Separaciones

Cromatografía
Temas para exponer:

• Cromatografía de fluidos supercríticos

• Equipos y técnicas auxiliares de introducción de

muestra –GC

• Efectos de matriz en cromatografía de gases (por

qué se genera, cómo se cuantifica, formas de
minimizar su efecto)
 • Pocos métodos analíticos específicos
• Mejor de los casos: Métodos
MATRICES COMPLEJAS selectivos para pocas especies o clase
• Separación del analito de
interferencias

Hasta mediados del siglo XX

Las separaciones analíticas se llevaban a cabo con métodos clásicos:

• Precipitación
• Destilación
• Extracción

Actualmente:

Separaciones analíticas mediante cromatografía y electroforesis

 Cromatografía ….Inicios

La cromatografia es un potente método de separación

que tiene aplicación en todas las ramas de la ciencia. La
técnica fue inventada y denominada asi por el botánico
ruso Mikhail Tswett a principios del siglo XX.

Las especies separadas aparecían como bandas coloreadas

CaCO3
en la columna, lo que justifica el nombre que eligió para el
método (del griego chroma que significa “color”, y graphein
que significa “escribir”).
DESCRIPCION GENERAL

Agrupa un conjunto de métodos que permiten:

• Separar
• Identificar y
• Determinar componentes estrechamente relacionados en mezclas complejas.
 La muestra se disuelve en una fase móvil (liquido, gas, fluido supercrítico) y se hace
pasar por una fase estacionaria inmiscible (columna, superficie sólida)
 Las dos fases se eligen de tal forma que los componentes de la muestra se distribuyen
en grados distintos entre la fase móvil y la fase estacionaria

Fase móvil Mezcla a separar

Fase estacionaria

Separación
 Clasificación de los métodos cromatográficos

Diferentes tipos de clasificaciones según el estado físico de las fases móvil y

estacionaria (gas-líquido, líquido-líquido, etc), soporte utilizado (columna, papel,
etc), mecanismo de la separación (adsorción, reparto), e incluso el tipo de soluto
(cromatografía iónica, cromatografía de proteínas, etc).

Clasificaciones más sencillas:

1- Según el medio físico de interacción entre la fase móvil y la estacionaria

Cromatografía en columna

Cromatografía en plano
Cromatografía en columna

Cromatografía en plano
2- Tipos de fases móviles y estacionarias

GAS Cromatografía
gaseosa
Fase móvil
LIQUIDO Cromatografía
líquida

INSTRUMENTACION

Inyección Separación Detección Tratamiento de

resultados
Cromatografía de elución en columna
Cromatografía de elución en columna

Parámetros cromatográficos

Resolución
Selectividad
Factor de retención
Eficiencia
 CROMATOGRAFÍA DE ELUCIÓN EN COLUMNA

La elución implica el transporte de una especie a través de una

columna por la adición de nueva fase móvil:

A mayor Tiempo en FM menor Tr

A mayor tiempo en FE, mayor Tr

*Tr: Tiempo retención

FM: Fase móvil
FE: Fase estacionaria

Reparto o distribución entre FM y FE

(Transferencia contínua)
Cromatograma

Si al final de la columna se coloca un detector que responde a la

concentracion del soluto y se registra su señal en función del tiempo, o del
volumen de fase móvil añadido, se obtiene una serie de picos como se
muestra en la figura

Uso: análisis cualitativo

Análisis cuantitativo
 ¿Qué es lo más deseable en
cromatografía?

• Picos cromatográficos estrechos y simétricos, con relaciones Señal/Ruido

grandes

• Resolución óptima en un tiempo mínimo

Velocidad de migración de los solutos en la columna

La eficacia de una columna cromatografica para separar dos solutos depende

en parte de las velocidades relativas con las que se lavan o se purifican las
especies dentro de la columana.

Constantes de distribución

suponen la transferencia de un analito entre las fases estacionaria y movil

Constante de distribucion (razon o coeficiente de reparto o Distribucion)

nS y nM son las cantidades de moles de analito en las dos

fases y VS y VM son los volumenes de las dos fases.
Tiempo de retención

Es una función de Kc

Velocidad lineal a lo largo de

columna

Velocidad lineal en la FM

Especie no
retenida Especie retenida, distribución
entre FM y FE

Medida de la velocidad promedio de migración de

la fase móvil.
Tiempo que pasan los compuestos en la FM
 Comportamiento cromatográfico de los solutos

Resolución
• Resolución óptima en un tiempo mínimo
• es una medida cuantitativa de su capacidad para separar dos analitos (A y
B), y permite evaluar la separación entre dos bandas con respecto a sus
anchos.
Ecuación de Resolución

La ecuación de resolución fundamental indica que la resolución se ve

afectada por tres parámetros importantes:
Factor de retención (k)

tR: Tiempo retención analito

t0: Tiempo muerto

Qué indica un valor alto

de k?

Es independiente del caudal y las dimensiones de

la columna. Es un parámetro útil cuando se
compara la retención usando diferentes sistemas
cromatográficos
Cómo cambiar el valor de k?

GC
Ajustar la temperatura de la
fase móvil (gas portador).
Cómo cambiar el valor de k?

LC?
Considere LC de fase
reversa (columna apolar,
fase móvil polar)
Cómo cambiar el valor de k?

LC?
Considere LC de fase reversa
(columna apolar, fase móvil polar)
Factor de selectividad (separación): α

Es la capacidad del sistema cromatográfico para distinguir

"químicamente" entre los componentes de la muestra. Se mide como
una relación de los factores de retención (capacidad) (k) de dos picos
de interés y se puede visualizar como la distancia entre los vértices de
los dos picos.
Factor de selectividad (separación): α

Los valores alfa altos (> 1.0)

indican un buen poder de
separación .

¿Qué implica que α sea 1?

¿Es adecuado tener α muuuy

grandes?
Cómo cambiar el valor de α?

Para GC y HPLC

Averiguar para la próxima clase….

• Picos cromatográficos estrechos, con relaciones Señal/Ruido grandes

En un mundo ideal, los picos cromatográficos serían líneas finas como un

lápiz, sin embargo, debido a los efectos de dispersión, los picos
adquieren su familiar forma "guasiana“, adicionalmente, es frecuente la
asimetría.
Eficacia / Eficiencia

Sistema cromatográfico

COLUMNA
Describe el ensanchamiento de las bandas de los solutos en su movimiento a
través de la columna.

Mayor Eficiencia: Picos mas estrechos

Menor Eficiencia: Picos mas anchos
 Teoría de platos teóricos
Eficiencia en términos de N

N: Número de platos o placas  es principalmente una medida de

la dispersión máxima en la columna, que refleja el rendimiento de la
columna.

Analogía: Comparación eficiencia de la columna con destilación

fraccionada, en donde la columna se divide en “Placas teóricas”

https://www.chromacademy.com/frameset-
chromacademy.html?fChannel=1&fCourse=2&fSco=11&fPath=sc
o11/gc_1_2_AimsObj.asp
Cuantas más placas ("teóricas") estén disponibles
dentro de una columna, más equilibrios posibles y
mejor calidad será la separación.

H: Altura de plato
A mayor N, MENOR H.
Altura equivalente a una placa teórica (HETP)
 Asimetría de bandas

Cómo interpreta esta banda o pico

cromatográfico?

• Retención fuerte por parte de la fase estacionaria.

• Es una indicación de que se están produciendo fenómenos

de adsorción significativos, llamados "sitios activos" (que
generalmente no deberíamos tener).

• Cambio del factor de retención

Alto k
Bajo k

tR
 Asimetría de bandas

Cómo interpreta esta banda o pico

cromatográfico?

Suele observarse en sistemas de reparto en los que las

interacciones soluto-fase estacionaria son relativamente
débiles comparadas con las interacciones soluto-soluto

O suele ser una indicación de sobrecarga de la fase

estacionaria.

Sobrecarga o columna dañada (canales)

Alto k
Bajo k
Midiendo la asimetría: Factor de asimetría
(A)

Pico con frente Pico con cola

a b

Límite aceptable
Columna nueva: 0,9 – 1,2
A <1,5 (Aceptable)
A> 2,0 Inaceptable (revisar separación y resolución)
Midiendo la asimetría: Factor de cola
 Número de platos teóricos para picos
asimétricos

El cálculo preciso del número de platos requiere picos simétricos, pero

hay una ecuación para estimar el número de placa con picos
asimétricos: