TINCIONES DE USO FRECUENTE EN

MICROBIOLOGIA Y CITOTECNOLOGIA
Antes de adentrarnos en el tema, se debe conocer un poco de historia.

 Anton Van Leeuwenhoek (1632-1723): él era un comerciante, se dice que también era un ayudante de
cámara; la curiosidad lo llevó a la creación de unas diminutas lentes biconvexas montadas sobre platinas de
latón, esto es el primer microscopio de la historia. Más adelante, Marcello Malpighi, demostró cómo
circulaban los glóbulos rojos, así mismo hizo una descripción de los mismos; sumado esto, describió a los
animálculos, que no son otra cosa que protozoos y bacterias.
 Robert Koch, en 1882 asiló el agente etiológico de la tuberculosis, Mycobacterium tuberculosis, y en 1883 el
Vibrio cholerae, agente de la Cólera. Es por estos descubrimientos que se le otorga el Premio Nobel de
Medicina. Realiza, además, unos postulados donde plateaba:
- POSTULADOS DE KOCH
1. La bacteria patógena inicial, agente causal de la enfermedad a estudiar, debe aislarse siempre de
animales enfermos y nunca de animales sanos.
2. Cuando el animal está enfermo, la bacteria debe aislarse en cultivo puro
3. Si la bacteria se inocula a otro individuo debe reproducirse la enfermedad
- ¿Sabían que existen excepciones a estos postulados?
Entre estas excepciones encontramos las enfermedades polimicrobianas, en donde no es sólo UNA
bacteria el agente patógeno por tanto, los cultivos “puros” son muy difíciles de realizar; entre estas
enfermedades está la RINITIS ATRÓFICA PORCINA, causada por 2 bacterias, Pastaurella multocida y
Bordetella bronchiseptica.
También las bacterias oportunistas, aquellas que desarrollan enfermedades en estado de
inmunosupresión.
 Hans Christian Gram (1853-1938): desarrolló la tinción que lleva su
nombre en 1884. *Súper importante, puede ser pregunta quiz, parcial, final, DATO CURIOSO
reparación*.
La primera contribución de Robert
 Rafael Rangel (1877-1909): conocido como “el bachiller”, descubrió en Koch fue el aislamiento del
1905 el Trypanosoma rangeli, este es considerado como no patógeno Bacillus anthracis, agente
para el hombre, al contrario del Trypanosoma cruzi agente causal del patógeno del Carbunco
Mal de Chagas. *La historia de Rangel es interesante y un poco triste, el Bacteridiano, mejor conocido
hombre se suicidó con Cianuro* como Ántrax. Esta enfermedad
puede presentarse como cualquier
Algo importante para el estudio de la microbiología es el árbol filogenético, el enfermedad infecciosa, con fiebre
cual establece que hay 3 grandes ramas que dan origen a una gran diversidad de incluida, sin embargo al momento
organismos, estas ramas son: Eukarya; Archaea y Bacteria del deceso, la sangre sale por los
orificios corporales oscura y sin
Estas ramas poseen un ancestro en común: LUKA coagular, puede además evitar
que se presente el Rigor Mortis.
FILIOGENIA: Historia evolutiva de especies a partir de un antepasado común.
“Origen y desarrollo evolutivo de las especies y en general de las estirpes de seres vivos” –RAE

TAXONOMÍA: es la ciencia de la clasificación.

 La clasificación es una gran división sistemática de microorganismo de grupos similares.
Posterior a esta clasificación macro, se realiza la especiación, que consiste en el agrupamiento
de un microorganismo para clasificarlo y nombrarlo. Para nombrarlo se usa una
nomenclatura, la cual sirve para su identificación. *Todos los nombres están latinizados*

 Orden: se escribe con la terminación -ales

 Familia: se escribe con la terminación -aceae
 Género: entre la familia y la especie. Éste se escribe con la primera letra en mayúscula
 Especie: colección de cepas que comparten características comunes. Se escribe en
minúscula SIEMPRE.
 Cepa: es la variante fenotípica de una especie.

TINCIONES
La tinción es un método sencillo para incrementar el contraste entre una célula y su entorno, para poder observar
de mejor manera sus características y comportamiento en el entorno.

TINCIONES DIRECTAS
En estas tinciones el colorante reacciona directamente con el sustrato, es decir con la célula a estudiar. Entre ellas
encontramos:

 SOLUCIÓN SALINA→ Ayuda a ver protozoarios, se utiliza a temperatura fisiológica,

35°-36°C, entre los protozoarios que se pueden observar está la Giardia (La Giardia
intestinalis es el agente causal de la giardiasis, cuyo principal síntoma es la diarrea,
cólicos abdominales, nauseas. La giardia es un protozoario muy hermoso parece
que te sonríe)
 IODO DE LUGOL → se utiliza en la Tinción de Gram para retener el Cristal Violeta
 HIDRÓXIDO POTÁSICO Y AZUL DE LACTFENOL → ambas tinciones permiten ver elementos de hongos
 TINTA CHINA→ permite observar células levaduriformes capsuladas, sobretodo en Liquido Céfalo Raquídeo,
como el Cryptococcus, que es el agente causal de la Criptococosis, hongo que se encuentra en el
excremento de las palomas.
La reacción de Quellong es
 REACCIÓN DE NEUFELD-QUELLONG→ estudia reacción antígeno-
utilizada para ver la reacción
anticuerpo. antígeno-anticuerpo que se da en
presencia del Streptococcus
TINCIÓN DE GRAM pneumoniae, el cual presenta
Es la tinción diferencial más utilizada. Proporciona información sobre la forma, capsula, un anticuerpo específico
tamaño y agrupación celular; y cómo es el tipo y composición de la pared se une al polisacárido capsular del
Neumococo y causa un cambio en
bacteriana. Permite diferenciar a las bacterias en dos grandes grupos:
el índice refractivo de la cápsula,
por lo que puede verse.
 Gram Positivo: son aquellas bacterias que presentan una pared celular o
bacteriana conformada por peptidoglicanos y 2 ácidos MEGA importantes, el Ácido Teicoico y Ácido
Lipoteicoico. Se tiñe de color azul o morado.
 Gram Negativo: son aquellas bacterias cuya pared celular es mucho más compleja, presenta una membrana
externa, un espacio periplásmico (donde se encuentra una capa de peptidoglicanos) y la membrana
plasmática. Se tiñe de color rosado.
¿Cómo se realiza la Tinción de Gram?

Esto lo podemos aprender con VIASA (si, recuerden la aerolínea de reputación dudosa, Violeta de Genciana
CONVIASA). El procedimiento es sencillo: Iodo de Lugol
1. Se tiene la muestra, que se puede obtener mediante un hisopo, y se realizael Alcohol acetona
frotis. A éste se le agrega Violeta de Genciana por 1min. Luego se lava con agua
de chorro. SAfranina
2. Se le aplica Iodo de Lugol por 1min, también es llamado mordiente, se encarga
de aumentar la afinidad de la célula por el colorante
3. Se lava con Alcohol acetona por 20segs. Es aquí que se determina la calidad de la tinción.
4. Se coloca un contraste llamado Safranina, que es de color rosado, se deja por 30 segs.
5. ¡Y listo!

TINCIÓN DE ZIELH-NEELSEN
Existen algunas bacterias que poseen en su pared celular ácidos grasos de cadena larga (ácido micólico, se
encuentra en la Mycobacterium) estos ácidos le dan la propiedad de resistir la decoloración del alcohol, por lo que a
estas bacterias se les llama Ácido-Resistentes.

¿Cómo se realiza la Tincón de Zielh-Neelsen?

1. A la preparación se le va a agregar Fuscina básica fenitada, posterior a eso se va a calentar con ayuda del
mechero y con un hisopo se va a frotar la lámina y de ella se van a liberar 3 vapores. Una vez que estos 3
vapores se hayan desprendido se deja reposar por 5min.
2. Una vez pasado este tiempo se realiza un lavado con agua, y se va a hacer la decoloración con Ácido
Clorhídrico.
3. Se coloca un tinte de contraste como el Azul de Metileno.

OTRAS TINCIONES
 Tinción de Zielh-Neelsen Modifica o Tinción de Kinyoun: esta tinción se utiliza para analizar muestras
fecales de pacientes con diarrea aguda para determinar la presencia de Coccidias (parásitos-protozoarios)
 Hematoxilina/Eosina
 Tricrómico de Masson: se utiliza para visualizar fibras de colágeno
 Colorante de Orceína
 Giemsa: tinción que se usa mucho en el área de pediatría, para detectar anomalías en la celularidad
sanguínea
 Wright: tinción que facilita la diferenciación de los tipos de células de la sangre. Utilizado también para
descartar la malaria y el paludismo.
 Tincion de Zanck: se utiliza para descartar herpes simple, aquí se pueden visualizar acúmulos de células
fusionadas multinucleadas
 Papanicolau: esta tinción se utiliza en exámenes como medio para descartar la presencia de malignidades
(cáncer y VPH)
 Naranja de Acridina: se utiliza para detectar bacterias en hemocultivos, le da fluorescencia si el
microorganismo está vivo o rojo si está muerto.
 Grocott-Gomori: tinción a base de metanina de plata utilizada para visualizar hongos como Pneumocystis
carinii (éste es un microorganismo oportunista, clasificado como hongo unicelular atípico, es el causante de
la Neumonía en pacientes inmunocomprometidos)
MORFOLOGÍA
COCOS: son bacterias con forma esférica, dependiendo de su agrupación pueden
clasificarse en:

 Diplococos: son aquellos cocos que están en pares, que sólo poseen un
plano de división.
 Estreptococos: son cocos dispuestos en cadenas, al igual que los diplococos,
tienen un solo plano de división.
 Tétradas: son cocos agrupados en forma de cuadrado, tiene 2 planos de
división.
 Sarcinas: cocos agrupados en forma de cubo, tiene 3 planos de división.
 Estafilococos: cocos agrupados en forma de racimo, no tiene un orden
establecido.

BACILOS: bacterias con forma de bastón ellas también se pueden agrupar en:

 Cocosbacilos: bacilos pequeños, redondeados.

 Diplobacilos: pares de bacilo
 Estreptobacilo: cadenas de bacilos
 Formas filamentosas: bacilos que crecen e forma de fibras
 Bacilos Fusiformes: bacilos que tienen los extremos más delgados.
 Vibrio: bacilos en forma de coma

ESPIRILO: bacteria con configuración helicoidal, cuerpos relativamente rígidos.

ESPIROQUETA: bacteria con configuración helicoidal y flexibles.

*De la clasificación de los bacilos, sólo tenemos que tomar en cuenta los COCOBACILOS y los
VIBRIO*

Hay otras morfologías, pero la profesora no las mencionó

DATOS

 Cuando estemos en la práctica y nos muestren una lámina, tenemos que hacer
2 preguntas MEGA SUPER IMPORTANTES:
1. ¿De dónde viene la muestra? (sitio anatómico)
2. ¿Qué tinción es?
 Leptospira interrogans: agente causal de la leptospirosis, bacteria con forma
de signo de interrogación (?), para verla se le hacen tinciones especiales como
la Inmunofluorescencia o campo oscuro. La leptospirosis es una enfermedad
que presenta como síntomas cuadro gripal con fiebre, dolor de cabeza, dolores
musculares y malestar general. Se genera por contacto directo con la orina de
un animal infectado.
 Borrelia burgdorferi: agente causal de la Enfermedad de Lyme, es una clase de espiroqueta, es decir es una
bacteria en forma de espiral. Esta enfermedad se trasmite por la picadura de una garrapata infectada.
 Treponema pallidum: agente causal de la sífilis.
 Spirillum minus: agente causal de la Fiebre Espirilar por Mordedura De Rata, también conocida como
Soduko.
 ¿qué es SEROVAR?: serovar o serovariedad hace referencia a los distintos tipos de microrganismos que se
diferencian por los antígenos que presenta en su superficie. Éstos se logran diferencias por distintas
Pruebas Serológicas, la más conocida es ELISA (Enzyme Linked Inmuno Sorbent Assay) esta prueba permite
el diagnóstico de enfermedades virales (rotavirus, adenovirus) y enfermedades parasitarias (toxoplasmosis,
Leishmaniasis)
 FAGOTIPIA: es una clasificación o tipificación utilizada para buscar similitudes entre bacterias por la
susceptibilidad que posean hacia los fagos (fagos=Bacteriófagos)

Gabriela Cuyuche

“Quiero compartir con ustedes el secreto que me ha llevado a alcanzar todas mis metas: mi fuerza reside
únicamente en mi tenacidad”.

-Louis Pasteur (padre de la microbiología, desarrolló la vacuna contra la rabia)