REVISTA BIOLOGÍA Vol. 18, No.

2, 2004

OBTENCIÓN Y CARACTERIZACIÓN QUÍMICA

DEL BIOTENSIOACTIVO PRODUCIDO POR Bacillus
brevis CEPA IDO-135 EN BIORREACTOR DE 5 L
Vivian Almazán1, R.R. Núñez1, Eudalys Ortiz1; L. Moran2 y Yamildre Díaz1
1
Instituto de Oceanología, CITMA. Ciudad Habana, Cuba
2
Centro para el control estatal de la calidad de los medicamentos, CECMED

RESUMEN
El desarrollo de la biotecnología ha brindado la posibilidad de obtener tensioactivos de origen
microbiano a gran escala para ser utilizados en diferentes industrias. En el presente trabajo se
informan las condiciones de cultivo, en un biorreactor de 5L, para la producción de tensioactivo por
Bacillus brevis cepa IDO-135, así como su purificación e identificación, empleando diferentes técnicas
cromatográficas y reactivos de coloración específica como reveladores. Además fueron determinadas
las características reológicas del biotensioactivo producido. El rendimiento fue 1.4 veces mayor que el
obtenido en zaranda, manteniendo una buena actividad superficial (28 mN/m). Fue demostrado que la
producción del tensioactivo estaba asociada al crecimiento microbiano y que dicho compuesto es un
fluido newtoniano de naturaleza lipopeptídica, con una viscosidad de 2cp.
Palabras clave: Bacillus brevis, tensioactivo, caracterización, purificación.
ABSTRACT
The development of biotechnology has provided the possibility to obtain surfactants of microbial origin
at a large scale to be used in different industries. In the present work are reported the cultivation
conditions in a 5L bioreactor, for the production of surfactant by Bacillus brevis strain IDO-135, as well
as for its purification and identification, using different chromatographic techniques and reagents of
specific coloration as developers. The rheological characteristics of the biosurfactant produced were
also determined. The product with superficial activity was obtained with 1.4 times better yields than
those obtained in shaker, maintaining a good superficial activity (28 mN/m). It was demonstrated that
surfactant production was associated to the microbial growth and that it is a Newtonian fluid of
lipopeptidic nature, with a viscosity of 2cp.

Key words: Bacillus brevis, biosurfactant, characterization, purification.

INTRODUCCIÓN

En la actualidad el costo por tonelada de los
tensioactivos sintéticos en el mercado mundial es
excesivamente alto (del orden de los 3,000 USD) y
aunque existe una elevada demanda por parte de la
industria nacional, esta no puede ser satisfecha.
Desde 1988, en el Instituto de Oceanología se
inició un programa de búsqueda y explotación de
sustancias de interés a partir de microorganismos
marinos, bajo las premisas de la abundancia y
diversidad de estos en nuestras aguas territoriales.
En la actualidad, se cuenta con una colección de
bacterias marinas, de aproximadamente 400 cepas,
de las cuales un alto por ciento posee la capacidad
de producir tensioactivos en medios hidrosolubles.
A partir de la búsqueda de cepas productoras de
tensioactivos, la cepa IDO-135 fue seleccionada por
haber presentado su extracto crudo una gran activi-
dad superficial a partir de sustratos hidrosolubles.
E-mail: biofer@oceano.inf.cu
Teniendo en cuenta lo antes señalado nos propu-
simos los siguientes objetivos:
 Evaluar las condiciones de cultivo para la produc-
ción de tensioactivos por Bacillus brevis cepa
IDO-135, en biorreactor de 5 litros.
 Identificar la naturaleza química del biotensio-
activo producido por la cepa Bacillus brevis
IDO-135.
MATERIALES Y MÉTODOS
Microorganismo empleado
Fue empleada la cepa IDO-135, que forma parte
de la colección de bacterias marinas del Instituto de
Oceanología. Esta fue aislada de los sedimentos
de la plataforma cubana (Joseph et al., 1994) e
identificada como Bacillus brevis (Núñez et al., 2001).

128
Determinaciones analíticas
Densidad óptica (DO): las determinaciones fueron
llevadas a cabo en un fotocolorímetro Spekol 11 a
una longitud de onda de 650 nm y la masa seca
gravimétrica (PS) determinada mediante una
correlación entre masa seca vs DO, con la siguiente
expresión:
PS = 0.8835 (DO) + 0.0508 r2 = 0.9732, n=8
Determinación de tensión superficial e interfacial:
las tensiones superficial (TS) e interfacial (TI) fueron
determinadas por el método del anillo de Du Noüy
(Roberts, 1989) en un tensiómetro Krüss 10.
Determinación de DMC: la determinación de Dilu-
ción Micelar Crítica (DMC), fue realizada haciendo
diluciones del caldo centrifugado libre de células, en
agua destilada. La DMC fue calculada determinando
la bisectriz del ángulo que forman las dos partes
rectas de la curva característica de TS vs dilución. El
punto donde la bisectriz intercepta a dicha curva fue
tomado como la dilución a partir de la cual comienza
la formación de micelas en el seno de la solución
(Roberts, 1989).
Determinación de la concentración de carbo-
hidratos totales solubles (CHTS): fue utilizado el
método de Dubois et al. (1956).
Determinación de la concentración Lípidos
totales (Lip): fue utilizado el método de la sulfofosfo-
vainillina (Rapp et al., 1979).
Determinación de la concentración de proteínas
solubles (Pro): las determinaciones de proteínas
fueron realizadas mediante la técnica de Bradford,
1976.
Fermentación en un biorreactor de 5 L
A partir de un cultivo de 24 horas de la cepa
IDO-135 en medio 6 agarizado (Gorvienko, 1961),
fue obtenido el preinóculo en el medio de fermen-
tación. El inóculo fue crecido durante 24 horas en
zaranda orbital bioblock a 125 r·min -1. y 30°C. La
relación de inóculo fue del 5% v/v. Esta fermenta-
ción fue realizada en un biorreactor Infors (de 5L de
volumen total) completamente instrumentado. Las
condiciones de trabajo fueron 800 rmin -1, 30 °C de
temperatura, 40 % de oxígeno disuelto y pH libre.
Fueron tomadas muestras de 10 mL cada 2 horas,
y se determinó la DO, concentración de carbo-
hidratos totales solubles, TS y concentración de
lípidos totales (Rapp et al., 1979).
La velocidad específica de crecimiento (µ) fue
determinada en la fase exponencial usando el
modelo de crecimiento no restringido. La velocidad
específica de consumo de sustrato (Qs) y la
129
velocidad específica de formación de producto (Qp)
fueron calculadas por el método de los incrementos.
Los rendimientos biomasa-sustrato, biomasa-producto
y producto-sustrato, fueron determinadas en la fase
exponencial.
Determinación de la viscosidad
y densidad del tensioactivo producido
La viscosidad fue determinada a 25oC en un
viscosímetro multipuntual Brookfield, a partir del
reograma obtenido utilizando la relación esfuerzo
cortante-gradiente de velocidad y la densidad
fue obtenida mediante la relación masa-volumen
empleando un picnómetro.
Aislamiento, purificación e identificación
del biotensioactivo
Después de la fermentación, el caldo fue centrifu-
gado y posteriormente el crudo libre de células fue
liofilizado.
La muestra concentrada por liofilización de
IDO-135, fue acidificada con HCL (1 mol·L-1), hasta
alcanzar pH = 2 y conservada a 8C durante
48 horas (Javaheri et al., 1995). Luego fue centrifu-
gada a 7025xg, durante 20 minutos a 4C (Desai y
Banat, 1997). Tanto al sobrenadante como al precipi-
tado obtenido (disuelto en 10 mL de agua destilada)
les fue ajustado el pH a 6 con NaOH (1 mol·L-1).
La obtención del producto activo fue realizada
mediante tres extracciones sucesivas del caldo
liofilizado previamente disuelto, con 100mL de mezcla
Folch (CHCl3/CH3OH (2:1, (v/v)) (Rapp et al., 1979).
El extracto orgánico obtenido fue evaporado a 40 oC
hasta sequedad y el residuo disuelto en 10 mL de
agua destilada para determinarle la TS; la fase
acuosa fue procesada de forma similar. Por otra
parte la fase orgánica fue redisuelta en 15mL de
mezcla Folch, para continuar los procesos de
purificación.
La separación de los compuestos con actividad
superficial fue realizada mediante cromatografía en
columna (CC) de baja presión (23x1cm), con gel de
sílice ( 400 mesh, Fluka) como fase estacionaria.
Para la elución fue utilizado el sistema de solvente:
CHCl3/CH3OH/H2O (65:15:2, v/v). Fueron colectadas
fracciones de 2mL y monitoreadas por medidas
de TS.
El pico con actividad superficial (CCA) obtenido
por CC fue sometido a cromatografía mediante un
sistema de HPLC (Pharmacia LKB) en fase normal,
utilizando una columna Ultropac DIOL 120T (4.6 x
250 mm) (LKB). Fueron utilizados como solventes:
0.1% TFA/H2O (A) y 0.05% TFA/CH3CN (B);
el volumen de muestra aplicado fue de 100L
en 400L de la mezcla B/A (9:1), con un flujo de
0.8 mL·min-1. El gradiente aplicado fue: 0/90, 10/90,
100/0 de %B/%A. La elución fue seguida por medi-
ciones espectrofotométricas, mediante un detector
2151 VWM LKB a 226 nm.
Paralelamente una alícuota del pico CCA, fue
analizado mediante un sistema de HPLC
(Pharmacia LKB) en fase inversa con una columna
de LiChrosorb RP8 5m (4 x 250 mm). Los
solventes empleados fueron 0.1% TFA/H 2O (A) y
0.05% TFA/CH3CN (B), el volumen de muestra
aplicado fue de 400L de la mezcla MUESTRA/A
(1:9), con un flujo de 0.8 mL·min -1, siguiendo
un gradiente de: 0/1, 10/1, 90/80 de %A/%B.
La elución fue seguida mediante un detector
2151 VWM LKB, a una longitud de onda de 226 nm.
Los picos obtenidos fueron colectados para su
posterior identificación.
Identificación del biotensioactivo
A la fracción activa de IDO-135, le fue deter-
minado el espectro de absorción UV-Visible desde
200 a 800 nm contra agua, en un Espectrofotómetro
Shimadzu UV-160A. El solvente utilizado fue H2O
destilada.
El pico con actividad superficial obtenido por
HPLC en fase inversa fue analizado por CCF, en
cromatoplacas de gel de sílice G 60 F254 de 0.25 mm
de espesor, de 20x20 cm (Merck). La corrida
fue realizada con el sistema de solvente CHCl 3/
CH3OH/H2O (65:15:2, v/v) (Cooper y Paddock,
1984). La naturaleza química del biotensioactivo fue
identificada mediante reactivos de coloración especí-
fica: compuestos orgánicos (Marinetti, 1964); grupos
amino libres (Touchstone y Dobbins, 1983); carbo-
hidratos (Jacin, 1965); fósforo (Kirchner, 1981);
glicolípidos (Kirchner, 1981); aminoazúcares (Kirchner,
1981); ácidos carboxílicos libres (Kirchner, 1981) y
lípidos (Kirchner, 1981).
Procesamiento estadístico de los resultados
Fue utilizado el Análisis de varianza de clasificación
simple (Lerch, 1977) y la Prueba de comparación de
medias de rangos múltiples de Duncan (1965) en el
cual las medias que no se diferencian fueron
expresadas con igual letra. Todas las experiencias
fueron llevadas a cabo por triplicado y los datos
procesados con los programas Microsoft Excel 7.0 y
Statistica 4.0.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
En la Figura 1 son mostrados los perfiles de las
diferentes variables monitoreadas (TS (mN·m -1),
CHTS (g·L-1), PS (mg·L-1) y Lip (mg·L-1)) durante la
130
fermentación de la cepa IDO-135 en el biorreactor
de 3L de volumen efectivo.
Figura 1. Perfil de fermentación de la cepa IDO-135
en biorreactor de 5 L, en medio de cultivo
con sacarosa como fuente de carbono y energía
a 30 oC, 40 % de oxígeno disuelto y 800 r·min-1.
Tensión superficial (TS), carbohidratos totales
solubles (CHTS), masa seca gravimétrica (PS),
lípidos (Lip.)
Las variaciones de masa seca gravimétrica (PS)
en el tiempo describen las diferentes fases de
crecimiento de esta cepa en el medio de cultivo
estudiado. La fase exponecial del crecimiento fue
observada entre las 6 y 12 horas y la velocidad
específica de crecimiento para estas condiciones fue
de 0.685 h-1.
Los niveles de carbohidratos disminuyeron desde
el inicio del cultivo, asociado al activo crecimiento. El
valor de Qs fue de 2,42 h-1.
También fue observado un incremento notable de
los lípidos desde el inicio de la fermentación hasta
un poco después de alcanzada la fase exponencial
del crecimiento. A partir de este momento (9 horas)
los niveles de lípidos se mantuvieron casi constantes.
Durante las primeras horas de fermentación los
valores de tensión superficial disminuyeron rápida-
mente y alcanzaron valores de 28  0.8 mN·m-1
manteniéndose constantes hasta el final de la
fermentación.
Se puede apreciar que existe una buena
correlación entre los valores de lípidos y TS, los
cuales indican la formación de tensioactivos durante
la fermentación. El valor de Qp fue de 2,137 h-1.
Durante la fase exponencial se obtuvieron los
siguientes rendimientos:
Yx/s = 0,283, Yp/x = 3,12, Yp/s = 0,882.
Aparentemente, desde el punto de vista cinético,
esta se corresponde con una fermentación de tipo 1
o asociada al crecimiento, según Gaden, (López y
Gódia, 1998).
Con la fermentación de IDO-135 en el biorreactor
se logró aumentar 1,38 veces el valor de µ, con
respecto a los valores obtenidos con la misma cepa
en zaranda por Núñez et al. (2001). Además los
valores de actividad del caldo fermentado a nivel de
biorreactor fueron superiores estadísticamente con
respecto a los obtenidos en zaranda con el mismo
medio de cultivo (28  0.8 mN·m-1 y 34  1.0 mN·m-1).
Debido a que en el biorreactor fue posible satisfacer
las concentraciones de oxígeno disuelto, la produc-
ción de tensioactivo fue superior.
En los biorreactores se puede satisfacer la
demanda de oxígeno de los microorganismos
mediante la inyección de aire en el seno del líquido y
si el diseño del biorreactor, es esbelto, se garantiza
que el tiempo de residencia de la burbuja de aire en
él sea mayor. Otro factor importante es la agitación
pues se logra una mayor homogeneidad de los
nutrientes.
Gracias a estos dos factores se logra que los
rendimientos, la velocidad específica de crecimiento
(µ) y la concentración de productos, sean mayores
que en zaranda (Núñez, 2003).
Estudios reológicos
En la Figura 2, se muestra la relación entre el
esfuerzo cortante () y el gradiente de velocidad
(dv/dy) para el tensioactivo obtenido a partir de
Bacillus brevis IDO-135. En ella se puede apreciar el
comportamiento de un fluido newtoniano, donde la
pendiente es la viscosidad absoluta del tensioactivo.
Esto significa que el fluido tiene características
similares al agua, lo cual facilita las operaciones de
bombeo y mezclado en los procesos de separación
y purificación de los tensioactivos.
 xy (din/cm 2)
7 clasificación simple y la prueba de rangos múltiples
6  xy= 1,9 dv/dy
5 r2 = 0,9754
4 nivel de significación del 5%, no ocurriendo así con
3
2 Esto demostró que la extracción con mezcla Folch
1 producido por la cepa en estudio.
0
0 50 100 150 200

Figura 2. Relación entre  y dv/dy para el extracto crudo
obtenido en medio con sacarosa como única
fuente de carbono y energía a partir
de Bacillus brevis cepa IDO-135 a 25oC
en un viscosímetro Brookfield.
Aislamiento y purificación del biotensioactivo
Los trabajos de caracterización y purificación de
los tensioactivos de origen microbiano son de
notable importancia por su aplicación en diferentes
industrias (Kosaric et al., 1987 y Cooper y Paddock,
1984); sin embargo, por su bajo rendimiento no han
podido competir con los tensioactivos sintéticos,
aunque en algunos casos resultaría suficiente la
obtención de extractos semipurificados.
La obtención de productos exocelulares garantiza
la purificación por métodos más sencillos y econó-
micos, ya que no implica una ruptura de la célula,
que conllevaría a la presencia de contaminantes no
deseados.
Durante el aislamiento de los componentes con
actividad superficial fue considerada su posible
naturaleza lipídica, debido a las concentraciones de
lípidos observadas durante la fermentación. En este
sentido fueron realizadas dos extracciones, una con
acetato de etilo (AcOEt) y la otra con mezcla Folch.
Al realizar la extracción con el primer solvente fue
obtenido un extracto cuyo valor de TS no alcanzó los
niveles esperados (Tabla I), debido probable-mente
a que el AcOEt es un solvente parcialmente soluble
en agua y por tanto pudiera haber ocurrido una
extracción incompleta del tensioactivo.
Sin embargo, al extraer con mezcla Folch, el
extracto orgánico obtenido tuvo una TS de
32.0 mN/m, mientras que la fase acuosa no presentó
buenas propiedades tensiométricas (Tabla I). Al ser
el CHCl3 un solvente poco polar y el CH3OH muy
polar ocurre la extracción efectiva del tensioactivo
hacia la fase orgánica, debido a su naturaleza
hidrofóbica.
Los resultados del análisis de varianza de
de Duncan, demuestran que existen diferencias
significativas entre la fase orgánica y la acuosa para
el caso de la extracción con la mezcla Folch, para un
el AcOEt.
es más eficiente para el aislamiento del tensioactivo
250 300 350 En la Tabla I se muestran los valores de TS de las
dv/dy (1/s) diferentes fracciones obtenidas durante el aislamiento
del tensioactivo producido por la cepa Bacillus brevis
IDO-135.
Por estudios previos realizados con esta cepa
(Ortiz, 1998 y Almazán, 2001), se conoce que la
actividad del grupo ionizable del tensioactivo
131
producido por ella, es afectada a valores de pH Resultados similares obtuvieron Javaheri et al.,
menores de 5, lo cual evidencia su carácter (1995), Lin et al., (1994) y Almazán (2001), en el
aislamiento de varios tensioactivos a partir
Tabla I. Tensión superficial de las diferentes fracciones de Bacillus licheniformis.
obtenidas durante el aislamiento del tensioactivo El compuesto activo presente en la fase
producido por la cepa Bacillus brevis IDO-135. orgánica, fue separado del resto de los
componentes del extracto por cromatografía
de adsorción sobre gel de sílice. Para esto
Etapas del aislamiento TS135
fueron utilizados 3 sistemas de solventes
Fase orgánica de la extracción con AcOEt 35.1  1.3
a de distinta polaridad (CHCl 3:CH3OH:H2O
(30:60:8, 65:25:4 y 65:15:2)).
Fase acuosa de la extracción con AcOEt 33.9a  1.2 Para los dos primeros sistemas de solven-tes
no se logró una buena separación de la
Fase orgánica de la extracción con mezcla Folch 32.4  1.0
a
sustancia activa, la cual en ambos casos al
ser analizada por CCF permitió apreciar que
Fase acuosa de la extracción con mezcla Folch 43.0b  3.1
eluían con otras sustancias no activas. Sin
Precipitado neutro (pH = 6) 31.0a  1.5 embargo, para el caso del sistema de
solvente CHCl3:CH3OH:H2O/ 65:15:2, fue
Sobrenadante neutro (pH = 6) 41.0b  3.3 colectada una fracción eluida después de
1.8 lechos de columna, que presentó una
Fase orgánica después de acidificar (pH = 2) 30.4a  0.7 TS de 32.4  0.2 mN·m-1. Esto demostró que
este solvente fue mucho más selectivo y que
Fase acuosa después de acidificar (pH = 2) 41.3b  3.3 el tensioactivo tiene más afinidad por este,
debido a su naturaleza hidrofóbica.
aniónico.
Debido a esto se acidificó el caldo liofilizado como
A pesar de que por CC con el sistema de solvente
un paso previo antes de la extracción con mezcla
menos polar, fue obtenida una sola fracción, que al
Folch, para así eliminar sustancias no tensioactivas
ser analizada por CCF presentó una mancha ancha
que por su naturaleza lipídica pudieran extraerse e
y extensa al revelar con vapores de Iodo. Esto
interferir durante la purificación del compuesto activo.
sugiere que hay presente más de una sustancia y que
estas están íntimamente relacionadas, con propie-
Después de la acidificación se obtuvo un precipitado
dades cromatográficas, coeficientes de reparto y
de color pardo claro, que a pH 2 no mostró actividad
volúmenes de retención similares. Además, las
superficial, pero que al restituirle el pH a 6 presentó
condiciones de la CC a presión normal no garantizan
buenas propiedades tensiométricas (Tabla I). Esto
una buena separación, debido a que existe poco
corrobora lo planteado por Neugebauer (1994),
grado de elaboración de las partículas, mayor tamaño
donde los tensioactivos aniónicos sólo son solubles
de la partícula matriz, así como menor resolución.
a un pH mayor que el valor del pKa de su grupo
ionizable, mientras que los catiónicos sólo son De la fracción activa obtenida por CC, una alícuota
solubles a un pH menor que el valor del pKa de su fue sometida a cromatografía por HPLC en fase
grupo ionizable. normal y en ella se observan varios picos anchos a
226 nm (Figura 3).
El extracto orgánico del precipitado (63 mg)
presentó una TS de 30.4  0.7 mN·m-1, mientras que
la fase acuosa no presentó buenas propiedades
tensiométricas (Tabla I). Esto evidencia que la
sustancia tensioactiva se encuentra en esta fase y
tiene carácter lipídico, lo cual coincide con las
determinaciones de lípidos en el extracto (34 %).

Estos resultados demostraron que la precipitación

ácida y posterior extracción con mezcla Folch logran
la separación del tensioactivo de las restantes
biomoléculas presentes en el caldo, de forma más
eficiente que la extracción del polvo liofilizado
resuspendido y así son eliminadas gran parte de las
sustancias no activas. Esto se evidencia al comparar
los valores de TS para cada fracción durante el
proceso de purificación (Tabla I).

132

Figura 3.
Separación por HPLC
en fase normal de la fracción
activa obtenida por
cromatografía en columna.
Columna Ultropac DIOL
120T (4.6 x 250 mm)
(LKB), solventes: 0.1%
TFA/H2O (A) y 0.05%
TFA/CH3CN (B); volumen
de muestra aplicado 100L
en 400L de la mezcla
B/A (9:1), con un flujo de
0.8 L·min-1, gradiente: 0/90,
10/90, 100/0 de %B/%A.
TFA: ácido trifluoracético.
existir mayor afinidad de ésta por la fase móvil y no
por la estacionaria. En estas condiciones no logran
ser separados los componentes presentes en la
fracción activa obtenida por CC.
Por tal motivo se realizó una cromatografía de la
muestra por HPLC en fase inversa (RP-8), donde
fueron obtenidos 11 picos con buena resolución, con
una fuerte absorción de los péptidos a 226 nm
(Figura 4). Esto fue corroborado con los niveles de
proteína detectados en esta fracción.
Al realizar las medidas de TS a cada uno de los
picos obtenidos, fueron encontradas diferencias
significativas entre estos. Sólo el pico 11 presentó
buenas propiedades tensiométricas (TS = 35.9  0.9
mN·m-1), similares a la de la fracción activa obtenida
por CC.

La actividad superficial del pico 11 (35.9  0.9

Como se puede observar en esta figura, no se
logró una buena separación por HPLC en fase
normal de los componentes presentes en la fracción
activa obtenida por CC.
Los tensioactivos son moléculas anfifílicas con
una parte polar y una parte apolar, esto hace que su
grado de retención en la columna de gel de sílice en
fase normal no sea eficiente, debido a que va a
mN·m-1) no alcanzó los niveles del caldo original, sin
embargo, se evidencia una notable disminución del
valor de TS para el pico analizado, al compararlo
con el valor de TS del agua destilada (72 mN/m), a
pesar del alto grado de dilución de la muestra.
Identificación de la naturaleza química
del biotensioactivo
En la Figura 5 se muestra el espectro UV-Vis
correspondiente al pico con actividad superficial
obtenido por HPLC en fase inversa.

Se observó una elevación a 206 nm, atribuido al

grupo carboxilo de los lípidos (Ernö, 1987). También
se aprecia un pico a 224 correspondiente a enlaces

Figura 4. Separación por HPLC en fase inversa
de la fracción activa obtenida por cromatografía
en columna. Columna de LiChrosorb RP8 5m
(4 x 250 mm), solventes: 0.1% TFA/H2O (A)
y 0.05% TFA/CH3CN (B), el volumen
de muestra aplicado 400L de la mezcla
MUESTRA/A (1:9), flujo: 0.8 mL·min-1,
gradiente: 0/1, 10/1, 90/80 de %A/%B,
detector: 2151 VWM LKB (226 nm).
TFA: ácido trifluoracético.
Figura 5. Espectro de absorción de 200 a 800 nm
de longitud de onda del pico con actividad
superficial obtenido por HPLC en fase inversa.
peptídicos (Lehninger, 1981). Esto manifiesta la
presunta naturaleza lipopeptídica del tensioactivo
producido por la cepa en estudio, en estas
condiciones.
133
 Los resultados de la CCF del tensioactivo puro se mientras que no se detectaron niveles apreciables
muestran en la siguiente tabla: de CHTS.

Tabla II. Identificación de la naturaleza química Los resultados de la identificación infieren que el
mediante reactivos específicos de CCF. tensioactivo producido por Bacillus brevis IDO-135
es un lipopéptido.
Fracción TS
Rf 1 2 3 4 5 6 7 8 Estos resultados concuerdan con los obtenidos
activa (mN/m)
por Katz y Demain (1977) al obtener un lipopéptido
IDO-135 0.3 + - - - - - + + 35.9  0.9 cíclico, conocido como GRAMICIDINA S, a partir de
una cepa de Bacillus brevis.
Prueba con: 1, verde bromocresol;
2, molibdato de amonio/HClO4; CONCLUSIONES
3, reactivo de Molish;
4, difenilamina; 1. Se demostró que los rendimientos y la velocidad
5, reactivo de Elson-Morgan; específica de crecimiento (µ) obtenidos durante
6, ninhidrina;
el cultivo de Bacillus brevis cepa IDO-135,
7, atmósfera de yodo;
8, rodamina B. aumentaron sus valores en aproximadamente 1.4
La respuesta de la fracción activa a cada uno de veces, con respecto a los obtenidos en zaranda,
los reactivos de coloración específica muestra que manteniendo una buena actividad superficial.
Bacillus brevis IDO-135 biosintetiza mayoritaria-
mente una molécula con una parte lipídica, que 2. Se demostró que la producción de tensioactivos
contiene ácidos carboxílicos libres, demostrándose está asociada al crecimiento microbiano y es un
la correlación que existió en el proceso fermentativo fluido newtoniano con una viscosidad de 2cp.
entre la determinación de Lip. y TS.
3. Se logró aislar y purificar el Tensioactivo produ-
El contenido de lípidos y proteínas de la fracción cido por Bacillus brevis cepa IDO-135, el cual
evaluada fue de 23% y 62%, respectivamente, tiene naturaleza lipopeptídica.

REFERENCIAS

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Recibido: Enero 2004

Aceptado: Septiembre 2004

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