Zonas Áridas 16(1): 1-16 (2016)

ISSN 1013-445X (Versión impresa)

ISSN 1814-8921 (Versión electrónica)
DOI: http://dx.doi.org/10.21704/za.v16i1.633
© Centro de Investigaciones de Zonas Áridas
Universidad Nacional Agraria La Molina, Lima - Perú

Artículo original

Germinación de tres especies de cactáceas

endémicas de méxico en condiciones asépticas
Germination of three species of endemic cacti of Mexico in
aseptical conditions
Rodrigo M. Villanueva, María del Carmen Navarro*, Héctor R. Eliosa
Cuerpo académico de Biología de Grupos de Organismos, Escuela de Biología, Benemérita Universidad Autónoma de
Puebla.
*Autor para correspondencia. E-mail: maria.navarro@correo.buap.mx

Recibido: 17 de diciembre 2014 Aceptado: 8 de noviembre 2015

RESUMEN
Echinocactus platyacanthus, Mammillaria pectinifera, y Escontria chiotilla son especies endémicas
de México que tienen importancia ecológica y económica. Sus poblaciones han disminuido
principalmente por el comercio y recolección ilegal de especímenes, así como por el cambio
de uso de suelo y la industrialización en sus áreas de distribución, en consecuencia las tres
especies están incluidas en los Apéndices de la Convención sobre el Comercio Internacional
de Especies Amenazadas de Fauna y Flora Silvestres. El cultivo de tejidos vegetales permite
la producción de gran número de plantas en corto tiempo y posibilita la conservación ex situ
de estas especies. En el presente estudio se construyó una Cabina de Seguridad Biológica
como alternativa de campana de flujo laminar y con el uso conjunto de una Cámara de
Germinación se evaluó el posible efecto de la escarificación (alcohol, agua a 50°C/10 y 15min)
en el porcentaje y la velocidad de germinación. También se determinó el efecto de diferentes
concentraciones de suplementos orgánicos y aminoácidos en la formación de brotes mediante
cultivo in vitro. El porcentaje de germinación mostró diferencias significativas entre las especies
(X 2=6.37; P= 0.041), el valor más alto se observó en E. platyacanthus (76.11). El índice de
germinación también resultó significativamente diferente entre las especies (X2=28.013; P<
0.001) y por la interacción entre especie y tratamiento (X 2=15.01; P=0.020). El mayor valor
ocurrió en semillas de E. platyacanthus y M. pectinifera al sumergirlas en agua 50ºC/10 min
y 50°C/15 min con 30.02 y 16.80 respectivamente. Por otra parte, en el cultivo de tejidos
vegetales sólo se observaron tres brotes. Los resultados indican que es factible obtener plántulas
de E. platyacanthus y de M. pectinifera cuando sus semillas son tratadas con agua a 50ºC/10
min y 50°C/15 min en cultivo in vitro con materiales de bajo costo.
Palabras clave: escarificación, Escontria chiotilla, Echinocactus platyacanthus, germinación,
Mammillaria pectinifera.
Villanueva et al.

ABSTRACT
Echinocactus platyacantus, Mammillaria pectinifera, y Escontria chiotilla are endemic Mexican
species that have ecological and economic value. Whose populations had decreased owing
to the traffic and illegal harvest, also the change in the ground use and industrialization in
the distribution areas, in consequence the three species have been included in Appendix of
Convention about International Trade of Endangered Species of Wild Fauna and Flora. The
vegetable tissues culture allows the production of a big number of plants in a short time and
allows ex situ preservation of these species. In the present study a Biological Security Cabin
was built as an alternative of a laminar flow cabinet and the combined use of a Germination
Cabinet with the purpose of appraise the possible effect of scarification (alcohol, water
50°C/10 min & 50°C/15 min) in the germination percentage and speed. Also the effect of the
different concentrations of organic supplements and aminoacids in formation of sprouts by
in vitro culture, was determined. The specie affected significantly the germination percentage
(X2=6.37; P=0.041); the highest value was observed in E. platyacanthus (76.11). The
germination index was resulted to be significantly different between the species (X 2 =28.013;
P<0.000) and by the interaction between specie and treatment (X2= 28.013; P=0.020). The
highest value occurred in E. platyacanthus and M. pectinifera seeds by submerging them in
water 50°C/10 and 15 min (30.02 and 16.80 respectively); in vegetal tissue culture only three
sprouts were observed. Results indicate that is feasible to obtain seedlees of E. platyacanthus
and M. pectinifera when their seeds are treated with water 50°C/10 and 15 min in vitro culture
using low cost materials.
Keywords: scarification, Escontria chiotilla, Echinocactus platyacanthus, germination,
Mammillaria pectinifera.

INTRODUCCIÓN
México es el país con mayor concentración de cactáceas distribuidas particularmente
en zonas áridas y semiáridas (Bravo-Hollis & Sánchez-Mejorada, 1978; Jiménez-Sierra,
2011; Hernández-Oria et al., 2007). Estas plantas tienen valor cultural, social, económico
y ecológico, por lo que se les ha dado diferentes usos como: alimento, forraje, medicinal,
cercos vivos, ceremonias religiosas y ornamentales, lo que ha provocado un decremento de sus
poblaciones debido al comercio y recolección ilegal, además del cambio de uso de suelo y la
industrialización. De las 518 especies (25 géneros) y 206 subespecies de cactáceas distribuidas
en el país, 276 se encuentran registradas en la NOM-059-SEMARNAT-2010 y 21 en la lista
de especies y poblaciones prioritarias para la conservación (Hernández & Godínez, 1994;
Bárcenas, 2006; Jiménez-Sierra, 2011; LGVS, 2014).
De las cactáceas mexicanas, 80% se han reconocido como endémicas (Jiménez-Sierra, 2011);
tal es el caso de Echinocactus platyacanthus, Mammillaria pectinifera, y Escontria chiotilla, las
cuales tienen importancia ecológica y económica (Jiménez- Sierra et al., 2007; Navarro &
Deméneghi, 2007). Las dos primeras se encuentran en la categoría de protección especial
(NOM-059-SEMARNAT-2010), mientras que E. platyacanthus ha sido catalogada como
especie amenazada categoría 4 debido a que sus tallos son utilizados para preparar dulces
(acitrón) y como forraje (Bravo-Hollis & Sánchez-Mejorada, 1991; Eguiarte & Jiménez,

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1999). M. pectinifera se encuentra en peligro de extinción categoría 2 (Hernández & Godínez,

1994) debido a la excesiva explotación de sus poblaciones con fines ornamentales (Jiménez-
Sierra et al., 2007; Navarro & Deméneghi, 2007; Valverde et al, 2009; Portilla - Alonso, 2011).
Por otra parte, los frutos de E. chiotilla se emplean en la elaboración de nieves, mermeladas,
vinos, pasteles y en la industria farmacéutica como vehículo en pomadas (Nieto, 1980); sus
tallos se utilizan como combustible, forraje y en la construcción y delimitación de predios
(Casas & Barbera, 2002). Por tales razones las tres especies están incluidas en los Apéndices
de la Convención sobre el Comercio Internacional de Especies Amenazadas de Fauna y Flora
Silvestres (CITES).
Como resultado de la extracción desmedida de cactáceas de su hábitat natural, ha sido
necesario implementar acciones para preservarlas o incrementar su tasa de producción
por medio de propagación por semillas, esquejes, brotes y vástagos que son considerados
métodos tradicionales y de bajo costo o por medio de Cultivo de Tejidos Vegetales (CTV)
(Arredondo, 2002), el cual constituye un procedimiento alternativo para la obtención y
conservación ex situ de estas especies, principalmente de aquellas que se encuentran en alguna
categoría de amenaza (López et al., 2000), debido a que permite su reproducción masiva y
la obtención de material vegetal libre de patógenos con características uniformes a partir de
semillas, embriones, tallos, meristemos, callos o granos de polen (Aceves & Hernández, 2000;
Mendoza, 2007); sin embargo, algunas desventajas del CTV se presentan en la adquisición
del material vegetal (Escobedo et al., 2002; Molina et al., 2005; Cuellar et al., 2006) y en
la proliferación de bacterias u hongos que afectan y destruyen los cultivos, en consecuencia
evitar la contaminación es un aspecto básico durante el desarrollo de ésta práctica (Mroginski
& Roca, 1993).
Otro aspecto que influye en la propagación de los cactus está relacionado con las características
propias de las semillas, como: la viabilidad, que está condicionada por factores como la
temperatura, luz y humedad (Bewley, 1997; Flores-Martínez et al., 2008), la longevidad (Franco
& Nobel 1989; Rojas-Aréchiga & Batis, 2001), las características genéticas de las especies y la
latencia de tipo endógena o exógena (Franco & Nobel, 1989; Rojas-Aréchiga & Batis, 2001;
Cardoso, 2009) que en algunas especies se presenta debido al tiempo de germinación o por la
morfología de las semillas. En cactáceas se ha observado que existen algunas características
químicas o de estructura del embrión que impiden la germinación (Ochoa-Alfaro et al., 2008;
Baskin & Baskin, 2014).
La latencia puede interrumpirse mediante la escarificación química con el uso de ácidos
(Rojas-Aréchiga & Vázquez-Yanes, 2000; García et al., 2004; Rosas-López & Collazo-Ortega,
2004; Ramírez & Valverde, 2005; Sánchez-Salas et al., 2006; Flores-Martínez et al., 2008;
Larrea-Alcázar & López, 2008) o de manera mecánica mediante el desgaste de la testa (Álvarez
& Montaña, 1997; Flores & Briones, 2001; Sánchez-Salas et al., 2006; Flores & Juardo,
2011). Para E. platyacanthus, M. pectinifera y E. chiotilla, se ha documentado la presencia de
latencia fisiológica, que puede inhibirse mediante la aplicación de sustancias químicas o calor
(Baskin & Baskin, 2014).

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Villanueva et al.

Para inhibir la latencia en semillas además de los ácidos se emplean otras sustancias como:
tween, giberelina, agua destilada a 50ºC o 70ºC y alcohol etílico absoluto. Para las semillas
de M. pectinifera y E. chiotilla el ácido sulfúrico ha provocado respuestas favorables 80% y
90% respectivamente. En E. platyacanthus el lavado de semillas por 5 min con agua destilada
estéril y en agitación constante, ha ocasionado 85% de germinación. (Ffolliott & Thames,
1983; Medrano-García, 1998; Navarro & Deménegui, 2007; Tenango-Cabañas, 2005; Retes-
Pruneda et al., 2007; Martínez-Flores, 2010).
Cuando se propagan cactáceas in - vitro es importante considerar las técnicas de desinfección
para garantizar su establecimiento, con este fin se ha utilizado agua jabonosa, inmersión en
alcohol e hipoclorito de sodio, tween o métodos menos agresivos como agua destilada estéril
y agitación constante, que no dañen el material vegetal (Retes-Pruneda et al., 2007; Manzo-
Rodríguez, 2010; Cuellar et al., 2006; Tenango - Cabañas, 2005; Martínez – Cárdenas et al.,
2003; Martínez-Flores, 1999). Las semillas de E. platyacanthus al recibir un tratamiento de
desinfección consistente de agua jabonosa corriente, inmersión en alcohol al 70% e inmersión
de hipoclorito de sodio al 12% de solución comercial muestran contaminación en un 10.5%.
Las semillas de E. chiotilla al ser lavadas con blanqueador comercial (Cloralex al 15%) por
25 minutos no manifiestan contaminación (Manzo-Rodríguez, 2010; Retes-Pruneda et al.,
2007). Por otra parte, el uso de etanol (70%) e hipoclorito de sodio para desinfectar las
semillas de E. platyacanthus provoca contaminación y oxidación de las partes vegetales en un
30% (Pérez et al., 1998). Los objetivos del presente estudio fueron 1) evaluar el efecto de la
escarificación en el porcentaje y el índice de germinación de semillas de E. platyacanthus, M.
pectinifera y E. chiotilla mediante el uso de una Cabina de Seguridad Biológica basada en el
funcionamiento de una campana de flujo laminar, además de una Cámara de Germinación y
2) determinar el efecto de diferentes concentraciones de suplementos orgánicos y aminoácidos
en la producción de brotes en cortes de disco de las plántulas en cultivo de tejidos vegetales
empleando una Cabina de Seguridad Biológica y una Cámara de Germinación.

MATERIALES Y MÉTODOS
El trabajo se llevó a cabo durante un año en el Laboratorio de Ecología Vegetal de la Escuela
de Biología de la Benemérita Universidad Autónoma de Puebla a partir de diciembre de 2009.

Especies de estudio
Echinocactus platyacanthus Link & Otto. Los ejemplares adultos alcanzan de 50 cm a 2
m de altura y de 40 a 80 cm de diámetro; sus tallos son simples, grandes, columnares o
toneliformes, rara vez ramificados, verde oscuro, en ejemplares juveniles presentan franjas
horizontales púrpura o rojas; el ápice está cubierto por abundantes tricomas amarillos; el
número de costillas incrementa conforme la edad de los individuos que llegan a contarse hasta
60. Espinas rígidas, amarillentas a grisáceas, subuladas, ligeramente aplanadas, rectas o algo
curvas, estriadas longitudinalmente Presenta flores amarillas. Frutos de 4.0-7.0 cm de largo,
1.1-1.4 cm de ancho, largamente oblongos, con tricomas abundantes; semillas 2.2-2.5 mm
largo, ca. 1.8 mm ancho, ovadas, pardas a negruzcas, brillantes (Arias et al., 2012).

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Mammillaria pectinifera F.A.C.Weber. Tallos simples, aplanados a globosos con jugo

semilechoso, tubérculos 2.5-3.5 mm de largo, comprimidos lateralmente, axilas desnudas,
aréolas elípticas. Espinas radiales, pectinadas, adpresas, blancas, sin espinas centrales. Flores
de 1 a 2 cm de largo; pericarpelo ca. 1.0 mm largo, 1.5-2.0 mm ancho, tépalos externos
oblanceolados, ápice cuspidado, margen ligeramente fimbriado, blanquecino a blanco-
verdoso, franja media rosado claro a pardo claro, ápice agudo, margen ligeramente fimbriado,
blanco, franja media rosada; frutos 5.0-7.0 (-9.0) mm largo, parcialmente embebidos en las
axilas de los tubérculos, verde claro a blanco cuando se encuentra seco; semillas 1.2-1.4 mm
de largo, 0.9 -1.1 mm de ancho, testa negra (Arias et al., 2012).
Escontria chiotilla (F.A.C.Weber ex K.Schum.). Tallo principal corto, ramas hasta 2.0 m
de largo y de 8 a 20 cm de ancho, costillas agudas, aréolas 0.8-1.3 cm de largo, elípticas,
generalmente confluentes en la parte terminal o media de las ramas, distantes entre sí. Espinas
radiales de 0.5 a 10 cm de largo, subuladas, rectas, grises, las espinas centrales entre 1 y 7 cm
de largo, desiguales, una más larga, rectas, subuladas, pardogrisáceas. Flores 3-4.5 cm de largo
y 2.0 cm de ancho; pericarpelo 1 a 1.4 cm de largo, 0.8-1.2 cm ancho, brácteas deltoides, ápice
acuminado, cartáceas, pardo claro o amarillo claro, tépalos largos, oblongos, ápice acuminado
o cuspidado, amarillo. Frutos 2.6-5 cm de largo, 2.5-3.7 cm de ancho, púrpura, brácteas 0.8-
1.1 cm de largo, 0.6-0.8 cm de ancho, deltoides, amarillas, translúcidas. Semillas 1.7-2.0 mm
de largo, 1.0-1.3 mm de ancho (Arias et al., 2012).
El material vegetal se obtuvo del banco de semillas de la Colección de Cactáceas y otras
Suculentas del Estado de Puebla Helia Bravo - Hollis de la misma institución. Las semillas
utilizadas en el experimento habían permanecido almacenadas durante dos años.

Condiciones experimentales
Para la realización del experimento fue necesario construir una Cabina de Seguridad Biológica
basada en el funcionamiento de una Campana de Flujo Laminar; además de una Cámara de
Germinación mediante el uso de materiales de bajo costo.

Cabina de Seguridad Biológica (CSB)

Para su construcción se utilizaron 6 placas de acrílico de 0.3 mm de espesor de 50 cm de ancho
por 60 cm de largo, que se unieron con silicón (marca pens) para formar un cubo en cuya
base y en el interior se fijó una manguera transparente de 1.5 cm de diámetro perforada cada 7
cm y con las perforaciones expuestas hacia la superficie. Dicha manguera sobresalía en la parte
superior derecha del cubo (CSB) y su extremo se unió a la tapa de un recipiente de plástico
con capacidad de 5 l que contenía 2 l de agua para la filtración. Al recipiente de plástico se le
colocó otra manguera en el fondo, la cual suministraba aire desde un generador artificial para
realizar la filtración por agua estéril.
Al frente de la cabina se realizaron dos orificios para la colocación de guantes de plástico largos
(europlex soft), los cuales fueron pegados con cinta de lámina metálica (scotch) para facilitar
la manipulación de los objetos en su interior. La cabina fue colocada en una superficie de
madera dentro de un cuarto cerrado que no permitía la entrada de corrientes de aire. Una vez
terminada la construcción de la CSB se removieron todos los excesos de silicón mediante un

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lavado con antibenzil rojo concentrado (Altamirano) e hipoclorito de sodio (Cloralex; Figura
1a, b y c.).
Una semana antes de la siembra la CSB fue desinfectada con antibenzil rojo concentrado
(Altamirano), adicionalmente todos los días se roció con hipoclorito de sodio al 50%
(Cloralex). Antes de la manipulación de material se lavaron manos y antebrazos con antibenzil
rojo, secado al aire y posteriormente un lavado con alcohol al 96%. Para la manipulación
y trabajo dentro de la CSB se utilizaron pinzas, navajas y agujas de disección, previamente
esterilizadas en autoclave a 121ºC y 15 kg/cm2 de presión durante 25 min.
Dentro de la CSB se colocaron dos placas de vidrio esterilizadas de 20 x 10 cm, que fueron
utilizadas como área de trabajo y alrededor de ellas fueron ubicadas cuatro lámparas de alcohol,
que se encendieron 15 minutos antes de la siembra de semillas manteniéndose así durante el
periodo de trabajo.

Cámara de Germinación (CG)

La CG se construyó con una base de madera (1.30 x 0.60 m) y 4 lámparas de 20 watts/plant
- aquarium de 61 cm colocadas sobre la pared (2) y el techo (2); al frente se colocó plástico
de invernadero para evitar corrientes de aire (Figura 2.) y tenía capacidad para mantener
aproximadamente 300 frascos con una temperatura promedio entre 24 y 26ºC.

Diseño experimental.
Se llevó a cabo un experimento factorial para determinar el posible efecto de la especie (E.
chiotilla, E. platyacanthus y M. pectinifera) y de la escarificación (Alcohol etílico absoluto/
15 seg, agua caliente a 50°C/10 min y agua caliente a 50°C/15 min) en el porcentaje de
germinación y en la velocidad de germinación. Para todos los tratamientos se usaron seis
réplicas, cada una con 15 semillas. Por medio del método de flotación se determinó la posible
viabilidad de las semillas (Cruz, 2011), se eliminaron las semillas del sobrenadante y de las
restantes se seleccionaron aleatoriamente 60 para cada tratamiento.
Antes de la siembra las semillas fueron colocadas en sacos de papel filtro (15 semillas en cada
uno), posteriormente se sumergieron en hipoclorito de sodio al 15% (Cloralex) durante 15
minutos y después se sometieron a tres enjuagues con agua estéril.
Con la finalidad de evaluar el posible efecto de la concentración de suplementos orgánicos
en la producción de brotes, a las plántulas obtenidas del experimento de germinación se les
eliminó la parte apical y basal. El resto de cada plántula fue segmentado en “discos” de cuatro
milímetros de espesor y se subcultivaron 5 de ellos en medio MS a diferentes concentraciones
(25%, 50% y 100%) y un testigo que no contenía suplementos orgánicos ni aminoácidos.
Para cada tratamiento se usaron tres réplicas. Debido a la escasez de plántulas de M. pectinifera
y E. chiotilla y al tamaño de las mismas, este experimento sólo se realizó para E. platyacanthus.
Las semillas y los cortes de disco se colocaron en frascos de vidrio de 100 ml con tapa metálica
que contenían 20 ml de medio MS a pH de 5.7 ± 0.1 adicionado con 20gr/l de sacarosa
(Dolce Krista), 7gr/l de agar bacteriológico (BD Bioxón) como agente gelificante y 2gr/l de
carbón activado (Hycel de México, S.A. de C.V.), este último no se agregó a los frascos de
CTV. Antes de sembrar las semillas y subcultivar los cortes de las plántulas los frascos con

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medio de cultivo fueron esterilizados en autoclave a 121ºC/1.5kg/cm2 durante 20 minutos.

Una vez realizada la siembra y el subcultivo se ubicaron en la CG haciendo una revisión diaria
durante 75 días para registrar la germinación, considerada como la emergencia de la radícula,
y el número de brotes que se produjeron en los cortes de las plántulas. En ambos experimentos
los frascos se movían diariamente dentro de la cámara para minimizar el efecto de la posición
del frasco en los resultados.

Análisis estadístico.
El índice de germinación (IG) se evaluó empleando el índice de Scott & Williams (1984) IG=∑
(ni*ti)/N, donde ni es el número de semillas germinadas al día i, ti son los días transcurridos
desde el inicio del experimento hasta el día i y N es el número total de semillas germinadas. De
acuerdo con el índice, entre mayor es el valor calculado mayor será la velocidad a la que ocurre
la germinación. Para determinar el efecto de la especie y la escarificación en el porcentaje de
germinación se utilizó un modelo lineal generalizado para una distribución binomial con
función de enlace logit, debido a que los datos no cumplieron los supuestos de normalidad
y de homocedasticidad. Para los valores del índice de germinación se realizó una prueba de
bondad del ajuste de Kolmogorov-Smirnof (d= 0.114, P>0.20) y posteriormente se utilizó
el modelo lineal generalizado para una distribución normal con función de enlace log para
detectar las posibles diferencias entre los factores. Los análisis se realizaron con el programa
STATISTICA ver. 7.
Para la evaluación del efecto de la concentración de suplementos orgánicos en la producción
de brotes no fue posible realizar un análisis estadístico en virtud de que la respuesta a los
tratamientos fue escasa y no se obtuvieron datos.

RESULTADOS
Se detectaron diferencias significativas en los porcentajes de germinación por efecto de la
especie (X2 =6.37; P= 0.041). La germinación promedio mayor ocurrió en las semillas de E.
platyacanthus (76.11 + 4.89) seguidas de las de M. pectinifera (35.55 + 4.82), mientras que
el menor valor se observó en E. chiotilla (17.5 + 2.22). Los tratamientos no afectaron a esta
variable ni la interacción de estos con la especie (X2=5.017; P= 0.17 y X2 =1.065; P= 0.302
respectivamente).
Después de una semana de haber sembrado las semillas en todos los tratamientos se registró
germinación. Los índices de germinación promedio más altos se observaron para las semillas
de E. platyacanthus y M. pectinifera que se sometieron a los tratamientos de agua a 50ºC/10
min y agua a 50ºC/15 min (30.02 + 2.15; 16.80 + 1.25 respectivamente). Al comparar
el testigo de cada especie con los tratamientos restantes se registró una mayor velocidad de
germinación en E. platyacanthus (25.74 + 4.31), seguida de M. pectinifera (13.06 + 3.99) y
finalmente E. chiotilla con (4.35 + 0,94). (Figura 3.).
El índice de germinación mostró variación por efecto de la especie (X2=28.013; P< 0.001) y de
la interacción (X 2=15.01; P=0.02), mientras que para los tratamientos no se detectaron efectos
significativos en esta variable (X2 =3.78; P= 0.285).

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Villanueva et al.

Las semillas de E. platyacanthus germinaron más rápidamente (20.78 + 2.26), seguidas de las
de M. pectinifera (11.04 + 1.57). En contraste las de E. chiotilla necesitaron mayor tiempo
para germinar (3.15 + 0.487).
La interacción especie tratamiento mostró que la inmersión de las semillas de E. platyacanthus
en agua a 50ºC/10 min favorece la velocidad de germinación (30.02 + 0.078), lo mismo
sucede con las semillas de M. pectinifera (16.80 + 0.14) al tratarlas con agua caliente pero
durante 15 minutos comparado con el tiempo que tardan en germinar las semillas en el testigo
(25.74 + 0.09 y 13.06 + 0.18 respectivamente).
Para E. chiotilla los valores del índice oscilaron de 3.03 + 0.77 a 3.26 + 0.72 en los tratamientos
de agua, el testigo mostró una velocidad ligeramente mayor (4.35 + 0.54). Para las semillas
de las tres especies que se trataron con alcohol se observó menor rapidez en la germinación.
Las plántulas de E. platyacanthus se desarrollaron adecuadamente, presentaron espinas y la
coloración verde oscura característica de la especie (Figura 4a.). En algunas plántulas de M.
pectinifera se observó hinchazón, rompimiento de cutícula y formación de tejido abundante
sin control, el resto de las plántulas presentaron la coloración típica de la especie (Figura
4b.). Algunas plántulas de E. chiotilla exhibieron vitrificación y murieron durante las primeras
cinco semanas, la mayoría de los individuos obtenidos presentaron espinas y buena coloración
durante su desarrollo (Figura 4c.)
Cultivo de tejidos vegetales (CTV)
La respuesta a los tratamientos fue escasa, sólo se obtuvieron brotes en los lotes testigo, 50% y
100% de suplementos orgánicos y aminoácidos. Se observó vitrificación de los tejidos (discos
de E. platyacanthus) a los 30 días de iniciado el experimento (Figura 5.).

DISCUSIÓN
En E. chiotilla el porcentaje de contaminación en el cultivo (5.5%) fue ligeramente superior
al observado (<5%) en semillas lavadas con blanqueador comercial (Cloralex) al 15% por
25 minutos, coincidiendo con lo observado por Retes-Pruneda et al. (2007). Respecto a E.
platyacanthus, las semillas desinfectadas con etanol (70%) e hipoclorito de sodio registraron
una contaminación de 10.5%, valor similar al registrado por Manzo-Rodríguez (2010). A
partir de estos resultados se infiere que los procesos de preparación del material y esterilización
son buenos debido que se aplicaron los lineamientos establecidos en el manual de Cabinas
de Seguridad Biológica (Villamil, 2005). El material utilizado en la construcción de la CSB
presentó buena calidad y resistencia para realizar cultivos vegetales y puede ser una opción
de uso cuando no se dispone de recursos económicos suficientes para la adquisición de
una campana de flujo laminar ni de una cámara de germinación, ya que sólo se invirtieron
aproximadamente $ 2000.00 para su construcción, siendo una inversión baja si se compara
con los costos de las campanas de flujo laminar comerciales. Un inconveniente observado fue
el tamaño de la CSB debido a la limitada superficie de trabajo (50 x 60cm), que entorpecía la
manipulación del material.
El porcentaje de germinación observado en E. platyacanthus (76.11) se encuentra dentro
del rango de valores observados 50 4-91,4% por Rojas-Aréchiga (1995) y Rosas (2002)
que se atribuyen a la existencia de variabilidad de distintas poblaciones de la especie,

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 Germinación de tres especies de cactáceas endémicas de méxico en condiciones asépticas

independientemente de los gradientes latitudinales en los que se encuentre. Además se ha

sugerido que las semillas de esta especie presentan latencia fisiológica (De La Rosa-Ibarra &
García, 1994; Rojas-Aréchiga et al., 1997; Rosas-López & Collazo-Ortega, 2004) por lo que se
esperaría un incremento en la germinación de las semillas al aplicar tratamientos germinativos.
En este estudio los tratamientos no mostraron ningún efecto en la germinación de las semillas
de E. platyacanthus, posiblemente tratarlas con agua a 50°C/10 min y 50°C/15 min o alcohol
no fue suficiente para inhibir la latencia pues se ha observado que cuando se tratan con ácido
sulfúrico/5 min se promueve su capacidad germinativa (Navarro et al., 2013) en virtud de
que si las semillas se colocan en condiciones apropiadas de germinación y rompimiento de la
latencia, el crecimiento potencial del embrión se incrementa y la germinación ocurre (Baskin
& Baskin, 2014).
Los porcentajes y la velocidad de germinación se relacionan con las características de los
individuos productores de las semillas y se ha observado que cuando proceden de plantas sanas
que se encuentran en condiciones óptimas, la germinación se incrementa. En este estudio
las semillas utilizadas fueron producidas por plantas de invernadero que se mantienen en
condiciones óptimas, posiblemente este es un factor que favoreció la germinación además de
otros, como la disponibilidad de nutrientes, agua en el medio de cultivo y mínimas impurezas
en el agar (Vázquez et al., 1997; Martínez-Flores, 1999; Vinocur et al., 2000; Hernández-
Aguilar, 2007; Manzo-Rodríguez, 2010).
El agua a 50ºC/10 min y a 50ºC/15 min favorece la velocidad de germinación en las semillas
de E. platyacanthus y de M. pectinifera (30.02 y 16.8 semillas/día respectivamente) lo que
sugiere que en éste tratamiento la absorción de agua en las semillas ocurrió más rápidamente
(Sánchez et al., 2006). También se ha observado que el tiempo de germinación, considerado
como la velocidad a la que responden las semillas a las señales ambientales determina el éxito
en el establecimiento (Vázquez-Yanes & Orozco-Segovia 1996). Por otra parte, la velocidad de
germinación registrada en las semillas de E. platyacanthus y M. pectinifera sugiere una respuesta
rápida a los factores ambientales y que sus plántulas son capaces de llegar a establecerse en su
totalidad en virtud de que el 100% de las plántulas obtenidas en ambos tratamientos (agua a
50ºC/10 min y 50ºC/15 min) sobrevivieron después de un año de realizado el experimento.
La germinación de E. Chiotilla fue escasa (17.5%) con una velocidad de germinación de 3.03 -
4.35 semillas por día. Estos valores difieren de los observados en 15 días para semillas de mayor
tamaño en las que se registra un valor de 94%. Si se considera que la capacidad y velocidad
de germinación de las semillas dependen del tamaño y ejemplar que las produce (Tenango-
Cabañas, 2005), posiblemente las semillas que se utilizaron en este estudio no presentaban
un tamaño adecuado. Este podría ser un factor a considerarse en estudios posteriores. Por
otro lado, se ha observado que la aplicación de ácido giberélico a 2.5 mg/l promueve la
germinación hasta 71% (Martínez-Cárdenas et al., 2003). Esta información sugiere que la
capacidad de germinación de las semillas puede tener una respuesta diferencial de acuerdo con
la especie y método de escarificación empleado.
A pesar de que el porcentaje de germinación obtenido en este estudio para M. pectinifera fue
menor (35.55) al registrado en semillas que no se sometieron a escarificación (hasta 95%)
(Navarro & Deméneghi, 2007), los tratamientos pregerminativos no afectaron esta variable,

Zonas Áridas 16(1): 1-16 (2016) -9-

Villanueva et al.

por lo tanto la escarificación con agentes químicos o agua caliente no es necesaria para favorecer
la germinación de esta especie a diferencia de aquellas especies que presentan latencia física en
las que se ha observado que la aplicación de agentes químicos aumenta la germinación de las
semillas (Baskin & Baskin, 2014). Esto sugiere que las semillas de M. pectinifera no presentan
este tipo de latencia.
Las técnicas de cultivo in vitro para M. pectinifera generan cambios en el medio donde se
produce la germinación, a diferencia de lo que ocurre con la propagación en sustratos de tierra
de hoja, negra, peat-moss, cacahuatillo en distintas proporciones, ya que no permite ninguna
variación respecto a la posición de la semilla, debido a la firmeza del gel, las concentraciones
del medio de cultivo y la pureza del agar que pueden llegar a superar los requerimientos
de la especie, lo que puede ocasionar una hiperhidricidad (Vinocur et al., 2000; González-
Rodríguez, 2001; Flores et al., 2004), como ocurrió con las plántulas de esta especie en el
presente trabajo.
Se ha observado que las concentraciones de suplementos orgánicos u hormonas que se adicionen
al medio de cultivo, tienen un efecto diferencial en las especies (Clayton et al., 1990). La escasa
formación de brotes registrada para las diferentes concentraciones de suplementos orgánicos
y aminoácidos, sugiere que posiblemente estos no sean necesarios o que las concentraciones
utilizadas en el experimento no fueron adecuadas. La vitrificación en el material vegetal de E.
platyacanthus durante el CTV ocurrió posiblemente debido al balance de nutrientes, humedad
relativa y disponibilidad de agua en el medio (Debergh, 1983, Martín del Campo, 1997).

CONCLUSIONES
La Cabina de Seguridad Biológica es un sustituto adecuado de una campana de flujo laminar
debido a que asegura la germinación de las semillas de las tres especies empleadas en este
trabajo al evitar la contaminación del medio de cultivo. Respecto a los cortes de disco de las
plántulas de Echinocactus platyacanthus también se mantuvieron en condiciones de asepsia.
Otra ventaja de la CSB consiste en acortar el tiempo para la obtención de plántulas de
Echinocactus platyacanthus y de M. pectinifera. Un beneficio adicional es el bajo costo de los
materiales empleados y su fácil fabricación. La única desventaja encontrada en la CSB es la
dificultad para manipular gran cantidad de material de manera simultánea.
El porcentaje de germinación de las semillas mostró diferencias significativas entre las especies,
con el valor más alto en E. platyacanthus. Por su parte, el índice de germinación fue afectado
significativamente por la especie y por la interacción entre especie y tratamiento por lo que
es factible obtener plántulas de E. platyacanthus cuando sus semillas son tratadas con agua a
50ºC/10 min y agua a 50ºC/15 min en cultivo in vitro.
Las diferentes concentraciones de suplementos orgánicos producen brotes escasos a partir de
los cortes de disco de las plántulas de Echinocactus platyacanthus.

- 10 - Zonas Áridas 16(1): 1-16 (2016)

 Germinación de tres especies de cactáceas endémicas de méxico en condiciones asépticas

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 Germinación de tres especies de cactáceas endémicas de méxico en condiciones asépticas

FIGURAS

Figura 1. Cabina de seguridad biológica (CSB): cuarto establecido para la CBS (a), vista
lateral y frontal de la CSB (b y c).

Figura 2. Cámara de germinación (CG) utilizada para el establecimiento de cultivos asépticos.

Ubicación de las lámparas (a), vista frontal (b).

Zonas Áridas 16(1): 1-16 (2016) - 15 -

Villanueva et al.

40
Tes tigo
Agua 50°C/10 min
Agua 50°C/15 min
35 Alcohol

30
Índice de Germinación

25

20

15

10

0
Escontria chiotilla Echinocactus platyacanthus
Mam m illaria pectinifera

Especi e

Figura 3. Índices de germinación promedio observados para la interacción especie*tratamiento

registrados para las semillas de Echinocactus platyacanthus, Escontria chiotilla y Mammillaria
pectinifera después de aplicar diferentes tratamientos de escarificación. (Media + E.E.).

Figura 4. Aspectos generales del desarrollo in vitro a los 73 días después de la siembra (a) E.
platyacanthus, (b) M.pectinifera y (c) E.chiotilla.

Figura 5. Brotes obtenidos en cortes de disco de plántulas de E. platyacanthus para 50%

(a) y 100% (b) de concentración de suplementos orgánicos y aminoácidos.

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