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COLORACIÓN GIEMSA
Principios de la técnica
Los colorantes tipo Romanowsky tienen como fundamento utilizar un contraste entre colorantes ácidos
y básicos, para lograr teñir las estructuras básicas y ácidas respectivamente. Como se puede observar
existe una afinidad de los colorantes ácidos a teñir las estructuras básicas y viceversa.
El colorante básico utilizado es el azul de metileno y sus derivados oxidados (Azure A y Azure B),
mientras que el colorante ácido es la eosina.
Las estructuras ácidas de las células son los ácidos nucleicos, los gránulos de los segmentados
basófilos, entre otras, por tanto, serán teñidos con el azul de metileno.
En este mismo sentido, las estructuras básicas de las células son la hemoglobina y algunos gránulos
como los contenidos en los segmentados eosinófilos, entre otras; estos serán teñidos con la eosina.
Por otra parte, debido a que el azul de metileno y el azufre se caracterizan por ser colorantes
metacromáticos, estos pueden brindar una tonalidad variable a las distintas estructuras de acuerdo a la
carga de polianiones que posean.
Utilidad principal
La técnica de tinción de Giemsa es utilizada en diversas áreas, entre ellas: en hematología, micología,
bacteriología, parasitología, citología y citogenética.
Hematología
Es la utilidad más frecuente que se le da a esta tinción. Con ella se logran identificar todas y cada una
de las células presentes en muestras de médula ósea o sangre periférica. Así como estimar el número de
cada serie, pudiéndose detectar leucocitosis o leucopenia, trombocitopenia, etc. Debido a que es
sensible para identificar células inmaduras, es relevante en el diagnóstico de leucemias agudas o
crónicas. También es posible hacer el diagnóstico de anemias, como la anemia drepanocítica,
falciforme, entre otras.
Micología
Bacteriología
Parasitología
COLORACIÓN WRIGHT
Principios de la técnica
Los componentes responsables de dar la gama de colores típica de la tinción de Wright son el azul B y
la eosina Y. El efecto observado dependerá del enlace de los colorantes a las estructuras químicas y a
las interacciones del azul B y la eosina Y. Las estructuras ácidas tales como los ácidos nucleicos, las
proteínas nucleares y el citoplasma inmaduro reactivo de algunos tipos de células, fijan el azul B
(colorante básico). Mientras que las estructuras básicas tales como la hemoglobina, los gránulos de los
segmentados eosinófilos, entre otras estructuras celulares, fijan la eosina Y (colorante ácido).
El resultado de tinción puede ser influido por diferentes factores, como el pH del colorante Wright, de
la solución amortiguadora y de lavado; así como el tiempo de tinción y de fijación. Por ello, cada paso
en la preparación de los reactivos es crucial y debe ser realizado cuidando cada detalle.
Procedimiento
5.- Lavar con agua corriente. Dejar caer el chorro de agua en forma suave, empezando por el borde de
la lámina inclinada.
7.-Observar en el microscopio con objetivo de menor aumento (40x) y luego con objetivo de inmersión
(l00x).
Utilidad principal
Hematología
Secreción Nasal
Esta técnica es muy útil para identificar las células de la secreción nasal (células epiteliales,
segmentados eosinófilos, polimorfonucleares) en el diagnóstico de rinitis alérgicas.
Parasitología
En este sentido, ha sido útil para el estudio de Leishmania sp dentro de los histiocitos del tejido celular
subcutáneo en úlceras de la piel. Así mismo, es empleada
para identificar leucocitos en muestra de heces (leucograma
fecal).
Gota gruesa
Esta metodología se usa para investigar la presencia de parásitos en una mayor cantidad de sangre. Para
ello se coloca sobre un portaobjetos una gota grande de sangre. Una vez allí se debe desfibrinar,
haciendo círculos cada vez más grandes desde el centro hacia afuera, utilizando para ello el borde de
otro portaobjeto. Finalmente, para poder observar los parásitos en el frotis grueso los eritrocitos deben
ser lisados con agua.
Bacteriología
El uso de esta técnica en bacteriología es limitado, debido a que no es buena para teñir a las bacterias,
es por ello que para la tinción de las mismas se usan otras técnicas de coloración especializadas. Sin
embargo, se ha empleado para buscar células epiteliales con cuerpos de inclusión de Chlamydia
trachomatis en frotis de mucosa uretral o endocervical, aunque hay que reconocer que no es el mejor
método para ello. También es posible observar entre los glóbulos rojos bacterias tipo espiral como
la Borrelia burgdorferi en pacientes infectados, así como mórulas o cuerpos de inclusión de Ehrlichia
sp en el citoplasma de linfocitos, monocitos o neutrófilos en un frotis sanguíneo.
Micología
El colorante está compuesto de azul de metileno (que tiñe de color azul las partes ácidas de las células)
y eosina (que tiñe las partes alcalinas), disueltos en metanol (que permite la fijación de las células) y
con esto la diferenciación de los parásitos.
Mas de 200 parásitos por campos en 100 campos observados indicaran ++++
De 2 a 20 parásitos por campo en 100 campos observados indicaran ++
1 parásito por campo en 100 campos observados indicara +
De 40 a 60 parásitos en 100 campos observados indicaran ½+
Menos de 40 parásitos en 100 campos observados se indicarán en números.
¿Qué diferencia existe entre las dos técnicas de coloración utilizadas? Sustente los principios
mediante referencias bibliográficas.
La tinción Giemsa, ideada por el alemán Gustav Giemsa, es un método habitual para el examen de
frotis sanguíneo, cortes histológicos y otro tipo de muestras biológicas. Los poliorganismos que forman
parte de una muestra biológica adquieren una coloración diferencial y se ven dentro del citoplasma de
la célula huésped. La técnica de Giemsa esta formada por varios colorantes: los tintes neutros utilizados
combinan el azul de metileno como tinte básico y la eosina como tinte acido lo que da una amplia gama
de colores y permite cuantificar los parásitos.
La tinción de Wright al igual que Giemsa es un tipo de tinción usada en histología para facilitar la
diferenciación de los tipos de célula de la sangre. Se usa principalmente para teñir frotis de sangre y
punciones medulares, para ser examinadas al microscopio. Es una tinción de tipo Romanowcky en azul
de metileno y sus productos de oxidación, así como eosina Y o eosina B
PREGUNTAS DE REFLEXIÓN
Porque de esa forma nos permitirá inferir de manera lógica por qué las reacciones químicas colorean a
ciertas células y porque a otras no. Porque si no lo conocemos jamás llegaremos a entender como es
que la tinción Wrigth permite identificar la especie del parasito y como es que la coloración Giemsa
permite cuantificar la parasitemia; si no conocemos el fundamento de estas tinciones nos limitaríamos a
solo memorizar los resultados y no a deducirlos de manera razonable.
VOCABULARIO
Plasmodium:Esun género de protistas del filo Apicomplexa, clase Aconoidasida, orden Haemo
sporida y familia Plasmodiidae del que se conocen más de 175 especies. El parásito siempre
tiene dos huéspedes en su ciclo vital: un mosquito que actúa como vector y un
huésped vertebrado.
Merozoito: Un merozoíto es una etapa del ciclo de vida de un parásito protozoario, resultado de
la reproducción asexual por división múltiple. Durante la merogonia, el núcleo se divide varias
veces y cada fragmento, al romperse la célula, adquiere una porción del citoplasma.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:
3. Acuña Zúñiga AM, Cabrera de los Santos F, Combol Martínez AM. Diagnóstico de
enteroparasitoris humanas. [Internet]. Montevideo: D - Universidad de la República; 2017 [citado 5
de mayo de 2019]. Disponible en: http://public.eblib.com/choice/publicfullrecord.aspx?p=5213801
5. Rodríguez por F. Tinción de Wright [Internet]. Blog de Laboratorio Clínico y Biomédico. 2017
[citado 12 de mayo de 2019]. Disponible en: https://www.franrzmn.com/tincion-de-wright/