Facultad de Ciencias de la Salud.

UNJBG Bioquímica Clínica I

Escuela Profesional de Farmacia y Bioquímica Mgr. Karla Nohely Ramos
Cáceres

PRACTICA N° 05

AMINOÁCIDOS Y PROTEÍNAS

I. OBJETIVOS

1) Identificar las propiedades de los aminoácidos y proteínas.

2) Reconocer las diferentes técnicas de identificación de aminoácidos y proteínas.

II. MARCO TEORICO

Las proteínas constituyen el grupo de compuestos más abundante en los seres vivos;
en algunos casos representan hasta 50% del peso total seco. Esta abundancia se debe
a que desempeñan diversas funciones:
1. Catálisis, en el caso de las enzimas.
2. Transporte, en el de la hemoglobina.
3. Almacenamiento, como sucede con la ferritina.
4. Movimiento (p. ej., actina y miosina).
5. Soporte mecánico (colágeno).
6. Protección inmunológica, a través de los anticuerpos.
7. Regulación de procesos biológicos y comunicación celular, como algunas
hormonas y sus receptores.
Las proteínas son macromoléculas de elevado peso molecular, porque su estructura
consta de cadenas de aminoácidos unidos por enlaces peptídicos entre el grupo alfa
carboxilo de un aminoácido y el grupo alfa amino
de otro.
Aunque en la naturaleza existen más de 300 aminoácidos, las proteínas sólo utilizan
20, de diferente tamaño, forma, carga, capacidad de formar puentes de hidrógeno
o enlaces disulfuro y reactividad química.

Los aminoácidos tienen la capacidad de formar dos tipos de isómeros, D y L, que

indican si el grupo amino se encuentra a la derecha o a la izquierda del carbono
quiral.

Las cuantiosas combinaciones que se pueden lograr con los 20 aminoácidos en las
cadenas polipeptídicas, otorgan gran diversidad a las funciones proteínicas.

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La presencia de grupos químicos ionizados en los aminoácidos permite que las
proteínas presenten características fisicoquímicas específicas en el microambiente
biológico; de allí la importancia de su estudio.

A varios aminoácidos se les denomina esenciales, porque el organismo carece de la

capacidad de sintetizarlos y, por tanto, es necesario ingerirlos en la dieta. Los
aminoácidos no esenciales son los que el cuerpo humano sí puede sintetizar.

El catabolismo deficiente de los aminoácidos lleva a su acumulación en el plasma y

su excreción excesiva en la orina; a esto se le conoce como aminoaciduria. En el
adulto normal, la excreción urinaria de aminoácidos es constante; en un periodo de
24 horas se excreta un promedio de 200 mg de nitrógeno alfa aminado. Existen
diversos trastornos en que aumenta la cantidad de aminoácidos en la orina.

III. MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS

 Seis tubos de ensayo

 Baño maría
 Solución de albúmina de huevo (clara de huevo diluida 1:50)
 Glicina 1%
 Ninhidrina a 0.2%
 Solución de fenilalanina 1%
 Reactivo de biuret
 Agua destilada

IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

EXPERIMENTO N°1 PRUEBA DE LA NINHIDRINA

FUNDAMENTO

La ninhidrina reacciona de manera específica con el grupo alfa amino de los

aminoácidos, sean libres o estén unidos mediante enlaces peptídicos.

La ninhidrina a pH de 4 a 8 es un oxidante muy fuerte y siempre reacciona con los

grupos alfa amino, liberando amonio; éste se condensa con la ninhidrina reducida y
con otra molécula de ninhidrina, formando un compuesto coloreado que va del azul
violeta al púrpura.

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Fig. 5-1. Reacción de la ninhidrina con los aminoácidos

PROCEDIMIENTO

1. Numerar tres tubos de ensayo de acuerdo con el cuadro 5-1.

2. En el tubo 1, colocar 1 ml de agua (blanco).
3. En el tubo 2, colocar 1 ml de solución de glicina (o cualquier otro
aminoácido) a 1%.
4. En el tubo 3, colocar 1 ml de solución de albúmina de huevo.
5. Agregar a cada tubo 10 gotas de solución de ninhidrina a 0.2%.
6. Mezclar y colocar en baño María durante 5 minutos.

Cuadro 5-1. Organización de los tubos de ensayo y su contenido

Reactivo
Tubo Agua Glicina 1% Albúmina de ninhidrina a
destilada huevo 0.2%
1-Blanco 1ml - - 10 gotas

2-Patrón - 1ml - 10 gotas

3- Problema - - 1ml 10 gotas

EXPERIMENTO N°2 PRUEBA DE BIURET

Existen varias pruebas para la cuantificación de proteínas en muestras biológicas.

La elección del método depende de varios factores; uno de ellos es la cantidad de
proteínas en la muestra. Por ejemplo, si la cantidad se encuentra en el orden de los
microgramos, es recomendable utilizar la prueba de Lowry. Por el contrario, en
muestras en que la cantidad es mayor; la prueba de elección es la de Biuret.

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FUNDAMENTO

La prueba de Biuret sirve para investigar la presencia de enlaces peptídicos, que

representan uniones específicas entre los aminoácidos. Se basa en la formación de
sales complejas de color violeta cuando se añade sulfato cúprico en solución
alcalina. El complejo está formado por enlaces de coordinación, en que los pares
electrónicos proceden de los grupos amino de los aminoácidos de la cadena
polipeptídica (Figura 5-2).

Figura 5-2. Reacción de Biuret. El reactivo de Biuret detecta la presencia de enlaces peptídicos.

PROCEDIMIENTO
1. Enumerar tres tubos de ensayo, de acuerdo con el cuadro 5-2.
2. En el tubo 1, colocar 2 ml de agua destilada (blanco).
3. En el tubo 2, colocar 2 ml de solución de fenilalanina (u otro aminoácido) a
1%.
4. En el tubo 3, colocar 2 ml de albúmina de huevo a 1%.
5. Añadir a cada tubo 2 ml del reactivo de Biuret.
6. Mezclar y observar.

Cuadro 5-2. Organización de los tubos de ensayo y su contenido

Reactivo
Tubo Agua Fenilalanina Albúmina de Biuret
destilada 1% huevo
1-Blanco 2 ml - - 2 ml

2-Patrón - 2 ml - 2 ml

3- Problema - - 2 ml 2 ml

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V. DISCUSIÓN DE RESULTADOS
Experimento 1
Describa que debe ocurrir en cada tubo de ensayo y responda:
¿Cuál de los tubos debe presentar coloración azul? Y porque

Reactivo
Tubo Agua Glicina 1% Albúmina de ninhidrina a
destilada huevo 0.2%
1-Blanco 1ml - - 10 gotas

2-Patrón - 1ml - 10 gotas

3- Problema - - 1ml 10 gotas

Tubo 1(Blanco): Agua destilada + Ninhidrina 0.2%:

En este primer experimento se presentará un apariencia traslucida o transparente
debido a que el agua destilada no presenta un grupo amino en especifico para poder
llevar acabo la reacción correspondiente.

Tubo 2(Patrón):Glicina 1% + Ninhidrina 0.2%:

En este caso se presentó una reacción de reducción de la ninhidrina, por acción del
grupo amino de la glicina ,lo que al final se manifestará un color azul oscuro ,típico
en la reacción con ninhidrina.

Tubo3(Problema):Albúmina de huevo + Ninhidrina 0.2%:

En este caso se también se presenta una reacción de reducción por parte de la
ninhidrina a causa de la albumina(ovoalbúmina) que es una proteína característica
en la clara del huevo ,esta reacción debe de dar como consecuencia una coloración
azul lechosa.

¿Cuál de los tubos debe presentar coloración azul? Y porque

Los tubos que deben de presentar una coloración azul vendrían a ser los tubos 2 y 3
debido a que estos tubos presentan proteínas tanto como glicina y
albumina(ovoalbúmina).
Esto con lleva a que la ninhidrina se reduzca al juntarse con las proteínas
mencionadas y muestre un color azul.

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Experimento 2
Describa que debe ocurrir en cada tubo de ensayo y responda:
¿Cuál de los tubos debe presentar coloración violeta? Y porque

Reactivo
Tubo Agua Fenilalanina Albúmina de Biuret
destilada 1% huevo
1-Blanco 2 ml - - 2 ml

2-Patrón - 2 ml - 2 ml

3- Problema - - 2 ml 2 ml

Tubo 1(Blanco): Agua destilada + R.Biuret:

En este primer experimento al mezclase estas son soluciones no se va a presentar

ningún tipo de reacción química debido a el agua destilada no presenta ningún
grupo amino y grupo carboxílico es por eso que es imposible que forme enlaces
peptídicos ,necesarios para utilizar el reactivo de biuret.Es por eso que el color que
se va a poder apreciar será transparente.

Tubo 2(Patrón):Glicina 1% + R.Biuret:

En este experimento no se va a presentar una coloración debido a que la glicina es
un solo aminoácido pequeño y por lo tanto no presenta enlaces peptídicos porque no
se encuentra unido a ningún otro aminoácido. Por lo tanto la solución no presentará
un cambio de color y seguirá siendo transparente.

Tubo3(Problema):Albúmina de huevo + R.Biuret:

En este experimento si se presenta una reacción debido a que la albumina
(ovoalbúmina) presente en el huevo esta formada por alrededor de 585 aminoacidos
conformando asi un gran grupo de enlaces peptídicos con los cuales el reactivo de
biuret va a actuar y brindará un color violeta.
¿Cuál de los tubos debe presentar coloración violeta? Y porque
En esta experiencia se pudo entender por medios teóricos que el tubo que
presentaría una coloración violeta seria el tubo 3 debido a que el reactivo de biuret
actúa con los enlaces peptídicos producto de la unión de los grupos amino y grupo
carboxílico de dos o más aminoácidos.

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VI. CUESTIONARIO

1. Explique que es el fundamento de la prueba de Lowry.

El método de Lowry (1951) es un método colorimétrico de valoración

cuantitativa de las proteínas. A la muestra se añade un reactivo que forma un
complejo coloreado con las proteínas, siendo la intensidad de color
proporcional a la concentración de proteínas, según la Ley de Lambert-Beer.

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Este método consta de dos etapas:

1) Los iones Cu2+, en medio alcalino, se unen a las proteínas formando
complejos con los átomos de nitrógeno de los enlaces peptídicos. Estos
complejos Cu2+-proteína tienen un color azul claro. Además, provocan el
desdoblamiento de la estructura tridimensional de la proteína, exponiéndose
los residuos fenólicos de tirosina que van a participar en la segunda
etapa de la reacción.
El Cu2+, se mantiene en solución alcalina en forma de su complejo
con tartrato.
2) La reducción, también en medio básico, del reactivo de Folin-Ciocalteau,
por los grupos fenólicos de los residuos de tirosina, presentes en la mayoría
de las proteínas, actuando el cobre como catalizador.
El principal constituyente del reactivo de Folin-Ciocalteau es el ácido
fosfomolibdotúngstico, de color amarillo, que al ser reducido por los grupos
fenólicos da lugar a un complejo de color azul intenso.

2. Investigue la composición del reactivo de biuret

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El Reactivo de Biuret indica la presencia de proteínas, péptidos cortos y otros
compuestos con dos o más enlaces peptídicos en sustancias de composición
desconocida.
Está hecho de hidróxido potásico (KOH) y sulfato cúprico (CuSO4), junto
con tartrato de sodio y potasio (KNaC4O6·4H2O). El reactivo cambia a violeta en
presencia de proteínas, y vira a rosa cuando se combina con polipéptidos de
cadena corta. El hidróxido de potasio no participa en la reacción, pero proporciona
el medio alcalino necesario para que tenga lugar.
Se usa normalmente en el ensayo de Biuret, un método colorimétrico que permite
determinar la concentración de proteínas de una muestra mediante espectroscopía
ultravioleta-visible a una longitud de onda de 540 nm (para detectar el ion Cu2+)

3. Mencione 10 aminoácidos esenciales

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4. Explique la importancia fisiológica de esos 10 aminoácidos mencionados

anteriormente.

Los aminoácidos esenciales son los que el organismo no puede sintetizar por
sí mismo así que necesita extraerlos de los alimentos, estos son necesarios
para el correcto funcionamiento de nuestro organismo.

5. Mencione las propiedades químicas de las proteínas

• Poseen un carbono asimétrico (excepto la glicina)
• Existen eniantómeros (R y L). En la naturaleza son L.
• Presentan actividad óptica Dextrógira (+) o Levógira(-)
• Son anfóteros

• Los grupos reactivos de importancia son: amino y carboxilo tanto terminales

como en las cadenas laterales, asi como sulfhidrilo, fenol, hidroxilo, tioéter,
imidazol y guanilo de las cadenas laterales.

6. Dibuje la estructura química de la fenilalanina y señale los grupos

funcionales de dicho aminoácido.

Fen
GRUPO AMINO ilala GRUPO
CARBOXILO

nin
CADENA R
a
10
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7. Mencione 1 patología relacionada con la fenilalanina

Fenilcetonuria:
 La Fenilcetonuria es una rara enfermedad hereditaria en la cual existe una
ausencia de fenilalanina hidroxilasa y por ello no se metaboliza
adecuadamente el aminoacido fenilalanina . Por lo tanto se acumula
excesivamente, se trata de una enfermedad infantil metabólica progresiva,
severa, que puede producir retraso mental si no se trata a tiempo .

8. Defina 2 trastornos en que aumenta la cantidad de aminoácidos en la

orina
Aminoaciduria
Es una cantidad anormal de aminoácidos en la orina. Los aminoácidos son
los pilares fundamentales de las proteínas en el cuerpo. Entre las
enfermedades del metabolismo que producen aminoaciduria se encuentran la
fenilcetonuria, la tirosinemia hereditaria, la alcaptonuria, la homocistinuria,
osteomalacia, hiperparatiroidismo, enfermedad de Canavan y la glicinuria.

Alcaptonuria
Un defecto en el gen HGD causa la alcaptonuria. Esta anomalía genética
hace que el cuerpo sea incapaz de descomponer en forma apropiada ciertos
aminoácidos (tirosina y fenilalanina). En consecuencia, una sustancia
llamada ácido homogentísico se acumula en la piel y otros tejidos
corporales.
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Enfermedad de Canavan
La enfermedad de Canavan (enfermedad de Canavan-Van Bogaert-
Bertrand), también conocida como degeneración esponjosa del
cerebro o deficiencia de aspartoacilasa, es un trastorno hereditario
del metabolismo del ácido aspártico que se caracteriza por la degeneración
progresiva de la materia blanca del cerebro (es una de las enfermedades
genéticas que se conocen con el nombre de leucodistrofia). Concretamente
se produce una degeneración de la mielina de la bicapa lipídica, que aísla
el axón de muchas neuronas. Es una de las enfermedades degenerativas del
cerebro más comunes en la infancia.

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VII. BIBLIOGRAFÍA

 Devlin TM. Bioquímica. Libro de texto con aplicaciones clínicas. 4a. ed.
Barcelona: Editorial Reverte; 2004.
 Montgomery R. Bioquímica: casos y texto. 6a. ed. Editorial Harcourt-Brace;
1998: cap.4.
 Baynes W. Jhon PhD. Bioquímica médica. 3 ed. Editoral ELSEVIER; 2011 cap
24.
 Villazón SA, Cárdenas CO, Villazón DO, Sierra UA Fluidos y electrólitos.
México: JGH Editores; 2000
 https://es.slideshare.net/melitoc1/determinacion-de-proteinas-por-el-metodo-de-
biuret-2
 http://biocoments.blogspot.com/2016/04/prueba-de-biuret-proteinas.html
 http://amitahealth.adam.com/content.aspx?
productId=118&pid=5&gid=003366#:~:text=Significado%20de%20los
%20resultados%20anormales,Cistinosis
 http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/4-Proteinas-Resumen-
Intersemestral-16-1_32160.pdf
 https://www.uv.es/tunon/pdf_doc/proteinas_09.pdf
 https://docero.es/doc/x1svx5
 file:///C:/Users/usuario/Desktop/Tarea%20pr%C3%A1ctica%202.pdf

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