UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAM MARTÍN –T

FACULTAD DE ECOLOGÍA
DEPARTAMENTO ACADEMICO DE CIENCIAS AMBIENTALES Y SANITARIOS
E, P. INGENIERIA SANITARIA
MOYOBAMBA
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Trabajo grupal
Tema:

EL PROCESO ANALITICO, PREPARACION DE LA

MUESTRA, EL ANÁLISIS QUIMICO, CURVAS DE
CALIBRADO
Curso:

QUÍMICA ANALÍTICA

Docente:

Ing. Dr. Yrwin Francisco Azabache Liza

Estudiantes:

Giancarlos García navarro

Gonzales Bances Kevin Alexis

Chamaya Montenegro Wilson

Ciclo:

III

Semestre Académico 2020 – I, Moyobamba, 24 de agosto

1. EL PROCESO ANALÍTICO GENERAL.

El proceso analítico es la metodología propia del trabajo analítico consistente en un conjunto

de operaciones sucesivas realizadas para solucionar un determinado problema analítico.

A la hora de realizar un análisis es muy importante tener clara la información que se necesita
para resolver el problema analítico planteado.

Muestra algunos de los factores a tener en cuenta a la hora de seleccionar el proceso analítico
más adecuado para la resolución de un problema analítico, para lo que habría que dar
respuesta a varias preguntas, tales como ¿qué tenemos que analizar y por qué?, ¿quién va a
tomar la muestra?, ¿dónde se va a tomar? ¿cómo van a influir los resultados?, etc. Así pues,
las respuestas a estas preguntas serán posibles si el problema se ha definido de manera clara
y minuciosa y se evitaría una cantidad de trabajo no necesario con el que se obtendrían datos
sin importancia (Grado, s.f.).

Etapas del proceso analítico

El proceso analítico general requiere de una serie de etapas que se realizan de forma
sucesiva y que se encuentran esquematizadas
2. PREPARACIÓN DE MUESTRA

La preparación de la muestra se puede definir como la etapa del proceso analítico en la que
se realizan todas aquellas operaciones necesarias para convertir la muestra en una forma
adecuada para el análisis, comprendiendo todas las transformaciones que se realizan desde
que se obtiene la muestra de laboratorio hasta que se llega a la etapa de medida del analito o
los analitos de interés.

La preparación de la muestra tiene como objetivos generales los siguientes:

o Hacer el analito accesible al análisis

o Obtener el analito a una concentración adecuada.
o Eliminar interferencias
o Proteger el instrumento final de medida
o Llevar un porcentaje de analitos tan alto como sea posible desde la muestra original al
paso de determinación.
o Obtener los analitos en el estado de agregación más adecuado para el procedimiento
instrumental a utilizar, asegurando que los analitos permanecen en su estado original
o están totalmente convertidos en una especie estable.
o Llevar sólo algunos de los componentes de la matriz de la muestr a original al paso de
determinación.
o Obtener el analito a una concentración apropiada para la detección y medida.
o No añadir ninguna nueva interferencia.

Una de las etapas del proceso analítico general es la de las Operaciones Previas, que a su
vez está constituida por dos etapas bien definidas: Muestreo y Preparación de la Muestra. se
encuentran representadas algunas de las operaciones previas a realizar para preparar la
muestra desde que se ha realizado el muestreo hasta obtener la muestra de labor atorio que
se lleva al instrumento de medida (Grado, s.f.).

Hay que tener en cuenta que en este esquema no están representadas todas las operaciones
que se utilizan para llevar a cabo la preparación de la muestra y que no todas las muestras
tienen que sufrir todos estos procesos secuencialmente hasta llegar al instrumento.

Esquema en el que se muestran algunas de las operaciones previas

Las operaciones a realizar para preparar la muestra van a depender del tipo de análisis
implicado, del estado de agregación, naturaleza y disponibilidad de la muestra, y de la
concentración y número de analitos a determinar, por lo que pueden ser muy numerosas y
diversas.

Dentro de las posibles operaciones de preparación de muestras algunos autores (Cámara et

al., 2004) diferencian dos fases, la primera de ellas correspondiente a una serie de tratamientos
16 previos de la muestra, y la segunda correspondiente a la propia preparación de la muestra
para la medida según el tipo de analito orgánico o inorgánico.

Pretratamiento de la muestra

Se conoce por pretratamiento a la etapa que hay entre la toma y el tratamiento de la muestra,
donde se van a realizar operaciones físicas sobre la muestra antes de su análisis, por otro
lado, se entiende como tratamiento a la etapa en la cual la muestra es sometida a procesos
químicos y físicos para prepararla para el posterior análisis.

Cuando la muestra llega al laboratorio el analista realiza una serie de tratamientos previos
como son el submuestreo para seleccionar una porción (submuestra) adecuada, que
represente a la muestra; o el almacenamiento, que debe realizarse de forma adecuada según
el tipo de muestra, aquellas muestras que se degraden rápidamente tienen que analizarse lo
más pronto posible, esto a veces no puede ser y hay que recurrir al almacenamiento en
condiciones determinadas o a la adición de conservantes, etc.

Para conservar la muestra completa e íntegra hay que usar diversas sustancias preservantes,
el cómo deben conservarse va a depender de las características de las muestras. Se pueden
utilizar ácidos y bases para el control del pH, el almacenamiento de la muestra a baja
temperatura (4ºC), además de la utilización de envases en color topacio y guardados en la
oscuridad.

La conservación de la muestra siempre tiene un aspecto cuantitativo asociado a la obtención

de resultados reproducibles.

Parámetros como el pH, la ausencia de cloro residual, o la temperatura de la muestra, tienen

que evaluarse en el lugar de muestreo y finalmente en el laboratorio. Hay que tener cuidado
ante la posible contaminación de la muestra al introducir alguna sonda de medida,
generalmente basadas en la toma de dos muestras idénticas para realizar en una de ellas la
medida de los parámetros de conservación.

Además, otro aspecto fundamental es el tiempo que pasa entre la toma de muestra y el análisis
ya que las sustancias a analizar pueden sufrir pérdidas o alteraciones, aunque se apliquen las
técnicas de conservación y almacenamiento adecuadas. Esta es una etapa importante ya que
en ella pueden variar la concentración de los analitos de interés debido a la temperatura,
manipulación, exposición a la luz, agitación, etc.

Las muestras hay que tratarla de manera diferente debido a la múltiple variedad de mue stras
y matrices Cada existentes, que hacen que sea imposible la descripción absoluta de los
diversos pretratamientos.

Los procesos de secado de la muestra, pulverización, homogeneización, y también posteriores

submuestreos, son muy generales para las muestras sólidas.

Entre ellas tenemos:

1. Secado: la presencia de agua en una muestra sólida puede producir alteraciones para
el análisis de compuestos inorgánicos y orgánicos, por ello es importante el buen
secado de la muestra y así evitar también reacciones de hidrólisis que producirían
 perdidas del analito. El secado se realiza antes de la trituración y homogeneización y
dos importantes caminos a la hora del secado son el secado en estufa y la liofilización.

2. Secado en estufa: se pone la muestra bien extendida en un vidrio de reloj, y se mete

en el horno a 100ºC durante un tiempo determinado, hay que conocer bien la
temperatura ya que temperaturas muy altas pueden producir descomposición de la
muestra y si la temperatura es baja puede producir un aumento del tiempo de la
muestra en la estufa.

3. Liofilización: es un proceso de secado en frío y caro, pero recomendable cuando hay

riesgo de pérdida de analito con el calentamiento. En la etapa primera se congela la
muestra con nitrógeno líquido para después hacerle el vacío, logrando que el hielo pase
a vapor de agua y es eliminado.

4. Trituración y homogeneización: se recomienda disminuir el tamaño de la muestra ya

que cuanto menor sea el tamaño de partícula menor será el error que se cometa en el
análisis, ya que las muestras finamente divididas son más homogéneas, pueden
mezclarse y submuestrearse con mayor precisión y exactitud, pueden disolverse y
extraerse más fácilmente porque presentan mayor superficie expuesta al disolvente.
En el mercado existen numerosos equipos que son utilizados para una adecuada
trituración, se puede encontrar, por tanto: trituradores p ara muestras duras (de
mandíbula, de rodillo, de cono, molinos de bolas, de anillos…) y trituradores para
muestras blandas.

Tratamiento de la muestra Los procesos de tratamiento de la muestra se pueden clasificar en

dos grupos según la naturaleza química del analito, inorgánica u orgánica.

3. EL ANALISIS QUÍMICO

La finalidad de un análisis químico es conocer la composición de la muestra que se esté

estudiando. A lo largo de los años se han desarrollado muchas técnicas y procedimientos de
análisis diferentes, desde la destilación tradicional hasta la cromatografía moderna. El tipo y
número de operaciones que se realicen dependerá del tipo de análisis que necesitemos.
Resulta conveniente antes de adentrarnos en el Análisis Químico definir los término s más
frecuentemente empleados en este ámbito:

Se denomina muestra a una parte representativa de la materia objeto de análisis, siendo una
alícuota de la muestra una porción o fracción de la misma. Se llama analito a la especie química
objeto del análisis. La matriz de la muestra será el conjunto de todas aquellas especies
químicas que acompañan al analito en la muestra. La técnica analítica es el medio utilizado
para llevar a cabo el análisis químico, mientras que el método analítico es un concepto más
amplio pues no sólo incluye a la o las técnicas analíticas empleadas en un análisis sino también
todas las operaciones implicadas hasta la consecución del resultado final.

Rara vez un método de análisis es específico, en el mejor de los casos será selectivo. Por esta
razón es muy común la aparición de especies interferentes durante Análisis Químico Grado
Bioquímica Curso 2011/12 4 un análisis, estas especies químicas influyen en la respuesta del
analito, pudiendo disminuir dicha respuesta (interferencia negat iva) o incrementarla
(interferencia positiva). El enmascaramiento es una vía comúnmente empleada para eliminar
interferencias, mediante la cual la especie interferente es transformada en otra especie química
que no altera la respuesta del analito.

La mayor parte de los métodos analíticos son relativos, es decir el contenido de analito en la
muestra se obtiene a través de un patrón de referencia. Se denomina disolución patrón o
estándar a una disolución de concentración exactamente conocida. La gráfica que representa
la respuesta analítica en función de la concentración del analito correspondiente se llama curva
de calibrado o curva estándar.

Clasificación de los métodos de análisis

Para llevar a cabo un análisis cuantitativo hay que llevar a cabo dos mediciones:

➢ La primera medida es el peso o volumen de la muestra bajo análisis.

➢ La segunda medida es una cantidad que es proporcional a la cantidad de analito
presente en la muestra.

Los métodos analíticos se clasifican en función de la naturaleza de esta última medida, en

este sentido hablamos de:
 A. Métodos Clásicos o Químicos:
• En los métodos gravimétricos se determina la masa de analito o de algún
compuesto relacionado químicamente con él.
• En los métodos volumétricos se mide el volumen de una disolución de
concentración conocida que contiene la cantidad de reactivo necesaria para
reaccionar completamente con el analito.

B. Métodos Instrumentales:
• Los métodos electroanalíticos conllevan la medida de alguna propiedad
eléctrica como potencial, intensidad de corriente, resistencia o cantidad de
electricidad.
• Los métodos espectrofotométricos se basan en la medida de alguna propiedad
de la radiación electromagnética tras la interacción con los átomos o moléculas
de analito; o bien la producción de radiación Análisis Químico Grado Bioquímica
Curso 2011/12 5 electromagnética a partir del analito cuando la materia ha sido
sometida a algún tipo de excitación.
• Existe un grupo misceláneo de métodos que implican la medida de la relación
carga-masa, velocidad de desintegración radioactiva, calor de reacción,
conductividad térmica, actividad óptica o índice de refracción.

C. Métodos de separación: cuando se desarrollaron estos métodos su finalidad inicial

era la eliminación de interferentes antes de proceder a aplicar la técnica analítica
seleccionada. En la actualidad, existen métodos de separación que son métodos de
análisis en sí mismos, como por ejemplo la cromatografía.

4. CURVAS DE CALIBRADO

Un procedimiento analítico muy utilizado en análisis cuantitativo es el llamado de calibración

que implica la construcción de una “curva de calibración”. Una curva de calibración es la
representación gráfica de una señal que se mide en función de la concentración de un analito.

La calibración incluye la selección de un modelo para estimar los parámetros que permitan
determinar la linealidad de esa curva. y, en consecuencia, la capacidad de un método
analítico para obtener resultados que sean directamente proporcionales a la concentración
de un compuesto en una muestra, dentro de un determinado intervalo de trabajo.
De esta forma, una curva de calibración es la representación gráfica que relaciona una señal
instrumental en función de la concentración de un analito y define un intervalo de trabajo en
el cual, los resultados a informar tienen una precisión y exactitud conocida que ha sido
documentada en la validación de cada método.
En el procedimiento se compara una propiedad del analito con la de estándares de
concentración conocida del mismo analito (o de algún otro con propiedades muy similares a
éste). Para realizar la comparación se requiere utilizar métodos y equipos apropiados para la
resolución del problema de acuerdo al analito que se desee determinar (SSE, 2017).

La etapa de calibración analítica se realiza mediante un modelo de línea recta queconsiste en

encontrar la recta de calibrado que mejor ajuste a una serie de “n” puntos experimentales,
donde cada punto se encuentra definido por una variable “x” (variable independiente,
generalmente concentración del analito de interés) y una variable “y” (variable dependiente,
generalmente respuesta instrumental).

La recta de calibrado se encuentra definida por una ordenada al origen (b) y una pendiente
(m), mediante la ecuación y = mx + b.

A partir de la curva de calibración (conjunto de concentraciones que describen el intervalo en

el cual se deberá cuantificar el compuesto por analizar) y a fin de asegurar que la recta
encontrada con los puntos experimentales se ajuste correctamente al modelo matemático de
la ecuación se calculan los valores de la ordenada al origen, la pendiente y el coeficiente de
determinación (r2).

Por tener una buena exactitud y confiabilidad estadística, el método más empleado para
encontrar los parámetros de la curva de calibrado es el método de los mínimos cuadrados
Este método busca la recta del calibrado que haga que la suma de los cuadrados de las
distancias verticales entre cada punto experimental y la rect de calibrado sea mínima o tienda
a cero. A la distancia vertical entre cada punto experimental y la recta de calibrado se le
conoce como residual. En forma gráfica se representa como (SSE, 2017):
Fig. 1 Curva de calibración con n = 5

De acuerdo a este método, las expresiones matemáticas para calcular la pendiente (m) y la
ordenada al origen (b), así como el coeficiente de determinación (r 2) son

n xy x y n x2
m
PENDIENTE
( x)2

y
b
ORDENADA AL ORIGEN
m xn

2 (n( xy) ( x)( y))2

COEFICIENTE DE r
DETERMINACIÓN (n( x2) ( x)2)(n( y2) ( y)2)

En la práctica para construir la curva de calibración se utilizan disoluciones que contienen

concentraciones conocidas de analito, llamadas disoluciones patrón o estándar.
Los estándares o disoluciones patrón para construir la recta de calibrado deben ser
preparadas en forma independiente, a partir de una o varias soluciones madre; el número
de puntos a escoger dependerá del uso que se dé a la recta de calibrado.

Si bien con dos puntos se puede construir una curva, estadísticamente se requieren por los
menos tres para que la curva sea confiable; este número se suele aplicar a métodos de
rutina perfectamente establecidos y validados (proceso por el cual se demuestra, por
estudios de laboratorio, que la capacidad del método satisface los requisitos para la
aplicación analítica deseada).

Sin embargo, si el método está en una etapa de desarrollo, el número de puntos mínimo
será de cinco o seis para que la variabilidad sea mínima y el intervalo lineal sea suficiente.
Hay que considerar que un aumento en el número de puntos experimentales implicara
mayor fiabilidad en la recta de calibrado. La verificación del comportamiento de un analito
mediante una curva de calibración requiere un mínimo de cinco puntos para un intervalo de
confianza del 95 % y de ocho puntos para uno del 99 %.

Cabe mencionar que en la práctica es muy importante efectuar la medida del “blanco” 4
Se llaman disoluciones blanco o simplemente blancos a las disoluciones que contienen
todos los reactivos y disolventes usados en el análisis, pero sin el analito. Los blancos miden
la respuesta del procedimiento analítico a las impurezas o especies interfe rentes que
existan en los reactivos o, simplemente, a las especiales características del instrumento de
medida.

La medida de la señal del blanco puede realizarse: a) registrando directamente la señal del
blanco e incluir este punto experimental en la recta de calibrado con x=0 como señal del
blanco; o b) restar a la señal medida con el analito, la señal media de varias lecturas del
blanco (señal observada – blanco).

Es importante señalar que los métodos analíticos son establecido por instituciones
nacionales o internacionales que proporcionan procedimientos y características del método
y que concluyen con indicadores de calidad (denominados características del desempeño
analítico) que suelen incluir: exactitud, precisión, especificidad, 5, además de los parámetros
que se determinan a partir de los curvas de calibración .Independientemente de la técnica
instrumental responsable de la señal analítica (cuyas características se estudian en forma
particular) los parámetros que se determinan a partir de las curvas de calibración obtenidas
con cualquiera de ellas son (Grado, s.f.):
 1. la linealidad
2. la sensibilidad
3. el límite de detección
4. el límite de cuantificación
5. el intervalo analítico

Linealidad del sistema de medición

La linealidad de la curva de calibración (habilidad para asegurar que los resultados

obtenidos directamente o por medio de una transformación matemática definida) es un
requerimiento fundamental en la práctica del análisis químico cuando se realizan curvas de
calibración. En general la linealidad no se cuantifica, pero se observa por simple inspección
o mediante pruebas significativas de no linealidad. La no linealidad se elimina mediante la
selección de un intervalo de operación más restringido. Cabe mencionar que el interval o
lineal puede ser distinto para matrices diferentes de acuerdo al efecto de las interferencias
procedentes de la matriz.

Como ya se mencionó con anterioridad, para demostrar la linealidad se requieren cumplir

ciertos criterios de aceptación en la que estadísticamente se puede justificar esa linealidad;
para ello es necesario calcular:

• la pendiente (m)
• la ordenada al origen (b)
• el coeficiente de determinación (r2)

Este cálculo se realiza fácilmente con una calculadora científica sencilla por lo que
normalmente no se recurre a las conocidas ecuaciones.

Como criterio de aceptación de la linealidad a partir de la curva de calibración (conjunto de

concentraciones que describen el intervalo en el cual se deberá cuantificar el compuesto
por analizar) se considera r 2>0.98

Sensibilidad. La sensibilidad de método mide su capacidad para discriminar entre pequeñas

diferencias en la concentración del analito. Dos factores limitan la sensibilidad. la pendiente
de la curva de calibración y la precisión del sistema de medida.
Para dos métodos que tengan igual precisión, el que tenga la mayor pendiente será el más
sensible; es importante señalar que para determinar la pendiente de la curva se considera
únicamente el intervalo lineal de la misma puesto que cuando la curva pierde su linealidad
la pendiente también es diferente.

Por otra parte, es importante mencionar que, al igual que la linealidad, también la pendiente
de la curva puede ser distinta para matrices diferentes; esto significa que la pendiente de la
curva depende de todas las condiciones de medida y que éstas deben ser iguales (o al
menos similares) para los estándares y la muestra problema

Límite de detección (LD). En general este término se define como la mínima concentración
del analito detectable por el método. Su determinación es importante (particularmente en
análisis de trazas) pero los problemas asociados con ella son diversos; estos problemas
han sido estadísticamente estudiados y varios criterios de decisión han sido propuestos.
Aunque ninguno es universal uno de los más aceptables es
el de la concentración que correspondería a la medida del “promedio del
blanco+ 3s”.

El blanco es la señal emitida por el instrumento con una disolución que contiene las mismas
especies que la muestra problema (pero sin el analito). Para fines de validación se considera
que deben hacerse 10 mediciones de blancos independientes El valor de 3s se refiere a
tres veces la desviación estándar al realizar la medición de estos blancos; cabe mencionar
que la elección de estos blancos no siempre es fácil.

Límite de cuantificación (LC) Llamado también límite de determinación, se define como la

más pequeña concentración del analito que puede ser determinada con un nivel de
exactitud y precisión aceptables. Dependiendo del convenio utilizado se considera como la
concentración de analito que corresponde al valor del promedio del blanco más 5, 6 o 10
veces la desviación estándar del mismo (esta última es la más común).

Es importante hacer notar que ni LD ni el LC representan niveles a los cuales sea imposible
la cuantificación del analito; el significado es que el LC representa la mínima concentración
 del analito que puede ser determinada con un aceptable nivel de incertidumbre

Intervalo analítico. Está definido como el intervalo de concentración en que el analito puede
ser determinado mediante la utilización de la curva de calibración; se considera que es el
comprendido entre el límite de cuantificación hasta la concentración en la cual se pierde la
linealidad de la curva

A título de ejemplo, a continuación, se muestra la curva de calibración obtenida al

representar la absorción de radiación (absorbancia A) de disoluciones estándar de albúmina
sérica. A partir de esta curva se explicarán los parámetros antes mencionados. Se conoce
que el promedio de 10 mediciones del blanco fue 0.015 con una desviación estándar de
0.002

Albúmica sérica bovina

0.05 0.1

Concentración ( moles/L)

En esta curva se observa linealidad hasta valores de absorbancia iguales a 0.4; este valor
corresponde a una concentración igual a 0,0207 mol//L El coeficiente de correlación de la
curva considerando únicamente estos cuatro puntos es igual a 0,9987 mientras que si se
consideraran todos ellos el coeficiente de correlación sería igual a 0,9382.
5. BIBLIOGRAFIA

Grado, B. (s.f.). INTRODUCCIÓN AL ANÁLISIS QUÍMICO. Obtenido de

https://www.um.es/documents/4874468/11830096/tema-1.pdf/1c49a077-8b02-405d-9100-
ee5f7f1b1b7b

SSE, L. O. (2017). https://agqlabs.cl/wp-content/uploads/Analisis-quimico-medir-es-comparar.pdf.

Obtenido de https://agqlabs.cl/wp-content/uploads/Analisis-quimico-medir-es-comparar.pdf