Вы находитесь на странице: 1из 6

БИОЛОГИЯ

ПРОБЛЕМА РЕПЛИКАЦИИ КОНЦОВ


ЛИНЕЙНЫХ МОЛЕКУЛ ДНК И ТЕЛОМЕРАЗА

Г. М. ДЫМШИЦ
Новосибирский государственный университет

ВВЕДЕНИЕ
DNA LINEAR END-REPLICATION Преемственность генетического материала в поколе-
PROBLEM AND TELOMERASE ниях клеток и организмов обеспечивается процессом
репликации – удвоения молекул ДНК. В результате это-
G. M. DYMSHITS го сложного процесса, осуществляемого комплексом
нескольких ферментов и не обладающих каталитичес-
Principles of replication and the problem of кой активностью белков, необходимых для придания
полинуклеотидным цепям нужной конформации, об-
duplication of DNA linear molecule ends разуются две идентичные двойные спирали ДНК. Эти
caused by the DNA-polymerases inability for так называемые “дочерние” молекулы ничем не отли-
primerless synthesis are considered. The mecha- чаются друг от друга и от исходной “материнской” мо-
nism of eukaryote chromosome DNA end elon- лекулы ДНК. Репликация происходит в клетке перед
делением, поэтому каждая дочерняя клетка получает
gation by telomerase is described. The role of
точно такие же молекулы ДНК, какие имела материн-
cell telomerase activity in the determination of ская клетка [1].
their proliferative potential is discussed. “Проблема концевой репликации” заключается в
том, что все известные ДНК-полимеразы, являющиеся
Рассмотрены принципы репликации и про- ключевыми ферментами сложного репликативного
блема удвоения концов линейных молекул белкового комплекса, неспособны полностью репли-
цировать концы линейных молекул ДНК. Для того что-
ДНК, связанная с неспособностью ДНК-по-
бы клетки не теряли при делении часть генетического
лимераз вести беззатравочный синтез. Из- материала, 3'-концы ДНК хромосом эукариот наращи-
ложен механизм работы фермента тело- ваются перед каждым раундом репликации короткими
меразы, наращивающего концы ДНК хромо- повторяющимися последовательностями. Это осуще-
сом эукариот. Обсуждается роль активно- ствляется ферментами – теломеразами.
сти теломеразы клеток в детерминации ПРИНЦИПЫ РЕПЛИКАЦИИ
их пролиферативного потенциала.
Процесс репликации ДНК основан на следующих
принципах.
Комплементарность. Каждая из двух цепей “мате-
ринской” молекулы ДНК служит матрицей для синтеза
дополняющей ее, то есть комплементарной, “дочер-
© Дымшиц Г.М., 2000

ней” цепи (рис. 1).


Полуконсервативность. В результате репликации
образуются две двойные дочерние спирали, каждая из
которых сохраняет (консервирует) в неизменном виде
одну из цепей материнской ДНК. Вторые цепи дочер-
www.issep.rssi.ru них молекул синтезируются из дезоксирибонуклеоти-
дов заново по принципу комплементарности к нитям

8 С О Р О С О В С К И Й О Б РА З О В АТ Е Л Ь Н Ы Й Ж У Р Н А Л , Т О М 6 , № 5 , 2 0 0 0
БИОЛОГИЯ
3' 5' 3' 5' 5' 3' 5' 3' 5'

A T A T T A T A T
A T A T T A T A T
T A T G A T A T A
С G С G С G С G
T
G C G C G C G C
T A T A A T A T A
A T A T A T A T

A
G C G C G C G C
A T A T A T A T
T A T T A T A T A
T A T T A T A T A
T A T T A T A T A

5' 3' 5' 5' 3' 5' 3' 5' 3'


“Материнская” ДНК Синтез “дочерних” цепей “Дочерние” ДНК

Рис. 1. Образование полуконсервативных дочерних молекул ДНК в результате реплика-


ции. Синтез дочерних цепей идет в направлении 5' 3' комплементарно и антипарал-
лельно цепям материнской молекулы

материнской ДНК. Дочерние ДНК ничем не отлича- Прерывистость. Для того чтобы новые нити ДНК
ются друг от друга и от материнской двойной спирали были построены по принципу комплементарности,
(см. рис. 1). двойная спираль должна быть раскручена и между ро-
дительскими цепями должны отсутствовать водород-
Антипараллельность и униполярность. Каждая цепь ные связи. Только в этом случае ДНК-полимеразы спо-
ДНК имеет определенную ориентацию. Один конец собны двигаться по материнским нитям и использовать
несет гидроксильную группу (ОН), присоединенную к их в качестве матрицы для безошибочного синтеза до-
3'-углероду в сахаре дезоксирибозе, на другом конце черних цепей. Но полное раскручивание спиралей, со-
цепи находится остаток фосфорной кислоты в 5'-поло- стоящих из многих миллионов пар нуклеотидов, сопря-
жении сахара. Две комплементарные цепи в молекуле жено со столь значительным количеством вращений и
ДНК ориентированы в противоположных направлени- такими энергетическими затратами, которые невоз-
ях – антипараллельно (см. рис. 1) (при параллельной можны в условиях клетки. Поэтому репликация начи-
ориентации напротив 3'-конца одной цепи находился нается одновременно в нескольких местах молекулы
бы 3'-конец другой). Ферменты, синтезирующие новые ДНК. Участок между двумя точками, в которых начи-
нити ДНК, называемые ДНК-полимеразами, могут пе- нается синтез дочерних цепей, называется репликоном
редвигаться вдоль матричных цепей лишь в одном на- (рис. 2). В эукариотической клетке в каждой молекуле
правлении – от их 3'-концов к 5'-концам. При этом ДНК в зависимости от размеров имеются, как правило,
синтез комплементарных нитей всегда ведется в тысячи репликонов. Репликоны в одной молекуле ак-
5' 3' направлении, то есть униполярно. Поэтому в тивируются по расписанию, заданному генетической
процессе репликации одновременный синтез новых программой.
цепей идет антипараллельно (см. рис. 1).
В каждом репликоне можно видеть репликативную
ДНК-полимеразы могут давать “задний ход”, то вилку – ту часть молекулы ДНК, которая под действием
есть двигаться в направлении 3' 5'. В том случае, специальных ферментов уже расплелась (рис. 2 и 3).
когда последнее добавленное при синтезе нуклеотид- Каждая нить в вилке служит матрицей для синтеза ком-
ное звено оказалось некомплементарным нуклеотиду плементарной дочерней цепи. В ходе репликации вил-
матричной цепи, оно будет замещено комплементар- ка перемещается вдоль материнской молекулы, при
ным нуклеотидом. Отщепив “неправильный” нуклео- этом расплетаются новые участки ДНК. Так как ДНК-
тид, ДНК-полимераза продолжает синтез в 5' 3' на- полимеразы могут двигаться лишь в одном направле-
правлении. Такая способность к исправлению ошибок нии вдоль матричных нитей, а нити ориентированы
получила название корректорской функции фермента. антипараллельно, то в каждой вилке одновременно ве-

Д Ы М Ш И Ц Г . М . П Р О Б Л Е М А Р Е П Л И К А Ц И И К О Н Ц О В Л И Н Е Й Н Ы Х М О Л Е К УЛ Д Н К И Т Е Л О М Е РА З А 9
БИОЛОГИЯ
Репликативные вилки

Репликон

Рис. 2. Репликация ДНК эукариотической хромосомы. Показан один из многих репликонов.


Репликативные вилки движутся в противоположных направлениях от точки начала репликации

5' цевой участок растущей цепи? Его синтезирует особая


3'
форма РНК-полимеразы, называемая ДНК-праймазой
(от англ. primer – затравка). Размер рибонуклеотидной
Синтез отстающей
цепи Точка сшивки затравки невелик (<20 нуклеотидов) в сравнении с раз-
фрагментов мером цепи ДНК, образуемой ДНК-полимеразой. Вы-
Оказаки
Брешь после полнившая свою функцию РНК-затравка удаляется
удаления затравки
специальным ферментом, а образованная при этом
брешь заделывается ДНК-полимеразой, использую-
щей в качестве затравки 3'-ОН-конец соседнего фраг-
Растущий фрагмент РНК-затравка
Оказаки мента Оказаки (см. рис. 3).
Удаление крайних РНК-праймеров, комплементар-
ных 3'-концам обеих цепей линейной “материнской”
молекулы ДНК, приводит к тому, что дочерние цепи
Синтез лидирующей
оказываются короче на 10–20 нуклеотидов (у разных
цепи видов размер РНК-затравок различен). В этом и заклю-
5' чается проблема недорепликации концов линейных
3'
молекул. В случае репликации кольцевых бактериаль-
ных ДНК этой проблемы не существует, так как первые
Рис. 3. Схема образования дочерних цепей ДНК в
репликативной вилке. Лидирующая цепь синтезиру- по времени образования РНК-затравки удаляются фер-
ется непрерывно, отстающая цепь сшивается из ментом, который одновременно заполняет образую-
фрагментов Оказаки после удаления РНК-затравок щуюся брешь путем наращивания 3'-ОН-конца расту-
и заделывания брешей
щей цепи ДНК, направленной в “хвост” удаляемому
праймеру.
дут синтез два по-разному организованных реплика-
тивных ферментативных комплекса. Одна дочерняя Проблема недорепликации 3'-концов линейных
цепь (лидирующая) растет непрерывно, а другая (от- молекул ДНК решается эукариотическими клетками с
стающая) – в виде фрагментов длиной в несколько сот помощью специального фермента – теломеразы.
нуклеотидов (см. рис. 3), названных в честь открывше-
го их японского ученого фрагментами Оказаки. После КАК РАБОТАЕТ ТЕЛОМЕРАЗА
действия ферментов, изменяющих структуру фрагмен- В статье А.А. Богданова [2] подробно рассказано о
тов, они сшиваются ДНК-лигазой, образуя непрерыв- строении теломеразы и принципах функционирования
ную цепь. Механизм синтеза дочерних цепей ДНК этого фермента. В 1985 году он был обнаружен у рав-
фрагментами называют прерывистым. норесничной инфузории Tetrahymena thermophila, а
Потребность в затравке. ДНК-полимераза не спо- впоследствии – в дрожжах, растениях и животных, в
собна начать синтез ни лидирующей цепи, ни фраг- том числе в яичниках человека и иммортализованных
ментов Оказаки отстающей цепи. Она может лишь на- (бессмертных) линиях раковых клеток HeLa. Теломераза
ращивать уже имеющуюся полинуклеотидную нить, является ДНК-полимеразой, достраивающей 3'-концы
последовательно присоединяя дезоксирибонуклеотиды линейных молекул ДНК хромосом короткими (6–8 нук-
к ее 3'-ОН-концу. Откуда же берется начальный 5'-кон- леотидов) повторяющимися последовательностями (у

10 С О Р О С О В С К И Й О Б РА З О В АТ Е Л Ь Н Ы Й Ж У Р Н А Л , Т О М 6 , № 5 , 2 0 0 0
БИОЛОГИЯ
позвоночных TTAGGG). Согласно номенклатуре, этот ее 3'-ОН-конец, а в качестве матрицы – РНК, входя-
фермент называют ДНК-нуклеотидилэкзотрансфера- щую в состав фермента. Эта стадия называется элонга-
зой или теломерной терминальной трансферазой. По- цией. После этого происходит транслокация – переме-
мимо белковой части теломераза содержит РНК, вы- щение ДНК, удлиненной на один повтор, относительно
полняющую роль матрицы для наращивания ДНК фермента. Следом идет элонгация и очередная транс-
повторами [3]. Длина теломеразной РНК колеблется от локация.
150 нуклеотидов у простейших до 1400 нуклеотидов у
дрожжей, у человека – 450 нуклеотидов. Сам факт нали- В результате образуются специализированные кон-
чия в молекуле РНК последовательности, по которой цевые структуры хромосом – теломеры [2]. Они состоят
идет матричный синтез куска ДНК, позволяет отнести
теломеразу к своеобразной обратной транскриптазе, то
Материнская
есть ферменту, способному вести синтез ДНК по мат- цепь ДНК
рице РНК. TAG 3'
GGGTTAG
GGGT Теломеразная
AUCCCAAUC
AUC CCAAUC РНК
В результате того что после каждой репликации до- Дочерняя 5'
черние цепи ДНК оказываются короче материнских на цепь ДНК
размер первого РНК-праймера (10–20 нуклеотидов), 5'
3'
образуются выступающие однонитевые 3'-концы мате-
ринских цепей. Они-то и узнаются теломеразой, кото-
рая последовательно наращивает материнские цепи (у
человека на сотни повторов), используя 3'-ОН-концы
их в качестве затравок, а РНК, входящую в состав фер-
мента, в качестве матрицы. Образующиеся длинные
одноцепочечные концы, в свою очередь, служат матри- Элонгация
цами для синтеза дочерних цепей по традиционному
репликативному механизму (рис. 4).
Схема удлинения концов линейных молекул ДНК GGGTTAG
GGGT GGTTAG 3'
TAGGGTTAG
TAG
AUCCCAAUC
AUC CCAAUC
представлена на рис. 5. Сначала происходит компле- 5'
ментарное связывание выступающего конца ДНК с ма-
тричным участком теломеразной РНК, затем теломе-
раза наращивает ДНК, используя в качестве затравки 3' 5'

“Материнская” ДНК
3'
Теломерные
повторы
5'
Репликация

3' 3' Транслокация


5' 5'
РНК-затравки
Удаление РНК-затравок TAG 3'
GGGTTAGGGTTAG
GGGTTAGGGT
и заделывание брешей AUCCCAAUC
AUC CCAAUC
5'
Выступающий конец
3' 3'
5' 5'
Добавление теломерных повторов 3' 5'
к 3'-концу теломеразой
3'
5'
Дорепликация “дочерней“ цепи
3'
5'
Рис. 5. Схема удлинения 3'-конца ДНК с помощью
Рис. 4. Наращивание концов ДНК хромосом эукари- РНК-содержащего фермента – теломеразы. Крас-
от теломерными повторами. Изображен один из ным цветом выделены спаренные комплементар-
концов хромосомы, другой удлиняется по такой же ные нуклеотиды выступающего конца ДНК и матрич-
схеме ного участка теломеразной РНК

Д Ы М Ш И Ц Г . М . П Р О Б Л Е М А Р Е П Л И К А Ц И И К О Н Ц О В Л И Н Е Й Н Ы Х М О Л Е К УЛ Д Н К И Т Е Л О М Е РА З А 11
БИОЛОГИЯ
из многократно повторенных коротких последователь- вых и линиях иммортализованных клеточных культур.
ностей ДНК и теломерсвязывающих белков. Поскольку В организме при дифференцировке клеток теломераза
теломерные последовательности нуклеотидов не явля- репрессируется. Экспрессию теломеразы считают фак-
ются кодирующими, они выступают в роли буферной тором иммортализации клеток.
зоны как защита от проблемы концевой репликации. В соматических клетках, культивируемых in vitro,
Укорочение ДНК в ходе каждого раунда репликации теломераза не работает и теломеры постепенно укора-
лишь сокращает нетранскрибируемый текст теломеры, чиваются. Длина теломер достоверно коррелирует с
но не приводит к утрате смысловых последовательнос- пролиферативным потенциалом (например, в фиброб-
тей – генов и регуляторов их экспрессии. Таким обра- ластах человека). Укорочение теломер может играть
зом, репликация обеспечивает передачу генетического роль митотических часов, отсчитывающих число деле-
материала в поколениях клеток и организмов. ний клетки. По достижении критической длины тело-
мерной ДНК запускаются процессы остановки клеточ-
ТЕЛОМЕРАЗА И “КЛЕТОЧНОЕ БЕССМЕРТИЕ” ного цикла [5].
Еще в 1971 году отечественный ученый А.М. Оловни- Опубликованная в 1998 году в журнале “Science”
ков в своей теории маргинотомии (от лат. marginalis – статья американских исследователей благодаря средст-
краевой, tome – сечение) [4] предположил, что посте- вам массовой информации привлекла внимание не
пенное укорочение ДНК хромосом при репликации только ученых (а в первую очередь не ученых) в связи с
может лежать в основе ограниченного потенциала уд- проблемами старения и “клеточного бессмертия”. В
воения, наблюдаемого у нормальных соматических этой прекрасной работе коллектива, возглавляемого
клеток, растущих в культуре in vitro, так называемого Джерри Шеем, удалось на 40% увеличить число деле-
“лимита Хейфлика”. Американский ученый Леонард ний нормальных соматических клеток человека в куль-
Хейфлик в начале 60-х годов показал, что если для туре. С помощью генно-инженерных методов в клетки
культивирования взять клетки новорожденных детей, был введен ген каталитической белковой субъединицы
то они могут пройти 80–90 делений, в то время как теломеразы и прилегающий к нему участок ДНК, регу-
соматические клетки от 70-летних делятся только 20– лирующий его работу. При активной работе гена увели-
30 раз. Ограничение на число клеточных делений и на- чивался как размер теломерной ДНК, так и продолжи-
зывают лимитом Хейфлика. тельность жизни клеточных культур. Сверх обычных
50 делений клетки прошли дополнительно 20 делений.
Хромосомы соматических клеток человека несут
Укорочение теломер можно рассматривать как мо-
на концах многократно повторенные гексамеры –
лекулярный индикатор количества делений, но не ста-
TTAGGG, общая длина которых может достигать 10 тыс.
рения клетки. Так, на культуре нормальных фиброблас-
пар нуклеотидов. В комплексе со специфическими
тов человека, взятых от доноров в возрасте от 0 до 93 лет,
белками такие тандемные повторы образуют теломеры,
выявили корреляцию между начальной длиной теломер
защищающие концы ДНК от действия экзонуклеаз,
и пролиферативной способностью клетки во всем диа-
предотвращающие неправильную рекомбинацию и
пазоне возрастов. А размер теломерной ДНК сперма-
позволяющие концам хромосом прикрепляться к ядер-
тозоидов не уменьшался в соответствии с возрастом
ной оболочке. Известно, что в ходе пассирования не-
мужчины, что говорит об экспрессии теломеразы в ли-
которых клонов нормальных клеток (например, фиб-
нии половых клеток. Прекращение работы теломеразы,
робластов человека) происходит укорочение теломер в
отмечаемое в подавляющем большинстве дифференци-
среднем на 50 пар нуклеотидов за каждый цикл деле-
рованных соматических клеток животных, является
ния. Подобное укорочение хромосом происходит in vivo
свидетельством их зрелости, а стало быть, и неизбежно
в лейкоцитах периферической крови, клетках эпидер-
следующих затем процессов увядания и гибели.
миса кожи, в эпителии толстого кишечника человека.
Старение особи – это нормальная биологическая
А.М. Оловников выдвинул гипотезу о существова- функция, способствующая прогрессивной эволюции
нии особого биологического механизма, решающего вида, размножающегося половым путем. Давление ес-
проблему концевой репликации, предположив, что он тественного отбора ослабевает после достижения жи-
действует в клетках организмов, размножающихся ве- вотным репродуктивного успеха, поскольку существо-
гетативным путем, а также в половых и раковых клет- вание особи после этого имеет меньшее значение для
ках, но не работает в большинстве наших соматических вида. Смерть от старости удаляет из популяции выпол-
клеток. Наращивание теломеразой концов линейных нивших свою роль предков и дает простор потомкам –
молекул и есть этот механизм. носителям новых полезных признаков. Как любая
Активность теломеразы у высших эукариот обна- важная биологическая функция, старение обусловле-
ружена лишь в трех типах клеток: генеративных, рако- но параллельным действием нескольких молекуляр-

12 С О Р О С О В С К И Й О Б РА З О В АТ Е Л Ь Н Ы Й Ж У Р Н А Л , Т О М 6 , № 5 , 2 0 0 0
БИОЛОГИЯ
ных механизмов [6]. Выключение теломеразы – лишь СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
один из них. 1. Фаворова О.О. Сохранение ДНК в ряду поколений: репли-
кация ДНК // Соросовский Образовательный Журнал. 1996.
Не стоит рассматривать гены, кодирующие белко- № 4. С. 11–17.
вые субъединицы теломеразы и входящую в ее состав 2. Богданов А.А. Теломеры и теломераза // Там же. 1998. № 12.
РНК, как “гены бессмертия”. Поддержание длины те- С. 12–18.
ломерной ДНК на определенном уровне зависит не 3. Докудовская С.С., Петров А.В., Донцова О.А., Богданов А.А.
Теломераза – необычный РНК-содержащий фермент // Био-
только от взаимодействия с ней теломеразы и теломер- химия. 1997. Т. 62, № 11. С. 1411–1422.
связывающих белков, но и некоторых, пока неизвест- 4. Оловников А.М. Принцип маргинотомии в матричном син-
ных факторов, регулирующих образование самих ком- тезе полинуклеотидов // Докл. АН СССР. 1971. Т. 201, № 6.
понентов теломеробразующего комплекса. С. 1496–1499.
5. Хейфлик Л. Смертность и бессмертие на клеточном уровне
Вряд ли бессмертие, достигнутое раковыми клет- // Биохимия. 1997. Т. 62, № 11. С. 1380–1393.
ками, размножающимися в культуре десятилетиями 6. Скулачев В.П. Старение организма – особая биологическая
функция, а не результат поломки сложной живой системы //
без укорочения теломер, – это то, к чему нужно стре- Там же. С. 1394–1399.
миться. Лекарства от смерти нет. Но тот факт, что вве-
дение в такие клетки препаратов, связывающих РНК- Рецензенты статьи Л.И. Корочкин, В.В. Власов
компонент теломеразы, приводит к укорочению тело-
мер с последующей гибелью клеток, вселяет надежду ***
на появление новых средств борьбы с раком. Григорий Моисеевич Дымшиц, доктор биологических
наук, профессор кафедры молекулярной биологии
Понимание механизма работы теломеразы, а глав- Новосибирского государственного университета, зав.
ное, регуляции экспрессии ее в клетке приблизит нас к лабораторией структуры генома Института цитологии
пониманию процессов и злокачественной трансфор- и генетики Сибирского отделения РАН. Область науч-
мации и старения. ных интересов – структурно-функциональная органи-
зация генома, химическая модификация нуклеиновых
Автор благодарен студенту НГУ М.К. Иванову за кислот. Автор более 130 научных публикаций. Соавтор
творческий подход при подготовке иллюстративного и соредактор четырех школьных учебников по общей
материала. биологии.

Д Ы М Ш И Ц Г . М . П Р О Б Л Е М А Р Е П Л И К А Ц И И К О Н Ц О В Л И Н Е Й Н Ы Х М О Л Е К УЛ Д Н К И Т Е Л О М Е РА З А 13