Planning du déroulement de la première séance des TP de Microbiologie alimentaire

Pour CF et CT, E. Staphylococcus Le genre Listeria GAM et levure ASR LAB

coli aureus Salmonella monocytogenes et Moisissures
Jour 1 Préparation des  Préparation de 90 -Préparation de - Préparation de Préparation du Préparation Préparation
Lundi
milieux de culture et ml de diluant et des 90 ml d’EPT bouillon Fraser milieu PCA. du milieu du milieu
stérilisation du tubes à essai de 9 -Bouillon demi et Préparation de TSC. MRS.
matériel nécessaire : ml de (EPT). Rappaport stérilisation diluant (90 ml)
- Stérilisation  Préparation de la Vassiliadis (des (90 ml pour et des tubes de
des boîtes de Petri, gélose de Baird tubes de 10 ml). chaque 9 ml.
des cônes de 0,1 ml Parker et Préparation aliment).
et de 1 ml (pour stérilisation. Gélose inclinée - Préparation des Préparation du
tous les germes)  Stérilisation des de Citrate de tubes de 10 ml milieu OGA
- Préparation tubes à hémolyse. Simmons. de bouillon
des milieux  Préparation de Fraser.
suivants : VRBL Bouillon Cœur - Préparation de
(Pour les CF et CT). Cervelle (10 ml) et la gélose
- Préparation stérilisation. (Oxford).
du diluant (Eau
Peptonnée
Tamponnée: flacon
de 90 ml et tubes à
essai contenant 9
ml).
- Préparation
de la gélose EMB..
Préparation de la
gélose inclinée de
Citrate de Simmons.
- Stérilisation
des tubes à
hémolyse.
Jour 2 Préparation des Préparation des Préparation de la Préparation de la Ensemencement Ajouter le Préparation
Mardi
dilutions et dilutions. suspension mère suspension mère de 1 ml des supplément et des dilutions
 Ensemencement des - Ajout de la (10 g + 90 ml) 10 g + 90 ml de dilutions le jaune et
BP avec VRBL, solution de jaune dans des sacs Bouillon Fraser (ensemencement d’œuf et ensemencem
incubation pdt 48h d’œuf et de Stomacher et demi avec son en profondeur), couler en ent en
(30 et 45 °C). tellurite de incubation à supplément) dans incubation) boite Petri, surface.
potassium au 37°C pdt 20h. des sacs Stomacher 30°C pdt 72 h. Ensemencem Incubation à
milieu Baird- et incubation à Ajouter le ent de 0,1 ml 37°C pdt
Parker, et couler 30°C pdt 24h supplément du des dilutions 48h.
en BP. milieu OGA (Méthode de
- Ensemencement ensemencement double
en surface de 0,1 en surface couche) et
ml des dilutions. (incubation à 25 incubation à
- Incubation à 37 °C pdt 5 jours). 37 °C pdt 24h
°C pdt 48h. en
anaérobiose.
Jour 3 0,1 ml dans 10 -Ensemencement Lecture de
Mercr
edi ml de RVS - de 0,1 ml du résultats.
Bouillon bouillon demi-
Rappaport Fraser dans des
Vassiliadis) et tubes de 10 ml de
incubation Fraser avec son
pendant 48 supplément,
heures à 43°C. incubation à 30°C
pendant 48h.
Jour 4 Dénombrement Coloration de Gram Lecture des
jeudi
Vérification d’E. des colonies résultats :
Coli caractéristiques. Dénombrem
Repiquage de Repiquage des ent.
quelques colonies de colonies Test de
CF sur EMB et caractéristiques dans Gram.
incubation pendant les tubes de BCC, Test de
24h à 37°C. incubation à 37°C pdt catalase.
24h. Repiquage
 des colonies
de LAB dans
des boites de
MRS pour
purification
(incubation)
Jour 5 Recherche Indole Mélanger 0,5 ml des Préparation de laEnsemencement Un
vendr
edi (recherche de tubes BCC avec 0,5 Gélose SS et la dans des Boîtes de deuxième
l’Indole) : ml de plasma de lapin Gélose Hektoen milieu Oxford repiquage et
Ajout de 0.5 ml de dans des tubes à (ne pas (enrichissement test de Gram
réactif de Kovacs et hémolyses stériles, autoclaver) primaire et et de
lecture de résultats. incubation à 37 °C secondaire), Catalase.
Lecture des résultats pdt 2h. Ensemencement incubation à 30°C
immédiats par cadrans sur pdt 48h.
Recherche de Lecture des la surface de la
l’utilisation du résultats. gélose SS.
citrate Présence ou absence Et sur la gélose
Ensemencement du d’un caillot dans le Hektoen
milieu Citrate de culot du tube. Et incubation à
Simmons, incubation 37 °C pdt 48h.
à 37°C pdt 24h.
Jour 6 Recherche de Lecture des Lecture des Dénombrement Un troisième
lundi
l’utilisation du résultats : résultats : des levures et repiquage
citrate Colonies Colonies des moisissures. (test de
Lecture de caractéristiques caractéristiques Gram et
résultats. (voir polycopié). (voir polycopié) catalase).
Repiquage des Préparation
colonies Identification : des
suspectes sur Coloration de produits pou
GN pour une Gram et Test de r les
identification catalase. probiotiques:
(incubation à - MRS
 37°C pdt 24h) - 16 tubes
à essai
stériles
- PBS
stérile 1
L)
- 128
tubes à
essai de
l’eau
physiolo
gique.
- Préparati
on
500ml
GN.
- Stérilisat
ion 32
Boites
de Petri.
- Pipette
stérile.
- Cônes
bleu et
jaune.
Jour 7 Coloration de -
Mardi
Gram. Séance 2 :
 Recherche Test
urée-indole Probiotique
Ensemencement Voir
milieu Urée- polycopié
indole et
 incubation 24h à
37°C.
Recherche de
l’utilisation du
citrate :
Ensemencement
du milieu Citrate
de Simmons,
incubation à
37°C pdt 24h.
Jour 8 Lecture de
Mercr
edi résultat : Voir
polycopié.