GUÍA DE PRÁCTICAS

LABORATORIO TALLER SIMULACIÓN CAMPO

CARRERA: INGENIERÍA EN ALIMENTOS

ASIGNATURA: ANÁLISIS DE ALIMENTOS II

NIVEL: SÉPTIMO PARALELO: “U”

UNIDAD DE ORGANIZACIÓN CURRICULAR: Profesional DOCENTE: Mg. Cecilia Carpio

CICLO ACADÉMICO: MARZO – AGOSTO 2018

PRÁCTICA N: 3

I. TEMA: “SEPARACIÓN DE LÍPIDOS POR CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA”

II. OBJETIVO:
 Separar lípidos de diferentes polaridades por cromatografía de capa fina.

III. INSTRUCCIONES: Use mandil y todos los equipos de protección personal y la Sorbona
para trabajar con los distintos solventes. Registrar cuidadosamente los pesos y demás datos
en el cuaderno de laboratorio.
IV. LISTADO DE EQUIPOS, MATERIALES Y RECURSOS:
MATERIALES REACTIVOS
 Balanza analítica  Solución de Hidróxido de Potasio al
 Vasos de precipitación de 100 mL 50% (p/p)
 Baño María  Éter de petróleo
 Estufa mantenida a 105°C  Hexano grado cromatográfico
 Pipeta automática de 100-1000 L  Etanol al 95%
 Cámara de desarrollo cromatográfico  Etanol 1:9
 Cronómetro  Acetona grado reactivo para análisis
 Placas de cromatografía ya preparadas  Benceno
 Capilares para aplicar la muestra o puntas  Tricloruro de antimonio (solución
de pipeta saturada en cloroformo)
 Pulverizador para aplicar el revelador
 Embudo de filtración
 Papel filtro
 Sorbona

Muestra: materia insaponificable extraida de la mantequilla, diluida en cloroformo

V. ACTIVIDADES POR DESARROLLAR:

A. Activación de las placas cromatográficas
Calentar las placas a 105°C durante 2 h y guardarlas en el desecador hasta el momento de usarlas.

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B. Saturación de la cámara de desarrollo
Colocar en el interior de la cámara la cantidad necesaria de la mezcla benceno:acetona 4:1, tapar
la cámara y dejar en reposo por 3 h para alcanzar el equilibrio líquido-vapor en el interior de la
cámara.
C. Separación cromatográfica
 Disolver en cloroformo la materia insaponificable extraida (utilizar de 0,5 a 1,0°mL).
 Depositar mediante un capilar toda la muestra disuelta en cloroformo sobre la placa
cromatográfica en puntos situados aproximadamente a 1°cm del borde inferior de la placa y
separados entre sí aproximadamente 0,5°cm (Fig 1). Lavar el vaso que contenía el extracto con
0,5°mL de cloroformo y depositar el líquido de lavado sobre las aplicaciones anteriores.
 Insertar la placa dentro de la cámara de desarrollo colocándola en una posición tal que la
superficie de la sílica no esté en contacto con el solvente para conseguir la saturación de la placa,
dejar en esta posición por 15°min.
 Exponer la placa al solvente y esperar el desarrollo de la separación hasta que el frente del
solvente se sitúe 1°cm por debajo del extremo superior de la placa (Fig. 2). Marcar el frente del
solvente, sacar la placa de la cámara y dejar evaporar el solvente a temperatura ambiente.
 Pulverizar la sección de referencia de la placa destinada al estándar si hubiera pero que en este
caso corresponde a la misma muestra para visualizar los componentes separados y ubicar la
banda correspondiente a los esteroles. Marcar el centro de cada mancha y medir la distancia
recorrida por cada componente de la muestra y la correspondiente al frente del solvente (Fig 3).
 Raspar en el resto de la placa la sección correspondiente a los esteroles y colocar en un vaso de
50°mL. Añadir 10°mL de cloroformo y agitar vigorosamente. Separar el extracto de la sílica por
filtración en un vaso tarado de 50°mL, repetir la extracción con otros 10°mL de cloroformo. Unir
los extractos y evaporarlos a sequedad bajo corriente de N. Pesar el residuo para determinar los
esteroles totales.

NOTA: Guardar los esteroles (colesterol) para utilizarlo como patrón en la cuantificación de
colesterol en diferentes grasas (Práctica 4).

Fig. °1 Fig. °2.

D. Determinación de los Rf de cada componente de la materia insaponificable

El gráfico 3 le ilustra como determinar los Rf.

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 Rfa = a/D

Fig. °3. Determinación de los Rf de los componentes de una muestra

CÁLCULOS
 Determinar el porcentaje de esteroles presentes en la materia insaponificable y en la muestra
original.
 Calcular los Rf de todos los componentes de la fracción insaponificable que se separaron.
VI. RESULTADOS OBTENIDOS:
a. Reportar el porcentaje de esteroles calculados en relación a la cantidad de materia insaponificable
y a la muestra original.
b. Calcular y presentar los valores de Rf de los lípidos presentes en la materia insaponificable.

c. DISCUSIÓN: Revisar en bibliografía especializada los tipos de lípidos que generalmente se

observan en la fracción insaponificable. Considerar la ubicación de estos lípidos en la muestra
tomando en consideración la composición de la fase móvil.
VII. CONCLUSIONES:
Elaborar conclusiones concisas en función del o de los objetivos planteados.

VIII. RECOMENDACIONES:
Proponer las recomendaciones que sean necesarias.

VALIDACIÓN DE LAS GUÍAS DE PRÁCTICAS

Fecha de elaboración: 2 de marzo del 2018

Mg. Cecilia Carpio

DOCENTE PLANIFICADOR UTA

Mg. Aracely Pilamala Mg. Carlos Moreno

COORDINADORA DE LA UNIDAD DE COORDINADOR DE CARRERA

ORGANIZACIÓN CURRICULAR PROFESIONAL
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