Exclusión

molecular

1) Mencione de forma clara y concisa el fundamento de separación de mezclas por

cromatografía de exclusión molecular

Cuando se hace pasar una mezcla de moléculas de distinto tamaño, a través de una
columna de filtración en gel; aquellas moléculas con un tamaño mayor que el diámetro de
los poros de las particulas, sólo podran moverse en su camino, a través de la fase
estacionaria, en el espacio que queda entre las partículas; y por lo tanto, no se verán
retrasadas en su descenso. En cambio aquellas moléculas capaces de penetrar en las
partículas se verán retrasadas por la fase estacionaria; en mayor medida, cuanto menor
sea su tamaño. Por lo tanto, las moléculas eluyen en este tipo de cromatografía por orden
decreciente de tamaño molecular.

9) ¿Cuál es el propósito de utilizar Azul-dextrana 2000 en los procesos de elución

empleando geles de exclusión molecular?

El azul dextrana 2000 forma una malla tridimensional haciendo que sea mayormente facil
la filtración de la mezcla

11) Represente en un cromatograma el resultado que obtendría después de separar una

mezcla de carbohidratos compuesta por: sacarosa, xilosa, fructosa y rafinosa, utilizando
como fase estacionaria un gel de Sepharose. EVIDENCIA: adjunte un archivo que
demuestre la resolución, A MANO, de este inciso.

Afinida
d

1) Mencione de forma clara y concisa el fundamento de separación de mezclas por

cromatografía de afinidad

Es un tipo de cromatografía de líquidos que se basa en la unión reversible entre el analito

de interés y un ligando específico, inmovilizado en un soporte sólido inerte. Cuando la
muestra pasa por la columna, sólo son retenidas las moléculas que se unen de manera
selectiva al ligando por afinidad y las que no se unen avanzan con la fase móvil.

3) Esquematice la estructura general de una fase estacionaria empleada en la separación

de mezclas por cromatografía de afinidad
 6) Una vez que el analito queda retenido en la matriz de afinidad, ¿cómo logra su elución?

Cuando se hace un lavado con el liquido apropiado para la muestra que se esta
separando

12) Si estuviera interesado en purificar la L-aminoácido aromático descarboxilasa, a

partir de un cultivo celular, especifique puntualmente qué sustancia usaría como ligando
de afinidad. Represente la estructura molecular de dicho ligando.

18) Investigue un ejemplo en el que se emplee la cromatografía de afinidad en el área

biológica. EVIDENCIA: adjunte el archivo de la referencia* y un archivo** que
incluya lo siguiente:
a) Mezcla b) Analito c) Características de la fase estacionaria
(indicar el ligando de afinidad).
Restricciones importantes: *REFERENCIA: puede ser un artículo, una aplicación descrita
en un libro de texto, un ejemplo descrito en un archivo PDF, etc. EL EJEMPLO NO
PUEDE SER ALGUNO DE LOS QUE VIENE EN LA PRESENTACIÓN DEL TEMA DE
CROMATOGRAFÍA DE AFINIDAD. **EL ARCHIVO DEBE DE INCLUIR LA(S)
IMÁGENES DEL DESARROLLO A MANO DE ESTE EJERCICIO, NO SERÁ VÁLIDO
NINGÚN ARCHIVO CON LA RESOLUCIÓN DEL INCISO ANTERIOR EN FORMATO
DIGITAL.