DIAPOSITIVA # 1

DETENCIÓN DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS

la clonación molecular ha permitido el aislamiento y caracterización de genes individuales.

Los genes requieren de un análisis de organización intracelular de la expresión de genes y
proteinas que codifican.
los procedimientos básicos empleados para la detección de ácidos nucleicos y proteínas,
son analizados por medio de técnicas que son importantes para una amplia variedad de
estudios, en las técnicas podemos encontrar:
- análisis de la expresión génica
- localización de proteínas
- mapa genético

ahora vamos a ver los métodos de detección de ácidos nucleicos y proteínas.

en los métodos podemos encontrar el PCR, hibridación y sondas.

DIAPOSITIVA # 2

PCR: psr son siglas en inglés que significa ( reacción en la cadena polimerasa)
la pcr es la clonación molecular que permite producir y aislar grandes cantidades de ADN,
a partir de un fragmento determinado.
la pcr fue desarrollada por Kary Mullis el 1988, estoy otorgó el premio Nobel en química en
1993 y fue compartido por Michael Smich.
La psr es un método alternativo para seguir la amplificación de fragmentos de material
genético a partir de una copia de ADN o ADN complementario( eso solamente lo hizo en
el ADN no en el ARN// ojo ) obteniendo resultados exponenciales
los objetivos de la PCR es hacer amplificación y una detección .
* la amplificación con la finalidad de tener muchas copias de lo que se amplifico para
hacer más estudio.
* Y en la detección es para detectar una secuencia específica en una cadena de ADN.
La PCR va a ser llevado a cabo por una ADN polimerasa, que en ese caso va ser la Tap,
este es un tipo de polimerasa termoestable y es llamado así porque es producida por una
bacteria llamada termuss acuátic

DIAPOSITIVA #3
los componentes necesarios para realizar la cadena de polimerasa son:
* ADN molde: Qué es el punto de partida donde se va empezar la amplificación, los
primers o cebadores, la enzima ADN polimerasa ( en este caso hacer la tab- polimerasa,
un cofactor de magnesio, los de deoxinucleotidos trifosfato y el termo ciclador.
decíamos entonces que el ADN va a ser el molde,
los primers se van a unir por complementaridad de bases,
la enzima polimerasa es la Tap. Aunas de las importancias del cofacetir de magnecio es
que las concentraciones bajas del magnesio no van a permitir el funcionamiento adecuado
del ADN polimerasa, por lo tanto no se van a obtener los mejores resultados, tiene que ser
promedio.
Los DNTPS Qué son las mismas bases nitrogenadaso del ADN( adenina ,guanina,
citosina y timina) eso es lo que van a hacer complemetar las bases y unirse a las otras
cadenas, En otras palabras, lo que va ayudar es a la elongación de la cadena.
después de que ya tengamos los componentes de la reacción del pcr se van a introducir en
un tubo de reacciones, y después de eso va a ser llevado al termoreciclafdor,( donde la
función del es regular las temperaturas).
algo importante a tener en cuenta, es que se necesita una solución BUFFER para poder
mantener el pH del ADN polimerasa.
y una sal importante es el cloruro de sodio, qué va a contribuir al buen funcionamiento de la
ADN polimerasa.

DIAPOSITIVA # 4
En ese caso ya entramos explicar las 3 etapas o ciclos de la PSR ,
en esa imagen encontramos encontramos el primer ciclo, Dónde tenemos dos hebras de
ADN, Entonces es un ADN bicatenario, que por calentamiento va produce el
desencadenamiento de las dos cadenas, esto quiere que se van a separar.

Después van a llegar los cebador es y se van a unir a cada extremo al gen de interés o al
gen que se quiere amplificar. después de esto puede actuar el ADN polimerasa, ( en ese
caso sería la taq_ polimerasa ) y lo que va hacer es por complementariaedad de bases //
ojo = los cebadores también se unen a estas cadenas que están separadas por
complementariedad de bases// , después de que sean los cebadores la ADN polimerasa,
va incluyendo los desoxinucleótidos ( o ucleótidos de ADN ) que en este caso sería
adenina ,guanina, timina citosina. Y después de eso ya empieza la síntesis de ADN a
partir de los cebadores,
"nota: si los cebadores no llegan no se puede incrementar las otras bases."
"nota: ese proceso no se puede llevar solamente a 3 ciclos se puede llevar a muchos,
pero muchos ciclos. Eso dependerá de laboratorio y de la necesidad con que se vaya a
hacer el trabajo.

la parte que acabamos de explicar corresponde a la fase 1 o ciclo 1.

/ / y las tres fases desnaturalización y todo eso: se vuelven a repetir el ciclo pero de una
forma exponencial, donde en cada ciclo se obtiene el doble de copias que habían
anteriormente

lo que miramos a quí es el tuvo de reacción, donde se coloca en una máquina, en ese
caso el termociclador, dónde va a permitir que se produzca ciclos repetitivos de
amplificación de ADN.
el termociclador eleva y baja las temperaturas, y la reacción se calienta por primera vez a
una temperatura determinada, y se da la desnaturalización de
de las dos hebras, en ese caso la hebra complementaria y la hebra también conocida
como Diana.
y después vine la elongación, Qué van a ser otro tipo bases, ( por ejemplo ya donde
adenina tiene que ir su respectiva complementaria, entonces la ADN polimerasa empiece
el plegamiento, qué es la unión de todas las cadenas.

Y eso es lo que va a suceder en este proceso, donde todo esto se va a volver a repetir
con cada cadena creada. Donde las cadenas se vuelven a separar, los primers vuelven a
cada extremo , luego vuelve las bases nitrogenadas, y la ADN polimerasa vuelve a ser lo
mismo. Es decir, en cada ciclo vuelve a ser la misma repitencion de desnaturalización,
anillamiento y enlongacion y da como resultado un número de millones de copias de genes
en un tiempo récod.

DIAPOSITIVA # 5
HIBRIDACIÓN transferencia Acidos NUCLEICOS:
la hibridación va ser la detección de secuencias específicas de ácidos nucleicos, donde el
apareamiento de bases entre hebras complementarias de ADN, es sometida a altas
temperaturas.
Pero antes de hablar de hibridación como tal,
vamos a hablar de las técnicas de la hibridación Qué son
..El Southern, que detecta la presencia de ciertas secuencias en el DNA, se usa por
ejemplo, para estudiar mutaciones en el genoma (permite evidenciar el mismo material
genético)
--El Northern, permite detectar qué genes son transcriptos en determinadas condiciones.
(la expresión de diferentes genes)
-- hibridación Insitus: para la detección de secuencias células especializadas de ARN y
ADN en células específicas. Y como estos ácidos nucleicos ocupan una posición en la
célula, al extraerse pierden información, Entonces se utilizan técnicas de sondas de ácidos
nucleicos para localizar secuencias de esos ácidos, mientras están dentro de la célula o los
cromosomas.

DIAPOSITIVA # 6
Ya entrando a detalle la hibridación, hablamos de la doble hélice de ADN que se
mantienen juntas por enlaces de hidrógeno.Qué son relativamente débiles y pueden
romperse por el calentamiento a temperaturas de un promedio de 90 c° o también por
exposición a pH extremo. Este tratamiento libera la unión de las cadenas, pero no rompe los
enlaces covalentes de los nucleótidos de las cadenas, ese proceso de rompimiento se
llama DESNATURALIZACIÓN, pero si eso se lleva a un proceso lento de temperatura
normal o de PH neutro, esas cadenas complementarias vuelven a formar fácilmente las
hélices dobles de ADN, este proceso es llamado la RENATURALIZACIÓN.

importante// una reacción de hibridación se producirá entre cualquier cadena libres de

ácidos nucleicos, ya sea ADN/ ARN.
APLICACIONES
este proceso de hibridación se puede llevar a cabo en:
* trisomía 21: este es una discapacidad intelectual de retraso en el desarrollo que son
causadas por una presencia de una tercera copia total o parcial de cromosomas 21
* fibrosis quística: es un trastorno hereditario que daña los pulmones y el sistema digestivo
* enfermedad de Huntinton: es una afección hereditaria en la que las neuronas se
regeneran y afecta los ganglios basales, esta enfermedad provoca la aparición de síntomas
psiquiátricos

DIAPOSITIVA # 7

SONDAS
son fragmentos de ADN o ARN con la capacidad detectar una secuencia antiparalela entre
una mezcla por complementaria.
 bueno para visualizar las moléculas Diana, se utiliza una sonda marcada Radio Activa por
marcaje inmunológico. El método más avanzado se utiliza marcajes mediante fluorescencia
que emiten señales mediante láser.
en la Sonda de ADN es una técnica que permite cortar, cepar, multiplicar y seleccionar
fragmentos de ADN.

DIAPOSITIVA # 8
En los métodos más avanzados se utilizan marcajes mediante fluorescencia que emiten
señales detectadas mediante láser.
El marcaje radioactivo es muy sensible pero conlleva el peligro de la radioactividad.