MÉMENTO DU BIOLOGISTE

MÉMENTO BIOLOGISTE

DU
Anticorps
anti-nucléaires
et anticorps anti-centromères
DEFINITION
Les anticorps anti-nucléaires (AAN) sont des auto-anticorps réagissant avec divers constituants
du noyau cellulaire (ADN, histones, centromères, antigènes nucléaires solubles….). On y
associe les anticorps dirigés contre des constituants présents dans le cytoplasme mais
provenant du noyau. Plus de cinquante anticorps anti-nucléaires ont été décrits, mais la
signification clinique d’un grand nombre d’entre eux n’est pas établie.
Les Ac anti-centromères sont des AAN définis par leur aspect particulier en immunofluo-
rescence indirecte (IFI).
Synonymes : AAN, ANA, Ac anti-noyaux.

INDICATION DU DOSAGE
Ces anticorps représentent le dépistage indispensable pour le diagnostic des maladies
auto-immunes non spécifiques d’organe (ou connectivites ou maladies auto-immunes
systémiques) (Tableau 1). Ils sont recherchés devant des signes cliniques plus ou moins
spécifiques (arthralgies, sécheresse de la bouche et des yeux, signes cutanés, etc.). Tout
résultat d’AAN positif déclenche la réalisation de tests complémentaires (anticorps anti-
antigènes nucléaires solubles et anti-ADN natif), visant à préciser la spécificité dépistée
en IFI, afin d’obtenir une orientation diagnostique plus précise (fig 1).

Tableau 1 : Association clinique des principaux AAN

Auto-anticorps Maladie associée (sensibilité %)

Anti-ADN natif Lupus Erythémateux Disséminé= LED (80%)
Anti-RNP Syndrome de SHARP (100%) LED (25%)
Anti-Sm LED (10%)
Anti-SSA Syndrome de Gougerot Sjogren (50%), LED (30%)
Anti-SSB Syndrome de Gougerot Sjogren (80%), LED (5%)
Anti-PCNA LED (3%)
Anti-Scl70 Sclérodermie diffuse
Anti-centromère Syndrome CREST (80%)
Anti-Jo1 Poly-dermatomyosite
Anti-Pm/Scl Sclérodermie, polymyosite

En dehors des connectivites, les AAN peuvent être retrouvés, parfois à titre élevé, dans de
nombreuses autres situations pathologiques ou physiologiques :
Maladies auto-immunes spécifiques d’organes (hépatites auto-immunes, thyroïdites, etc.)
Infections virales
Cancers
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Affections diverses (vascularites, sarcoïdose, insuffisance rénale)
Prise de médicaments inducteurs (bêtabloquants, isoniazide, interféron, minocycline,
chlorpromazine, procaïnamide etc…)
Age > 60 ans (prédominance féminine).
L’interprétation d’un titre d’anticorps anti-nucléaires positif nécessite donc une confrontation
clinico-biologique très étroite, tenant compte notamment des résultats des tests complémentaires,
des signes cliniques et de l’âge du patient.

METHODES DE RECHERCHE
Les anticorps anti-nucléaires sont recherchés par immunofluorescence indirecte (IFI) sur
cellules HEP-2 ou HEP-2000. Les résultats sont rendus en inverse de dilution. Conformément
à la nomenclature (arrêté paru au JO du 24/04/95), tout dépistage positif d’AAN (≥ au 100e)
est suivi d’une recherche quantitative d’Ac anti-DNA natif ainsi que d’un dépistage d’anti-
antigènes nucléaires solubles (ENA). Si cette seconde recherche est négative, un titrage des
Ac anti-histones peut être effectué.
Les principaux aspects de fluorescence nucléaires sur HEp-2000 sont : homogène, moucheté,
membranaire, centromère et nucléolaire. Ces différents aspects orientent sur la nature de
l’auto-antigène cible (Tableau II), mais ils ne suffisent pas à poser le diagnostic, plusieurs
anticorps anti-nucléaires de spécificités différentes pouvant co-exister dans le même sérum.
Les aspects de fluorescence cytoplasmiques (suspicion d’anticorps anti-mitochondrie, actine,
ribosomes, Jo1, synthétases…), sont confirmés sur triple substrat (foie, rein, estomac) ou par
une technique immunoenzymatique adaptée.

Tableau II : Principaux anticorps évoqués en fonction de l'aspect sur cellules Hep2000.

Aspect de fluorescence Spécificité évoquée
Homogène Anti-ADN natif, anti-histone, anti-nucléosome
Moucheté RNP, Sm, SSA, SSB, Scl70
Nucléolaire Anti-Pm/Scl,
Moucheté M2 de type centromère Centromère

Figure 1 : Démarche diagnostique de recherche d’AAN

Dépistage des anticorps anti-nucléaires en IFI sur cellules Hep-2 / Hep-2000

Serum au 1/80

POSITIF NEGATIF

Titrage Caractérisation de la fluorescence

Fluorescence nucléaire Fluorescence cytoplasmique

Homogène Moucheté Centromère Nucléolaire Cytosquelette

Ribosomes
Mitochondries
Recherche de la spécificité des AAN CONFIRMATION
Anticorps Anticorps anti-antigènes
anti-ADN natifs nucléaires solubles
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- Fréquence = 5 jours / 7
- Délai technique = 1 jour si résultat négatif

PRELEVEMENT
Sérum
Quantité du prélèvement : 1 ml
Conservation et transport : à +4 °C.

EXPERTISE BIOMNIS
Volumétrie quotidienne (AAN dont anti-centromères) : environ 620/jour (Paris : 308/j ; Lyon : 314/j).
Qualité des résultats :
- Recrutement important qui permet l’observation de tous les aspects des AAN y compris
les fluorescences complexes (hétérogènes, mixtes, rares…).
- Personnel qualifié et expérimenté pour la lecture des lames en immunofluorescence.
- Equipement performant (microscope de dernière génération, technologie Bioplex®:
technique de pointe permettant le titrage de tous les anticorps anti-antigènes nucléaires
solubles en une seule étape).
- Techniques, lames choisies et validées au laboratoire.
- Paramètres accrédités COFRAC à Lyon, en cours d’accréditation à Ivry (Anticorps anti-
nucléaires, anticorps anti-antigènes nucléaires solubles, anticorps anti-ADN natif).
Rapidité des résultats :
- Réalisation quotidienne des dosages des anticorps anti-nucléaires qui sont donc rendus
à J1 si négatifs et si positifs, le titrage est rendu à J2.
- Déclenchement automatique du dosage, sur le Bioplex®, des anticorps anti-antigènes
nucléaires solubles et anticorps anti-ADN natif si les anticorps anti-nucléaires sont
positifs : donc assurance d’avoir un résultat complet et cliniquement pertinent en 3 jours
maximum.
Expertise biologique et technique :
- Assistance biologique et aide à l’interprétation des résultats.
- Conseil à la prescription.
- Veille scientifique, collaboration avec les fournisseurs de réactifs, les laboratoires hospitaliers,
contacts privilégiés avec les médecins référents en auto-immunité au sein des CHU,
participation aux congrès nationaux et internationaux en auto-immunité.
- Membre de société savante (Société Française d’Immunologie).

EXEMPLE DE COMPTE-RENDUS BIOMNIS

Voir feuillets ci-joints.
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