Université D’Alger Benyoucef BENKHEDDA

Faculté des Sciences Médicales

Département de Pharmacie

Module d’Immunologie
4ème Année de Pharmacie

Cours:
TCR, BCR et anticorps monoclonaux

Dr F.MEÇABIH
2015/2016
Introduction

Récepteurs de l’antigène :

• Récepteur sur les lymphocytes T : TCR pour « T Cell Receptor »

• Récepteur sur les lymphocytes B : BCR pour « B Cell Receptor ».

Le TCR et le BCR sont très diversifiés.

• Plus de 109 spécificités différentes de BCR

• Plus de 1011 spécificités différentes de TCR

Un lymphocyte T ou B n’exprime qu’un type de récepteur : un clone

lymphocytaire

2
 Structure du BCR

Unité de reconnaissance de l’Ag : Ig de surface

ITAM (KXXL/I)2

Unité de transduction de signal: Iga (CD79a) et Igb (CD79b)

3
D’après kuby et al
 Structure du BCR

4
D’après Abul abbas et al
Structure du BCR

Feuillet b

VL

CL

Pont S-S

5
 Structure du BCR

Variabilité des acides aminés

entre les différents BCR (ou Ig)

Régions hypervariables
Régions hypervariables

6
D’après janeway et al
Distribution des BCR sur les lymphocytes B

IgG, A ou E
IgM

IgM

IgD

LB immature LB mature (naïf) LB mémoire

7
 Structure du TCR
Unité de reconnaissance de l’Ag : TCR ab

Unité de transduction de signal: complexe CD3

8
D’après kuby et al
 Structure du TCR

carbohydrates

Chaine a Chaine b

Domaine
variable (V)

Domaine
constant (C)

Région
transmembranaire

Région
Pont intracytoplasmique
dissulfure
(S-S)
9
D’après kuby et al; janeway et al
 Structure du TCR

CDRs CDRs

carbohydrates

10
D’après Abul abbas et al
 Fonction du TRC et BCR : reconnaissance de l’Ag

Le BCR (aussi les anticorps)

épitope Paratope

11
D’après Abul abbas et al; kuby et al
 Fonction du TRC et BCR : reconnaissance de l’Ag

Le BCR (aussi les anticorps)

12
D’après janeway et al
Fonction du TRC et BCR : reconnaissance de l’Ag

Le BCR (aussi les anticorps)

Épitope
conformationel
Structure
conformationnelle
de la protéine

Épitope
séquentiel

Structure linéaire de la
protéine

D’après janeway et al
Épitope : déterminant 13
antigénique
Fonction du TRC et BCR : reconnaissance de l’Ag

Le BCR (aussi les anticorps)

Ag 1 déterminant en 1 déterminant Déterminant

d’origine commun similaire différent

Réactions croisées Pas d’interaction

14
 Fonction du TRC et BCR : reconnaissance de l’Ag

Le TCR

TCR

CDRs

peptide

Régions d’interaction des CDR

CMH avec la poche du peptide
(classe I) (CDR3 et CDR1 interagissent
avec le peptide; CDR1,2 et 4
interagissent avec la
molécule HLA)
15
D’après janeway et al, Abul abbas et al
 Fonction du TRC et BCR : transduction de signal

Le BCR

16
D’après Abul abbas et al
 Fonction du TRC et BCR : transduction de signal

Le TCR

17
D’après Abul abbas et al
 Gènes des TCR et BCR

18
D’après Abul abbas et al
 Gènes des TCR et BCR

19
D’après Abul abbas et al
 Gènes des TCR et BCR : réarrangement

Chaine légère Chaine lourde

ADN
ADN germinal

Recombinaisons somatiques
Réarrangement
D-J

Recombinaisons somatiques

Réarrangement
V-D-J ou V-J

transcription
ARN
Transcrit
primaire

épissage

ARNm

Traduction

Chaine
peptidique

protéine

20
D’après janeway et al Rôle important de RAG1, RAG2 pour la recombinaison somatique
 Gènes des TCR et BCR

Génération de la diversité

21
D’après Abul abbas et al
 Gènes des TCR et BCR

Génération de la diversité
Additions P Déletion par exonucléases et Additions N

Clivage de l’épingle
à cheveux
Délétions par
éxonucléases

Ajout de nucléotides
complémentaires

Addition de
nucléotides
par TDT

Soudure

22
TDT: terminal désoxyribonucléotidyl transférase
D’après kuby et al
 Expression du TCR et BCR

Ordre des réarrangement TCR : g, d, b puis a

Ordre des réarrangement BCR : chaine lourde, CLk puis CLl

Exclusion allélique : un réarrangement productif sur un
chromosome bloque le réarrangement sur l’autre chromosome pour
le même locus.

23
D’après Abul abbas et al
 Expression du TCR et BCR

Expression du TCR

Ordre des réarrangement : g, d, b puis a

24
D’après Abul abbas et al
 Expression du TCR et BCR

Expression du BCR

25
D’après Abul abbas et al
 Expression du TCR et BCR
Expression du BCR
Expression de l’IgM Expression de l’IgD

ADN ADN

ARN ARN
ARNm ARNm

Protéine Protéine

Forme membranaire Forme soluble

26
D’après Janeway et al
 Changement de BCR

27
D’après Abul abbas et al
Changement de BCR
Commutation de classe

IgG, A ou E
IgM

IgM

IgD

LB immature LB mature (naïf) LB mémoire

28
 Changement de BCR
Commutation de classe

29
D’après Abul abbas et al
 Changement de BCR
Commutation de classe

30
D’après Janeway et al
 Changement de BCR
Hypermutations somatiques

Augmentation de l’affinité du BCR et de l’Ac

31
D’après Abul abbas et al
Les anticorps monoclonaux

clone1 clone2 clone3 clone4

Lymphocyte B Lymphocyte B Lymphocyte B Lymphocyte B

Ac monoclonal 1 Ac monoclonal 2 Ac monoclonal 3 Ac monoclonal 4

Physiologie : réponse polyclonale Pathologie : immunoglobinopathie

monoclonale

Gammaglobulines Immunoglobuline
(immunoglobulines monoclonale
32
principalement)
 Les anticorps monoclonaux
Technique des hybridomes

Lymphocytes B Myélome HGPRT-

Rate

IMMUNISATION FUSION
HAT
SELECTION

CRIBLAGES
Hybridomes
Hybridomes spécifiques

DILUTIONS LIMITES

SELECTION D’AcM

HAT (Hypoxanthine, Aminoptérine, Thymidine)

33
Les anticorps monoclonaux
Immunogénécité des anticorps
Déterminants isotypiques

IgG1 de souris IgM de souris

Déterminants allotypiques

IgG1 de souris IgG1 de souris

ligné A ligné B

Déterminants idiotypiques

IgG1 de souris IgG1 de souris 34

Anti-antigène a Anti-antigène b
Les anticorps monoclonaux
Immunogénécité des Acm
Ac Monoclonaux

Murins Chimériques Humanisés

Humains
Mab produits à Régions constantes Seuls les CDRs
partir de d’origine humaine et sont d’origine
lymphocytes B régions variables murine
murins d’origine murine

0% 75% 90% 100%

…omab …ximab …zumab …umab

Provoquent des Ac : Provoquent des Ac :
• Anti-isotypes provoquent seulement
• Anti-allotypes
• Anti-allotypes des Ac anti-idiotypes
• Anti-idiotypes
• Anti-idiotypes

35
 Les anticorps monoclonaux
Production des Acm humains
Souris transgéniques Immortalisation des lymphocytes B
Gènes des Ig humaines

Isolation des Ly B
Immunisation

Cellules
myélomateuses Ly B de la rate
(proteurs d’Ig immortalisation
humaines)
Fusion

Hybridomes

Criblage Criblage

36
AcM humain
Les anticorps monoclonaux
Production des Acm humains
« phage display »
Isolation des LyB

PCR VH (VDJ)+VL (VJ)

Transfection et expression sur des

phages (phage display)

sélection Amplification

Criblage

transfection

37
AcM humain
Les anticorps monoclonaux

Les anticorps monoclonaux

Humains
Humains (souris
transgéniques)
(Phage display)
Lonberg et al.
Humanisés McCafferty et al. 1994
1990
Jones et al. 1986
Panitumumab
Adalimumab (2006)
Chimériques (2002)
Daclizumab
Morrison et al. (1997)
1984

Murins Abeiximab
(1984)
Kohler et
Milstein 1975

Muromonomab-CD3
(1986) 38
Les anticorps monoclonaux
Exemple d’Acm utilisés comme des thérapeutiques

Anticorps monoclonaux à usage thérapeutique sur le marché ou ayant des autorisations

d’utilisation
Cible
Anticorps Nom Origine moléculaire Indication
OKT3 Orthoclone Muromonab Souris CD3 Transplantation
Panorexa Edrecolomab Souris EpCAM Oncologie
Reopro Abciximab Fab Chimérique gpIIb/IIIa Maladies cardio-vasculaires
Rituxan Rituximab Chimérique CD20 Oncologie et PR
Simulect Basiliximab Chimérique CD25 Transplantation
Remicade Infliximab Chimérique TNFa Inflammation, SPA, PR
Zenapax Daclizumab Humanisé CD25 Transplantation
Synagis Palivizumab Humanisé RSVb Maladies infectieuses
Herceptin Trastuzumab Humanisé HER2/Neu Oncologie
Mylotarg Gemtuzumab (Ozogamicin) Humanisé CD33 Oncologie
Campath Alemtuzumab Humanisé CD52 Oncologie
Zevalin Ibritumomab 90Y/111In Souris CD20 Oncologie
Humira Adalimumab Humain TNFa Inflammation, SPA
Xolair Omalizumab Humanisé IgE Asthme allergique
Bexxar Tositumomab 131I Souris CD20 Oncologie
Erbitux, IMC-C225 Cetuximab Chimérique EGF-R Oncologie
Avastin Bevacizumab Humanisé VEGF Oncologie
HuMax-CD4 Humain CD4 Oncologie
Raptiva Efalizumab Humanisé CDIIa Dermatologie
ROACTEMRA Tocilizumab Humanisé IL-6 Inflammation (PR)
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