Código FGA-73 v.

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Manual de Practicas
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PRACTICA N 10

1. PREPARACION DE ESTANDARES DE TRABAJO (SOLUCIONES PATRON)

2. Objetivos

• Aplicar unidades de concentración en la preparación de soluciones patrón.

• Preparar en forma correcta una solución patrón de concentración conocida.
• Reconocer la importancia de las soluciones patrón en el trabajo de laboratorio para
determinar concentraciones desconocidas en el ámbito biológico.

3. Marco Teórico
Las soluciones estándar o patrones de calibración son mezclas de cantidades conocidas
de ciertos componentes usados para comparar con concentraciones desconocidas en la
muestra. Los patrones se utilizan principalmente para control y aseguramiento de la
calidad, para hacer medidas y balances, para el análisis cuantitativo de muestras, o para
conocer la composición de las muestras. La confiabilidad y la calidad de las sustancias
estándar se aseguran mediante el seguimiento de un protocolo estricto de calidad (QAP)
durante su fabricación.
Una solución patrón es una de concentración perfectamente conocida. Hay que tener
mucho cuidado para establecer exactamente la concentración de la solución patrón
porque la exactitud del análisis volumétrico está directamente relacionada con la calidad
de dicho parámetro. La concentración de la solución patrón puede establecerse de dos
formas distintas: 1.Directamente: se disuelve una cantidad exactamente pesada de un
patrón primario, y se diluye hasta un volumen conocido. 2. Indirectamente: se valora la
solución que contiene una cantidad pesada de sustancia pura con una solución patrón.
Este tipo de solución se denomina un patrón secundario. 1

Cuando se requiere conocer la concentración de cualquier analito como glucosa,

proteínas, NaCl, etc; de una muestra X es necesario recurrir a un método
espectrofotométrico que determine la absorbancia de muestras de concentraciones ya
conocidas (soluciones patrón) , y así graficar las absorbancias y concentraciones de
estas soluciones patrón, obteniendo un gráfico denominado curva de calibración
mediante el cual, se puede determinar la concentración de la muestra desconocida
interpolando en la curva.
Para esto usted procede así:

1. Preparación de las soluciones patrón.

2. Lectura de la transmitancia o absorbancia de las soluciones patrón mediante un
método espectrofotométrico.
3. Elaboración de la curva espectral.
4. Elaboración de la curva de Ringbom.
5. Elaboración de la curva de calibración.
6. Lectura de la absorbancia de las muestras de concentración desconocida.

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Disponible en Internet:
http://es.wikipedia.org/wiki/Soluci%C3%B3n_Est%C3%A1ndar
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7. Determinación de la concentración de las muestras de concentración desconocida

utilizando la curva de calibración.

1. Materiales Equipos e Insumos

Materiales
1 Balón aforado de 50ml.
6 Tubos de ensayo.
1 Pipeta graduada de 1ml.
1 Pipeta graduada de 5ml.
1 Pipeta graduada de 10ml.
1 Vidrio de reloj.
1 Espátula.
1 Agitador.
1 Gradilla.
1 Vaso de precipitado de 100ml.
1 Pipeteador o pera.
1 Churrusco.

Equipos
Balanza analítica.

2. Reactivos
Agua destilada.
• Metil naranja
• Verde de malaquita.
• Rojo metilo.
• Cristal violeta.
• Eosina.
• Azul de bromofenol.
• Verde de metilo.
• Azul de tripan.
• Fucsina.
• Safranina.

3. Procedimiento

6.1 Preparación de estándares de trabajo o soluciones patrón:

1. Prepare una solución 50ml del colorante asignado a una concentración de 0.01% P/V.
2. A partir de la solución Stock preparar 5 soluciones patrón de: 0.062 mg/ml, 0.125
mg/ml, 0.250 mg/m, 0.500 mg/ml, 1.0 mg/ml. Con un volumen final de 5 ml. Calcule el
volumen de la solución Stock que va a agregar a cada tubo.

Cuestionario
1. ¿Que se entiende por solución patrón?
2. ¿Porque es importante a nivel biológico realizar soluciones patrón?
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3. Dar un ejemplo en cada caso.

7. Nivel de Riesgo:

• Nivel 2: Riesgo Medio (Bata de Laboratorio, Guantes, Cofia, Tapabocas, Zapato

Cerrado Bajo, Pantalón Largo).

Manejo de residuos:
• Línea 1

8. Bibliografías

TORRENEGRA, Rubén. Introducción al Análisis Químico Moderno. Pontificia

Universidad Javeriana.1990.

Disponible en Internet:
http://es.wikipedia.org/wiki/Soluci%C3%B3n_Est%C3%A1ndar