DETERMINACIÓN DEL CONTENIDO DE NITRÓGENO POR EL MÉTODO DE MICROKJELDAHL

DETERMINACIÓN DEL CONTENIDO DE PROTEÍNA EN UN ALIMENTO

Valentina Rodríguez1, Karen Montoya2 y Angie Santana3

Laboratorio de química analítica, Departamento de Química, Universidad del Valle, Calle 13 # 100-00, Cali.
1
stephania.rodriguez@correounivalle,edu,co,2montoya.karen@correounivalle.edu.co,
3
angie.santana@correounivalle.edu.co
18 de Abril 2018

Resumen. En la práctica se determinó el porcentaje de nitrógeno y proteína en un alimento (leche en polvo) por el
método de microKjeldahl; para ello, se tomó una muestra, la cual se digesto en medio ácido al caliente, se dejó enfriar y
se le agregó una solución alcalina, formando amoniaco. El amoniaco formado se destiló hacia una solución de ácido
bórico con indicador mixto, formándose el ion borato. Seguidamente, se tituló con ácido clorhídrico estandarizado,
obteniendo un porcentaje de nitrógeno de 1,95% y de proteína de 12,4% con un porcentaje de error de 24,3%.

Palabras clave: nitrógeno, proteína, microKjeldahl.

1. METODOLOGÍA
2.1 Estandarización de la solución de HCl 0.02M.
a. Se pesó 0,0369 g de muestra en un matraz
microKjeldahl seco. Se le añadió 0,0752 g de CuSO 4, Para conocer la molaridad del HCl se tuvo en cuenta la
0,0251 g de MgO y 2,0016 g de K2SO4. siguiente ecuación química:
b. Se agregó 2,5 mL de H2SO4 concentrado, se montó al
digestor y se calentó gradualmente hasta que el 2 HCl+ Na2 CO3 → 2 NaCl+ H 2 CO3
líquido tomó un color verde esmeralda. [Ecu. 1]
c. Se dejó enfriar, se trasvasó la muestra digestada al
equipo de microdestilación y se hicieron lavados con Además, se tuvo en cuenta que se usaron 0,0101 g de
9 mL de agua destilada. Después, se sumergió la Na2CO3 y se requirió 12,6 mL de HCl para titular la
manguera adaptada al extremo del condensador a un solución de carbonato de sodio.
erlenmeyer de 125 mL con 10 mL de H 3BO3 4% y 5
gotas de indicador mixto. 0,0101 g Na2 CO 3
d. Se adicionó 15 mL de solución salina (5,0200 g de ∗1 mol Na2 CO 3
NaOH + 0,9900 g de tiosulfato de sodio en 20 mL), 0,0126 L
∗2mol HCl
se tapó inmediatamente y se inició la destilación 105,98 g Na2 CO 3
calentando con plancha hasta el cambio de viraje del 1 mol Na2 CO 3
indicador (azul).
e. Se retiró el erlenmeyer, se lavó el extremo del ¿ 0,0151 M HCl
condensador con agua destilada y se procedió a titular
el ion dihidrógenoborato formado con HCl 0,02 M 2.2 Porcentaje de nitrógeno y proteína en la muestra.
estandarizado.
Para conocer el porcentaje de nitrógeno en la muestra se
2. DATOS Y RESULTADOS tuvo en cuenta las siguientes ecuaciones:

Tabla 1. Peso de los reactivos utilizados. C a H b N c + H 2 SO 4 → a CO2 +b H 2 O+ c NH 4 H SO 4

DATO PESO (g) [Ecu. 2]
Muestra 0,0369
CuSO4.5H2O 0,0752 c NH 4 H SO 4 + NaOH → c NH 3 + H 2 O+ NaH SO4
MgO 0,0251 [Ecu. 3]
K2SO4 2,0016
NaOH 5,0200 −¿¿

NH 3+ H 3 BO3 → NH 4+¿+ H 2 BO 3 ¿
Na2S2O3 0,9900
Na2CO3 0,0101 [Ecu. 4]
H 2 BO 3−¿+HCl → H BO3+ NH 4 Cl¿
3
(10)(26,0 g)
Masateórica N = =0,408 g N
[Ecu. 5] 100∗6,38

Así, se realizó el siguiente calculó para conocer la masa

g Nitrógeno teórica de nitrógeno en la muestra analizada.
%N = ∗100
g muestra
[Ecu. 6] muestra∗0,408 g N
0,0369 g =5,78 x 10−4 g N
26,0 g porción
Teniendo en cuenta las anteriores ecuaciones y que se
necesitó 3,4 mL de HCl se calculó el porcentaje de Para calcular el porcentaje de error se utilizó la siguiente
nitrógeno: ecuación:

HCl∗0,0151mol HCl H 2 BO 3−¿ |Valor experimental −valor real|

3,4 mL ∗1 mol ¿ %E r= x 100 %
1000mL sln 1 mol HCl valor real
+¿
[Ecu. 8]
NH 4
−¿∗1 mol −¿ ¿¿
1mol H2 BO3 ¿
¿ 5,134 x 10−5 mol H 2 BO3 A partir de la ecuación 8 se obtuvo el siguiente
resultado:
+¿∗1 mol N
+¿ ¿
NH 4 ∗14,0 g N
1 mol
1 mol N
¿ Tabla 3. Masa teórica y experimental de N en la muestra
¿ 5,13 x 10−5 mol NH 4 y porcentaje de error.
Masa teórica de Masa de N
Porcentaje
¿ 7,1876 x 10−4 g N N en la muestra encontrada en la
de Error (%)
(g) muestra (g)
7,1876 x 10−4 g N 5,78x10-4 7,19x10-4 24,3%
%N = ∗100=1,95%
0,0369 g muestra
3. DISCUSION DE RESULTADOS
Para calcular el porcentaje de proteína se utilizó el El método más común para determinar nitrógeno
porcentaje de nitrógeno y un factor de 6,38 orgánico es el método de Kjeldahl, el cual está basado en
correspondiente a productos lácteos, que en este caso la una valoración de neutralización. El método de Kjeldahl,
muestra fue leche en polvo. o alguna de sus modificaciones, es el procedimiento
estándar para determinar el contenido de proteínas en
%Protreína=1,95∗6,38=12,4 % granos, carnes y materiales biológicos [2].

Tabla 2. Porcentaje de nitrógeno y proteína en la Es importante tener en cuenta a la hora de realizar los
muestra. cálculos que la mayoría de las proteínas contienen
DATO PORCENTAJE (%) aproximadamente el mismo porcentaje de nitrógeno; por
Nitrógeno 1,95 lo tanto, la multiplicación de este porcentaje por un
Proteína 12,4 factor adecuado proporciona el porcentaje de proteína en
una muestra. En esta práctica fue necesario el factor de
Para calcular el porcentaje de error, primero se calculó la productos lácteos, 6.38, para determinar el porcentaje de
masa teórica de nitrógeno en la muestra, para ello, se proteína en leche en polvo [2]. El método de Kjeldahl
tuvo en cuenta que el contenido de nitrógeno en la consiste en tres etapas fundamentales:
muestra analizada se encuentra expresado en porcentaje 1. Digestión
de proteína por porción (26 g) y se aplicó las siguientes En esta etapa se realiza la descomposición de la proteína
ecuaciones: con ácido sulfúrico; este reactivo oxida el carbono
(carbonización) y el hidrógeno en la muestra, en CO 2 y
H2O [2]. Antes de poner a calentar la muestra, es
(% proteína)(masa porción)
Masateórica N = necesario agregar una sal neutra, como el sulfato de
100∗Factor correspondiente potasio (K2SO4), para incrementar el punto de ebullición
[Ecu. 7] de la disolución de H 2 SO4 con el fin de aumentar la
temperatura a la que ocurre la descomposición de la
materia orgánica. Además, se agregó un agente
catalizador, (CuSO4+ MgO), para incrementar la ruptura
de los enlaces moleculares; todo esto con la finalidad de
reducir el tiempo de digestión [3]. Es de suprema
importancia tener cuidado en la cantidad añadida de
K2SO4 porque un exceso puede producir una
descomposición por calor y provocar la pérdida de
nitrógeno. De igual manera, el exceso de catalizador
(CuSO4+ MgO) puede producir pérdidas de nitrógeno en
la muestra [4]. Después de haber calentado lo suficiente,
y se haya llevado a cabo completamente la reacción, la
solución en el matraz de microKjeldahl se torna de un
color verde esmeralda (debido a la sal de cobre) y esto
indica la terminación de la etapa de digestión.
2. Destilación
Después de haber dejado enfriar la solución sometida a
la digestión, se preparó el montaje de destilación el cual
no fue el idóneo ya que era necesario un aparato
destilador Kjeldahl y no un sistema de destilación
común. Luego de haber conectado al extremo del
condensador la manguera que irá sumergida en un
erlenmeyer con ácido bórico al 4% e indicador mixto, se
agrega la solución digestada al matraz de destilación y
rápidamente se agrega la solución alcalina preparada
(NaOH + Na2S2O3) para dar comienzo a la destilación.
Esto se hace con el propósito de convertir el medio
bastante básico para liberar el ion amonio presente en la
solución de sulfato de amonio y convertirlo en amoniaco
(véase la Ecuación 3), el cual deberá recogerse por
burbujeo en la solución de ácido bórico dando como
productos el ion amonio y el ion dihidrógenoborato
(véase la Ecuación 4) [3].
Al no disponer del material sofisticado para un buen
resultado, es recomendable tener bastante cuidado al
llevar a cabo esta etapa porque se puede presentar
situaciones que dificulten la obtención del nitrógeno
orgánico en su totalidad. Por ejemplo, pérdida de
amoníaco por fugas en el circuito de destilación y por
refrigeración insuficiente en el condensador [4]. Por
último, se debe prestar atención de que no haya arrastre
o contaminación del ácido bórico por la base fuerte
(NaOH) ya que se estaría agregando una base fuerte
extra de la aportada por el amoniaco [4]; de igual forma,
por el cambio de las condiciones de presión puede que la
solución de ácido bórico y amoniaco sean succionados y
haya pérdida de nitrógeno. Se concluye que todos estos
errores experimentales se pueden disminuir usando el
equipo adecuado para este análisis.
3. Titulación
El exceso de ion dihidrógenoborato, que queda en la
solución después de que se ha absorbido todo el
amoniaco en forma de ion amonio, se titula con ácido
clorhídrico hasta que la solución se torné de un color
rojo claro. La valoración permite calcular las moles de
ácido clorhídrico que son necesarias para reaccionar con
el ion dihidrógenoborato y con relaciones
estequiométricas hallar la cantidad de nitrógeno en la
solución presente como ion amonio. En esta etapa es
indispensable conocer con buena exactitud la
concentración de la solución de ácido clorhídrico porque
a partir de este valor se va a calcular los gramos de N
presente en la solución. Es probable que este error en la
preparación de la solución de ácido clorhídrico, ya sea
por la mala percepción del viraje de neutralización,
añadiendo más volumen del requerido, se haya
propagado en los cálculos y aporte en el porcentaje de
error calculado (véase la Tabla 3).
Para terminar, el método de Kjeldahl determina la
materia nitrogenada total, que incluye tanto las no
proteínas como las proteínas verdaderas. Esto quiere
decir que el resultado del análisis es una buena
aproximación del contenido de proteína total del
alimento ya que el nitrógeno también proviene de
componentes no proteicos [4]. Se puede observar en la
Tabla 2 que el porcentaje de proteína hallado
experimentalmente no concuerda con el porcentaje de
nitrógeno en el envoltorio de la leche en polvo, 10%.
Como ya se explicó anteriormente, es probable que en la
determinación de nitrógeno se haya cuantificado
nitrógeno de otras especies no proteicas tales como la
creatina y la urea. Sin embargo, el aporte de estas
especies es muy pequeño comparado con el aporte de N
de la proteína. El porcentaje de error se le atribuye a que
el método de Kjeldahl no es selectivo al momento de
cuantificar el nitrógeno orgánico (proteína), sino que da
un resultado global de todo el nitrógeno en la leche en
polvo que interfiere en nuestro análisis a la hora de
determinar únicamente el nitrógeno proveniente de la
proteína (valor nutricional).
4. CONCLUSIONES
 Es importante tener cuidado en la cantidad añadida
de K2SO4 y de catalizador (CuSO4+ MgO) ya que
puede producir pérdidas de nitrógeno en la muestra.
 Para determinar nitrógeno a partir del método de
Kjeldahl es necesario trabajar con el equipo adecuado
ya preestablecido para obtener resultados
significativos. Es posible trabajar con instrumentos
alternos, pero el experimento es más propenso a
errores experimentales y por ende, no se cumple con
el objetivo del análisis.
 El método de Kjeldahl es adecuado para determinar
el contenido de nitrógeno total de los alimentos; sin
embargo, este método no es exclusivo para
determinar sólo el nitrógeno proveniente de la
 proteína y podría variar un poco el porcentaje de [4] Determinación de proteína mediante el método de
proteína respecto al enunciado en la envoltura del Kjeldahl.
producto (alimento) basado en el valor nutricional. De: https://es.slideshare.net/vegabner/determinacion-de-
 Se debe tener cuidado al momento de adicionar la proteinas-mediante-el-metodo-de-kjeldahl-nutricion
solución alcalina a la muestra, ya que una pequeña (revisado 16/04/2018).
traza de solución que pase al condensador y a la
solución de ácido bórico, ocasionaría que la
valoración no se dé adecuadamente. Además, se debe
tapar inmediatamente para evitar pérdidas de
amoniaco.

5. PREGUNTAS
1. La titulación debe de realizarse con HCl y no con
NaOH, porque la especie que se está titulando en la
solución es una base H2BO3- [1], la reacción se pudo
observar en la Ecuación 5.
Se puede explicar también porque el ion
dihidrógenoborato formado es una base
considerablemente fuerte, haciendo la solución
alcalina, por ello la titulación final debe realizarse
con HCl y no con NaOH. [3]

2. La reacción es la siguiente:
−¿¿

NH 3+ HCl → NH +¿+Cl ¿
4
[Ecu. 9]

Para calcular los mL de HCl necesarios se realizó el

siguiente cálculo:

muestra∗8,5 g N
∗1 mol N
100 g muestra
1,50 g
14,0 g N

N∗1 mol NH 3
∗1 mol HCl
−3 1 mol N
¿ 9,11 x 10 mol
1 mol NH 3

HCl∗1000 mL sln
¿ 9,11 x 10−3 mol =91,07 mL sln
0,1 mol HCl

6. BIBLIOGRAFÍA
[1] Ayres. G. H, Análisis Químico Cuantitativo, 2ª
edición, Editorial Ediciones del Catillo, España, 1970.
Pág. 343.
[2] Skoog. D, West. D, Holler. F, Crouch. S,
Fundamentos de Química analítica, 9ª Edición, Editorial
Cengage Learning, México D.F 2015. Pág. 388-389.
[3]. Determinación de proteína por el método de
Kjeldahl.
De: https://es.scribd.com/document/338421817/Metodo-
Kjeldahl (revisado 16/04/2018).