Занятия № 6

Тема: Электрогенез в клетках. Потенциал покоя, потенциал действия.

Цель работы: Научиться объяснять микроэлектродный метод измерения

потенциалов, научиться объяснять в рамках электродиффузионной теории природу
потенциала покоя и уметь рассчитать его величину по заданным концентрациям
ионов, научиться объяснять и изображать графически ионные потоки через
мембрану в процессе возбуждения клетки.

Студент должен знать: микроэлектродный метод измерения потенциалов,

природу потенциала покоя и потенциала действия, процессы генерации
потенциалов, величина потенциал реверсия.
Студент должен уметь: измерять потенциалы, объяснять процесс генерации
потенциала действия, начертить график, рассчитать величину потенциала реверсии
и потенциала действия по заданным концентрациям ионов.

Вопросы теории самостоятельной подготовки:

1. Что называется трансмембранной разностью потенциалов?

2. Что такое равновесная разность потенциалов, как можно рассчитать для данного
сорта ионов?
3. Как формируется потенциал покоя клетки? Каковы соотношения относительных
проницаемостей разных ионов для клетки в покое?
4. Каковы соотношения электрохимических(μ) и электрических(Δφ) потенциалов
внутри клетки и снаружи в покое?
5. каким способом можно измерить трансмембранный потенциал в эксперименте?
6. В чем состоит процесс «возбуждения клетки»? Как меняются при этом
относительные проницаемости мембраны для различных ионов. Почему?
7. Нарисуйте график потенциала действия. Какие ионы и в каком направлении
двигаются при деполяризации и реполяризации мембраны? Пассивно или активно
двигаются при этом ионы?
8. Как можно разделить токи К+ и Na+? Какие вещества для этого используют?
9. Каковы основные свойства потенциала действия аксона?
10. Нарисуйте синхронно графики потенциала действия и токов Na+ и К+ во время
возбуждения клетки.

Глоссарий
Биопотенциалы, разность потенциалов, потенциала покоя, потенциал действия,
деполяризация, реполяризация.

Блок информации.

В работе изучаются методы регистрации и механизмы формирования покоя и

генерации потенциала действия в аксоне.
Одним из важнейших задач биологической мембраны-генерация и передача
биопотенциалов. Это явление лежит в возбудимости клеток, регуляция
внутриклеточных процессов, работы нервной системы, регуляция мышечного
 сокращения, рецепции. В медицине на исследование электрических полей,
созданных биопотенциалами органов и тканей, основаны диагностические методы:
электрокардиография, электроэнцефалография, электромиография и другие.
Практикуется и лечебное воздействие на ткани и органы внешними
электрическими импульсами при электростимуляции.
Биопотенциалами называют разности электрических потенциалов,
существующие между двумя точками живой ткани. Биопотенциалы,
регистрируемые в организме, – это в основном мембранные потенциалы
Мембранным потенциалом называется разность потенциалов между
внутренней (цитоплазматической) и наружной поверхностями мембраны:

Мембранные потенциалы подразделяются на потенциалы покоя и потенциалы

действия.
Мембранный потенциал покоя (МПП)– стационарная разность электрических
потенциалов, регистрируемая между внутренней и наружной поверхностями
мембраны в невозбужденном состоянии.
МПП определяется разной концентрацией ионов по разные стороны мембраны
и диффузией ионов через мембрану.
Внеклеточная среда имеет высокую концентрацию ионов натрия (Na+) и хлора
(Cl–). Внутриклеточная среда – калия (K+). Клеточная мембрана имеет
селективную ионную проницаемость, что обусловлено наличием ионных каналов.

Рис. 1. Формирование потенциала действия

 В состояния покоя мембрана характеризуется значительной проницаемостью
для ионов калия и хлора, незначительной – для ионов натрия. Натрий-
калиевый насос позволяет поддерживать различие концентраций ионов натрия и
калия по обе стороны плазматической мембраны. Мембранный потенциал покоя
внутри клетки относительно межклеточной жидкости составляет от – 60 мВ до –
100 мВ в зависимости от вида клетки. Во время действия на мембрану внешнего
стимула (например, механической, химической или электрической природы)
электрический баланс нарушается, что сопровождается входом ионов натрия внутрь
клетки и возникновением быстрого изменения мембранного потенциала. На
мембране устанавливается положительный потенциал действия (около 20–30
мВ). Этот потенциал возникает не на всей мембране, а лишь на том участке, к
которому был приложен внешний стимул. Процесс возбуждения мембраны,
сопровождаемый появлением потенциала действия, называется деполяризацией.
По достижению максимального потенциала натриевые каналы закрываются и
поток ионов натрия в клетку полностью прекращается. В то же время
проводимость калиевых каналов повышается и ионы калия под действием как
градиента концентрации, так и электрического поля, оставляют клетку, вынося
с собой из клетки положительный заряд и восстанавливая мембранный
потенциал покоя. Этот процесс, называемый реполяризацией, приводит к
восстановлению потенциала покоя на мембране. Потенциалом действия (ПД)
называется изменение во времени мембранного потенциала клетки, происходящее
при ее возбуждении. Формирование понятия потенциала действия обусловлено
двумя ионными потоками через мембрану: поток ионов натрия внутрь клетки
приводит к перезарядке мембраны, а противоположно направленный поток
ионов калия обусловливает восстановление исходного потенциала покоя.

Подготовка к работе

Теоретические сведения и выполнение работы.

Задание 1. Рассмотрим микроэлектродный метод регистрации трансмембранного

потенциала  на опорном кадре 1 представлена полная схема измерения. На кадре
2 представлены вопросы.
Измерительная система состоит из вольтметра , внешнего электрода, который
заземлен, т.е. всегда фиксирует нулевой потенциал нар=0 ( наружная среда имеет
нулевой заряд). Внутрь клетки вводится микроэлектрод-микропипетка с раствором
КСl. Вольтметр показывает разность потенциалов( напряжение) на мембране м
между внутренней вн и внешней средой нар ( около -60мВ):
Формула м=вн - нар
Т.к. нар =0, то говорят о потенциале на мембране м=вн
 Кадр1

Вопросы по первому заданию:

1.1.В каких направлениях (в клетку или из клетки) в результате диффузии пойдут
ионы а) К+, б) Na+. в) Cl-?
1.2.Укажите знак (больше нуля, ноль, меньше нуля) напряжения, которое может
зарегистрировать вольметр.
Кадр2

Задание 2. Рассмотреть процессы диффузии через каналы мембраны и

возникающую при этом трансмембранную разность потенциалов (кадры 3-4)
Вопросы к заданию представлены на
кадрах 6,7.

Кадр3

В мембране появились ионные каналы,

через которые могут проникать
положительные ионы и не могут
отрицательные.
Концентрация положительных ионов
слева от мембраны больше, чем справа
(слева шесть положительно заряженных
ионов, а справа –только один).
Следовательно, в результате диффузии,
катионы должны стремиться через каналы слева направо-оттуда, где их больше
туда, где их меньше.
В компьютерном варианте можно посмотреть, как будет перемещаться
положительный ион по ионному каналу, и как изменится потенциал,

Кадр 4
СТОП! Катион прошел ионный канал, при этом слева от мембраны осталось пять
катионов и шесть анионов (суммарный
заряд- отрицательный), справа –два
катиона и один анион (суммарный
заряд- положительный).
На мембране возникают
регистрируемая вольтметром разность
потенциалов (слева потенциал меньше)
и электрическое поле, направляющее
катионы справа налево. В
компьютерном варианте можно
посмотреть, как будут перемещаться
катионы в результате диффузии ( слева
их пять, справа-два) и под действием
электрического поля, и как при этом
будет меняться потенциал мембраны.

Кадр5

СТОП! Катион под действием

электрического поля прошел
ионный канал справа налево.
Изменился потенциал мембраны,
уменьшилось электрическое поле.
Катионы, находящиеся слева от
мембраны и обладающие
большой кинетической энергией,
могут двигаться против
электрического поля слева
направо. Причина этого-разность
концентрации катионов.
Катионы, находящиеся справа от
мембраны, могут двигаться по
электрическому полю справа
налево. Возникает равновесная
ситуация, когда поток ионов
справа налево равен обратному потоку, и суммарный ток через мембрану равен
нулю.

Вопросы по второму заданию:

2.1.Что покажет вольметр, если:
 а) в мембране нет ионных каналов?
б) в мембране есть ионные каналы, через которые могут проходить положительно
заряженные ионы?
Кадр 6

2.2.Что покажет вольметр, если:

в) в мембране открыты ионные каналы, через которые могут проходить ионы К+?
г) в мембране открыты ионные каналы, через которые могут проходить ионы Na+?

Кадр 7

Задание 3. Рассмотреть процесс выравнивания электрохимического потенциала :

вн  нар для ионов К+, за счет оттока последних из клетки. При этом
электрический потенциал нар уменьшается до величины потенциала покоя покм. В
этом случае вн = нар суммарный поток ионов К+ равен 0 ( кадр8, 9).
Вопросы к заданию представлены на кадре 10.

КАДР 8
 Напряженность электрического поля
достигает такой величины, что число
ионов К+, покидающим клетку,
сравнивается с числом ионов К+,
входящим в клетку. Суммарный поток
ионов К+ через мембрану Iм равен нулю
(на рисунке один ион К+ двигается внутрь
клетки, другой- наружу). Устанавливается
динамическое равновесие.
Установившаяся в результате на мембране
разность потенциалов называется
потенциалом покоя клетки
Отметим, что в состоянии покоя
суммарный ток Iм через мембрану равен
нулю.
Математический поток ионов
описывается уравнением Нернста-Планка:
Iм= - uRT(dc/dx) – uczF(d/dx)

Где u-подвижность иона, R-газовая постоянная,T-абсолютная температура,c-

концентрация ионов, z-заряд иона в элементарных единицах заряда,F-постоянная
Фарадея, dс/dx и d/dх-градиенты концентрации и потенциала.В начальный момент
нар=вн и поэтому d/dх=0.Таким образом, в начальный момент поток ионов К+ из
клетки наружу Iнар определяется диффузией:
Iнар = -uRT(dc/dx).
По мере выхода ионов К+ из клетки второе слагаемое уравнения(1) увеличивается
до тех пор, пока: |uRT( dc/dx)|=uczF( d…/dx)|. Тогда Iнар =0 т.е. в состоянии покоя
(когда клетка не возбуждена) ток через мембрану не идет. Возникающая при этом
разность потенциалов на мембране является потенциалом покоя покм, величину
которого можно оценить по формуле Нернста:
−RT
❑пок
м = ln ¿ ¿ ¿
F

Кадр10

Вопросы по третьему заданию:

 3.1. Что покажет вольтметр (клетка находится в состоянии покоя) в случае замены
аксоплазмы на межклеточную жидкость, а межклеточной жидкости на аксоплазму?

Задание 4. Обсудите ионный состав системы клетка –внеклеточная жидкость при

развитии потенциала действия. Относительная проницаемость мембраны для Na+
изменилась Рк: РNa = 1:20, и Na+ стал интенсивно
входить в клетку-фаза деполяризации. После
прекращения работы Na -каналов наступает фаза
реполяризации: К+ вытекает из клетки и далее
повторяется процесс, рассмотренный в задании 3.

Вопросы по четвертому заданию:

4.1. Изменится ли , и если изменится , то как ,
потенциал реверсии в случае замены аксоплазмы
на межклеточную жидкость, а межклеточной
жидкости на аксоплазму?

Потенциал реверсии можно рассчитать для

равновесного состояния ионов Na+:
−RT
∆ φ рев
м = ln ¿ ¿ ¿
F
Кадр11

Ответьте на вопросы, представленные на кадрах 11,12.

Вопросы по
четвертому заданию:
4.2. Изменится ли, и
если изменится, то как
потенциал реверсии,
если жидкость
концентраций К+,
уравнять концентрации
Na+ в межклеточной
жидкости и
аксоплазме?

Кадр12

Задание 5: Обсудите кинетику токов через биологическую мембрану в процессе

возбуждения. В работе демонстрируются графики изменения м при различных
внешних электрических воздействиях на мембрану. Покадрово в динамике
обсуждаются особенности графического построения потенциала действия аксона
(кадр13).
 Кадр 13

После окончания потенциала действия мембранный потенциал возвращается к

значению потенциала покоя и при подаче нового положительного импульса может
возникнуть новый потенциал действия.
Подробно показаны изменения Na+ и К+токов при деполяризации и реполяризации
мембраны (кадр14). Разделение токов возможно благодаря использованию
блокаторов:
-для Na+ - тетродотоксина (ТТХ);
-для К+ -тетраэтиламонния (ТЭА). Показаны как суммарный ток через мембрану.
Все графики синхронны. Вопросы представлены на кадре 15.
Кадр 14

Выходящий из клетки калиевый ток снижает мембранный потенциал до величины

покм , одновременно закрываются К+ каналы. Все это уменьшает Iк.
Na+ - каналы уже закрыты и INa=0. Ток через мембрану IM=IK.
В дальнейшем мембранный потенциал устанавливается равным потенциалу покоя
покм, ток через мембрану становится равен нулю IM =0. Нервный импульс-потенциал
действия – окончен, и мембрана готова к новому возбуждению.
Вопросы по пятому заданию.
5.1. Смогут ли и почему по мембране аксона распостраняться нервные импульсы с
частотой 1000Гц?
 5.2. Нарисуйте ионные токи через мембрану аксона, если потенциал на
мембранеравен+30мВ и …
а) тетрадотоксином заблокированы Na+каналы;
б) тетраэтиламмонием заблокированы К+каналы.
5.3. Нарисуйте потенциал действия в случае замены аксоплазмы на межклеточную
жидкость, а межклеточной жидкости на аксоплазму.
Все процессы в заданиях1-5 рассмотрены в динамике и в объеме, достаточном для
самостоятельного усвоения материала.