UNIVERSIDAD NACIONAL

AUTÓNOMA DE MÉXICO
FACULTAD DE
ESTUDIOS SUPERIORES
ZARAGOZA.

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA
CELULAR Y DE LOS TEJIDOS I

INFORME:

“EXTRACCIÓN Y PURIFICACIÓN DE
ADN HUMANO”

GRUPO: 2401

INTEGRANTES:

Martínez López Mario Axel

Ángel de Jesús Radilla López
Torres López Karen Guadalupe
Estrella Velásquez Diana Yanelly

Hipótesis:
Se extraerá y aislara el ADN a partir de muestra de sangre que contiene células
nucleadas en el cual se encuentra el núcleo genómico ; mediante una serie de
procedimiento usando los reactivos Wizard Genomic como son ; La solución de lisis
celular , solución de lisis de núcleos , La solución de precipitación de proteínas , Solución
de RNasa , solución de rehidratación de ADN.

objetivo:

❖ Analizar el fundamento de la extracción de ADN.

❖ Extraer el ADN de una muestra de sangre humana utilizando el equipo de reactivos

“Wizard Genomic DNA purificactión”.

❖ Revisar las distintas aplicaciones que tiene la obtención de ADN.

Resultados:

1. Después de incubar la mezcla de lisis celular , centrifugar y desechar el

sobrenadante de esta , el ADN tiene la apariencia de una resina blanquizca y se
encuentra en el fondo del tubo.

2. Después agregó solución de lisis de núcleos se formó una solución viscosa en la

cual se podía observar grumos por eso se puso a incubar a una temperatura de
37°C.

3. se agregó solución de precipitado de proteínas se observó en la solución una

formación de pequeños grumos. Se centrifugó a 350 rpm se observó en el fondo
del tubo una pequeña plasta de un color café la cual son las proteínas en una
solución transparente en la que se encuentra el ADN.

4. Se transfirió el sobrenadante a un tubo que contenía isopropanol para que

precipitara el ADN lo cual se pudo observar al
formarse unas hebras que tenía la apariencia de hilos
de color blanco entrelazados unos con otros.

5. se centrifugó a 3500 rpm durante 1 min y se observó

en el fondo del tubo una pequeña plasta de color
blanco la cual era el ADN.

6. Después de quitar el sobrenadante y agregar etanol

para el secado del ADN se agregó solución
rehidratante y se pudo ver cómo el ADN recobraba
una apariencia en solución.
Análisis de Resultados:
El ADN se encuentra en las células de los seres vivos principalmente en el núcleo de
estas Para el objetivo de esta práctica se empleó una muestra de sangre en la cual se
encontraban las células sanguíneas conocidos como eritrocitos y leucocitos. Estos últimos
contienen núcleo por lo tanto son las células que se requieren para obtener el ADN. Sin
embargo, el ADN se encuentra rodeado y constituido por otras moléculas que se deben
separar para poder ser estudiado, por lo tanto, se llevan a cabo procesos de purificación
del mismo. Existen diferentes formas de llevar a cabo la purificación del ADN, aunque el
proceso en general es como sigue:

- Se deben romper las membranas de la célula lisándola. Las sales caotrópicas ayudan a
romper la estructura tridimensional de macromoléculas como las proteínas o los ácidos
nucleicos consiguiendo su desnaturalización. La adición de un detergente como el SDS es
necesaria a menudo para eliminar las membranas.

- Degradación de la fracción proteica asociada al ADN. Se deben separar las proteínas

con la finalidad de obtener solamente los ácidos nucleicos. Se consigue mediante la
adición de una proteasa. La fracción proteica puede precipitarse mejor con la ayuda de
sales como el acetato de amonio o el acetato sódico.

• Precipitación del ADN. El ADN es insoluble en alcohol, por lo que se puede precipitar
etanol frío o isopropanol y recuperar mediante una centrifugación. El alcohol del
sobrenadante se llevará las sales añadidas previamente.

• Lavado del pellet. Se realiza con alcohol frío volviendo a centrifugarse.

• Recuperación. El sedimento se puede resuspender en agua o tampón Tris tras ser

secado completamente.

- Finalmente, se comprueba la purificación del ADN aplicándole electroforesis de ADN.

Conclusiones:

Se pudo observar como el ADN cambiaba su estado físico durante el proceso de

extracción y purificación del mismo y también se pudo obtener una cantidad considerable
del ADN el cual se utilizará en su cuantificación y la electroforesis donde se podrá
comprobar el grado de pureza. Dado que en esta práctica todavía no se puede medir
cuantitativamente si los resultados finales son correctos en la extracción y purificación nos
guiamos conforme a sus cambios físicos del ADN y ya que se presentaron los mismos
cambios en el experimento conforme a lo que la teoría describe se puede decir que el
experimento se llevó a cabo con éxito lo cual se podrá rectificar con las siguientes
prácticas de cuantificación y electroforesis de ADN .

Bibliografía:

● ALJANABI, S. M. and 1. MARTÍNEZ. 1997. universal and rapid salt-

 extraction of high quality genomic DNA for PCR- based techniques.
Nucleic Acids Res. 25:4692-4693.

● CHEN, D. H. and P. C. RONALD. 1999. A rapid DNA minipreparation meted

suitable for AFLP and other PCR applications. Plant Mol Biol Rep.
17:53-57.