КЫРСТЯ
Д. Ф. ЧЕБОТАР
В. И. ДУМИТРАШ
ВОЕННАЯ ТОКСИКОЛОГИЯ
И
ОСНОВЫ МЕДИЦИНСКОЙ ЗАЩИТЫ
КИШИНЭУ 2012
УЧЕБНАЯ ЛИТЕРАТУРА ДЛЯ СТУДЕНТОВ
ГОСУДАРСТВЕННОГО УНИВЕРСИТЕТА
МЕДИЦИНЫ И ФАРМАЦИИ имени
« НИКОЛАЯ ТЕСТЕМИЦАНУ»
Н. М. КЫРСТЯ
Д. Ф. ЧЕБОТАР
В. И. ДУМИТРАШ
ВОЕННАЯ ТОКСИКОЛОГИЯ
И
ОСНОВЫ МЕДИЦИНСКОЙ ЗАЩИТЫ
КИШИНЭУ 2012
2
ВВЕДЕНИЕ
3
уничтожения. Всего за годы войны было применено около 130 тыс. тонн
высокотоксичных соединений примерно 40 наименований. В итоге, 1,3 млн
человек получили поражения, из них более 100 тыс. — погибли. Важно отметить,
что, создав химическое оружие и применив его, воюющие страны оказались
практически не подготовленными к оказанию помощи пораженным. Это
послужило поводом для быстрого формирования уже в ходе войны нового
направления военной медицины — санитарно-химической защиты, призванной
создать систему профилактики и оказания помощи пораженным отравляющими
веществами. У истоков этой работы стояли выдающиеся химики и медики: Н. Д.
Зелинский, Г. В. Хлопин, Н. П. Кравков, В. И. Глинчиков, А. А. Лихачев, И. Ф.
Пожарисский, М. Д. Тушинский, Н. И. Лепорский. В процессе планомерного
изучения токсических свойств боевых отравляющих веществ и медицинских
средств защиты от них сформировалось новое направление науки — военная
токсикология. Большой вклад в становление и развитие военной токсикологии на
первом этапе внесли специалисты различного профиля. Это и организаторы
здравоохранения (Б. К. Леонардов, позже — Б. С. Синтюрин), и клиницисты (Н. Н.
Савицкий), гигиенисты (В. И. Виноградов-Волжинский, И. П. Ласточкин),
патологоанатомы (С. С. Вайль), фармакологи (С. В. Аничков, М. Д. Машковский),
и ветеринары (Н. А. Сошественский) и др.
В годы Второй мировой войны химическое оружие применяли в крайне
ограниченных масштабах. Тем не менее работы по созданию новых образцов ОВ
не прекращались. В фашистской Германии, а позже и других странах, были
созданы чрезвычайно токсичные боевые отравляющие вещества, что вновь
стимулировало военно-токсикологические исследования, к которым подключились
большие коллективы ученых, крупные научно-исследовательские центры нашей
страны. Большой вклад в решение проблем военной токсикологии во второй
половине XX в. внесли видные деятели отечественной медицинской науки: Ю. В.
Другов, С. Н. Голиков, М. Я. Михельсон, Б. Д. Ивановский, А. И. Черкес и многие
другие.
Научным итогом многолетней работы по изучению действия на организм боевых
отравляющих веществ явилось не только создание эффективных медицинских
средств защиты от высокотоксичных соединений, но и существенный вклад в
решение ряда фундаментальных проблем биологии и медицины. Это — учение о
генотоксичности ксенобиотиков; представления о механизмах синаптической
передачи нервного импульса; законы процессов биоэнергетики; явление
метаболизма чужеродных веществ в организме человека и животных и др. На базе
проведенных исследований сложилась система организации медицинской защиты
войск от химического оружия.
4
химического дела», 1933; Лубоцкий М. Н. «Санитарно-химическая защита», 1935 и
др.). По мере накопления научных данных, курс все более трансформировался в
учебную дисциплину — «Военная токсикология». В курсе «Военной
токсикологии» практические вопросы рассматривались на основе изучения
механизмов токсического действия, патогенеза, проявлений поражений ОВ
(«Руководство по токсикологии отравляющих веществ» под ред. Черкеса А. Н.,
1964; «Руководство по токсикологии отравляющих веществ» под ред. Голикова С.
Н., 1972; «Военная токсикология, радиология и медицинская защита» под ред.
Саватеева Н. В., 1987 и др.).
В 1993 г. в Париже была принята «Конвенция о запрещении применения,
разработки и накопления химического оружия». В настоящее время конвенцию
подписали более 150 государств. В соответствии с принятыми документами
предполагается уничтожить запасы химического оружия на планете.
«Конвенция», безусловно, является большим шагом вперед в направлении
избавления человечества от угрозы массового истребления. Тем не менее пока
существует вероятность возникновения военных конфликтов, договорные акты
едва ли смогут полностью устранить возможность массовых поражений людей
химическими веществами. Так, оружие будет находиться в распоряжении
государств еще в течение 10—15, а может быть и более лет, пока не будут
уничтожены все его запасы. Кроме того, отравляющими веществами могут
обладать государства, не присоединившиеся к Конвенции. Не запрещенными
являются разработка и накопление оружия несмертельного действия (полицейские
газы).
Однако основной причиной, побуждающей говорить о сохранении высокого
уровня химической опасности в современном мире, являются беспрецедентный
рост масштабов химического производства в мирных целях, достижения химии в
области органического синтеза, огромное разнообразие синтезированных и вновь
синтезируемых веществ, многие из которых обладают высокой токсичностью. Так,
в Европе ежегодно производится 0,5 млрд смертельных для человека доз мышьяка,
100 млрд доз фосгена, аммиака, синильной кислоты, 10 000 млрд доз хлора. По
данным ВОЗ, широко распространены и находятся в ежедневном обращении более
40 000 химических соединений. Согласно некоторым оценкам, в мире
насчитываются десятки тысяч объектов, на которых производят или используют
токсичные соединения. Это—предприятия нефтеперерабатывающей,
фармацевтической, химической индустрии, заводы по выпуску пестицидов,
продуктов бытовой химии и т. д. Количество изученных на сегодняшней день
физиологически активных веществ (ФАВ), свойства которых позволяют
рассматривать их как потенциальные средства химической агрессии, составляет не
один десяток. Источником таких веществ и информации об их биологической
активности являются исследования в области фармакологии, поиск новых
высокоэффективных пестицидов (инсектицидов, гербицидов, микоцидов,
ратицидов и др.), токсикологические исследования по оценке опасности новых
5
промышленных веществ, появляющихся в ходе внедрения новых технологических
процессов и т. д.
6
Большое значение приобретают работы в области зоотоксикологии и фи-
тотоксикологии в связи с необходимостью защиты окружающей среды от хи-
мических и радиоактивных веществ.
В последние годы возникли совершенно новые разделы токсикологии, та-
кие, например, как космическая токсикология, токсикология природных ядов и
др. Большие задачи возникли перед токсикологией за последние 90 лет в связи
с бурным развитием химического оружия, основанного на изучении от-
равляющих веществ. Действие отравляющих веществ на организм человека и
животных изучает военная токсикология. Развитие военной токсикологии
тесным образом связано с разработкой отравляющих веществ и их примене-
нием в широких масштабах во время Первой мировой войны.
Токсикология ОВ как самостоятельная область науки возникла в России в 1915 г.
— тотчас после первого применения ОВ немецкими войсками против русской
армии. Исследования их действия на организм были начаты у нас известными
русскими клиницистами и гигиенистами (Г.В. Хлопиным, В.И. Глинчиковым, Л.С.
Сахаровым и др.). Эти работы в дальнейшем успешно развивались Н.А.
Сошественским, А.А. Лихачевым, А.Н. Гинсбургом, Б.А. Предтеченским, Ю.В.
Друговым, Р.С. Рыболовлевым, Н.В. Саватеевым, Г.А. Софроновым и др.
Отечественные ученые достигли больших успехов в изучении действия ОВ на
организм, создании средств защиты от них и разработке эффективных способов
лечения пораженных ими людей. Многие ученые России за работы в области
токсикологии удостоены Государственных премий (А.Н. Гинсбург, Ю.В. Другов,
И.Л. Кнунянц, С.Н. Голиков, Р.С. Рыболовлев, Г.А. Софронов и др.).
7
(циклозарин) имелось в запасах химического оружия Ирака и было
уничтожено в марте 1991 г. в районе Эль-Хамассия подразделениями
вооруженных сил США. Последние годы XX в. ознаменовались появлением в
арсенале химического оружия новых групп ОВ — таких как ОВ
психотомиметического действия, фитотоксикантов, боеприпасов микстового
действия и др.
За прошедшие десятилетия XX в. в мире накоплен большой арсенал хи-
мического оружия. Запасы ОВ смертельного действия в США составляют
около 40 тыс. т, из которых примерно половина приходится на ОВ нервно-
паралитического действия.
Вместе с тем в последние десятилетия ХХ в. возникли новые важные проблемы
в военной токсикологии, связанные с применением отравляющих и других
высокотоксичных веществ в атаках химического терроризма, диверсии
(применение зарина в Токийском метро). Возможны также разработка и
использование новых веществ не предусмотренных Конвенцией.
Все эти и многие другие подобные вопросы являются следствием бурного
развития за последние 50 лет ХХ в. фундаментальных наук – химии, молекулярной
биологии, биохимии, биоорганической химии и микробиологии.
Авторы
8
Гл а в а 1
ОСНОВНЫЕ ПОНЯТИЯ ВОЕННОЙ ТОКСИКОЛОГИИ
1.1. Основные сведения о токсичности веществ и параметрах
токсикометрии.
В соответствии с Конвенцией о запрещении разработки, производства,
накопления и применения химического оружия и его уничтожении (1993),
химическое оружие (ХО) — это оружие массового поражения, действие
которого основано на токсических свойствах химических веществ.
По определению, данному в Конвенции, химическое оружие в совокуп-
ности или в отдельности означает следующее:
а) токсичные химикаты и их прекурсоры, за исключением тех случаев,
когда они предназначены для целей, не запрещенных в настоящей Конвен-
ции, при том условии, что их виды и количества соответствуют таким целям;
б) боеприпасы и устройства, специально предназначенные для смертель-
ного поражения или причинения иного вреда за счет токсических свойств,
указанных в подпункте «а» токсичных химикатов, высвобождаемых в резуль-
тате применения таких боеприпасов и устройств;
в) любое оборудование, специально предназначенное для использования
непосредственно в связи с применением боеприпасов и устройств, указанных
в подпункте «б»;
Понятие «токсичный химикат» означает любой химикат, который в ре-
зультате химического воздействия на жизненные процессы может вызвать
летальный исход, временный инкапаситирующий эффект или причинять
постоянный вред человеку или животным. К этой группе относятся все
подобные химикаты, независимо от их происхождения или способа
производства и независимо от того, произведены ли они на объектах,
содержатся ли в боеприпасах и т.д. Перечень токсичных химикатов и их
полупродуктов, попадающих под действие международных соглашений,
приведен в списках (№ 1—3) указанной выше Конвенции о запрещении и
уничтожении химического оружия.
Наряду с приведенными определениями Конвенции в законодательных
документах Российской Федерации также употребляются термины «химичес-
кое оружие» и «отравляющие вещества», которые используются в данном
учебнике.
Отравляющие вещества (ОВ) — это токсичные химикаты,
предназначенные для снаряжения химических боеприпасов и устройств,
составляющих основу химического оружия для применения в условиях
ведения боевых действий.
9
Токсичность — это свойство химического соединения, которое
характеризуется его способностью вызывать нарушения биохимических и
биофизических процессов в клетках, а также физиологических функций
организма, приводящих к возникновению симптомов интоксикации, а при
тяжелой степени поражения — к гибели организма. Степень интоксикации
зависит от количества поступившего в организм ОВ. Количество вещества,
вызывающее токсический эффект, называется токсичной дозой (ТД, или
токсодоза). При изучении веществ смертельного действия токсический
эффект обычно оценивают по альтернативно учитываемому показателю —
гибели биообъекта. Количество вещества, вызывающего летальный исход,
называется смертельной ТД. Наряду со среднесмертельными дозами
(концентрациями) в военной токсикологии оцениваются токсодозы
(концентрации), вызывающие легкие, средние и тяжелые степени поражения.
Различные категории ТД, используемые в военной токсикологии,
рассматриваются ниже. В практической работе токсикологи наиболее часто
используют средние (медианные) эффективные ТД (ЕД50) и средние
(медианные) смертельные (летальные) дозы (LD50) как наиболее достоверные
ТД, имеющие вероятностные характеристики. Для количественной оценки
могут применяться и другие показатели токсичности, характеризующие
частичный эффект (ЕД5, LD5, ЕД16, LD16, ЕД84, LD84, ЕД95, LD95 и др.),
находящиеся на верхней и нижней границах достоверности зависимости доза
— эффект.
При расчете вероятностных значений эффективных доз следует избегать
ошибки, принимая вероятность события за величину события, совершаемого
с данной вероятностью, поскольку значения величин летальных доз обратно
пропорциональны силе токсического действия (чем выше токсичность, тем
ниже величина LD50). Количественное выражение токсичности составляет
1/LD50 (1/ЕД50).
Токсичность химических соединений зависит от их строения и механизма
токсического действия. В качестве примера в табл. 1.1 приведены показатели
токсичности 15 соединений — природных токсинов (ПТ), ОВ и других ток-
сичных веществ (ТВ), получаемых синтетическим путем, механизм токсичес-
кого действия которых исследовался в XX в. Как видно из табл. 1.1, токсич-
ность природных ядов (ПЯ) и ТВ может существенно различаться, например,
по весовым ТД на 1 • 109 (мкг/кг).
10
Таблица 1.1. Токсичность некоторых веществ в опытах на мышах при
внутрибрюшинном и внутримышечном введении (LD50 мкг/кг, мкг •
моль/кг), механизмы и симптомы интоксикации приведенными
веществами (по данным литературы)
АцХ' - ацетилхолин
11
нарушения жизненно важных процессов в организме животных и человека.
Под жизненно важными имеются в виду биохимические и биофизические
процессы, которые занимают ключевое положение в метаболизме веществ в
клетках и поддержании гомеостаза в тканях и органах млекопитающих. В со-
ответствии с этим можно условно выделить определенные типы ПТ, ОВ и
других ТВ:
• Вещества избирательного нейротропного действия.
• Вещества избирательного кардиотропного действия.
• Цитотоксичные вещества, нарушающие строение и функции генетичес-
кого аппарата клеток, включая биосинтез белков.
• Цитотоксичные вещества, нарушающие синтез макроэргических соеди-
нений в клетках.
• Вещества, оказывающие специфическое мембранотропное действие, в
частности вещества, нарушающие функции альвеолярных клеток (пи-
ноцитов I и И порядка) и эндотелия капилляров кровеносных сосудов
легких.
Краткая характеристика указанных выше групп веществ смертельного
действия с учетом их подтипов, а также примеры ПТ, ОВ и других ТВ при-
ведены в табл. 1.2.
Как уже отмечалось, под определением «токсичность» понимается спо-
собность вещества вызывать нарушения биохимических (биофизических)
процессов в клетках и физиологических функций организма. Термин «нару-
шение физиологических функций» в военной химии и токсикологии обычно
означает свойство вещества вызывать снижение трудоспособности (боеспо-
собности) и гибель организма. Токсичность характеризуется количеством ве-
щества, вызывающим поражающий эффект, — величинами токсодоз и ха-
рактером токсического действия на организм.
Критерии оценки степени токсичности вещества различны и зависят во
многом от того, в какой области человеческой деятельности данное вещество
используется. Этим обстоятельством определяется различие критериев оцен-
ки в промышленной токсикологии, пищевой, коммунальной, судебной и во-
енной токсикологии. Ниже приводятся определения, принятые в мировой
обшей токсикологии (по определениям комиссии при ВОЗ, SIPRI и ООН), а
также принятые в военной токсикологии.
12
Механизм токсического действия ТВ ПЯ, ОВ и другие ТВ
ПЯ и другие ТВ нейротропного действия
Нарушение функции ионных каналов нервных Тетродотоксин, сакситоксин, батрахотоксин
волокон и др.
Нарушение функции возбуждающих
(холинергических и др.) синапсов
Нарушение хранения и выделения АцХ в Ботулинические токсины (БТ),
синаптическую щель нейротоксины скорпионов и др.
Взаимодействие с холинорецепторами на пре- и Тайпотоксин, кобротоксин, бунгаротокси-
постсинаптических мембранах ны, латротоксины, мускарин, никотин и др.
Ингибирование холинэстераз Эзерин, ДФФ1 зарин, зоман, VX и другие
Нарушение функции тормозных Ф0В2
(ГАМКергических и глицинергических) синапсов
ЦНС
Нарушение функции синапсов на Тетаноспазмин, токсопиримидины и другие
пресинаптическом уровне ТВ
Нарушение функции синапсов на Пикротоксин, бикукилин, силатраны,
постсинаптическом уровне бициклофосфа- ты и др.
ПЯ и другие ТВ кардиотропного действия
Нарушение функции миокарда Батрахотоксин, палитоксин и др.
Взаимодействие с рецепторами коронарных Строфантины и другие сердечные
сосудов и проводящих путей сердечных мышц гликозиды, палитоксин
Цитотоксичные вещества, нарушающие строение и функции нуклеиновых кислот
Нарушение репликации Иприты, колхицин и др.
Нарушение биосинтеза белков
Нарушение транскрипции Аманитин, иприты, афлатоксины и др.
Нарушение трансляции Рицин, дифтерийный токсин и др.
Цитотоксичные вещества, нарушающие синтез макроэргических соединений в
митохондриях
На стадиях, предшествующих окислительному Иприты, люизит, фторацетат и другие ТВ
фосфорилированию
На стадиях процессов окислительного HCN, соли HCN
фосфорилирования
ОВ и другие ТВ, нарушающие функции легочной ткани (пиноцитов I и II порядка
При ингаляционном воздействии газов и паров Хлор, фосген, дифосген, перфторизобутилен
и другие ТВ
При парентеральном введении ТВ Паракват и другие ТВ
1
ДФФ - диизопропилфторфосфат
2
ФОВ – фосфорорганические вещества
13
Таблица 1.3. Классификация ТВ, принятая в военной токсикологии
LCt50,
Величины LD50, мг/кг
Категория токсичности мг • мин/л
внутримышечно, накожно ингаля-
подкожно ция
Высокотоксичные <0,5 < 15 <2
С выраженной токсичностью 0,5—10 15—100 2—20
Умеренно токсичные 10—150 100—500 20—200
Малотоксичные > 150 >500 >200
14
Токсичные вещества — вещества, способные при воздействии на живые
организмы приводить их к гибели и имеющие следующие характеристики:
•средняя смертельная доза при введении в желудок от 15 до 200 мг/кг
включительно;
•средняя смертельная доза при нанесении на кожу от 50 до 400 мг/кг
включительно;
• средняя смертельная концентрация в воздухе от 0,5 до 2 мг/л включительно.
Высокотоксичные вещества — вещества, способные при воздействии на
живые организмы приводить их к гибели и имеющие следующие
характеристики:
• средняя смертельная доза при введении в желудок не более 15 мг/кг;
• средняя смертельная доза при нанесении на кожу не более 50 мг/кг;
• средняя смертельная концентрация в воздухе не более 0,5 мг/л.
Вещества, представляющие опасность для окружающей природной
среды, характеризующиеся следующими показателями острой токсичности в
водной среде:
• средняя смертельная доза при воздействии на рыбу в течение 96 ч не бо-
лее 10 мг/л;
• средняя концентрация яда, вызывающая определенный эффект при воз-
действии на дафнии в течение 48 ч, не более 10 мг/л.
В ноябре 1998 г. международным сообществом была принята
рекомендованная Организацией по экономическому сотрудничеству и
развитию (ОЭСР) ООН гармонизированная система классификации
химических веществ по их воздействию на здоровье человека и окружающую
среду (табл. 1.5). Перейти полностью на применение этой системы
предполагается до конца 2008 г.
Как видно из представленных классификаций, отнесение веществ к тому
или иному классу токсичности в значительной степени зависит от условий
применения веществ и возможности нанесения ущерба здоровью человека в
конкретных условиях. Это особенно важно знать в связи с возможностью
поступления химикатов в окружающую среду при аварийных и иных
ситуациях.
Классификация химических веществ, основанная на параметрах острой
токсичности, как уже отмечалось, свидетельствует о степени токсичности ве-
щества. Вместе с тем наряду с понятием степени токсического действия (ко-
личественным) существует понятие характера токсического действия, де-
монстрирующее основные качественные признаки поражения.
Под характером токсического действия вещества на организм понимается
совокупность представлений о механизме токсического действия,
15
формировании патофизиологических процессов и основных симптомов
поражения, динамике их развития во времени и другие стороны токсического
действия вещества. Особенности характера токсического действия веществ
на организм положены в основу токсикологической (физиологической)
классификации ОВ и токсинов.
Как отмечалось выще, токсичной дозой называется количество вещества,
вызывающее определенный токсический эффект. С целью количественной
16
воздействие паров токсиканта, например 5—6 ч) с учетом возможности работ по
уничтожению (ХО).
Размерность токсодоз различается в зависимости от путей проникновения ТВ в
организм. При внутривенном (внутримышечном) введении, а также при
гюпалании на кожные покровы, слизистые оболочки глаз и в ЖКТ токсодо- ai. как
правило, измеряются отношением количества вещества к единице массы тела
биообъекта (например, в мг/кг, мкг/кг, моль/кг и т. д.).
В последнее время в литературе приводят токсодозы, соотнесенные с единицей
площади поверхности тела (мг/м2, моль/м2). Подобные дозы при дей- ствии
различных веществ у разных видов ЛЖ различаются в меньшей степени, чем дозы
с размерностью, соотнесенной с единицей массы тела, поэтому они могут быть
использованы при анализе видовой чувствительности к веществам. Пересчет доз
проводят по формуле:
ЕД 50, мг/м2 = К • ЕД50, мг/кг,
Где К — коэффициент пересчета, как правило, зависит от массы ЛЖ и чело- века
М : K= М 0,309.
Такой подход к определению дозы основан на том, что обмен веществ и
скорость метаболических процессов у различных ЛЖ зависят в большей стегни
от площади поверхности тела, чем от его массы.
ТД веществ, соотнесенные с единицей площади поверхности тела и ха-
рактеризуюшие обшетоксическое действие веществ, естественно, отличаются от
токсодоз, которые формально имеют такую же размерность (мг/см 2), но
используются для характеристики местного действия ОВ: например, при по-
ражении кожи ипритом пузыреобразующие дозы равны 0,05—0,1 мг/см2.
При ингаляционном воздействии обычно указывают количество вещества в
воздухе, соотнесенное с единицей объема (мг/л, мг/м 3 и т. д.). В некоторых
случаях используют объемные концентрации (части на миллион, ррm), что
соответствует количеству миллилитров газа в 1 м3 воздуха.
17
Таким образом, Р — атмосферное давление в миллиметрах ртутного
столба при Т = 298, К = 62 360 и Р = 760 мм рт. ст. формула имеет вид: I мг/л
== 24 451,68/ММ, ррm.
Важное значение для оценки токсичности ОВ при ингаляции имеет время
воздействия ОВ. Токсодозы в таком случае являются произведением концен-
трации ОВ на время и имеют размерность: мг • мин/л (мг • мин/м3).
По формуле Габера
T = Ct,
где Т — показатель токсичности ОВ (токсодоза);
С — концентрация ОВ;
t — время действия (экспозиция).
Строго говоря, величины Ct можно называть токсодозами только при соб-
людении постоянства объема легочной вентиляции и массы биообъекта.
Габер предполагал, что для большинства ОВ Ct = constant, и, действительно,
во многих случаях это соотношение соблюдается, однако для ряда
соединений величины Ct возрастают с
увеличением экспозиции. Обычно Ct =
constant характерно для веществ,
обладающих кумулятивным действием
(рис. 1.1, а), тогда как возрастание Ct с
увеличением экспозиции ОВ возможно
при отсутствии у него кумулятивного
действия (рис. 1.1, б). В качестве примера можно сослаться на данные о
зависимости Ct от t для фосгена, иприта и синильной кислоты. Так, в случае
воздействия фосгена и иприта при изменении экспозиции от нескольких до
десятков минут значения LCt остаются практически постоянными, а в случае
воздействия HCN при изменении экспозиции с 30 с до 30 мин LCt50
увеличиваются в 2 – 3 раза (в зависимости от вида ЛЖ и условий опыта).
Важно отметить, что выраженным кумулятивным действием обладают ФОВ.
Рис. 1.1. Типичные виды зависимостей величин Ct (LCt) при ингаляции от экспозиции (t). а —
для веществ, обладающих кумулятивным действием; б — для веществ, не обладающих
кумулятивным действием.
кумулятивным действием
Медианная эффективная токсодоза (ЕД50) — это количество вещества,
вызывающее определенные эффекты у 50 % подопытных (пораженных)
животных. ЕД50 — первые буквы англ. effective dose — эффективная доза.
Для веществ, оказывающих смертельное действие, когда эффект оценивают
по числу погибших животных, используют величины LD50 и LCt50 от лат.
18
letalis — смертельная), а при оценке выведения из строя — величины ID 50 и
ICt50 («I» от англ. incapacitating — выводящая из строя) и т. д. (см. табл. 1.2).
При определении ED50 (LD50) зависимость эффекта от дозы устанавливают
на основании экспериментальных данных, которые анализируют с помощью
статистических методов, как правило, с использованием пробит-анализа.
Использование пробит-метода основано на двух положениях: 1) вероят-
ность распределения биоответов в токсикологических и фармакологических
экспериментах обычно соответствует закону логарифмически нормального
распределения. В этом случае по оси абсцисс откладывают не дозы, а лога-
рифмы доз; 2) вероятности биоответов оценивают с использованием величин
пробитов (а не процентов, как это часто делают в практической работе ток-
сикологи); пробиты (probites) — вероятностные величины (от англ.
probability unites), отсюда и название «пробит-метод». Использование
пробитов позволяет анализировать зависимости биоответов от логарифмов
доз в линейном видe: пробиты = а + b lgD в широком интервале биоответов
(от 0,1 до 99,9 %). коэффициенты а и b уравнения по существу
характеризуют чувствительность животных к данному веществу при данном
виде аппликации. Значения пробитов по наблюдаемым в эксперименте
биоответам находят по таблицам табл. 1.2, Приложение) или рассчитывают
аналитически. Статистическую обработку экспериментальных данных
проводят по специальным программам [Finni D., 1971]. При этом
рассчитывают среднеквадратичные отклонения, а также ошибки и
доверительные интервалы ЕД50 (LD50) и других категорий токсодоз. Значения
тангенсов углов наклона пробит-линий (b) по существу определяют
отношения различных категорий токсодоз и отражают изменения
вероятности эффектов с изменением величин токсодоз (логарифма токсодоз),
что наряду с медианными токсодозами имеет важное значение при оценке
токсического действия вещества.
В XX в. в нашей стране и за рубежом были проведены большие
исследования по обоснованию «стандартов безопасности» ОВ с учетом
возможных воздействий низких концентраций паров ОВ в рабочей зоне и
атмосферном воздухе населенных мест (ПДК р.з. и ПДКа.в.). Эти величины,
разработанные на государственном уровне и принятые в РФ, США и других
странах, используют в официальных документах по уничтожению
химического оружия РФ (Закон РФ по уничтожению химического оружия
РФ, Государственная программа уничтожения химического оружия РФ и
др.).
Вместе с тем в повседневной работе военные химики и токсикологи
часто используют «временные» величины ориентировочных безопасных
19
уровней воздействия (ОБУВ) и ориентировочных допустимых уровней
воздействия (ОДУ). Величины ОБУВ и ОДУ могут периодически уточняться
в свете новых научных данных и дополнительных обстоятельств.
После операции «Буря в пустыне» (1990—1991) военные специалисты
С.Ш.А. и Великобритании, особенно в связи с возникновением «синдрома
войны в заливе», уточняли определенные категории токсодоз и концентраций
ОВ нервно-паралитического действия (табл. 1.7). Специалисты США, исходя
из принятых ингаляционных токсодоз, допускали возможность воздействия
на личный состав антииракской коалиции низких концентрации паров зарина
и циклозарина в течение 1-4 сут (24-96 ч). Это привело к необходимости
разработки приборов войсковой индикации на уровне концентраций 10-5
мг/м3, т. е. на уровне предельно допустимых количеств (TWA PL и кTWA
GPL), установленных в США. В Вооруженных силах РФ ОБУВ оценивают
при возможном воздействии ОВ в течение 5—6 ч.
20
дне; TWA GPL (General Populative Limit) — максимально допустимая
средневзвешенная концентрация зарина в населенных пунктах при
нахождении в них в течение 3 сут (72 ч). Величина TWA GPL в США
уточняется после операции «Буря в пустыне» (с целью по нижения
величины концентрации паров зарина).
Токсичность — интегральный показатель реакции организма на
действие вещества. На нее влияет ряд факторов, характеризующих скорости
взаимодействия вещества с биомишенями и метаболизма вещества на стадии
транспорта к биомишеням. Эти вопросы специально рассматриваются ниже.
Здесь же целесообразно остановиться на тех факторах, которые влияют на
токсичность веществ и имеют значение в практической работе. К ним
относятся:
виды аппликации и пути проникновения вещества в организм;
различия видовой чувствительности к исследуемому веществу;
Таблица 1.8. Факторы, влияющие на токсичность веществ
Факторы Примеры, пояснения
Вещества, как правило, более токсичны при
ингаляции и менее токсичны при действии
Пути проникновения ОВ в организм
через кожные покровы (особенно
малоустойчивые и летучие)
Тяжелая физическая нагрузка, ослабленное
состояние организма и другие причины
способствуют повышению
Состояние организма, возрастные, половые чувствительности к ОВ и ядам.
и индивидуальные различия Индивидуальные различия
чувствительности по существу определяют
дробные эффекты при введении вещества в
дозах, близких к ED 50 (LD 50)
Токсичность зарина и других ФОВ для
Видовая чувствительность
разных видов ЛЖ изменяется на порядок
Важное значение имеют при ингаляции —
агрегатное состояние (пары, дисперсность
Условия воздействия ОВ аэрозолей, объем легочной вентиляции и
др.), при действии через кожу - ее
температура, влажность и др.
21
• Учитывая важное значение этих факторов, рассмотрим их более подробно.
• Основные пути проникновения ОВ и токсинов в организм;
• органы дыхания (ингаляция);
• кожные покровы (кожно-резорбтивное действие);
• слизистые оболочки глаз и верхних дыхательных путей;
• желудочно-кищечный тракт (per os, сублингвально);
• раневые поверхности (каналы) и поврежденные кожные покровы.
Зависимость токсичности ОВ от путей проникновения в организм пред-
ставлена на примере токсичности ФОВ при различных видах аппликации.
Так, из табл. 1.9 видно, что при ингаляции токсичность ФОВ наиболее вы-
сокая и приближается к таковой при их внутривенном введении.
В зависимости от агрегатного состояния вещества при ингаляции токсич-
ность ОВ наиболее высока при действии паров и мелкодисперсных
аэрозолей, при действии через кожные покровы — средне- и
крупнодисперсных аэрозолей.
Таблица 1.9. Токсичность ФОВ при различных путях проникновения в
организм
Ингаляция Через Через
Внутривен- Per OS,
LCt 50, LD50⃰, мг/кг слизистые кожу,
ФОВ но, LD50, мг • мин/л LD50, КВИ**
оболочки LD50,
мг/кг мг/кг
глаз, мг/кг мг/кг
GB 0,015 0,075 0,020 0,10 0,14 25 1560
GD 0,004 0,03 0,006 0,03 0,04 1,5 400
VX 0,004 0,03 0,006 0,03 0,04 0,12 35
* Ориентировочные значения LD50 (мг/кг) при ингаляции рассчитаны исходя из значений LCt 50 и
объема легочной вентиляции (15 л/мин) с использованием формулы Габера (см. текст).
** КВИ — кожно-венозный индекс, равный отношению LD 50 при накожной аппликации к LD50
при внутривенном введении.
22
Обозначив Р(k1 • к2) = К и приняв для газов и паров к2 = 1, имеем LCt 50 = К
• LD50. Значения К (размерность, кг • мин/л) для разных видов животных
различные: для мышей К = 1; для крыс, морских свинок и кроликов К = 2—
2,5; для кошек и собак К = 3—3,5 и для человека К = 5, т.е. для человека
формула Габера имеет вид: LCt50 ~ 5LD50. Так, при внутривенном введении
LD50 зарина = 0,015 мг/кг (см. табл. 1.9), LCt 50 = 0,075 мг - мин/л.
При проникновении через слизистые оболочки глаз ФОВ примерно в 5
раз, а при пероральном поступлении на порядок менее токсичны, чем при
внутривенном введении. Значительно менее токсичны ФОВ при действии
через кожные покровы: при воздействии зарина в 1500 раз, VX — в 35 раз,
чем при внутривенном введении, т. е. превышение КВИ в 45 раз. Причины
этого рассмотрены ниже.
Токсичность ОВ при попадании в раны и на ожоговые поверхности прак-
тически такая же, как при внутримышечном введении (т. е. примерно в 1,5—
2 раза меньше, чем при внутривенном введении). Такие поражения ОВ, когда
одновременно имеются и ранения, называются комбинированными (или
микстными).
Пути проникновения ОВ во многом определяют не только величины их
токсодоз, но и динамику развития интоксикации. Более подробно пути про-
никновения ОВ и токсинов в организм рассмотрены ниже.
Существенное влияние на степень токсичности веществ, помимо вида ап-
пликации, оказывают возраст, состояние организма и другие факторы. Так,
например, дети и пожилые люди, а также лица, перенесшие заболевания
органов дыхания, более чувствительны к ФОВ при ингаляции. При
физической нагрузке поражающая доза уменьшается, поскольку объем
легочной вентиляции возрастает в 2—3 раза. Следует учитывать и другие
причины. В частности, при физической нагрузке повышаются энергозатраты
организма, что усугубляет развивающееся кислородное голодание в тканях
при поражениях ФОВ.
Важное значение при оценке токсичности ОВ имеют конкретные условия
воздействия вещества и способы его применения. Так, при ингаляции ОВ
степень дисперсности аэрозоля влияет на место резорбции частиц аэрозоля в
органах дыхания, что в свою очередь отражается на степени токсичности
вещества. При действии через кожу важное значение имеют ее температура и
влажность, а также другие факторы. Разгоряченная влажная кожа легко
проницаема для аэрозолей ОВ.
Токсичность многих ОВ и токсинов для разных видов животных
различная. В то же время о токсичности веществ для человека судят на
основании данных, получаемых в опытах на лабораторных животных.
23
Исследование видовой чувствительности имеет важное теоретическое и
практическое значение.
Следует отметить, что видовая чувствительность к разным веществам про-
является по-разному. Так, при действии ОВ (иприта, фосгена и др.) в Первой
мировой войне видовые различия оказались маловыраженными, а смертель-
ные ТД для животных и человека практически одинаковыми. Вещества, об-
ладающие выраженным резорбтивным действием на определенные системы,
вызывают токсический эффект, как правило, в малых дозах. Выраженные
различия видовой чувствительности наблюдаются ко многим нейротропным
веществам, в частности к фосфорорганическим ингибиторам (ФОИ) холин-
эстераз (ХЭ) (табл. 1.10).
Из представленных в табл. 1.10 данных видно, что токсичность зарина для
собак и обезьян на порядок выше, чем для мышей. Аналогичная, но несколь-
ко менее выраженная зависимость ФОИ наблюдается у животных с более
развитой центральной нервной системой (ЦНС). Это в основном относится к
веществам, обладающим более выраженным действием на ЦНС (зарин,
зоман и др.). Для веществ с преобладающим действием на периферическую
нервную систему различия видовой чувствительности могут проявляться в
меньшей степени, например в случае с воздействием фосфакола (см. табл.
1.10).
Основными причинами различий в видовой чувствительности к ТВ служат
степень сродства к биомишеням и различия в концентрации биомишеней в
организме различных животных, а также скорости метаболизма веществ в
тканях разных животных, достигающие значительных величин. Этим
вопросам, представляющим большой теоретический и практический интерес
для токсикологии, посвящены специальные исследования.
Сложным является изучение видовой чувствительности к веществам пси-
хотомиметического действия и другим веществам, временно выводящим из
строя. Токсодозы, вызывающие нарушения ЦНС у человека и животных, в
ряде случаев существенно различаются. В подобных случаях требуется про-
ведение специальных исследований.
Видовые различия токсичности веществ во многом зависят от путей их по-
ступления в организм. Полагают, что при ингаляции (и внутривенном введе-
нии) токсичность ФОВ для человека и собак примерно одинаковая [Grob D.].
При накожной аппликации более подходящей биологической моделью с точ-
ки зрения подобия скоростей проникновения веществ через кожные покровы
считают свиней и морских свинок [Treager R.T., 1966; Blank J., Scheuplein R.,
1973].
24
Таким образом, исследование видовой чувствительности позволяет разра-
батывать чувствительные методы биологического контроля ОВ и ядов.
Например, известно, что у мелких птиц (канареек и др.) высокая чувствитель-
ность к синильной кислоте и окиси углерода, а у некоторых видов рыб
(золотые рыбки, рыба-луна и др.) — к ФОВ. Это послужило основанием для
рекомендации по использованию некоторых пород рыб в целях биологичес-
ких методов определения малых концентраций ФОВ в воде.
1
Ориентировочная оценка по данным американских авторов [Grob D. et al., 1950].
25
вызывают также местные симптомы: миоз, бронхоспазм, фибрилляцию
мыщц и т. д.
Дозы (концентрации) веществ, вызывающие местные поражения, как
правило, меньше доз, вызывающих резорбтивное действие. Так, токсодозы
иприта, вызывающие поражение глаз и дыхательных путей, примерно на по-
рядок меньше смертельных токсодоз.
Важно отметить, что пути поступления ОВ в организм и область первич-
ного контакта с ОВ (слизистые оболочки глаз, дыхательные пути, а также ко-
жа человека) представляют собой важные рефлексогенные зоны, обильно
снабженные чувствительными нервными окончаниями (рецепторами), раз-
дражение которых приводит к выраженным рефлекторным реакциям как со
стороны глаз и дыхательных путей, так и со стороны внутренних органов. В
связи с этим выделяют рефлекторное действие ОВ, которое наиболее вы-
ражено в случае применения веществ раздражающего действия. Так, при
действии высоких концентраций раздражающих веществ может наступить
рефлекторная задержка, и даже остановка дыхания и сердца (об этом нужно
помнить при организации и проведении окуривания с целью проверки пра-
вильности подбора и подгонки противогазов).
Параметры,
характеризующие KCN Зарин VX Палитоксин БТЗ
токсичность ОВ
LD 50, мг/кг 10 0,2 0,03 2 •10-4 2•10-8
26
Время гибели2 2 мин 20 мин 0,5 ч 1—2 ч 1 сут
1
В опытах на белых мышах при внутримышечном введении ОВ.
2
При введении 1,5—2 LD50 ОВ.
3
БТ - бактериальный токсин.
27
1.4. Острые, подострые и хронические формы интоксикации.
Кумулятивное действие ОВ и токсинов
В зависимости от скоростей поступления ОВ в организм различают
острые и хронические формы интоксикации (поражений).
Острые формы поражения обычно возникают при одновременном
поступлении в организм относительно больших количеств ОВ (как правило,
порядка одной или нескольких поражающих и смертельных токсодоз) в
течение короткого времени (минуты, десятки минут, часы). В этом случае
симптомы интоксикации обычно развиваются быстро и гибель может
наступить в короткое время. В некоторых же случаях, несмотря на то, что
имеется острая форма поражения, симптомы интоксикации могут
развиваться медленно (например, при поражении ипритом, фосгеном и др.).
При поступлении в организм ОВ в дозах (концентрациях), не вызывающих
гибели, в том числе и в небольших количествах в течение продолжительного
времени (сутки, недели, месяцы), могут возникать подострые и хронические
формы интоксикации. В этих случаях симптомы интоксикации зависят от
дозы ОВ и развиваются обычно медленнее, чем при острых формах, иногда
отмечаются некоторые особенности их развития. Например, при действии
малых количеств ФОВ наблюдаются повышенная возбудимость, кошмарные
сновидения, чувство страха и другие расстройства нервной системы,
поражения миокарда, мышечные парезы, параличи и другие симптомы
интоксикации.
По длительности воздействия вещества на организм подострые формы ин-
токсикации занимают как бы промежуточное положение между острыми и
хроническими поражениями при воздействии веществ в течение часов,
десятков часов и суток в относительно больших дозах.
При хронических и подострых формах поражения происходит кумуляция,
т. е. накопление в организме либо токсичного вещества, либо вызываемых им
эффектов. Соответственно различают материальную и функциональную ку-
муляцию, а также кумуляцию смешанного типа. Если вешество медленно де-
токсицируется, медленно выводится из организма, постепенно накапливается
в организме, то это материальная кумуляция, например, при интоксикации
мышьяком, ртутью, ипритом, ХЩТ, диоксином и др. В основе функциональ-
ной кумуляции лежит суммирование токсических эффектов, а не самого ве-
щества. Например, при действии фосгена накапливается не вещество, а ко-
личество разрушенных под действием ОВ клеточных элементов легочной
ткани.
Хорошо известный в медицине и типичный пример функциональной ку-
муляции — действие на организм этилового спирта при частом его употреб-
28
лении, когда происходит накопление повреждений в тканях ЦНС, печени,
половых железах и других органах.
При действии ОВ часто отмечается сочетание материальной и функцио-
нальной кумуляции (смешанный тип кумуляции), например при поражении
VX, подострых формах интоксикации.
С целью количественной оценки кумулятивного действия веществ обычно
используют коэффициент кумуляции (КК) или индекс кумуляции, под ко-
торыми принято понимать отношение суммарной дозы вещества, вызываю-
щей определенный эффект при дробном введении к дозе, вызывающей тот
же эффект при однократном введении [Каган Ю.С., Станкевич В.В., 1964].
КК = Ʃ ( ЕD50n) / ЕD501
Где Ʃ ( ЕD50n) — сумма доз, введенных животным в условиях хронического
или подострого опыта для получения определенного эффекта (например, ги-
бели 50 % животных);
ЕD501 - эффективная доза при однократном введении вещества.
Считают, что кумулятивное действие слабо выражено или отсутствует, если
КК > 10; выражено, если КК = 10—3, и сильно выражено, если КК = 3—1
(КК < 1 может наблюдаться при сверхкумуляции). В специальных исследо-
ваниях изучаются зависимости КК от условий проведения опытов: вводят
Степень выраженности кумулятивных эффектов (КЭ) и величины КК
зависят от условий проведения экспериментов (вида ЛЖ, способов введения
определенных доз и других факторов). Обычно в скрининговых работах
используют мелких ЛЖ (мыши, крысы), которым вводят вещество внут-
ривенно (внутримышечно) или в виде ингаляции. В острых (подострых)
опытах обычно вещество вводят в дозах ≈ 1/7—1/5 LD 50 ежедневно. По
методике Р. К. Лима и соавт. (1961) >; целью сокращения времени экспе-
риментов введение вещества начинают с дозы ≈ 1/10— 1 /7 LD 50, увеличивая
ее в 2 раза. Величины КК рассчитывают по приведенной выше формуле.
Типичные результаты для некоторых ОВ и ТВ, исследуемых в военной
токсикологии, по данным литературы, приведены в табл. 1.12.
29
1—3 Выражен Иприт (НД), агенты GD, VX и др.
Наличие и степень выражен ности зависят
3—10 Табун (GB), зарин (GB), фосген (CG) и др.
от условий эксперимента
10—30 Мало выражен Синильная кислота, цианиды и др.
Синильная кислота(при низких концентрациях
>30 Практически не наблюдается
10-3 мг/л
30
поступления веществ в организм, а также скорость проникновения веществ
из крови в ткани-мишени через ГГБ в области стенок кровеносных капил-
ляров тканей, что влияет на характер и степень токсического действия ве-
ществ. Так, «заряженные» соединения плохо проникают в ЦНС и оказывают
более выраженное периферическое действие.
После поражения биомишеней в клетках и тканях возникают нарушения
метаболических процессов, которые приводят к развитию патофизиологи-
ческих процессов и симптомов поражения. Компенсаторные механизмы ор-
ганизма способствуют купированию патофизиологических изменений, про-
исходящих при нарушениях метаболизма в крови. Если они оказываются
недостаточными, возникают симптомы поражения, что может привести к ги-
бели. С целью устранения основных причин происходящих нарушений и ку-
пирования симптомов поражения используют средства медицинской защиты.
В действии ОВ на организм принято выделять следующие стадии:
1) контакта с ОВ и проникновения вещества в кровь;
2) транспорта вещества кровью с места аппликации к тканям- мишеням,
распределения вещества по организму и метаболизм вещества в тканях внут-
ренних органов (токсико-кинетическая стадия);
3) проникновения вещества через ГГБ (стенки капилляров и другие тка-
невые барьеры) и накопления в области молекулярных биомишеней;
4) взаимодействия вещества с биомишенями и возникновения нарушений
биохимических и биофизических процессов на молекулярном и субклеточ-
ном уровнях (токсико-динамическая стадия);
5) функциональных расстройств организма, развития патофизиологичес-
ких процессов после поражения молекулярных биомишеней и возникновения
симптомов поражения;
6) купирования основных симптомов интоксикации, угрожающих жизни
пораженного, в том числе с использованием средств медицинской защиты,
или стадию исходов (при поражениях смертельными токсодозами и несвое-
временном использовании средств защиты возможна смерть пораженных);
7) выздоровления и восстановления работоспособности (боеспособности).
Выше было рассмотрено действие на организм одного вещества. Однако
в токсикологической практике возможны случаи воздействия на организм не
одного, а двух или более веществ, поэтому целесообразно остановиться и на
совместном их действии.
31
независимое действие, когда вещества, обладающие различными
механизмами токсического действия, практически не оказывают
влияние друг на друга;
аддитивное действия, когда величины эффектов при действии двух
веществ, составляют сумму эффектов каждого;
более чем аддитивное (синергизм или потенцирование) взаимное усиление
токсического действия веществ, когда эффект от действия двух веществ
выше суммы эффектов действия каждого;
менее чем аддитивное (антагонизм) взаимное уменьшение токсического
действия веществ, когда эффект от действия двух веществ меньше суммы
эффектов действия каждого.
Для количественной оценки совместного действия ОВ существуют раз-
личные методы. Наиболее часто в современных работах для оценки токсич-
ности смесей используют формулу [Finni D.J., 1971]:
32
Механизмы синергизма и антагонизма могут быть различными. Так, если
два вещества оказывают прямое избирательное действие на одну и ту же био-
мишень, вызывая взаимное усиление или ослабление эффектов, то обычно
говорят о прямых синергизме и антагонизме. Синергизм и антагонизм могут
наблюдаться и тогда, когда вещества действуют на различные биомишени
(непрямые синергизм и антагонизм). Так, например, адреналин и атропин
при введении в глаз вызывают расширение зрачка и ведут себя как
синергисты. Однако механизмы действия этих веществ различные.
Адреналин вызывает сокращение радиальных мышечных волокон радужной
оболочки, которые иннервируются адренергическими нервными волокнами
(т.е. адреналин действует как симпатомиметик), в то время как атропин
вызывает расслабление круговых мышечных волокон радужной оболочки,
которые иннервируются холинергическими волокнами (т.е. атропин
действует как холинолитик). Таким образом, в рассмотренном случае
наблюдается непрямой синергизм.
В литературе описаны и другие, более сложные взаимные влияния ве-
ществ, а в ряде работ используют другие понятия и термины (конкурентный,
неконкурентный, бесконкурентный, независимый и другие виды антагонизма
и синергизма), рассмотрение которых выходит за рамки нашего учебника.
Синергизм и антагонизм могут быть обусловлены тем, что одно из веществ
ыияет на метаболизм другого на стадии транспорта к биомишени. Так, в на-
стоящее время под потенцированием как частным случаем синергизма часто
понимают такое действие веществ, когда одно вещество (потенцирующее) за-
медляет детоксикацию в организме другого (потенцируемого) вещества,
вследствие чего его токсичность повышается. Подобные механизмы были
изучены впервые на примере некоторых фосфорсодержащих пестицидов
[О'Брайн Р., 1964]. Если же под действием одного вещества повышается ско-
рость детоксикации и расхода на побочные процессы другого вещества (ОВ,
токсина) на токсикокинетической стадии, то это, как правило, приводит к
снижению токсичности ОВ: например, использование стимуляторов белко-
вого синтеза (бензонала и др.) в качестве средств, повышающих скорость де-
токсикации и снижающих токсичность ФОВ.
Исследование механизмов взаимного влияния веществ проводят при раз-
работке средств медицинской защиты от ОВ и некоторых других ТВ.
33
1.7. Пути проникновения отравляющих веществ в организм и
поступления их в кровяное русло
34
Таким образом, стенки альвеол легких можно рассматривать как
тонкую мембрану (толщиной 1 мкм), разделяющую две среды: наружную
(альвеолярный воздух) и внутреннюю (кровь), постоянно орошаемую с
внутренней стороны новыми порциями крови и имеющую большую площадь
поверхности (≈80—100 м2), через которую происходит газообмен между
кровью и воздухом.
35
эндотелиальных клеток кровеносных капилляров сосудов легких, что
приводит к отеку легких (табл. 1.14).
Таблица 1.14. Токсичные вещества, вызывающие острую ингаляционную интокси-
кацию, и объекты их воздействия в органах дыхания человека [Элленхорн Д., 2002]
Тип ТВ Примеры
ТВ, воздействующие на верхние ды- Хлор, аммиак, формальдегид, уксусный
хательные пути и бронхи1 альдегид, акролеин, двуокись серы, хло-
ристый водород, фтористый водород,
уксусная кислота, хлорпикрин^ и др.
ТВ, воздействующие на терминальные Окись и двуокись азота, фосген, дифосген и
бронхиолы и альвеолы легких др
1
При высоких концентрациях некоторых веществ (хлорпикрин и др.) возможен рефлектор-
ный спазм голосовых связок с явлениями остановки внешнего дыхания. Необходимо оказание
срочной медицинской помощи (искусственное дыхание, массаж сердца, в тяжелых случаях —
трахеотомия).
Некоторые ТВ (фреоны, и др.) нарушают структуру и свойства
поверхностно-активной мембраны легких, что также приводит к отеку
легких.
При ингаляции ОВ нервно-паралитического и общеядовитого действия,
ОВ психотомиметического действия, аэрозолей токсинов, нейротропных ве-
ществ судорожного действия и других ТВ вещества поступают в кровь через
биомембраны альвеол легких на большой площади.
Таким образом, газы и пары веществ с большими скоростями проникают
из вдыхаемого воздуха в кровь через тонкие стенки альвеол. Этим объясня-
ется высокая токсичность ОВ при поступлении через органы дыхания в га-
зообразном и парообразном состояниях.
При ингаляции аэрозолей ОВ и токсинов крупные частицы (дисперсность
150 мкм и больше) задерживаются в основном в верхних отделах ды-
хательных путей. Аэрозоли средней дисперсности (20—50 мкм) оседают в
бронхах (средних и мелких), в то время как мелкодисперсные аэрозоли
(частицы 5 мкм и меньше) проникают в альвеолы. Вещества, поступившие в
альвеолы, быстро проникают через их стенки в кровь на большой повер-
хности и поэтому наиболее опасны. Это относится как к жидким, так и к
твердым аэрозолям.
Следует отметить и еще одно важное обстоятельство. При ингаляции ве-
щества сразу же поступают в артериальную кровь и через несколько секунд в
сосуды головного мозга. Это — один из существенных факторов, опреде-
ляющих высокую токсичность ОВ при ингаляции.
36
1.7.2. Проникновение отравляющих веществ через кожные покровы
Кожа человека играет важную физиологическую роль, принимает участие
в терморегуляции, дыхании, водно-солевом обмене. Наиболее главная с точ-
ки зрения военной токсикологии функция кожи — защита организма от воз-
действия ТВ. Общая площадь поверхности кожи человека ≈1,5 м 2. Считается,
что у военнослужащего, одетого в обмундирование, открытые участки кожи
(лицо, шея, кисти рук) составляют ≈0,1 м 2 . Кожа под обмундированием так-
же является входными воротами для ОВ, проникающих в подкостюмное про-
странство, как правило, в виде паров.
Факторы, влияющие на токсичность веществ при накожной аппликации:
физико-химические свойства вещества (летучесть, вязкость, липидо-
фильность и др.), которые определяют, с одной стороны, скорость ис-
парения веществ с поверхности кожи (например, значительная часть за-
рина испаряется с кожи, в то время как летучесть VX значительно ниже),
с другой — скорость поступления веществ в верхние слои эпидермиса;
скорость проникновения веществ через эпидермис, которая определяется
значениями Км (см. ниже) и коэффициентами диффузии веществ через
слои эпидермиса и придатки кожи, а также концентрацией вещества в
коже (зависят от свойств ОВ и структурных элементов слоев кожи).
Эти параметры очень различаются у разных видов ЛЖ и различных учас-
тков тела человека. Так, наиболее проницаема кожа лица (щек и лба), шеи,
груди и других областей кожного покрова человека.
скорость детоксикации ОВ ферментами кожи (например, более высокая
скорость детоксикации зарина и зомана, чем VX в коже, во многом оп-
ределяет более высокую токсичность VX при действии через кожу);
показано, что активность подобных ферментов в коже разных видов жи-
вотных и человека разная;
конкретные условия заражения (площадь заражения кожи, ее темпера-
тура и влажность и другие факторы, влияющие на скорость проникно-
вения веществ через кожу).
Большое значение для понимания механизмов проникновения ОВ через
кожу человека имеют особенности строения кожи.
Кожа человека состоит из трех основных слоев: эпидермиса, дермы и под-
кожной жировой клетчатки (рис. 1.2). Основную защитную функцию кожи
выполняет эпидермис, который состоит из нескольких слоев: рогового, блес-
тящего, зернистого, шиповидного и росткового (базального).
Толщина эпидермиса ≈100 мкм, рогового слоя (PC) ≈20 мкм. На
разных участках тела человека толщина PC различная, что влияет на
37
изменение скорости проникновения веществ через кожу в различных
участках. Расположенные в дерме под базальной мембраной эпидермиса слои
кожи содержат сеть кровеносных и лимфатических сосудов. Вещество,
проникнув через все слои эпидермиса, поступает в кровеносные капилляры
дермы.
Основной диффузионный барьер при проникновении веществ через
кожу человека — PC эпидермиса. Определенную роль играют и придатки
кожи — сальные и потовые железы. Полагают, что они имеют основное
значение на начальных стадиях проникновения вещества через кожу (до
насыщения клеток PC веществом). При проникновении через кожу
липофильных веществ (иприт, зоман и др.) сальные железы являются
своеобразным депо, в котором вещества могут накапливаться, а затем
медленно поступать в кровь. После насыщения клеток PC веществом
основной путь проникновения последнего — трансцеллюлярный, т. е.
проникновение вещества через все слои клеток PC и эпидермиса.
В работах некоторых авторов [Blank J.H., Treager R.T., 1966] показано, что
скорости проникновения веществ через кожу подчиняются закону Фика:
J = кр △С,
где J — количество вещества, проникшего через кожу на стационарном ре-
жиме через определенную площадь в единицу времени, моль • см -2/мин-1; кр
— константа проникновения вещества, см • мин -1; △С — разница концен-
траций вещества с двух сторон мембраны, моль/см3.
С другой стороны:
кр = KМ •D/Ϭ ; J = KМ D△С /Ϭ,
где Км — коэффициент, характеризующий степень сродства вещества к PC
— отнощение количества вещества, поглощенного PC (эпидермисом), к
количеству вещества в растворе; для ряда веществ Км изменяется
пропорционально коэффициенту распределения веществ в системе октанол
— вода; D — коэффициент диффузии вещества через PC (эпидермис), см2 • с;
Ϭ — толщина
мембраны PC, см.
38
— эпидермис; II — дерма; III — подкожная жировая клетчатка; 1 — роговой слой; 2 — "промежуточные"
слои эпидермиса между роговым слоем и слоем базальных клеток (шиповидный слой, слой зернистых
клеток, блестящий слой); 3 — слой базальных клеток; 4 — кровеносные капилляры; 5 — корень волоса; 6 —
сальная железа; 7 — потовая железа.
Пунктирные линии — основные пути проникновения ОВ через кожу в кровеносные капилляры: А —
придаткам кожи (волосяным фолликулам, сальным и потовым железам); Б — через слои эпидермиса кожи.
39
1.7.3. Поступление отравляющих веществ и токсинов через раневые
поверхности
При попадании ОВ и ТВ на раневые поверхности (микстовые поражения)
они быстро поступают в систему капилляров в области раневых
поверхностей, а затем в общую систему кровеносных сосудов с быстрым
проявлением токсических эффектов. Примеры — аналоги курареподобных
веществ. Большую опасность представляет раневой ботулизм. Симптомы
проявляются более быстро, чем при пероральных отравлениях. Развиваются
вялые параличи, которые сохраняются длительное время (недели, месяцы).
Описаны летальные исходы. С точки зрения военной токсикологии актуальна
оценка раневого БТ при применении противником изделий (патронов и др.),
содержащих ботулотоксины для микстовых поражений [Ротшфилд Д., 1966;
Franke S., 1977]. Механизмы действия ботулотоксинов и курареподобных
бисаммониевых арилкарбаматов как потенциальных химических агентов для
микстовых поражений рассматриваются ниже.
40
превращения (биотрансформация) веществ, как правило, катализируемые
ферментами, — метаболизм веществ в организме;
проникновение веществ через клеточно-тканевые барьеры в ткани-ми-
шени, в которых расположены молекулярные биомишени.
При распределении веществ в организме важную роль играют кровь и
лимфа, являющиеся связующей средой для всех внутренних органов и
тканей.
Кровь состоит из плазмы и взвешенных в ней клеточных элементов (эрит-
роцитов, лейкоцитов и тромбоцитов). Плазма крови — гидрозоль белков, ли-
попротеинов и гликопротеидов с растворенными в ней солями, создающими
определенную буферную емкость (рН 7,4), и другими соединениями. В обо-
лочках клеток крови содержится большое количество липидов, которые с ли-
попротеидами плазмы крови по существу являются липидной фазой кровя-
ного потока.
При поступлении в кровь гидрофильные вещества растворяются в плазме,
а липофильные концентрируются в основном в оболочках эритроцитов и на
липопротеидах плазмы крови (в связи с этим важно отметить, что общая пло-
щадь поверхности эритроцитов крови человека составляет =3000 м 2). При
прохождении крови по капиллярам происходит извлечение вещества
клетками эндотелия капилляров, а затем оно проникает в те или иные ткани.
Распределение веществ в организме в значительной степени зависит от
особенности кровоснабжения органов и тканей, а также от специфической
органотропности веществ.
Кровоснабжение тканей и органов человека существенно различается. Так,
в 1 мин через одинаковые объемы тканей (100 см 3) протекают следующие
количества крови: в мозге — 100 см3, в печени — 60 см3, в кишечнике — 50
см3, в селезенке — 45 см3, в желудке — 20 см3, в верхних конечностях — 10
см3 (в покое), в нижних конечностях — 7 см 3. ЦНС обильно снабжается
кровью. Так, в головной мозг (составляющий 1∕50 массы тела человека) по-
стоянно поступает 1/5 крови. Поэтому в мозг, сердечную мышцу и другие ор-
ганы, имеющие обильное кровоснабжение, ТВ поступают в первую очередь.
Различия в кровоснабжении играют важную роль и в распределении вещес-
тва внутри органа. Так, через капилляры серого вещества головного мозга
протекает в 3—5 раз больше крови (площадь поверхности капилляров серого
вещества приблизительно 150 см2 на 1 г ткани), чем через капилляры белого
вещества мозга (площадь поверхности капилляров приблизительно 40 см 2 на
1 г ткани).
41
Важное значение при распределении веществ в организме и их
избирательном действии играет специфическая органотропность —
избирательное сродство вещества к определенным тканям и органам.
Способность некоторых веществ к избирательному действию хорошо
известна в фармакологии и токсикологии. Примерами являются
специфическое действие камфоры и некоторых гликозидов на сердечную
мышцу, нейролептиков на ЦНС и т.д.
Основные показатели, характеризующие специфическую органотропность
веществ:
• высокое сродство к определенным биомишеням (ферментам, рецепторам и
др.) тканей;
• концентрация в органах и тканях;
• способность включаться в метаболические циклы в определенных тканях;
• концентрация в крови при прохождении по капиллярам различных тканей;
• избирательная проницаемость через стенки капилляров в тканях-мишенях и
отдельных структурах органов, а также другие факторы, которые
рассматриваются ниже.
42
к детоксикации ОВ реакции
Ферментативные превращения, приводящие Летальный синтез фторацетата,
к образованию в организме более ТВ тионтиольная изомеризация ФОС и др.
(летальный синтез)
Взаимодействие с ферментами крови и
Взаимодействие ФОВ с эстераза- ми крови,
тканей печени и других органов, подобным
печени и других тканей
ферментам-мишеням нейротропных
веществ
Сорбция на элементах крови с
Сорбция устойчивых ОВ (иприта, VX и др.)
последующей десорбцией в капиллярах
на липидах крови
тканей-мишеней (при воздействии ус-
тойчивых в крови веществ)
Взаимодействие с ферментами биомембран, Ингибиторы эстераз клеток стенок
регулирующими проницаемость последних капилляров
43
разрывом связи Р — F и образованием кислых продуктов. Подобные
ферменты, относящиеся к группе гидролаз (арилэстераз) (табл. 1.16),
получили общее название «фосфорилфосфатазы».
В активных центрах этих ферментов имеются ионы металла (Mg 2+ и др.).
Ферментативный гидролиз зарина и зомана проходит с высокими скоростя-
ми: Т 1/2 равны минутам (в зависимости от органа и ткани), т.е. в течение
времени, сопоставимого с временем развития интоксикации. Показано, что
скорость ферментативного гидролиза во многом определяет токсичность
ФОВ (зарин, зоман и табун). Однако арилэстеразы тканей человека
практически не гидролизуют вещества типа VX, чем в основном и
объясняется их высокая токсичность, особенно при действии через кожу
[Scafe S., Campbell D., 1959].
44
тичной структуре 4 субъединицы 4 субъединицы 2 субъединицы -300 ООО
Нервная ткань и эритро-
Локализация (ис- циты млекопитающих.
Сыворотка крови и ткани внутренних органов (печень,
точник выделения Электрический орган
легкие, почки и др.) млекопитающих
ферментов) электрического угря,
скатов и др.
Субстратная Алкил Арилкарбонаты и
Холиновые эфиры карбоновых кислот
специфичность карбонаты др
Ацетилхопин (ацетил > Бутирилхолин Трибутирин, Ариловые эфи ры
Оптимальные пропионил > бутирипхо- (бутирил > про- этипбутират и карбоновых
субстраты лин) пионил > др. кислот, ФОВ (GB,
ацетилхолин) GD, ДФФ)
Угнетение высо Есть Нет Нет Нет
кими концентра
циями субстрата
Ингибиторы Метилфторфосфонаты Фторфосфаты Нитрофенил- Этилендиамин-
Специфические (зарин, зоман), V-агенты (ДФФ), фтор- фосфаты, тетраацетат, п-
и фосфонаты, VX, фторфосфаты, хлормеркури-
нитрофенилфосфа три-о-крезил- бензоат и др.
ты и др. фосфат и др.
ФизостигминЗ Угнетает Угнетает Не угнетает Не угнетает
Молекулярная 1 • 104 2,5-103 101—102 = 103
активность4
Строение активного Эстеразный участок (оксигруппа серина и Оксигруппа се- Кофермент - ионы
-центра (основные имидазольное кольцо гистидина). Анионный рина и имида металлов (Мn2+,
элементы) участок (карбоксильная группа). -зольное кольцо Мg2+ и др.)
Гидрофобные участки гистидина. Гид-
рофобные
участки
1
Здесь и далее в скобках указана нумерация в соответствии с «Классификацией и номенклатурой
ферментов», утвержденной Международной комиссией по ферментам.
2
ММ — относительная молекулярная масса.
3
Концентрация 10-5—10-4 М.
4
Молекулярная активность — количество молекул субстрата, подвергающихся каталитическому
превращению на одном активном центре фермента при оптимальных условиях в 1 с.
45
Изомеризация. Некоторые тионовые аналоги ФОС в организме подверга-
ются тион-тиольной изомеризации с образованием более токсичных тиоло-
вых аналогов:
46
Применительно к веществам, исследуемым в военной токсикологии, зна-
чимость процессов конъюгации наиболее выражена при метаболизме
веществ, в состав которых входят ароматические заместители, например при
поражении производными бензиловой, хлорфеноксиуксусной кислот и
других фитотоксикантов, а также при воздействии неполярных апротонных
растворителей (бензол, толуол и др.) и некоторых других ядовитых
технических жидкостей.
Скорость метаболизма веществ на токсико-кинетической стадии во мно-
гом определяет их токсичность. Особенно это проявляется в тех случаях, ког-
да скорость детоксикации большая и сопоставима со скоростью поступления
веществ в кровь. Так, большие скорости детоксикации HCN в крови и тканях
(приблизительно 0,02 мг/мин • кг) — основная причина отсутствия у HCN
кумулятивного действия и проявление малой токсичности при поступлении в
организм с малыми скоростям: (10-2 мг/мин • кг), что соответствует инга-
ляции паров HCN в концентрации приблизительно 10-2-10-3 мг/л.
Пути и скорость метаболизма веществ в организме человека и животных
во многих случаях существенно разнятся, что является причиной различий
видовой чувствительности к ОВ и ядам. Так, кролики и другие грызуны зна-
чительно менее чувствительны к холинолитикам (типа атропина и BZ), так
как в крови этих животных отмечается высокое содержание фермента атро-
пиназы, катализирующего гидролиз атропина и подобных соединений.
Наряду с видовыми важное значение имеют генетические, индивидуаль-
ные, возрастные и половые особенности обмена веществ и другие факторы,
влияющие на скорость метаболизма и токсичность веществ.
Синтез ферментов, участвующих в метаболизме веществ, может быть из-
менен под действием других соединений, что приводит к изменению токсич-
ности веществ. Подобные подходы используют при разработке средств про-
филактики и терапии. Как уже отмечалось, метаболические превращения
веществ обычно приводят к снижению их токсичности. Кроме того, в ряде
случаев при биотрансформации в организме могут образовываться и более
токсичные соединения, например при окислении ФОС и тионтиольной изо-
меризации. Подобные реакции, приводящие к образованию более токсичных
соединений в организме, получили название «летальный синтез». Типичная
реакция летального синтеза (помимо уже указанных примеров метаболизма
ФОС) — образование в митохондриях клеток из фторуксусной кислоты
фтор- лимонной. Последняя — сильный ингибитор фермента аконитазы в
цикле Кребса, что приводит к блокаде цикла. Этим и объясняется высокая
токсичность фторацетата для теплокровных (LD50 = 0,2 мг/кг, кролики).
47
Наряду с процессами биотрансформации часть вещества на токсико-ки-
нетической стадии может расходоваться на взаимодействие с ферментами,
которые по своим свойствам близки ферментам-мищеням для нейротропных
веществ. Примером являются реакции ФОИ с холинэстеразами, карбоксил-
эстеразами и другими эстеразами крови, печени и других внутренних органов
в том случае, когда ОВ сорбируются на липидах, из которых медленно пос-
тупают к биомишеням.
Другие процессы, которые возможны на токсико-кинетической стадии,
рассматриваются ниже.
В заключение необходимо отметить, что некоторые вещества в организме
млекопитающих крайне медленно подвергаются метаболическим превраще-
ниям или практически не вступают в реакции. Примерами таких веществ яв-
ляются хлорорганические соединения (гексахлоран, ДДТ, диоксин и др.).
Устойчивые к детоксикации и, как правило, липидофильные токсичные ве-
щества обладают выраженным кумулятивным действием.
48
«хлорных» каналов). Этим, по-видимому, и объясняются большие скорости
проникновения цианионов внутри нейронов. Липидофильные вещества
(зоман и др.) в основном проникают через липидные участки биомембран.
Вещества, хорошо растворимые и в воде, и в липидах (зарин и др.), могут
проникать обоими путями. Проникновение веществ, способных к ионизации
(например, алкалоидов, VX и др.), зависит от степени ионизации вещества
при рН 7,4 тканей.
Существует особый вид транспорта веществ — пиноцитоз, когда молекулы
веществ, находящиеся на наружной поверхности клеток, захватываются обо-
лочками клеток в пиноцитозные пузырьки, переносятся внутрь, а затем через
цитоплазму клеток. Обычно таким путем поступают в клетки высокомоле-
кулярные вещества и даже гетерогенные ассоциаты. Этот путь имеет опре-
деленное значение при проникновении токсинов через эндотелиальные
клетки альвеол и стенок капилляров.
Особый вид транспорта веществ через биомембраны представляет проник-
новение веществ через ГГБ, отделяющий кровь от тканей. Структурными
элементами ГГБ являются эндотелиальные клетки (ЭК) стенок капилляров,
межклеточное вещество и другие специфические образования. Внутреннюю
поверхность стенок капилляров выстилают ЭК (толщиной 0,3—3 мкм), как
правило, по 4—6 клеток по периметру капилляра. В местах контакта между
ЭК имеются межклеточные щели шириной до сотен нанометров,
периодически закрывающиеся специальными заслонками. Поверхность
стенок ЭК выстлана молекулярным слоем цементирующего вещества, в
состав которого входят гликопротеиды, мукополисахариды и протеинат
кальция (Са+2). Этот слой в капиллярах ЦНС имеет суммарный
положительный заряд, что является одной из причин плохой проницаемости
катионов и веществ с положительным зарядом в ткани ЦНС. В ЭК имеются
поры (мелкие, диаметром 10 нм и крупные, диаметром 60 нм и более),
которые иногда пронизывают ЭК до базальной мембраны.
ЭК «окутаны» снаружи базальной мембраной толщиной 30—100 нм, со-
стоящей из липопротеидов, кератиноподобных белков, липидов и мукопо-
лисахаридов. Снаружи базальной мембраны располагаются особые мураль-
ные клетки и их отростки, погруженные в межклеточное вещество, которые
вместе представляют как бы единый каркас для ЭК.
На рис. 1.3 схематически показаны основные пути проникновения ОВ,
токсинов через стенки кровеносных капилляров из кровяного русла:
1) через поры в клетках эндотелия (через крупные поры проникают вещества
с молекулярной массой приблизительно 103—104 и через мелкие поры —
низкомолекулярные вещества);
49
Рис. 1.3. Пути проникновения ОВ и токсинов из крови через стенки капилляров в ткани-мишени. I — через
поры в клетках эндотелия; II — через щели между клетками эндотелия; III — с помощью пиноцитозных
пузырьков (ПП); 1 — плазма крови; 2 — цементирующее вещество (ЦВ) протеинат кальция, имеющее
положительный заряд; 3 — клетки эндотелия (КЭ); 4 — базальная мембрана (БМ) капилляра; 5 —
муральные клетки (МК); 6 — межклеточные пространства; 7 — астроциты (А); 8 — дендрит (Д),
подходящий к нейрону; 9 — синапс; 10 — биомишени (ферменты и рецепторы в сина- птической щели);
11 — нейрон.
50
миелиновая оболочки) и области синапсов, которые не защищены плотными
мембранами. Именно в этих областях расположены биомищени, на которые
направлено действие многих нейротропных веществ (тетродотоксин,
сакситоксин, ФОВ и др.). Иногда вещества проникают внутрь нейронов и по-
ражают биомищени, расположенные в области субклеточных образований.
Так, ботулинические токсины и некоторые нейротропные пептиды
проникают внутрь синаптических бляшек с током аксоплазмы и поражают
пресинаптический аппарат выделения медиатора — ацетилхолина. В таких
случаях веществам приходится преодолевать клеточно-тканевые барьеры.
Низкомолекулярные липидофильные вещества, как уже отмечалось выше,
быстро проникают через подобные барьеры. Высокомолекулярные вещества
— белки и пептиды, многие из которых являются гидрофильными
веществами и для которых коэффициенты диффузии через биомембраны, как
правило, значительно более низкие, намного медленнее достигают
биомишеней. Считается, что с увеличением молекулярной массы на 3—5
порядков время проникновения веществ к биомишеням в нервной ткани
увеличивается на 2—3 порядка и становится равным 103-105 с, что
наблюдается при действии бактериальных токсинов.
В целом можно считать, что после поступления ОВ в кровь распределение
его по органам и тканям, пути и скорости метаболических превращений и
скорость проникновения вещества через клеточно-тканевые барьеры во мно-
гом определяют скорость накопления вещества в области молекулярных био-
мишеней и токсичность вещества.
1.8.2. Действие отравляющих веществ и токсинов на биохимические
мишени. Токсико-динамическая стадия
Физиологическая активность веществ в основном обусловлена их дейс-
твием на биохимические мишени.
В 1891 г. в Санкт-Петербурге в диссертации Д.Л. Романовского впервые
было описано явление избирательной токсичности. Показано, что лечебное
действие хинина при малярии связано с избирательным действием на
паразита (малярийного плазмодия), при котором кровяные клетки хозяина
(человека) не затрагиваются. Основные положения учения о химиотерапии
были сформулированы в начале XX в. П. Эрлихом, который полагал, что
лекарственное вещество, подобно «магической пуле», избирательно
поражает микроорганизмы (мишени) благодаря избирательному
взаимодействию с хеморецепторами на оболочках клеток-паразитов. Позже в
работах химиков, фармакологов и токсикологов были разработаны основные
принципы избирательной токсичности физиологически активных веществ
[Альберт Э., 1989].
51
В современной литературе под биохимическими мишенями (biochemical
targets) обычно подразумевают биологически важные соединения и молеку-
лярные структуры, взаимодействие с которыми физиологически активных
веществ приводит к изменениям биохимических и биофизических процессов
в клетках и тканях на молекулярном и субклеточном уровнях, а в по-
следующем — к изменениям обмена веществ и физиологических функций
организма. Основными биомишенями ОВ и токсинов в большинстве случаев
являются ферменты и рецепторы нервной ткани. Некоторые ТВ взаимодей-
ствуют с нуклеиновыми кислотами, белками рибосом, структурными эле-
ментами биомембран и другими биологически важными соединениями (табл.
1.17).
Таблица 1.17. Действие ОВ и токсинов на биохимические мишени
ОВ и токсины Основные биомишени
ФОВ (GB, CD, VX) Ацетилхолинэстераза нервной ткани
Иприты (Н, HD, HN3) Гексокиназа (фермент углеводного обмена) и нуклеиновые
кислоты клеток
Люизит (L) Пируватоксидаза (фермент углеводного обмена)
Синильная кислота (АС) Цитохром а3 (цитохромоксидаза) дыхательной цепи
окисления в митохондриях нейронов и других клеток
Фосген (СО) и др Липиды и белки мембран эндотелиальных клеток стенок
альвеол легких
Окись углерод Гемоглобин — транспортный белок крови (эритроцитов)
Вещество BZ и др. Холинорецепторы синапсов ЦНС
LSD и др. Рецепторы и ферменты метаболизма серотонина
и норадреналина ЦНС
Вещества раздражающего Рецепторы чувствительных нервных волокон слизистых
действия оболочек глаз и верхних дыхательных путей
(CS, CR и др.)
Ботулинические токсины Молекулярные структуры внутренних поверхностей
пресинаптических мембран и оболочек везикулярных
пузырьков в синаптических бляшках холинергических
синапсов
Рицин, дифтерийный токсин Белки рибосом клеток
Сакситоксин (TZ), Ионные (натриевые) каналы мембран нервных волокон
тетродотоксин и др.
Бициклофосфаты и другие Рецепторы и структуры ионофоров на
ГАМК- литики постсинаптической мембране ГАМКергических синапсов
ЦНС
Афлатоксины Мембраны лизосом клеток и нуклеиновые кислоты
Диоксин Рецепторы, хромосомы и ферменты клеток
52
1)высокие скорости взаимодействия ОВ с биомишенями, несмотря на то,
что концентрации ОВ и токсинов в области биомишеней, как правило,
низкие:
2) высокая избирательность в действии на определенные биомишени;
3) высокая прочность комплексов ОВ и токсинов с биомишенями, которые
не распадаются в присутствии высоких концентраций субстратов;
4) биомишени, поражаемые ОВ и токсинами (особенно при поражении
веществами смертельного действия), имеют большое функциональное зна-
чение для регуляции жизненно важных биохимических и физиологических
процессов в организме высших млекопитающих. Под термином «жизненно
важный» следует понимать те основные ключевые этапы обмена веществ и
механизмов регуляции процессов на уровне систем органов, нарушение
которых приводит к развитию патологических процессов и возникновению
симптомов поражения.
Остановимся на указанных особенностях более подробно.
Высокотоксичные вещества характеризуются поражающим эффектом при
действии на организм в малых дозах. В клетках и тканях создаются концен-
трации веществ, соизмеримые с концентрациями активных центров фермен-
тов, рецепторов и других биомишеней. Эти концентрации могут быть очень
низкими — порядка 10-7 – 10-8М и ниже. Это в свою очередь могло бы оз-
начать, что при взаимодействии с биомишенями в стехиометрических соот-
ношениях скорости реакций должны были бы быть тоже низкими. Однако,
как правило, все высокотоксичные вещества имеют высокое сродство к ак-
тивным центрам ферментов и рецепторов: константы сродства (Ki) порядка
10-7 – 10-8М и ниже и биомолекулярные константы скорости реакции (k i) 10"'^
—10"® л • моль"'/ мин"1 и выше. Такое высокое сродство ингибиторов к
активным центрам ферментов на стадии образования комплексов с фермен-
тами и высокие константы скорости реакции означают, что даже при низких
концентрациях ингибиторов угнетение ферментов будет выраженным (на
50 % и более) в течение короткого времени (секунды, минуты). Действие ОВ
и токсинов на основные биомишени приведена в табл. 1.18.
Взаимодействие ОВ с биомишенями приводит к образованию комплексов
с участием кулоновских, гидрофобных, донорно-акцепторных и водородных
связей. Прочность комплексов зависит от характера и количества связей
между молекулой вещества и биомишенью. В некоторых случаях возникает
ковалентная связь между молекулой ОВ и функциональной группой актив-
ного центра фермента (биомишени), как правило, с нуклеофильными груп-
пами биомишеней. Подобные комплексы прочны (энергия связей, участву-
ющих в образовании комплексов ОВ с биомишенями, достигает десятков и
53
сотен килоджоулей) и не разрушаются в присутствии высоких концентраций
субстратов (табл. 1.18).
Обычно специфические ингибиторы ферментов взаимодействуют с теми
же функциональными группами в активных центрах ферментов, что и суб-
страты. В зависимости от прочности комплексов фермента с ингибитором и
от конкуренции ингибитора с субстратом за активный центр фермента (ре-
цептора) выделяют различные типы ингибиторов ферментов и веществ, вза-
имодействующих с рецепторами.
Следует особо отметить, что биомишени, поражаемые ОВ и токсинами,
имеют важное функциональное значение для регулирования биохимических
и физиологических процессов в организме.
В некоторых случаях в организме поражается не одна, а несколько био-
мишеней. Среди тех, на которые направлено действие ОВ и токсинов,
условно выделяют первичные (основные) и вторичные биомишени.
Основными (первичными) называются биомишени, с которыми ОВ и
токсины избирательно взаимодействуют на токсикодинамической стадии
благодаря высокому сродству к ним. Поражение — основной пусковой
механизм в развитии последующих процессов. Так, например, биомищени
токсичных нейротропных веществ (ФОВ, сакситоксина, ботулинических
токсинов и др.), приведенных в табл. 1.17, — это первичные биомищени.
Вторичные биомишени — это другие биомищени, с которыми ОВ
взаимодействуют, помимо основных биомишеней. Так, ФОВ, помимо
взаимодействия с ацетилхолинэстеразой, действуют на другие эстеразы и
рецепторы. Следует отметить, что деление на первичные и вторичные
биомишени в определенной степени условно, особенно для веществ с менее
выраженным избирательным действием: например, иприт ингибирует
фермент углеводного обмена (гексокиназу), а также действует на
нуклеиновые кислоты. Это означает, что в клетках расстройство
биохимических процессов идет по нескольким направлениям и приводит к
нарушениям многих биохимических звеньев (поэтому иприт часто называют
полифункциональным клеточным ядом). Аналогичным действием обладают
рицин, диоксин, афлатоксины и другие клеточные яды.
54
Образование ковалентных связей. ОВ как ацилирующие агенты:
ФОВ, карбаматы Нуклеофильная группа (активированная НО-группа) остатка серина
в эстеразном участке холинэстераз
Нуклеофильные группы (HS-группы) активного центра фермента
Люизит
пируватоксидазы
Нуклеофильные группы (H2N—, HN=, HS—, НО— и др.) белков,
липидов, жирных кислот биомембран пневмоцитов стенок альвеол и
Фосген, дифосген и др.
эндотелиальных клеток стенок капилляров кровеносных сосудов
легочной ткани
Образование прочных комплексов. ОВ и ТВ — комплексообразователи
HСN, цианиды Fe+3 цитохромоксидазы (цитохромдаз) в митохондриях нейронов и
клеток миокарда
Fe+2 гемоглобина (НЬ, Fe+2 ) с образованием карбоксигемогло- бина
Окись углерода
(НЬ, Fe2+, СО)
Сакситоксин, тетродоток- Молекулярные компоненты структур и Ма^-каналов биомембран
син аксонов
Агент BZ Активные центры холинорецепторов в холинергических синапсах
ЦНС
Низкомолекулярная (А) субъединица рицина образует комплексы с
Рицин белками рибосом и внерибосомальных факторов, участвующих в
трансляции полипептидных цепей на рибосомах
ГАМКпитики Функциональные группы хлорионного рецепторного комплекса в
ГАМКергических синапсах ЦНС
Функциональные группы биомембран везикулярных пузырьков и
внутренних поверхностей синаптических бляшек холинергических
Ботулинические токсины
синапсов парасимпатических отделов периферической и
центральной нервной систем
Токсины, обладающие ферментативной активностью
После сорбции на поверхности клеток субъединицы (А и В) могут
Ботулинические и другие обладать ферментативной активностью или запустить комплексы
бактериальные токсины, ферментов клеток, в результате чего разрушаются биомембраны
рицин клеток и происходит разрыв дисульфидной связи (—S—S—) между
субъединицами А и В токсинов, и внутрь проникают более легкие
(А) субъединицы
Фракции некоторых токси-
Помимо нейротоксинов, ботулотоксины содержат гематоглю-
нов, обладающие различ-
тирующие фракции. Некоторые токсины (змей и др.) вызывают
ными механизмами дейс-
гемолиз эритроцитов. Есть и другие примеры
твия
Токсины, получаемые пол усинтетическим путем
Одним из направлений исследований в области белковой инженерии
Химерные токсины, отде-
за рубежом является получение химерных токсинов, состоящих из
льные субъединицы кото-
разных субъединиц (А и В) различных токсинов (например,
рых обладают разными ме-
субъединицы В — из бактериальных токсинов и субъединицы А —
ханизмами токсического
из фитотоксинов. Основные идеи работ подтверждены в опытах in
действия
vitro на культурах изолированных клеток и тканей
55
относятся нейротропные (ФОВ, ботулотоксины и др.), кардиотропные
(кардиогенины — строфантин и др.), миотропные (кротоксин, диамфотоксин
и др.), гепатотропные (афлатоксины, ядовитые технические жидкости и др.),
почечные яды (этиленгликоль и др.) и другие токсичные вещества
системного действия;
2) цитотоксичные яды — вещества с менее выраженной специфичностью
к определенным клеткам и тканям и вызывающие нарушения основных био-
химических и биофизических процессов жизнедеятельности любой клетки и
ткани, в которые они проникают. К ним, например, относятся ингибиторы
ферментов углеводного обмена (иприты, люизит и др.), вещества, действую-
щие на нуклеиновые кислоты (иприты и др.), нарушающие синтез белков на
рибосомах (рицин и др.), и др.
В некоторых случаях отнесение вещества к той или иной группе бывает
условным и часто выделяют третью группу;
3) цитотоксичные вещества с выраженной специфичностью к
определенным клеткам и тканям (цианиды — ингибиторы цитохрома аз с
преимущественным действием на нейроны и клетки миокарда, иприты и
другие алкилирующие мутагенные вещества с преимущественным действием
на быстроделящиеся клетки и др.).
Ниже рассматриваются механизмы токсического действия ОВ и токсинов
на определенные биомишени.
56
Кi+1
Е+1 = Е I` + Х - (1)
i
К -1
Е + 1 → Е I1. (2)
Обратимое торможение характеризуется равновесием между ферментом и
ингибитором с определенной константой равновесия, которая является мерой
сродства ингибитора к ферменту. Обычно используемая константа
ингибирования (Ki) с помощью которой оценивается эффективность обрати-
мого ингибитора, равна обратной величине сродства ингибитора к ферменту:
Ki = Кi -1 / / Кi+1 (т. е. чем меньще Ki, тем выше степень сродства
ингибитора к ферменту). Характерно, что для системы фермент —
обратимый ингибитор — степень торможения фермента достигается
довольно быстро и затем не зависит от времени.
В отличие от обратимого необратимое торможение непрерывно усилива-
ется, так что в конце концов наступает полное (или почти полное) угнетение
даже при очень низких концентрациях ингибитора. Эффективность ингиби-
тора в последнем случае выражается не константой равновесия, а константой
скорости реакции в уравнении 1, 2), которая соответствует доле фермента,
подвергшегося торможению за определенный промежуток времени при оп-
ределенной концентрации ингибитора (чем выше К I, тем выше сродство ин-
гибитора к ферменту).
Ингибиторы, взаимодействующие с теми же функциональными группами
активных центров ферментов, с которыми взаимодействуют субстраты,
называются конкурентными, а ингибиторы, снижающие активность
ферментов вследствие реакции с другими функциональными группами, —
неконкурентными.
В качестве примера в табл. 1.19 приведены некоторые ингибиторы фер-
ментов различных типов, представляющие интерес для военной химии и
токсикологии.
57
фосфорорганические ингибиторы нарушающие пространственную
ХЭ. Иприт для гексокиназы и др. структуру ферментов
Обратимые Галантамин и другие обратимые Некоторые ароматические
ингибитроры ХЭ соединения для ХЭ
58
Известно [Aldridge W., 1971], что для некоторых ФОВ при взаимодействии
с ХЭ Ki равны 10 -7 – 10-8 М и менее, т. е. отношения kmj/ki = 102—103 и более.
Это означает, что при взаимодействии ФОВ с ХЭ ферментингиби- торный
комплекс будет образовываться при концентрациях ингибитора в сотни и
тысячи раз меньших, чем при концентрациях субстрата ацетилхолина (АцХ).
Поэтому ФОВ вызывают угнетение ХЭ в присутствии субстрата AцХ.
Специфичность ингибитора к ферменту на стадии образования Е1-комп- •
CKca зависит от структурного соответствия ингибитора активному центру
фермента и сил, определяющих образование комплексов (кулоновских, гид-
рофобных, диполь-дипольных взаимодействий и водородных связей).
Избирательная специфичность в действии ОВ проявляется высоким сродс-
твом к ферменту-мишени. Как правило, отмечается корреляция между степе-
-.ью торможения фермента-мишени и тяжестью поражения. Так, уже в пер-
вых работах по исследованию ФОВ была показана зависимость между
степенью торможения ацетилхолинэстеразы (АХЭ) ЦНС и тяжестью пора-
жения [Коган Ю.С., 1981; Grob D., 1950].
59
скорости которых определяют биохимическую сторону метаболических про-
цессов веществ в организме.
Количественной характеристикой специфичности ФОВ к активным цен-
трам ферментов является бимолекулярная константа скорости угнетения
фермента — кi. Чем больше кi. кем более выражено торможение фермента
при более низких концентрациях ингибитора. В качестве примера в табл. 1.20
приведены константы скорости угнетения эстераз некоторыми ФОВ. Из таб-
лицы видно, что в случае производных метилфосфоновой кислоты константы
скорости угнетены, АХЭ выше констант скоростей угнетения других эстераз.
Рассмотренные примеры иллюстрируют биохимическую избирательность
действия веществ на молекулярном уровне, что является причиной избира-
тельного угнетения определенных биомишеней при действии ОВ в низких
концентрациях, в то время как в этих условиях с другими биомишенями ОВ
не вступают в реакцию или вызывают не столь сильное торможение. Этим
ФОВ отличаются от ФОС-пестицидов [Бресткин А.П., 1973; Розенгарт В.И.,
1973, 1978].
1.10. Действие токсичных веществ на нуклеиновые кислоты
Некоторые ОВ и другие токсичные вещества специфически действуют на
нуклеиновые кислоты и нарушают их матричную функцию. Различают
вещества, нарушающие:
репликация ДНК
транскрипцию в основном ингибиторы РНКаз
регуляторные механизмы функционирования отдельных оперонов
хромосом.
Вещества, взаимодействующие с ДНК и РНК, обладают различными ме-
ханизмами действия. Некоторые вещества (актиномицин и др.) образуют
комплексы с ДНК, нарушая работу ферментов. Для других веществ хаак-
терен так называемый процесс интеркаляции (вставления) молекулы веще-
ства между соседними парами оснований двойной спирали ДНК, что приво-
дит к нарушению последовательности нуклеотидов в ДНК и сдвигу рамки
при транскрипции. Подобным действием обладают некоторые мутагенные
ароматические соединения (профлавины, диоксин и др.). Некоторые веще-
ства взаимодействуют с ДНК, алкилируя, ацилируя и окисляя функциональ-
ные группы нуклеотидов. Появление модифицированных нуклеотидов по-
вышает вероятность ошибок спаривания при репликации и транскрипции,
что приводит к мутациям — нарушениям строения и функций нуклеиновых
кислот.
Для понимания сущности химического мутагенеза рассмотрим механизм
мутагенного действия азотистой кислоты, который впервые был исследован в
60
начале 60-х годов XX в. на вирусе табачной мозаики и, как было показано,
состоит в дезаминировании оснований нуклеиновых кислот. Было установ-
лено, что при этом появляется несколько вариаций (схема 1.1). В результате
дезаминирования цитозина возникает урацил, который способен к образо-
ванию водородных связей теперь уже не с гуанидином, а с аденином (см. схе-
му 1.1, И, а), при последующих репликациях ДНК это приводит к замене ос-
нований Ц— Г→ А—Т (см. схему 1.1, И, б). При дезаминировании аденина
образуется гипоксантин, который соединяется не с тиамином, а с цитозином
(см. схему 1.1, 1П, а), в результате чего при последующей репликации ДНК
пара оснований А—Т заменяется на Г— Ц (см. схему 1.1, III, б). При дезами-
нировании гуанина образуется ксантин, однако, он, как и гуанин, соединя-
ется с цитозином (см. схему 1.1, IV, а), поэтому дезаминирование гуанина не
вызывает мутации (см. схему 1.1, IV, б). Как видим, не всякое изменение в
основаниях нуклеиновых кислот приводит к мутации.
Таким образом, при действии азотистой кислоты следует ожидать замены
пары А—Т →Г—Ц и пары Г—Ц →А—Т в ДНК и соответствующих замен в
РНК с учетом, что на место тимина становится урацил.
В настоящее время хорошо изучен молекулярный механизм действия
многих других мутагенных веществ. Например, геометрически подобный ти-
мину 5-бромурацил, включающийся в ДНК при репликации, может обра-
зовывать пары и с аденином, и с гуанином. В результате этого будут возни-
кать при дальнейшей репликации ДНК замены пар оснований Г—Ц → А—Т
и А—Т Г—Ц. Включение 2-аминопурина ДНК, способного образовывать
пары как с тимином, так и с цитозином, обычно приводит, с одной стороны, к
замене А—Т→ Г—Ц, а с другой — Г—Ц→ А—Т. Изучено мутагенное дейс-
твие и других веществ. Для военной токсикологии наибольший интерес пред-
ставляют мутагенные алкилирующие соединения.
Еще в 40-х годах XX столетия было показано, что некоторые алкилиру-
ющие соединения (иприты, этиленимины и др.) обладают выраженным му-
тагенным действием. Эти вещества реагируют с нуклеиновыми кислотами,
алкилируя пуриновые основания и фосфатные группы [Кнунянц И.Л., Ло-
шадкин Н.А., 1965]. Алкилирование оснований (в основном гуанина) при-
водит к разрыву гликозидных связей между основаниями и остатками дез-
оксирибозы, что вызывает депуринизацию ДНК. Наиболее эффективны
бифункциональные алкилирующие соединения (иприты и др.), которые вза-
имодействуют с соседними парами оснований, вызывая двустороннюю
депуринизацию ДНК. (схема 1.2).
61
дезаминирующих веществ
CH3
62
HN
N N
А Т Ц Г Т А Г А
Т А Г Ц А Т Ц Т
63
Аманитин — токсичный полипептид, вьщеленный из грибов Amanis
phalloides (бледная поганка); специфический ингибитор транскрипции и
РНК-полимераз. Токсичен: LD50 = 0,04 мг/кг (внутрибрюшинно, внутримы-
шечно, подкожно), для человека 0,1 мг/кг.
Экзотоксин, продуцируемый Вас. thuringiensis, — небелковый яд, в состав
которого входят аденин, D-рибоза, D-глюкоза, соединенные эфирной связью
с фосфорилированной аллариновой кислотой. Ингибитор транскрипции.
Токсичен: LD50 = 0,016 мг/кг (внутримышечно).
Подавление репликации и транскрипции вызывают также некоторые аф-
латоксины, продуцируемые грибами Aspergillus flavus.
Некоторые вещества обладают специфическим механизмом действия, вы-
зывая хромосомные мутации. Так, колхицин, выделенный из растения
Colchicum autumnale, является специфическим ингибитором митоза, блоки-
рует расхождение хромосом и вызывает гибель клеток. Токсичен: LD 50 = 3 мг
для мыши, введенной внутримышечно или внутрибрюшинно, 0,125 мг/кг для
собаки, введенной per os, для человека 0,3 мг/кг (per os).
Известны и другие токсичные вещества, воздействующие на генетический
аппарат клеток, например диоксин — сильно мутагенное вещество, примесь
к рецептурам дефолиантов, использовавшихся армией США во Вьетнаме (см.
главу 4).
64
2)в действии на рибосомы различных организмов (простейших и высших
организмов). Многие антибиотики (стрептомицин, тетрациклины, эритро-
мицин и др.), являющиеся специфическими ингибиторами трансляции у
бактерий, используют в качестве противобактериальных средств.
Некоторые ингибиторы синтеза белков на рибосомах высших организмов
обладают высокой физиологической активностью в отношении млекопита-
ющих. К ним относятся рицин, абрин, модецин, лектин и другие полипеп-
тидные токсины (молекулярная масса 30 000—80 ООО), выделенные из рас-
тений, которые, как правило, ингибируют стадию элонгации. Высокоток-
сичный бактериальный дифтерийный токсин (LD50 = 0,2 мкг/кг, введен
внутримычшечно, внутрибрюшинно) также блокирует синтез полипептидов
за счет действия на факторы элонгации и НАД. Токсин Т-2 — один из ми-
котоксинов трихотецинового ряда, продуцируемых различными видами гри-
бов рода фузариев, блокирует стадию инициации (LD 50 5 мг/кг для крысы,
введенный per os). Угнетение синтеза белков на рибосомах приводит к на-
рушению синтеза ферментов, белков мембран клеток и белков, участвующих
в иммунной защите организма, а также других белков клеток и тканей, что
вызывает нарушения обменных процессов и физиологических функций ор-
ганизма.
1.12. Действие отравляющих веществ на митохондрии. Отравляющие
вещества как ингибиторы тканевого дыхания и энергетических
процессов в клетках
Некоторые ОВ и токсины (люизит, цианиды и др.) являются ингибиторами
тканевого дыхания и энергетических процессов в клетках [Курляндский Б.А.,
Ротенберг Ю.С. и др., 2002].
Тканевое дыхание — совокупность биохимических процессов в клетках и
тканях, связанных с окислением углеводов (глюкозы и др.) и липидов, при
котором образуются макроэргические соединения (АТФ и др.). Различают
два типа тканевого дыхания: аэробное — с участием кислорода, который
доставляется в клетки гемоглобином крови, анаэробное — в отсутствие
кислорода. При анаэробном дыхании образуется молочная кислота, при
аэробном дыхании конечными продуктами окисления глюкозы являются СО2
и Н2О. Основные процессы тканевого дыхания происходят в митохондриях
клеток. В нейронах, клетках сердечной мышцы и некоторьгх других тканях
основным является аэробное дыхание.
Для понимания механизма действия токсичных веществ целесообразно
рассмотреть основные стадии тканевого дыхания (рис. 1.4):
1)окисление углеводов (глюкозы и др.) до пировиноградной кислоты (пи-
рувата), из которой в последующем при анаэробном дыхании образуется мо-
65
лочная кислота, а при аэробном — ацетил-кофермент А (ацетил-КоА). На
этой стадии из 1 моля глюкозы образуются 2 моля АТФ;
2) включение ацетил-КоА в цикл трикарбоновых кислот и его метаболи-
ческие превращения до СО2 (NaHC03) с отщеплением от окисляемых суб-
стратов атомов водорода, которые поступают к коферментам дегидрогеназ
(НАД и флавопротеидам), а от них к коферменту Q (KoQ);
66
валентность атомов железа в цитохромах при транспорте электронов
постоянно изменяется (Ре2+ ^ РеЗ+). На последнем цитохроме (цитохром аз),
который называется также цитохромоксидазой, завершается дыхательная
цепь переносчиков электронов. Окисление восстановленного цитохрома а^
идет за счет передачи электронов на кислород с участием протонов с
образованием воды:
4е (4Fe 2+, цитохром а з ) + 4Н + + 0 2 2Н2О + 4FeЗ+ (цитохром a3)
67
1.13. Действие отравляющих веществ на клеточные мембраны
ОВ удушаюш,его действия, которые были применены во время Первой
мировой войны, вызывают нарушения проницаемости мембран клеток стенок
альвеол и кровеносных капилляров легких, в результате чего развивается
отек легких. В данном случае речь идет о специфическом действии ОВ на
мембраны клеток альвеол. Однако в настоящее время известно большое
количество веществ, нарушающих функции клеточных мембран
(мембранотропные яды). Механизм токсического действия подобных
веществ разнообразен, так же как и многообразны функции биологических
мембран. Этому вопросу в последние десятилетия посвящены многие
фундаментальные исследования в биоорганической химии и молекулярной
биологии [Овчинников Ю.А., 1992]. Остановимся лишь на некоторых
примерах, иллюстрирующих механизмы действия мембранных ядов.
Многие вещества специфически нарушают проницаемость биомембран, в
частности ионные потоки. Так, валиномицин и грамицидин — токсичные ан-
тибиотики (LD50 равны 1 и 3 мг/кг соответственно, введенные внутримы-
шечно, подкожно) вызывают нарушения проницаемости К+ и Na+ через мем-
браны митохондрий. Интересен механизм действия валиномицина —
циклододекандепсипептидаза, содержащего по 2 остатка L-вал, D-вал, L-мо-
лочной кислоты и D-a-оксиизовалериановой кислоты, образующих 36-член-
ный цикл (кольцо), внутрь которого попадает К"*", который оказывается в
гидрофобном бласлете молекулы валиномицина. В таком виде К"*"
транспортируется через мембраны митохондрий. В результате нарушений
ионньгх потоков через мембраны митохондрий блокируется синтез АТФ.
В некоторых случаях имеется нарушение ионных потоков вследствие уг-
нетения ферментов мембран. Так, строфантин (оубаин) (LD 50 = 17,2 мг/кг,
введенный внутрибрющинно, внутримышечно) является ингибитором
Na+ /К+-зависимой АТФазы — фермента, участвующего в активном транс-
порте катионов через мембраны клеток сердечной мышцы (в основном на-
рушается транспорт Na+).
Некоторые токсичные вещества действуют на мембраны лизосом клеток.
Так, афлатоксины (LD50 = 7,5 мг/кг) и другие микотоксины вызывают на-
рушения проницаемости лизосом клеток печени. Известны и другие токсич-
ные мембранотропные вещества.
67
1.14. Вещества, нарушающие высшие системы регуляции обмена
веществ и физиологических функций организма, токсичные
нейротропные вещества
Обмен веществ и физиологические функции организма регулируются на
различных уровнях (молекулярном, клеточном, органотканевом, системном и
целостного организма). К высшим системам регуляции относятся нервная и
гуморальная системы высших животных и человека. Особо важное значение
имеет нервная система человека, которая возникла в ходе эволюции живых
су- ш,еств на Земле.
Токсичные вещества, избирательно действующие на нервную систему,
обычно называются токсичнъши нейротропными веществами. Существуют
различные классификации нейротропных веществ: по характеру действия на
нервную систему и возникающим эффектам, по действию на различные
отделы нервной системы и др. Наиболее часто используют классификацию
нейротропных веществ, предложенную Ю.А. Овчинниковым, в которой
учтены механизмы действия на проведение нервного импульса.
В соответствии с этой классификацией различают вещества, нарушающие
1)проведение нервного импульса по нервному волокну (аксону) — аксо-
нального действия;
2)синтез, хранение и выделение медиатора в синаптическую щель — пре-
синаптического действия;
3) взаимодействие медиатора с рецептором и функционирование постси-
наптической мембраны, а также угнетающие ферменты разложения медиа-
тора — постсинаптического действия.
Примеры веществ аксонального действия — тетродотоксин и сакситоксин,
блокирующие натриевые каналы нервных волокон. Примеры веществ,
нарушающих проведение нервных импульсов через синапсы, в которых ме-
диатор — ацетилхолин и ГАМК, а также их токсикологическая характерис-
тика приведены в табл. 1.21.
Под рецепторами в широком смысле подразумеваются структурные еди-
ницы мембран клеток, с которыми избирательно взаимодействуют медиато-
ры, гормоны и другие физиологически активные вещества (ФАВ), вызыва-
ющие определенные биоэффекты в клетках. Рецепторы мембран нервных
клеток представляют собой белки, имеющие специфическую третичную и
четвертичную структуры. Так, холинорецепторы состоят из 4—5 субъединиц
с молекулярной массой 60 000—80 000.
Многие рецепторы образуют прочные комплексы с белками, липидами и
другими компонентами биомембран (гликопротеидами и др.). При взаимо-
действии со специфическим эффектором (медиатором, гормонов или ФАВ)
68
происходят определенные конформационные изменения рецептора. Это
приводит к изменению конформации структурных элементов постсинапти-
ческой мембраны в непосредственной близости от ионных каналов (ионо-
форов).
Основные механизмы преобразования возбуждения рецепторов в опреде-
ленные биоответы клеток (рис. 1.5):
а) раскрытие ионных каналов и возникновение ионных потоков, что при-
водит к изменению поляризации биомембран (рис. 1.5, А).
69
Рис. 1.5. Действие медиатора (гормона) на рецептор, сопровождающееся раскрытием ионных каналов (А),
активацией ферментов на внутренней поверхности биомембраны и образованием под действием фермента
внутриклеточного медиатора (цикпо-АМФ), который вызывает биоэффекты в клетке (Б).
а—состояние покоя, ионный канал закрыт; б—состояние возбуждения при образовании комплекса
медиатора (гормона) с рецептором, ионный канал раскрыт.
ИК — ионный канал; ЛМ — липидная мембрана; ЛМ' — липидная мембрана после возбуждения рецептора
и МИП (МИП — модулятор ионной проницаемости); МИП' — возбужденный медиатор ионной
перестройки; Р — рецептор; Р' — возбужденный рецептор; Т—трансдуктор; Т'—возбужденный
трансдуктор; Ф — фермент; Ф — активированный фермент. АТФ — аденозинтрифосфат; цАМФ —
циклический аденозинмонофосфат (внутриклеточный медиатор).
70
Таблица 1.22. Примеры некоторых агонистов и антагонистов
холинергических и ГАМКергических синапсов и вызываемых ими
эффектов
71
отмечалось, условно выделяют два основных типа наиболее важных рецеп-
торов, регулирующих ионную проницаемость биомембраны (БиоМ) клеток.
1. Рецепторы (Р), непосредственно связанные с «быстрыми» ионными
каналами (БИК). К ним относятся холинорецепторы (в комплексе с Na +-
кaнaлaми), ГАМК-Р (в комплексе с С1- -ионными каналами) и др. При
взаимодействии Р, связанных с БИК, как правило, с низкомолекулярными
лигандами (ацетилхолином, ГАМК, мускарином и другими
холиномиметиками, фенобарбиталом, диазепамом и другими
ГАМКмиметиками) происходит возбуждение Р (Р → Р ⃰ ), обусловленное
определенными конформационными перестройками в молекулах белков и
липопротеидных комплексов. Эти перестройки в холинорецепторах и ГАМ
Крецепторах различные, что является примером уникальных специфических
особенностей белков Р как регуляторов метаболических процессов на
клеточном уровне. Активизированный рецептор (Р*) через модулятор ионной
проницаемости (МИП) способствует раскрытию ионного канала (в данном
случае БИК) на постсинаптической мембране (в случае нейротропных
синаптотропных веществ) и в более широком смысле — на БиоМ клеток.
Раскрытие БИК приводит к быстрому повышению концентрации ионов на
внутренней поверхности БиоМ, что в свою очередь сопровождается
деполяризацией (при прохождении по Na + -кaнaлaм) или гиперполяризацией
(при прохождении по С1- -каналам) БиоМ. На рис. 1.5 такие рецепторы
условно показаны как рецепторы и БИК типа А. Действие таких рецепторов
проявляется в виде биоэффектов на клеточном уровне в течение
миллисекунд.
2. Рецепторы, связанные с «медленными» ИК (условно MP). При возбужде-
нии таких Р под действием адреналина, полипептидных гормонов(инсулина
и др.) происходит активация фермента ^аденилатциклазы), находящегося на
внутренней поверхности БиоМ (Ф → Ф ). Это сопровождается синтезом из
аденозинтрифосфата циклоаденозинмонофосфата (АТФ → цАМФ) и из гуа-
нозинтрифосфата циклогуанозинмонофосфата (ГТФ → цГМФ), т. е. из нук-
леотидтрифосфатов образуются циклические нуклеотид монофосфаты,
которые являются своеобразными внутриклеточными гормонами (медиато-
рами), вызывающими различные биоэффекты в разных клетках под дейс-
твием их специфических ферментов. На рис. 1.5 Р и МИК условно показаны,
так же как Р типа Б. В функционировании этих Р важную роль играют
пуриновые основания, поэтому такие Р получили название «пуриновые ре-
цепторы».
72
Во второй половине XX в. было показано, что механизм передачи возбуж-
дения рецепторов связан с обменом циклических нуклеотидмонофосфатов:
циклического аденозинмонофосфата (цАМФ) и циклического гуанозинмо-
нофосфата (цГМФ). Наиболее подробно этот процесс исследован на примере
адренорецепторов и обмена цАМФ. Установлено, что рецептор, находящийся
на внешней стороне мембраны нервной клетки, через трансдуктор соединен с
каталитической субъединицей, обладающей ферментативной активностью и
называемой «аденилатциклазой». Под действием медиатора (норадренали-
на), гормонов или других биологически активных вешеств происходят воз-
буждение рецептора и активация аденилатциклазы, катализирующей синтез
цикло-АМФ из АТФ. Образовавшийся цАМФ взаимодействует с рецептор-
ной поверхностью другого аллостерического белка — фермента
протеинкина- зы, который состоит из двух субъединиц — регуляторной и
каталитической. Взаимодействие цАМФ с регулярной субъединицей
приводит к активации каталитической, которая катализирует
фосфорилирование специфических белков (белков мембран нервных клеток,
микроканальцев и др.), изменяя их свойства. Установлено, что
фосфорилирование белков мембран нервных клеток сопровождается
изменением ионной проницаемости нервных мембран, что лежит в основе
распространения импульса по БиоМ. После десорбции с аллостерического
участка протеинкиназы цАМФ подвергается воздействию фосфодиэстеразы
и превращается в АМФ.
Рассмотренная выше схема иллюстрирует современные представления о
механизмах действия медиаторов и гормонов на рецепторы. Эти механизмы с
участием циклических нуклеотидмонофосфатов достаточно общие. Так,
например, показано, что в холинергических нейронах возбуждение холино-
рецептора реализуется путем регуляции уровня и обмена цГМФ, т. е. имеет
место связь между рецепторами различных типов.
Известно, что молекулярный механизм действия некоторых физиологи-
чески активных веществ на ЦНС, проницаемость капилляров, сердечную
мышцу и другие специфические ткани связан с нарушением обмена цикли-
ческих нуклеотидмонофосфатов [Овчинников Ю.А., 2002].
72
первичные нарушения биохимических и биофизических процессов пос-
ле воздействия токсичных веществ на биомишени (на молекулярном и
субклеточном уровнях);
развитие патологических процессов (и одновременно компенсаторных
приспособительных реакций) на клеточном и органном уровнях, а
также на уровне систем органов и организма в ответ на действие ОВ;
развитие выраженных симптомов интоксикации (поражения).
73
1. Вещества, вызывающие центральные гипоксии вследствие действия яда
на клетки дыхательного и сосудодвигательного центров ЦНС. К ним
относятся некоторые наркотики (из группы опия), а также ФОВ (зоман)
при их прямом действии на клетки дыхательного центра. К этой же
группе могут быть отнесены некоторые судорожные яды центрального
действия (ГАМКантагонисты и др.), вызывающие сильные судороги, во
время которых развивается гипоксия.
1
( в специальной литературе описаны другие классификации гипоксии. В целях
краткого изложения основных представлений о механизмах гипоксии и их роли в развитии
поражения веществами смертельного действия в учебнике используется несколько
упрощенная классификация гипоксии.)
2. Вещества, вызывающие легочные гипоксии (гипоксические гипоксии), в
основе которых лежат нарушения функций органов дыхания. Обычно
выделяют две подгруппы ядов:
а) ОВ, действующие на легочную ткань (стенки альвеол), — ОВ удушающего
действия и др.;
б) ОВ, вызывающие бронхоспазм, бронхорею и другие нарушения про-
ходимости воздухоносных путей (ФОВ, мускарин и др.).
2. Вещества, вызывающие гемическую гипоксию, в основе которой лежит
уменьшение количества эритроцитов (гемолитические яды — гемолизины
змеиных ядов и др.) или уменьшение количества гемоглобина, способного
транспортировать кислород (образование карбоксигемоглобина при отравле-
ниях окисью углерода и метгемоглобина при действии метгемоглобинобра-
зователей).
3. Вещества, вызывающие тканевую гипоксию, в основе которой лежит уг-
нетение различных стадий тканевого дыхания: действие цианиона на ци-
тохромоксидазу, иприта — на гексогеназу, люизита — на пируватоксидазу и
фторкарбоновых кислот — на аконитазу и т.д.
4. Вещества, вызывающие гипоксии смешанного типа и
характеризующиеся одновременным нарушением функций нескольких
систем на различньгх уровнях. Именно такой тип гипоксии наиболее часто
встречается при интоксикации современными ОВ и токсинами смертельного
действия (ФОВ и др.).
Борьба с кислородным голоданием — одно из важнейших мероприятий
при оказании помощи пораженным веществами смертельного действия.
Одним из основных механизмов поддержания гомеостаза в организме
теплокровных млекопитающих является система кислотно-основного
баланса (КОБ) и транспорта газов крови (ТГК), количественные показатели
которых — важные критерии оценки состояния гомеостаза [Голиков С.И.,
74
Саноцкий И.В., Тиунов Л.Д., 1986; Лужников Е.А., 2001; Курляндский Б.А. и
др., 2002]. Имеется множество публикаций по оценке КОБ и ТГК при
интоксикациях различными ТВ, различных нагрузках в спортивной
медицине, клинических обследованиях и др.
В последние годы XX в. были опубликованы результаты исследований по
измерению показателей КОБ и ТГК (рН, BE, РСО 2, РО2, О2, Hb02, НСО3,
MtHb и др.) при интоксикации различными дозами ОВ (ТВ) смертельного
действия, вызывающих различные типы гипоксий. При этом были исполь-
зованы единые методические подходы.
75
Таблица 1.23. Изменение показателей КОБ и ТГК после введения крысам ОБ
и ТБ
Степень тяжести L-Dso Период, мин Величина, Минимальное значение БЕ
коэффициент в данном периоде время, мин
76
зывало образование MtHb и приводило к тому, что CN - из митохондрий кле-
ток поступали в кровь, образуя цианметгемоглобин. При тяжелой и сверхтя-
желой степени интоксикации веществом CN к 60-й минуте величины БЕ
были примерно на 15 единиц выще, чем в контрольных опытах.
При интоксикации норборнаном в отдельной серии опытов примерно через
2,5 ч вводили фенобарбитал (ФБ), являющийся ГАМКагонистом. Это вы-
зывало прекращение судорог и давало более высокие показатели БЕ.
Изложенное выше укладывается в современное представление о механиз-
мах действия ОВ, других ТВ и ФАВ. Вместе с тем следует отметить
некоторые наблюдения, требующие дискуссионного обсуждения.
При введении NaN02 из гемоглобина, в состав которого входит Fе2+, об-
разуется MtHb, содержащий Fe+3, который, с одной стороны, оказывает ле-
чебное действие, а с другой — не способен транспортировать кислород. По
логике это должно было бы приводить к уменьшению количества НЬ0 2 в
крови. Иными словами, скорость образования MtHb выше скорости
уменьшения количества НЬ02, что может быть объяснено двумя причинами.
Концентрация НЬ02 при интоксикации веществом CN была сильно
повышенной перед введением NaN02 (см. выше). Но по мере образования
MtHb из депо кровяных клеток (селезенка, печень, костный мозг, капилляры
легких и др.) происходит выброс новых порций эритроцитов. Образующиеся
дополнительные депо эритроцитов компенсируют образование MtHb. Со
временем отмеченная выше разница показателей сглаживается. Такое
явление служит основанием для применения при интоксикации HCN не
только 1, 2, но в отдельных случаях даже 3 ампул с антидотом
амилнитритом. Подобные заключения уже подтверждены в других
лабораториях, в том числе в опытах на собаках.
При введении зарина в течение короткого времени (несколько минут) на-
блюдается выраженное угнетение холинэстераз крови. В то же время нару-
шения КОБ и ТКГ развиваются в более позднее время (в опытах на крысах к
20—25-й минуте). Это, по-видимому, обусловлено тем, что именно к этому
времени происходит накопление зарина в ЦНС. Полученные данные могут
быть использованы как объективный показатель степени интоксикации раз-
личными веществами смертельного действия, а также с целью прогноза даль-
нейшего развития поражения.
77
1.16. Принципы антидотной терапии и профилактики интоксикации при
поражениях отравляющими веществами. Средства медицинской
защиты
В системе мероприятий по защите войск от оружия массового поражения
важную роль играют СМЗ, эффективность которых во многом зависит от
правильного и своевременного их использования.
При использовании СМЗ от химического оружия предусматривается
определенная последовательность действий, обусловленная общими
принципами профилактики и терапии острых поражений ОВ, которая
включает:
1) применение профилактических средств с целью предупреждения пора-
жений;
2) дегазацию кожных покровов и удаление ОВ и токсинов со слизистых
оболочек глаз и носоглотки с целью предупреждения поступления ОВ в
кровь (при проведении частичной санитарной обработки);
3) применение антидотов для купирования и устранения основных сим-
птомов поражения (при оказании первой медицинской помощи); оказание
врачебной, квалифицированной и специализированной медицинской помощи
на этапах медицинской эвакуации и в госпиталях.
Важное значение при оказании медицинской помощи пораженным ОВ и
токсинами имеют специфические антидоты и средства профилактики.
Антидоты — противоядия (anti — против, dotes — яды) — лекарственные
препараты, предназначенные для специфической терапии и профилактики
поражений ОВ, ядыми и токсинами. Антидоты обладают различными
механизмами действия, в соответствии с которыми (и учетом данных по
токсико-кинетическим стадиям действия ОВ и ядов) могут быть разделены
на несколько групп.
При оказании первой медицинской помощи в первую очередь
используются средства, направленные на предотвращение поступления ОВ в
кровь. Среди них можно выделить две подгруппы:
а) неспецифические средства — растворители и сорбенты, используемые
для удаления ОВ с поверхности кожи и слизистых оболочек. Так, при перо-
ральных поражениях применяют адсорбенты (активированный уголь и др.) и
в последующем делают промывание желудка. Для удаления ОВ с
поверхности кожи могут быть использованы растворители или
адсорбирующие средства типа «фулеровой земли». Применение этих средств
основано на физических принципах: растворении, сорбции и последующем
удалении;
78
б) специфические средства, вступающие в реакцию с ОВ и образующие
нетоксичные продукты. Эти средства создают с учетом реакционной способ-
ности ОВ. К ним относятся компоненты рецептур, входящие в состав ИПП;
БАЛ и унитиол в составе мазей, предназначенных для защиты от люизита, и
др. Эти средства антидотами обычно не называются.
В группе средств, повышающих скорость детоксикации и расхода О В в
крови и тканях на пути вещества к биомишеням, можно условно выделить
две подгруппы:
а) вещества, взаимодействующие с ОВ с образованием нетоксичных про-
дуктов. Например, альдегиды и кетоны, а также серосодержащие соединения,
которые реагируют с цианидами с образованием циангидринов и роданистых
соединений, соответственно БАЛ и унитиол, взаимодействующие с
люизитом, и др. Подобные средства, так же как и средства, предотвраща-
ющие поступление ОВ в кровь, разрабатываются с учетом реакционной спо-
собности ОВ;
б) вещества, индуцирующие синтез ферментов, повышающих скорость
детоксикации и расхода ОВ на токсико-кинетической стадии. В конце 60-х
годов XX в. было показано, что некоторые вещества (барбитураты и др.) спо-
собны активировать синтез ферментов, детоксицирующих эти же вещества, а
также некоторые другие чужеродные для организма соединения (ксенобио-
тики), в том числе ОВ. Установлено, что в клетках печени и других
внутренних органов стимулируется синтез ферментов (гидролаз, оксидаз и
др.) уже через несколько часов после введения барбитуратов (бензонала и
др.). Увеличение количества ферментов, с которыми взаимодействуют ОВ по
пути к биомишеням, приводит к повыщению скорости расхода ОВ в крови и
тканях на побочные процессы и, следовательно, к снижению токсичности
вещества. Некоторые из подобных веществ (бензонал и др.) исследовали за
рубежом в качестве возможных профилактических средств при отравлении
ФОВ.
К группе антидотов, действующих по принципу физиологического
(функционального) антагонизма, относятся вещества, вызывающие
физиологические (фармакологические) эффекты, противоположные тем,
которые возникают при действии ОВ. Так, при перевозбуждении
холинергических отделов нервной системы используют атропин и другие
холинолитики, при возбуждении ЦНС — нейролептики и транквилизаторы и
т. д.
Условно можно выделить две подгруппы подобных веществ:
1) антидоты, взаимодействующие с теми же биомищенями, с которыми
реагирует ОВ, имея к биомишеням более выраженное родство — конкурен-
79
тный вид физиологического (фармакологического) антагонизма. Пример —
холинолитики при интоксикации холиномиметиками и др. Обычно это бы-
вает в том случае, когда биомишени для ОВ и антидота — одни и те же ре-
цепторы, в приведенном примере — холинорецепторы (например, использо-
вание м-холинолитиков при интоксикации м-холиномиметиками). В этом
смысле подобные антидоты одновременно являются и антидотами специфи-
ческого действия (см. ниже);
2) антидоты, действие которых основано на независимом (непрямом) фи-
зиологическом антагонизме по отношению к ОВ, т. е. когда действие яда и
антидота направлено на разные биомишени, но при этом наблюдаются
противоположные физиологические (фармакологические) эффекты.
Примерами являются противосудорожные средства (типа ГАМКмиметиков),
используемые при поражениях различными судорожными ядами, в том числе
ФОВ и др.
Следует отметить, что антидоты, действие которых основано на принципах
физиологического (фармакологического) антагонизма, с успехом используют
в клинической токсикологии, в том числе и в тех случаях, когда механизм
токсического действия яда до конца не изучен [Лужников Е.А., 2001].
К группе антидотов специфического действия относятся вещества, пред-
отвращающие взаимодействие ОВ с биомишенью или реактивирующие
биомишени (ферменты), ингибированные ОВ. Это одни из самых
радикальных средств специфической профилактики и терапии при
поражениях ОВ. Антидоты этой фуппы разрабатываются с учетом
механизмов токсического действия ОВ.
Условно можно выделить следующие подгруппы:
а) вещества, образующие обратимые комплексы с активными центрами
биомишеней и предотвращающие взаимодействие ОВ с биомишенями. Как
правило, эти вещества — обратимые конкурентные ингибиторы ферментов.
Например, обратимые ингибиторы холинэстераз (галантамин и др.) защища-
ют активные центры холинэстераз от взаимодействия с ФОВ и т. п. Обычно
биомишени в таком случае — ферменты. Если они являются рецепторами,
антидоты данной фуппы могут быть одновременно конкурентными физио-
логическими антагонистами;
б) вещества, реактивирующие активные центры биомишеней (ферментов),
ингибированных ОВ. К ним относятся реактиваторы холинэстераз, ин-
гибированных ФОВ (2-ПАМ и др.), реактиваторы пируватоксидазы (липое-
вой кислоты), ингибированной люизитом, и др.;
в) реактиваторы непрямого действия. Представляет интерес реактивация
ингибированного фермента не в результате взаимодействия антидота с ин-
80
гибированным ферментом, а под влиянием вещества, которое образуется в
организме при введении антидота, т. е. в результате как бы непрямого (опо-
средованного) действия последнего (случай, противоположный летальному
синтезу). Это наблюдается при использовании метгемоглобинобразователей
(антидотов от HCN), когда в крови образуется MtHb, с трехвалентным же-
лезом которого взаимодействует циан-ион. При этом происходит восстанов-
ление активности цитохромоксидаз тканей, ингибированных циан-ионом.
В тех случаях, когда ОВ в течение некоторого времени находится в крови
(или в других тканевых депо) в непрореагировавшем состоянии или при по-
степенном поступлении в кровь из депо (например, поступление VX из кож-
ного депо), эффективными могут оказаться средства и методы, направленные
на ускорение выведения ОВ из кровяного русла.
Методы гемотрансфузии (гемосорбция, гемодиализ и др.) основаны на том,
что кровь пораженных пропускают через сорбционные колонки
(гемосорбция), на элементах наполнителей которых (уголь и др.) происходит
сорбция ОВ. При гемодиализе кровь пропускают в диализные емкости, через
полупроницаемые стенки которых ОВ диффундирует в водный раствор,
омывающий диализный мешочек. Концентрация ОВ в крови снижается, что
способствует более эффективному лечению. Методы гемотрансфузии в
настоящее время нашли достаточно щирокое практическое применение в
медицинской практике при отравлениях пестицидами и другими токсичными
веществами [Лужников Е.А., 2001].
При лечении пораженных радиоактивными веществами и отравлений со-
лями тяжелых металлов используются комплексообразующие соединения
(ЭДТА, БАЛ, унитиол и др.), которые выводят ОВ из организма.
Иммунная (и иммунохимическая) защита от О В и токсинов представляет
собой особый вид защиты организма, основанный на том, что в тканях
вырабатываются антитела (белки), специфичные к антигенам.
Эффективность иммунной защиты определяется степенью сродства антител к
антигенам и концентрацией антител в крови и тканях организма
(«напряженностью» иммунитета).
Иммунная защита от высокомолекулярных токсинов является одним из ос-
новных видов медицинской защиты от бактериальных токсинов. В качестве
антигенов (которые вводятся в организм заранее) используют анатоксины —
токсины, подвергнутые специальной предварительной обработке (тепловой
или формалином и др.), в результате чего утрачиваются токсические, но со-
храняются их антигенные свойства.
81
В последние десятилетия за рубежом опубликованы данные о принципи-
альной возможности создания иммунохимической защиты от низкомолеку-
лярных вешеств, в частности от ФОВ.
Выше были рассмотрены некоторые наиболее важные основные принципы
антидотной терапии и профилактики. В настоящее время за рубежом ведутся
поиски новых антидотов и комбинированных рецептур. В ряде случаев
антидоты, помимо основного, могут обладать и дополнительным лечебным
действием, повышающим эффективность рецептур. Так, некоторые биспи-
ридиниевые реактиваторы ингибированных холинэстераз (HGG-12 и др.),
кроме того, что они восстанавливают ингибированные ферменты, оказывают
действие на холинорецепторы (ганглиоблокирующее), что способствует сня-
тию судорог при поражениях ФОВ.
В рецептурах наряду с основными антидотами часто используют корректо-
ры — лекарственные средства для повышения эффективности рецептур и
устраняющие побочные эффекты антидотов.
Важное значение имеет также комплексная терапия, проводимая в первую
очередь по жизненным показаниям и с учетом характера патофизиологичес-
ких изменений и симптомов поражения (симптоматическая), а также терапия,
направленная на восстановление работо- и боеспособности пораженных.
Учитывая, что при поражениях многими ОВ и токсинами смертельного
действия одной из основных причин гибели организма является кислородное
голодание, борьба с последним играет важную роль. При оказании первой
медицинской помощи в случае остановки дыхания у пораженного необходи-
мо искусственное дыхание. На этапах медицинской эвакуации проводят ок-
сигенотерапию, включая аппаратные методы искусственного дыхания.
Особое значение борьба с гипоксиями имеет при поражениях ФОВ, ОВ
удушающего действия и других интоксикациях.
Большую роль Ифает своевременное использование лекарственных
средств для снятия судорог, купирования нарушений сердечно-сосудистой и
дыхательной систем, гомеостаза.
Основные средства антидотной терапии и профилактики, используемые
главным образом при оказании первой медицинской помощи пораженным
ОВ, рассматриваются в соответствующих главах учебника.
82
Глава 2
ТОКСИКОЛОГИЯ ОТРАВЛЯЮЩИХ ВЕЩЕСТВ ИНОСТРАННЫХ
АРМИЙ И ДРУГИЕ ТОКСИЧНЫЕ ВЕЩЕСТВА СМЕРТЕЛЬНОГО
ДЕЙСТВИЯ
Одним из видов оружия массового поражения XX в. является химическое
оружие (ХО), которое может быть использовано для уничтожения, подавле-
ния, изнурения войск и населения, заражения местности (акватории), воен-
ной техники, материальных средств, продуктов питания, водоисточников,
уничтожения животных, а также посевов и лесов. Поражающее действие ХО
основано на токсических свойствах ОВ, токсинов и других ТВ, для перевода
которых в боевое состояние используют специальные средства.
ОВ — токсичные соединения, которые при боевом применении вызывают
поражение живой силы противника и могут быть использованы для
выполнения других задач, решаемых с помощью ХО. Наряду с О В могут
быть применены некоторые токсины и яды, получаемые с помощью
природных продуцентов (ботулинические токсины, рицин, сакситоксин и
др.), а также синтетические аналоги природных ядов (бисаммониевые
арилкарбаматы — аналоги кураре, физостигмина и др.).
Особое внимание в зарубежной литературе уделяется бактериальным ток-
синам (БТ), что обусловлено их высокой токсичностью. Долгое время БТ от-
носили к биологическому оружию, однако в последние десятилетия в связи с
рещением проблемы получения стабильных рецептур БТ в необходимых ко-
личествах, а также возможности их применения теми же способами, что и
при применении ХО, они за рубежом стали рассматриваться в качестве
эффективных веществ, которые могут быть использованы наряду с ОВ.
Таким образом, в военных кругах США и других стран НАТО они
рассматриваются как разновидность ХО. В связи с этим целесообразно
уточнить, что биологическим оружием в военной зарубежной литературе
обычно называют оружие, основанное на применении болезнетворных
микроорганизмов (бактерий, риккетсий, вирусов и патогенных грибов),
которые размножаются, попадая в организм человека и животных. БТ
являются в основном белками, не содержат генетического материала
(нуклеиновых кислот) и не способны к репликации. В этом смысле важно
подчеркнуть, что мероприятия по защите войск от использованных
противником токсинов и бактериальных средств будут существенно
различаться, в частности при проведении противоэпидемических
мероприятий, так как при применении токсинов не будут возникать
эпидемии инфекционного характера.
83
Вместе с тем войсковая индикация БТ проводится в системе неспецифи-
ческой биологической разведки и специфической индикации биологических
агентов, поэтому не случайно, что в руководствах и наставлениях по защите
от оружия массового поражения армий многих стран БТ рассматриваются
как компоненты биологического оружия (БО).
ОВ и токсины иностранных армий обладают различными физическими,
химическими и токсическими свойствами. Так, токсические (разные
категории токсических доз) и физико-химические свойства (летучесть,
скорости гидролиза и др.) веществ различаются в десятки и тысячи раз.
Существуют разнообразные классификации, в которых учитываются
неодинаковые свойства ОВ и токсинов.
Наиболее часто используют классификации:
1)химические, предусматривающие деление ОВ в зависимости от принад-
лежности к определенным классам химических соединений, их реакционной
способности и механизмов реакций;
2) тактические — по назначению веществ при применении ХО и устой-
чивости ОВ на местности;
3) токсикологические (физиологическая) — по характеру токсического
действия на организм и симптомам поражения;
4)комбинированные, в которых сочетаются элементы различных класси-
фикаций, как правило, тактических и токсикологических.
В этом учебнике используются токсикологическая, тактическая и комби-
нированная классификации.
В основе токсикологической (физиологической) классификации лежит
характер токсического действия веществ на организм. В соответствии с этой
классификацией выделяют 5 групп ОВ:
• нервно-паралитического действия;
• кожно-нарывного действия;
• общеядовитого действия;
• удушающего действия;
• психотомиметического действия.
Кроме того, существует группа веществ раздражающего действия, которые
не включены в списки Конвенции по запрещению ХО — 93, предназначенная
для борьбы с беспорядками.
По скорости развития симптомов поражения различают вещества быстрого
и медленного действия. К последним относятся иприт, фосген и боту-
линические токсины, а все остальные — ОВ быстрого действия.
За рубежом получила широкое распространение тактическая классифика-
ция ОВ и токсинов по названиям:
84
• вещества смертельного действия (летальные агенты), предназначенные
для поражения и уничтожения живой силы противника;
Смертель-
смертельнВероятнос
Медицин-
Характер Длитель-
ные
ская по-
LCt50
ть
действия на ность
Тип мощь по
организм ICt50 действия
токсодозы
веществ жизненным
ых исхо-
Летальные Нарушения жиз показаниям
Часы,
агенты ненно важных
Высокая Низкие 100—101 сутки. Требуется
функций, приво-
недели
дящие к гибели
Инкапаси- Нарушения функ
танты ций, приводящие
Часы, Не требу-
к снижению Низкая Высокие 102—103
сутки ется
работо- и
боеспособности
Ирританты Раздражение сли-
зистых оболочек
Минуты, Не требу-
глаз и верхних Низкая Высокие >103
часы ется
дыхательных
путей
85
2.1. Отравляющие вещества нервно-паралитического действия
ОВ нервно-паралитического действия называются ФОВ, которые при воз-
действии на организм вызывают угнетение холинэстераз тканей млекопитаю-
щих (человека).
В 1932 г. произошли два, как в то время казалось, не связанных между со-
бой научных события, которые на несколько десятилетий определили на-
правления дальнейших исследований военных химиков и токсикологов. До-
цент химического факультета Берлинского университета В. Ланге и его
помощница Г. Крюгер [Lange W., Krugeer G., 1932] опубликовали работу, в
которой были описаны методы синтеза и свойства диалкилфторфосфатов.
Эта работа положила начало исследованиям химических свойств фосфорор-
ганических соединений.
В том же году в Англии Стедманы [Stedman В., Stedman А., 1932] опуб-
ликовали работу по выделению из крови лошади фермента, расщепляющего
ацетилхолин на холин и уксусную кислоту (холинэстеразу). Однако в то вре-
мя еще не было известно, что механизм токсического действия ФОВ обус-
ловлен угнетением холинэстераз. Этот факт был установлен лишь через 10
лет.
После опубликования работы В. Ланге и Г. Крюгер исследования по химии
и токсикологии ФОВ до окончания Второй мировой войны были засекречены
и в военно-химических лабораториях фашистской Германии и некоторых
других воюющих государств (например, в Англии) проводились изыскания
новых токсичных ФОВ. В лаборатории Г. Шредера перед Второй мировой
войной были получены высокотоксичные ФОВ — табун, зарин, а несколько
позже зоман [Schrader G., 1952, 1963]. В Англии в начале 40-х годов XX в.
был получен ДФФ [Saunder В., 1957].
После Второй мировой войны, когда широко проводилось изучение стро-
ения активных центров холинэстераз, были синтезированы вещества, близкие
по строению ацетилхолину [Ghosh R., Newman Г, 1955; Hammelin L., 1957, и
др.]. Подобные им вещества — V-агенты — маслянистые жидкости
изучались в США, а на рубеже 60-х годов в Нью-Порте (штат Индиана) был
построен завод по производству VX — высокотоксичного (особенно при
действии через кожные покровы) ФОВ.
Позднее в зарубежной литературе появились сообщения о веществе под
шифром «GP», которое, как полагают, по своим свойствам занимает проме-
жуточное положение между зарином и VX, а также о веществе «ЕА-5774»,
которое при ингаляции в 3 раза токсичнее VX [Bay А., 1980].
86
2.1.1. Общая характеристика и токсичность
ОВ нервно-паралитического действия — зарин (шифр армии США — GB),
зоман (GD) и VX являются производными метилфосфоновой кислоты.
Зарин (GB) — изопропиловый эфир фторангидрида метилфосфоновой
кислоты — изопропилметилфторфосфонат:
Бесцветная жидкость, tкип. 151,5°С, tзам. 57 °С. Летучее вещество: Смакс. при
20°С — 12,1 мг/л (при 25 °С — 16,3 мг/л); давление насыщенного пара при
25 °С — 2,9 мм рт. ст. Летучесть при низких температурах меньше: С макс при
0°С — 4,1 мг/л. Зарин хорошо смешивается с водой и органическими
растворителями. В нейтральных средах гидролизуется медленно (через часы,
сутки), в щелочных — значительно быстрее. Константа скорости щелочного
гидролиза Крн. при 25 °С — 25 л/моль • с, поэтому щелочные растворы ис-
пользуют для дегазации зарина. Зависимость времени гидролиза наполовину
(t0,5) от рН : t0,5= 5,4 • 108/10 рН. Так, t0, при рН 8,0=5,4 ч и т. д., а в 0,1 н.
растворах щелочей — нескольким минутам.
Это одно из самых высокотоксичных веществ, действующих в парообраз-
ном состоянии. Миоз и загрудинный эффект наблюдаются при токсодозах
порядка 10-3 мг•мин/л, ICt50=0,03 мг•мин/л, LCt50=0,075 мг•мин/л.. При
действии через кожу LD50=25 мг/кг (в каплях), а при действии в парах ICt 50 ≈8
мг • мин/л, LCt 50 = 15 мг/л; при действии через ЖКТ LD50=0,14 мг/кг.
Основная форма применения — пары. Следует учитывать, что при низких
температурах летучесть зарина уменьшается и часть вещества может
присутствовать в виде мелких капель. В последние годы за рубежом (США,
Англия и др.) проводят исследования загущенных рецептур GB и их
модификаций (с добавками растворителей). В качестве загустителей
используют гели полиметакрилата (8 %) и карбоксиполиметилена (3 %), а в
качестве растворителей, повышающих проникновение ОВ через кожу, —
диметилсульфоксид и др. [Creasy N. et al., 1978].
Зоман (GD) — пинаколиновый эфир фторангидрида метилфосфоновой
кислоты — пинаколилметилфторфосфонат:
Бесцветная жидкость, t кип. 190 °С, t зам— 80 °С. Летучесть зомана ниже,
чем зарина: Смакс при 20 °С = 3 мг/л (при 25 °С = 3,9 мг/л, при 0°С = 0,5 мг/л).
87
Давление насыщения паров при 25 °С = 0,4 мм рт. ст. Плохо растворяется в
воде и хорошо в органических растворителях. Плохая растворимость в воде
ограничивает использование водных щелочных растворов для дегазации, по-
этому при приготовлении щелочных дегазаторов, как правило, используют
аткоголяты. В водных щелочных растворах зоман гидролизуется примерно в
3 раза медленнее зарина.
Токсичность зомана выще, чем зарина. Воздействие паров зомана при
концентрациях 0,0005 мг/л в течение 1 мин приводит к развитию миоза.
ICt50= 0,02 мг • мин/л, LCt50 = 0,03 мг • мин/л. При действии через кожу
смертельные дозы — 1—5 мг/кг. Обладает выраженным кумулятивным
свойством.
В литературе имеются сведения о загущенных рецептурах GD, из которых
испарение зомана происходит медленно.
Вещество VX. V-агенты — 0-алкиловые эфиры S-β-N,N-диaлкилaминoэ-
тилтиометилфосфоновой кислоты — 0-алкил-S-β-диалкиламиноэтилтиол-
метилфосфонаты:
88
заражения техники, снаряжения и других предметов на длительное время
(Reutter S., Tomson S., Mioduszewski R., 2000].
К фосфорорганическим (фосфорсодержащим) веществам нервно-парали-
тического действия также относятся:
• ОВ и потенциальные ОВ Второй мировой войны;
• низшие гомологи V-агентов;
• ФОВ с промежуточной летучестью.
ОВ и потенциальные ОВ Второй мировой войны
Табун — N,N-диметиламид-0-этилцианфосфат:
89
Условные шифры: DFP (Великобритания), PF (США).
Впервые получен в 1938 г. Г. Шредером (Германия). Независимо от него в
1941 г. синтезирован и исследован В. Saunders (Великобритания).
ДФФ — бесцветная жидкость со слабым фруктовым запахом. Давление
насыщенного пара 0,5 мм рт. ст., Cмакc при 20 0С = 5,6 мл/л. Растворимость в
воде 1,5 %, хорошо растворяется в органических растворителях.
Менее токсичен, чем табун и зарин. LCt50 = 3 мг • мин/л, при накожной
аппликации LD50 = 0,2 г/кг. Характерно выраженное миотическое действие.
При концентрации 0,008 мг/л (экспозиция 5 мин) возникает миоз, который
наблюдается в течение нескольких суток.
Механизм токсического действия — угнетение холинэстераз тканей млеко-
питающих. Симптомы интоксикации такие же, как при применении зарина;
более выражены симптомы поражения периферической нервной системы.
Лечение: холинолитики, реактиваторы и др. (см. ниже). Применение ре-
активаторов затруднено, так как наблюдается «старение» ингибированной
холинэстеразы.
ДФФ и его аналоги входят в списки Конвенции по запрещению химичес-
кого оружия.
В настоящее время ДФФ используется в научных исследованиях в
качестве специфического необратимого ингибитора сериновых гидролаз и
его название можно встретить в каталогах химических реактивов зарубежных
фирм.
Табун и ДФФ — фосфаты, методы получения которых значительно более
простые, чем синтез фосфонатов, т. е. без использования методов получения
веществ во связью С—Р.
Низшие гомологи V-агентов
Ниже представлены формулы веществ, так называемых холиновых и
тиохо- линовых эфиров кислот фосфора [Tammelin Е.Е., Fredrikscon, 1958, и
др.]. Их синтез был осуществлен в середине 50-х годов XX в. в Швеции. Они
содержали Фуппы, подобные ацетилхолину, и фосфорилирующие фрагменты
Р—F:
90
вые вещества, применение которых как потенциальных химических агентов в
то время было затруднено. В настоящее время в связи с созданием бинарного
оружия и возможностью применения токсичных веществ в актах хими-
ческого терроризма оценка этих веществ должна быть иной.
В 1955 г. в Великобритании [Ghosh R., Newman I., 1955] запатентовали но-
вый ФОС — пестицид амитон (C2H50)2 P(0)SCH2CH2NR2 — (высокотоксич-
ную жидкость), — токсичность которого сопоставима с токсичностью
зарина. Но специалисты в области военной химии и токсикологии уже в то
время знали, что переход от фосфатов к фосфонатам сопровождается
повышением анти-АХЭ-свойств и токсичности. Так появился новый класс
соединений — гомологи V-агентов (табл. 2.2), большое количество которых
было исследовано в 50—60-х годах XX в. за рубежом. Токсичность этих
веществ при внутримышечном (внутривенном) введении, как правило,
возрастает с увеличением молекулярной массы. В опытах на мышах LD 50
VX=0,02 мг/кг. LD50 низших гомологов VX ≈0,05—0,06 мг/кг. Но низшие
гомологи VX более летучие, чем VX на полпорядка и более. Эти вещества
могли бы по токсическим и физико-химическим свойствам отвечать
требованиям к веществам с промежуточной летучестью, однако синтез V-
агентов в бинарном варианте представляет сложную проблему. И вновь
91
внимание военных химиков и токсикологов было обращено на фторангид-
риды кислот фосфора.
Еще в 70-х годах XX в. в США была выдвинута концепция разработки бо-
евых химических агентов с промежуточной летучестью (Jntermediate
Volatility Agents — IVA) [Антонов Н., 1981; Robinson J., 1978; Bay A., 1980].
В соответствии с этой программой (IVA) боевые химические агенты долж-
ны отвечать следующим требованиям:
• летучесть (величины Смах) на 1—2 порядка выше таковой VX и на 1—2
порядка ниже, чем GB;
• токсичность при внутривенном (внутримышечном) введении и накожной
аппликации выше, чем GB, и равна или несколько ниже, чем у VX;
• токсичность при действии через летнее армейское обмундирование ЛАО
выше, чем VX (при относительно коротких экспозициях зараженного ЛАО
(1-3 ч);
• должны быть разработаны методы получения агентов (рецептуры) IVA по
бинарной технологии.
На первых этапах произведена дополнительная переоценка ранее обсле-
дованных в Англии и США низших гомологов VX, некоторые из них более
летучие, чем VX в пределах порядка (см. табл. 2.2). Поскольку получение их
в бинарном варианте — сложная проблема [Франке 3. и др., 1972; Алексан-
дров В., Емельянов В., 1990], было обращено внимание на другие типы ФОВ.
Исследования по программе IVA среди производных фторфосфорных
кислот проводились соответственно в двух направлениях:
1)синтез и оценка свойств циклоалкилметилфторфосфонатов и их рецеп-
тур с агентами GB и GD, т. е. создание агентов по типу GP, GF и др.;
2)синтез и оценка свойств диалкиламиноалкил- N,N,-диалкиламидофтор-
фосфатов — по типу CV-агентов:
92
агентами GB и GD. Были разработаны способы бинарного синтеза вещества
и его смесей в присутствии изопропиламина (как акцептора HF). По-ви-
димому, это вещество (или его рецептуры) описаны (в зарубежной литерату-
ре) под шифром агента GP [Bay А., 1980].
В Швеции подобные вещества (циклогексилметилфторфосфонат) иссле-
довались под шифром «GF». Токсические свойства агента GF приведены в
табл. 2.3.
Следует отметить, что это направление связано с получением дифтор-
Таблица 2.3. Токсичность некоторых ФОВ (в опытах на крысах, пути
введения внутримышечный, кожно-резорбтивный)
1
GF — циклогексил (метилциклогексил) метилфторфосфонат.
2
GV — (CH3)2N-P(0)(F)0CH2CH2N(CH2).
3
t= 39 °С при давлении 2 мм рт. ст.
4
Отношение LD50 при накожной аппликации к LD50 при внутримышечном введении.
и/или дихлорангидридов метилфосфоновой кислоты, которые входят в
список Конвенции
Второе направление связано с синтезом и оценкой свойств 0-диалкил-
аминоалкил- N,N -диалкиламинофторфосфонатов. Подобные вещества ис-
«:ледовали в качестве потенциальных боевых химических агентов в Эджвуд-
ском арсенале. Они представлены в табл. 2.4 под щифром GV—GV4.
В последнее время подобные высокотоксичные фторфосфонаты обозна-
чаются условными шифрами GV-агентов [Bajger I., Matoushek А., 1971].
Описаны способы их синтеза:
93
относительно малоустойчивые. Однако при получении веществ в бинарном
варианте требования к их устойчивости снижаются, т. е. устойчивость
должна быть сопоставима со временем действия агента. Данные вещества
менее летучие, чем зоман. Так, для вещества с шифром GV4 в литературе
приводится величина Смах=0,16 мг/л (25 °С). Можно полагать, что с учетом
различий в температурах кипения вещества GV представлены общей
формулой, где Смах ≈0,3 мг/л:
94
вещество под щифром GV: токсичность его в опытах на крысах при внутри-
мыщечном введении в 5 раз выще, чем зарина, и практически равна VX, а
при накожной аппликации на порядок выще, чем зомана, и в 17 раз ниже, чем
VX. Подобные соотношения в токсодозах, по-видимому, отражают ток-
сичность ФОВ, исследуемых за рубежом по программе «IVA».
Следует подчеркнуть, что представления о циклозарине выщли за рамки
теоретических обсуждений. В марте 1991 г. войсками США был уничтожен
склад химического оружия в районе Эль-Хамасия, в связи, с чем и произощел
выброс в атмосферу нескольких тонн иприта, зарина и циклозарина. Эти дан-
ные были официально подтверждены МО США в середине 90-х годов XX в.
в связи с расследованием причин синдрома войны в Персидском заливе.
95
мозга и верхней части щейного отдела спинного мозга человека. НВ блужда-
ющего нерва подходят к внутренним органам, расположенным в грудной и
брющной полостях организма человека. Другие НВ парасимпатического
отдела вегетативной НС отходят от пояснично-крестцового отдела ЦНС и ин-
нервируют органы, находящиеся в области большого и малого таза (рис. 2.1).
Рис. 2.1. Автономная (вегетативная) иннервация внутренних органов (схема). I — продолговатый и средний мозг; II — грудной и
поясничный отделы спинного мозга; III — крестцовый отдел спинного мозга; IV — цепочки симпатических ганглиев; V —
периферические ганглии; VI—органы: 1 — глаз (мышцы); 2—слезная железа; 3—слюнные железы; 4—сердце; 5 — гортань; 6 —
трахея; 7 — бронхи; 8 — желудок; 9 — кровеносные сосуды внутренних органов; 10 — печень и желчный пузырь; 11 —
поджелудочная железа; 12 — надпочечник; 13 — тонкая кишка; 14 — толстая кишка; 15 — почки; 16 —мочевой пузырь; 17 — половые
органы.
96
Рис. 2.2. Строение нервной клетки (А) и синапса (Б).
А: 1 — тело нейрона; 2 — дендриты; 3 — аксон; 4—6 — синапсы.
Б: 1 —синаптическая бляшка; 2 — синаптические пузырьки (с медиатором); 3 — пресинаптическая мембрана; 4 — синаптическая
щель; 5 — постсинаптическая мембрана; 6 — холинорецептор (ХР); 7 — ацетилхолинэстераза (АцХЭ).
В — прохождение нервного импульса (объяснение в тексте).
97
напс» и т. д. Термин «опиоидные рецепторы» используют применительно к
рецепторам, с которыми взаимодействуют алкалоиды опия (морфин и др.)
или их синтетические гомологи (фентанил и др.). Существуют различные
подтипы определенных рецепторов. Так, различают: m-(мускарино)холино-
рецепторы и n-(никотино)холинорецепторы [Аничков С.В., 1982; Машков-
ский М.Д., 2003]. Основные симптомы перевозбуждения этих рецепторов
при интоксикациях ФОВ нервно-паралитического действия (НПД) приведе-
ны в табл. 2.6. При действии зарина более выражены симптомы перевозбуж-
дения т-холинорецепторов (ХР) периферической НС. При действии зомана
перевозбуждение, помимо m-ХР, — n-ХР и ЦНС. Атропин в основном ку-
пирует симптомы перевозбуждения m-ХР периферической НС.
98
отдельные НВ и ЦНС — волокна, иннервирующие мышцы глазного яб-
лока, клетки слюнных и потовых желез и некоторые другие.
Столь широкое распространение холинергических синапсов практически
во всех отделах НС человека является причиной выраженной клинической
картины при интоксикации ингибиторами холинэстераз, особенно при по-
ражениях ОВ НПД. При этом возникают симптомы не только перевозбуж-
дения холинергических, но и адренергических отделов НС человека. Это
связано с тем, что волокна парасимпатического отдела ВНС человека ин-
нервируют многие внутренние органы, в том числе надпочечники. При их
возбуждении происходит повышение концентрации адреналина в крови, ко-
торый поступает к тканям внутренних органов, следствием чего является воз-
никновение симптомов, характерных для перевозбуждения адренергических
систем организма. Это в свою очередь является причиной появления различ-
ных симптомов интоксикаций ФОВ, когда брадикардия сменяется тахикар-
дией-, падение артериального давления — повышением, а также различных
изменений ЭКГ и ЭЭГ. Столь сложная картина интоксикации — причина ос-
ложнений, возникающих при лечении и реабилитации пострадавших при по-
ражениях ОВ НПД, особенно при тяжелых степенях интоксикации [Лужни-
ков Е.А., 2001], а также серьезных последствий интоксикаций ОВ НПД.
Рассмотрим отдельные стадии функционирования синапсов с учетом
основных элементов строения на примере холинергических сигналов.
Строение синапсов в разных отделах НС человека различно. Так, строение
холинергических синапсов в ЦНС (дендрит-дендритные и др.) отличается от
строения нервно-мышечной синапсов (НМС). Это естественно, так как НМС
с нервно-мышечной пластинкой постоянно перемешаются при сокращениях
мышечных волокон. Особенности строения НМС по результатам последних
R-структурных исследований приводятся ниже. В то же время существуют
общие принципы строения синапсов НС (см. рис. 2.2), состоящих из
следующих элементов:
• синаптической бляшки (СБ), находящейся на окончании отростка нейрона.
В СБ имеются синаптические пузырьки (СП), в которых содержится большое
количество молекул медиатора (10-2—104 молекул в каждом СП).
Поверхность СБ, обращенная к иннервируемой клетке или к отросткам
другого нейрона, образует пресинаптическую мембрану (ПреСМ), играющую
важную роль в экзоцитозе медиатора;
• постсинаптической мембраны (ПостСМ), в состав которой включены
рецепторы и ферменты, участвующие в специфической сорбции медиатора и
последующем его разрушении; в холинергических синапсах — это
холинорецепторы (ХР), фермент ацетилхолинэстераза (АХЭ);
96
• синаптической щели (СЩ) между ПреСМ и ПостСМ шириной ≈20—40 нм
(ширина и общая площадь СЩ колеблются в зависимости от природы
синапса). С боковых сторон СЩ имеются диффузионные барьеры.
Строение холинергического синапса схематически показано на рис. 2.2.
Причины нарушения функции холинергических синапсов при действии ОВ
НПД рассматриваются ниже.
Метаболизм медиатора в синапсе имеет несколько стадий.
1. Синтез АцХ осуществляется в СБ из холина и уксусной кислоты (аце-
тилКоА) под действием фермента холинацетилазы в присутствии
АТФ. Ингибиторы ХАТ: гемихолиний, ацетилгемихолиний и другие
вещества, которые исследуются как антидоты от ОВ НПД.
2. Синтезированный АцХ накапливается в СП и хранится в них в депо-
нированном виде. Стадия хранения АцХ в СП нарушается под
действием ботулинических токсинов.
3. Экзоцитоз АцХ в СЩ. При поступлении нервного импульса к оконча-
нию нервного отростка (волокна) в СБ повышается концентрация Са +2.
СП, содержащие АцХ, быстро поступают к внутренней поверхности
ПреСМ. Происходит слияние оболочек СП с биомембранами ПруСМ.
Открываются специфические каналы, по которым молекулы АцХ
квантами поступают в СЩ. Предполагается участие рецепторов на
ПреСМ в этом процессе. Стадия нарушается под действием
ботулотоксинов, токсинов скорпионов, змей и других ПЯ и токсинов.
4. Диффузия АцХ через СЩ. Молекулярные механизмы,
обеспечивающие высокие скорости процессов, до конца не изучены.
5. Взаимодействие АцХ с ХР сопровождается конформационными изме-
нениями белковой глобулы последних и модуляторов ионной
проницаемости, открытием Na+-кaнaлoв, деполяризацией ПостСМ,
возникновением спайка и проведением импульса по мембранам
иннервируемой клетки. Возможно участие пуриновых рецепторов (ц-
ГМФ). После деполяризации ПостСМ происходит десорбция АцХ с
активного центра ХР. При этом происходят конформационные
изменения в молекуле холинорецепторов, вследствие чего молекула
АцХ десорбируется из активного центра ХР и поступает в область
активного центра АХЭ. Стадию блокируют антиметаболиты АцХ:
холиномиметики (никотин, мускарин и др.) и холинолитики (атропин,
BZ и др.), кобротоксин и др.
6. Гидролиз АцХ на активном центре АХЭ. После десорбции с ХР АцХ
поступает в активный центр АХЭ, где подвергается гидролизу с
97
высокими скоростями (10 тыс. молекул АцХ в 1 с, на одном активном
центре АХЭ). Ингибиторы стадии: ОВ НПД более подробно см. ниже.
7. Поступление продуктов гидролиза АцХ в СБ. Продукты гидролиза
АцХ утилизируются нейронами. Холин поступает в СБ, где под
действием ХАТ при взаимодействии с ацетил-КоА и при участии АТФ
синтезируются новые молекулы АцХ, которые накапливаются в СП,
где сохраняются до поступления по нервному волокну новых нервных
импульсов, происходит выброс новых квантов АцХ в СЩ и т. д.
Ингибиторы стадии захвата продуктов гидролиза АцХ — N-aллил-3-
xинyклидинoл и др.
98
б) анионный участок — карбоксилат-анион (—СОО -) дикарбоновой глута-
миновой аминокислоты, участвующий в ионном взаимодействии с катион-
ной головкой АцХ при образовании фермент-субстратного комплекса;
в) гидрофобные участки, обрамляющие эстеразный и анионный участки,
образованные гидрофобными остатками аминокислот (триптофана, фенил-
аланина и др.), участвующими в гидрофобных взаимодействиях при образо-
вании комплекса Михаэлиса фермент-ингибиторных комплексов с ФОВ;
г) аллостерические участки, расположенные вне активного центра и участ-
вующие во взаимодействии с ингибиторами и некоторыми аналогами суб-
стратов, что оказывает влияние на каталитический центр; полагают, что в их
состав в АХЭ входит второй анионный участок.
В конце XX в. за рубежом были выполнены исследования по R-структур-
ному анализу кристаллической АХЭ, выделенной из нервной ткани электри-
ческого органа ската Тофес1о Califomica (ТсАХЭ). Работы проведены с раз-
рещением 2,5 А° с последующей компьютерной обработкой полученных
данных по строению фермента в трехмерном пространстве. Фермент ТсАХЭ
является тетрамером, состоящим из 4 субъединиц, каждая из которых — сфе-
рическая белковая глобула элипсоидной формы. Субъединицы ТсАХЭ, как и
других кристаллических препаратов АХЭ из нервной ткани млекопитающих,
имеют по одному каталитическому центру. Трехмерная структура бел-
Рис. 2.3. Строение активных центров холинэстераз и локализация гидрофобных участков (схема).
99
тками α -спиралей и β -структур (по 8—12 аминокислот). На поверхности
белковой глобулы каталитической субъединицы имеется узкий углубленный
участок в виде щели протяженностью ~ 1,5—2 нм, на дне которого на
глубине -2,0 А° находится оксигруппа серина, рядом с которой в третичной
структуре расположены остатки гистидина. Боковые поверхности сторон
синаптичес- кой щели образованы гидрофобными остатками триптофана,
фенилаланина, лейцина, изолейцина и др. Остаток тирозина, расположенный
на боковой стороне щели, находится недалеко от эстеразного участка АХЭ.
В последние годы XX в. и в начале XXI в. в Израиле, Франции, США и
других странах были выполнены работы по выделению АХЭ, холинорецеп-
торов и других структур холинергических синапсов и их исследованию с по-
мощью R-структурного анализа, а также других современных методов физи-
ко-химического анализа. Выделены в кристаллическом виде АХЭ из нервной
ткани ЛЖ (мыщей, крыс и др.) и человека. Получены в кристаллическом виде
препараты n-холинорецепторов из нервно-мышечных синапсов (НМС)
позвоночных, в том числе из синапсов человека.
В НМС позвоночных АХЭ находится в асимметричной форме, состоящей
из трех тетраметров, присоединенных к коллагеновому стержню («якорю»)
— ColQ (collagen quatemization). Холинэстеразы синтезируются в мышечных
клетках под контролем их генов. После синтеза полипептидных цепей на ри-
босомах первичные субъединицы локализуются в области аппарата Гольджи.
Посттрансляционные процессы сопровождаются конформационными изме-
нениями. Наблюдается образование дисульфидных связей в активном центре
АХЭ. Это было подтверждено специальными исследованиями АХЭ мозга
мышей, в которых имеются 6 остатков цистеина.
Несмотря на некоторые различия в первичных и высших структурах белка,
строение С-концов полипептидных цепей АХЭ в НМС является однотипным.
Последние (в области С-конца) — 40—41-й остаток аминокислот получили
название «Т-домен». В 4-м положении от конца находится цисте- ин. В Т-
домене имеются ароматические аминокислоты, в том числе остатки
триптофана, которые образуют α -спираль. Т-пептид получил также обозна-
чение WAT (где W — однобуквенное обозначение триптофана). С помощью
WAT Т-домен взаимодействует с «якорными» коллагеноподобными белками
(ColQ), которые в свою очередь содержат фрагмент, богатый остатками про-
лина — PRAD (proline rich attachment domen), взаимодействующего с фраг-
ментом WAT каталитической субъединицы фермента.
Подводя краткий итог R-исследованиям кристаллических АХЭ, отметим
следующее.
100
Установлено, что при перестройках молекул АХЭ на уровне третичных и
четвертичных структур и при взаимодействии АХЭ с субстратами (ацетилхо-
лином и др.) при образовании комплекса Михаэлиса, ацетилированного
фер- .мента и деацетилировании происходят существенные
конформационные изменения. В целом предложенные в 60-х годах XX в.
с.хемы ферментативного катализа с участием ХЭ в соответствии с данными
последних лет получили новое подтверждение, за исключением того, что
карбоксильная группа принадлежит не аспарагиновой (как считалось
раньше), а глутаминовой аминокислоте. Классическую триаду, характерную
для сериновых гидролаз, можно представить в виде следующей формулы:
где Е —
фермент (ХЭ), S — субстат (АцХ), ES — комплекс Михаэлиса, ES' —
ацетилированный фермент, Р' — холин, Р" — ацетат; k+1, k-1, к+2, к+з —
константы скоростей реакций промежуточных стадий, стадия
деацетилирования проходит с участием молекулы воды.
Сорбция молекулы АцХ в активном центре АХЭ при образовании комп-
лекса Михаэлиса сопровождается многоточечным связыванием АцХ с учас-
тием кулоновского взаимодействия в анионном участке (см. рис. 2.4, б) гид-
рофобного взаимодействия атомов углерода молекулы АцХ и водородных
связей с атомами кислорода группы С=O и эфирного атома кислорода АцХ.
Молекула АцХ оказывается как бы «замороженной» в активном центре АХЭ.
Происходит стабилизация свободной энергии системы. Выигрыш энергии
реализуется в конформационных изменениях активного центра фермента, что
сопровождается образованием 8-членного переходного состояния при
101
нуклео- фильном замещении у атома углерода С=O=группы АцХ (см. рис.
2.4, б, г). Образуется ацетилированный фермент. В переходном состоянии
происходит изменение гибридизации АО карбонильного атома углерода: SР2-
гибридизация основного состояния→SP3-гибридизация переходного
состояния. Переходное состояние имеет форму тетраэдра. В
ацетилированном ферменте (см. рис. 2, г) происходит SP 2-гибридизация
атома углерода группы С=O— плоская треугольная конформация
ацетильной части. При дезацетилировании (см. рис. 2, в) в переходном
состоянии→SP3-гибридизация — тетраэдрическая структура; продукты
реакции — уксусная кислота; SP2-гибридизация — плоская треугольная
структура.
Образование комплекса Михаэлиса сопровождается большими конфор-
мационными изменениями, в которых принимают участие упомянутые выше
функциональные группы триады: сер—тис—глу (см. рис. 2.4, б).
В этой триаде важное значение имеет имидазольное кольцо гистидина,
выполняющего своеобразную роль триггера. После взаимодействия триме-
тиламмониевой головки молекулы АцХ с карбоксильной группой глутами-
новой кислоты иминогруппа имидазольного кольца гистидина участвует в
образовании водородной связи с эфирным атомом кислорода молекулы АцХ
После разрыва эфирной связи в АцХ атом водорода выделяется с остатком
хатина. При этом сильно повышается основность второго атома азота в ими-
лазольном кольце.
Активация НО-группы серина сопровождается разрывом связи Н—О в
oксигруппе серина. Образовавшийся оксианион атакует атом углерода кар-
бонильной группы АцХ, образуя ацетилированный фермент (геометрия ос-
новного и переходного состояний обсуждалась выше). Таким образом, ими-
дазольное кольцо гистидина выступает, с одной стороны, как кислота (донор
протона), с другой — как основание (акцептор протона). Такая же роль триг-
гера имидазольного кольца гистидина при деацилировании фермента, и
вновь образуется 8-членное переходное состояние (ПС).
Таким образом, в процессе ферментативного гидролиза АцХ дважды об-
разуются тетраэдрические структуры, что сопровождается конформационны-
ми изменениями белковой глобулы фермента. Это экспериментально пока-
зано R-структурными исследованиями последних лет.
При образовании ПС важное значение имеет пуш-пульный механизм при
ацетилировании АХЭ (а также при фосфорилировании ФОВ), когда одно-
временно с нуклеофильной атакой атома кислорода ПО-группы серина на
центральный атом ацильной фуппы происходит синхронная электрофиль-
ная атака в виде водородной связи с атомом кислорода эфирной связи в АцХ
102
или с атомом фтора в ФОВ (см. рис. 2.4). В результате многоточечного
взаимодействия молекулы лиганда (АцХ или ФОВ) происходит образование
последующего комплекса (ацетилированного или фосфорилированного
фермента) с низкими значениями энергии (энтальпии) активации и высокими
значениями предэкспоненциального множителя в уравнении Аррениуса
(энтропии активации). Так, энергия активации ферментативного гидролиза
АцХ в активных центрах холинэстераз составляет22—25 кДж/моль, а
спонтанного гидролиза АцХ (при рН 7,0, t 25 °С) ≈95 кДж/моль [Яковлев
В.А., 1969, и др.].
103
диффузия молекулы субстрата в активный центр фермента и удаление
продуктов реакции из активного центра АХЭ. Скорости этих процессов на-
много ниже времени существования переходного состояния (при ацетили-
ровании и деацетилировании), поэтому некоторое время (микросекунды, до-
ли микросекунд) активный центр АХЭ остается свободным. Это понятие
относительно и зависит от концентрации субстрата. При условии реальных
концентраций АцХ в синапсе ([S] ~ Кm) в районе активного центра АХЭ про-
исходят конформационные изменения, характерные для состояния работа-
ющего активного центра фермента. И хотя они совершаются с высокими
скоростями, продолжительность этих процессов больше существования пе-
реходного состояния. В то же время активный центр АХЭ, находящийся в ра-
бочем состоянии, готов к акцептированию тетраэдрической структуры, в уг-
лах которой имеются электроотрицательные атомы кислорода (или фтора в
молекулах ФОВ), являющиеся потенциальным структурным аналогом пере-
ходного состояния при гидролизе АцХ. В результате вместо АцХ в
эстеразный участок поступает молекула ФОВ (рис. 2.5).
104
R-структурные исследования, проведенные в последние годы, показали,
что КФИ в активных центрах холинэстераз (ХЭ) возникают при основных
видах взаимодействия АцХ и ФОВ с ферментом. К ним относятся:
кулоновское взаимодействие в районе анионного участка активного
центра АХ и БуХЭ;
водородные связи с атомами кислорода Р=0-группы и атомом фтора в
G-агентах;
оптимальные гидрофобные взаимодействия, дополняющие основные
виды взаимодействий;
стереоизомерия атома фосфора ФОВ;
ван-дер-ваальсовы и донорно-акцепторные взаимодействия (нитрофе-
ниловые эфиры кислот фосфора, ФОВ, содержащие кратные связи,
ацетиленовые фрагменты) и другие его виды, вызывающие КФИ.
Показано, что КФИ возникают и при взаимодействии ФОВ с
ацетилированной формой фермента.
КФИ способствуют созданию конформации с участием функциональных
групп фермента, соответствующей адаптации тетраэдрической структуры пе-
реходного состояния нуклеофильного замещения у атома углерода С=О-
группы АцХ. В переходном состоянии происходит нуклеофильная атака
атома кислорода НО-группы серина на атом фосфора молекулы ФОВ с
образованием фосфорилированного фермента (см. рис. 2.4, г). Стадия
дефосфорилирования с участием молекулы воды отсутствует.
Особое значение имеет стереоизометрия молекулы ФОВ, причем лево-
вращающие формы ФОВ более сильные ингибиторы, чем правовращающие.
В последние годы установлена конформация зарина, зомана и VX. Пока-
зано, что S(—) - зарина имеют константы ингибирования АХЭ выше, чем
R(+) на три порядка (табл. 2.7).
Подобные данные получены в опытах in vivo (табл. 2.8). Как видно из табл.
2.8, S(—)-формы более токсичны, однако разница между лево- и правовра-
щающими формами не столь большая, как в опытах in vitro. Это объясняется
тем, что на токсико-кинетической стадии ФОВ подвергаются ферментатив-
ному гидролизу, взаимодействию с карбоксиэстеразами, депонированию в
липидных фазах крови и другим процессам.
При обсуждении вопроса, почему дезацетилирование холинэстераз про-
ходит с высокими скоростями, в то время как дефосфорилирование фосфо-
рилированной холинэстеразы практически не происходит, следует отметить,
что активированная молекула воды не способна вызвать дефосфорилирова-
ние, так как атака сбоку к связи сер—О—Р на атом фосфора неэффективна.
105
Противоположностью этому является использование реактиваторов ингиби-
рованных холинэстераз.
Реактивация комплексов фермент—ингибитор. В середине XX в. были
синтезированы первые соединения альдоксимы и кетоксимы гидроксамовых
Таблица 2.7. Влияние стереоизомерии по атому фосфора ФОВ типа R0
(СНз)Р(0)Р на ан- тихолинэстеразные свойства веществ [Костяновский и др.]
Стереоизомеры по атому фосфора
Эффекты, свойства
S(-) по Р R(+) по Р
О О
Возможные конформации II II
СНз—Р —OPri F
1 F — Р — OPri
I
СНз
Константы скорости ингибирования 1,4•10 7 3•10 3
АХЭ (кi л/моль • мкг)
Эффекты при образовании комплекса Продуктивная сорбция Непродуктивная
АХЭ — ингибитор 1 сорбция
1
При образовании фермент-ингибиторного комплекса в случае продуктивной сорбции возникает переходное
состояние, завершающееся фосфорилированием оксигруппы серина в активном центре АХЭ.
1
Хиральные центры по атому фосфора в зарине и VX; хиральные центры по атомам фосфора и углерода в зомане.
2
Количественные соотношения стереоизомеров в рацемате не указаны.
106
сопровождающейся ее разрывом и образованием фосфорилированного аль-
доксима (2-ПАМ), который подвергается дальнейшим превращениям (по ти-
пу бэкмановской перегруппировки) с образованием физиологически неак-
тивных продуктов (рис. 2.6).
Эффективной атаке реактиваторов на атом фосфора способствует наличие
α -эффекта, когда рядом с атомом кислорода атом азота (с неподеленной
парой рπ-электронов) и двойная связь О—N=CH—R 1 (R1 — остаток пири-
дина), которые легко поляризуются. В этом одна из причин эффективности
реактиваторов фосфорилированных холинэстераз (Уилсон и др., Нахманзон и
др.)
Вместе с тем в фермент-ингибиторных комплексах происходят процессы,
которые имеют не только теоретическое, но и практическое значение и
получили название «старение» ингибированных холинэстераз. Показано, что
процесс «старения» («ageing») фосфорилированных холинэстераз, со-
ответствующий стадии кi в уравнении 2, состоит в дезалкилировании ал-
кильного радикала RO- группы у атома фосфора с образованием дезалкили-
рованных фермент-ингибиторных комплексов и спирта (уравнение 3):
107
Таблица 2.9. Кинетика дезалкилирования АцХЭ, ингибированной
различными ФОВ типа R0 (R') POF (рН 7,4; 25 °С)
108
комплексное введение холинолитиков (атропина и др.) и реактиваторов ин-
гибированных холинэстераз (ТМБ-4 и др.).
109
болезненной чувствительностью глаз к свету. Все эти неприятные явления
исчезают только через несколько часов...»
После воздействия паров и аэрозолей ФОВ у пораженного быстро разви-
вается миоз (табл. 2.11), ухудшается зрение (особенно при плохом освеще-
нии), появляется боль в глазных яблоках, возникают чувство тяжести в груди
и затруднение дыхания (бронхоспазм), наблюдаются выделения из носа,
слюнотечение и повышенная потливость. Если пострадавший своевременно
воспользовался средствами защиты органов дыхания, то подобные симпто-
мы, как правило, постепенно ослабевают и исчезают через несколько часов
(или 1—2 сут).
В тяжелых случаях поражения ОВ симптомы более выражены: нарастает
затруднение дыхания, гиперсекреция слюнных и бронхиальных желез
повыщается настолько, что жидкость обильно выделяется изо рта и носа.
Пострадавший с трудом дышит. Развивается резкая слабость, появляется
чувство страха, пораженный в панике мечется, испуганный нарастающим
удушьем. Если в этот период не приняты меры к спасению пострадавшего, у
него возникают судороги и потеря сознания. Наблюдается непроизвольное
вьщеление мочи и кала. Развиваются параличи мышц с последующим
смертельным исходом.
При тяжелых поражениях происходит быстрое развитие судорог и пара-
личей. В зависимости от количества поступившего в организм ОВ различают
легкую, среднюю и тяжелую степени поражения (табл. 2.12).
Рассмотренная выше клиническая картина поражения ОВ является типич-
ной при воздействии любых ФОВ. Однако в зависимости от путей поступле-
110
ния ФОВ в организм могут наблюдаться некоторые особенности в развитии
симптомов поражения — так называемые местные симптомы. Например, при
ингаляции ФОВ наиболее выражены миоз, бронхоспазм, гиперсекреция же-
лез слизистых оболочек носа и бронхов; при кожной аппликации — фибрил-
ляция мышц в месте нанесения ОВ, которая возникает через 10—30 мин пос-
ле по падания капель аэрозоля, а при попадании ФОВ в ЖКТ отмечаются
спастические боли в области живота, рвота, диарея.
Динамика развития симптомов интоксикации во многом зависит от вида
аппликации. При ингаляции и попадании ОВ на слизистые оболочки и ра-
невые поверхности картина поражения развивается быстро. При попадании
ОВ на кожные покровы резорбтивное действие вешеств проявляется мед-
ленно — через десятки минут, несколько часов, особенно при низких тем-
пературах. При попадании на кожные покровы относительно больших ко-
личеств ОВ (несколько токсодоз) симптомы поражения развиваются быстрее.
Выше были рассмотрены симптомы, которые возникают обычно при ос-
трых формах интоксикации ФОИ. В то же время при подострых и хроничес-
ких интоксикациях наряду с этими симптомами наблюдаются и некоторые
особенности клинической картины: парезы, параличи, миастения, поражение
миокарда и другие явления, вызванные нарушениями проводимости нервных
волокон и обменных процессов. Подобные симптомы могут возникать и
после острых интоксикаций.
111
2.1.6. Принципы антидотной терапии и профилактики отравлений ФОВ.
Первая медицинская помощь и средства медицинской защиты
112
получаемый в настоящее время синтетическим путем (рис. 2.7). Атропин
применяют в виде 0,1 % раствора для подкожных и внутримышечных
инъекций по 1 мл. Вследствие высокого сродства к ХР атропин образует с
ними прочные комплексы, поэтому снижается концентрация в крови
свободных ХР, с которыми может взаимодействовать АцХ. Однако
комплексы, образованные атропином и ХР, в присутствии высоких
концентраций АцХ разрушаются. Кроме того, атропин в тканях
млекопитаюших гидролизуется ферментативно, что приводит к снижению
эффективности действия атропина и повторному возникнове-
113
рые взаимодействуют с остатками ФОВ в ингибированном ферменте, в
результате чего разрывается ковалентная связь между атомом фосфора
фосфориль- ного остатка и атомом кислорода оксигруппы серина и
восстанавливается активность холинэстераз. Образующийся
фосфорилированный оксим разрушается в организме. Наиболее изученными
и эффективными реактиваторами являются 2-ПАМ (прал ид оксим), 2-ПАС,
дипироксим (ТМБ-4), обидоксим (токсогонин, LuH6) и др. (рис. 2.8).
Реактиваторы используют в виде растворов: 15 % раствор дипироксима по
1—2 мл, 40 % раствор изонитрозина по 2—3 мл, 10 % раствор 2-ПАМ по 2—
4 мл, 25 % раствор обидоксима (токсогонин) по 1 мл.
Реактиваторы следует вводить как можно раньше после поражения, так как
фосфорилированный фермент подвергается изменениям и наступает «старе-
ние» холинэстераз, ингибированных ФОВ, особенно при воздействии зомана.
Еще в 50-х годах прошлого века было показано, что при продолжительном
взаимодействии ФОБ с холинэстеразами (при хранении ингибированных хо-
линэстераз) эффективность реактиваторов падает вследствие изменений в
фермент-ингибиторных комплексах (при «старении» ингибированных хо-
линэстераз). Было показано, что механизм «старения» состоит в том, что в
ингибированном ферменте происходит дезалкилирование фосфорильного
остатка. В приведенной ранее схеме (III) стадия с константой скорости ре-
акции кi+з соответствует процессу «старения». Образующийся при дезалки-
лировании комплекс фосфорилированной холинэстеразы реактивируется
значительно хуже благодаря рπ — dπ сопряжению рπ -электронов атома кис-
лорода ионизированной ОН-группы с Зd-орбиталями атома фосфора:
114
эффективными и при зариновых интоксикациях. Действие подобных веществ
объясняется не только реактивирующим эффектом.
3. С целью защиты холинэстеразы от взаимодействия с ФОБ используют
обратимые конкурентные ингибиторы холинэстераз (типа прозерина —
галанта- мин, пиридостигмин и др.; см. рис. 2.9). Эти вещества образуют
обратимые комплексы с холинэстеразами и защищают функциональные
группы активных центров фермента от взаимодействия с ФОБ. Они обычно
входят в состав профилактических средств, защитное действие которых
продолжается несколько часов.
115
методы искусственного дыхания в сочетании с медикаментозным лечением
для снятия бронхоспазма и бронхореи [Лужников Е.А., 2001].
6. Повышение скорости детоксикации и расхода ФОВ на побочные про-
цессы в крови и тканях внутренних органов. В литературе показано, что не-
которые барбитураты (бензонал и др.) стимулируют синтез микросомальных
ферментов, участвующих в детоксикации ксенобиотиков, в частности ФОВ.
Процесс регулируется на генетическом уровне. Имеются сообщения, что пос-
ле предварительного введения некоторых барбитуратов отмечается
повышение скорости ферментативной детоксикации ФОВ в крови и тканях
внутренних органов ЛЖ, что приводит к снижению токсичности ФОВ
[Обрайен Р., 1967].
7. С целью ускорения выведения антихолинэстеразных веш,еств из крови в
последние десятилетия в клинической токсикологии используются методы
гемотрансфузии и гемодиализа, которые нашли практическое применение
при лечении случайных поражений ФОВ-инсектицидами.
Рис. 2.10. Типичные ГАМК-агонисты в качестве противосудорожных средств для оказания врачебной
медицинской помощи при интоксикации веществами нервно-паралитического действия: барбитураты (тип
I): фенобарбитал (R=C2H5 и R-CgHg), барбитал (R = R' = С2Н5) и др.; бензодиазепины (тип II): диазепам (X
= С1, Y = Н, R = СН3), феназепам (X = Вг, Y = С1, R = Н) и др.
8.В последние годы XX в. в США и других странах проводили работы по
иммунохимической защите от ФОВ [Schteinberger G. et al.]. В качестве анти-
генов используют очищенные специфические белки, содержащие после хи-
мических модификаций в качестве гаптеновых групп остатки ФОВ. На при-
мере параоксона (Е-600) — 0,0-диэтил-и-нитрофенилфосфата показана
принципиальная возможность иммунохимической защиты от ФОВ.
Смысл экспериментов, выполненных в лаборатории G. Schteinberger и сотр.
(США), сводился к следующему. Животным (кроликам) вводили
антиген — очищенный белок (гемоцианин), содержащий большое количестo
остатков ФОВ, присоединенных предварительно к остаткам тирозина.
Антигены, содержащие в виде гаптеновых групп остатки Е-600, вводили
116
животным 3—4 раза с интервалом 1 мес. Это привело к появлению в крови и
тканях кроликов антител, специфичных к ФОВ, концентрация которых со
временем нарастала. На фоне выработанного иммунитета введение через 4
мес Е-600 в дозах, соответствующих нескольким (3—4) LD50, не вызывало
симптомов интоксикации. В этой же лаборатории были получены антитела и
к токсичным ФОВ (зарин и др.).
9.Изучение использования веществ, снижающих синтез АцХ, а следова-
тельно, концентрации последнего в синаптической щели началось давно. С
этой целью исследовали гемихолиний (рис. 2.11) и другие подобные со-
единения, являющиеся ингибиторами холинацетилазы (ХАТ) — фермента,
катализирующего синтез АцХ в нейронах. Однако выраженный эффект при
этом не получен. В последнее время в литературе опубликованы данные об
использовании аналогов гемихолиния, в частности ацетилсекогемихолиния
(см. рис. 2.11), который также является ингибитором ХАТ. Наряду с
ингибиторами ХАТ исследовали вещества, уменьшающие захват АцХ и
продуктов его гидролиза из синаптической щели в синаптическую бляшку,
т.е. некоторые соединения, содержащие хинуклидиновые остатки: N-аллил-З-
хинуклидинол и др. Подобные соединения давали более высокий эффект, чем
гемихолиний, в опытах на мышах и крысах при интоксикациях зоманом.
Выше были рассмотрены основные типы антидотов при поражениях
ФОВ и механизмы их защитного действия. Подобные подходы, оправданные
в учебных целях, естественно, несколько упрощены с точки зрения действия
лекарственных препаратов на организм. Кроме того, некоторые вещества об-
ладают различной направленностью действия. Так, исследуемые в последние
годы реактиваторы типа HGG и HI (HGG-12, HGG-22, HGG-42, Н-16 и др.)
являются не только реактиваторами ингибированных ХЭ, но и ганглиобло-
каторами, что приводит к купированию судорог (т. е. проявляются два меха-
низма антидотного эффекта).
Наиболее эффективно комплексное использование антидотов-
холинолитиков, реактиваторов ингибированных ХЭ, противосудорожных
препаратов в сочетании со средствами и мерами, направленными на борьбу с
кислородным голоданием и восстановление нарушенных функций
организма. Кроме антидотных препаратов, на этапах медицинской эвакуации
проводят симптоматическое лечение, цель которого — восстановление
функций сердечно-сосудистой и дыхательной систем, а также другие
мероприятия по оказанию квалифицированной и специализированной
медицинской помощи.
117
Первая медицинская помощь при поражениях ФОВ включает следующие
мероприятия:
частичная санитарная обработка открытых участков кожи с помощью
содержимого ИПП (ИПП-8), а при попадании ФОВ в глаза — промывание
глаз водой из фляги (вне очага);
118
При оказании квалифицированной врачебной помощи на этапах медицинской
эвакуации и в госпиталях наряду с использованием антидотов проводят комплексную
терапию, направленную на купирование основных симптомов интоксикации (и по
жизненным показаниям). В последующем целью лечения является восстановление
работоспособности и боеспособности пораженных и ввод их в строй.
2.2.1. Иприт
Иприт — один из наиболее эффективных ОВ Первой мировой войны («желтый
крест», «Lost», горчичный газ, шифры армии США — Ни HD — перегнанный иприт),
боеприпасы кодируются двумя зелеными кольцами и маркируются надписью «НО
GAS».
Иприт впервые был получен в 1886 г. Н.Д. Зелинским, работавшим в то время в
лаборатории В. Майера.
С военными целями это вещество впервые было применено Германией в ночь с 12
на 13 июня 1917 г. при обстреле химическими снарядами англофранцузских войск в
долине реки Ипр (Бельгия), откуда и пошло его название. Несмотря на то что на
фронтах Первой мировой войны иприт был применен позже других ОВ, потери от
него были такими же, как от всех других ОВ, вместе взятых (по данным
американского экспедиционного корпуса). По другим данным, потери от применения
иприта были еще более значительны. Это объясняется тем, что иприт вызывает
поражения при различных видах аппликации. Для Первой мировой войны наиболее
характерными были местные поражения кожи, глаз, а также органов дыхания,
приводящие к потере боеспобности.
В 1935 г. иприт был использован итальянской армией во время войны в Абиссинии.
Иприт — β,β'-дихлордиэтилсульфид (CLCH2CH2SCH2CH2CL).
Бесцветная или слабоокрашенная маслянистая жидкость. Технический иприт —
бурая маслянистая жидкость с запахом чеснока или горчицы, tпл14°С, но может быть и
ниже в зависимости от примесей, tкип 217 °С. Пары иприта в 5,5 раза тяжелее воздуха.
Смакс. при 20 °С = 0,6 мг/л, давление насыщенного пара 0,07 мм рт. ст. Несмотря на
малую упругость пара, концентрации паров иприта в воздухе вызывают поражения
глаз, органов дыхания и кожи различной степени тяжести (в зависимости от
температуры, плотности заражения и т. д.).
Иприт плохо растворим в воде (0,07 % при 20 °С), чем объясняется его высокая
устойчивость в ней. Растворенный иприт гидролизуется с образованием нетоксичного
тиодигликоля и НС1. Скорость гидролиза растворенного в воде HD относительно
высокая и зависит от температуры: t 0,5 гидролиза HD при 0,6 °С равна ≈3 ч, при 10 °С
= 51 мин, при 20 °С = 10 мин и при 37 °С = 3 мин. В кипящей воде полный гидролиз
HD происходит за 20—30 мин. Сравнительно малая летучесть и плохая растворимость
в воде обеспечивают стойкость иприта на технике и местности: летом в течение
нескольких недель, зимой — месяцев.
Иприт хорошо растворим в органических растворителях, быстро проникает и
растворяется в резине, масляной краске и лаках. Все это характеризует иприт как
устойчивое, трудно дегазируемое вещество.
Иприт поражает все ткани и органы, в которые проникает. В местах контакта с
ипритом возникают воспалительные и некротические изменения. Основная форма
применения — аэрозоли. Пороговая токсодоза 0,05 мг • мин/л, ICt 50=0,15—0,2 мг-
мин/л, LCt50=l,0—1,5 мг•мин/л. Иприт обладает кумулятивным свойством: величины
токсодоз остаются практически постоянными и не зависят от времени (при
экспозиции до 1—2 ч). Это означает, что при действии в течение, например, часа
поражающие концентрации составляют тысячные доли 1 мг/л, что значительно < С макс.
При действии через кожные покровы LD50= 50—70 мг/кг. Дозы, вызывающие
поражение кожи, 0,05-0,1 мг/см2.
Иприт — сильный клеточный яд, что обусловлено его способностью как га-
лоидного алкила взаимодействовать с нуклеофильными группами (амино-, ими- но- и
сульфгидрильными группами) белков и нуклеиновых кислот (алкилирующие свойства
иприта по отношению к нуклеофильным реагентам). Это приводит к образованию
связей (С—N и др.), характеризующихся высокой энергией (приблизительно 500
кДж), которые не могут быть реактивированы с помощью нуклеофильных реагентов,
что является одной из основных причин отсутствия специфических антидотов от
иприта до сих пор:
2.2.4. Люизит
Люизит — продукт взаимодействия треххлористого мышьяка с ацетиленом, в
состав которого входят β-хлорвинилдихлорарсин (α-люизит), бис-β-
хлорвинилхлорарсин (β-люизит) и три- β-хлорвиниларсин (γ-люизит). Наибольшей
токсичностью обладает α-люизит; β- и γ-люизиты менее токсичны и имеют
второстепенное значение. С учетом кратной связи в хлорвиниловом фрагменте а-
люизит существует в виде двух пространственных изомеров, различающихся своими
физическими свойствами [Александров В.Н., Емельянов В.Н., 1990]:
Рис. 2.14. Транспорт электронов по цитохромам. Цианион присоединяется к трехвалентному железу (Fе3+) цитохрома а3
(цитохромоксидазы).
где n = 2,4 и т. д.
достаточно 0,08 % СО (0,85 мг/л) в воздухе (при вдыхании в течение 3—4 ч).
Симптомы отравления. Различают молниеносную и замедленную форму
отравлений СО. Молниеносная форма возникает при высоких концентрациях в
воздухе СО. При замедленной форме возможны легкая, средняя и тяжелая степени
отравления. При отравлениях легкой степени (10—15 % НbСО в крови) отмечаются
головная боль, ощущение сжатия головы в области висков, головокружение, тошнота,
слабость. При отравлениях средней степени (20—35 % НbСО в крови) возникают
расстройства дыхания, нарушения координации движений («пьяная походка»),
синюшность кожи, слабость, затуманенность сознания; при тяжелых отравлениях (60
% НbСО): потеря сознания, судороги, а затем паралич дыхания и сердца.
Первая помощь. Прекратить поступление СО в организм, пострадавшего вывести
на чистый воздух. Дать кислород (оксигенотерапия). Это способствует диссоциации
НbСО на гемоглобин и СО. При остановке дыхания показано искусственное дыхание.
Защитой служит противогаз с гопкалитовым патроном. При высоких концентрациях
СО в воздухе используют изолирующий противогаз.
2.4.2. Перфторизобутилен
Перфторизобутилен (СFз)2=СF2 (ПФИБ; в зарубежной литературе РFIВ,
молекулярная масса 200,3) — легкокипящая жидкость, t кип 7°С. Растворяется в
органических растворителях, не растворяется в воде. Высокореакционное соединение,
вступающее в реакции присоединения или замещения с нуклео- фильными
реагентами:
В легочной ткани ПФИБ реагирует с нуклеофильными группами белков и
липопротеинов, нарушая проницаемость оболочек пиноцитов и эндотелиальных
клеток капилляров кровеносных сосудов легких, что приводит к отеку легких.
Токсические дозы и концентрации на уровне таковых фосгена и даже ниже (в
зависимости от экспозиции). Ориентировочная LСt50= 1,5—2 мг•мин/л. Обладает
выраженными кумулятивными свойствами.
ПФИБ используют в химической промышленности. ПДК = 0,1 мг/м 3, внесен в
списки Конвенции по запрещению разработки производства, накопления и
применения химического оружия и его уничтожению.
Симптомы поражения. Через несколько часов после интоксикации появляются
первые признаки отека легких: одышка, затруднение дыхания, хрипы и др., часто
характерные для так называемой серой формы гипоксии. Максимальное время
развитие отека легких — через несколько часов с неблагоприятным исходом.
Лечение симптоматическое. Специфических антидотов, как правило, нет.
Индикация: отбор проб воздуха с последующей хромато-масс-спектрометрией.
Средства защиты: противогазы с высокими защитными свойствами или
изолирующие средства защиты органов дыхания.
Условное
Соединение2
обозначение
Способ введения LD50 мг/кг
α-Нафтилтиомочевина АНТМ Реr os, внутрибрюшинно 0,1
Паракват ПАК Внутрибрюшинно 40
Путресцин (1,4-диаминобутан) ПУТ Внутрибрюшинно 5
Бутилокситолуол БОТ Рег 08, внутрибрюшинно 250
Малатион3 МЯТ Внутрибрюшинно 1504
1
Токсичность веществ, являющихся примесями к техническому препарату инсектицида, приме нявшемуся в Пакистане, рассматривается
ниже.
2
Формулы веществ приведены в тексте.
3
Причины потенцирования токсичности веществ, в том числе малатиона, обсуждаются ниже.
4
Суммарная масса всей смеси препарата.
Введение
Масса легких к 3-м суткам,
ООО—Ме(S), мк • мол/кг (внутривенно) OSS —
мг/100 г
Ме(О)
0 - 557 ±7
0 + 1497 ± 62
3,2 + 941 ± 96
8 + 618 ±29
16 + 542 ± 14
80 + 557 ±9
1
Триметилтионфосфат вводили крысам в глицериновом растворе орально за 2 ч до введения 0-метил-
ди(метилтиол)фосфата. который вводят внутривенно в дозе 290 мк • моль/кг, что соответствует ≈2 LD50.
Рис 2.16. Строение каннабинола (а); А9 — тетрагидроканнабинола (б); фрагмента Д8 — тет- рагидроканнабинола (в).
Первые признаки интоксикации (эйфория, ощущение тепла, расширение зрачков)
проявляются, как правило, через 20—30 мин после приема ДЛК. Нарушается
восприятие окружающей обстановки, времени, пространства, возникают расстройства
психики и раздвоение личности (человек как бы видит себя со стороны). Зрительные и
слуховые галлюцинации характеризуются яркостью и красочностью и
воспринимаются как объективно существующие (например, от пролетающей птицы
пораженный видит тень и т.п.). Возникающие образы быстро изменяются. Иногда
появляются чувство страха и беспокойства, подозрительность и мания преследования.
При воздействии высоких доз наблюдаются более тяжелые расстройства психики,
нарушения координация движения, кататония и др. Психозы продолжаются часами и
дольше (в зависимости от дозы). На следующий день отмечается чувство усталости.
Симптомы интоксикации другими галлюциногенами схожи с лизергино- выми
психозами. Иногда наблюдаются некоторые особенности. Так, тетра-
гидроканнабинолы наряду с галлюцинациями (психогенное действие) вызывают
падение АД (гипотензивное действие), понижение температуры тела
(гипотермическое действие), снижение болевой чувствительности (анальге- тическое
действие). Преобладание того или иного эффекта зависит от строения этих веществ и
содержания в них различных компонентов.
2.5.1.2. Антиметаболиты ацетилхолинового обмена
Строение некоторых холинолитиков, обладающих психотропной активностью, во
многом близко к строению АцХ и атропина (рис. 2.17). История изучения веществ
этого типа связана с исследованиями атропина и подобных соединений.
Атропин — алкалоид, выделенный из некоторых растений семейства пасленовых
(Solanaceae), красавки (Аtropa Веlladonna), белены черной (Hyoscyamus niger) и
дурмана (Datura Stramonium). Физиологическое действие экстрактов этих растений
известно с древних времен.
Впервые атропин был выделен из растений в 1831 г. (Маin Н.). Это твердое
вещество, растворимое в спирте. Строение установлено в конце XIX в. Атропин —
сложный эфир тропина и троповой кислоты, содержит асимметричный атом углерода,
поэтому обладает оптической активностью. Это рацемат двух оптически активных
соединений — (+)- и (—)-гиосциаминов. Наибольшей активностью обладает (—)-
гиосциамин. В растениях синтезируется именно эта форма, но при выделении и
хранении она превращается в менее активную (+)-форму. Разработаны синтетические
методы получения атропина. В медицине препарат применяют в виде сульфата.
Рис 2.17. Строение некоторых веществ психотомиметического действия—антиметаболитов ацртмлхолина.
ПЭБ—пиперидиловый эфир бензиловой кислоты; ХЭБ—хинуклидиновый эфир бензиловой кислоты; А б—
виды дитрана.
Анальгетическая активность
Наркотические LD50, Коэффицент
Относительно LD50/ЕD50
анальгетики
морфина
ЕD50 мг/кг октанол/вода
Морфин 1 3200 770 225 1,4
Меперидин 0,1 6400 5 32 40
Метадон 4 800 12 9,6 120
Фентанил 300 10,7 300 3,2 800
Суфентанил 4500 0,71 25000 17,8 1800
Фльфентанил 75 42,7 1100 47 150
Ремифентанил 220 14,5 33000 478,5 18
Карфентанил 10000 0,32 10600 3,25 >2000
1
Расчетные величины с учетом ЕОэд на крысах и относительных данных по анальгетической активности.
Молярная
Молекуля токсичность
Токсины, ПЯ, вещества Источник и способ полученияLD50 1, мкг/кг
рная масса2 LD503,
моль/кг
Белки и пептиды
Ботулинический токсин Бактерии Сlostridium botulinum 2,6 • 10-5 1,5 • 105 1,7• 10-16
Столбнячный токсин Бактерии Сlostridium tetani 2,8• 10-5 1,4 • 105 2 • 10-16
Дифтерийный токсин Дифтерийная палочка 0,24 6,4 • 104 3,7• 10-12
Coryn.diphtheria
Рицин, абрин Растение Ricini communis 2,8 6,5 • 104 4,3• 10-11
Тайпоксин Змея австралийская 2 4,2 • 104 4,8• 10-11
-Бунгаротоксин Змея 25 2,8 •104 8,8• 10-10
Кротоксин Гремучая змея 50 3,0 • 105 1,7• 10-9
Нейротоксин Кобра 75 7,8 • 105 9,6 •10-9
Титьютоксин Скорпион 9 6,8 • 105
Небелковые яды и синтетические вещества
Палитоксин Кораллы Palythoa toxica
Батрахотоксин Лягушка кокой 2 538 3,7• 10-9
Тетродотоксин Рыба фугу 8 319 2,5• 10-8
Сакситоксин Одноклеточные жгутиковые —
8 281 2,8• 10-8
динофлагелляты
Карбаматы (Зоммера) Синтез 8 400 2,0• 10-8
Агент VХ Синтез 30 267 1,0• 10-7
Зоман Синтез 100 181 5,5• 10-7
Зарин Синтез 250 181 1,7• 10-7
Апплисиатоксин Морское животное Styloch.longicom 250 685 3,7• 10-7
Тубокурарин Растение Chondodendron tomen 200 696 2,9• 10-7
Продолжение таблицы 3.1
Молярная
Молекуля токсичность
Токсины, ПЯ, вещества Источник и способ полученияLD50 1, мкг/кг
рная масса2 LD503,
моль/кг
Небелковые яды и синтетические вещества
Аконитин Растение 200 600 3,3• 10-7
Стрихнин Растение 500 334 1,5• 10-6
3
Мускарин Растение 1,1 •10210 5,2• 10-6
Бициклофосфат(третбутил)
Синтез 35 206 1,7• 10-7
3174
ДФФ 5 •10 2,9• 10-5
Na CN 1 • 104 65 1,5• 10-4
1
LD50 в мкг/кг в опытах на 6 мышах при внутримышечном и внутрибрюшном введении.
2
ММ-относительная молекулярная масса
3
Молярная токсичность LD50, моль/кг= LD50, г/кг/ММ
Содержание
Токсин М(Д) Р11
сахара, %
Абрин 65 000 6,1 3,7
А-цепь 30 000 4,6 —
В-цепь 35 000 7,2 7,4
Модецин 63 000 6,2—7,1 2,7
А-цепь 28 000 5,8—6,1 -
В-цепь 31 000 7,3—8,1 -
Рицин 62 057 7,1 4,5
А-цепь 30 625 7,5 2,6
В-цепь 31 432 4,8 6,4
Вискумин 60 000 - 9,7
А-цепь 29 000 - -
В-цепь 32 000 - -
Волкензин 62 000 7,5—8,2 5,7
мг/кг, т. е. на 3 порядка выше, чем у рицина и других лектинов (см. табл. 3.6). На
уровне LD50 ПИР вызывают такие же патологические изменения в организме, как
и лектины.
Известны работы, в которых исследователи стремились получать гибридные
молекулы токсинов, содержащие субъединицы (например, В-цепь) бактериальных
токсинов и субъединицы (А-цепь) лектинов, а также ковалентносвязанные
субъединицы бактериальных токсинов с гормонами и моноклональными ан-
тителами (в последнем случае — получение иммунотоксинов). Попытки ис-
пользовать их для лечебных целей пока не увенчались успехом. Лучшие ре-
зультаты были получены при связывании А-цепей лектинов и ПИР с антителами.
Однако существуют технические проблемы, обусловленные выделением А-цепей
лектинов в чистом виде (без В-цепей) и биологические проблемы, связанные с тем,
что на эти химерные токсины вырабатываются новые антитела и оценка
последствий этого — непростая задача. Тем не менее были получены
иммунотоксины, содержащие антитела на раковые клетки, и ПИР, при введении
которых срок жизни мышей, пораженных раковыми опухолями, был более
длительным, чем в контроле.
Лечение и индикация лектинов затруднены. За рубежом рицин оценивается как
диверсионный (саботажный) яд [Тranke S. еt аl., 1987].
Защита от аэрозолей — противогаз. Возможна иммунная защита. Лечение —
симптоматическое.
Г л а в а 4 ФИТОТОКСИКАНТЫ
таллия при острых и подострых отравлениях приведены в табл. 5.1. При подострых
и хронических поражениях выраженное кумулятивное действие.
Первая помощь — промывание желудка (при поступлении соединений таллия в
ЖКТ), прием активированного угля (30—40 г).
В стационарных условиях — мероприятия по выведению соединений таллия из
организма. Возможно использование комплексообразователей и других средств.
Лечение симптоматическое [Лужников Е.А., 1997].
Применение нейролептических средств, как и при поражениях ТЭС, про-
тивопоказано.