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especimenes visiblemente hemolizados ya que se conoce que estos producen
Prueba por aglutinación de látex en lámina para la
determinación cualitativa y semi - cuantitativa de Anti-DNP
asociado con Lupus Eritematoso Sistémico en suero
Humano.
Referencia Presentación
s-LE/010 Estuche x 50 pruebas
s-LE/012 Estuche x 100 pruebas
INTRODUCCION
En el Lupus Eritematoso Sistémico (s-LE), se producen anticuerpos dirigidos
contra el ácido desoxirribonucleico nativo y otros componentes nucleares. Está
clasificado como el prototipo de la enfermedad autoinmune severa, involucrando
variedad de tejidos,
asociado con un amplio rango de anticuerpos en circulación. Las características
de la enfermedad son anticuerpos en contra el DNA nativo, nucleoproteínas,
DNA denaturado y otros antígenos nucleares extractables. El Lupus Eritematoso
Sistémico (S-LE) también afecta un amplio rango de tejidos. Los órganos
afectados son en decreciente incidencia, articulaciones, piel, riñones, sistema
nervioso central, corazón y pulmones. Otra característica importante es la
elevada frecuencia de la enfermedad en mujeres, la cual es aproximadamente de
3 – 4 veces más frecuente que en los hombres. La alta incidencia de s-LE entre
gemelos monocigotos (70-80%) y familiares cercanos (5-10%) indica que s-LE
puede ser una enfermedad hereditaria.
Los anticuerpos Anti-DNP son demostrados por un número de procedimientos
de laboratorio el cual incluye la prueba de Célula LE, inmunofluorescencia y
aglutinación de partículas de látex recubiertas. En la prueba s – LE de
Plasmatec, las partículas son ligadas con proteína desoxiribonucleica nativa
(DNP) por medio de una matriz de albúmina intermediaria. Estas partículas
revestidas combinadas con anticuerpos Anti DNP en suero producirán una
aglutinación visible.
PRESENTACION DEL ESTUCHE
1. Reactivo de Látex suficiente para 50/100 pruebas en lamina (Etiqueta
amarilla) Suspensión de partículas de látex de poli estireno recubiertas con
extracto de DNP en un buffer salino.
2. Control Positivo (etiqueta rojal) Suero humano estabilizado, positivo para
s-LE.
3. Control Negativo (etiqueta azul) Suero Humano estabilizado, negativo para
s-LE.
4. Lamina plástica reutilizable para prueba.
5. Pipetas y mezcladores desechables.
PRECAUCIONES
Para uso de Diagnostico In Vitro
El suero control SLE ha sido probado y encontrado como no reactivo para el
antígeno de superficie de hepatitis B (HbsAg) y HTLV-111; sin embargo, todos
los productos de suero humanos y los especimenes de pacientes deben ser
considerados como potencialmente peligrosos y deben ser manejados de la
misma manera que el agente infeccioso. Los reactivos contienen azida de sodio.
Este agente es conocido como reactivo con el cobre y el plomo en desagües y
puede formar de ácidos explosivos. Estos materiales deben ser eliminados con
grandes cantidades de agua para prevenir la acumulación de ácidos.
ALMACENAMIENTO
Los reactivos son estables entre 2-8 C hasta la fecha de expiración que indica la
etiqueta. NO CONGELAR.
REQUERIMIENTOS ADICIONALES
Reloj temporizador
Tubos de Ensayo (Titulación solamente)
Pipetas Serológicas (Titulación Solamente)
Salina Fisiológica (0.9% NaCl) (Titulación Solamente)
PREPARACION DE LA MUESTRA
Se recomienda que sólo suero sea utilizado. No inactive con calor el suero o
los controles. Evite descongelar los especimenes repetidamente. No utilice
resultados falsos positivos.
Estabilidad de la muestra: El suero es estable por 48 horas cuando es
almacenado entre 2-8 C
Sustancias que interfieren: Utilice solamente una lamina limpia y seca, lavada
previamente con poco detergente y enjuagado con agua destilada.
Los pacientes con Artritis Reumatoide, Síndrome de Sjogren, enfermedad mixta
de Tejido Conectivo., Esclerosis Sistémica Progresiva y L.E discoide, pueden
mostrar reactividad cuando se ejecute la prueba. Muchos medicamentos de
amplio uso, pueden de hecho inducir a un síndrome de Lupus Eritematoso
sistémico. Hidralazina, Isoniazida y procainamida y un numero de anti
convulsionantes pueden entrar en esta categoría.
Los reactivos Látex deben ser agitados vigorosamente por 30 segundos antes de
su uso con el propósito de evitar la agregación de las partículas de látex.
PROCEDIMIENTO
1. Lleve todos los reactivos a temperatura ambiente y mezcle suavemente
antes de usar.
2. Coloque en las divisiones separadas (celdas) de la misma lamina:
Suero 1 gota
Control Positivo (etiqueta roja) 1 gota
Control Negativo (etiqueta azul) 1 gota
3. Adicione una gota de reactivo látex sLE a cada célula
4. Mezcle con el extremo plano de la pipeta / mezcle y esparza el fluido
regularmente sobre cada celda.
5. Incline la lamina de atrás hacia adelante suavemente por 3 minutos
mientras observa la aglutinación
DETERMINACION SEMI CUANTITATIVA
Prepare las diluciones para los especimenes como se muestra a continuación:
Dilución:
1:2 (1 parte suero + 1 parte salina)
1:4 (1 parte suero + 3 parte salina)
1:8 (1 parte suero + 7 parte salina)
1:16 (1 parte suero + 15 parte salina)
1:32 (1 parte suero + 31 parte salina)
1:64 (1 parte suero + 63 parte salina)
Proceda como el la prueba de screening (cualitativa).
El titulo de anticuerpos de s LE en suero es la dilución mas alta de suero que
muestra aglutinación del reactivo látex, 3 minutos después de ser mezclados.
CONTROL DE CALIDAD: Los controles positivos y negativos deben ser
corridos con cada serie y los resultados comparados con los especimenes del
paciente.
RESULTADOS
Algún grado de aglutinación visible dentro de 3 minutos se interpretará como
positivo. La prueba s-LE es considerada negativa cuando no hay diferencia entre
la aglutinación del espécimen y el control negativo.
CARACTERISTICAS DE INTERPRETACION
La prueba de Látex s-LE fue comparada con una Prueba de Células LE
estándar, así como también con una prueba de fluorescencia ANA. Las tres
pruebas mostraron una concordancia excelente en el suero de pacientes
clínicamente activos para sLE: s-LE látex 82% positivo, preparación de Células
LE 86% positivo, prueba de ANA 82% positivo. Sueros de pacientes
clínicamente inactivos para s-LE: reacciones positivas: s-LE látex 19%, prueba
ANA 71%. Pacientes con enfermedad de Tejido Conectivo no mostraron
reacciones positivas con la prueba S-LE látex, pero 17% y 50% de reacciones
positivas con preparación de Células LE y la prueba de ANA respectivamente.
Estudios adicionales publicados han confirmado la sensibilidad y la
especificidad de las pruebas s-LE látex
REFERENCIAS
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