Revista Bistua

Facultad de Ciencias Basicas

Universidad de Pamplona
Pamplona-Colombia
Vol 8 (1),2010:71-77

Actividad larvicida del aceite esencial foliar de Eucaliptus globulus contra Aedes aegypti Linnaeus

Larvicidal activity of essential oil isolated from Colombian Eucalyptus globulus against Aedes
aegypti Linnaeus

Xiomara Yáñez Rueda1, Omar Giovanny Pérez2 ,Hernando Meza 1

1
Grupo de Investigación en Productos Verdes (GPV), Universidad de Pamplona, Pamplona, Norte
de Santander, Colombia. Correo electrónico: ipv@unipamplona.edu.co
2
Grupo de Investigación en Parasitología y Enfermedades Tropicales (GIEPATRI), Universidad de
Pamplona, Pamplona, Norte de Santander, Colombia.

RESUMEN
La actividad larvicida del aceite esencial (AE) de las hojas secas de Eucaliptus globulus cultivado en
la región de Chinácota, Norte de Santander (Colombia), contra la cepa de referencia Rockefeller
del mosquito Aedes aegypti Linnaeus fue evaluada a nivel de laboratorio, teniendo en cuenta la
metodología de la OMS. El AE fue obtenido por Hidrodestilación asistida por radiación de
Microondas (HDMO) y sus componentes mayoritarios fueron analizados por Cromatografía de
Gases de Alta Resolución (GCAR).
Las larvas de cuarto estadio de A. aegypti resultaron susceptibles frente al AE en concentraciones
de 100 ppm con una mortalidad del 100%. El análisis estadístico Probit-log de los bioensayos
permitió determinar el valor de la dosis diagnóstica en 0.0348% (348 ppm). La susceptibilidad de
las larvas fue asociada con los componentes volátiles mayoritarios el 1,8-Cineol o Eucaliptol y el α-
Pineno presentes en concentraciones del 82.38% y 8.69% respectivamente, seguidos de otros
componentes como Bourboneno, Limoneno y Nerol, los cuales se supone poseen un efecto
sinérgico. El AE de E. globulus se propone como una herramienta alternativa, ecológicamente
compatible, en la estrategia de lucha integrada que se lleva a cabo en nuestra región tropical, para
controlar este importante vector del dengue y la fiebre amarilla.
PALABRAS CLAVES: Eucaliptus globulus, Larvicida, Aedes aegypti, eucaliptol, pineno, limoneno.
*Para citar este articulo: Yáñez Rueda X, Giovanny Pérez O, Meza H . Actividad larvicida del aceite
esencial foliar de Eucaliptus globulus contra Aedes aegypti Linnaeus. Bistua 2010;8(1):71:77

+Autor para el envio de correspondencia y la solicitud de separatas: Grupo de Investigación en

Productos Verdes (GPV), Universidad de Pamplona, Pamplona, Norte de Santander, Colombia.
Correo electrónico: ipv@unipamplona.edu.co

ABSTRACT
The aim of this work was to study the larvicidal activity of E. globulus essential oil against Aedes
aegypti larvae. The essential oil was obtained by vapor extraction and their chemical composition
was determined by gas chromatography coupled to mass spectroscopy. Bioassays were run with
the essential oil pure and diluted. The results obtained showed that essential oil have larvicidal
action, causing an almost instantaneous mortality. Eucaliptol, α-Pinene, Limonene, Buorbuneno y
Nerol were identified as the active principle responsible for the larvicidal action of E. globulus
essential oil, causing 100% larval mortality at the lowest tested concentration of 100ppm. These
results suggest that the essential oil of E. globulus is promising as larvicide against A. aegypti and
could be useful in the search of newer, more selective, and biodegradable larvicidal natural
compounds to be used in official combat programs and at home.

KEY WORDS: Eucalyptus globulus, larvicidal activity, Aedes aegypti, Eucalyptol,

α-Pinene, Limonene.
INTRODUCCIÓN
La utilización de productos naturales como los aceites esenciales (AE) se ha incrementado en los
últimos tiempos, en las áreas alimenticia, farmacéutica y cosmética, como agentes conservantes,
antioxidantes, microbicidas e industriales en general. Colombia a pesar de su gran biodiversidad es
un importador a gran escala de los AE [3]. Muchas especies vegetales poseen gran actividad
biológica, no sólo contra los insectos, sino también contra otros organismos como ácaros,
roedores, nematodos, bacterias, virus y hongos [9].
La familia Myrtaceae está compuesta aproximadamente por 133 géneros y unas 3900 especies, las
cuales se distribuyen en su mayoría en las regiones tropicales y subtropicales de Australia y
Suramérica. El género Eucaliptus abarca unas 300 variedades [16]. Es uno de los árboles de más
rápido crecimiento en el mundo y alcanza a veces una altura de 100 m. Debido a que su enorme
sistema de raíces absorbe vastas cantidades de agua, se ha plantado en áreas pantanosas
infestadas de malaria para secar el suelo y purificar el aire. Tiene hojas altamente aromáticas de
color verde-azul en forma de corazón cuando son jóvenes, y, largas y lanceoladas en su madurez.
Cerca de 50 especies proveen un aceite valioso, con un aroma refrescante, penetrante y
estimulante con reminiscencias medicinales [2]. El componente clave de las hojas de eucalipto es
un aceite volátil conocido como Eucaliptol (1,8-Cineol) encontrado con la más alta proporción
(70% como mínimo) [4]. Especies de la familia Myrtaceae han demostrado acción larvicida de su
aceite esencial foliar contra A. aegypti agente transmisor del dengue clásico (DC), dengue
hemorrágico y la fiebre amarilla [1]. Se ha demostrado que un extracto de aceite de eucalipto
resulta eficaz en la protección contra distintos tipos de picaduras de insectos [8]. Como la mayoría
de las especies del género Eucaliptus, las principales investigaciones de esta planta han sido
dirigidas al estudio del AE de sus hojas, en la que también se observa la presencia de compuestos
polifenólicos, una ß-dicetona antioxidante de cadena larga [12] y terpenoides aromáticos
conocidos como los euglobales [4, 7]. De acuerdo con las reconocidas propiedades del Eucaliptol,
se especula si este componente mayoritario, podría ser directamente responsable de la
mortalidad de las larvas de A. aegypti o por el contrario requiere de la participación de los otros
componentes minoritarios. Muchos de estos componentes menores tienen propiedades irritantes
y son removidos por redestilación del aceite [7, 14].
El aumento de la resistencia al insecticida Abate (Temefós), considerado como el elemento clave
en los programas de control químico del vector ha propiciado la aparición de nuevas epidemias de
dengue y dengue hemorrágico en áreas tropicales, obligando a revisar la información sobre la
situación de cría y desarrollo de A. aegypti, para retomar iniciativas globales de control [11].
En este trabajo, se ha evaluado el AE obtenido de las hojas secas de E. globulus, cultivado en la
región de Chinácota (Norte de Santander), cuyos componentes químicos mayoritarios se
consideran responsables frente a la susceptibilidad de las larvas de A. aegypti del cuarto estadio
(cepa Rockefeller). Los resultados obtenidos son promisorios para desarrollar nuevos agentes
antivectoriales de aceptación ecológica como estrategia de lucha integrada contra el principal
vector del dengue y la fiebre amarilla.
MATERIALES Y MÉTODOS
Obtención del Aceite Esencial (AE)
Las hojas de E. globulus fueron recolectadas en la vereda Iscalá, del municipio de Chinácota, Norte
de Santander (Fotografía 1). El municipio de Chinácota se encuentra ubicado en el valle que forma
al bifurcarse poco antes de Pamplona, la Cordillera Oriental, a 7º 37’ Latitud Norte y 72º36’
Longitud Oeste, del Meridiano de Greenwich, tiene una extensión territorial de 166.50 Km2 y una
altitud promedio de 1175 msnm (metros sobre el nivel del mar). Se encuentra en los pisos
térmicos de templado a frío, con temperaturas que oscilan entre los 12ºC y los 22ºC
[http://www.chinacota.com].
La especie fue clasificada por el botánico Luis Roberto Sánchez, director del Herbario Regional
Catatumbo-Sarare, de la Universidad de Pamplona. Las hojas se separaron manualmente de los
tallos y se secaron al aire y a la sombra por 15 días. El AE fue extraído a partir de 300 gramos de
material mediante el método de Hidrodestilación asistida por Microondas (HDMO), para lo cual se
utilizó un microondas marca Samsumg, por 40 minutos y potencia del 70%. El rendimiento de AE
se midió como ml de AE por 100g de hojas secas.

FOTOGRAFÍA 1. Zona de recolección del eucalipto, en la Vereda Iscalá (Chinácota). (Fuente Los
Autores).
Análisis Químico del Aceite Esencial (AE)
La composición química de los aceites se determinó por la técnica de Cromatografía de Gases de
Alta Resolución. Se tomaron 30 µl del aceite esencial y se disolvieron en 1 ml de diclorometano.
En cada equipo, se inyectó 1 µl de la muestra anterior. Se estandarizaron las variables del método,
como temperatura inicial y temperatura del horno. Se corrieron las muestras en las columnas HP-5
e INNOWAX, con el aceite esencial y con los patrones de hidrocarburos C-7 a C-32, para calcular
los índices de Kováts (IK). Se confirmaron los componentes mayoritarios por espectrometría de
masas, de acuerdo con la base de datos NYST- 2005.

Cepa Rockefeller de A. aegypti

Se utilizaron larvas de la cepa de referencia Rockefeller considerada altamente susceptible, la cual
ha sido mantenida y manipulada en el Laboratorio del Instituto de Salud de Norte de Santander,
en Cúcuta (Colombia) por 30 años, sin presión de selección con insecticidas, por lo tanto, no ha
sido expuesta, ni ha estado en contacto con otras especies, ni ambientes. Se considera una cepa
de alta confiabilidad para la experimentación con insecticidas y potenciales plaguicidas (Fotografía
2).

Bioensayos
Teniendo en cuenta la metodología de la OMS se investigó la susceptibilidad de larvas de Aedes
aegypti de cuarto estadio frente al AE de E. globulus. Partiendo de una concentración inicial de
200 ppm del AE, la cual causa el 100 % de mortalidad de las larvas, se realizaron los bioensayos
preliminares utilizando 2 réplicas por cada concentración de AE con los controles
correspondientes. Las concentraciones finales probadas para E. globulus fueron de 5 ppm, 15
ppm, 25 ppm, 50 ppm, 75 ppm y 100 ppm, con las que se realizaron bioensayos que contaron con
5 réplicas por concentración y sus respectivos controles. Los controles fueron tratados siguiendo la
misma metodología, pero utilizando acetona como solvente. Posteriormente, se aplicó a los
resultados el análisis estadístico Probit-log5 (concentración vs .mortalidad) para establecer la dosis
diagnóstica del AE y las Concentraciones Letales del mismo (CL50 y CL99) [15].
FOTOGRAFÍA 2. Larvas entre tercer y cuarto estadio de la cepa Rockefeller de Aedes aegypti.
(Fuente: Los autores).
Discusión de resultados y conclusiones

El rendimiento de AE obtenido para las hojas secas de E. globulus fue del 1,33%. Por
Cromatografía de Gases se identificaron más de una decena de componentes terpénicos como se
muestra en el perfil cromatográfico del AE en la Figura 1. En la Tabla 1, se observan los
componentes volátiles mayoritarios analizados. El 1,8-Cineol o Eucaliptol aparece como el
componente de mayor proporción con 82.38%, seguido de α–Pineno con 8.69%, Bourboneno con
2.25%, Limoneno con 1.35% y Nerol con1.22%.
Las pruebas realizadas con concentraciones de 100 y 75 ppm del AE de E. globulus mostraron el
100% y el 73.2% respectivamente de mortalidad de las larvas de A. aegypti, según se observa en la
Tabla 2. Con las concentraciones de 50, 25, 15 y 5 ppm el nivel de mortalidad resultó menor al
50%. En general, se observó que la concentración de los aceites y la mortalidad mantienen una
tendencia a la proporcionalidad, lo que indica que a medida que decrece la concentración de AE,
se observa la disminución en el porcentaje de mortalidad de las larvas.
Los resultados del análisis estadístico Probit-log de los bioensayos para determinar la actividad
larvicida del AE, se muestran en la Tabla 3 y permitieron establecer la dosis diagnóstica de
348.9426 ppm (0.0348%) para el AE de E. globulus contra las larvas de A. aegypti Linn., junto con
los valores de las concentraciones letales CL50= 58.566655 % y CL99= 174.47130 %.
Los anteriores valores se aproximaron a los determinados para las mirtáceas cubanas Eugenia
melanadenia y Psidium rotundatum, las cuales también presentaron efecto larvicida sobre A.
aegypti. Los AE de estas especies vegetales también poseen el 1,8-Cineol o Eucaliptol, el Limoneno
y el Pineno, entre sus componentes mayoritarios. Las dosis diagnósticas para los aceites esenciales
de estas 2 plantas fueron de 0,022% (220 ppm) para E. melanadenia y de 0,0164 % (164 ppm)
para P. rotundatum [1].
De igual manera, los valores se acercaron a los determinados para el AE de Curcuma aromatica
con alta actividad contra larvas de cuarto estadio de A. aegypti con valores de CL50 de 57.15 ppm
[6] y para la canela indígena Cinnamomum osmophloeum Kaneh y otros aceites esenciales con
excelente efecto inhibitorio contra larvas de cuarto estadio de variedades del mosquito Aedes,
cuyos valores de CL 50 estuvieron entre 36-44 ppm, y la CL 90 fue de 79-85 ppm respectivamente
[17, 18].
El presente estudio permite avanzar en la búsqueda de una alternativa natural para el control del
vector causante de graves dolencias como la fiebre amarilla y del dengue en nuestra región
tropical y ofrece una referencia para futuras investigaciones en cuanto a la susceptibilidad de las
poblaciones del mosquito y otras plagas similares, frente a los AE de mirtáceas nativas.
GRÁFICA 1. Perfil cromatográfico del aceite esencial de Eucaliptus globulus recolectado en la
vereda Iscalá del municipio de Chinácota (Norte de Santander).
Tabla 1. Componentes volátiles mayoritarios del Aceite Esencial (AE) de Eucalyptus globulus de la
vereda Iscalá del municipio de Chinácota (Norte de Santander).

Pico Concentración IK IK Compuestoc

relativa Exp.a Teóricob
(%)

1 8.69 936 936 α–Pineno

2 0.46 979 980 β–Mirceno
3 0.45 990 988 2 -Octaneno
4 1.35 1031 1031 Limoneno
5 82,38 1037 1034 1,8–Cineol
6 0.25 1213 1212 Dihidrocarveol
7 1.22 1229 1228 Nerol
8 0,38 1282 1282 γ-Terpineno
9 0,36 1342 1340 Acetato de Terpinen-4-ol
10 0,25 1356 1356 Eugenol
11 0,54 1374 1374 Isobutirato de Linalol
12 2,25 1386 1384 Bourboneno
13 0,57 1396 1395 Trimenal
14 0,41 1410 1409 Cedreno

a
Índice de Kováts experimental establecido por Cromatografía de Gases de Alta Resolución (CGAR)
con Detector FID, en columna HP-5.
b
Adams, Robert (2005) Identification of essential oil components by gas chromatography/mass
spectroscopy. Allured Publishing Corporation: Carol Stream Illinois, USA. 469p.
c
Identificado por Cromatografía de Gases con Detector Selectivo de Masas.
Tabla 2. Concentración del AE de Eucaliptus globulus y % de mortalidad de los individuos.

Concentración (ppm) Mortalidad (%)

100 100

75 73.2

50 36.8

25 29.5

15 11

5 1
TABLA 3. Análisis Probit-log de bioensayos de laboratorio de larvas de A. aegypti expuestas a
diferentes concentraciones del aceite esencial foliar de E. globulus.

CL Nivel de confianza Rango

2 = % 22.34171 .95 9.6675 < CL < 51.52625

50 = % 58.566655 .95 42.98471 < CL < 79.78727
90 = % 106.85560 .95 64.00238 < CL < 178.59300
95 = % 126.7231 .95 68.07637 < CL < 236.22680
98 = % 153.52640 .95 72.39598 < CL < 326.16060
99 = % 174.47130 .95 75.21402 < CL < 405.54580

Varianza de CL50 = 4.034856 – 05

Heterogeneidad = 27.12532 con 2 df.
Dosis diagnóstica = 348.9426 ppm (0.0348%).
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