FORMATO PARA INFORME DE

UNIVERSIDAD TÉCNICA DEL NORTE

PRÁCTICAS DE
FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD
LABORATORIO
EJECUCIÓN Y EVALUACIÓN CÓDIGO: FOR.D.3.05
PROCESO:
ACADÉMICA VERSIÓN: 1.0
FECHA
PROCEDIMIENTO GESTIÓN Y
APROBACIÓN:
SUB PROCESO: DESARROLLO DE PRÁCTICAS
DE LABORATORIO PÁGINA: Página 1 de 1

UNIVERSIDAD TÉCNICA DEL NORTE

FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD
NUTRICIÓN Y DIETÉTICA

INFORME 2

TEMA: REALIZACIÓN DE UNA PREPARACIÓN DE MUESTRA PARA

CULTIVO EN UN MEDIO SOLIDO

INTEGRANTES: López Víctor, López Carolina, Marcillo Milena, Muñoz Leidy

Ibarra, 2019
Contenido

1. OBJETIVOS .......................................................................................................................3
2. INTRODUCCIÓN ..............................................................................................................4
3. MARCO TEÓRICO...........................................................................................................5
4. EQUIPO ..............................................................................................................................7
5. PROCEDIMIENTO ...........................................................................................................8
6. RESULTADOS EXPERIMENTALES .............................................................................9
7. ANÁLISIS DE RESULTADOS .........................................................................................9
8. CONCLUSIONES ............................................................................................................10
9. ANEXOS ...........................................................................................................................10
10. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ........................................................................11
1. OBJETIVOS

➢ Aprender los diferentes métodos de cultivo que existen para la preparación y

siembra de una muestra microbiológica en un medio sólido para cultivo.
➢ Listar los pasos para la siembra de una muestra microbiológica durante la toma
de muestra y aplicación de ésta en el medio de cultivo.
➢ Describir las características del medio de cultivo y las características iniciales
de éste antes del crecimiento de colonias bacterianas.
 2. INTRODUCCIÓN

Para realizar exámenes microbiológicos, es importante prestar atención a la higiene

personal y utilizar técnicas de trabajo que aseguran, en la medida de lo posible, la
exclusión de contaminación extraña.
Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros
componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los
microorganismos (Cuesta, 2016) . Se puede realizar varios tipos de siembra sobre placas
Petri, en función del objetivo y de la muestra de la que se parte. Dicha muestra puede
encontrarse en un medio sólido, semisólido o líquido.
En este laboratorio se realizará por Siembra por Estría: este tipo de siembra se realiza
para estudiar las características de las colonias, obtener colonias aisladas u obtener gran
cantidad de masa. El procedimiento se basa en ir agotando el inóculo que arrastra el asa
de forma que al final, lleve sólo unas pocas células que se depositan una a una en el agar,
generando una colonia aislada.
 3. MARCO TEÓRICO

Medios de cultivo:

Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros

componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los
microorganismos. La diversidad metabólica de estos es tan grande que la variedad de
medios de cultivo es enorme, no existiendo un medio de cultivo universal adecuado para
todos ellos, ni siquiera refiriéndonos a las bacterias con exclusividad. (Cuesta, 2016)

Los microorganismos son los seres más abundantes de la tierra, pueden vivir en
condiciones extremas de pH, temperatura y tensión de oxígeno, colonizando una amplia
diversidad de nichos ecológicos. Entre los requerimientos más importantes para su
desarrollo están el carbono, el oxígeno, nitrógeno, dióxido de carbono e hidrógeno.
Muchas bacterias sin embargo necesitan del aporte extra de factores de crecimiento
específicos en forma de suero, sangre y extracto de levadura entre otros. (López & Torres,
2006)

Son necesarios para el aislamiento, mantenimiento, la reproducción y la identificación

de los microorganismos. (Cuesta, 2016)

• Contienen sustancias nutritivas

• pH adecuado
• Deben estar estériles

Incubación: Depende del metabolismo del microorganismo a cultivar. La atmósfera

empleada. (aerobio, microaerofílico, anaerobio). (Cuesta, 2016)

• Tiempo.
• Temperatura.

Clasificación de medios de cultivo:

1. Según su estado físico:

• Líquidos: se denominan caldos y contienen los nutrientes en solución acuosa.
(López & Torres, 2006)
• Semisólidos: contienen 7,5 g de agar /litro de caldo. Se utilizan para
determinar la motilidad de las especies en estudio. (López & Torres, 2006)
 • Sólidos: se preparan añadiendo un agar a un medio líquido (caldo) a razón de
15g/litro. (López & Torres, 2006)
2. Según su finalidad en microbiología o composición: a causa de los requerimientos
químicos del mundo microbiano, a veces es necesario agregar o eliminar
componentes químicos del medio. (López & Torres, 2006)
• No selectivos: contienen suficientes nutrientes como para soportar el
crecimiento de gran variedad de microorganismos. (Cuesta, 2016)
• Selectivos: permiten el crecimiento de sólo un tipo de microorganismo.
(Cuesta, 2016)
• Enriquecido: son medios no selectivos que se le agrega sustancias como ser
sangre, suero, albúmina, etc... Para microorganismos exigentes. (Cuesta,
2016)
• Diferenciales: son medios de cultivo que permiten establecer diferencias
entre diferentes tipos microorganismos. (Cuesta, 2016)

Según su origen:

• Naturales: son los preparados a partir de sustancias naturales de origen animal o

vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya composición química no
se conoce exactamente. (López & Torres, 2006)
• Sintéticos: son los medios que contienen una composición química definida cuali
y cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados reproducibles. (López &
Torres, 2006)
• Semisintéticos son los sintéticos a los que se les añaden factores de crecimiento
bajo una forma de un extracto orgánico complejo, como por ejemplo extracto de
levadura. (López & Torres, 2006)

Manejo de los medios de cultivo:

Según (Cuesta, 2016):

1. El laboratorio debe registrar la fecha:

• de recepción
• de apertura del envase.
• de caducidad
2. El almacenamiento debe realizarse en las condiciones apropiadas. 9
 • Envases: deben estar herméticamente cerrados. (especialmente medios
deshidratados) (Cuesta, 2016).
• No deben utilizarse medios deshidratados que presenten apelmazamiento
o un cambio de color (Cuesta, 2016).

Los medios de cultivo se preparan:

Según (Cuesta, 2016):

1. En el laboratorio a partir de sus diferentes componentes.

2. A partir de productos en polvo deshidratados comerciales.
3. Pueden adquirirse medios listos para su uso.

4. EQUIPO

• Mandil blanco manga larga

• Guantes de látex estériles
• Mascarilla, Gorro o cofia
• Botiquín de primeros auxilios: con todos los elementos médicos
• Basurero de color rojo con identificación “Desechos Contaminados”
• Bolsas de basura rojas
• Alcohol
• Desinfectante.

Los equipos y materiales requeridos para realizar esta práctica son:

• Computadora con proyector y conexión a internet.

• Cajas Petri con medio enriquecido (Agar sangre).
• Puntero láser.
• Ambiente para cultivo
• Materiales de laboratorio
• Asa de siembra
• Mechero de Bunsen o lámpara de alcohol.
• Estufa de cultivo
• Muestra de orina
 • Pinzas para tubo de ensayo
• Asa bacteriológica
• Marcador Indeleble
• Fósforos
• Papel Kraft

5. PROCEDIMIENTO

1. Rotular la placa en la que se vaya a realizar la siembra por la parte inferior y anotar
la fecha y el número o código de la muestra. Mantenerla cerrada boca abajo, junto
con el resto de material a utilizar en las inmediaciones de la llama.
2. Esterilizar el asa de siembra calentándola al rojo vivo con la llama. Esperar a que
se enfríe, sin alejar de la zona de esterilidad, sujetándola con la mano dominante.
3. Si la muestra procede de otra placa Petri, tomar una colonia con el asa. Si la
muestra procede de un tubo con medio líquido, abrir el tubo sujetando el tapón
con el dedo meñique de la mano dominante (en la que se sigue sosteniendo el asa),
flamear la boquilla del tubo, introducir el asa sumergiéndola en el medio, sacar el
asa y cerrar el tubo. Si la muestra procede del cuerpo humano como secreciones,
obtener la muestra con un cotonete o hisopo estéril.
4. Abrir la placa cogiéndola con la mano dominante. Posar el asa de siembra con el
inóculo y deslizar por la superficie con un movimiento de zigzag, cubriendo
alrededor de 1/3 de la misma.
5. Esterilizar el asa en la llama y dejar enfriar.
6. Girar la placa Petri 90º. Tocar con el asa el final de la superficie sembrada y
deslizar de nuevo con un movimiento en zigzag hasta cubrir con otro 1/3 de la
superficie.
7. Esterilizar el asa en la llama y dejar enfriar
8. Repetir el paso 6 y si desea, realizar una cuarta estría repitiendo los pasos 5 y 6
nuevamente.
9. Esterilizar el asa. Cerrar la placa e incubarla.

IMPORTANTE: Todo el procedimiento se debe llevar a cabo en las inmediaciones de la

llama. El objetivo es ir perdiendo la cantidad bacteriana presente para obtener finalmente
colonias aisladas, por lo que, en el primer zigzag, las líneas deberían estar muy juntas y
en los siguientes cada vez más separadas.

NOTA: Si lo que se desea es obtener gran cantidad de biomasa, realizar el zigzag por toda
la superficie del medio de cultivo.

6. RESULTADOS EXPERIMENTALES

Para la primera revisión que fue después de 24 horas que dejamos la caja Petri de agar
sangre donde se hizo un solo barrido, de muestra de orina, se pudo evidenciar que en la
zona de inoculación en forma de zigzag no se halló crecimiento de colonias bacterianas,
por tal motivo se llegó a la conclusión que se tuvo un resultado de un urocultivo negativo
a las 24 horas.

7. ANÁLISIS DE RESULTADOS

Es de suma importancia guiar a los estudiantes, e indicarles en indicaciones generales de

medidas de bioseguridad las cuales son de vital importancia para evitar accidentes en
dentro de este. Resulto factible y convencional orientar a los y las estudiantes en el
laboratorio para que así en futuras practicas se lo realice con mayor eficacia y cometiendo
un mínimo de errores.
 8. CONCLUSIONES

En este experimento no dio lugar a realizarse el cultivo en medio solido por la procedencia
de degradación de celulosa, la celulosa es el principal componente de la pared celular de
los vegetales y de algunos protoctistas. Nombres de las bacterias que degradan la celulosa
como Eubacterias, Cellulomonas, Mixobacterias: Cytophaga, Sporocytophaga,
Sorangium y filamentosos. La celulosa puede ser degradad por hidrólisis enzimática
utilizando celulasas procedentes del hongo T. Ressei.

9. ANEXOS

Figura. 1 barrido de muestra

 Figura. 2 desinfección de asa bacteriológica

10. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Barahona, J. (5 de Seotiembre de 2014). PCE IBERICA. Obtenido de PCE IBERICA:

https://www.pce-iberica.es/instrumentos-de-medida/equipos-laboratorio.htm

BiosLab. (11 de Enero de 2018). visavet. Obtenido de visavet:

https://www.visavet.es/es/bioslab/bioseguridad.php

Cuesta, A. (2016). FAO. Obtenido de Aseguramiento de calidad, medios de cultivo y reactivos,

normas ISO 17025:
http://www.fao.org/tempref/GI/Reserved/FTP_FaoRlc/old/prior/comagric/codex/rla3
013/pdf/aseg3.pdf

Facultad de Medicina CAS. (16 de Marzo de 2014). UDD. Obtenido de UDD:

https://medicina.udd.cl/sobre-la-facultad/definicion-de-bioseguridad/

Lara, H., Núñez, N., & P.Rodríguez. (2008). Bioseguridad en el laboratorio: medidas
importantes. Bioquimica , 4.

López, L., & Torres, C. (2006). Biologia. edu. Obtenido de Medios de Cultivo:
http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/tp4.pdf