NORMA TÉCNICA NTC

COLOMBIANA 3909

1996-07-24

CERVEZA.
MÉTODOS PARA DETERMINAR EL CONTENIDO
DE COBRE EN LA CERVEZA

E: BEER. METHODS TO DETERMINE COPPER CONTENT

CORRESPONDENCIA:

DESCRIPTORES: cerveza; bebida alcohólica; bebida.

I.C.S.: 67.160.10

Editada por el Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación (ICONTEC)

Apartado 14237 Bogotá, D.C. - Tel. 6078888 - Fax 2221435

Prohibida su reproducción Editada 2001-08-11

 PRÓLOGO

El Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación, ICONTEC, es el organismo nacional

de normalización, según el Decreto 2269 de 1993.

ICONTEC es una entidad de carácter privado, sin ánimo de lucro, cuya Misión es fundamental
para brindar soporte y desarrollo al productor y protección al consumidor. Colabora con el sector
gubernamental y apoya al sector privado del país, para lograr ventajas competitivas en los
mercados interno y externo.

La representación de todos los sectores involucrados en el proceso de Normalización Técnica

está garantizada por los Comités Técnicos y el período de Consulta Pública, este último
caracterizado por la participación del público en general.

La NTC 3909 fue ratificada por el Consejo Directivo de 1996-07-24.

Esta norma está sujeta a ser actualizada permanentemente con el objeto de que responda en
todo momento a las necesidades y exigencias actuales.

A continuación se relacionan las empresas que colaboraron en el estudio de esta norma a través
de su participación en el Comité Técnico.

BAVARÍA S.A.
CERVECERÍA LEONA S.A.
CERVECERÍA UNIÓN
INVIMA

ICONTEC cuenta con un Centro de Información que pone a disposición de los interesados
normas internacionales, regionales y nacionales.

DIRECCIÓN DE NORMALIZACIÓN
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CERVEZA.
MÉTODOS PARA DETERMINAR EL CONTENIDO
DE COBRE EN LA CERVEZA

1. OBJETO

Esta norma establece los métodos para determinar el contenido de cobre en la cerveza.

2. MÉTODOS DE ENSAYO

El cobre puede ser determinado por los métodos descritos a continuación:

2.1 Método colorimétrico

2.1.1 Reactivos

a) Dibencilditiocarbamato de zinc (ZDBT)

Preparación

Se prepara una solución de ZDBT al 0,5 %(m/v) en tolueno o tetracloruro de

carbono. Se usa tolueno si se desea trabajar con un solvente más ligero que el
agua o tetracloruro de carbono si se desea un solvente más pesado que el agua.

b) Agua destilada libre de cobre

Preparación

Se adiciona al agua destilada unos pocos ml de ZDBT (reactivo a) y se agita. A

continuación se descarta el reactivo después de usado con las trazas de cobre
removidas del agua.

c) Ácido sulfúrico diluido (1+3)

d) n-hexanol

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e) Peróxido de hidrógeno, 30 % de H2O2

f) Tolueno puro o tetracloruro de carbono, los mismos usados para preparar ZDBT
(reactivo a).

g) Sulfato de cobre pentahidratado (CuSO4.5H2O)

2.1.2 Equipos y material

a) Espectrofotómetro o colorímetro con filtro azul-verde o verde.

b) Tubos para centrífuga de 50 ml con tapa de vidrio o tapa de rosca con

revestimiento interior. Después de lavar y enjuagar los tubos se debe asegurar
que estén libres de cobre mediante el siguiente procedimiento: se adiciona a cada
tubo 15 ml de agua destilada, 3 ml de ácido sulfúrico diluido y 5 ml de solución de
ZDBT (reactivo a). Se agitan los tubos vigorosamente, se descarta el contenido y
a continuación se dejan escurrir.

c) Centrífuga con capacidad para emplear tubos de 50 ml a 2 500 rpm.

d) Baño de agua en ebullición

e) Bureta o pipeta

2.1.3 Calibración

a) Preparación de la solución de calibración (solución estándar de cobre)

Se pesan 3,928 g de cristales de sulfato de cobre pentahidratado (CuSO4.5H2O),

grado reactivo, libre de cualquier depósito blancuzco de CuSO4, se disuelve en
agua, y se diluye a un litro. También se puede preparar una solución estándar de
cobre disolviendo 1,000 g de alambre o lámina de cobre puro en 75 ml de ácido
nítrico (1+4). Se calienta hasta completar la disolución, y se deja ebullir hasta que
expela humos, se enfría, y diluye la solución a 1 L en un balón volumétrico. Un ml
de estas soluciones contiene 1 mg de cobre. Para elaborar la curva de calibración,
se prepara una solución que contiene 0,01 mg de cobre por ml, por dilución de 5,0
ml de la solución estándar de cobre, a 500 ml, en un balón volumétrico. Esta
solución se debe preparar inmediatamente antes de su uso.

b) Procedimiento de calibración

A una serie de 6 tubos de centrífuga libres de cobre, se adiciona por medio de una
pipeta graduada (o bureta) 0,0; 1,0; 2,0; 3,0; 4,0, y 5,0 ml de la solución de cobre
diluida, equivalente a 0,0; 0,4; 0,8; 1,2; 1,6 y 2,0 mg/L de cobre presente en la
cerveza usada. Se adiciona 25 ml de cerveza y una gota de hexanol (reactivo d).
Se mezcla bien y se sigue el método para determinar cobre descrito a
continuación.

La absorbancia de la solución del complejo cobre-ZDBT sigue la ley de Beer en

todo el rango de concentración usado. Se grafica la absorbancia (en la ordenada)
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contra mg/L de cobre presente en la cerveza (en la abcisa). Se debe obtener una
línea recta la cual generalmente no pasa por el origen a menos que la cerveza
usada no contenga cobre. Mediante una línea a través del origen paralela a la
línea graficada se corregirá el contenido de cobre de la cerveza empleada en la
calibración e indicará el verdadero contenido de cobre de las mezclas de
calibración. Se calcula el factor para convertir la absorbancia a mg/L de cobre.

2.1.4 Procedimiento

Para evitar adicionar cobre durante la desgasificación, se toma la muestra de cerveza para
análisis directamente de la botella, la cual deberá estar fría y bien agitada inmediatamente antes
de abrirse. Se deja que las burbujas de gas abandonen el líquido antes de remover la tapa
completamente. Cuidadosamente se colocan 25 ml de cerveza fría en un recipiente graduado. Si
la espuma interfiere con la medida de 25 ml de muestra, se adiciona una gota de hexanol
(reactivo d).

Se adicionan 25 ml de cerveza al tubo para centrífuga de 50 ml libre de cobre. Se adiciona una

gota de hexanol(reactivo d), 3 ml de H2SO4 diluido(reactivo c), y 1 ml de solución de H2O2
(reactivo e). Se mezcla y coloca el tubo en un baño de agua en ebullición durante 30 min (véase
la Nota 1).

Se remueve el tubo y se enfría a 25 oC. Se adiciona exactamente 5,0 o 10,0 ml de la solución de

ZDBT (reactivo a) y se tapa el tubo. A continuación se agita el tubo vigorosamente 60 veces. La
agitación se repite cuatro veces, dando a cada tubo 60 agitaciones vigorosas cada vez y
permitiendo que la emulsión formada parcialmente se separe entre cada agitación (Véase la Nota 2).
Se centrífuga el tubo a 2 500 rpm por 2 min , entonces se toma con la pipeta la capa clara de
solvente (véase la Nota 3).

Se transfiere la solución clara del solvente (tolueno o tetracloruro de carbono) a la celda

espectrofotométrica del mismo tamaño de la usada en la calibración. Se mide la absorbancia a
435 nm contra un blanco (se registra como PR). El blanco se prepara como sigue:

Se mezclan 3 ml de la solución de H2SO4(reactivo c) mas 25 ml de agua libre de cobre (reactivo b)

con la misma cantidad de ZDBT usada en la determinación. Se agita bien y se separa la capa de
solvente. Se mide la absorbancia a 435 nm (se registra como A). Se fija el cero en el
espectrofotómetro con solvente en la celda.

Para corregir por el color de la cerveza extraído por el solvente, se lleva a cabo completamente el
procedimiento con el solvente solamente, omitiendo ZDBT. Se mide la absorbancia del extracto
solvente de cerveza a 435 nm (se registra como B) (véase la Nota 4).

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2.1.5 Cálculos

El cálculo del contenido de cobre en la cerveza se realiza mediante la fórmula:

Cobre, mg/L = [PR-(A+B)]xF

Donde:

PR = absorbancia o lectura fotométrica siguiendo el desarrollo de color con

ZDBT (lectura total),

A = absorbancia o lectura fotométrica del blanco.

B = absorbancia o lectura fotométrica del extracto solvente de color,

F = factor para convertir absorbancia o la lectura fotométrica a mg/L de cobre.

Si se usa una curva de calibración, el contenido de cobre se toma en mg/L de la curva después
de restar la corrección por el blanco.

El cobre se reporta como mg/L con dos cifras decimales.

EJEMPLO

F = 0,0075

PR = 46

A = 5

B = 3

Cobre en mg/L

= [46-(5+3)]x0,0075

= 0,285 o 0,29

Notas:

1) Algunas muestras pueden requerir n-hexanol adicional para controlar la excesiva formación de espuma
durante el calentamiento.

2) Es importante que las muestras digeridas se agiten vigorosamente para lograr la completa emulsificación con
la solución de ZDBT para evitar resultados bajos.

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3) Si se llevan gotas de la capa acuosa en la pipeta, estas se pueden remover dejando correr el solvente desde
la pipeta hacia abajo por la pared de un tubo de ensayo limpio, libre de cobre y seco antes de transferirlo a la
celda del espectrofotómetro. Las goticas de agua se adhieren al tubo de ensayo y el solvente limpio puede ser
vertido.

4) Los tubos para determinar el color extractable por el solvente no deben ser enjuagados con ZDBT para
prevenir que el ZDBT ocasione resultados altos.

2.2 DETERMINACIÓN COLORIMÉTRICA EMPLEANDO CUPRETOL

Esta determinación se realiza de acuerdo con el método indicado en la GTC 4, página 123.

2.3 DETERMINACIÓN DE COBRE POR ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN

ATÓMICA

Como un procedimiento estándar alterno, la determinación de cobre en cerveza usando

espectrofotometría de absorción atómica esta restringida a los instrumentos con una sensibilidad
suficiente para detectar niveles de 0,05 mg/L de cobre por aspiración directa. Se debe emplear
una curva de adición de estándar de cerveza.

2.3.1 Reactivos

a) Solución estándar de cobre 1 000 mg/L

Preparación

Se disuelve 1,000 g de cobre metálico en un volumen mínimo de ácido nítrico

(1+1). Se diluye a 1 L con ácido nítrico al 1 %(v/v). Como alternativa, se pueden
utilizar soluciones estándar de cobre de muy alta pureza para espectrofotometría
de absorción atómica suministradas por casas productoras.

b) Agua desionizada

2.3.2 Equipos y material

a) Espectrofotómetro de absorción atómica, equipado con una lámpara de cátodo

hueco de cobre. Se usa un quemador con cabeza de 3 ranuras con lo cual se
aumenta la sensibilidad e igualmente disminuye la tendencia a obstruirse.

b) Balón volumétrico de 100 ml con tapa de vidrio.

c) Pipetas de 1 ml graduadas en 0,1 ml.

d) Pipetas volumétricas de 10 ml.

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2.3.3 Procedimiento

Se usa el mismo método descrito en la NTC 3910, sustituyendo el estándar de hierro por cobre.

El cobre se reporta como mg/L en cerveza con aproximación a dos decimales.

2.3.4 Ejemplos y cálculos

El procedimiento para calcular el contenido de cobre se muestra mejor con un ejemplo en el que
la curva de adición de estándar interno se obtiene graficando la cantidad de cobre adicionada
contra la absorbancia. En la Figura 1 se muestra una réplica de una hoja de trabajo. Por
extrapolación, la intercepción con la abcisa indica que la cerveza contiene 0,13 mg de Cu/L .

Elemento: Cu

Longitud de onda: 324,7 nm

cabeza de quemador de 3 ranuras

Llama: oxidante (azulosa)

(aire/acetileno)

Rejilla

Concentración Absorbancia

1. cerveza + 0,0 mg/L Cu 0,125

2. cerveza + 0,1 mg/L Cu 0,220
3. cerveza + 0,2 mg/L Cu 0,320
4. cerveza + 0,4 mg/L Cu 0,510
5. cerveza + 0,6 mg/L Cu 0,700

Figura 1. Ejemplo del cálculo del contenido de cobre en la cerveza a partir de datos obtenidos
por espectrofotometría de absorción atómica

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3. APÉNDICE

3.1 NORMAS Y GUÍAS QUE SE DEBEN CONSULTAR

Las siguientes normas contienen disposiciones que, mediante la referencia dentro de este texto,
constituyen la integridad del mismo. En el momento de la publicación eran válidas las ediciones
indicadas. Todas las normas están sujetas a actualización; los participantes, mediante acuerdos
basados en esta norma, deben investigar la posibilidad de aplicar la última versión de las normas
mencionadas.

GTC 4: Métodos de análisis de Bebidas Alcohólicas

NTC 3910: Cerveza. Métodos para determinar el contenido de hierro en la cerveza.

3.2 DOCUMENTO DE REFERENCIA

AMERICAN SOCIETY OF BREWING CHEMISTS. Methods of Analysis. 1992