Cromatografía en columna

Partición: fenómeno de reparto entre las dos fases debido a su solubilidad. La solubilidad es una
medida de polaridad y de otro tipo de interacciones moleculares.

Eluyente: se trata de un disolvente que se usa para llevar los componentes de una mezcla a través
de una fase estacionaria.

Eluato: solución o sustancia obtenida por un proceso de elución ( proceso de extracción de una
sustancia absorbida desde un lecho poros o columna de cromatografía con un disolvente
adecuado )

Fase estacionaria: Esta fase permanece fija y consiste en partículas, generalmente sólidas,
pequeñas y con una superficie micro porosa, de forma que presenta un amplio desarrollo
superficial. Puede estar empaquetada en forma de columna o extendida en forma de capa. En
ocasiones es necesario un tratamiento químico de la fase estacionaria para conseguir unas
partículas de tamaño y poro adecuados.

Fase móvil : la fase móvil consiste en una disolución de material que se desea analizar en una
disolvente apropiado que no se absorba a la fase estacionaria, a medida que la fase móvil pasa a
través de la fase estacionaria, se va produciendo una absorción selectiva: aquellos componentes
de la fase móvil que muestren mayor afinidad de absorción con la fase estacionaria quedaran
retenidos en las capas superiores de la columna, y aquellos que muestren menor afinidad se
absorberán más tarde, más abajo en la columna.

El grado de separación o resolución de dos bandas adyacentes se define como la distancia entre
los picos de las bandas (o centros) dividida entre el ancho promedio delas bandas. Si la retención y
el ancho de la banda se miden en unidades de tiempo, la resolución está dada por:

Rs = (t´R,2 - t´R,1)/(0.5·(W2+W1))

Las bandas de soluto se ensanchan gradualmente conforme emigran a través dela columna
cromatografía. La resolución de los solutos individuales en bandas discretas ocurre solamente si
las bandas se ensanchan en menos medida que lo que se separan los máximos de los picos. Los
valores en la línea base de los anchos de bandas adyacentes son casi constantes, esto es, W2 =
W1. Puesto que el ancho de la banda en la línea base es igual a cuatro desviaciones estándar, para
una banda dada la resolución también se puede expresar como:

Rs = (t´R,2 - t´R,1)/(4·σ)

La resolución es una función de tres factores separados: 1) un factor de la selectividad de la

columna que varía con α, 2) una velocidad de migración o factor de capacidad que varía con k' y 3)
un factor de eficiencia que depende de L/H (o el número de platos teóricos). Cada factor puede ser
calculado directamente del cromatograma registrado y se puede ajustar en forma más o menos
independiente. Los primeros dos factores son por esencia termodinámicos, mientras que el
término L/H está principalmente asociado a los aspectos cinéticos de la cromatografía. Los
cambios en α y k' se logran seleccionando diferentes fases estacionarias y móviles o variando la
temperatura y (con menor frecuencia) la presión. Adicionalmente' puede variarse cambiando las
cantidades relativas de las fases móvil y estacionaria dentro de la columna. Cuando se optimiza
una separación en particular el término de k' debe ser considerado en primer lugar. El intervalo
óptimo de valores de k' va de 1 hasta

10. Por desgracia, en una mezcla compleja con muchos componentes, a menudo sólo es posible
optimizar las condiciones de separación para un par de ellos. La única solución efectiva de este
problema cuando se trabaja con muestras complejas reales es la programación de k´. En
cromatografía de gases se puede obtener un valor óptimo de k´ variando la temperatura. En
cromatografía líquida usualmente se suele variar de manera sistemática la composición de la fase
móvil. Si la resolución es todavía un problema se debe buscar un aumento en α o en L/H.

Kd en cromatografía

Según la afinidad de cada componente con el lecho cromatográfico a lo fase móvil, quedarán
retenidos algunos compuestos y otros compuestos se irán con la fase móvil.

Kd: coeficiente de partición, es la afinidad de un compuesto por la fase estacionaria.

Kd = [ fase estacionaria]/[fase móvil]

-si Kd es mayor es + afín con la fase estacionaria

-si Kd es menor, es menos afín con la fase estacionaria y más afín con la fase móvil