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Practica 2: Cromatografía
Fecha: 23/10/2017
Resumen
Introducción
1. Adsorbente elegido
2. Polaridad de los solventes en la columna
3. Tamaño de la columna
4. Rango de elución
Papel
Celulosa
Silica gel
Alumina
Carbón activado
Objetivos
Hipótesis
Metodología
Materiales:
Reactivos:
Hexano
Tolueno
Acetato de etilo
Cloroformo
Cloruro de metileno
Metanol
Etanol
Éter de petróleo
Acetona
Benceno
Silica gel para capa fina
Silica gel para columna
Equipos de laboratorio:
Estufa
Campana de extracción
Procedimiento:
1. Limpiar el chile guajillo, quitar semillas y venas, dejar solo la piel, macerar en
trozos pequeños y pesar 20 gramos. Colocar en un frasco y agregar la
cantidad suficiente de cloruro de metileno para cubrir todo el chile, dejar
reposar para que la extracción se lleve a cabo.
2. Preparar una suspensión de silica gel para capa fina con acetato de etilo,
sumergir dos portaobjetos en la suspensión, agitar cada que se introduzcan
dos placas, después activar las placas en la estufa, 15 minutos a 100 grados
centígrados.
3. Colocar un papel filtro en la pared de cada frasco y agregar 10 ml de un
disolvente diferente en cada frasco.
4. Puntear con el capilar el extracto en las placas previamente activadas, dos
puntos en cada placa y colocar dentro de las cámaras de elución en orden de
polaridad.
5. Revisar cada una de las placas y determinar en cual se llevó a cabo una
mejor separación, buscar un solvente polar y otro poco polar, miscibles entre
si, en donde se haya llevado a cabo una mejor separación. Realizar mezclas
entre ese par en diferentes proporciones, realizar pruebas de elución
nuevamente y determinar en qué proporción se llevó a cabo la mejor
separación.
6. Preparar 100 ml de solución con el par elegido en la proporción elegida, llenar
la bureta a la mitad con el solvente menos polar de la mezcla y colocar un
algodón en el fondo de la bureta. En un matraz bola preparar una solución de
silica gel para columna con el solvente menos polar de la mezcla, agregar
hasta que toda la silica gel quede en la columna y sacar el solvente restante.
Agregar 2 cm de sal sobre la silica gel, agregar 1 ml de mezcla y puntear el
extracto, abrir la bureta para que salga la mezcla y se lleve a cabo la
separación del extracto en la silica gel, rellenar de mezcla cuantas veces sea
necesario.
7. En cuanto empiece a salir el primer componente del chile guajillo (color
amarillo) recolectar muestras de 1 ml en 20 tubos de ensayo, preparar 20
placas para capa fina y 20 cámaras de elución, puntear una gota de extracto
original y una de cada tubo, agregar 10 ml de mezcla a cada cámara y
comprobar si hubo separación.
Diagrama de flujo
Preparación de la
Limpieza y extración del
chile guajillo con cloruro suspensión de silica gel Preparación de placas y
para capa fina con acetato cámaras de elución.
de metileno.
de etilo.
Preparación de la mezcla
Pruebas de elución con
de disolventes y Cromatografia en
los diferentes disolventes.
preparación de la columna y recolección de
Elección del disolvente
columna para muestras.
ideal.
cromatografia.
Cromatografia en capa
fina para comparar
extracto original y el
obtenido en la columna.
Resultados
Pruebas de elución:
9 1
1 9
8 2
2 8
7 3
3 7
6 4
4 6
Conclusiones
Bibliografía
Carotenoides
Xantofilas
Clorofila a y b
Cromatografía en columna:
Las separaciones en la cromatografía en columna pueden realizarse por reparto,
adsorción o intercambio iónico. El estado físico del adsorbente hade ser de tal
manera que permita el empaquetamiento uniforme de la columna y el flujo libre de
disolvente a través de ella.
Cromatografía en capa fina
Cromatografía en papel y electro cromatografía. En todos los casos se emplea una
capa plana y relativamente delgada de una materia que a la vez es el soporte o
bien que recubre una superficie de vidrio, plástico o metálica. La fase móvil se
mueve a través de la fase estacionaria por capilaridad, a veces ayudada por
gravedad o por aplicación de un potencial eléctrico. En la actualidad la
cromatografía en plano se centra en la técnica de la capa fina, que es más rápida,
tiene mejor resolución y es más sensible que su alternativa en papel.
9.-¿Por qué es necesario que la cámara de elución este saturada de los vapores
del eluyente?
Se hace una suspensión de la silica gel para capa fina utilizando un solvente, en
este caso utilizamos acetato de etilo.
23.- ¿Por qué es importante que las muestras a separar por cromatografía vayan
lo más secas posible?
24.- Al cargar una columna se recomienda que la muestra lleve la mínima cantidad
de disolvente ¿Por qué?
Para que la muestra sea lo más pura posible y se puedan realizar las pruebas
correctamente.
Reaccionan entre si
27.- ¿Cuáles son los pasos a seguir para la preparación de las placas
preparativas?