Cromatografía en papel.

Jaimes Ortiz, Helen Adriana

Laboratorio instrumental I, Facultad de Ciencias Básicas, Universidad de Pamplona

RESUMEN: Se realizó la separación de diferentes compuestos mediante el método de extracción en cromatografía de papel, en el cual se
quería evaluar el rendimiento entre dos disolventes (alcohol antiséptico 96%, removedor) con el fin de evaluar entre estos aquel que presenta
un mayor rendimiento en la separación de una muestra la cual se dio mediante dos fases, utilizando un diseño simple de comparación por
tiempo y efectividad, como resultado se evidencia por análisis cualitativos que el método de cromatografía en papel presento un buen factor
de retención al momento de separar compuestos con el alcohol antiséptico, también otras ventajas como menor tiempo de corrida.

Palabras Claves: Extracción, Rendimientos, Tiempo y Efectividad, Cromatografía, Análisis Cualitativo.

ABSTRACT: The separation of different compounds was carried out by means of the paper chromatography extraction method, in which
the performance between two solvents (antiseptic alcohol 96%, remover) was evaluated in order to evaluate between them that it presents a
higher performance in the separation of a sample the quality was given by two phases, using a simple design of comparison by time and
evolution, as a result it is evidenced by qualitative analyzes that the paper chromatography method presented in a good retention factor at
the time of separation, compounds with the antiseptic alcohol, also other advantages such as shorter running time.

Key words: Extracción, Rendimientos, Tiempo y Efectividad, Cromatografía, Análisis Cualitativo.

1. Introducción de la caracterización de los materiales, conocer la

El botánico Mijaíl Tswett quien en 1906 empleo por
primera vez el término de cromatografía. Uso
columnas de absorción de líquidos para separar
pigmentos vegetales. No fue hasta mediados del
siglo XX cuando aparecieron los primeros equipos
de cromatografía de gases. En esa misma fecha
empezó a desarrollarse la cromatografía liquida de
alta resolución (HPLC). Así esta técnica se ha
convertido en un método muy versátil de
separación. Es utilizada para la caracterización de
los componentes de mezclas complejas y tiene
aplicación en todas las ramas de la ciencia. Se basa
en el principio de retención selectiva, permite
identificar y determinar las cantidades de los
componentes analizados.3
La cromatografía en papel es una técnica de
separación, la cual se lleva a cabo gracias a dos fases
una móvil y otra estacionaria la cual incluye un
(solido, liquido) se puede utilizar como soporte
cualquier sustancia que pueda dividirse en partículas
finas y distribuirse uniformemente en forma de lámina
esto incluye partículas inorgánicas (gel de sílice, oxido
de aluminio entre otras) y orgánicas (celulosa,
poliamida, polietileno, etc.). 1 la cromatografía es
aplicada en distintos campos: desde el punto de vista
composición de los mismos es imprescindible puesto
que las propiedades de los materiales dependen
fundamentalmente, por un lado, de los componentes
que lo forman y, por otro, de la proporción existente
entre ellos.2
cuando se introduce un compuesto en la corriente de la
fase móvil en un sistema cromatografico, de no existir
interacción de este con la fase estacionaria, la banda
que la forma se desplazaría a la misma velocidad que
la fase móvil y emergería del lecho estacionario
cuando el volumen total de la fase móvil utilizado
fuese igual al volumen vacío o intersticial de la
columna (volumen muerto); sin embargo, las
moléculas de la muestra interaccionan de hecho con la
fase estacionaria, aquellas necesitan para su elución el
paso de un volumen mayor de la fase móvil, que se
denomina volumen de retención de la muestra.3
Al fenómeno de migración de los componentes de una
mezcla a lo largo de la fase estacionaria impulsado por
la fase móvil se llama elución, en el cual los solutos
se separan en base a la distinta velocidad de
desplazamiento cuando estos son arrastrados por una
fase móvil a través de un lecho cromatografico. Las
dos fases se eligen de tal modo que los componentes
de la muestra se distribuyan de modo distinto entre las

1
dos fases. Aquellos fuertemente retenidos por la fase
estacionaria se mueven lentamente con el flujo de fase
móvil, mientras que los que se retienen débilmente
avanzan con más rapidez. 2
Esta técnica resulta ser muy simple y útil a la hora de
separar compuestos de diferentes mezclas y poder
determinar, según el grado de arrastre debido a la
polaridad entre el solvente o fase móvil, y la sustancia
arrastrada, los componentes de la muestra que estamos
analizando. 1 los parámetros de retención de un
compuesto dependen de un gran número de variables,
por lo que la identidad entre analitos y patrones
solamente puede ser establecida para un sistema dado
y en un momento dado y en un momento dado, lo que
hace muy trabajosa la identificación de una sustancia
por este método. 3
trabajando en ambos casos con el sistema
cromatografico. A la hora de realizar las
comparaciones, es conveniente utilizar determinados
parámetros, que si bien no eliminan todas las
posibilidades de variabilidad de los resultados, si
permiten al menos corregir la variabilidad inducida por
determinadas condiciones; como parámetros de
retención utilizados frecuentemente para análisis
cualitativo. En la cromatografía se tiene en cuenta la
velocidad del soluto y la del eluyente para poder
determinar la siguiente relación.3
𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑢𝑒𝑠𝑡𝑜
Rf =
𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑓𝑟𝑒𝑛𝑡𝑒
Ecuación 1. Factor de retención.

La cromatografía permite separar mezclas muy

Hoy en día casi no hay campo de la química, biología,
complejas de productos, aun cuando estos sean de
medicina, etc. En el que no se utilice la cromatografía
naturaleza muy semejante. Lo que permite la
en alguna de sus formas, tanto en su vertiente
separación de mezclas complejas de productos y el
preparativa como en la analítica; por otra parte el
aislamiento y purificación de los componentes
desarrollo sobre el uso conjunto de la cromatografía
individuales es de gran importancia en la química
con otras técnicas analíticas, así como el desarrollo de
orgánica. La cromatografía constituye una importante
otros tipos de cromatografía, como es por ejemplo la
herramienta en este sentido, complementaria con las
de fluidos súper críticos hace previsible una extensión
técnicas clásicas: cristalización, destilación, etc. 2
aun mayor de su uso.3
La mayoría de las propiedades varían de papel a papel,
lo que provoca variaciones en el Rf. Actualmente
existen papeles modificados con resinas cambiadores 2. Materiales y reactivos
de iones, alúmina, etc. El aparato que se usa consta de 2.1 Materiales:
Un soporte para el papel, un recipiente para el
disolvente y una cámara hermética para desarrollar la Tarros de compota, tiras papel (2cmx7cm).
Cromatografía. La cámara hermética es necesaria para
evitar la evaporación de los disolventes volátiles
debido a la gran superficie del papel expuesta. Antes 2.2 Reactivos
de sumergir el papel en el disolvente de elución se
Aplica la muestra en forma de punto diminuto con Alcohol comercial, removedor, remolacha,
cualquier objeto que pueda transferir un pequeño zanahoria, espinaca, tinta de lapicero rojo (Faber-
Volumen. El papel debe estar en equilibrio con los Castell).
vapores del disolvente antes de empezar el desarrollo.
La cromatografía en papel se ha aplicado con buen
éxito a problemas de química orgánica e inorgánica y 2. Metodología
de bioquímica.1
Se tomó una hoja de blog blanco tamaño carta de la
cuales se sacaron 18 tiras con medidas de
Teniendo en cuenta estas limitaciones, el mejor
(2cmx7cm), de las cuales cuatro se sometieron a
método para realizar un análisis cualitativo es, la
una corrida en capa fina solo con la solución de
comparación directa de los parámetros de retención de alcohol antiséptico en nuestros tarros de compota
los picos a la muestra con los de sustancia patrón, con un volumen de aproximadamente 2 cm, lo cual
2
se hizo con el objetivo de limpiar nuestras tiras añadirlo en un tarro de compota, con cada una de
para así poder realizar nuestra corrida y nuestras muestras.
compararlas con las otras, estas se dejaron durante
media hora, en el cual fueron 10min de corrida solo
con el alcohol y 20min de secado. Cromatografía en papel con removedor.
Después se procedió a marcar cada una de nuestras
Al marcar un punto con nuestra solución de
tiras con 2cm de distancia en nuestra parte
espinaca en el extremo inferior del papel, se puede
superior donde termina nuestra corrida y 0,5cm
donde empieza, así mismo en nuestra línea. observar que en la parte en donde conectaba con la
fase móvil (2ml de removedor) se percató un
Para la preparación de nuestra fase móvil se llevó a cambio en donde se había marcado el punto, el cual
cabo con los diferentes compuestos (remolacha, recorría en el papel con un color degradante.
espinaca, tinta roja, zanahoria).
En los resultados obtenidos en la corrida con
Empezando con la zanahoria a la cual se procedió a
removedor se obtuvo que el eluyente recorrió una
rallar de manera de extraer más fácil su solución, la
distancia desde el punto inicio y una separación de
cual se dejó dentro de una servilleta para así poder
sacarle su jugo y así mismo se procedió hacerle lo sus pigmentos, los cuales se pueden observar en la
mismo a la espinaca y la remolacha, cuando se tabla 1, 2, 3, 4.
tuvieron las tres sustancias extraídas se colocaron
en cada una de las líneas con sus respectivos
puntos. Tabla 1. Datos obtenidos en la primera corrida con espinaca..

Se empezó con la primera corrida en alcohol con Fase Fase móvil. Distancia Apariencias.
estacionaria recorrida
cada una de nuestras muestras, en las cuales todas (papel). (cm).
tuvieron un tiempo aproximado de 7min en 1 Espinaca 3,9 Verde
corrida. translucido
Para nuestra segunda corrida se realizó en una 2 Espinaca 3,2 Verde más
solución de removedor, en el cual cada una de las oscuro
corridas varió mucho más en cuanto a su tiempo de
separación teniendo tiempos de diferencia entre 3,9
4min. 𝑅𝑓 = = 0,97𝑐𝑚
4,0
Para nuestra última muestra corrida en la cual cada 3,2
una de nuestras tiras fueron sometidas a una 𝑅𝑓 = = 0,8𝑐𝑚
4,0
corrida primero con nuestra solución de alcohol
antiséptico para así poderlas limpiar y determinar Ecuación 1. Relación de los cálculos con los Rf.
si estas presentaban unas mejores separaciones,
las cuales después de eso se procedió a hacerle la
corrida cromatografía con nuestras muestras en Tabla 2 Datos obtenidos en la corrida con remolacha.
una solución de removedor.
Fase Fase móvil. Distancia Apariencias.
estacionaria recorrida
(papel). (cm).
3. Resultados y Análisis 1 Remolacha 3,8 Rosa
translucido.
En esta primera parte de la práctica se realizó la
selección de la fase móvil a partir de los eluyentes
disponibles, siendo en este caso el alcohol 3,8
𝑅𝑓 = = 0,95𝑐𝑚
antiséptico 96% y el removedor, cada eluyente se 4,0
le sometió a una prueba de cromatografía al
3
Ecuación 1. Relación de los cálculos con los Rf. Se puedo observar que en la parte en donde
conectaba con la fase móvil (2ml de alcohol
antiséptico) se percató un cambio en donde se
había marcado el punto, el cual recorría en el papel
con un color degradante.

Tabla 3 datos obtenidos en la corrida con la tinta roja.

En los resultados obtenidos en la corrida con
removedor se obtuvo que el eluyente recorrió una
Fase Fase móvil. Distancia Apariencias. distancia desde el punto inicio y una separación de
estacionaria recorrida
(papel). (cm). sus pigmentos, los cuales se pueden observar en la
1 Tinta roja 2,0 Amarillo tabla 5, 6, 7.
2 Tinta roja 2,3 Naranja
claro
3 Tinta roja 3,7 Piel Tabla 5 Datos obtenidos en la corrida con la remolacha.
4 Tinta roja 3,8 fucsia
Fase Fase móvil. Distancia Apariencias.
estacionaria recorrida
2,0 (papel). (cm).
𝑅𝑓 = = 0,5𝑐𝑚
4,0 1 Remolacha 1,5 Morado
2,3 claro.
𝑅𝑓 = = 0,6𝑐𝑚
4,0 2 Remolacha 2,1 Amarillo
3,7 claro.
𝑅𝑓 = = 0,92𝑐𝑚
4,0
3,8 1,5
𝑅𝑓 = = 0,95𝑐𝑚 𝑅𝑓 = = 0,37𝑐𝑚
4,0 4,0
2,1
𝑅𝑓 = = 0,63𝑐𝑚
Ecuación 1. Relación de los cálculos con los Rf. 4,0
Ecuación 1. Relación de los cálculos con los Rf.
Tabla 4 Datos obtenidos en la corrida con zanahoria. Tabla 6 Datos obtenidos en la corrida con tinta roja.

Fase Fase móvil. Distancia Apariencias. Fase Fase Distancia Apariencias.

estacionaria recorrida estacionaria móvil. recorrida
(papel). (cm). (papel). (cm).
1 zanahoria 3,5 Verde
translucido. 1 Tinta roja 1,4 Rosa claro
2 Tinta roja 2,2 Naranja
3,5
𝑅𝑓 = = 0,87𝑐𝑚 3 Tinta roja 2,9 Fucsia
4,0
Ecuación 1. Relación de los cálculos con los Rf.
1,4
𝑅𝑓 = = 0,35𝑐𝑚
4,0
Método cromatografico con alcohol
2,2
antiséptico. 𝑅𝑓 = = 0,55𝑐𝑚
4,0

4
 2,9 3 Tinta roja 3,3 Morado
𝑅𝑓 = = 0,73𝑐𝑚
4,0 claro
Ecuación 1. Relación de los cálculos con los Rf.
1,3
𝑅𝑓 = = 0,33𝑐𝑚
Tabla 7 Datos obtenidos en la corrida con espinaca. 4,0

Fase Fase móvil. Distancia Apariencias.

2,2
𝑅𝑓 = = 0,55𝑐𝑚
estacionaria recorrida 4,0
(papel). (cm).
3,3
𝑅𝑓 = = 0,82𝑐𝑚
1 Remolacha 3,8 Rosa 4,0
translucido.
Ecuación 1. Relación de los cálculos con los Rf.
En la separación de los pigmentos con la remolacha
2,2 no se pudieron determinar estos compuestos, ya
𝑅𝑓 = = 0,55𝑐𝑚
4,0 que estos no lograron separarse.
Ecuación 1. Relación de los cálculos con los Rf. Tabla 9 Datos obtenidos en la corrida con espinaca.

En la separación de los pigmentos con la zanahoria Fase Fase móvil. Distancia Apariencias.
estacionaria recorrida
no se pudieron determinar estos compuestos, ya
(papel). (cm).
que estos no lograron separarse.
1 Espinaca 2,0 Verde
Método cromatografico con removedor
translucido.
(corrida con alcohol solo primero).
Se puedo observar que en la parte en donde
conectaba con la fase móvil (2ml de alcohol 2,0
𝑅𝑓 = = 0,5𝑐𝑚
antiséptico) se percató un cambio en donde se 4,0
había marcado el punto, el cual recorría en el papel
Ecuación 1. Relación de los cálculos con los Rf.
con un color degradante.
En los resultados obtenidos en la corrida con
removedor se obtuvo que el eluyente recorrió una Tabla 10 Datos obtenidos en la corrida con la zanahoria.
distancia desde el punto inicio y una separación de Fase Fase móvil. Distancia Apariencias.
sus pigmentos, los cuales se pueden observar en la estacionaria recorrida
tabla 8, 9, 10. (papel). (cm).

Tabla 8 Datos obtenidos en la corrida con tinta roja. 1 Zanahoria 1,9 Piel claro.
Fase Fase Distancia Apariencias.
estacionaria móvil. recorrida
(papel). (cm). 1,9
𝑅𝑓 = = 0,47𝑐𝑚
1 Tinta roja 1,3 Rosa claro 4,0
Ecuación 1. Relación de los cálculos con los Rf.
2 Tinta roja 2,2 Rojo
oscuro La mayoría de los métodos de análisis son en los
casos más favorables pero no específicos, por ello
cuando se trata de muestras complejas la
separación del analito de las posibles interferencias
5
es una etapa esencial. Aun mejor sería la
posibilidad de determinar varios analitos después
de una separación previa. Uno de los mejores
métodos para conseguir esa separación, y
posiblemente, el más utilizado es la cromatografía.1
Comparación entre los pigmentos separados.
En el caso del alcohol antiséptico tuvo una
respuesta provocando una separación más notoria
de las tintas con respecto al papel, logrando
correrse unos pocos centímetros de su posición
inicial, al agregar este eluyente apolar, el
absorbente arrastra los compuestos con él, de esta
manera ciertos componentes de la tinta que son
polares se absorben en la fase estacionaria en su
lugar de inicio y a medida que hacen elución van
siendo desplazados y solubilizados.
En el caso del removedor, debido a su polaridad con
respecto al alcohol antiséptico, no se observa gran
separación de estos compuestos, esto se debe a que
los componentes de la tinta son de naturaleza
polar, haciéndolos poco o nada solubles y a su vez
esto es gracias a que cada compuesto tiene una
afinidad distinta con respecto a la fase móvil. En
este eluyente y esto no genera un proceso de
corrimiento sobre el papel.
Imagen 1 separación de compuestos por cromatografía en capa fina.
6
Imagen 2 Obtención de los pigmentos separados por cromatografía en
papel.
5. Conclusiones
En esta práctica se logró conocer y como aplicar la
cromatografía por papel, sus características y los
factores que influyen en la separación por
cromatografía.
Se aprendió a como calcular los valores del factor
de retención de las sustancias para poder deducir
la relación que existe entre la polaridad de las
sustancias que se analizaron con la de los eluyentes
que se utilizaron con ellas.
6. Referencias Bibliográficas
1) José Manuel González de Buitrago,14 -
Cromatografía, Editor(s): José Manuel González de
Buitrago, Técnicas y Métodos de Laboratorio
Clínico (Tercera Edición), Elsevier
España,2010,Pages197210,ISBN9788445820292,
https://doi.org/10.1016/B978-
45820292.500148.(http://www.sciencedirect.co
m/science/article/pii/B9788445820292500148)
2) Luque de Castro, M. D., & Priego-Capote, F.
(2010). panacea. Journal of Chromatography A,
1217(16),23832389.doi:10.1016/j.chroma.2009.11.02
7. Consultado 29 de septiembre de 2019.
http://www4.ujaen.es/~mjayora/docencia_archivos/Q
uimica%20analitica%20ambiental/Tema6.pdf
3)https://www.mncn.csic.es/docs/repositorio/es_ES
/investigacion/cromatografia/principios_de_cromato
grafia.pdf