилы подвергаются нек-
1
„-I (, •! пи эритроидных клетках- розу с последующим разрушением и
''„едшественнииах резко увеличива- их поглощением макрофагами, то,
'''„ экспрессия ml'HK Fas, а через согласно последним данным, глав-
\) ч ИВ поверхности клеток опреде- ным процессом изъятия интактных
•ии Fai-АГ с максимальной экс- нейтрофилов и других гранулоцитов
''ессией через 72 ч [Dai С.-Н. et al., из воспалительного очага является
Ш), Под действием этого цитокина апоптоз, который играет важную
,, эритроидных клетках увеличива- роль в удалении нейтрофилов из
ли гакже экспрессия каспаз 1, 3 и тканей при остром воспалении. Более
5 которые вызывают апоптоз этих того, апоптоз является главным, кар-
КОЕ. динальным процессом, контролирую-
Н развитии апоптоза участвуют щим длительную функциональную
транскрипционных факторов. жизнеспособность клетки, которая
)1Д
fjK, трапскипиионный фактор API может быть модулирована различны-
индуцирует апоптоз эритроидных ми медиаторами воспаления [Н as-
1
' JAK2 и STAT5, напротив, lett С. et п., 1997].
^охраняют эритрондные клетки- Установлено, что мембрана ней-
„редшеотввн i|jl о т него [Jacobs- трофилов освобождается ОТ рецепто-

9?
ря CD16 (icyRlll) ii процессе апоп- тельное увеличение экспрессии CD95
щ и Поскольку в процессе апоптоза на нейтрофилах с одновременным
уйеньшается экспрессии CD 16, то уменьшением числа апоптозных кле-
Определение последнего может слу- ток [Pullman К. et al., 1998].
ВМТЬ критерием для установления Аиоптозные нейтрофилы удаля-
Числа кеапоптозных (высокая экс- ются макрофагами, оставаясь интакт-
прессия CD 16) и апоптозных (низкая иыми, без выделения из гранул фер-
ИССПрессия CD 16) нейтрофилов. Про- ментов и медиаторов воспаления.
и*ч > апоптоза нейтрофилов солрово- Макрофаги, происходящие из моно-
Вдастся снижением их функциональ- цитов, для распознавания апоптоз-
ных способностей (фагоцитоза, сек- ных клеток используют на своей
|u-iiiiii гранул, хемотаксиса). При поверхности рецепторы интегрин
сипмчанном апоптозе способность av[33 (витронектин рецептор) и CD36
ппмрофилов к адгезии к Е-селектину (рецептор тромбоспондина). In vitro
и к СО18-интегриновому лиганду поглощение нейтрофилов макрофага-
фибриногена снижается. Изменяется ми может быть модулировано фак-
уровень экспрессии ключевых рецеп- торами микроокружения и вещества-
Горов, которые опосредуют адгезию ми, которые изменяют содержание
Ивйтрофшюв: снижается экспрессия цАМФ в макрофагах. Фибробласты
I) селектина/селектин лиганда, повы- и мезангеальные клетки также спо-
шается экспрессия CD11Ь/С018-ин- собны распознавать и поглощать
Гвгринов. Снижение адгезивной спо- апоптозные нейтрофилы in vitro
собности апоптозных нейтрофилов [Сох G. et al., 1995; McCutchcon .1.
Ограничивает высвобождение из них et al., 1996].
i петотоксических веществ [Drans- Таким образом, апоптоз не толь-
ПеШ I. et at, 1995; Homburg С. et ко определяет жизнеспособность ней-
ill., 1995]. трофилов и их функцию в очаге
Липополисахариды, КСФ-ГМ, воспаления, но он контролируется и
(!5а увеличивают жизнеспособность модулируется внешними медиатора-
пентрофилов путем ингибирования ми. В отличие от некроза клетки при
процесса апоптоза, повышают их апоптозе включается механизм, ог-
функциональную активность, вклю- раничивающий распространение вос-
чая секрецию и хемотаксис. Внутри- палительного процесса на здоровые
клеточные механизмы, управляющие ткани [Haslett С. ct al., 1997].
ипоптозом нейтрофилов, недостаточ- Исходя из всего сказанного, мож-
но изучены, но известно, 2+что в этом но отметить, что апоптоз играет
процессе играет роль Са . Процесс важную роль в онтогенезе человека.
апоптоза нейтрофилов опосредуется Различные эндо- и экзогенные фак-
l'iis-рецептором (CD95) клетки. Вве- торы могут нарушать генетическую
дение здоровым лицам рекомбинант- регуляцию апоптоза, приводя к раз-
НОГО КСФ-Г вызывает у них значи- личным патологическим состояниям

ЭРИТРОЦИТЫ
Эр является сложным образова- функций. Нарушение структуры и
нием, характеризуется наличием мем- метаболизма Эр приводит к прежде-
браиы, цитоскелета мембраны и ге- временной их гибели, и клипико-ге-
моглобина, особенностями метабо- матологически это проявляется •
ПИЭМВ. Все это способствует выпол- виде синдрома анемии разной степе-
неиию этими клетками определенных ни выраженности.

93
ФИМОПОГИЯ ЭРИТРОГКХШ

МОРФОЛОГИИ И КИНЕТИКА п р о д о л ж и i f i i i , м и г i i. митоза -


ЭРИТРОЦИТОВ 76 мин. Генерационное время для
пронормоцита составляет 20 ч [Ко-
Как было отмечено, клетками- зинец Г.И. и др., 1982J.
предшествеиницами Эр являются В базофильных нормоцитах ульт-
ранняя и ПОЗДНЯЯ БОВ-Э и КОЕ-Э. раструктурно определяется высокая
Эти клетки отличаютоя друг от друга насыщенность цитоплазмы полисо-
преимущественной локализацией, ко- мами (полирибосомами) и митохон-
ло и и со бракующей способностью, дриями. Они делятся дважды и дли-
чувствительностью к Эпо, способно- тельность их жизни 25 ч. Число
стью продуцировать различные тины базофильных нормоцитов, находя-
гемоглобинов и другими признаками. щихся в Gi-фазе, составляет 16—52%,
1 [ервой морфологически распо- в S-фазе — 52—80%, в G 2-фазе —
знаваемой клеткой эритроидного ро- 3—15%. ИМ составляет 50—80%,
стка является эрИТробласт. В процес- длительность митоза — 91 мин, а ге-
се созревания эритробласт претерпе- нерационное время — 20 ч.
вает ряд морфологических измене- В полихроматофилыюм нормо-
нии — уменьшается размер клетки, ците на электронограмах видны аг-
происходит конденсация ядерного регаты, состоящие из множества зе-
Хроматина, в цитоплазме накаплива- рен, иногда окруженные мембраной.
ется гемоглобин, ядро из центра Число клеток в Gi-фазе составляет
перемещается на периферию с после- 4—47%, в S-фазе — 46—68%, а в
дующим его кариорексисом, ретику- G 2-фазе — 2—26%. Длительность ми-
ЛОЦИТ принимает очертания двояко- тоза составляет Ю'/г мин, а генера-
вогнутого диска. Эти множественные ционное время — 30 ч. ИМ равен
изменения и фитрокариоцитах явля- 33—50%.
ютм следствием трвнзиторных экс- При электронной микроскопии в
прессии различных генов в течение оксифильном нормоците эндоплазма-
терминальной стадии процесса диф- тическая сеть и пластинчатый ком-
ференцировки [Yarlagadda S. et al., плекс развиты слабо или полностью
1(мж|. 11 нволюция ядра происходит отсутствуют. Количество и размеры
i иомен i а гемоглобинизации — оно митохондрий значительно уменьше-
i Г1НОВИТСЧ более грубым, пикнотич- ны. Аморфное вещество цитоплазмы
iM.iM. и пост- лишения ядра нормоцит равномерно диспергировано, но ино-
иреирищвстея в Эр. гда его несколько больше вокруг
V пьтрвс! руктурно в цитоплазме рибосом. Встречаются включения же-
цронормоцит! определяются боль- леза. Фигур митотического деления
ниц1 количосп во рибосом, располо- не встречается. ИМ равен нулю.
МВННЫЯ группами, наблюдаются ми- В результате четырех делений
ГОХОНДрии, зерна ферритина. Отме-эритробласта в конечном итоге об-
чи in гея дне цектриоли, окруженные разуются 8—32 Эр [Sebahoun G.,
цистернами пластинчатого комплек- 1998].
са. It ядре преобладает эухроматин, В процессе гемоглобинизации ци-
определяются ядрышки, не ограни- топлазмы в эритрокариоцитах парал-
ченные мембраной. В норме индекс лельно происходит инволюция ядра —
метки (ИМ) с 3Н-тимидином состав- оно становится сморщенным, пикно-
ляет 70 -100%. Методом цитофото- тичным, клетка лишается ядра и
метрии установлено, что содержание превращается в Эр. Однако вследст-
клеток, находящихся в Gi-фазе, со- вие диссоциации в созревании ядра
(члкляет 1,4—5,5%, в S-фазе — 52— и цитоплазмы в нормальных услови-
80% и в ( Ь - ф а з с — 15—45°4 Средняя ях часть полихроматофильпых нор-

94
моцитов теряют ядро, превращаясь фазово-контрастном микроскопе
и ретикулоцит (Рц). Последний явля- контуры и форма Рц постоянно
i-ioi незрелым Эр. В нем определяется изменяются. По мерс созревания Рц
сетчатая субстанция, которая являет- в нем исчезает сетчатая субстанции
оя артефактом и состоит из агреги- и он превращается в зрелый Эр. Весь
рованных митохондрий, пластинча- жизненный цикл от эритр об ласта до
того комплекса, рибосом и других Рц составляет от 3 до 7 дней.
opi а пел л. При прижизненной окра- Главная задача Эр заключается и
ске (бриллиантовым крезиловым си- том, что они должны сохраняться в
ним, акридиновым оранжевым) эти циркулирующей крови как можно
вещества выявляются в виде сетчатой дольше и при этом сохранять гемо-
субстанции. Последняя в мазках кро- глобин в таком состоянии, чтобы
пи, окрашенных обычным способом, можно было переносить кислород и
ие выявляется, и Эр имеют полихро- течение этого времени для удовле-
матофильную окраску. творения потребностей в нем тканей
В сутки у здоровых людей в и переносить ССЬ из тканей в систему
Костном мозге образуется ЗхШ9/кг циркуляции легких. Фиксация кисло-
массы тела ретикулоцитов. Образо- рода приводит к переходу 1'с'1 теми
ившиеся в костном мозге ретикуло- в F e 3 ( . Главными компонентами Эр
циты сохраняются в нем 36—44 ч, а являются мембрана, гемопиншн и
пнем попадают в кровь, где дозре- метаболический путь. Нее ми ipu
•ают в течение 24—30 ч. По данным главных компонента Эр взан модой
Е.Н.Мосягиной (1969), время созре- ствуют, чтобы обеспечить перенос
нания Рц в крови составляет 8—12 ч. кислорода, защитить гемоглобин <и
Поскольку в Рц сохранена система окислителей и поддержи ва и. поото
рибосом и других органелл, то в янство осмотического давления и Эр.
период пребывания ретикулоцита в В норме костный мои у т р о с
кос! ном мозге в нем происходит лого должен вырабатывать ежеднев-
синтез большого количества белко- но до 10'' Эр. У детей количество
1ч,1 х фракций, входящих в состав образующихся Эр зависит от возрас-
мебраны. В то же время Рц перифе- та. По данным P.Oski (1981), к
рической крови синтезируют только моменту рождения ребенка суточная
дне фракции. Синтез белков в Рц продукция Эр составляет 2,5 3% ОТ
иниеит от наличия в них тема. При общей массы циркулирующих Эр,
недостаточности гема происходит или 1,3 мл/кг массы тела ребенка. В
inn ибирование синтеза белка, так как последующие периоды уменьшается
активируется е1Г-2а-киназа (HRI), образование Эр до 0,2% к 5-му дню
которая блокирует начальную ста- жизни и до 0,1%-—к 10-му дню. К
дию синтеза белка [Rafie-Kolpin M. 3-месячному возрасту продукция Эр
el ill., 2000]. Гем отрицательно регу- составляет около 2% от общей массы
нирует активность HRI путем непо- Эр, и на этом уровне сохраняется но
средственного связывания с ней. По все периоды детства.
мнению J.Crosby и соавт.(2000), HRI Время циркуляции Эр с кровью
участвует в синтезе белка в незрелых у взрослых составляет в среднем 120
клетках эритроидного ростка и, воз- (100—140) дней [Wajcman 11. с! fti,
можно, регулирует образование Эр. 1992]. Период полужизни (ТУа КС
Кроме того, в Рц происходит синтез 5|
Сг) у доношенных детей несколько
ПКПИДОВ и г е м а . короче, в среднем 23,3 дня (от I ^ ДО
11 свежих пативпых препаратах 35 дней), чем у взрослых (2(>
1'ц обладаю! двигательной активпо- 35 дней). Еще более низкие значения
ОТЫО, ПОЭТОМУ при их изучении в наблюдаются у недоношенных детей

95
l(l,ft ДН4Я, ДлИТвПЬНОС!Ь ЖИЗНИ ' ) р у Эр являются липший I i.i, но их со-
доношенных новорожденных детей держание колеблется и разные перио-
составляет Ы) 70 дней, а у недоно- ды жизни: их меньше всего у недо-
шенных 35 50 дней. ношенных и доношенных детей, и у
Мо мере старения Эр становятся взрослых их содержание составляет
менее деформвбельньши. Это связано в среднем 78% (от 42 до 94%). В то
с потерей поверхностного слоя мем- же время у здоровых лиц в цирку-
браны ')р, уменьшается объем Эр лирующей крови в разные возрас-
вследствие их дегидратации. Меха- тные периоды встречаются Эр в виде
низм, вследствие которого происхо- «чаши», стоматоцитов, дискостома-
дит потеря мембраны Эр, оконча- гоцитов, шизоцитов и др. (см. при-
тельно не выяснен. Предполагают, ложение 9).
что этот феномен является вторич- В разные возрастные периоды
ным как следствие взаимодействия эритроцитом етрические показатели
Эр с клетками СМФ. По мере ста- также отличаются у детей недоно-
рения Эр в них уменьшается актив- шенных, доношенных и взрослых.
ность ферментов, концентрация 2,3- Чем меньше возраст ребенка, тем
ДФГ и вследствие этого увеличива- больше объем крови и Эр (из расчета
ется сродство гемоглобина к кисло- в миллилитрах на 1 кг массы тела),
роду, уменьшается освобождение ки- средний объем Эр.
слорода в тканях [Waugh R. et el., На исходный уровень НЬ и числа
1992; Michel G., 1995]. Эр у новорожденных детей значи-
Высказывается мнение, что при- тельно влияет поступление крови из
чиной гибели стареющих Эр является плаценты. Сосуды плаценты содер-
появление в них неоантигенов. Рас- жат 75—125 мл крови. В момент
поанавание этих неоантигенов про- рождения ребенка кровь из плаценты
исходи! аутоАТ, и этим объясняется быстро проникает в сосуды ребенка.
фц оци гоз Эр клетками СМФ (по Выяснено, что в течение первых 15 с
•нвлогии с ЛИГА). Эти неоантигены после рождения происходит трансфу-
локализуются на Band 3, трансмем- зия 25% крови из плаценты ребенку;
бранном белке, участвующем в если перевязка пуповины отсрочена
Гранспорто анионов [Kay M. et al., на 1 мин, то этот объем крови
1940] увеличивается до 50%. Задержка пе-
I [оявление неоантигенов может ревязки пуповины увеличивает объем
бы 11. СВЯ 1вно либо с деградацией крови у новорожденного ребенка в
белке ' >\кгснбовследствие олигоме- среднем на 61%. В этих случаях через
рнэации молекулы белка под влия- 72 ч после рождения ребенка объем
нием оксидвнтов, либо связано с массы Эр составляет в среднем
взаимодейсп вием белка с денатури- 49 мл/кг, а если перевязка пуповины
рованным гемоглобином [Tanner M. произведена сразу, то 31 мл/кг [Doy-
el al., 1993]. Однако опыты на кро- le J. et al., 1999].
ликах не выявили увеличения Ig на Показатели красной крови и
поверхности мембраны Эр, что ста- эритроцитометрии представлены в
ВИТ под сомнение иммунологический приложениях 10—13.
генез старения Эр [Dale N. et al., Таким образом, эритроцитомет-
19911. рические показатели, суточная про-
Принято считать, что Эр имеют дукция и длительность циркуляции
форму двояковогнутого диска (дис- Эр в крови различаются у людей
конт). Однако рядом авторов уста- различного возраста — более зна-
новлено, что у здоровых людей дей- чительные изменения отмечаются у
СТВИ гель но преобладающей формой недоношенных детей.

96
СТРУКТУРА И СВОЙСТВА играет и роль буфера для диффузии,
МЕМБРАНЫ, СКЕЛЕТА и в то же время представляет по-
верхность, через которую регулиру-
МЕМБРАНЫ И ЦИТОСКиЛКТА ется поступление в Эр и выход ич
ЭРИТРОЦИТОВ них питательных веществ, кислорода,
макромолекул, гормонов, ионов, ин-
Большинство Эр здорового чело- формации и др. Иначе говоря, мем-
века имеют форму двояковогнутого брана играет жизненно важную роль
диска, в циркулирующей крови их в процессах, происходящих в Эр.
циьметр в зависимости от возраста Селективная проницаемость мем-
Человека колеблется от 6,4 до браны позволяет задерживать необ-
1
М мкм, а объем — от 71 до 117 фл. ходимые для жизнедеятельности Эр
Более высокие параметры наблюда- компоненты и выделять ненужные
ются у детей периода новорожден- токсины, усваивать питательные ве-
ное! и. Площадь поверхности всех Эр щества, экскретировать продукты
составляет у взрослого человека распада. Каналы и насосы, находя-
№00 м*. щиеся в мембране, модулируют со-
С точки зрения биологов, изу- держание этих веществ и ионов внут-
чающих строение клетки, в Эр сле- ри Эр, обеспечивают осмотическое
дует различать мембрану, скелет мем- давление и электрический потенциал
брвиы и цитоскелет. Мембрана пред- в Эр. Плазматическая мембрана ш
оггавляет собой жидкий двойной ли- рает важную роль как первичное
йидный слой, который поддержива- место для взаимодействия и связи '>(>
ется сложной инфраструктурой бел- с окружающей его средо и. 11 о дл и
ковых молекул, обеспечивающей вяз- нормальной жизнедеятельности ' >|>,
кость и эластичность мембраны. наряду с другими факторами, необ-
Протеины, которые обеспечивают ходима интактная и функционирую-
ну функцию мембраны, называются щая плазмолемма.
мембранным скелетом. Последний Средняя длительность циркуля-
следует отличать от так называемого ции Эр у взрослого человека состав-
цитоскелета Эр, в понятие которого ляет 120 дней. Эр лишены ядра,
иключают комплекс белков, сопри- митохондрий, полирибосом, нуклеи-
касающихся между собой, с липид- новых кислот, не способны синтези-
кым слоем мембраны и со скелетом ровать новые белки, которые были
мембраны. утрачены или повреждены в период
Наружной оболочкой Эр является циркуляции с кровью. За время СМОЙ
плазматическая мембрана (плазмо- жизни Эр совершают кругооборот
яемма), которая является границей, более 100 000 pas, и за этот период
отделяющей внутреннее содержимое в них происходят значительные ме
(ритоцита от среды, в которой живет ханические и метаболические изме-
и функционирует Эр. Мембрана об- нения. Большое количество гемогло-
падает свойствами текучести, пла- бина (белка) в Эр обеспечивает ему
( j ичностыо, деформабельностью, высокое онкотическое давление и,
благодаря им эритроцит способен таким образом, имеются все условия
проникать через капилляры диамет- для разбухания Эр (способности при
ром до 3 мкм, а затем, пройдя через нимать выпуклую форму) в изотопи-
них, ВНОВЬ принимать первоначаль- ческих растворах и сморщиваться и
ные форму и размер. гипертонических. Это особенно важ
Мембрана полупроницаема, со- но при прохождении Эр через сосу-
отонт из лнпидов и белков, и благо- дистую сеть ночек, так как в почках
цяря им в биохимическом аспекте имеются зоны с различной молярно-

Ч- 4ft] 97
ч>и:т >IH )i ин : >:IA

iii.io oi изотонической до увели- приводи! к ВОЯВЛВНМЮ >> | со сфери-


ченном и d pas, Выделение молекул ческой и эллипсовидными формами.
аялем in поврежденного гемоглоби- В Эр с такими формами общая по-
на приводит к изменению pll и РОг верхность мембраны уменьшается, и
II Эр, Вес VIо требует, чтобы Эр были как следствие этого, Эр менее дефор-
Структурно прочными: мембрана мабельны, у них отмечается снижен-
должна быть пластичной, резистент- ная толерантность к осмотическому
ной к фрагментации, растяжимой и стрессу.
(и,ша Г>ы приспособлена к быстрым Вязкость Эр определяется в ос-
изменениям осмотического давления. новном содержанием гемоглобина в
I [одложке мембраны и цитоскелет Эр, которое у здоровых людей со-
должны быть резистентны к различ- ставляет 270—350 г/л. В дегидрати-
ным повреждениям (окислению, про- рованных Эр эффект внутриклеточ-
теи л irty и др.), так как возмещение ной концентрации гемоглобина уве-
поврежденных белков невозможно. В личивается и происходит экспотен-
(ТОМ отношении мембрана Эр уни- циальное повышение вязкости Эр.
кальна, она адаптирована к этим Насосы и каналы мембраны Эр в
воздействиям. норме поддерживают внутриклеточ-
Одним из главных свойств Эр ный объем, который поддерживает
•вляется их способность к деформа- концентрацию гемоглобина ниже
ции с поел едущим восстановлением уровня, при котором вязкость цито-
нормальной формы без признаков плазмы влияет на деформабельность.
фрагментации и нарушения целости Аномалии насосов и(или) каналов
мембраны. Как указывают N.Moc- мембраны Эр, их перестройка поли-
handes и соавт, (1983), деформабель- меризованным или кристаллизован-
нооть >р определяется тремя величи- ным гемоглобином — все это приво-
нами: i еометрией (двояковогнутая дит к дегидратации Эр с резким
пи коидная форма Эр), цитоплазма- увеличением его вязкости.
1МЧС1КПИ вязкостью и деформабель- Проходя через капилляры, Эр
IMMII.lt) деформируются. Дефекты мембран-
Двоаковогнутая дискоидная фор- ных и цитоскелетных белков Эр
MI >|* и иIIяп си важнейшей величи- могут приводить либо к временной,
ной поскольку обеспечивает выжи- либо к постоянной деформации Эр.
n.uiih >> | и (ксгрсмальных условиях. Взаимодействие различных белков
(Ю|.см >р и норме у взрослого скелета мембраны и цитоскелета Эр
•и поиски сос'шпляет и среднем 90 фл, регулирует деформабельность и ста-
поверхность диска при опре- бильность мембраны Эр. Стабиль-
us условиях позволяет увели- ность мембраны предохраняет Эр от
чим, объем )р до 140 фл, т. е. почти фрагментации.
и 1,9 pain. Мембрана Эр имеет сложный
Гаким образом, только форма биохимический состав. Большую ее
Позволяет] Эр обеспечить себя значи- часть (52%) составляют белки, 40% —
ГОЛЬНЫМ избытком мембраны и ци- липиды и 8% — углеводы. Общая
10
ТОСКвлетом при разбухании Эр. Кро- масса мембраны 10 Эр составляет
ме того, геометрическая форма Эр 15 мг.
позволяет ему растягиваться под дей- Мембрана Эр представляет собой
iiпнем механического стресса. Утра- жидкий двойной липидныи слой,
та мембраны вследствие частичного который связан с различными бел-
фагоцитоза при иммунной форме ГА, ковыми структурами. Некоторые
фрагментации кусочков мембраны у белковые молекулы находятся па
СОЛЬНЫХ с дефектами цит^оскелета поверхности наружного липидного
•0ОООО 000000000OJ ')
®ссо ооссососсо. DOOO

2. Схематичное изображение мембраны иасимметричное расположение фосфа-


тидилсерина в мембране Эр обуслов-
Полков цитоскелета, связанных с мембранной
щштроцита (пояснения в тексте). лено взаимодействием скелета мем-
браны с фосфолипидиым слоем. При
{•поя, другие — связаны с внутренним увеличении концентрации катионов
Моем, третьи — насквозь проникают в Эр в апоптозных Эр фосфатидил-
випидный слой (рис. 2). серин перемещается с внутреннего
Липидный компонент мембраны слоя мембраны на наружный и тгим
Состоит примерно из равного коли- как бы дает сигнал макрофигам,
чества фосфолипидов и неэстерифи- чтобы они ПОГЛОТИЛИ эти измененные
ЦИрованного холестерина; в неболь- Эр [Sniffer К. ct al., 1997].
шом количестве определяются сво- Эр не способны синтезировать
бодные жирные кислоты и гликоли- липиды de novo, но между линидами
имды. Фосфолипиды составляют при- мембраны Эр и окружающей их
Ыпгштельно 0,53-—0,75 ммоль/мг средой происходит обмен линидами.
белка мембраны Эр и представлены У здоровых людей значительных
it основном фосфатидилхолином изменений в составе липидов мем-
(10%), сфингомиелином (25%), фос- браны Эр не наблюдается. Однако
фатидилэтаноламином (28%) и фос- при патологических состояниях, ко-
фптидилсерином (14%); другие фос- гда имеются изменения в липидиом
фолипиды составляют 2—3%. обмене в организме (цирроз печени,
И различных слоях мембраны абеталипопротеинемия и др.), ано-
випиды распределяются неравномер- мальный состав липидов в циркули-
но, асимметрично. Так, наружный рующей крови может приводит!, к
слой мембраны Эр состоит в основ- нарушению обмена липидов между
ном из фосфатидилхолина и сфинго- окружающей средой и мембраной Эр.
миелина, тогда как внутренний слой В свою очередь, это может способ-
KB 80% состоит из фосфатидилэтано- ствовать морфологическим измене-
ПВмина и фосфатидилсерина. Холе- ниям Эр (акантоцитозу) и клинически
стерин распространен в подложке проявляться ГА разной степени ны-
[Вове F. ct al., 1997]. В нормальных раженности.
Эр фосфатиднлеерин локализуется во Скопления липидов в латераль-
•нутреннем слое мембраны [Mando- ной части плазматической мембраны
и Л. el al., 1998]. По мнению играют важную роль в различных
М. ile Jong и соавт. (199S), такое процессах, происходящих в мембра-

99
ФИШ )1 Ю1 ИИ ЭРИ 114)1 И 11.ЧЛ

in-, liiKiix как передача сигналов в увеличения пин уменьшения химиче-


пмопоэтических клетках, отбор гли- ских соединений спектр ин-акти но вой
козилфосфатидилинозитол(ОР1>-свя гексагональной решетки с молекула-
швающих белков |Drown D . el al., ми, влияющими на их способность
2000]. И г)р эти мембранные липид- сворачиваться в спираль или раскру-
ные микроучастки богаты различны - чиваться. Поэтому любые нарушения
ми фосфолипидами, ОFI-связываю- структуры мембраны и цитоскелет-
щими белками, интегральным про- ных белков врожденного, наследст-
ипним сгоматином (band 7.2b), flo- венного или приобретенного харак-
tillln-1 и ilotillin-2. С этим участком тера могут влиять на деформабель-
Ч1< гично связаны также большинст- ность и стабильность Эр.
•0 цч i оекелетных белков — спек- Эр не способны синтезировать de
ipun, актин, белок 4.1 и белок 4.2 novo белки. Наиболее важными бел-
[Saber U. et al., 2001]. ковыми компонентами скелета мем-
Белки мембраны Эр обычно под- браны и цитоскелета Эр являются
разделяют на два класса; интеграль- спектрин (а- и Р-субъединицы), ан-
III.IL- и периферические. Интегральные кирин, протеин 4.1, актин, гликофо-
белки взаимодействуют с липидным рины, протеин 3, протеин 4.2, адду-
слоем мембраны, они проходят через цин и протеин 4.9.
мембрану насквозь, так что один Цитоскелетные белки (к ним не
сегмент белка находится снаружи относятся протеин 3 и гликофорины)
мембраны Эр, а другой располагается способствуют образованию цитоске-
па цитозольной части мембраны. летной решетки, состоящей из нитей
Белковые молекулы, тесно связанные спектрина, скрепленных между собой
с липидным слоем мембраны Эр, узлами, которые содержат нити F-
ЯВЛЯЮТСЯ структурной основой цито- актина и протеин 4.1. Эти узловые
ihmci в, образуют гексагональную участки (точки пересечения нитей
решетку, состоящую из спектриновых спектрина) прикрепляются к приле-
И МГГИновых фрагментов, к которым жащему липидному слою мембраны
дополнительно прикрепляются бел- с помощью протеина 4.1 к гликофо-
ки, укрепляющие решетку с липид- рину и мультивалентной связи анки-
Н1.1м гноем. У крепление решетки про- рина со спектрином и цитоплазма-
П1 иодип через определенные интер- тической частью протеина 3. Адду-
1ш ни с помощью мультивалентных цин, протеин 4.2 и протеин 4.9 ста-
бмхов (шнкирнн, протеин 4.1), кото- билизируют взаимодействие спектри-
pi.it- прикрепляются к решетке и на и актина и связывание актина.
ни iоплнматическому участку для Главными интегральными белками
интегральных белков (гликофорина, мембраны Эр являются протеин 3
протеина 3 см. рис. 2). (Band 3) и гликофорины, которые
При деформации Эр происходит пронизывают липидный слой насквозь.
перестройка решетки. Некоторые мо- Протеин 3 (band 3, АЕ1 —Anion
лекулы спектрина раскручиваются и Exchanger) —- это трансмембранный
растягиваются, тогда как другие еще гликопротеин. На его долю прихо-
больше сжимаются и скручиваются. дится приблизительно 25% от всего
Итогом )того является то, что общая белка, составляющего мембрану. В
поверхность Эр не изменяется, хотя одном Эр содержится более 1 млн
его очертания приобретают иной молекул белка [Jarolim P., 1998].
вид. Исходя из строения цитоскелета, Протеин 3 является главным транс-
становится очевидным, что деформа- портным белком анионов в Эр, зна-
IK-III.IIOCII, ")p будет увеличиваться чительно влияет на деформабель-
или уменьшаться в зависимости от ность Эр, опосредует в них метабо-

100
пигм И iit s. ei at, 1990]. Локус гена ()) протеин 3 является потенци-
протеина 3 находится на хромосоме альным носителем Л Г групп кропи,
1-7 (17ц21—qlcr). содержит 20 эксонов. ЭПИТОПЫ которых ло калию паны в
Протеин 3 — это полифупкцио- мембранном участке белка;
кальныЙ белок с молекулярной мас- 7) наряду с фосфатидилсерином
roii 100 килодальтон, играющий мембраны Эр и компонентами плаз-
[дойную роль в Эр. В цитоплазме мы крови протеин 3 играет важную
•р располагается 4-kD N-терминаль- роль в адгезии Эр к эндотелию.
in.iit участок, который связывает ци- Связывание цитоплазматического
юскелет Эр с билипидным слоем участка (43 килодальтона)
мембраны через анкирин [Perrota S. протеина 3 с анкирином является
•I а!., 1998]. Цитоплазматический важным скрепляющим механизмом в
участок Band 3 (cdb3) связывает ряд обеспечении гибкости и ригидности
периферических мембранных бел- Эр [An X.-L. et al., 1996]. Связывание
кон—это периферические белковые протеина 3 с гемохромами стимули-
ниганды, анкирин, протеин 4.1, рует образование агрегатов в виде
Протеин 4.2, обеспечивая очертания «пятен», которые распознаются и:ю-
Эр, некоторые гликолитические фер- АТ Эр, что приводит к опеопизации
менты (альдолаза ГАФ-дегидрогена- Эр с последующим их удалением ич
1а, ФФК), дезоксигемоглобин, гемо- циркулирующей крови клетками
кромы [Zhang D. et al., 2000]. СМФ [Mohandes N., 1990]. Этот
С-терминальны и мембранный механизм является главным, путем
участок (55 килодальтон) протеина 3 которого измененные и состарившие-
осуществляет транспортный обмен ся Эр секвестрируются. Биогенез мем-
хлоридов и гидрокарбонатов в Эр браны Эр в эритробластах зашн и i
[Tanner M., 1998]. от использования цитоплазматиче-
Но данным P.Jarolim (1998), ского участка протеина 3 как ОЧДП
AMandori и соавт. (1998), протеин 3 для стабильности мультимолскуляр-
играет ведущую роль в гомеостазе ного комплекса, образующего сиек-
')р, выполняя следующие функции: триновую решетку [Palek J.ct al.,
1) он является главным анион- 1992].
1р;1иснортным каналом С\— и НСОз~~; Таким образом, протеин 3 явля-
2) с помощью цитоплазматиче- ется важным компонентом Эр для
ских окончаний протеин 3 взаимо- биогенеза их мембраны, модуляции
действует с цитоскелетом Эр с помо- эластичности и ригидности, транс-
щью связей с анкирином, про- порта анионов и иммунной метки
теином 4.2 и, возможно, со спектри- стареющих Эр для их удаления ич
ком; циркулирующей крови.
3) цитоплазматические оконча- К интегральным мембранным
ния протеина 3 являются мишенью белкам относятся также гликофори-
для связывания с гемохромами, ко- ны, которые содержат большое ко-
юрые образуются при денатурации личество сиаловых кислот. Сущест-
или окислении гемоглобина глице- вуют 5 различных форм гликофорн
ральдегиддегидрогеназоЙ, альдола- нов: А, В, С, D, E [Chasis J. el al
аой; 1992]. В Эр основную часть состав
4) протеин 3 может регулировать ляет гликофорин А — 5в одном Эр
метаболический путь расщепления определяется (5...9)х10 копий. Со
ферментов, таких как Г-6-ФД; держание других гликофоринон зна-
5) протеин 3 может быть ключе- чительно меньше. Так, 5 в одном )р
вым элементом в организации мем- определяется (0,8...3)х105 копий глик-
браны Эр; офорина В, (0,5...1)х10 копий гли~

/0/
ФИШ )ЛО1 ИЯ ЭРИТН( >1 /< К ИЛ

кофорииа С, (0,t...0,2)xl03 копий мают форму ЭЛЛИПСЕ, но клинических


гликофорина 1) (Песке П. et al., 1990]. признаков ГА не отмечается |Те1-
ГлИКОфорИН Е, по-видимому, проис- len M. et al., 1991J. Как и протеин 3,
&ОДИ1 lit гликофорина Л [Kudo S. et гликофорин С играет важную роль
id., 1990]. Гликофорины А и В в укреплении цитоскелета.
гомологичны. Скелет мембраны Эр прикрепля-
Гены гликофоринов А, В и Е ется к мембране Эр путем взаимо-
локализованы на хромосомах 4-й действия между переносчиком анио-
пары (4q28—q31> [Vignal A. et al., нов протеином 3 с анкирином, а
|990|, а гликофоринов С и D — на также взаимодействия с глик-
хромосомах 2-й пары (2ql4—q21) офорином С (символ человеческого
[Cartron J. et al., 1990]. гена — GYPC) и протеином 4.1. По
Окончательная биологическая данным G.Hummel и еоавт. (1998),
функция гликофоринов не охаракте- GYPC у человека представляет собой
ризована. Высказывают предположе- трансмембранный белок, состоящий
ние, что гликофорины играют важ- из трех функциональных участков:
ную роль в модуляции взаимодейст- 1) экстрацеллюлярного, содержа-
пия г ) р — Э р и Эр — эндотелиальная щего эритроцитарные АГ Gerbich;
клетка (Kopito К.., 1987]. Гликофори- 2) трансмембранного;
ны ИМСКЛ важное значение для кли- 3) цитоплазматического, который
нической иммунологии. Так, АГ связывается с протеином 4.1.
группы крови М и N располагаются Мембрана содержит в небольшом
на глнкофорине А. Редкие варианты количестве (менее 1хЮ4 копий в
группы крови — Miltenbcrgen V, En одном Эр) ряд ионных насосов и
(1-) и Mk Mk являются гликофори- каналов, включая Na + , K+, АТФаза-
новымм вариантами, En (а-) является и кальциизависимых калиевых кана-
следствием делении гена гликофори- лов. Активность этих белков часто
на А Гликофории В связан с SS- изменяется в ответ на первичную
iрумной кропи. аномалию мембраны или цитоскеле-
1 ЛИКОфорины А и В экспресси- та Эр, однако патологические состоя-
|ки|.HIM голько на клетках эритроид- ния, связанные с мутациями этих
iitnn ряда, в течение их терминаль- белков, не описаны [Benz E., 1994].
н о ю сифования, первоначально по- К числу цитоскелетных белков,
шет m i, n;i стадии проэритробласта. связанных с мембраной, относятся
!
Ь финн i t никофоринов А и В не спектрин, F-актин, протеин 4.1,
интим ни форму и деформабельность протеин 4.2, протеин 4.9, анкирин и
Эр, и (ТО iaci авляет полагать, что аддуцин. Они связываются с цито-
пни in- ИГраКИ рОДИ и поддержании плазматическими участками инте-
механической стабильности, дефор- гральных белков (протеином 3 и
мабмьнос*] п и формы Эр. гликофоринами) [Tse F. et al., 1998].
I tup на и п.1 i ПИКОфорнна С дают Спектрин является главной ча-
\ш- юнис необычных иммунологи- стью цитоскелета Эр и составляет
ческих фенотипов )р, включая Ger- 75% от всей массы белков цитоске-
ЫоЬ YDS п WEPB [Chasis J. et al., лета. В одном Эр содержатся около
1992]. И течение дифференциации и 200 000 молекул. Спектрин представ-
оозрования эритроидных клеток экс- ляет собой гетеродимер, состоящий
првесня 1'лпкофорина С изменяется. из а- и ^-цепочек.
Глмкофорнн С обеспечивает ста- Относительная молекулярная
бНДЬНОСТЬ, регулирует деформабель- масса а-цепочки составляет 280 000,
НООТЬ и очертания мембраны. При (5-цепочки — 240 000 IWinkelman J. el
нфпцптс Гликофорина С ')р прини- al., 1993]. Ген сс-спектрина раеполо-

Ю2
и-ип'оциты
ЖСН на хромосомах 1-й миры (1ц22 жепреесирукицихся в различных про-
q23), содержит 52 эксонов, а (5-спек-порциях в разных тканях млекопи-
Грина — на хромосомах 14-й пары тающих.
(I4q23—q24.2) [Huebner К. et al., Семейство гена 4.1:
I*>Kf>; Fukushima Y. et al., 1990]. 1.4.1.R — экспрессируется в Эр,
11 pit электронной микроскопии гемопоэтических клетках, селективно
Обе субъединицы спектрина имеют и в других клетках организма
1 i ержневидный, «лапшеобразный» [Huang S. et al., 1998];
нчд, и длина каждой структуры 2.4.1 .G — широко экспрессирован
(доставляет около 100 нм. По всей в клетках различных тканей;
010ей длине обе спектриновые моле- 3.4.1.N —нейроспецифический;
кулы имеют множественные точки 4.4.1.В — экспрессирован в клет-
Соприкосновения. Слектриновые ди- ках головного мозга, а также селек-
меры образуют тетрамерные формы тивно в клетках других тканей.
Путем неконвалентноЙ связи между Ген протеина семейства 4.1 рас-
участком 80 килодальтон а-субъеди- полагается в геноме человека среди
ИИЦЫ и участком 28 килодальтон различных хромосом: Iq32—9ter
Ц-субъединицы. При нарушении (4.1R), 6 (4.1G) и 18 (4.1В) [Parra M.
•заимодействия спектрин — спек- et al., 1997].
грин изменяются деформабельность Протеин 4.1 соединяет спектрип-
и стабильность мембраны Эр. Ами- актиновуго решетку с липидным сло-
мо- и карбоксильные окончания спек- ем мембраны Эр с помощью ком-
Грина являются ключевыми участка- плекса, образованного спектрип-ак-
ми для взаимодействия с анкирином, тином, цитоилазматическим участ-
актином и протеином 4.1 [Burke J. ком протеина 3 и гликофорииом С,
el al., 1997]. Биохимическая роль протеина 4.1
К спектрину прикрепляется это связывание спектрина с мембра-
протеин 4.1, который является цито- ной. Сам по себе спектрин связыва-
скслетным фосфопротеином с моле- ется с актином слабо, по благодаря
кулярной массой 80 килодальтон. протеину 4.1 эта связь укрепляется,
Протеин 4.1 стабилизирует мембран- стабилизируется взаимодействие
но-цитоскелетную решетку, предле- спектрина с актином, и этим самым
жащую к липидному бислою мембра- придается прочность мембране Эр
ны Эр. В одном Эр определяется до [Becker P. et al., 1990].
Л К) 000 копии протеина 4.1. Наличие аномалии протеина 4.1
Протеин 4.1R является структур- или же его дефицита клинически и
ным белком скелета мембраны Эр и гематологически проявляется наслед-
играет важную роль в определении ственным эллиптоцитозом [Chasis J.
морфологии Эр и их механических et al., 1992]. Дефицит протеина 4.1
свойств. Эритроцитарный 4.1R- сопровождается механической неста-
i юл и пептид с молекулярной массой бильностью Эр, но деформабель-
КО килодальтон является прототипом ность мембраны Эр не изменяется.
семейства различных протеинов 4.1, Другим белком, который сиязы
образующихся в неэритроидных вается со спектр ином, является лп-
клетках путем альтернативного со- кирин. В прошлом его обозначали
единения преРНК-транскрип- как протеин 2.1. Анкирип предешп
iон 4.1К, а также экспрессии но- ляет собой молекулу с молекулярной
ны \ 4.1-гомологичных веществ раз- массой 210 килодальтон, в которой
личных генов. В состав семейства можно выделить 3 участка: амиио-
гпш 4.1 входят по крайней мере терминальныЙ (89 килодальтоп), ко-
ЧС1 ырс пыеоко] омологичпых члена. торый является местом прикрепления

103
Ф1t. ФП HIOI ИУ1 ;ц •и 11ч )i к к тл

протеин! Л участок (62 килодаль- обычно актнвируки пиши путамина-


loii) для прикрепления спектрина и зы Эр.
регуляторный учясток (55 килодадь- Хотя истинная роль протеина 4.2
тон). I* одном ')р содержится около окончательно не определен;!, однако
100 000 копий анкнрняв [Zhu L. et отмечено, что дефицит этого белка
ill., 1998], Эритроидно-спецнфическая в мембране Эр проводит к сферуля-
экспрессия гена анкирина I (Ank 1) ции последних, а клинически отме-
опосредуется промотером, и для про- чается ГА разной выраженности
явления с ю активности необходимы [Granjo E. et al., 1998]. Это обстоя-
GATA-1 и САССС-связывающие бел- тельство заставляет полагать, что
ки. Ген анкирина располагается на протеин 4.2 играет роль в поддержа-
хромосомах 8-й нары (8р11.1—р21.1), нии стабильности и эластичности Эр
содержит 42 :жсона [Lambert S. et [Yawata Y., 1994]. На основе биофи-
al., 1990; McMullin M., 1999]. зических и электронно-микроскопи-
Апкирин, являясь поливалентным ческих исследований, D.Golan и со-
Протеином, связывается с |3-цепочкой авт. (1996), A.Rybicki и соавт. (1996)
СПвктрина, и это приводит к плот- высказывают предположение, что
пому соединению со спектрином и протеин 4.2 может играть роль ак-
проченном 3, скреплению связи ске- цессорно-связы вающего белка для
т ч а мембраны Эр с липидным слоем скрепления взаимодействия инте-
|Kicl ( i . et al., 1998]. грального мембранного протеина 3
It укреплении цитоскелета Эр с цитоскелетной решеткой.
важная роль принадлежит протеину Деформабельность и механическая
4.2, содержание которого составляет целость мембраны Эр человека обес-
около 5% от всей массы белков печиваются короткими нитями актина
мембраны Эр человека. Протеин 4.2 скелетной решетки, перекрещенных
Представляет молекулу с молекуляр- длинными, гибкими спектриновыми
imn массой 72 килодальтона, в од- молекулами. Длина коротких нитей
ним >> | содержится до 200 000 копий. актина составляет (33±5) нм [F оw-
I m протеина 4.2 (HLB42) расположен ler V., 1997].
ни кроМОСОМах 15-й пары (15ql5—q21), Кроме того, в Эр в различных
1ч»дсржн1 I \ жсонов. Протеин 4.2 свя- количествах обнаружены другие бел-
н.т.пин с прогонном 4.1, анкирином, ки, связанные со спектрин-анкирино-
Протеином * и комплексом анкирин -— вым комплексом. К ним относятся
протеин \ [Zhu L et al., 1998]. аддуцин, протеин 4.9 (дематин), тро-
I функция протеина 4.2-—это помиозин, миозин, белки, относящие-
iiuiint комплекса спектрин — ся к тропонину [Benz E., 1994].
<iii i пи анкирин с проченном 3 [Рег- Троиомодулин Эр человека —это
rottl S. et ill., 1997], No мнению тропомиозин-связывающий белок с
I (im-iiii Shinohara и соавт. (1998), молекулярной массой 40,6 килодаль-
отсутствие протеина 4.2 не приводит тон, находящийся в комплексах в
к разрушению цитоскелетной части местах соединения цитоскелета с
мембраны, так как физиологическое мембраной Эр [Vera С. et al., 1998].
отсутствие этого белка может быть Тропомиозиновые комплексы регу-
компенсировано за счет более высо- лируют длину актиновых нитей в
кого содержания анкирина. L.Chang клетках мышечной и немышечной
и соавт, (1994) высказывают предпо- тканей [Chu X. et al., 1998].
ложение, что протеин 4.2 защищает Чтобы предотвратить перестрой-
цитоскслет Эр от преждевременного ку длины нитей актина, оба его конца
I прения путем присоединения каль- прикрыты, в частности медленнора-
ция и других кофакторов, которые стущее окончание (остроконечное)

104
филамента тропомодулином [Fow- ствием этого появляются морфоло-
\т V., 1997]. гически измененные Эр в перифери-
11 ротеин 4.9 — это фосфопроте- ческой крови — -сфероциты, сферо-
ин С молекулярной массой 4Х кило- стоматоциты,эллиптоциты,а клини-
цальтон, и он выполняет функцию чески может наблюдаться умеренно
как а к т и н с в я з ы в а ю щ и й белок. выраженная ГА, отставание живот-
It процессе созревания клеток эрит- ных в физическом развитии.
роидного ряда количество протеина Таким образом, структура мем-
•I.') уменьшается. Высказывается мне- браны, ее скелета и цитоскелета Эр
ние, что, возможно, роль фосфопро- тесно взаимосвязаны, определяю!
геина более значима для процесса функцию и свойства мембраны Эр.
опревания эритроидных клеток, чем Мутации генов или дефицит отдель-
для жизнедеятельности Эр в цирку- ных биохимических компонентов
лирующей крови. мембраны и цитоскелета приводят к
Аддуцин — это белок скелета нарушению свойств, формы, дефор-
мембраны; он, как и тропомодулин, мабельности и других жизненно важ-
прикрывает окончания нитей фибри- ных функций Эр, которые клиниче-
на. В одном Эр содержится до 30 000 ски могут проявляться в виде раз-
копий [Kuhlman P. et al., 1996]. личных заболеваний и синдромом.
Дддуцин способствует взаимодейст- В отношении биогенеза мембра-
11ШО спектрина с F-актином, участ- ны Эр четкой ясности относительно
вует в процессе соединения спектрина последовательности отдельных сту-
к комплексу в участке скелета мем- пеней ее развития в известных нам
браны Эр. Ген сс-аддуцина располо- публикациях нет. Это связано с тем,
жен на хромосомах 4-й пары (4р 16.3), что для исследований прак i и чески
;i [3-аддуцина — на хромосомах 2-й невозможно получить чистую попу-
пары (2р13—р14) [Gallagher P. et al., ляцию эритроидных клеток-предше-
1998]. Аддуцин конкурирует с ственниц каждой стадии развития
протеином 4.1 за связывание со спек- эритропоэза в достаточном количе-
i рин-актиновым комплексом, но так стве для анализа. Кроме того, суще-
как его значительно меньше содер- ствуют множество изоформ белков,
жится в Эр, чем протеина 4.1, то и до сих пор остается открытым
маловероятно, что аддуцин играет вопрос, на каком этапе эритропоэн
существенную роль как модулятор в происходит переключение этих изо-
образовании спектрин-актинового форм.
комплекса. Установлено, что биосинтез бел-
С помощью метода гомологич- ков мембраны и цитоскелета Эр
ной рекомбинации эмбриональных происходит асинхронно в течение
гемопоэтических стволовых клеток эритропоэза, так что пик синтеза
D.Gilligan и соавт. (1998) вывели различных компонентов мембраны
породу мышей, у которых в Эр достигается на в разных стадиях
отсутствовал аддуцин. К этому их дифференциации и созревания эрит-
побудило то обстоятельство, что до роидных клеток. Эти ком по пен i ы,
этого не было известно о функции появляющиеся на ранних стадиях
аддуцина in vivo. Наблюдения за эритропоэза, начинают собираться с
эт ими Р-аддуцин-отрицательными образованием цитоскелета па более
мышами показали, что аддуцин не- поздних стадиях, Белки одного rtBI
обходим для поддержания нормаль- синтезируются асинхронно. Так, же-
ной поверхности Эр. При отсутствии прессия гена протеина 4.1 ВОЗНИКАЛ
р-аддуцина не происходит включения до стадии проэритробласта, тогда
а-аддуцина в мембрану Эр, и след- как спектрин-актиновый участок по-

105
1> \л

является на поздних стадиях созре- робластах, а зкопрмоия гена а-спек-


вания эритробластов [Tang Т. el al.» трина преобладает в более поздних
1990], клетках-предшествеппицах >ритропо-
На ранней стадии образования эза [Benz E., 1994].
мембраны Эр с формированием се Значительная перестройка и фор-
формы важную роль играет мирование зрелой мембраны проис-
протеин 3, который включается в ходят после энуклеации ортохромно-
мембрану. С появлением новых бел- го нормоцита [Mohandas N., 1991].
коных компонентов мембраны и ци- После потери клеткой ядра в рети-
тоскелета Эр происходит организа- кулоциге происходит незначитель-
ция стабильного макромолекулярно- ный биосинтез протеина 4.1 и глик-
го комплекса. В течение ранних офорина С. В ретикулоцитах содер-
стадий >ритропоэза синтезируется жатся митохондрии, полирибосомы
также анкирин, и это заставляет и ряд белков мембраны, которые
полагать, что он является важным либо отсутствуют, либо содержатся
элементом на раннем этапе органи- в небольшом количестве в зрелых
зации мембраны путем непосредст- Эр. Также отличается фосфолипид-
венного взаимодействия с протеи- ный состав и внутренне-внешнее рас-
ном 3 [Lazarides E., 1987]. пределение липидов в бислое мем-
11 роцесс биосинтеза и сборки браны ретикулоцитов и Эр. Ретику-
субъединиц спектрина является ком- лоциты менее деформабельны и ме-
плексным. В рашшх эритробластах, нее стабильны к механическому воз-
происходящих в желточном мешке, действию, чем Эр. Ретикулоциты,
у плода и у взрослых биосинтез созревая в костном мозге в течение
спектрина р-формы превышает био- 2—3 дней, первоначально имеют
синтез а-спектрина. Это соотношение форму «чаш» и лишь впоследствии
сохраняется и в течение поздних принимают форму двояковогнутых
стадий эритропоэза у эмбриона, но дисков. Процесс созревания ретику-
не у плода и взрослых людей. У лоцита и параллельное изменение его
взрослых людей в нормобластах и формы сопровождается реорганиза-
регикулоцитах увеличивается экс- цией как фосфолипидов мембраны и
прессия гена а-спектрина, тогда как цитоскелета и включенных в них
Экспрессия гена 3-спектрина остается белков, так и потерей липидов и ряда
Неизменной. Вследствие этого в те- белков, включая рецепторы Тф, ин-
Ч8НMl ипчдпих стадий развития эри- сулина и фибронектина. В итоге к
гропо ии превалирует тРНК а-белка, концу созревания ретикулоцита его
I, с это наступает в тот период, деформабельность достигает тако-
мили фактически происходит обра- вую Эр [Waugh R. et al., 2001].
юванне мембраны Эр [Peters L. et Имеются немногочисленные све-
дения относительно структуры и
Изменения в соотношении био- свойств мембраны, скелета мембраны
синтеза спектрина в различных ком- и цитоскелета Эр у людей различного
партаментах эритроидных клеток мо- возраста.
гу i отражать в какой-то степени Состав белка мембраны и цито-
различную чувствительность эритро- скелета у детей и у взрослых не
ИДШ.1Х клеток-предшественниц к Эпо отличается, но имеются некоторые
п различным цитокинам, стимули- качественные различия. Так, S.Lan-
рующих эритрОПОЭЗ. Так, экспрессия daw и соавт. (1981) установили, ЧТО
гена (i-спсктрипа селективно увели- а-спектрин легче экстрагируется и t
чивайся под влиянием Эпо в чело- Эр новорожденных детей, чем И5 >> |
ввчоских внкирин-дефицитных эрит- взрослых людей. Исходя из этого.
Ч'И1Г()ЦИП,1

вггоры высказывают предположи]те, O.Lindercamp и со авт. (!УК2), кото-


что это связано с наличием в Эр рые установили, что Эр и новорож-
но порожденных фегальной формы денных, и взрослых людей имеют
иа-ктрииа. Вместе с тем содержание избыток поверхности мембраны по
димерОВ спектрина одинаково в Эр отношению к объему Эр. Поэтому
сравниваемых групп. это обстоятельство обеспечивает рав-
И Эр определяется контрактиль- ную степень деформабельности Эр
ni.iii актип-миозиновый комплекс, при ее измерении в вискозиметре.
ири УГОМ содержание иммунореак- Однако Эр новорожденных в отличие
ривного миозина в Эр новорожден- от таковых у взрослых имеют боль-
ных больше, чем в Эр взрослых. шие размеры и увеличенный мини-
Возможно, это обусловлено истин- мальный цилиндрический диаметр.
iii.iM увеличением содержания белка, Эти повышенные геометрические па-
ни не исключена возможность, что раметры Эр у новорожденных детей
по связано с качественным разли- затрудняют прохождение Эр в систе-
чием протеина — присутствием фе- ме микроциркуляции, в частности в
пльного миозина [Fowler V. et al., селезенке, что способствует увеличен-
1994]. ной секвестрации и сокращению дли-
И отношении липидного состава тельности жизни Эр.
мембраны Эр новорожденных детей Суммируя вышесказанное, схема-
и it (рослых также имеются различия. тично мембрану и цитоскелет ' )р
Так, в Эр новорожденных детей, можно представить следующим об-
особенно недоношенных по сравне- разом (см. рис. 2): Эр окружен
нию с Эр взрослых людей на 20% билипидным слоем, состоящим m
больше содержится липидов, больше внутреннего и наружного листков.
определяется фосфолипидов и холе- Снаружи (а) этот липидный слой
стернна. Соотношение холестерина и состоит в основном из фосфатидил-
фосфолипндов в Эр новорожденных холина и сфингомиелипа, а внутрен-
и у взрослых постоянно, хотя у ний слой (б) •— из фосфатидилэтапо-
взрослых оно может быть несколько ламина и фосфатидил сер нка. Транс-
выше. Однако Эр новорожденных в мембранные белки — протеин 3 (и)
отличие от таковых взрослых, содер- и гликофорин (г) пересекают на-
жат больше сфи игом и ели на, насы- сквозь билипидный слой. Основу
щенных жирных кислот и фосфати- цитоскелета составляют белковые
дилинозитола и меньше фосфатидил- молекулы — спектрин, представлен-
чолииа [Matovcic L. et al., 1985]. ный а- (д) и Э- (е) субъединицами,
Как известно, деформабельность и актин (ж), которые образуют гек-
Эр зависит от трех факторов: отно- сагональную решетку, связанную с
шения поверхности Эр к его объему, билипидным слоем мембраны. При-
цмто плазматической вязкости и ри- крепление решетки к мембране опо-
гидности мембраны. Эр новорожден- средуется анкирином (а),
ных и взрослых имеют одинаковый протеином 4.1 (и), аддуципом (к).
профиль градиента осмотической де- Таким образом, мембрана И ци-
формабельности, С помощью экта- тоскелет Эр тесно взаимосвяшми и
цитометрии установлено, что дефор- взаимозависимы, обеспечивая под-
мация Эр новорожденных детей и держание различных функции и
НросПЫХ одинаковая, но отмечено, свойств Эр, их жизнеспособное!I..
что в отличие от Эр взрослых про- Наследственные или приобретении*
хождение Эр новорожденных через изменения в количестве или качеетс
мил и норы затруднено. Этот нара- биохимических компонентов, входя-
цокс был объяснен исследованиями щих в состав структуры мембраны

Ю7
н цитосколете Эр могу! приводить к БИОСИНТЕЗ Н М Л И 111 о РЕГУЛЯЦИЯ
морфологическим и функциональ-
ным ИЗМвНШНИЯМ ' >[>, у к о р о ч е н и ю Гем составляет 4% от всего НЬ
длительности их жизни. Клинически и представлен комплексом протопор-
это может протекать бессимптомно фирина IX и Fe 2+ , В процесс био-
либо в виде различных форм анемий синтеза гема вовлечены 8 ферментов
с соответствующей к лини ко-гемато- (схема 2).
логической симптоматикой. Синтез гема начинается в мито-
хондриях эритробластов. Мишенями
первой ступени образования гема
ГЕМОГЛОБИН являются глицин и сукцинил-
коэнзим А (сукцинилКоА). В мито-
Гемоглобин является дыхатель- хондриях клеток сукцинат превраща-
ным пигментом, относящимся к хро- ется в сукцинилКо, который соеди-
мопротеидам. Он придает Эр крас- няется с глицином в присутствии
ную окраску и на его долю прихо- ниридоксальфосфата (витамина Вб).
дится 95% от всех белков, входящих Эта реакция катализируется синтета-
и состав Эр, тогда как на остальные зой 5-АЛК-С, ферментом, находя-
компоненты Эр (строму, мембрану) — щимся в митохондриях, с образова-
5%. Гемоглобин—это сложный бе- нием пяти углеродных цепочек 5-
лок, металлопротеин имеет молеку- АЛК. Существуют две формы АЛК-С:
лярную массу 64 500. В одном Эр печеночная (неспецифическая) и
содержится около 280 млн молекул эритроцитарная, которые являются
НЬ, каждая из которых состоит из изофер ментам и. Оба изофермента на-
п рос тети ческой группы гема и гло- ходятся под контролем двух различ-
Сшпа. ных генов: ген печеночной АЛК-С
Гем представляет собой ком- расположен на 3-й паре хромосом
плексное соединение протонорфири- (Зр21), а эритроцитарный ген — на
iiii IX с железом. Протопорфирин хромосоме X (Xpl 1.21) [Sassa S.,
0ООТОИ1 из четырех пирроловых ко- 2000]. После образования в митохон-
ти, it центре которого находится дриях АЛК последняя транспортирует-
ЮЛ030, соединенное с четырьмя ато- ся в растворимую фракцию клетки —
MiiMii ;i кии пирроловых колец двумя цитозоль; здесь под действием фер-
i i.i ми и двумя дополнительными мента АЛК-дегидратазы (син.— пор-
i mi ЛМИ, Так как координационное фобилиногенсинтетаза) из двух мо-
чпсии женеta равно 6, то остаются лекул АЛК образуется монопирроль-
mm мши. ишаппыми две связи: с од- ный ПБГ. Ген АЛК-дегидратазы рас-
ним in пн\ связывается глобин, а к положен на 9-й паре хромосом (9q34).
другой присоединяется кислород и Под влиянием ПБГ-Д (син.— гидро-
другие inn лнды- ксиметилбилансинтетаза) путем по-
Глобиновая часть НЬ состоит из лимеризации из четырех молекул
четырех еубъедипиц (2а и 2(3). Це- ПБГ образуется тетрапирроловый
почка О-глобииа содержит 141 ами- гидроксиметилбилан. Это вещество
нокислоту, а [i-цепочка — 146. Каж- очень нестабильно в водных раство-
дая субъединица глобина соединена рах и быстро без участия ферментов
с активной частью молекулы гема, может превращаться в уроиорфири-
содержащего атом Fe 2 + , находящего- ноген I. Ген ПБГ-Д расположен на
ся в центре протопорфирина IX. 11-й паре хромосом (Uq23—1 iqler).
Атом 1;е21 ковалентно связан с ами- Однако в нормальных условиях фер-
нокислотой полипептидной цепоч- мент уропорфириноген Ш-косинте-
ки — гистидином, таза, который находится в избытке.

108
\ГППН)ЦИГЫ

Глицин

Синтетаэа АЛК

u-Ами но- |1-кетоад ипиноваякисл ота Сукцинилкоэнэим А

-СО2

АЛК

Дегидратаза АЛК

Порфобипиноген Копропорфириноген

Порфобилиногендезаминаза

Гидроксиметилбилан Уропорфириноген I

Уропорфириноген-И1-косинтетаза

Уропорфириноген

Уропорфириногендекарбоксилаза

Копропорфириноген III

Копропорфириногеноксидаза

Протопорфириноген IX

Протопорфириногеноксидазэ

Протопорфирин IX

Феррохелатаза

Гем

Fe'

Схема 2. БИОСИНТЕЗ ГЕМА.

подвергает полимеризации почти действует на уроиорфирииогеи 1 ИЛИ


весь гидроксиметилбилан с образо- III с образованием копропорфи
ванием уропорфириногена III. Ген риногена I или III соотвегсч пенни
уропорфнрнногеи 111-синтетазы рас- Как к субстрату активность ферм ей • •*
положен на 10-й паре хромосом проявляется в большей степени И
I l0q25.3 q26.3) [Astrin К. et at, изомеру III, чем к изомеру I Г§М
1991], В природе существует только УПГ-Д расположен на 1-й парс \рч
уропорфириноген или его изомеры I мосом (1 pter—p21).
к III. В растворимой фракции клетки После образования копропорфи
имеется фермент УПГ-Д, который риногена II) последний перемещает

109
ФИЗИОЛОГИИ ЭРИIt'01 ПКI М

oi и мм тхоидрии КЛвТОК, и которых семейству i емонрп i сипов, ответст-


иод действием ферменте копропор- венных за первую фазу метаболизма
фириногеноксидазы происходит эндогенных и экзогенных химических
ОКИСЛвНИв и декарбоксилирование веществ.
копропорфириногена III с образова- Гем участвует также в образова-
нием протопорфириногена IX. Ген нии митохондриальных цитохромов,
копропорфириногеноксидазы распо- каталазы, пероксидазы, цитохро-
ложен ИЯ J-fl марс хромосом (3ql2). ма Ь5; некоторые гемопротеины об-
Протопорфириноген IX под влияни- наруживаются в эндоплазматическом
ем протопорфириногеноксидазы ире- ретикулуме, которые играют важную
врдтяетсл и протопорфирин IX. Ген роль в метаболизме лекарств.
фермента расположен на 1-й паре Гем обладает многими биологи-
хромосом (Iq23) и содержит 13 эк- ческими функциями, включая связы-
СОНОВ [James M. ct al., 2000J. Послед- вание кислорода, участвует в процес-
ним ферментом па пути синтеза гема сах метаболизма кислорода, передаче
является феррохелатаза, ген которой электронов и др. Он играет централь-
неположен на 18-й паре хромосом ную роль в регуляции активации
(18q21.3). Этот фермент находится многих белков, в том числе гем
i л к же в митохондриях клетки и регулирует свой собственный синтез
способствует включению железа в [Ноп Т. et al., 1997]. Контрольный
Про гопорфирин IX с образованием механизм биосинтеза гема локализу-
IСМЛ. ется на первой ферментативной сту-
It эритроидных клетках большая пени образования АЛК. Фермент
чи II, железе выделяется из эндосо- АЛК-С имеет низкую активность по
MI.I, проникает сквозь внутреннюю и сравнению с активностями фермен-
внешнюю мембрану митохондрий. тов последующих ступеней образова-
Чтобы ДОСТИЧЬ феррохелатазы, кото- ния гема.
р!Я способствует включению железа В здоровом организме синтез ге-
tt протопорфирин IX. Движение эн- ма регулируется так, чтобы обеспе-
МЫ и и и не ни предпосылкой для чить гемом в адекватном количестве
liiiytpitKiieni'iimiо перемещения желе- для синтеза различных гемопротеи-
ш Him синтеза гема в митохондрии нов.
|/1ши)! Л S cl al., 1997]. После этого Эта регуляция происходит по
и'м по к иле ti митохондрии и соединя- типу механизма обратной связи пу-
ется « глобином, образуя гемоглобин. тем воздействия конечного продукта
ОЛрпювавшийся гем утилизируется (гема) на активность синтетазы АЛК.
|Н1 i iH'iin.iMii I емо протеи нами. После По-видимому, ингибиция активности
мри. iii'iiiiiiriniii чс\ ырех глобиповых АЛК-С является главным контроли-
t yOi.cyiniiHii ибричуегся гемоглобин. Гем рующим механизмом. Высказывается
одинаков для всех видов гемоглобина, мнение, что при избытке гема по-
и ра шпчпм в свойствах l i b связаны следний соединяется с белком, назы-
голько о различиями глобиновой части. ваемым «апорепрессор», синтез ко-
I ем крайне неустойчив, легко превра- торого находится под контролем
щвстся в гематин с окисление Fe 2 + в регуляторного гена. Это комплексное
1ч*1' н присоединением к последней соединение — «гем — апорепрессор»
группе ОН ; он также легко превра- действует как корепрессор, и апоре-
iiinnni в гемип, который вместо группы прессор еще называют репрессором.
()11 содержит хлор. Последний действует на оперативный
It печени, в гепатоцитах гем ген, вследствие чего угнетается транс-
vi ИЛИЭИруется для образования ци- крипция структурного гена, ответст-
ГОХрОЬИ р45(), который относится к венного за синтез мессенджера РНК,

110
который контролирует синтез ЛЛК-С бирования АЛК-С, так что контроль
и рибосоме. AJ1K-C осуществляется за счет «сво-
Таким образом, избыток гема бодного пула гема», находящегося
Приводит к укорочению полупериода внутри цитозоля. Таким образом,
существования тРНК АЛК-С, умень- ценность и активность фермента
шению содержания АЛК-С, предот- АЛК-С зависит от внутриклеточного
вращению транслокации цитозоль- содержания гема и от потребности
Ш.1Ч предшественников АЛК-С в ми- в геме для метаболических процессов.
гохондрии, и итогом этого является В нормальных условиях большин-
снижение синтеза гема [Hon T. et ai., ство печеночного гема используется
1997]. для синтеза цитохромов р450, группы
При повышенной утилизации те- микросомальных ферментов, функци-
ми происходит угнетение оператив- ей которых является окончательное
iiiii о гена, вследствие чего происхо- окисление в процессе метаболизма
ди i увеличение синтеза АЛК-С с лекарственных веществ. Гем увели-
образованием большого количества чивает экспрессию гена оксигеназы 1,
предшественников гема для удовле- содержание гуанилмонофосфата че-
РВорения потребностей организма в рез растворимую гуанилатциклазу,
Геме [Orkin F., 1996]. По данным транскрипцию гена цитохрома р450
I lltin и соавт. (1997), в регуляции [Ноп Т. et al., 1997].
синтеза гема в эритроидных клетках «Свободный пул гема» рассмат-
участвуют 15 клонов, 2 из которых ривается как истощающийся пул при
ниляются негативными регулято- состояниях, которые вызывают ин-
рами. дукцию увеличения синтеза цитохро-
Регуляция метаболизма печеноч- мов р450, особенно при состояниях,
ного гема также находится на уровне приводящих к быстрому снижению
фермента АЛК-С. В норме печеноч- цитохромов р450. Так, различные
ные клетки содержат фермент в порфириногенные липофилическис
небольшом количестве, и его период химические вещества и лекарства
полужизни короткий. Однако актив- (инсектициды, барбитураты, эндоген-
ность фермента может быстро уве- ные и экзогенные стероиды, антибио-
ничиться во много раз под воздей- тики, небарбитуровые гипнотические
i гнием различных лекарственных и вещества и др.) вызывают снижение
химических веществ, которые обла- содержания цитохромов р450 и ин-
дают потенцией вызывать порфирии дуцируют повышение содержания
(см. раздел «Наследственные и при- апопротеииов цитохромов р450, при-
обретенвые порфирии»). Экспери- водя к истощению пула «регулятор-
ментальные и клинические наблюде- ного» гема, вследствие чего увеличи-
ния показали, что главным факто- вается синтез АЛК-С. Напротив, па-
ром, контролирующим уровень ак- рентеральное введение гема живот-
гивности печеночной АЛК-С, являет- ным и больным людям с порфирией
ся небольшой, но критический пул может приводить к сохранению или
«регуляторного» гема, находящегося же избытку пула «регуляторного»
I гйпатоцитах, и этот контроль осу- гема и по механизму обратной связи
ществляется по типу обратной связи. снижать активность АЛК-С. Меха-
Концентрация гема, необходимая для низм, с помощью которого пул «ре-
угнетения продукции АЛК-С, низкая — гуляторного» гема уменьшает актив-
К) } моль/кг, тогда как для подавления ность АЛК-С, включает в себя уве-
активности — 10 5 моль/кг. Но кон- личение содержания деградации
центрация гема, образованного внутри тРНК АЛК-С и блокаду проникно-
митохондрий, недостаточна для ипги- вения молекул фермента в митохоп-

111
ФИ иичнчин n oih

Дшруд.-щим
mPHK

mPHK
ЛИК синтетазы

Митохондриальные
Цитозольнэя цитохромы
нриАЛК синтетаза

Аро Р450

Митохондриальная
АЛК-синтетаза

Цитохром Р450

Субстраты
порфириногенного
суицида.
Водорода
Г.укцимил пероксид.
'• HIM Л Перекисно-
водородные
липиды
Iниции

Holo-триптованпирролаза Биливердин 1Ха Продукты


+ железо распада
+ углерода монооксид гема

i «,м„ l I'll МЯЦИЯ МЕТАБОЛИЗМА ПЕЧЕНОЧНОГО ГЕМА


(по H-Bonkovsky, 1999).

Арии. Экспериментально было пока- чиваться в клетках под влиянием


ипн), что уменьшение содержания повышенного содержания гема, ко-
mPHK АЛ К-С происходи!' по меха- торое может быть обусловлено либо
мншу обратной связи, изменяется экзогенным введением гема, либо
уровнь транскрипции гена АЛК-С. индукцией активности АЛК-С, при-
(Содержание пула «регуляторного» водящей к образованию всех проме-
i i'Mii также зависит от активности жуточных продуктов образования ге-
гемоксигеназы. Этот фермент расще- ма и в конечном счете к увеличению
пи >нч i см внутри гемсодержащих гема.
клеток. Активность гемоксигеназы В норме образование АЛК при-
может быстро и значительно увели- водит к увеличению активности ПБГ-

112
I СПОСОбетвуЯ Продолжении) эффвК- ТИП гемоглобина. У человека с нор-
гивного пути биосинтеза гема. Ряд мальным по генам гемоглобина ге-
кндогенных и экзогенных факторов номом встречаются 4 типа полипеп-
могут модифицировать индукцию тидных цепей глобина: а, р, Y и 5,
ЛИК С. Так, увеличении потребления отличающихся по составу и иногда
vi неводов или белка может бдокиро- по количеству аминокислот. Среди
ил 1 к индукцию синтеза АЛК-С; ме- у-цепи определяется два нормальных
А G
•..нш |м действия глюкозы не извес- варианта-—°у- и у- цепи. При y в
1Г11. положении 136 находится глицин, а
А
Хелатное железо (цитратное же- при у — аланин. У эмбрионов су-
1830, декстран) снижает содержание ществуют е- и i^-глобиновые цепи.
№№, приводя ко вторичному увели- Предполагают, что е-цепи относятся
чению его синтеза. Различные группы к группе не а-цепей, а ^-цепи имеют
i героидов, включая гонадные мета- большое сходство с а-цепью, поэто-
пи ш гы и АКТГ, промежуточные му ^-цепи рассматривают как эм-
продукты деградации желчных ки- бриональный а-глобин. На рис. 3
пим могут индуцировать синтез представлен синтез полипептидных
ЛЛК-С. У адреналэктомированных цепей в различные периоды развития
животных гидрокортизон индуциру- эмбриона, плода и доношенного ре-
Л синтез АЛК-С. бенка.
Па схеме 3 представлена схема а-Цепь состоит из 141 аминокис-
регуляции метаболизма печеночного лотного остатка, а Р-, у- и 5-цепи
рвла. Поскольку при ряде заболева- из 146. сх- и р-цепи идентичны в 65
ний может нарушаться синтез пор- позициях и различны в 76. у- и 5-цепи
фиринового обмена, то в идентичны по 107 положениям ами-
приложениях 14 и 15 представлены нокислотных остатков, но различны
нормальные показатели. в 39 позициях.
Как было отмечено, одна нз
неиспользованных координационных
БИОСИНТЕЗ ГЛОБИНА связей железа в теме соединяется с
И ЕГО РЕГУЛЯЦИЯ глобином, и результатом этого явля-
ется образование гемоглобина. Рент-
На разных этапах развития эм- геноструктурный анализ показал, что
бриона, плода, ребенка и взрослого в гемоглобине а- и р-цепи свернуты
человека обнаруживаются различные в спиральные сегменты различной
типы гемоглобинов. Все НЬ являются длины: в а-цепях имются 7 спиралей,
i L-геротетрамерами и содержат два в р-цепях—8. Молекула НЬ пред-
гипа глобиновых цепей: а (а или Q ставляет тстрамер, состоящий из 4
it Р (Е, 5, Gy, A7 или р) [Russel J. et полипептидных цепей. В различные
al., 1997]. Р-Подобные гены глобина периоды развития человека отмеча-
G A
у человека (е, y, y и р) репресси- ются различные виды НЬ, и ЭТО
рованы в эритроидных клетках, вы- обусловлено различиями в глобинах,
деленных из желточного мешка (е), активность синтеза которых изменя-
печени плода (Gy, AY) И КОСТНОГО ется в онтогенезе (см. рис. 3).
мозга (р) [Sabatino D. et al, 1998]. Синтез глобиновых цепей нахо-
Синтез НЬ происходит в пронормо- дится под управлением генов. Каж-
цитах — базофильных нормоцитах. дый ген глобина состоит из трех
В онтогенезе у человека проду- эксонов, разделенных двумя нитро-
цируются несколько типов цепей нами. Эксон 2 контролирует связы-
глобина, которые при различных вание гема и образование а — Р-ди-
сочетаниях между собой определяют мера, а эксон 3 контролирует многие

ИЗ
50-

С2,2
HbGower I

HbGower

3. Экспрессия цепочек глобина у людей в новорожденного ребенка отношение


онтогенезе (по данным E.Girodon и соавт., Оу к Ау составляет 7 : 3, а к 6 мес —
1995). 2 : 3 [Honig G. et al., 1986; Stama-
toyannopoulas G. et al., 1994]. Для p-
аминокислоты, вовлеченные во взаи- и 5-цепей имеется один локус для
модействие глобиновых субъединиц, каждой из этих двух глобинов.
необходимых для кооперации тетра- В отношении генов эмбриональ-
мерв lib it связывании к и с л о р о д а . ных глобиновых цепей уже на ранних
I сны, кодирующие синтез сс-цепи стадиях эмбриогенеза отмечается экс-
НАХОДЯТСЯ на хромосомах 16-й пары прессия г- и ^-глобиновых генов.
(I6pj ).2 pier), а-подобные глобины H.Kamuzora и соавт. (1974) считают,
Н1ХОДЯТСЯ< хиод контролем трех генов что £-гены являются генами прими-
< х] — 3 ' ) . Экспрессия тивных а-цепей. у-Глобиновые гены
2
i С
01 Г0НО1 веб л ю дается у 5-недельного наиболее активно функционируют у
шбрион! и сохраняется после рож- плода, а после рождения ребенка они
in па протяжении всей жизни постепенно инактивируются. В то же
ЧМОМК1 Гены для | К у- и 8-цепей время активность генов р- и 5-цепей
рМПОЛОЖвНЫ вблизи д р у г от д р у г а в антенатальном периоде минималь-
пи хромосомах 11-й пары (11 p 15.5). на и резко увеличивается после ро-
\\ Подобные i побины контролируют- ждения ребенка.
ся иям.и) генами (5' — е G y — AY — Экспрессия генов глобина в эрит-
б \\ Л [Lena-Russo D. et al., роидных клетках у человека является
IWS|. у-Цепи находятся под контро- высоко регулируемым процессом, ко-
лем днух генов «гамма G» и «гам- торый обеспечивается как транскрип-
ма Л1). II оследние несут код для ционным, так поеттранскрипциоп-
у глобина, отличительной чертой ко- иым контролем. Этот контроль обес-
торых
ь
является наличие глицина (в печивает высокий уровень эритроид-
у) и аланина (в Ау) в позиции 136 но-клеточной специфичности и кле-
HI у-цепи. 13 свою очередь, в лу-цепи точно-специфическую стадию экс-
и ПОЗИЦИИ 75 аминокислотный оста- прессии генов а- и (3-подобных гло-
ток может быть замещен изолейци- бинов: £- и 8-глобина в течение
иом ( л у ! ) или треонином *-(Лут)- У раннего эмбриогенеза и а- и [i-гло-

114
;>!>И11'ОЦИ!Ы

i:i в постнатальном периоде. Спе- ТОН обнаружен в полипогепшых Г»


цифичность экспрессии индивидуаль- мопоэтических клетках-предшво! ввм
ных генов отражает взаимодействие пицах, в мегакариоцитарпых и туч»
-1| активных регуляторных элемен- ных клетках. NF-E2 необходим дли
ГО1 I ДНК с трансактивными фак- повышения активности кластер! \\
Горвми. К числу эритроидных фак- гена LCR (p-globin gene locus control
горов т р а н с к р и п ц и и относятся region). Он является важным актива-
ОАТА-1, NF-E2 (Nuclear Factor — тором в синтезе гемоглобина и в
I i vlhroid 2, ядерный эритроидный обмене железа [Andrews N. et ;il.,
Лектор 2) и SCFL (Stem Cell Factor 1993; Gong Q. et al., 1993].
I tukemia, фактор стволовой клетки Ген SCFL ответствен за образо-
Ивйкемии), E K L F , Nrf-1, Nrf-2, LCR- вание белка, который является акти-
I I, AP-1, Spl [Moi P. et al., 1994; ватором транскрипции. Он экспрсс-
Sim C.-W. et al., 1994]. Посттранс- сирован на высоком уровне в эрят-
крипционный контроль стабильно- роидных, мегакариоцитарных и туч-
I i ii mPHK глобина обеспечивается ных клетках [Green A. ct al., 1992],
Кругам уровнем, чем при котором Индукция созревания клеток зрИТрО-
экспрессия гена глобина регулирует- идного ряда приводит к увеличению
i н Если у большинства mPHK период экспрессии SCFL в 5—10 раз, ;i при
•ГО деградации (T'AS) колеблется от блокировании синтеза или активно
нескольких минут до нескольких ча- сти SCFL или же мутации бвЛК1
ши, то TV2S mPHK глобина состав- происходит ингибированис созрева
ЛЯет 16—48 ч [Kabnick К. et al., 1988; ния эритроидных клеток [Apian P, d
Hargrove J. et al., 1989]. Эта значи- al., 1992].
Гвлькая стабильность позволяет бо- Каждый ген глобина имеет регу
4w 95% mPHK глобина аккумулиро- ляторньге элементы (прОМОТеры), ко-
ii.i i ься в терминально-дифференциро- торые модулируют тканевоспецифи
ii.iиных эритроидных клетках-пред- ческую экпрессию белка. Эти элемен-
шественницах [Russel E. et al., 1996]. ты, взаимодействуя с LCR, контро-
GATA-1 является транскрипцион- лируют индивидуальную экспрессию
ным (фактором, одна или несколько гена глобина. Каждый pei уляторпын
копий которого локализованы в ре- элемент включает в себя множествен-
i vn я торных элементах всех генов, ные эритроидно-специфические уча-
репрессированных в эритроидных стки и отмечается экспрессия транс-
клетках. Это свидетельствует о важ- крипционных факторов.
Ности GATA-1 для развития и функ- Тканевоспецифическая эКСПрвО
1
r
ции )p. GATA-1 необходим для сия е-гена глобина обусловлена чем,
дифференциации клеток эритроидно- что промотер взаимодействует с
ю ряда. Ген расположен на Х-хро- эритроидно специфическими белками
мосоме [Orkin S., 1992]. GATA-1 (GATA-1, NF-E2). В эритроидных
гакже экспрессирован на полипотент- клетках эмбриона эта экспрессия ог-
и i.i х гем о поэтических клетках-пред- раничена из-за действия ИНГИбитОрО!
Швственицах, тучных, мегакариоци- [Gong Q. et al., 1993]. При увеличении
гарных и эндотелиальных клетках уровня GATA-1 в эмбрионам мл
[Sposi N. et al., 1992; Mouton M.-A. эритроидных клетках наблюдается
Di al., 1993]. снижение синтеза е-глобинв и шРНК
NF-E2 это второй ДНК-связы- GATA-2. Увеличение в 2 3 pull
И.МОМ1ИЙ белок, играющий важную содержания mPHK в клетках СО Про
рощ, и экспрессии гена глобина. вождается увеличением в 1,5 ptM
NII'IIK для компонента NF-E2 с содержании е~глобнна и В 2,(> pain
молекулярной массой 45 килодалъ Y-ГЛОбииа [ I k o n o m i IV cl a l . , \ФЩ. V

115
ФИШ U Ю1 ИИ :>1-ИПЧН1ч,1.1Л

человек! гом (^-подобного глобина (г) Ma рОЗИЫХ ЭТбПаК развития чело-


жч-прессироиан на прими I и иных века (эмбрион плод ребенок —
)|ш I роидных клетках желточного взрослый) превалирую! различные
мешка уже • течение первых недель типы гемоглобинов. Каким образом
рачшпия эмбриона, и экспрессия гена происходит молекулярный контроль
г-] лобипа опосредуется многими по- переключения выработки определен-
ложи гельным и и негативными регу- ного типа глобина?
ля горными элементами; к их числу Исследованиями B.Peters и соавт.
относятся PRE II (Positive Regularory (1993) было показано, что у мышей
Element), PRE II —связанный фактор деления угнетающего элемента в ре-
(PRE II BF), SSRPI и др. [Baron M. гионе е-промотера приводит к тому,
el al,, 1998]. что в дефинитивных эритроидных
Существуют ряд промотеров, уча- клетках наблюдается экспрессия е-
ствующих в регуляции генов у-гло- глобина. Это указывает на то, что в
бина. Известны до 15 ДНК-связы- процессе развития эмбриона ген е-
ВВЮЩИХ белков (SSP, CP I, SP1, глобина контролируется ингибитор-
GATA-1, Oct-1, NF-E3 и др.), кото- ными элементами. Было установлено
рис т а имодействуют с геном про- также, что существует автономный
мо i ера у-глобина [Mantovani R. et контроль гена ^-глобина. Этот ген
al.. 1989]. На функцию промотера экспрессирован в эритробластах жел-
непосредственно или косвенно влия- точного мешка, но он не определя-
ют множественные механизмы путем ется в дефинитивных эритроидных
•SB и мо действия регуляторных эле- клетках фетальной печени и костного
нентов с LCR и, возможно, через мозга взрослых людей [Pondel M. et
ингибиторы. В дистальном участке al., 1990]. В промотере гена ^-глобина
iciia y-upoMOTcpa обнаружен участок отсутствует супрессор, и это указы-
т ч ;i i it ш ю г о р е г у л я т о р а — Y Y 1 вает на то, что автономный контроль
|Piiik К. el al., 1991; Stamatoyanno- гена ^-глобина отличается от тако-
pouloi ( i . et al., 1994]. вого гена е-глобина [Sabath D. et al.,
I [ромотер [5-глобина содержит 1994].
iiii'Mi'iiiI.I, которые взаимодействуют В 1988 г. O.Choi и соавт. впервые
i I i К ii, тем самым, способствуют выдвинули гипотетическую модель
>ксиреесии гена и созреванию эрит- переключения различных типов гло-
н HI in I.I x кие i ок-предшественниц бинов в онтогенезе, которая впослед-
Antonlon M. el al., 1990]. Известны ствии подтверждена исследованиями
i>ч i активаторов транскрипции, ко- C.Kim и соавт. (1992). Было установ-
горые (пособствуют экспрессии (3- лено, что в эмбриональной стадии
i пинии.i И ИХ ЧИСЛО иходят G A T A - 1 , LCR (Locus Control Region, контро-
C p l , S p l , ( ' A ( ' I ) и д р . [ M a g r a m J. et лирующий локус участка) взаимодей-
•1,, 1 9 8 9 ; H a r t z o g Ci. et a l . , 1993]. ствует с геном е-глобина; у плода
I t-ii L-глобина имеет только про- ген е-глобина угнетен G А
и LCR взаи-
мотер. Его транскрипционными ак- модействует с y- и у-генами. У
ги автор в ми являются GATA-1, Spl и взрослых у-гены угнетены и LCR
Ср2. I 'лавная роль в фупкциониро- узнает (3-ген.
11.11М1П н регуляции промотера £-гена Общепринятые модели переклю-
принадлежит (iATA-1 [Yu С. et al., чения гемоглобина предполагают,
1990]. что промотеры гена глобина конку-
IJ wwc промотера а-глобина также рируют за эритроидно-специфиче-
имеются участки для связывания с ские факторы транскрипции и(или)
активаторами транскрипции (GATA-1, LCR, чтобы активировать экспрес-
Cpl, Ср2 и др.) [Lim L. et al., 1992]. сию определенного гена глобина па

116
.Ч'ИП'ПЦИП.!

К i ж до й стадии развития [Sub at In о I). лых происходят из одном линейной


и a ! , 1998], Фрагмент 5/6bp промо стволовой клетки, то ПОЭТОМ^ В
Ггрл [i-спск грина чело иска увеличи- клетках "эритроидных колоний про-
iiiiri жепрессию ml'HK ^глобинаА в должает определяться HbF в течение
фктроидных клетках. Промотер у- периода переключения синтеза раз-
i яобина угнетает экспрессию тРНК личных типов глобиновых цепей.
\\ i побииа в желточном мешке. Было G.Stamatoyannopoulos и соавт. (1994)
установлено, что для полного угне- отмечают, что содержание HbF в
Г*НИЯ тРНК [5-глобина в эритроид- БОЕ-Э, образованных из гемопоэти-
in.i\ клетках желточного мешка у ческих клеток-предшественниц пупо-
грансгенных мышей необходимы все винной крови, имеет промежуточное
гри нромотера генов (е,G7,AY) [Dc содержание HbF в БОЕ-Э, образован-
Babatino D. et al., 1999]. Координи- ных из гемопоэтических клеток-пред-
рованное переключение а- и fi-no- шественниц плода и взрослых людей.
цобных генов приводит к экспрессии В экспрессии гена р-глобина участ-
и.i высоком уровне Hb Gower (£2е2), вует Kruppel-подобный фактор (Eryt-
МЫ' (а2у2) и НЬА (а2 fi2) в течение hroid Kruppel-like Factor, EKLF),
'М1Ц1ионального, фетального и взрос- который является одним ич ключевых
ши о развития соответственно [Не Z. факторов, участвующих в процессе
п al., 2001]. переключения гена глобина фекпм.
In vitro колонии, образованные ного типа на взрослый [Oghill Б. II
И1 гемопоэтических к лет о к-пред шест- al., 2001]. В регуляции EKLF учам
пгимин фетальной печени, костного вует транскрипционный фа к гор
мозга новорож