Nombre: Evelyn Noelia Castillo Medina

MICROSCOPIA
1.1 El descubrimiento de la estructura celular: el microscopio óptico
En general, los microscopios ópticos se usan para examinar células a
relativamente pocos aumentos, y los electrónicos para examinar células y
estructuras celulares a muchos aumentos.
 El microscopio óptico compuesto
El microscopio óptico utiliza la luz visible para iluminar las estructuras celulares.
En microbiología se usan distintos tipos de microscopios ópticos: de campo
claro, contraste de fases, contraste por interferencia diferencial, campo oscuro
y fluorescencia. Normalmente las células bacterianas son difíciles de observar
con el microscopio de campo claro, porque no tienen un contraste significativo
con el medio circundante. Al observarlas con un tipo de microscopio óptico
llamado de contraste de fases se evita el problema.
 Aumento y resolución
El límite superior de los microscopios ópticos es de unos 2.000 aumentos, y a
aumentos superiores la resolución no mejora. La resolución es una función de
la longitud de onda de la luz utilizada, y es una característica de la lente del
objetivo conocida como apertura numérica, que es una medida de la capacidad
de la lente para captar la luz.
Las lentes en las que se utiliza aceite se llaman lentes de inmersión en aceite.
El aceite de inmersión aumenta la capacidad de una lente para captar la luz al
permitir que algunos de los rayos de luz que salen de la muestra formando un
ángulo sean captados y vistos.
1.2 Mejora del contraste en el microscopio óptico
 Tinción: aumento del contraste en el microscopio de campo claro
Se pueden usar colorantes para teñir las células y mejorar el contraste, de
modo que sea más fácil observarlas al microscopio de campo claro. Los
colorantes son compuestos orgánicos. Muchos de los usados en microbiología
tienen carga positiva, y por esta razón reciben el nombre de colorantes básicos.
Ejemplos de ellos son el azul de metileno, el cristal violeta y la safranina.
 Tinciones diferenciales: la Tinción de Gram
Según sea el resultado de esta tinción, las bacterias se pueden dividir en dos
grandes grupos: las grampositivas y las gramnegativas. Una vez teñidas, las
bacterias grampositivas se muestran de color morado y las gramnegativas de
color rosa La diferencia de color en la tinción de Gram se debe a diferencias en
la estructura de la pared celular de las células.
 Microscopia de contraste de fases y de campo oscuro
Se basa en el principio según el cual las células tienen un índice de refracción
diferente al del medio que la rodea. Así pues, la luz que atraviesa una célula
tiene una fase distinta de la que atraviesa el líquido circundante. Esta sutil
diferencia es amplificada colocando un dispositivo en el objetivo del
microscopio de contraste de fases llamado anillo de fases, que genera una
imagen oscura sobre un fondo claro, en el microscopio de campo oscuro, la luz
llega a la muestra únicamente desde los lados. La única luz que recibe la lente
es la que dispersa la muestra, de modo que esta aparece clara en un fondo
oscuro.
 Microscopia de fluorescencia
Se utiliza para visualizar muestras que emiten fluorescencia, es decir, que
emiten luz de un color diferente al de la luz que han absorbido. Las células
emiten fluorescencia porque contienen sustancias fluorescentes naturales,
como la clorofila. El DAPI (4,6-diamidino-2-fenilindol) es un colorante
fluorescente muy usado que tiñe las células de color azul brillante porque forma
complejos con el DNA.
1.3 Imagen tridimensional de las células
 Microscopia de contraste por interferencia diferencial
Es un tipo de microscopía óptica que utiliza un polarizador en el condensador
para producir luz polarizada (luz en un solo plano). Esta luz polarizada pasa
después por un prisma que genera dos haces distintos, que atraviesan la
muestra y entran en el objetivo, donde se vuelven a unir en uno solo.
 Microscopia confocal de barrido con laser
Es un microscopio controlado por ordenador en el que se acopla un láser a un
microscopio de fluorescencia. El láser genera una imagen tridimensional
brillante y permite al observador acceder a la muestra desde diversos planos
de enfoque.
1.4 Análisis de la estructura celular: LA MICROSCOPIA ELECTRONICA
Los microscopios electrónicos están equipados con cámaras para poder tomar
fotografías, llamadas micrografías electrónicas. Normalmente, en microbiología
se usan dos tipos de microscopio electrónico: el de transmisión y el de barrido.
 Microscopia electrónica de transmisión
El poder de resolución es mucho mayor que el del microscopio óptico, y
permite incluso ver estructuras a escala molécula. A diferencia de los fotones,
los electrones tienen muy poco poder de penetración; incluso una sola célula
es demasiado gruesa para atravesarla con un haz de electrones. En
consecuencia, para observar la estructura interna de una célula es necesario
obtener secciones finas de ella, y luego estabilizarlas y teñirlas con distintos
productos químicos para hacerlas visibles.
 Microscopia electrónica de barrido
En la microscopía electrónica de barrido, la muestra se cubre con una capa fina
de un metal pesado, normalmente oro. Los electrones son desviados por la
capa de metal y recogidos y proyectados en un monitor para producir una
imagen. En el microscopio electrónico de barrido se pueden observar también
muestras bastante grandes, y la profundidad de campo (la porción de la imagen
que queda enfocada) es extremadamente buena.