Академический Документы
Профессиональный Документы
Культура Документы
ДОНЕЦК 2012
УДК 6612.015+577.1 (075.8)
ББК 28.9
563
Утверждено Учёным Советом Донецкого национального
медицинского университета им. М. Горького (протокол № от 25.05.2012)
А в т о р ы:
З.М.Скоробогатова, Ю.Д.Турсунова, И.И.Зинкович, А.Г.Матвиенко,
И.В.Ниженковская, Е.В.Хомутов, Е.М.Бакурова, О.П.Шатова,
Я.Г.Жебеленко, М.А.Сташкевич, С.А.Зуйков.
РАЗДЕЛ 2. ВИТАМИНЫ……………………………………………………… 20
Классификация и номенклатура витаминов …………………………………. 20
простые сложные
ферменты ферменты
апофермент кофактор
E ES
V. Свойства ферментов
1. Зависимость активности фермента от температуры (термолабильность)
v В некотором ограниченном интервале скорость реакции
повышается с ростом температуры., т.к. увеличивается
кинетическая энергия молекул. При оптимальной
температуре (40◦С) скорость ферментативной реакции
максимальна. При дальнейшем повышении температуры
40 t° наступает денатурация фермента и реакция останавливается.
7
2. Влияние рH на скорость ферментативной реакции
v Эта зависимость определяется следующими факторами:
денатурацией фермента при очень высоких или очень
низких рH;
изменением величины заряда субстрата или фермента.
Т.к. в активном центре фермента есть группы, способные к
ионизации, то изменение рH влечет изменение степени
ионизации функциональных групп, что может вызвать
конформационные изменения в ферменте, и, следовательно,
рН изменение его активности.
гистидин
NН3 СО2
дека
рбок
сила
з а
кетокислота гистамин
8
VI. Изоферменты
Например, Н Н Н Н Н Н
лактатдегидрогеназа (ЛДГ) –
Н Н Н М М М
сложный фермент с
четвертичной структурой, ЛДГ1 ЛДГ2 ЛДГ3
которая представлена четырьмя
субъединицами двух типов:
Н и М. Комбинация этих М М М М
субъединиц (полипептидных М М М
цепей) дает пять изоферментных Н
ЛДГ4 ЛДГ5
форм фермента.
Эти изоферменты имеют разную скорость движения
в электрическом поле, поэтому их можно разделить с
помощью электрофореза.
Они органоспецифичны, т.е. локализованы в разных
ЛДГ1
органах: ЛДГ1 – преимущественно в сердечной
мышце, ЛДГ5 – больше в скелетной мускулатуре; в
крови их содержание в норме минимально. При
деструкции органа ( инфакте миокарда)
концентрация ЛДГ1 в крови резко возрастает.
Сутки после инфаркта Такие ферменты или их изоферментные формы
называют индикаторными.
VII. Полиферментные системы
• Это надмолекулярные комплексы, в состав которых S
входят различные ферменты, последовательно
катализирующие разные стадии одного процесса. Эти матрикс
Е1
системы работают по типу конвейера (продукт
первой реакции является субстратом для второго Е2
фермента и т.д.), в результате происходит выигрыш в Е3
расстоянии и во времени). Часто такие ферментные P Е4
ансамбли структурно связаны с какой-либо
органеллой клетки или мембраной.
• Например, пируватдегидрогеназный комплекс,
синтаза высших жирных кислот и др. 9
мембрана
VIII. Общие представления о катализе
неферментативная
реакция
переходное
состояние
энергия активации
неферментативной реакции
свободная энергия
энергия активации
ферментативной реакции
S
исходное
состояние
ферментативная
реакция
P
конечное
состояние
ход реакции
10
IX. Механизм дейcтвия ферментов
k1 k2
E+S ES ES* EP E+P
k-1
Уравнение Михаэлиса-Ментен
Vmax . [S]
описывает поведение многих ферментов в
V = КM + [S]
зависимости от концентрации субстрата.
аллостерический
центр
активный центр
2. Активация кофакторами
Наличие кофактора – необходимое условие активности сложных Некоторые
ферментов. В качестве кофакторов чаще всего выступают активные металлы –
формы витаминов или ионы двух- (иногда одно-)валентных металлов. кофакторы
Четверть всех ферментов нуждается в наличии металлов для проявления Cu2+
активности. Fe2+
Осуществляется активация разными механизмами:. Fe3+
ионы металлов участвуют в формировании и стабилизации активного K+
центра; Mg2+
ионы металлов выполняют роль простетических групп; Mn2+
ионы металлов облегчают связывание субстрата с активным центром Mo+
фермента; Ni2+
металл соединяется с субстратом, образуя металлосубстратный Se+
комплекс (истинный субстрат), на который действует фермент. Zn2+
14
3. Частичный протеолиз - превращение неактивного фермента (зимогена или
профермента) в активный путем отщепления полипептидного участка. При этом
гидролизуется одна пептидная связь, т.е. главным является изменение первичной
структуры фермента. Характерен для протеолитических ферментов, участвующих в
переваривании белков.
Н2О
полипептидный участок
неактивный фермент активный фермент
Это эволюционно закрепленный механизм защиты структурных белков клетки от
действия протеаз.
4. Фосфорилирование - дефосфорилирование ферментов
Ряд ферментов при фосфорилировании (введении отрицательно заряженной
фосфорной группы) под действием фермента протеинкиназы активируется, например:
АТФ АДФ
липаза протеинкиназа липаза Ф
неактивная активная
Другие ферменты активируются при дефосфорилировании:
гликоген- гликоген-
синтаза синтаза
неактивная
активная
Н2О
протеинфосфотаза
5. Ассоциация и диссоциация протомеров
Некоторые ферменты активируются присоединением или отщеплением регуляторных
субъединиц или белков-регуляторов. При этом главным является изменение
четвертичной структуры фермента.
ассоциация
диссоциация
15
XIII. Ингибирование ферментов
Изучение ингибирования дало ключ к пониманию механизма действия многих
ферментов, позволило понять суть ферментативного катализа, изучить многие
метаболический процессы. Оно имеет также прикладное значение, т.к. ингибиторы
применяются в фармакологии, фармацевтической промышленности.
Ингибиторы характеризуются прочностью связывания с субстратом, (устанавливается
диализом), поэтому делятся на две группы:
1. Необратимые ингибиторы – соединения, специфически связывают
функциональные группы фермента, образуя с ним прочные ковалентные связи.
2. Обратимые ингибиторы – образуют непрочные, нековалентные связи и могут
диссоциировать от фермента.
ингибиторы
необратимые обратимые
ингибиторы ингибиторы
конкурентные неконкурентные
ингибиторы ингибиторы
1. Конкурентное ингибирование
Е Е
S Р1 Р2 Р3 Рn
Е1 Е2 Е3 Еn
_
Иногда при продолжительном действии неконкурентного ингибитора и образовании
прочных связей с ферментом такое ингибирование становится необратимым.
Необратимые ингибиторы часто бывают токсичными.
• Например, цианиды, прочно связываясь с железом, входящим в активный центр
цитохромоксидазы, блокируют дыхательную цепь, что ведет к смерти клетки.
• Ионы тяжелых металлов очень токсичны т.к. блокируют SH-группы в активном
центре ферментов, при этом субстрат может связаться с активным центром, но
продукты не будут образовываться.
• Ингибиторы холинэстэразы, которая расщепляет ацетилхолин (нейромедиатор),
фосфорилируют каталитическую группу фермента необратимо (отравляющие
вещества зарин, зоман). 17
XIV. Применение ферментов в медицине
18
Задания для самопроверки и самокоррекции
Задача 1. У гастроэнтерологического больного понижена кислотность желудочного
сока, вследствие чего нарушено переваривание белков в желудке. Какое
свойство ферментов, переваривающих белки (в частности, пепсина)
проявляется в данном случае?
A. Зависимость активности ферментов от pН.
B. Специфичность ферментов.
C. Термолабильность ферментов.
D. Денатурация ферментов.
E. Влияние ингибиторов на активность ферментов.
Классификация и номенклатура
Для обозначения каждого витамина существует буквенное обозначение,
химическое и физиологическое название, например:
витамин С = аскорбиновая кислота = антискорбутный витамин.
Классифицируются витамины по их растворимости в воде или жирах.
холофермент
субстрат катализ
продукт
Mетаболизм витаминов
Жирорастворимые витамины после всасывания в кишечнике депонируются в тканях,
где утилизируются по мере необходимости; водорастворимые витамины -
превращаются в активную форму - коферменты и, выполнив каталитическую
функцию в составе ферментов, распадаются и выводятся из организма.
Антивитамины
Антивитамины – это природные и синтетические соединения, которые препятствуют
биологическому эффекту витаминов. Их можно разделить на две группы:
- структурные аналоги витаминов, которые обычно блокируют активные центры
ферментов, соединяясь с его белковой частью вместо витамина, чем вызывают
конкурентное ингибирование данного фермента. В результате тормозится
определенная биохимическая реакция, что проявляется клинической картиной гипо-
или авитаминоза. Хорошо известный изониазид – препарат, который используется для
лечения туберкулеза, является антивитамином витаминов РР и В6.
- неспецифические антивитамины, которые разрушают или связывают витамины.
Например, в сырой рыбе содержится фермент тиаминаза, который разрушает тиамин
( витамин В1), а сырой белок куриного яйца содержит авидин – антивитамин Н. 21
ВИТАМИН В1 - ТИАМИН - антиневритный
АТФ АМФ
B1 ТПФ
ά-кетоглутарат ά-кетоглутаратдегидрогеназа
сукцинилКоА + СО2
рибитол
Коферментные формы:
флавинмононуклеотид - ФМН;
флавинадениндинуклеотид – ФАД
АТФ ФФ АТФ ФФ
B2
ФМН
ФАД
Коферментные формы:
никотинамидадениндинуклеотид – НАД+
никотинамидадениндинуклеотидфосфат -НАДФ+
+
НАД+ НАДФ+
Биологическая роль никотиновых коферментов:
осуществляют перенос водорода в окислительно- восстановительных реакциях,
являясь коферментами пиридинзависимых анаэробных дегидрогеназ;
являются субстратами для синтетических реакций репликации и репарации;
являются аллостерическими регуляторами активности ряда ферментов.
Гиповитаминоз – пеллагра:
дерматит (симметричные поражения участков кожи);
диарея (патологические изменения слизистой оболочки рта и кишечника);
деменция (умственная отсталость). 24
Витамин В6 – пиридоксин - антидермитный
Коферментные формы :
-О-РО3Н2 -О-РО3Н2
пиридоксальфосфат - ПАЛФ
пиридоксаминфосфат – ПАМФ
ПАЛФ ПАМФ
Коферментные формы образуются путем фосфорилирования витамина с помощью
АТФ и фермента пиридоксалькиназы :
АТФ АДФ
B6 ПАЛФ
пиридоксалькиназа
Источники витамина:
пища и микрофлора
кишечника
птеридиновое кольцо п-аминобензойная глутаминовая кислота
кислота
Коферментная форма - тетрагидрофолиевая кислота (ТГФК) – Н4 фолат
Коферментные формы:
метилкобаламин (метил-В12)
дезоксиаденозилкобаламин (ДА - В12)
Биологическая роль :
метил-В12 совместно с ТГФК участвуют в реакциях трансметилирования, т.е.
межмолекулярного переноса метильных групп (ресинтез метионина, синтезы
адреналина, креатина, пуриновых и пиримидиновых оснований, т.е. синтез ДНК и
РНК;
ДА - В12 участвует в переносе водорода в реакциях изомеризации, является
коферментом метилмалонил-КоА-мутазы – фермента, который катализирует
превращение метилмалонил-КоА (образуется при расщеплении аминокислот с
разветвленной цепью) в сукцинил-КоА (метаболит цикла Кребса).
27
ВИТАМИН С – аскорбиновая кислота
антискорбутный витамин
β-аланин
Коферментные формы :
НS-КоА - коферментА (коэнзим А) или кофермент ацилирования
4-фосфопантетеин
НS
HS-КоА
β-меркаптоэтиламин пантотеновая кислота фосфоаденозиндифосфат
Биологическая роль: НS-КоА участвует в процессах: Гипо-
активации ацетата и жирных кислот; витаминоз –
окисления и синтеза высших жирных кислот; отсутствует
синтеза холестерина и других стероидов;
синтеза кетоновых тел; (Pantoten- лат. –
ацилирования в синтезах гема и ацетилхолина; повсеместно
окислительного декарбоксилирования пирувата и α-кетоглутарата распространен)
всасывания различных веществ в ЖКТ.
ВИТАМИН Н – Биотин – антисеборейный витамин
Источник – микрофлора кишечника,
продукты растительного и животного
происхождения
Биологическая роль - в качестве простетической группы входит в состав
биотиновых ферментов, катализирующих реакции карбоксилирования и
транскарбоксилирования:
биосинтез жирных кислот (ацетил-КоА-карбоксилаза);
превращение пирувата в оксалоацетат (пируваткарбоксилаза);
биосинтез пуриновых нуклеотидов.
Гиповитаминоз – при нарушении нормальной микрофлоры кишечника (в
результате длительного приема антибиотиков и сульфаниламидов). В эксперименте на
животных при длительном скармливании сырого яичного белка, который содержит
белок авидин, препятствующий нормальному всасыванию биотина. Проявляется
патологическими изменениями кожи по типу себореи, выпадением волос. 29
Задания для самопроверки и самокоррекции
Задача 1. Подтверждением диагноза бери-бери, поставленного врачом, послужил
результат анализа мочи, показавший :
А. Повышенное показание оксалата
В. Повышенное количество лактата
С. Повышенное количество ацетоацетата
D. Повышенное количество пирувата
Е. Повышенное количество глутамата
30
РАЗДЕЛ 3. ВВЕДЕНИЕ В ОБМЕН ВЕЩЕСТВ
БИОЭНЕРГЕТИКА
Биоэнергетика, или биохимическая термодинамика, занимается изучением
энергетических превращений, сопровождающих биохимические реакции.
Ее основополагающие принципы позволяют объяснить, почему протекают одни
реакции и невозможны другие. Небиологические системы могут совершать работу за
счет тепловой энергии, биологические - за счет энергии химических процессов.
В чем важность этой темы для медицины и фармацевтики?
Вся необходимая энергия должна поступать в организм в виде топлива -
питательных продуктов. Вопрос о том, как организм извлекает эту энергию - основа
для понимания процессов нормального питания. Истощение энергетических ресурсов
ведет к голодной смерти, запасание избыточной энергии в форме питательных веществ
– к ожирению. Коррекция нарушений обменных процессов с помощью
фармацевтических средств также должна учитывать энергетические потребности
организма.
Все химические реакции живой клетки подчиняются законам термодинамики.
1 закон : внутренняя энергия системы вместе с ее окружением остается
постоянной, она лишь переходит из одной формы в другую. Самопроизвольно
химические процессы могут протекать могут протекать только в одном направлении - к
достижению равновесия, т.е. к максимальной энтропии. Энтропия - мера хаоса,
неупорядоченности.
2 закон: энтропия при самопроизвольных процессах возрастает.
Самопроизвольно разупорядоченная система никогда не превратиться в
упорядоченную, для обращения надо затратить дополнительную энергию.
Практически проще предсказать направление химических реакций с
помощью свободной энергии системы, которую можно измерить.
АДФ+Ф
НАД+
НАДФ+
ФАД
химическая
энергия
~ рибоза аденин
Главным макроэргом в живых
организмах является
АТФ аденозинтрифосфат (АТФ), который
обеспечивает передачу свободной
энергии от экзергоническим процессам к
эндергоническим
Ф гидролиз (~) означает, что перенос группы,
соединенной такой связью,
сопровождается выделением большого
количества свободной энергии.
Свободная энергия гидролиза концевой
фосфатной группы АТФ
рибоза аденин
ΔG0 = - 30,5 кДж/моль.
АДФ
АДФ + Ф АТФ
34
3 стадия (общая для всех обменов) - окисление ацетил~КоА до конечных метаболитов
углекислого газа и воды. Эта стадия протекает в митохондриях - энергетических
станциях клеток и состоит из двух процессов:
цикла трикарбоновых кислот (ЦТК), в результате которого образуется СО2, а атомы
водорода используются для восстановления коферментов НАД и ФАД. Водород - это
универсальное энергетическое топливо, которое используется в дыхательной цепи для
образования энергии и воды.
системы электронного транспорта в мембранах митохондрий, в котором атомы
водорода переносятся на кислород с образованием воды. Эта система сопряжена с
окислительным фосфорилированием, в результате которого энергия биологического
окисления используется для синтеза АТФ.
пируват
СО2
ацетил-КоА
S Н2О 37
1. НАД-зависимые дегидрогеназы
Н Сложные ферменты, которые
катализирует реакции
2Н+2е- ..
окисления непосредственно
+ Н+
субстратов S (первичные
НАДН дегидрогеназы).
+ -
(восстановленная форма) НАД (активная форма
витамина РР) - кофермент этих
ферментов, акцептируя два
протона и два электрона (2Н
НАД + +2е-) от S превращается в
(окисленная форма) восстановленную форму
НАДН.
2. Флавиновые дегидрогеназы или флавопротеины (ФП)
3. Убихинон - КоQ
5. Цитохромы
Это сложные белки – гемопротеины,
белок содержащие гем (подобные гему гемоглобина) -
прочно связанную простетическую группу. Гем
содержит геминовое железо, способное менять
валентность, т.е. переносить только электроны.
Комплекс II
НАД+ 2Н
ФАД FeS
SH2 Н2О
SH2
Н+
Н+
цит.с
Н+
межмембранное
пространство
НАДНН НАД+
АДФ+Ф
матрикс V
синтез АТФ
Н+
химический
потенциал ΔрН электрохимический
потенциал ΔµН+ АТФ-синтаза
Комплекс II
НАД+ ФАД FeS Коэффициент окислительного
фосфорилирования P/O – отношение
количества фосфорной кислоты (Р),
SH2 (P/O = 3) использованной на фосфорилирование,
пируват к поглощенному кислороду (О).
α-кетоглутарат
изоцитрат SH2 (P/O=2) P/O зависит от точки вхождения
малат сукцинат восстановительных эквивалентов H2
глутамат ацил-КоА от субстратов SH2 в цепь транспорта
лактат глицерол-3-фосфат электронов.
(С2)
(С6)
(С4) (С6)
СО2
(С4) α-
(С5)
СО2
(С4)
(С4)
(С4)
∼SКоА конденсация
НSКоА
цитратсинтаза
2а
8
оксалоацетат цитрат дегидратация
дегидрирование
малат-
ЦТК аконитаза
дегидрогеназа
7 малат
гидратация цис-аконитат
фумараза НАДНН+ 2в
аконитаза
гидратация
ФАДН2
фумарат
изоцитрат-изоцитрат 3
сукцинат-
6 дегидрогеназа
дегидрогеназа декарбокси-
дегидрирование лирование
α-кето- СО2
сукцинил- глутарат-
тиокиназа дегидрогеназа
сукцинат
НSКоА α-кетоглутарат
НSКоА
∼SКоА
ГТ
ГДФ+Ф
Ф СО2
сукцинил∼SКоА
5 4
субсратное окислительное
фосфорилирование декарбокси-лирование
декарбоксилирование 47
Энергетический баланс ЦТК
Регуляция ЦТК
пируват
АТФ, ацетилКоА, НАДН,
пируват жирные кислоты
дегидрогеназный
комплекс АМФ, НSКоА, НАД+, Са2+
ацетил-КоА
АТФ, НАДН, сукцинил-КоА
АДФ
цитрат Самым важным фактором
синтаза цитрат регуляции цикла является
соотношение НАДН/НАД+.
оксалоацетат изоцитрат
ЦТК
АТФ
малат изоцитрат
дегидрогеназа дегидрогеназа АДФ, Са2+
НАДН
малат α-кетоглутарат
α-кето
ФАДН2 глутарат- НАДН, сукцинил-КоА
дегидрогеназа
Са2+
сукцинат сукцинил∼SКоА
дегидрогеназа
ингибирование
ГТФ
активация
48
Задания для самопроверки и самокоррекции
Задача 1.
Нарушение последовательности ферментов при реконструкции цепи тканевого
дыхания в эксперименте полностью блокирует его активность. Каким
свойством компонентов необходимо руководствоваться в построении
активной цепи переноса электронов?
А, Молекулярной массой
В. Редокс-потенциалом
С. Структурой кофакторов
D. Электрофоретической подвижностью.
1,6-гликозидная
связь
Углеводы пищи
гликоген глюкозо-6-фосфат
СО2
липиды глицерин 3-фосфоглицеральдегид
рибозо-
5-фосфат
α-амилаза
слюны
1,6-
гликозидаза
Тонкий кишечник
панкреатическая
α-амилаза
фосфо- УДФ-глюкозо-
глюкомутаза пирофосфорилаза
глюкоза-6-фосфат глюкозо-1-фосфат
УДФ-глюкоза
урацил
УДФ-глюкоза
а) удлинение цепи
Удлинение цепи катализируется гликоген-
синтазой. Так как образование гликозидных
связей между сахарами является
эндоэргической реакцией, вначале в реакции
глюкозо-1-фосфата с уридинтрифосфатом
гликогенсинтаза (УТФ) образуется активированный
предшественник — УДФ-глюкоза. После
этого остаток глюкозы легко переносится с
УДФ-глюкозы на «затравку» гликогена.
б) ветвление Когда растущая цепь достигает
определенной длины (>11 остатков),
специальный ветвящий фермент гликогена
(1,4→1,6-трансгликозидаза ) катализирует
перенос концевого олигосахарида,
состоящего из 6-7 остатков, на 6-ОН остаток
глюкозы той же или другой цепи гликогена с
образованием точки ветвления [α(1→6)-
связи]. Дальнейшее удлинение этого
ветвящий фермент фрагмента осуществляется
гликогенсинтазой, образующей α(1→4)-
связи. 54
IV. Распад гликогена в тканях Гликоген печени никогда
не расщепляется
полностью. Как правило,
укорачиваются только
невосстанавливающие
концы древовидной
структуры путем
Н3РО4 Гликоген ( n молекул глюкозы) фосфоролиза, т.е.
гликоген- присоединения
фосфорилаза фосфорной кислоты по
месту разрыва связи.
Гликогенфосфорилаза
отщепляет от
неразветленных цепей
гликогена по одному
мономеру в виде
Глюкозо-1-фосфат Гликоген ( n -1 молекул глюкозы) глюкозо-1-фосфата
1,6-связь Гликогенфосфорилаза катализирует фосфоролиз
1,4-связей, т.е. расщепление линейных
полимеров. Разрыв 1,6-связей катализирует
деветвящий фермент, который обладает:
гликоген гликозилтрансферазной активностью, т.е.
гликоген- переносит олигосахарид из трех глюкоз
фосфорилаза в конец неразветвленной цепи, при этом остается
одна молекула глюкозы, связанная 1,6-связью;
1,6-гликозидазной активностью, т.е.
расщепляет 1,6-связи с образованием свободной
молекулы глюкозо-1-фосфата
глюкозы и линейного полимера, на который
деветвящий
далее действует гликогенфосфорилаза, отщепляя
фермент
гликозил- по одной молекуле глюкозо-1-фосфата.
трансферазная Распад гликогена в печени и в мышцах
активность
отличается только одной реакцией,
обусловленной наличием только в печени
глюкозо-6-фосфатазы, которая «освобождает»
деветвящий
фермент глюкозу от фосфата (своеобразного якоря,
1,6-гликозидазная который не выпускает глюкозу из клетки), в
активность глюкоза результате чего глюкоза из печени выходит в
кровь. Таким образом, мобилизация гликогена
линейный (1,4-) полимер - печени поддерживает постоянную
субстрат для дальнейшего концентрацию глюкозы в крови. Функция
действия гликогенфосфорилазы гликогена мышц – обеспечение самой мышцы
55 метаболическим топливом.
Регуляция гликогенолиза и гликогенеза (синтеза и распада гликогена)
Синтез и распад гликогена – два противоположных процесса, их одновременное
протекание в клетке бессмысленно, поэтому происходит переключение этих
метаболических путей путем изменения активности двух ключевых ферментов –
гликогенсинтазы и гликогенфосфорила с помощью
инсулин
их фосфорилирования и дефосфорилирования.
Синтез гликогена активируется в
период пищеварения (1-2 часа после
приема углеводной пищи). В это
время вырабатывается гормон
поджелудочной железы инсулин, гликоген- гликоген-
который активирует гликогенсинтазу синтаза синтаза
путем ее дефосфорилирования (см. неактивная
раздел «Гормональная регуляция активная
обмена веществ»). В результате Н2О
глюкоза, всосавшаяся в кровь из протеинфосфатаза
кишечника, депонируется в печени в
глюкозо-
виде гликогена.
6-фосфат инсулин глюкагон
протеинфосфатаза
Н2О Распад (мобилизация) гликогена
происходит, главным образом, в период
между приемами пищи , а также во время
физической работы. В постабсорбтивном
гликоген- гликоген- периоде (при снижении концентрации
фосфорилаза фосфорилаза глюкозы в крови) усиливается выработка
активная другого гормона поджелудочной железы
неактивная глюкагона, который активирует гликоген-
АТФ фосфорилазу путем фосфорилирования.
АДФ
При этом происходит распад гликогена в
протеинкиназа печени и глюкоза выходит в кровь.
Аналогично в мышцах действует
адреналин, который активирует распад
глюкагон адреналин
гликогена при мышечной работе.
Болезни гликогена
Это наследственные заболевания – энзимопатии, связанные со снижением или
отсутствием активности ферментов синтеза или распада гликогена.
Гликогенозы – болезни накопления гликогена, вследствие чего возникает
гипогликемия и ее последствия (например, болезнь Гирке – недостаточность глюкозо-6-
фосфатазы).
Агликогенозы – нарушение синтеза гликогена, в результате чего наблюдается
снижение его содержания в тканях и также гипогликемия. 56
глюкоза V. Дихотомический распад глюкозы
– непрямое окисление глюкозы.
гликолиз Независимо от условий,
дихотомическое деление 6-ти
анаэробные условия 2 пируват анаэробные углеродной молекулы глюкозы с
в дрожжах условия
аэробные
образованием двух 3-х углеродных
условия молекул пирувата происходит
2 этанол +2СО2 2 лактат одинаково . Далее, в зависимости
2СО2
от условий, пируват различными
2 ацетил-КоА путями превращается либо в
лактат, либо в ацетил-КоА, или в
4СО2 + Н2О этиловый спирт (в дрожжах).
Анаэробный гликолиз
Анаэробный гликолиз – это ферментативный распад глюкозы до молочной кислоты
(лактата) без потребления кислорода (см. схему на стр.). Все реакции гликолиза
происходят в цитозоле.
Происходит в мышцах в первые минуты интенсивной работы, эритроцитах (нет
митохондрий), в различных органах при недостаточном снабжении их кислородом
(гипоксия), а также в опухолевых клетках. В этих условиях гликолиз является
единственным способом получения энергии для синтеза АТФ из АДФ и Фн.
1 стадия - энергопотребляющая, в которой глюкоза дважды фосфорилируется
(активируется) с затратой 2АТФ и дихотомически делится на два
фосфорилированных С3 фрагмента - фосфотриозы: фосфодиоксиацетон и 3-
фосфоглицериновый альдегид, которые взаимопревращаются, но во вторую стадию
непосредственно включается 3-фосфоглицериновый альдегид.
2 стадия - энергогенерирующая стадия (гликолитическая оксидоредукция), в
которой происходит окисление (дегидрирование) 3-фосфоглицеральдегида и
восстановление НАД+ в НАДН. Кроме того, во второй стадии происходят две реакции
субстратного фосфорилирования (7-я и 10-я реакции), каждая из них дает 2АТФ в
расчете на одну молекулу глюкозы (т.к. в результате дихотомии образовалось две
фосфотриозы и каждая далее превращается в пируват). Таким образом, во второй
стадии образуется 4 молекулы АТФ.
НАДН Н+, образовавшийся при окислении 3-
глюкоза фосфоглицеринового альдегида (6-я реакция),
в анаэробных условиях не может окисляться в
дыхательной цепи, поэтому восстанавливает
2НАД+ пируват до молочной кислоты (11-я реакция),
что обеспечивает регенерацию окисленного
2НАДНН+ НАД+ в отсутствие кислорода.
2 пируват в отсутствие О 2 лактат
2 Всего превращение глюкозы в лактат
57
сопровождается образованием (2х2-2)=2АТФ.
глюкоза Анаэробный
гликолиз
энергопотребляющая
1 АТ
гексокиназа Ф
стадия
фруктозо-1,6-дифосфат Реакция 5
Изомеризация
4 триозофосфатов
3-фосфоглицериновый 5 фосфодиокси-
альдегид ацетон
2 НАД+
6 Реакция 6
2 НАДН Н+ Образование 2 молей
(гликолитическая оксидоредукция)
НАДНН+ и
стадия
макроэргического
(2)1,3-дифосфоглицерат соединения
Реакция 7
Субстратное
7 2АТ фосфорилирование-
Энергогенерирующая
Реакции 8 и 9
(2)3-фосфоглицерат Образование
макроэргического
8 соединения (и воды)
(2)2-фосфоглицерат
Реакция 10
9 Субстратное
фосфорилирование -
(2)фосфоенолпируват образование 2 молей АТФ
Реакция 11
Восстановление 10 2АТ
пирувата в пируваткиназа Ф
лактат
(используется 11
НАДН Н+ ,
обоазующийся в
(2) пируват (2)лактат
6-й реации) 2 НАДН 2 НАД+ 58
1 - гексокиназа
2 - глюкозо-6-фосфат изомераза Из 11 реакций анаэробного гликолиза три
1 стадия
3 – фосфофруктокиназа реакции необратимы, остальные могут
4 – альдолаза протекать как в прямом, так и в обратном
5 – триозофосфатизомераза направлениях. Необратимыми являются:
1 – гексокиназная;
6 – глицеральдегидфосфатдегидрогеназа
3 – фосфофруктокиназная;
7 – фосфоглицераткиназа
8 – фосфоглицеромутаза 10 – пируваткиназная.
2 стадия
9 – енолаза Ферменты, катализирующие необратимые
10- пируваткиназа реакции, являются регуляторными, от их
11- лактатдегидрогеназа активности зависит скорость всего
метаболического процесса.
фруктозо-1,6-
дифосфат
4
5
3-фосфоглицер- фосфодиокси-
альдегид ацетон
ГЛЮКОЗА
1 IV
глюкозо-6-фосфат
фруктозо-6-фосфат
3 III
фруктозо-
1,6-дифосфат
липиды
белки
(2) 3- фосфоглицерат
мышц
2ГТФ амино-
белки кислоты
(2) фосфоенолпируват
мышц (ФЕП)
II
10
(2) оксалоацетат
аминокислоты
(2) пируват
I
2АТ
Ф
61 (2) лактат
Глюконеогенез является процессом, обратным гликолизу,
Цикл Кори за исключением необратимых реакций гликолиза (1, 3,
10), которые в глюконеогенезе идут с помощью других
(специфичных для глюконеогенеза) ферментов:
глюкоза гликолиз лактат глюкозо-6-фосфатазы, фруктозо-1,6-бисфосфатазы,
фосфоенолпируваткарбоксикиназы (ФЕПКК),
пируваткарбоксилазы, а также различных трансаминаз.
глюкоза лактат Происходит преимущественно в печени и почках.
кровь Новообразование глюкозы из аминокислот и глицерина
активируется при голодании под действием гормонов
глюкокортикоидов.
глюкоза глюконеогенез лактат
В интенсивно работающей мышце в результате анаэробного
гликолиза образуется лактат, который выходит в кровь,
поступает в печень, где превращается в глюкозу путем
глюконеогенеза. Это глюкозо-лактатный цикл или цикл Кори.
Регуляторные ферметы гликолиза:
Направление метаболизма
глюкозо-
глюкозы в печени связано с
гексокиназа 6-фосфат
фруктозо- ритмом питания.
6-фосфат Регуляция противоположно
цитрат направленных процессов –
фосфофруктокиназа гликолиза и глюконеогенеза
АМФ АТФ
направлена на их
необратимые стадии. Так
как совершенно невозможно
АТФ
пируваткиназа одновременное протекание
синтеза и распада глюкозы,
ацетил-КоА
согласование этих
Регуляторные ферменты глюконеогенеза: процессов обеспечивается
ацетил- пируваткарбоксилаз регуляцией активности
SКоА а специфических ферментов
гликолиза и глюконеогенеза.
АТФ фруктозо-1,6- Если клетка испытывает
дифосфатаза АМФ потребность в АТФ, то
активируется гликолиз,
глюкагон тогда как во врмя голодания
глюкозо-6-
адреналин
фосфатаза инсулин печень поставляет глюкозу в
глюко- кровь благодаря
кортикоиды глюконеогенезу.
ФЕП-
карбоксикиназ
а 62
глюкоза VII. Спиртовое брожение
НАДНН+ НАД+
ТПФ
пируватдекарбоксилаза алкогольдегидрогеназа
этанол ацетальдегид
алкогольдегидрогеназа ацетальдегиддегидрогеназа
ацетат
Метаболизм этанола происходит в основном в печени (до
90%). Обмен этилового спирта происходит быстро, ацетил-КоА
поэтому при поступлении в организм больших количеств
алкоголя резко уменьшается отношение НАД+/НАДН+.
Это ведет к тому, что обратимая реакция превращения АТ
Ф Н2О
пирувата в лактат будет сдвинута в сторону лактата: СО2
НАДНН+ НАД+
пируват лактат
лактатдегидрогеназа
Другими словами, концентрация лактата в клетке (и в крови) возрастет, а пирувата –
уменьшится. Это приведет к снижению глюконеогенеза в печени, т.к. пируват является
предшественником в новообразовании глюкозы. При снижении запасов гликогена в
печени и мышцах (после физической работы, приеме алкоголя натощак) может
развиться выраженная гипоглюкоземия (вплоть до потери сознания). Кроме того,
снижение использования лактата как субстрата глюконеогенеза приводит к
лактоацидозу – понижению рН крови.
63
VIII. Апотомический распад глюкозы –
прямое окисление глюкозы - пентозо-фосфатный путь.
Кроме дихотомии существует альтернативный метаболический процесс прямого
окисления глюкозы – пентозо-фосфатный путь (ПФП), который не связан
непосредственно с дыхательной цепью переноса электронов и окислительным
фосфорилированием. В нем образуются другой тип носителей метаболической энергии
– восстановленные коферменты НАДФН+, несущие водороды окисленной глюкозы,
которые в дальнейшем используются в восстановительных синтезах жиров,
биохимически важного трипептида глутатиона и др. Вторая функция ПФП –
образование фосфопентоз, необходимых для синтеза нуклеотидов.
Этот процесс включает две стадии:
1 стадия – окислительная, в ходе которой глюкоза в активной форме (глюкозо-6-
фосфат) непосредственно (прямо) окисляется, а затем декарбоксилируется (апотомия
-отщепление «apex» - верхушки - одного атома углерода в виде углекислого газа) с
образованием фосфопентоз и НАДФН+.
неокислительная окислительная
стадия стадия
глюкоза-6-фосфат
НАДФ+ глутатион восстановленный
глутатионредуктаза
рибозо-5-фосфат
нуклеотиды,
коферменты
ДНК, РНК 64
1. Окислительная стадия 2. Неокислительная стадия
Н СО Н (взаимопревращения фосфопентоз)
глюкозо- 6 молекул
6-фосфат рибулозо-5-фосфат
Р
НАДФ+
2 С5 2 С5 2С5
глюкозо-6-фосфат- рибозо- ксилулозо- ксилулозо-
дегидрогеназа 5-фосфат 5-фосфат 5-фосфат
НАДФН+
транскетолаза
6-фосфо- 2С3
глюконо-
2 С7 глицер-
седогептулозо- альдегид-
лактон
7-фосфат 3-фосфат
Р трансальдолаза
лактоназа
2С6 2С4
фруктозо- транскетолаза
эритрозо-
«apex» 6-фосфат 4-фосфат
6-фосфо- Н ОСН
глюконат 2С3
2С6 глицер-
фруктозо- альдегид-
6-фосфат 3-фосфат
Р
6-фосфоглюконат- НАДФ+
дегидрогеназа
НАДФН+ 2 молекулы 2 молекулы 1 молекула
глюкозо- глюкозо- глюкозо-
апотомия
6-фосфат 6-фосфат 6-фосфат
рибулозо-5-
фосфат
Суммарное уравнение пентозофосфатного цикла:
Р
фосфопенто- 6 глюкозо-6-фосфат + 12 НАДФ+ + 7Н2О
изомераза
1-я и 2-я стадии
рибозо-5-
фосфат 5 глюкозо-6-фосфат + 12 НАДФН+ + 6 СО2 + Р
65 Р
Функция неокислительной стадии состоит в том, чтобы производство
пентозофосфатов соответствовало метаболическим потребностям клетки. Обычно
потребность в НАДФН+ намного выше, чем в пентозофосфатах. С помощью этого пути
избыток пентоз, превышающий потребности клетки, может быть возвращен в фонд
гексоз.
В жировой ткани, где требуются большие
количества восстановительных эквивалентов
(НАДФН+) для синтеза жиров, а
фосфопентозы маловостребованы, активно
протекают обе стадии, т.е. процесс имеет
циклический характер и в тком случае его
называют пентозо-фосфатный цикл.
66
IX. Взаимопревращения моносахаров –включение других гексоз в обмен глюкозы
мальтоза лактоза
мальтаза лактаза
гликоген галактоза
фофорилаза галакто- АТФ
сахароза галакто-1-фосфат-
киназа
уридилтрансферазааза
АТФ глюкозо- галактозо-
сахараза глюкоза 1-фосфат 1-фосфат
гексо-
киназа УДФ-глюкоза
глюкозо- УДФ-галактоза
6-фосфат
АТФ
гексо-
фруктоза киназа
фруктокиназа АТФ фруктозо-
6-фосфат
фруктозо-1-фосфат
фруктозо-1-фосфат-
альдолаза
фруктозо-
глицеральдегид + фосфодиокси- 1,6-дифосфат
ацетон
АТФ 3-фосфоглицер- пируват СО2 + Н2О
триозокиназа альдегид
Наследственные
Нарушения обмена фруктозы энзимопатии Нарушения обмена галактозы
Непереносимость фруктозы – дефект Галактоземия – дефект фермента
фермента фруктозо-1-фосфатальдолазы, галактозо-1-фосфат-уридил-
при этом накапливается фруктозо-1-фосфат, трансферазы, вследствие чего в
который ингибирует распад гликогена. В крови и внутренних органах
результате развивается фруктоземия, накапливается галактоза и
фруктозурия и тяжелая гипогликемия. галактозо-1-фосфат. Клинически
Эссенциальная фруктоземия – дефект проявляется помутнением
фермента фруктокиназы, при котором кристалика, увеличением печени,
повышается выведение фруктозы с мочой, задержкой умственного развития.
что не сопровождается выраженными Проявляется в раннем возрасте
67 клиническими проявлениями. при употреблении молока.
Задания для самопроверки и самокоррекции
Задача 1. Экспериментальным путем выявлено, что превращение пирувата в
фосфоенолпируват происходит в присутствии витамина. Какого именно?
A. Рибофлавина
B. Тиамина
C. Пиридоксина
D. Биотина
E. Убихинона
С19Н31СООН арахидоновая
этаноламин Свободные жирные кислоты –
холин
амфифильные (дифильные)
гидрофильная
«голова» Х вещества, т.к. имеют
серин гидрофильную (заряженную)
«голову» и гидрофобный
(незаряженный) «хвост»:
гидрофильная
3. Стероиды –дифильные «голова»
вещества:
холестерин; гидрофобный
стероидные гормоны; «хвост»
желчные кислоты;
витамин D.
гидрофобная
гидрофильная часть насыщенная ненасыщенная
часть ВЖК ВЖК 69
II. Переваривания липидов
Переваривание нейтральных жиров– это постадийный гидролиз триацилглицеридов с помощью панкреатической
липазы (липолиз)
холевая жиры
кислота пищи желудок
гидрофильная
сторона
панкреатические
желчная соли желчный липаза и колипаза
кислота желчных кислот пузырь
гидрофобная сторона
вода двенадцати-
перстная поджелудочная
мицелла кишка железа
Пищевые
жиры
10. ВЖК в клетке (миоците)
окисляются до конечных
продуктов с образованием АТФ
или запасаются (в адипоците),
включаясь в синтез ТАГ.
желчные желудок
кислоты рН 1,5-2 11. Часть ВЖК ТАГ миоцит
желчный
связывается с или
пузырь
альбуминами
адипоцит
крови и
уносится
9.Часть ВЖК
неблагоприятные с ее током.
попадет в
условия для
клетки
переваривания
жировой
липидов ВЖК ткани,
миокарда,
скелетных
5. 90% желчных мышц,
кислот молочных
АТФ
всасывается желез.
из кишечника
в кровь,
тонкая поступает в
кишка печень, где
снова липопротеинлипаза
1. Соли желчных кислот используется
эмульгируют пищевые в желче-
жиры в тонком образовании
кишечнике, образуя (энтеро- 8. ЛП-липаза, активируемая
смешанные мицеллы. гепатическая апоС II, на поверхности
циркуляция – эндотелия капилляров
7-8 оборотов в жировой ткани расщепляет
2. Панкреатическая
сутки). ТАГ, содержащиеся в
липаза (и колипаза)
хиломикронах, на ВЖК и
расщепляет ТАГ капилляр глицерин.
до ВЖК и МАГ
(гидролиз до глицерина
7. Хиломикроны переносят
происходит в незначительной
стенка пищевые ТАГ по
степени ).
кишечника лимфатической системе и
АпоСII кровеносным сосудам к
3. ВЖК и МАГ всасываются тканям ( жировая ткань,
в стенку кишечника в виде скелетные мышцы, миокард
мицелл с дифильными и др.).
желчными кислотами,
фосфолипидами и
холестерином. хиломикрон
ВЖК
фосфолипаза А2
фосфолипаза С
фосфорная кислота
фосфатидил-
инозитол-
дифосфат
глицерин
Н
фосфолипаза D
инозитолдифосфат (ИФ2)
Панкреатическая фосфолипаза А2 поступает в тонкую кишку в неактивной форме и
активируется трипсином путем частичного протеолиза. В результате ее действия
образуются токсичные лизофосфолипиды, которые не накапливаются, т.к. практически
одновременно на фосфолипиды действуют кишечные фосфолипазы А1, С и D.
RСООН
+
Н2О
холестеролэстераза
глицерол- P фосфоглицерол- P P
глицерин киназа фосфоглицерол дегидрогеназа фосфодиокси- 3-фосфоглицер-
ацетон альдегид
2
Глицерин активируется путем фосфорилирования
(затрачивается 1 АТФ), образовавшийся фосфоглицерол
дегидрируется (при этом образуется НАДН, который передает
водороды в дыхательную цепь, что сопряжено с синтезом 3
20
АТФ). Образовавшийся фосфодиоксиацетон, являясь
метаболитом гликолиза, превращается в фосфоглицериновый
альдегид, который, окисляется во второй стадии гликолиза до пируват
пирувата (при этом образуется 3 АТФ за счет окислительного ацетил-SКоА
фосфорилирования и 2 АТФ – за счет субстратного). В аэробных
условиях пируват окисляется до ацетил-КоА (образуется 3
АТФ), который в ЦТК «сгорает» до СО2 и Н2О с образованием ЦТ
12 АТФ. Таким образом, при окислении глицерина до конечных К
продуктов образуется 22 АТФ.
Н2О СО2
V. Окисление высшх жирных кислот
1. Активация ВЖК в цитоплазме клеток АТФ АМФ + ФФ
RCOOH + HSKoA ацил-КоА-синтетаза
R-CO- SKoA
2. Перенос ацил- КоА из цитозоля в матрикс митохондрии с помошью карнитина
Окисление ВЖК происходит в митохондрии,
но внутренняя мембрана митохондрий
непроницаема для ацил-КоА,
поэтому ацил переносится
в комплексе с
карнитином, работающим
по челночному принципу.
карнитин
75
β-Окисление высших жирных кислот
Митохондриальное окисление высших жирных кислот (ВЖК) происходит в 3 стадии. В
1 стадии (β-окисление) ВЖК подвергается окислительной деградации с отщеплением
2-х углеродного фрагмента в виде ацетил-SКоА, начиная от карбоксильного конца
окисляемого ацила. Например, при окислении
пальмитиновой кислоты (n=16)
S-КоА образуется n/2=8 молекул ацетил-
пальмитоил- S-КоА SКоА, которые вступают во 2-ю
ацил-SКоА- ФАД стадию окисления ВЖК - цикл
1 дегидрогеназа ФАДН2 в ЦПЭ 2АТФ Кребса. В этой стадии ацетильные
группы окисляются до СО2 и
S-КоА поставляют атомы водорода в
еноил- S-КоА дыхательню цепь.
еноил-SКоА- Стадия 1 Стадия 2
2 гидратаза число циклов
β-окисления β-Окисление
8ацетил-SКоА
(n/2-1)=7
S-КоА
β-оксиацил- S-КоА
β-оксиаци-SКоА-
дегидрогеназа НАД+
3 НАДНН+ в ЦПЭ 3АТФ
ЦТК
S-КоА
β-кетоацил-
НS-КоА
4 тиолаза
S-КоА S-КоА
НАДН, ФАДН2
ацил-S-КоА ацетил -SКоА Стадия 3
Эти 4 последовательные реакции (цикл β-окисления) цепь
повторяются до тех пор, пока вся жирная кислота, переноса
электронов
имеющая четное число атомов углерода (n),
превратится в n/2 молекул ацетил-SКоА: АДФ+Ф АТФ
С14
В 3-й стадии водороды от НАДН и ФАДН2 поступают в
С12 дыхательную цепь и восстанавливают кислород с
образованием воды (жиры – источники эндогенной воды).
С10 При этом энергия окисления ВЖК конвертируется в
С8 молекулы АТФ. При окислении 8 молекул ацетил-КоА
С6 образуется 8х12=96АТФ. Кроме того, происходит 7 циклов
окисления, каждый дает 5АТФ (за счет окисления НАДН и
С4
ФАДН2), т.е. 7х5=35АТФ. Всего 141-1* = 140 АТФ.
(* 1 молекула АТФ затрачена на активацию ВЖК). 76
Синтез кетоновых тел VI. Метаболизм кетоновых тел
липидная
капля
SКоА SКоА
2 ацетил-SКоА
кетоновые тела ацетоацетат и β-
тиолаза гидроксибутират
НSКоА
НSКоА экспортируются
как источники
SКоА энергии для
ацетоацетил-SКоА ВЖК ацетил-SКоА скелетных мышц,
ОМГ- SКоА- ацетил-SКоА сердца, мозга.
синтетаза оксалоацетат ЦТК
НSКоА
глюкоза
SКоА глюкоза экспортируется
β-оксиметилглутарил-SКоА (ОМГ- SКоА) как топливо
гепатоцит для мозга и
ОМГ- SКоА- других
лиаза ацетил-SКоА тканей
Утилизация
кетоновых тел
ацетоацетат
β-оксибутират НАД+
β-оксибутират β-оксибутират НАДН
НАДН дегидрогеназа
дегидрогеназа
НАД+
кетоновые
кетоновые тела
тела
SКоА
Кетоновые тела синтезируются только в печени ацетоацетил-SКоА
(первая реакция – в цитозоле, остальные – в тиолаза НSКоА
митохондриях гепатоцитов), но никогда в ней не
используются. Они диффундируют в кровь и
используются как альтернативное метаболическое
SКоА SКоА
топливо для внепеченочных тканей: миокарда,
2 ацетил-SКоА
скелетных мышц, коркового слоя надпочечников и в
условиях голодания - мозга.
В норме концентрация кетоновых тел в крови невысока (10-20 мг/ ЦТ
л), но резко возрастает при голодании и сахарном диабете, К
когда создаются биохимические условия для их усиленного СО2
АТФ
синтеза, что ведет к кетонемии (кетоацидозу) и кетонурии. НО 77
2
VII. Синтез холестерина
биомембраны
витамин D3
желчные
кислоты холестерин
ПФП
НАДФН+
ланостерин
НАДФН+
сквален
2НАДФН+ 2НАДФ+ изопентенилдифосфат
Н2ОН
ОМГ- SКоА- редуктаза
β-оксиметилглутарил-SКоА (ОМГ- SКоА)
мевалоновая кислота
Синтез эндогенного холестерина происходит преимущественно в печени (50-80%),
кишечнике (10-15%), а также в коже (до 5%), коре надпочечников и репродуктивных
органах. Биосинтез холестерина начинается с ацетил-КоА. Углеродный скелет
С27стерина строится из С2-звеньев в длинной и сложной последовательности реакций.
Биосинтез холестерина можно разделить на четыре этапа.
На первом этапе из трех молекул ацетил-КоА образуется мевалонат (С6). Первые
реакции полностью совпадают с синтезом кетоновых тел (но происходят в цитоплазме
гептоцитов) до ОМГ-SКоА, который на пути синтеза холестерина восстанавливается до
мевалоновой кислоты. Регуляторный фермент этого синтеза - ОМГ-SКоА-редуктаза,
коферментом которого является НАДФН+ (поставляется в основном из пентозо-
фосфатного пути окисления глюкозы). Активность этого фермента ингибируется
холестерином и ЛПНП по принципу обратной отрицательной связи. Данный фермент
ингибируется путем фосфорилирования (дефосфорилированная форма - активна).
На втором этапе мевалонат превращается в «активный изопрен»,
изопентенилдифосфат.
На третьем этапе шесть молекул изопрена полимеризуются с образованием сквалена
(С30).
На четвертом этапе сквален циклизуется в ланостерин (С30), от которого
отщепляются три метильные группы и образуется холестерин (С27). На схеме
78 представлены наиболее важные промежуточные продукты этого биосинтеза.
Поступление с пищей Синтез из ацетилКоА
(экзогенный холестерин) (эндогенный холестерин)
0,3-0,5 г в сутки до 1 г в сутки
фонд холестерина
структура мембран синтез стероидных
в организме
и липопротеинов гормонов ~40 мг в сутки
ЛПНП
вне-
печеночные
остат. ткани
ЛПОНП ХМ остат.
ЛПОНП
ХМ предшественники ЛПВП
капилляр (из печени и кишечника)
ВЖК
липопротеинлипаза жировая ткань, мышцы
Все липопротеины участвуют в транспорте холестерина и его
эфиров по крови и распределении их по органам.
Хиломикроны транспортируют экзогенный холестерин от
кишечника через кровь в печень.
ЛПОНП образуются в печени (в небольших количествах –
в кишечнике) и транспортируют экзо- и эндогенный
холестерин (наряду с другими липидами) через кровь к
плазма плазма крови
тканям. Эти формы липопротеинов (ХМ и ЛПОНП) крови после послеприема
являютмя короткоживущими (полупериод их жизни голодания жирной пищи
составляет 1,5 – 2 часа).
Липопротеинлипаза (ЛП-липаза) на поверхности эндотелия сосудов расщепляет ТАГ
в составе хиломикронов и ЛПОНП, превращая их в остаточные хиломикроны и
остаточные ЛПОНП (называемые ЛППП - липопротеины промежуточной плотности),
соответственно. Эти частицы поглощаются печенью путем эндоциоза (через
«узнавание» рецепторами).
ТАГ остаточных ЛПОНП могут далее расщепляться ЛП-липазой, превращаясь в
ЛПНП. Эти частицы отличаются от своих предшественников не только большим
количеством холестерина (в виде эфиров), но и составом апопротеинов. Это основной
класс липопротеинов, которые переносят холестерин как в печень, так и во
внепеченочные ткани для его дальнейшего использования. ЛПНП являются
атерогенными, т.е. способствуют развитию атеросклероза.
ЛПВП, образующиеся в виде предшественников в печени и кишечнике,
«дозревают» в крови и, благодаря способности «вытягивать» на себя мембранный
холестерин клеток, обеспечивают его обратный транспорт в печень, поэтому являются
антиатерогенными липопротеинами (препятствуют развитию атеросклероза). 81
IX. Биосинтез липидов - липогенез
Липогенез нацелен на аккумулирование в организме человека резервов
метаболического топлива (в виде триацилглицеридов) и обновление структурных
компонентов биомембран (путем синтеза фосфолипидов, сфинголипидов). Составной
частью этого процесса является биосинтез жирных кислот, который наиболее активно
происходит в жировой ткани, печени, молочной железе во время лактации.
Синтез высших жирных кислот
В организме человека преимущественно синтезируется пальмитиновая кислота
(С16), непосредственным донором двухуглеродных фрагментов является ацетил-КоА,
который образуется при аэробном окислении глюкозы в митохондрии клетки. Реакции
синтеза происходят в цитоплазме клеток, но внутренняя мембрана митохондрий
непроницаема для ацетил-КоА, матрикс цитозоль
поэтому перенос ацетила из ацетил-КоА
ацетил-КоА
митохондрии в цитоплазму
осуществляется с помощью оксалоацетат цитрат цитрат
оксалоацетат
челночного механизма. Он включает
в себя образование цитрата (из
СО2 малат
ацетилКоА и оксалоацетата), НАДФ+
который проходит через мембрану и НАДФН+
по сути является переносчиком пируват пируват
ацетила в цитоплазму:
Оксалоацетат возвращается в матрикс митохондрий с помощью челночной системы,
включающей его восстановление в малат, который может пройти через мембрану.
Другим путем возврата оксалоацетата является его превращение в пируват, для
которого мембрана также проницаема. Преимуществом этого пути является
образование НАДФН+, необходимого для восстановительного синтеза жирных кислот.
В митохондриях цитрат является основным субстратом цикла Кребса, однако он может
покидать митохондрию и выходить в цитоплазму в условиях усиленного потребления
углеводов с пищей.
В первой стадии происходит карбоксилирование ацетил-КоА с образованием С3
молекулы малонил-КоА, катализируемое ключевым ферментом биосинтеза – ацетил-
КоА-карбоксилазой, простетической группой которого является биотин:
АТФ
АДФ+Ф
+
биотин ацетилКоА-карбоксилаза
SКоА SКоА
ацетил-КоА (КоЕ – биотин) малонил-КоА
цитрат
инсулин пальмитоил-КоА
Пальмитатсинтаза обеспечивает
последовательное удлинение углеродной цепи
на два атома углерода (С2, С4, С6 и т.д.) до образования
16-углеродного ацильного остатка, связанного с SН-
группой АПБ. Отщепление пальмитила от АПБ
осуществляется путем гидролиза. При этом образуется
свободная пальмитиновая кислота С15Н31СООН и
83
освобождается пальмитатсинтаза.
Последовательность ферментативных реакций синтеза ВЖК
КС МТ
перенос
АТ АПБ КР
малонила КС МТ
ЕР ГД АТ АПБ КР 5
ЕР ГД перенос бутирила
повторение циклов с SН-группы АПБ
SКоА
малонил-КоА на SН-группу
НSКоА
фермента КС
КС МТ
КС МТ синтаза жирных кислот, АПБ
АТ КР
АТ АПБ КР несущая метильную
и малонильную группы ЕР ГД
ЕР ГД
бутирил-АПБ
1 НАДФ+
конденсация
НАДФН+
4
восстановление
КС МТ КС МТ
АТ АПБ КР АТ АПБ КР
ЕР ГД ЕР ГД
β-кетобутирил-АПБ КС МТ
НАДФН+
АТ АПБ КР
2 НАДФ+
ГД 3
ЕР
восстановление дегидратация
84 β-гидроксибутирил-АПБ
Синтез фосфатидной кислоты – общего предшественника ТАГ и ФЛ
Жиры являются наиболее
глюкоза компактной формой
хранения энергии,
поэтому часть глюкозы,
поступающей с пищей,
гликолиз
превращается в жиры.
Этот процесс
активируется инсулином
(в абсорбтивный период)
и наиболее активно
фосфодиокси- глицерин происходит в печени
ацетон и жировой ткани.
НАДН+ АТФ
глицерофосфат-
печень дегидрогеназа глицеролкиназа
жирова ткань печень
НАД+ АДФ
мышцы
глицерол-
3-фосфат
SКоА
НSКоА
Ацилирование ацетил-КоА глюкоза
глицерол-3-фосфата
в положении 1 и 2
Синтезированные из
SКоА
ацетил-КоА (из
Фосфатидная кислота НSКоА глюкозы) жирные
является общим кислоты не остаются в
предшественником в свободном состоянии, а
синтезе как простых быстро активируются в
нейтральных жиров – ацил-КоА и
триацилглицеридов используются для
(ТАГ), так и сложных – фосфатидная кислота синтеза ТАГ и в
фосфолипидов (ФЛ). меньшей степени ФЛ.
триацилглицериды фосфолипиды 85
Н2О ЦТФ
Ф фосфатидная кислота ФФ
ЦДФ-холин ЦМФ
ЦДФ
диацилглицерид ЦДФ-диацилглицерид
3
серин
ЦМФ
3
Синтезируемые нейтральные жиры ТАГ
триацилглицерид
выполняют главным образом энергетическую фосфатидилсерин
функцию, а фосфолипиды – преимущественно
структурную: входят в состав мембран клеток
и оболочек липопротеинов.
В значительной степени печень синтезирует
как ТАГ, так и ФЛ не только для собственных
нужд, но и «на экспорт» - для других тканей,
куда они поступают в составе липопротеинов
по кровеносным сосудам. При нарушении фосфатидилэтаноламин
синтеза фосфолипидов затрудняется удаление Препарат «Гептрал», S-аденозил-
нейтральных гидрофобных ТАГ из применяемый при
метионин (-СН3)
заболеваниях печени,
гепатоцитов, что может приводить к жировой представляет собой S- В12
инфильтрации печени (накоплению аденозилметионин. S-аденозил-
гомоцистеин
нейтральных жиров в печеночных клетках).
Синтез ФЛ может быть нарушен, в частности,
из-за недостатка липотропных факторов:
холина, метионина, серина (при белковом
голодании).
86 фосфатидилхолин (лецитин)
X. Патология липидного обмена
88
РАЗДЕЛ 6. ОБМЕН ПРОСТЫХ
БЕЛКОВ
Белки
– это биополимеры,
мономерами которых
являются аминокислоты, пептидная связь
связанные
пептидной связью.
R R R R R R R R
O H O H O H O H O H O H O H O
Н2N-CH-C N-CH-C N-CH-C N-CH-C N-CH-C N-CH-C N-CH-C N-CH-C-OH
третичная структура –
пространственная укладка
вторичной структуры
Стабилизирующие связи:
первичная
водородные, дисульфидные,
cтруктура –
ионные, гидрофобные.
определенная
линейная четвертичная структура
последовательность вторичная структура - – ассоциация нескольких
аминокислот в пространственная укладка субъединиц (протомеров)
полипептидной полипептидной цепи в виде в олигомерный белок.
цепи. α-спирали или β-структуры Стабилизирующие связи
Стабилизирующие Стабилизирующие связи: водородные, ионные,
связи: пептидные водородные гидрофобные.
Обмен белков занимает центральное место в метаболических процессах, происходящих
в живом организме, что обусловлено многообразием, важностью и уникальностью
функций , выполняемых белками.
Именно этот обмен обеспечивает самовоспроизведение себе подобных организмов
путем программированного синтеза белка, остальные виды обмена подчинены этой
89 глобальной задаче.
В организме человека в сутки распадается на аминокислоты около 400г белка, и
столько же белка синтезируется. Причем необратимо распадается 1/4 часть
аминокислот, которая должна восполняться за счет пищевых белков. В сутки взрослый
человек должен получать 0,7г белка на 1 кг веса (100-150 г/сутки). Исключение белков
из пищи даже на короткий срок приводит к серьезным нарушениям:
Белковое голодание (квашиоркор)
Снижено
потребление задержка роста
белков снижен синтез анемия
гемоглобина
атрофия клеток
поджелудочной нарушено переваривание
железы белков
N-конец С-конец
цепи пептидная связь цепи
Н2О
N-концевой
неактивный фермент полипептид активный фермент
(профермент или зимоген)
аутокатализ
карбокси-
пептидаза
аминокислотный
остаток
фенил-
R R тирозин R аланин R R R
O H O H O H O H O H O H O H O
Н2N-CH-C N-CH-C N-CH-C N-CH-C N-CH-C N-CH-C N-CH-C N-CH-C-OH
пепсин
НCl
аутокатализ
пепсиноген
энтеропептидаза химотрипсиноген
трипсиноген проэластаза
прокарбоксипептидаза
В кишечнике (рН 7-8) действуют ферменты поджелудочной железы: трипсин,
химотрипсины, эластаза, карбоксипептидаза, вырабатываемые в неактивном виде.
Эти проферменты активируются в кишечнике: трипсиноген активируется кишечным
ферментом энтеропептидазой, химотрипсиноген, проэластаза и
прокарбоксипептидаза активируются самим активным трипсином.
Аминопептидаза и дипептидазы – ферменты кишечного сока, вырабатываются в
активном состоянии.
В результате суммарного действия всех желудочных, панкреатических и кишечных
пептидаз происходит полный гидролиз пищевых белков и образуются свободные
аминокислоты, которые всасываются в стенку кишечника путем активного
транспорта, поступают в кровь и разносятся к органам и тканям. Свободные
аминокислоты, в отличие от белков, лишены видовой специфичности и не обладают
антигенными свойствами.
Пути превращения аминокислот
Часть аминокислот в результате потери аминогруппы (процессы дезаминирования и
трансаминирования) превращается в α-кетокислоты (безазотистые остатки), которые
могут быть:
использованы на синтез глюкозы – глюконеогенез (такие аминокислоты называются
гликогенные),
использованы на синтез липидов, кетоновых тел – кетогенез (такие аминокислоты
называются кетогенные),
окислены до конечных продуктов с образованием СО2, воды и энергии.
Отщепившаяся аминогруппа в виде аммиака NH3 (токсичное вещество),
превращается в мочевину (конечный продукт азотистого обмена) и выводится через
почки с мочой.
Часть аминокислот распадается путем отщепления карбоксильной группы
(декарбоксилирование) в виде СО2 с образованием продуктов, которые называются
биогенные амины. 94
II. Пути превращения аминокислот
Функциональные
белки
созревание 10000г
Свободные аминокислоты
используются прежде всего на
синтез собственных
функциональных белков
организма:
структурных белков, ферментов,
рецепторов, гормонов, белков
трансляция плазмы крови и т.д.
глюкоза
пул
аминокислот липиды
секреция 100 г
белка
50г/сутки кетоновые
пища
50-100 тела
г/сутки
всасывание
деградация
до 150г/сутки ά-кето-кислоты
50-100г/сутки
cинтез
переваривани
е de novo
СО2 NН3 СО2 , Н2О
амино- пируват
АТ
кислоты фосфоенолпируват Ф
кишечник 3-фосфоглицерат
ά-кетокислоты мочевина соли
глюкоза аммония
выведение с
фекалиями биогенные
почки
10г/сутки амины
выведение с
95 мочой
ДЕЗАМИНИРОВАНИЕ АМИНОКИСЛОТ
ТРАНСАМИНИРОВАНИЕ АМИНОКИСЛОТ
Трансаминирование – это перенос аминогруппы с аминокислоты (донора) на α-
кетокислоту (акцептор) с образованием новой α-кетокислоты и новой аминокислоты
без промежуточного выделения аммиака.
NН3
2
глутаматдегидрогеназа
Синтез Образование
глутамина Образование глутамата
Образование
аланина Синтез
аммонийных
мочевины
солей
25г/сутки 0,5г/сутки
мозг и мышцы,
другие ткани кишечник печень почки мозг 98
IV. Пути обезвреживания аммиака
1. Образование транспортных форм аммиака
Конечными продуктами обмена аммиака являются мочевина и аммонийные соли,
которые образуются соответственно в печени и почках и выводятся из организма
через почки в составе мочи. Однако аммиак образуется во всех органах и тканях,
особенно интенсивно при напряженной мышечной работе, нервном возбуждении и т.д.
Поэтому доставка аммиака к местам окончательного обезвреживания (печень и почки)
осуществляется с помощью транспортных форм.
Главной транспортной формой аммиака является глутамин, который
легко проникает через клеточные мембраны, так как представляет
собой нейтральную аминокислоту:
АТФ АДФ + Ф
NН3 + глутамат глутамин
глутаминсинтетаза
Благодаря этой реакции в норме поддерживается низкая
концентрация аммиака в крови (25-40 мкмоль/л)
Глутамин попадает в кровь из различных тканей, в основном, из мышц и мозга и
транспортируется главным образом в почки, печень и кишечник, где активен фермент
глутаминаза, отщепляющая от глутамина свободный аммиак:
Н2О
глутамин глутаминаза глутамат + NН3
Из кишечника и мышц аммиак выводится в виде
аланина (глюкозо-аланиновый цикл)
Работающая мышца получает часть энергии за счет
распада аминокислот. Аминогруппы от
различных аминокислот в процессе реакции
трансаминирования оказываются в глутамате.
Далее глутамат трансаминируется с пируватом,
который образуется в работающей мышце из
глюкозы в результате гликолиза. В результате этой
реакции образуется аланин, который «несет в себе»
аминогруппы из мышечных белков и углеродный
скелет из глюкозы:
+ +
пируват аланин
глутамат α-кетоглутарат
Образовавшийся аланин через кровь поступает в
печень, где подвергается непрямому дезаминирова- почки
нию. Полученный аммиак обезвреживается с мочевина
образованием мочевины, а пируват превращается в
99 глюкозу, которая снова питает мышцы. Выведение с мочой
2. Биосинтез мочевины – орнитиновый цикл
Орнитиновый цикл Кребса-Хензелайта (цикл образования мочевины) – это
основной процесс обезвреживания аммиака в организме человека.
Происходит только в печени (в
NН4 +
глутамин митохондриях и цитоплазме) путем
Н CО3- образования нейтральной
карбамоил- нетоксичной молекулы мочевины,
2АТФ
фосфат- которая легко проходит через
cинтетаза I мембраны, переносится кровью в
2АДФ+Ф почки и выводится с мочой.
карбамоилфосфат Биосинтез мочевины
осуществляется из аммиака
Н2N C (доставляется в печень глутамином)
матрикс и угольной кислоты (НСО3-).
митохондрии
орнитин-
НN C
карбамоил- 2
орнитин цитруллин
трансфераза
цитруллин АТФ
цитоплазма
аргинино-
сукцинат- ФФ
cинтетаза
НN C
фосфат
орнитин
NН2
C =О
рибоза АМФ
NН2
мочевина аденин
аргиназа
промежуточный продукт
аргинино- N Н3
NН2 + сукцинат-
C
cинтетаза
Н2 N аспартат
аргинино-
аргинин АМФ
сукцинат-
лиаза
NН2+
NН C
фумарат аргининосукцинат 100
из внепеченочных тканей глутамат
глутамин
глутаминаза оксалоацетатат
глутамат
АсАТ
глутамат- аспартат
дегидрогеназа ά-КГ
карбамоил-
2АТФ
фосфат-
1
2АДФ Фн cинтетаза I
матрикс ∼
митохондрии
карбамоилфосфат
2 Фн
орнитин- цитруллин
орнитин карбамоил-
трансфераза
цитозоль
аспартат
орнитин
5
мочевина цитруллин
аргиназа
HOH 3
аргинино-
сукцинат-
cинтетаза АТФ
АМФ + ФФн
аргинин
4
аргинино-
сукцинат-
лиаза
фумарат
аргининосукцинат
Молекула мочевины содержит два атома азота:
N NН2
первый атом азота поступает в орнитиновый цикл в виде аммиака;
N второй атом азота вводится в мочевину из аспартата C =О
NН2
фумарат аргинин мочевина
малат
Цикл Цикл
регенерации аргининосукцинат мочевины орнитин
аспартата
из фумарата
цитоплазма аспартат цитруллин
ПИРУВАТ
аспарагин
аспартат фумарат триптофан
ЦТК
лейцин
аспартат изолейцин
сукцинат
фенил-
аланин лейцин
α-кето-
тирозин глутарат лизин
валин фенилаланин
метионин глутамат, глутамин тирозин
треонин гистидин, пролин
изолейцин аргинин
Углеродные скелеты, образовавшиеся из
аминокислот при отщеплении аммиака, аминокислоты
могут вовлекаться через α-кетокислоты
в ЦТК и сгорать до углекислого газа и биосинтезы NН3 углеродные
скелеты
воды. Однако, реального значения этот аминокислот,
путь не имеет, т.к. не выгодно «сжигать» нуклеотидов, др.
α-кетокислоты
столь ценные молекулы. Основным карбамоилфосфат
путем является их превращение в Цикл
СО2
глюкозу, т.е. глюконеогенез. Цикл регенерации
аспартата ЦТК Н2О
мочевины
Образующийся аммиак используется из фумарата АТФ
для биосинтеза различных азотистых
соединений либо выводится в виде мочевина оксалоацетат
мочевины.
глюкоза 103
V. Декарбоксилирование аминокислот
СОО Н ПАЛФ
Н2N СН R СО2 + Н2N СН2 R
аминокислота декарбоксилаза
биогенные амины -
физиологически
СО2 активные вещества
триптофан триптамин
окситриптофан
СО2
серотонин
СО2
гистидин
гистамин
СО2
γ-аминомасляная кислота
глутамат ГАМК
СО2
тирозин ДОФА
норадреналин
дофамин
104 адреналин
Некоторые аминокислоты подвергаются декарбоксилированию – отщеплению α-
карбоксильной группы с образованием СО2 и биогенных аминов – физиологически
активных веществ (гормонов, нейромедиаторов и др.). Некоторые биогенные амины
входят в состав других биомолекул, например, этаноламин входит в состав
фосфолипидов, β-аланин является структурным элементом коэнзима А.
Катализируют эту реакцию α-декарбоксилазы L-аминокислот, которые обладают
стереоспецифичностью (т.е. не действуют на D-изомеры аминокислот), коферментом
является пиридоксальфосфат.
Известно более 40 биогенных аминов, наиболее важными являются следующие:
Серотонин нейромедиатор проводящих путей, образуется в гипоталамусе.
Гистамин образуется в тучных клетках соединительной ткани, секретируется в
кровь при повреждении ткани (травма, ожоги). Функции гистамина:
вызывает расширение сосудов, отеки, покраснение кожи;
участвует в развитии аллергической реакции;
стимулирует секрецию желудочного сока, слюны;
снижает артериальное давление, но повышает внутричерепное;
сокращает гладкую мускулатуру легких;
является нейромедиатором.
важный тормозной нейромедиатор высших отделов мозга. В виде
γ-Аминомасляная
лекарственных препаратов гаммалон и аминолон ГАМК
кислота ГАМК
применяется при нарушениях мозгового кровообращения,
эндогенных депрессиях, приступах эпилепсии.
медиатор среднего отдела мозга. Недостаточность этого биогенного
Дофамин амина в черной субстанции мозга (при снижении активности ДОФА-
декарбоксилазы) приводит к болезни Паркинсона.
Норадреналин тормозной медиатор симпатической нервной системы в разных
отделах головного мозга, однако, может быть возбуждающим
медиатором в гипоталамусе. Снижение в нервных клетках
норадреналина и дофамина может приводить к депрессии.
Адреналин гормон интенсивной физической работы, стресса, регулирует
основной обмен, усиливает сокращение сердечной мышцы,
повышает артериальное давление.
Обезвреживание биогенных аминов
1. Окисление (с дезаминированием) под действием моноаминооксидаз (МАО):
NН3 Ингибиторы МАО –
R СН2 NН2 R СН O депренил, ниаламид,
моноаминооксидаза
пиразидол - применяются
(ФАД)
при лечении паркинсонизма
2. Метилирование с участием SAM - для гистамина, адреналина, норадреналина:
адреналин метиладреналин 105
VI. Особенности обмена ароматических аминокислот в разных тканях
фенилаланин
О2
фенилаланин- НАДФН
+ Надпочечники
фенилкетонурия гидроксилаза адреналин
НАДФ+
норадреналин
Н2О
п-оксифенилпируват Кожа
меланины
п-оксифенил- О2
тирозинемия III пируват- Щитовидная железа
СО2
оксидаза иодтиронины (тироксин)
Фенилаланин – незаменимая
аминокислота, тирозин –
условно заменимая,
гомогентизиновая кислота
синтезируется только из
гомогентизат-
фенилаланина. Катаболизм
алкаптонурия диоксигеназа О2 этих аминокислот происходит
в печени, при этом образуются
фумарилацетоацетат фумарат, который может
использоваться в
фумарил-
тирозинемия I ацетоацетаза глюконеогенезе и ацетоацетат,
т.е. кетоновое тело. Эти
фумарат ацетоацетат ароматические аминокислоты
являются кето-гликогенными
Нарушения обмена ароматических аминокислот – энзимопатии – связаны с
генетическими дефектами синтеза ферментов их метаболизма.
Фенилкетонурия – фенилаланин накапливается в крови, с мочей выводятся большие
количества фенилкетонов (образуются при избытке фенилаланина), проявляется резкой
задержкой умственного и физического развития (фенилпировиноградная олигофрения).
Алкаптонурия – накопление гомогентизиновой кислоты, которая окрашивает мочу в
черный цвет, может происходить отложение пигментов в тканях (склеры, нос, уши).
Альбинизм – нарушение синтеза пигментов меланинов в коже, волосах и сетчатке.
Тирозинемия – ряд энзимопатий, связанных с накоплением тирозина, который в
106 избыточных количествах оказывает негативное влияние на развитие ребенка.
глюкоза VII. Обмен глицина и серина
ТГФК N5,N10(СН2)ТГФК
синтез креатина
пируват синтез
синтез глутатиона
пуриновых
синтез парных желчных кислот нуклеотидов
Глицин и серин – заменимые аминокислоты (могут синтезироваться из глюкозы).
Играют важнейшую роль в синтезах многих жизненно важных биологических веществ.
Являются источником одноуглеродных фрагментов, которые переносятся с помощью
тетрагидрофолиевой кислоты - N5,N10(СН2)ТГФК (см. раздел «Витамины») и
используются в уникальных реакциях синтеза метионина, пуриновых нуклеотидов,
тимидилата и др.
ТГФК
НАД+ НАДН+
НСООН
глициноксидаза
Н3С Ф+ФФ
метионин метионинаденозил-
АТФ СН3
трансфераза
ТГФК 1 S-аденозил-
метионин
Витамин В12 4 (SAM) R
метил-
2 трансферазы
3 R-СН3
N5(СН3)ТГФК
ОН
пурин: аденин гуанин рибоза
Р
Н
пиримидин: цитозин тимин урацил дезоксирибоза
Дезоксирибонуклеотиды:
ДНК, РНК
Рибонуклеопротеин
(рибосомы)
В кишечнике пептиды распадаются далее до свободных аминокислот.
Гидролитический распад ДНК и РНК осуществляется в тонком кишечнике с
помощью эндонуклеаз - ДНК-азы и РНК-азы поджелудочного сока до
олигонуклеотидов, а затем фосфодиэстеразами - до мононуклеотидов:
ДНК-аза РНК-аза У
А
нуклеотидаза
(фосфатаза) Г
Т
азотистое
основание:
Р
Г С
мононуклеотид
Р
Р
АТФ
глюкоза Р Р
Н
(ФРПФ-синтетаза)
рибозо-5-фосфат фосфорибозил-
пирофосфат (ФРПФ)
Рибозо-5-фосфат активируется в 1-
положении с образованием ФРПФ, Р Р
который далее превращается в
фосфорибозиламин, в котором атом
глн
азота в NH2-группе будет N-9 атомом
синтезируемого пуринового кольца (в ФРПФ-амидо-
трансфераза
ходе 9 последующих реакций).
глу
Р
5АТФ
фосфорибозил-
инозинмонофосфат (ИМФ) 9 реакций
амин 111
В результате последовательной сборки пуринового кольца на фундаменте
фосфорибозы образуется первый пуриновый нуклеотид – ИМФ – инозинмонофосфат,
который не входит в состав нуклеиновых кислот, а является предшественником АМФ и
ГМФ. ИМФ не накапливается в клетке, а быстро превращается в нуклеотиды:
АМФ – аденозинмонофосфат с участием аспартата и энергии ГТФ
ГМФ – гуанозинмонофосфат с участием глутамина и энергии АТФ.
аспартат
НАД+ ГТФ
Н2О
Р
рибоза
НАДН+
ИМФ
Р Основное место
рибоза
биосинтеза пуриновых
ксантозилмонофосфат нуклеотидов – печень. Р
рибоза
Она снабжает
пуринами аденилосукцинат
глн ткани, не способные к
АТФ их синтезу:
эритроциты,
глу полиморфно-ядерные фумарат
лейкоциты и, частично,
мозг.
Р Р
рибоза рибоза
АМФ
ГМФ
Далее происходит фосфорилирование нуклеотидов с образованием субстратов, из
которых может синтезироваться РНК:
аденозин-
дезаминаза
рибоза
аденозин инозин гипоксантин
аллопуринол ксантин-
О
оксидаза
рибоза ОН
ОН ОН
Н2О NН3
гуаназа
(гуаниндезаминаза) НО
Н2 N Н2 N Н
гуанозин рибоза гуанин ксантин
мочевая кислота
2 3 4
аспартат карбамоиласпартат дигидрооротовая кислота оротовая кислота
ФРПФ
оротидил- 5
фосфорибозил- Р Р
трансфераза
Оротацидурия –
наследственное
заболевание, связанное ЦТФ
с нарушением
превращения оротовой Р
кислоты в УМФ. С рибоза рибоза
мочой выделяется в 1000 ОМФ
раз больше оротата, чем
глу ОМФ-
в норме, нарушается 6
АДФ декарбоксилаза СО2
синтез ДНК.
Проявляется умственной
9 глн
отсталостью и тяжелой АТФ АДФ
АТФ
АДФ
АТФ
мегалобластической
анемией. Лечат УТФ УДФ
8 7
«ударными» дозами
Р
уридина (до 1г в сутки.) рибоза
УМФ
В отличие от пуриновых, в синтезе пиримидиновых нуклеотидов сначала строится
свободное пиримидиновое кольцо, а затем к нему присоединяется рибозо-5-фосфат.
Источниками атомов пиримидинового кольца являются глутамин, угольная кислота и
аспартат. Вначале из амидного азота глутамина, CO2 и АТФ образуется
карбамоилфосфат (как и в синтезе мочевины). Затем к нему присоединяется
аспартат, в следующей реакции замыкается цикл с образованием дигидрооротата,
который дегидрируется в оротовую кислоту - пиримидиновое основание. Далее к ней
присоединяется фосфорибоза из ФРПФ и образуется первый пиримидиновый
нуклеотид ОМФ – оротидилмонофосфат, из которого образуется УМФ, а затем ЦТФ.
116
Биосинтез дезоксирибонуклеотидов
азотистое азотистое
Р Р Р Р основание
основание
Н
ОН
нуклеозиддифосфат дезоксинуклеозид-
(АДФ, ГДФ, дифосфат
ЦДФ, УДФ) НАДФ+ НАДФН+ (дАДФ, дГДФ,
дЦДФ, дУДФ)
Пролифелирующие клетки для репликации генома нуждаются в
дезоксинуклеозидтрифосфатах как субстратах для синтеза ДНК.
Восстановление рибозы в дезоксирибозу происходит только в составе нуклеозидди-
фосфатов, причем, непосредственным восстановителем является небольшой белок
тиоредоксин, а восстановительные эквиваленты поставляются НАДФН+.
СН3
N,N-метенил
ДГФК
ТГФК
дУМФ дТМФ
аминоптерин
метотрексат
ТГФК
Для синтеза ТМФ необходимо ввести в дУМФ метильную группу (-CH3). Её донором
является метенил-ТГФК (фактор роста!) с участием Vit B12, катализирует эту реакция
тимидилатсинтаза. При этом метенил-ТГФК, отдавая метильную группу,
превращается в дигидрофолат (ДГФК), которая восстанавливается в ТГФК с помощью
дигидрофолатредуктазы. Чтобы ТГФК снова превратилась в «носителя» метильной
группы, необходим серин как донор этого одноуглеродного фрагмента.
Ферменты, участвующие в этом процессе и контролирующие синтез ТМФ, а, значит, и
синтез ДНК, являются важными мишенями для действия цитостатиков
(5-фторурацил, метатрексат, аминоптерин). 117
ОБЩАЯ СХЕМА СИНТЕЗА И РАСПАДА НУКЛЕОТИДОВ
глоюкоза
глюкоза аминокислоты
аминокислоты СО
СО
22
АТФ
синтез
витамины
de
novo
пуриновые и пиримидиновые нуклеотиды
(нуклеозидмонофосфаты)
АТФ
дАТФ,
дАТФ,дГТФ,
дГТФ, нуклеозидтрифосфаты АТФ, ГТФ,
дТТФ,
дТТФ,дЦТФ
дЦТФ УТФ, ЦТФ
т-РНК
т-РНК
транскрипция м-РНК
м-РНК трансляция белок
р-РНК
р-РНК
Распад тканей
нуклео-
пуриновые и пиримидиновые нуклеотиды протеин
(АМФ, ГМФ,
ГМФ,ТМФ,УМФ,ЦМФ)
ТМФ, УМФ, ЦМФ) ы
пищи
119
РАЗДЕЛ 8. ОСНОВЫ МОЛЕКУЛЯРНОЙ ГЕНЕТИКИ
дочерняя
ДНК-полимераза III
цепь ДНК
ДНК- полимераза I дочерняя
цепь ДНК
ДНК-лигаза
ЭТАПЫ РЕПЛИКАЦИИ
1. Инициация
Происходит в S-фазе клеточного цикла.
Осуществляется путем локального
разделения (плавления) полинуклеотидных
цепей в области начала репликации ori
(original–начало, англ.) со специфической
последовательностью оснований, богатой ori.
А::::Т парами. К ней присоединяются
особые белки, например хеликаза, которая
расплетает двойную спираль, используя 5’ 3’
энергию АТФ. Образуется репликативный
пузырь. хеликаза
Другие белки - SSB-белки - связываются с
одиночными цепями и препятствуют SSB-белки
реставрации (обратному скручиванию)
5’
двойной спирали. праймер
От точки начала репликации процесс
расплетения продвигается вдоль ДНК в обе
стороны. В каждой из них начальный
участок, в котором ДНК разделяется на
одиночные нити, называющиеся
репликативной вилкой, где и
располагается хеликаза, которая
раскручивает двойную спираль со
скоростью ~50 п.о. в секунду (у эукариот) фрагменты
Оказаки
или
50 тыс. – 100 тыс. п.о. в минуту (у
прокариот). 3’
Обе репликативные вилки, удаляясь друг
от друга, проходят расстояние до таких же 3’ 5’ 3’ 5’
вилок, движущихся им навстречу от «лидирующая» «запаздывающая»
соседних точек ori. В молекуле ДНК цепь цепь
эукариот более 1000 таких точек и все они
«работают» одновременно, поэтому полная
репликация генома человека репликативная вилка
осуществляется за 8-9 часов. 126
Движение хеликазы усиливает скрученность (супер-спирализацию) впереди нее.
Убирают образующиеся супервитки ферменты топоизомеразы. Они разрывают
фосфатную перемычку (3’ – 5’ – cвязь) в одной из цепей (не гидролизуя, а замыкая 3-
фосфоэфирную связь с д-рибозы на ОН-тирозина фермента). Оставшийся свободный
конец свободно вращается, благодаря чему и убираются супервитки, а потом опять
сшивается ферментом топоизомеразой.
Как уже отмечалось, ДНК-полимеразы не могут соединять 2 первых нуклеотида, т.е.
инициировать синтез, они могут только удлинять цепь. Поэтому в начале белок DnaG
(праймаза) присоединяется к открытым цепям ДНК в области ori и катализирует
синтез затравки – праймера (10-12 нуклеотидов РНК, присоединенные по принципу
комплиментарности). Праймаза образует связи 3’ – 5’. Синтез происходит в
направлении 5’ 3’.
После завершения синтеза праймера дальнейший рост осуществляет основной
фермент репликации - ДНК-полимераза III.
2. Элонгация
Репликация на двух антипараллельных цепях происходит
3’ 5’
одновременно. хеликаза
На одной цепи ДНК синтез дочерней идет непрерывно в
направлении 5’ 3’ от участка ori по мере
раскручивания и продвижения вилки (такая дочерняя цепь праймер
называется лидирующей цепью).
На второй цепи синтез дочерней идет в направлении,
обратном движению вилки. Создание этой дочерней нити
(отстающей, запаздывающей), начинается в виде
отдельных отрезков (100-200 нуклеотидов) – фрагментов
фрагменты
Оказаки (названы по имени японского ученого Р. Оказаки
Оказаки). Каждый из них начинается от своего праймера и
продолжается (почти) до достижения праймера праймер
предыдущего фрагмента Оказаки. 5’ 3’ 5’ 3’
Как лидирующая цепь, так и отстающая, (из фрагментов Оказаки) синтезируются ДНК-
полимеразой III. Кроме полимеразной активности, все ДНК-полимеразы обладают и 3’,
5’-экзонуклеазной активностью, т.е. могут гидролизировать связь и удалять нуклетиды
с 3’-концов (в направлении «назад»), что позволяет этим ферментам проверять и
устранять свои ошибки.
У полимераз I и III есть и 5’3’ экзонуклеазная активность, что позволяет им
участвовать в репарации.
Та же активность позволяет ДНК-полимеразе I удалять праймер, постепенно отрезая от
5’-конца по одному рибонуклеотиду, а к 3’-концу фрагмента присоединяя
дезоксирибонуклеотиды, используя свою полимеразную активность. Промежутки,
которые возникают 3’-ОН и 5’-фосфатом, сшивают ДНК-лигазы, используя энергию
АТФ. 127
Редактирующая активность ДНК-полимеразы III
Если к растущей цепи добавился неправильный нуклеотид, он немедленно
удаляется еще до завершения синтеза. При образовании неправильной пары резко
ухудшается кинетика процесса, скорость движения фермента падает, в результате
активируется другой центр ДНК-полимеразы III, который гидролизует (удаляет)
последний ошибочный нуклеотид (фермент как бы «оглядывается» и исправляет свою
ошибку!)
Ошибки возникают с частотой примерно одна на миллион
Редактирующая активность фермента понижает частоту ошибок в ~100 раз.
3. Терминация.
Заканчивается репликация тогда, когда вся матричная ДНК скопирована. В
образованной таким образом двойной спирали ДНК только одна из цепей
синтезирована заново. Поэтому говорят, что репликация ДНК происходит по
полуконсервативному механизму. У E.coli петля растет со скоростью 1000 пар
нуклеотидов в секунду. Для репликации всей молекулы хромосомной ДНК этой
бактерии необходимо 42 минуты. У эукариот репликативная петля растет со скоростью
100 п.н. в секунду. Вероятно, это связано с наличием связи с гистонами. У человека для
полной дупликации ДНК необходимо 8 часов.
Принципы репликации:
комплементарность
антипараллельность
униполярность
потребность в затравке
прерывистость
полуконсервативность
128
«Молекулярные часы клетки» - теломеры
129
II. Репарация
Передача генетической информации в неискаженном виде - важнейшее условие
сохранения вида. Это обеспечивается за счет комплементарности. Однако, возможны
как ошибки репликации, так и неблагоприятное действие окружающей среды
(радиация, УФ-облучение, химические агенты).
Cуществует специальная система мониторинга точности спаривания нуклеотидов,
причем осуществляется двойная проверка:
- при включении ДРН в растущую цепь;
- после включения ДРН путем удаления ошибочных нуклеотидов (ошибки происходят
не чаще, чем 1 раз на 10 пар оснований).
Причины спонтанных нарушений
ошибки репликации
депуринизация вследствие непрочности N-гликозидной связи в пуринах
дезаминирование (Ц У, А Г, Г Х)
Причины индуцированных нарушений
алкилирование азотистых оснований (алкилирующие агенты применяются как
ингибиторы новообразований)
образование сшивок - пиримидиновых димеров между соседними основаниями
(тимином) под действием УФ-облучения
сахаро-фосфатный
ДНК остов пары оснований, Репарация – удаление поврежденных
связанные участков ДНК или ошибочно встроенных
водородными нуклеотидов. Ключевой частью всех
связями репаративных систем является распознавание
повреждение
дефекта в структуре ДНК, который или сразу
восстанавливается, или маркируется
специальными белками.
Этапы репарации:
удаление
поврежденного участка
1) узнавание места повреждения и
раскручивание участка ДНК в области
повреждения
2) однонитевой разрыв ДНК с 5 –конца на
расстоянии около 20 п.о. от места повреждения
ДНК-полимераза I
УФ-специфической эндонуклеазой
строит новую копию
3) достройка (“латка”) поврежденной
цепи с помощью ДНК-полимеразы 1
4) отщепление поврежденного участка за счет
ДНК-лигаза экзонуклеазной активности ДНК-полимеразы I
сшивает разрыв 5) сшивание 3-конца латки с 5-концом
основной цепи ДНК-лигазой
130
В клетке действует несколько систем репарации, позволяющих сохранить
генетическую информацию. Нарушение работы таких систем приводит к
заболеваниям, например, к пигментной ксеродермии – аутосомно-рецессивному
наследственному заболеванию. Существует две основные клинические формы
проявления этого заболевания: одна сопровождается дегенеративными изменениями
в глазах и коже, а другая, кроме того, характеризуется неврологической
дегенерацией. Тяжелым осложнением этого заболевания является рак кожи. Причины
развития пигментной ксеродермии связывают с дефектами ферментов репарации
тиминовых димеров (в частности, нарушение синтеза УФ-специфичной
эндонуклеазы).
131
IV. Молекулярные основы транскрипции
Структура оперона
Промотор - участок оперона, служащий для узнавания ферментом РНК-полимеразой.
Последовательность оснований по ходу цепи ДНК ниже сайта промотора с
направлением 3’ 5’ используется в качестве матрицы для синтеза РНК.
1. Инициация
транскрипции
кодирующая
2. Элонгация
цепь ДНК
транскрипции
3. Терминация
транскрипции
(первичный транскрипт)
135
ЭТАПЫ ТРАНСКРИПЦИИ
На всех этапах транскрипции необходимо участие специальных белковых факторов:
А, В – факторов инициации, Е, Н, F – факторов элонгации, ρ-фактор – фактор
терминации.
1. Инициация
ДНК-зависимая РНК-полимераза связывается с ДНК и «ищет» промотор, перемещаясь от 3’-конца
кодирующей цепи ДНК.
РНК-полимераза находит промотори связывается с ним с помощью σ-фактора. При этом цепь ДНК
не раскручена.
Цепь ДНК раскручивается с помощью РНК-полимеразы от «-10» до «-1» участка, образуя
открытый промоторный комплекс, который затем с помощью ионов магния еще более расширяется.
Первый нуклеозидтрифосфат, который «ставит» РНК-полимераза, всегда пуриновый: АТФ или
ГТФ. Таким образрм, синтез РНК всегда начинается с пуринового нуклеозидтрифосфата (Пур-5-
ФФФ).
136
По мере продвижения кор-фермента происходит расплетание ДНК – как бы
движется «пузырь транскрипции», содержащий около 18 п.о. в расплетенном виде. Как
только одна п.о. становится раскрученной перед 3’-концом растущей цепи РНК, одна
п.о. скручивается за «хвостом» РНК-полимеразы.
В результате элонгации образуется гибрид ДНК-РНК.
3. Терминация
У E.coli . большинство генов терминируются 2 путями:
1) путем формирования структур типа «шпильки» в РНК, в результате чего
ослабляется связь между РНК-полимеразой, матрицей (ДНК) и самой РНК. Эти
структуры образуются благодаря копированию сигналов терминации, которые
представляет собой определенную последовательность в рамках кодирующей
цепи ДНК. Специфичными для терминирующих участков являются
палиндромы (обратные повторы) и полиА-последовательности. Транскрипт
с этого участка имеет форму шпильки с концевой УУУУ-
последовательностью.
2) путем узнавания терминирующей последовательности специальным белком-
При взаимодействии ρ-фактора с
p-фактором.
РНК-полимеразой она теряет
ДНК-
матрица
сродство к ДНК и комплекс
распадается: фермент
терминирующий
отделяется от ДНК,
участок ДНК высвобождаются фактор и и
первичный транскрипт, т.е. РНК
Чтобы аминокислота «узнала» свое место в будущей полипептидной цепи, она должна
связаться с транспортной РНК (тРНК), выполняющей адапторную функцию: с одной
стороны, «узнает» кодон на мРНК, с другой – связывается с соответствующей этому
кодону аминокислотой.
Все т-РНК имеют одну полинуклеотидную цепь, отдельные участки которой образуют
спиралевидные петли - “шпильки” за счет водородных связей А-Т и Г – Ц ( 70% п/п
цепи), в результате образуется пространственная конфигурация в виде “ клеверного
листа”.
Прокариотическая Эукариотическая
N рибосома рибосома
70S 80S
направление
движения 50S 30S 60S 40S
рибосомы 5S rРНК
5S rРНК
16S 5.8S
23S 18S rРНК
rРНК rРНК
rРНК
растущий 28S rРНК
пептид
не менее не менее
N 34
21 50 33
молекул
белок
белок разных разных
белков
белков белков
N C стоп-кодон
UAA
UAG
В синтезе белка мРНК использует не одну, а
UGA несколько рибосом, в результате чего
образуются полисомы. При этом повышается
60S эффективность использования мРНК, а
40S следовательно, повышается скорость синтеза
30 3’ конец белка . 140
1. ИНИЦИАЦИЯ ТРАНСЛЯЦИИ
Наиболее ответственным моментом трансляции являются точное
узнавание самого первого кодона, который соответствует N-концевой аминокислоте
будущего белка. От этого зависит правильность установки рамки считывания. При
этом оба конца мРНК имеют нетранслируемые участки.
Стартовая точка – инициирующий кодон АУГ, кодирующей метионин, т.е. каждый
белок начинается с метионина. Чтобы отличить этот «начальный» метионин от других
молекул метионина, которые встраиваются в белки, у клетки есть две разные по
структуре тРНК с одинаковыми антикодонами (УАЦ) и только одну из них
распознают IF2 (фактор инициации) и только в комплексе с ним эту met-мРНК может
принять П-сайт рибосомы. (IF2 обладает ГТФ-азной активностью).
Шаги инициации
• мРНК фиксируется на малой субъединице рибосомы вблизи кэпа
• мет-тРНК вместе с IF2 связывается с малой субединицей рибосомы в П-сайте с
участием КЭП-связывающих белков и других факторов инициации.
• у прокариот малая рибосома сразу взаимодействует с участком мРНК, содержащего
АУГ или ГУГ (инициирующим), которые соответствуют N- формил мет-т-РНК.
• Малая субъединица, объединенная с мет-т-РНК продвигается по м-РНК к ее 3’-концу
с помощью АТФ-зависимого механизма до встречи с кодоном АУГ. По принципу
комплиментарности антикодон мет-тРНК (УАЦ) связывается с кодоном АУГ (при
этом расщепляется ГТФ), что служит сигналом к объединению малой субъединицы с
большой (одновременно в цитоплазму вытесняются белковые факторы). Образуется
комплекс: м-РНК-рибосома-метионил-т-РНК, готовый к элонгации.
40S Факторы инициации у прокариот:
IF1 ;
IF1 IF2 IF3 IF2 – обладает ГТФ-азной активностью;
метионил-т-РНК
IF3 – имеет максимальное сродство к
ГТФ малой субъединице.
мРНК
У эукариот факторы инициации eIF1, eIF2…
( всего описано до десяти факторов). У эукариот
комплекс мРНК ингибировать фактор инициации eIF -2 могут
инициации
интерфероны – белки, которые синтезируются
в лимфоидной и других тканях, обладают
IF1 IF2 IF3 антивирусной и противоопухолевой
60S активностью.
ГДФ
cтимулирует
На рибосоме имеются два участка: П-сайт или
ГТФ-азную активность пептидильный сайт, служащий для связывания с
фактора IF2 мРНК удлиняющейся полипептидной цепью; А-сайт
или аминоацильный, служащий для
П-сайт А-сайт
присоединения новой аа-тРНК. На стадии
рибосома, инициации к П-сайту присоединяется метионил-
готовая к трансляции тРНК, А-сайт – свободен. 141
2. ЭЛОНГАЦИЯ ТРАНСЛЯЦИИ
Элонгация - это рост полипептидной цепи от N-конца к С-концу, ступенчатое
удлинение синтезируемой полипептидной цепи, путем образования пептидных связей
между аминокислотами, доставляемыми в А-сайт рибосомы транспортными РНК.
а) - связывание аа-т-РНК. В момент первого шага второй кодон на мРНК свободен. С
ним спаривается своим антикодоном поступающая в рибосомы аа-тРНК, ее
аминоацильный конец связывается с А-сайтом рибосомы. Участвуют белковые
факторы элонгации, в частности, EF-2, который инактивируется дифтерийным
токсином путем АДФ-рибозилирования.
б) –транспептидация. Происходит переброс пептидила с левой тРНК (из
П-сайта) на аминогруппу аа-тРНК, таким образом формируется пептидная связь с
помощью пептидилтрансферазы. Пептидилтрансферазную активность связывают с
рРНК, которую считают рибозимом, т.е. РНК, обладающей каталитической
активностью. В А-сайте образуется пептидил-тРНК (n+1) , П -сайт - вакантный.
в) - транслокация . Образовавшийся пептидил-тРНК переносится из А-сайта в П-сайт,
благодаря продвижению рибосомы относительно мРНК. Фермент - транслоказа.
Используется энергия ГТФ, т.е. участвует фактор элонгации EFG, обладающий ГТФ-
азной активностью.
Транслирующая рибосома перемещается вдоль мРНК в направлении 3-
конца на 1 кодон (триплет), т.е. идет наращивание полипептидной цепи по 1
аминокислоте в соответствии с порядком кодонов мРНК. На рибосоме одновременно
может разместиться около 30 остатков аминокислот, остальные «свисают» в
цитоплазму.
Энергетические затраты на синтез 1 пептидной связи: 2АТФ и 2 ГТФ
м-РНК
5’
ГТФ ГДФ
образование образование
пептидной связи пептидной связи
Ингибиторы элонгации:
амицетин, эритромицин, пуромицин, тетрациклины. 142
Во время элонгации происходит важное событие - формирование
пространственной структуры полипептидной цепи, от чего в значительной степени
зависит жизнь этой молекулы.
Гидрофобные участки синтезируемого белка притягиваются друг к другу,
гидрофильные - взаимодействуют с водой и ионами, вследствие этого происходит
самоорганизация растущей цепи во вторичную и третичную структуры.
Иногда белок (продукт) нужно отправить через мембрану, для чего он должен быть
раскручен. Для этого синтезируемая цепь взаимодействует со специфическими
белками – шаперонами, которые препятствуют сворачиванию
белка и поддерживают его в недосвернутом состоянии.
Шапероны- молекулы-наставницы, которые «уберегают» еще неготовый
белок от «рискованных контактов» его фрагментов. Они образуют нековалентный
комплекс с растущей полипептидной цепью, как бы «предостерегая» ее от ошибочных
вариантов скручивания и упаковки, и обеспечивают правильное складывание
полипептидной цепи (фолдинг), от чего зависит функциональная активность белка.
Считают, что шапероны защищают организм от спонтанного возникновения
прионовых модификаций. Известно только то, что прионовые белки отличаются от
своих нормальных эквивалентов только необычной пространственной организацией
при той же первичной структуре
3. ТЕРМИНАЦИЯ ТРАНСЛЯЦИИ
143
Регуляция
синтеза
белка
Концентрация многих белков в клетке непостоянна и изменяется в зависимости от
состояния клетки и внешних условий. Это происходит в результате регуляции
скоростей синтеза и распада белков. Регуляция экспрессии генов может
осуществляться на любой стадии на пути от гена до образования функционально-
активного белка.
Регуляция транскрипции
Транскрипция генов может подавляться или активироваться, следовательно, синтез
белков может репрессироваться или индуцироваться. Оперон - это участок ДНК,
кодирующий строение, как правило, функционально связанных белков и содержащий
регуляторную зону, контролирующую синтез этих белков. На рисунке приведена схема
лактозного оперона:
промотор структурные гены
ген-регулятор оператор
РНК-полимераза
ГР П О Z Y А ДНК
транскрипция заблокирована
м-РНК белок-репрессор
РНК-полимераза
ИНДУКТОР (лактоза)
Z Y А ДНК
транскрипция разрешена
ГР П О
м-РНК
м-РНК
неактивный
репрессор
ИНДУКТОР
трансляция
145
Задания для самопроверки и самокоррекции
Задание 1
Для диагностики ВИЧ-инфекции используется метод полимеразной цепной реакции. Что лежит в его
основе?
A. Амплификация генов
B. Рекомбинация генов
C. Транскрипция РНК
D. Сплайсинг РНК
E. Элонгация трансляции
Задание 2 При отравлении ядом бледной поганки блокируется работа РНК-полимеразы В (ІІ). Какой
процесс при этом нарушается?
A. Обратная транскрипция
B. Синтез праймеров
C. Синтез мРНК
D. Синтез тРНК
E. Созревание РНК
Задание 3 Геном человека содержит более 30 тысяч генов, а количество вариантов антител достигает
миллионов. Благодаря какому механизму это возможно?
А. Образованию фрагментов Оказаки
B. Рекомбинации генов
C. Амплификации генов
D. Репарации ДНК
E. Репликации ДНК
Задание 4
Процесс биосинтеза белка является мишенью для многих антибиотиков. Какой процесс из
нижеперечисленных блокирует тетрациклин?
A. Элонгацию трансляции
B. Терминацию репликации
C. Терминацию трансляции
D. Элонгацию транскрипции
E. Инициацию репликации
Задание 5
При пигментной ксеродерме кожа очень чувствительна к солнечному свету. Дефект какого фермента
имеет место при данном заболевании?
A. ДНК-геликазы
B. Праймазы
C. УФ-эндонуклеазы
D. ДНК-гликозидазы
E. 5’, 3’ - экзонуклеазы
тропные гормоны
выделение тропных гормонов. Эти
предшест- гормоны с током крови поступают в
венники
периферические соответствующую эндокринную
железы железу, вызывая секрецию
определенного гормона. Гормоны
действуют на органы или ткани-
гормоны мишени, изменяя в них концентрацию
метаболитов, т.е. влияя на обмен
веществ. Избыток гормона по
клетки- принципу обратной отрицательной
мишени связи тормозит выработку гормонов
ответ клетки
гипоталамуса или гипофиза. 146
Гормоны - (hormao -греч. - побуждать к действию) - вещества органической природы,
вырабатываемые в специализированных клетках желез внутренней секреции,
поступающие непосредственно в кровь и оказывающее регулирующее влияние на
обмен веществ в тканях-мишенях и на функции всего организма.
Каждый гормон, где бы он ни был синтезирован, попадает в кровь и циркулирует
вместе с ней, встречаясь на своем пути с клетками всевозможных типов. Но далеко не
все клетки являются мишенями для любого гормона, они реагируют на присутствие в
крови лишь одного или нескольких, но тоже строго определенных гормонов.
межклеточное
гормон пространство
кровь
рецептор
клетка- клетка -
мишень немишень
При этом все 75 триллионов клеток организма человека являются мишенями для
одного или нескольких из 50 известных гормонов.
Реакция ткани-мишени на действие гормонов зависит от ряда факторов:
скорости продуцирования гормона в кровь и скорости деградации его в печени
или в почках (от нескольких минут до нескольких суток);
анатомической близости ткани-мишени к источнику (эндокринной железе);
скорости ассоциации и диссоциации гормонов со специальными белками-
переносчиками. Гормоны находятся в крови как в свободном, так и в связанном
состоянии - с протеинами плазмы, специфическими белками-переносчиками (резервуар
гормонов, их неактивная форма). В тканях-мишенях гормон освобождаются от белка и
начинают функционировать. В клинике определяют свободную и связанную формы
(например, повышение свободных женских половых гормонов - плохой
диагностический признак).
Все гормоны взаимодействуют с клетками-мишенями через рецепторы - особые
молекулы узнавания, специфические белки сложной, уникальной структуры,
обеспечивающие высочайшую избирательность. Один гормон может иметь несколько
рецепторов. Нарушение функции рецепторов может лежать в основе многих
эндокринных заболеваний. Нарушения могут быть следующие:
появление антител против рецепторов определенных гормонов;
отсутствие связывания гормона с рецептором;
нарушение регуляции рецепторов. 148
Истинные гормоны обладают следующими отличительными свойствами:
целенаправленность и дистантность действия (образуются в одних органах,
действуют в других);
высокая биологическая активность (концентрация гормонов в крови ничтожно мала
(10-7 - 10-12 моль/л);
высокая специфичность (гормоны действуют только на свои ткани-мишени).
Кроме истинных гормонов, секретирующихся непосредственно в кровь и
обладающих дистантностью, существуют гуморальные регуляторные факторы
неэндокринного происхождения (гормоны локального действия), регулирующие
метаболизм там, где они вырабатываются (изокринное действие). Они образуются в
разных органах и тканях: лимфоидной системе, лейкоцитах, соединительной ткани,
ЖКТ, нервной системе, почках, миокарде, поэтому еще называются тканевыми
гормонами или гормоноидами.
лютропин импульсы
Концентрация гормонов подвержена 30
периодическим колебаниям, которые могут зависеть 20
от времени года, времени дня или менструального 10
цикла. Многие гормоны поступают в кровь
12 15 18 21 24 3 6 9
импульсами и нерегулярно, их концентрация может время, сут
пульсировать. Концентрация другой группы
внешнее
гормонов меняется в зависимости от внешних 30
воздействие
факторов (стресс, голодание, прием пищи). Выброс 20 инсулин
гормонов является ответом организма на внешнее 10 прием пищи
воздействие или на изменение внутреннего 12 15 18 21 24 3 6 9
состояния. время, сут
I. Классификация гормонов
Существует несколько подходов к классификации гормонов:
по растворимости в воде и липидах (гидрофильные или липофильные гормоны);
по локализации рецепторов гормонов (мембранные или цитозольные рецепторы);
по секретирующим эндокринным железам (гормоны гипофиза, поджелудочной,
щитовидной железы и т.д.);
по метаболическому эффекту (гормоны гипергликемические, анаболические и т.д.)
по химической структуре:
гормоны белково-пептидной природы:
сложные белки (чаще гликопротеины): СГ, ТТГ;
простые белки: инсулин, СТГ;
пептиды: кальцитонин, глюкагон, нейропептиды, тканевые биорегуляторы;
гормоны - производные аминокислот: тироксин, адреналин, норадреналин и др.;
гормоны стероидной природы : кортикостероиды и половые гормоны,
производные витамина D;
эйкозаноиды – гормоноподобные вещества - производные арахидоновой кислоты:
149 простагландины, простациклины, тромбоксаны, лейкотриены.
II. Механизмы взаимодействия гормонов с клеткой
Все гормоны делятся на две большие группы в зависимости от клеточной
локализации рецептора (на клеточной мембране или внутри клетки), с которым
взаимодействует гормон. Это в свою очередь зависит от структуры и свойств самого
гормона:
гидрофильные гормоны – белково-пептидной природы и производные аминокислот
– не способны проникать внутрь клетки-мишени через липофильную клеточную
мембрану, действуют на клетку за счет связывания с мембранным рецептором;
липофильные гормоны – стероидные гормоны и иодтиронины – проникают в
клетку-мишень и взаимодействуют со специфическими рецепторами в цитоплазме или
в клеточном ядре.
Механизм
Механизм действия
действия гидрофильных
гидрофильных гормонов
гормонов
Трансформация гормонального сигнала в специфический ответ клетки-мишени
происходит в результате следующих молекулярных событий:
Передача гормонального сигнала осуществляется через белковые рецепторы,
расположенные на поверхности плазматической мембраны. Различают два основных
типа мембранных рецепторов:
ионотропные рецепторы – после взаимодействия с гормоном они способствуют
открытию ионных каналов на мембране и развитию быстрых ионных потоков (кальция,
натрия, калия, хлора);
метаботропные рецепторы активируют системы клетки через белки-
трансдукторы (G-белки).
гормон эффекторные
ферменты:
метаботропный
аденилатциклаза,
рецептор
гуанилатциклаза,
фосфолипаза С,
фосфолипаза А2.
аденилат-
циклаза
фосфодиэстеразааза
диацилглицерид (ДАГ)
фосфолипаза С
кальмодулин
кальмодулин
Гипофункция СТГ
Гипофизарный нанизм или карликовость – врожденная недостаточность
соматотропина, проявляется маленьким ростом с сохранением правильных пропорций
и нормальных умственных способностей.
S S
цис – тир – иле – глн – асп – цис – про – лей – гли – СО – NН2
окситоцин
S S
цис – тир – фен – глн – асп – цис – про – арг – гли – СО – NН2
вазопрессин
Окситоцин
Активирует сокращения гладкой мускулатуры матки и сокращения клеток,
окружающих альвеолы молочной железы. Окситоцин применяется в клинической
практике для стимуляции родовой деятельности.
159
IV. Гормоны щитовидной
железы
Иодтиронины входят в состав белка тироиодглобулина, фолликул
содержащегося в коллоиде фолликулов щитовидной
коллоид
железы. Этот белок представляет собой запасную форму
основных гормонов фолликулярной части щитовидной
железы – тироксина и трииодтиронина.
Это единственные гормоны. содержащие иод, который С-клетки
поступает в ткани в виде аниона. капилляр
Синтез иодтиронинов.
1. Образование молекулярного иода 2е
2I- иодидпероксидаза I2
с помощью иодидпероксидазы:
2. Иодирование остатков аминокислоты тирозина в составе тиреоиодглобулина
(посттрансляционная модификация белка тироиодглобулина) с участием
тирозиниодиназы с образованием моно- (МИТ) и дииодтирозинов (ДИТ):
остатки
тирозина
… … … белок тироиодглобулин
I2 тирозиниодиназа
МИТ ДИТ
I I I I
… … … белок тироиодглобулин
Эндемический зоб
Возникает из-за недостаточного поступления иода в организм. Проявляется
компенсаторным разрастанием щитовидной железы, однако, синтез иодтиронинов при
этом
163
снижен. Корректируется введением иода в составе пищи.
V. Гормоны поджелудочной железы
Островковый аппарат поджелудочной железы вырабатывает следующие гормоны:
глюкагон - в α-клетках;
инсулин - в β клетках;
соматостатин - в D-клетках -(здесь его концентрация выше, чем в гипоталамусе)
подавляет секрецию гормона роста;
участвует в локальной регуляции инсулина и глюкагона;
панкреатический полипептид - в F-клетках - влияет на желудочно-кишечную
секрецию.
S
S S
частичный протеолиз
проинсулин
( 1 полипептидная цепь инсулин
из 84 аминокислотных 2 полипептидные цепи:
остатков ) (А – 21, В - 30 аминокислотных остатков)
Синтез и секреция инсулина регулируется уровнем глюкозы в крови. Глюкоза является
основным энергетическим субстратом. Источниками глюкозы для организма служат
углеводы пищи и эндогенное производство глюкозы (главным образом, печенью) путем
гликогенолиза (распада гликогена) и глюконеогенеза (синтеза глюкозы из неуглеводов).
Концентрация глюкозы в крови зависит от соотношения выброса ее в кровоток и
утилизации тканями.
Концентрация глюкозы в норме жестко регулируется и у здоровых людей редко падает
ниже 2,5 ммоль/л или превышает 8,0 ммоль/л независимо от режима питания. В норме
концентрация глюкозы в крови составляет 3,3 -5,5 ммоль/л.
Ткани-мишени: жировая ткань, скелетные мышцы, печень.
Инсулин находится в двух формах:
свободный инсулин - атакует все ткани-мишени;
связанный (с белками) - действует только на жировую ткань.
165
Влияние инсулина на обмен веществ
Углеводный обмен.
Инсулин - единственный гипогликемический гормон, который снижает
концентрацию глюкозы в крови следующими путями:
повышает проницаемость клеточных мембран для глюкозы в жировой ткани и
скелетных мышцах;
повышает проницаемость клеточной мембраны для ионов кальция;
повышает активность фосфодиэстеразы, которая расщепляет цАМФ, благодаря
чему снижается распад гликогена;
стимулирует синтез гликогена путем активации гликогенсинтазы;
повышает активность основных ферментов гликолиза - гексокиназы (снимает с нее
ингибирующий комплекс глюкокортикоидов), глюкокиназы, фосфофруктокиназы,
пируваткиназы;
повышает активность ферментов, участвующих в окислении глюкозы до конечных
продуктов (ЦТК): пируват- и альфа-кетоглутаратдегидрогеназных комплексов,
цитратсинтазы, изоцитратдегидрогеназы;
увеличивает скорость прямого окисления глюкозы - пентозо-фосфатного пути
через активацию глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы;
ингибирует ферменты глюконеогенеза, таким образом препятствует накоплению
глюкозы (в результате избирательного ингибирования транскрипции гена,
кодирующего мРНК для основного фермента глюконеогенеза - фосфоенолпируват-
карбоксикиназы – ФЕПКК).
Инсулин активирует все процессы утилизации глюкозы,
способствует превращению ее в жиры
или в конечные продукты с выделением энергии.
Жировой обмен
Инсулин противостоит большинству гормонов, т.к. активирует синтез жира:
повышает активность липопротеинлипазы, которая расщепляет хиломикроны, что
способствует поступлению ресинтезированных в кишечнике жиров в жировую ткань;
поддерживает нормальный уровень регуляторного фермента синтеза ВЖК - ацетил-
КоА-карбоксилазы, катализирующего превращение ацетил-КоА в малонил-КоА,
который «запускает» синтез ВЖК;
активируют синтез ВЖК (через усиление образования ацетил-КоА и НАДФН2 при
прямом и непрямом окислении глюкозы);
усиливает синтез ТАГ из ВЖК и глицерина, которые образуются из глюкозы ;
снижает активность гормончувствительной липазы жировой ткани, благодаря чему
жир задерживается в депо.
осмотический диурез
отрицательный метаболический кетоацидоз
азотистый баланс
полиурия
потеря натрия
задержка роста
дегидратация тканей
работоспособность сердца
место синтеза сердце просвет кровеносных сосудов
адреналин кровяное давление
производное мозговое Метаболический эффект:
печень
аминокислот вещество жировая гликогенолиз
надпочечников мышцы
ткань уровень глюкозы в крови
липолиз
Ткани-мишени: жировая ткань, скелетные мышцы, сердце и печень.
Влияние на обмен веществ.
Углеводный обмен. Адреналин - гипергликемический гормон, действует через
ц-АМФ (как и глюкагон) и обеспечивает срочную мобилизацию гликогена в печени и
мышцах при физической работе и стрессе (активирует распад гликогена, стимулируя
гликогенфосфорилазу и тормозит синтез гликогена, ингибируя гликогенсинтазу).
Липидный обмен. В жировой ткани адреналин стимулирует липолиз путем
активации тканевых ТАГ-липаз по аденилатциклазному механизму. Это приводит к
повышению уровня жирных кислот и глицерина в крови. Свободные ВЖК поступают
в сердечную мышцу и служат источником энергии.
Физиологические эффекты
Адреналин и норадреналин сужают кровеносные сосуды, повышают кровяное
давление, адреналин увеличивает силу и частоту сердечных сокращений, расслабляет
169гладкие мышцы кишечника, бронхов, матки.
VII. Стероидные гормоны
Общим предшественником
всех стероидных гормонов C27
является холестерин, который
поступает в гормон- кальцитриол
синтезирующие клетки из холестерин
разных источников в составе
ЛПНП или синтезируется в
этих клетках из ацетил-КоА.
Гормоны коры надпочечников
Глюкокортикоиды С21
(кортизол, кортизон, кортикостерон)
Минералокортикоиды С21 прегненолон кортизол
(альдостерон)
Половые гормоны C21
Мужские половые гормоны –
андрогены С19 (тестостерон)
Женские половые гормоны
эстрогены С18 , прогестерон С21 прогестерон альдостерон
Синтез стероидных гормонов
Приведенные
В процессе синтеза стероидных
C19 на схеме
гормонов образуется более 40
стероиды
стероидных метаболитов, тестостерон объединены в
отличающихся по структуре и
подгруппы
биологической активности, наиболее
по числу
важными являются прогестерон, C18
углеродных
кортизол, альдостерон, тестостерон и
атомов.
эстрадиол, а также кальцитриол. эстрадиол
Регуляция
секреции кортизола ЛПНП
АКТГ клеточная мембрана
кортизол липидная
R рецептор
G ЛПНП капля
АКТГ, являясь гормоном аденилатциклаза
пептидной природы, не ЭХС
АТФ цАМФ холестерол-
проходит внутрь клетки, а эстераза
взаимодействует с рецептором ПК ХС
(R) на поверхности клеточной
мембраны, который через G-
эндоплазматический
белок и аденилатциклазу ретикулум
активирует протеинкиназу
(ПК). Этот фермент переводит ХС
в активное состояние: прогестерон
холестеролэстеразу - прегненолон
фермент, который освобождает 11-дезокси- митохондрия
холестерин (ХС) из его эфиров кортизол
(ЭХС); кортизол
ферменты синтеза
кортизола из холестерина. 172
Глюкокортикоиды вырабатываются при
сон снижении концентрации глюкозы в крови,
поэтому в течение суток их секреция ритмично
мкг/100мл
фильтрат
ЦТК участвующих в транспорте ионов
натрия через клеточные мембраны.
насос АТФ белок Таким образом, усиливается
реабсорбция натрия и хлора из
Na+ АДФ Na+
Na +
мочи в межклеточную жидкость и
далее в кровь, в результате чего
кровь натрий задерживается в организме.
Одновременно идет потеря калия
(в обмен на натрий).
Выработку альдостерона контролируют ренин-ангиотензиновая система (каскад
реакций частичного протеолиза), а также АКТГ, простагландин Е и снижение
концентрации Na+ .
РЕНИН-АНГИОТЕНЗИНОВАЯ СИСТЕМА:
Уменьшение объема Стеноз
циркулирующей крови почечной артерии
Уменьшение перфузионного
давления в почках
увеличение
ренин - протеолитический фермент,
объема синтезируется в юкстагломерулярных
Выделение ренина
циркулирующей клетках почек при снижении кровяного
давления
крови
ангиотензиноген I ангиотензин I
α-глобулин, ангиотензинпревращающий фермент
синтезируется в печени
ангиотензин II
жажда
1 5
2 6
кости
Гипопаратиреоз
Может развиться в результате ошибочного удаления паращитовидных желез при
операции на щитовидной железе. В крови резко снижается концентрация кальция и
возрастает концентрация фосфора. Ощущение онемелости конечностей, многие
мышцы вовлекаются в тетанические судорожные сокращения (от фибриллярных
подергиваний до сильных судорог). Характерны спазмы гортани.
Гиперпаратиреоз - болезнь Реклингаузена
Развивается при гормонально активных опухолях паращитовидных желез. При этом
повышается концентрация кальция в крови и снижается концентрация фосфора,
фосфатурия. Резкое поражение костной ткани, остеопороз - деминирализация костей
(до нарушения матрикса костной ткани, т.к. нарушен синтез коллагена). Кальций
накапливается в почках, развивается мочекаменная болезнь (оксалаты кальция).
181
Кальцитриол
Кальцитонин
пищевые фосфолипиды
незаменимые жирные мембран глюкокортикоиды
кислоты (витамины F):
линолевая
линоленовая фосфолипаза А2
арахидоновая
аскорутин
аспирин
метиндол арахидоновая кислота С20
простагландин-
синтаза липооксигеназа
эндопероксиды лейкотриены
аминокислоты
глюкоза
белки
гликоген гликоген
жиры
жиры жиры
185
Постабсорбтивный период
Через несколько часов после прекращения поступления пищи начинается
использование организмом запасенных энергетических резервов. Сигналом для
мобилизации запасов является изменение секреции гормонов поджелудочной железой.
Если в абсорбционную фазу было высоким соотношение инсулин/глюкагон, то в
постабсорбтивном периоде уменьшается секреция инсулина и возрастает-
глюкагона. В результате начинается расщепление запасных веществ: жиров, белков,
гликогена.
Печень. Усиливается распад гликогена, в результате чего образуется глюкоза,
которая выходит в кровь и потребляется прежде всего мозгом и эритроцитами, т.е.
клетками, не имеющими собственных резервов глюкозы. При дальнейшем голодании в
печени активируется глюконеогенез – синтез глюкозы из аминокислот, поступивших из
мышц (вследствие распада белков) и глицерина, доставленного из жировой ткани (в
результате распада жиров). Высшие жирные кислоты (ВЖК), которые также
приносятся кровью в печень из жировой ткани, превращаются в кетоновые тела –
основной энергетический субстрат для внепеченочных тканей в постабсорбтивном
периоде (особенно для сердечной мышцы и мозга, если другие энергетические резервы
исчерпаны, например, при длительном голодании).
аминокислоты белки
гликоген
глюкоза гликоген
глицерин глицерин
глюкоза
кетоновые
ВЖК тела
жиры
Энергетические
резервы исчерпаны
ВЖК
Мышцы. Запасы гликогена снижаются, образующаяся при этом глюкоза
используется мышечной тканью для собственных нужд. Белки распадаются до
аминокислот, которые с кровью поступают в печень и превращаются в глюкозу
(глюконеогенез).
Жировая ткань. Усиливается липолиз, образовавшиеся свободные жирные кислоты
транспортируются кровью (в комплексе с альбуминами) во многие ткани, где
являются источниками энергии (кроме мозга и эритроцитов). 186
Задания для самопроверки и самокоррекции
Задание 1
У пожилой женщины обнаружен остеопороз. Ей назначена диета с необходимым
количеством кальция, а также гормональная терапия. Какой гормон,
использумый в качестве рекальцификатора при заболеваниях костной
системы, можно назначить в данном случае?
А. Паратгормон
В. Кортизол
С. Альдостерон
D. Адреналин
Е. Кальцитонин
Задание 4
Синтез липидов является важным звеном анаболизма, обеспечивающим организм
человека запасом энергетического материала. Назовите гормон,
стимулирующий этот процесс.
А. Адреналин
В. Кортизол
С. Эстрадиол
D. Инсулин
Е. Глюкагон
Правильность решения проверьте, сопоставив их с эталонами ответов.
1-B, 3-D, 5-B.
187
РАЗДЕЛ 10. БИОХИМИЯ КРОВИ
Функции крови
Транспортная функция: газы в крови
перенос газов (дыхательная функция) -
кислорода и углекислого газа. т.е.
обеспечение тканей кислородом и
выведение СО2;
перенос питательных веществ
(трофическая функция) к печени и другим питательные
органам после всасывания в кишечнике. вещества,
Такой транспорт обеспечивает снабжение метаболиты,
органов и тканей необходимыми конечные продукты
веществами для жизнедеятельности; метаболизма
перенос метаболитов , обеспечивающий
обмен веществ в тканях и органах;
последующий перенос конечных гормоны
продуктов метаболизма (экскреторная
функция) для их выведения из организма
легкими, печенью и почками;
перенос гормонов (регуляторная функция)
от эндокринных желез к тканям-мишеням.
Поддержание гомеостаза: клетка внеклеточное
поддержание водного баланса между пространство
клеточным пространством и внеклеточной
средой;
поддержание температуры тела путем контроля
кровью транспорта тепла;
поддержание кислотно-основного равновесия,
т.е. рН крови, которое регулируется легкими,
почками и печенью.
Защитная функция:
в крови содержатся клетки иммунной системы и
антитела, защищающие организм от чужеродных
молекул и клеток; клетки иммунной антитело
свертывающая система крови защищает организм системы
от кровопотерь при повреждении кровеносных
сосудов;
антисвертывающая система крови предотвращает
образование тромбов путем растворения
188
кровяных сгустков (фибринолиз). свертывание крови
фибринолиз
Кровь человека составляет примерно 8% от массы тела. Она состоит из клеток,
клеточных фрагментов и водного раствора, т.е. плазмы. Доля клеточных элементов в
общем объеме называется гематокритом и составляет примерно 45%.
СОСТАВ КРОВИ
эритроциты 44%
неорганические органические 59% 6,5%
вещества вещества
мочевина
мочевая кислота альбумины глобулины эозирофил базофил
креатин,креатинин гранулоцит
(4,5%) (2–3,5%)
аминокислоты глюкоза
пируват лейкоциты
аммиак, индикан
билирубин лактат
(остаточный ТАГ фибриноген
азот) холестерин (0,3%)
тромбоциты
кининогены
Кинины повышение
(брадикинин проницаемости сосудов;
«Контрикал»
каллидин)
«Гордокс»
(противовоспалительные боль;
препараты) кининазы
неактивные аллергические реакции
полипептиды
Почечная Внепочечная
ретенционная азотемия ретенционная азотемия
возникает вследствие возникает вследствие
ухудшения экскреторной нарушения кровообращения,
функции почек. При этом снижения артериального
небелковый азот мочевины давления и уменьшения
возрастает до 90% почечного кровотока 193
III. Кислотно-основное состояние крови (КОС)
нМ логарифмическая
шкала
[Н+]
линейная
рН шкала
ацидоз алкалоз
гиповентиляция; гипервентиляция;
повышенное образование Н+; повышенное выведение Н+
пониженное выведение Н+
Ацидоз – изменение реакции крови в кислую сторону вследствие накопления в
крови водородных ионов Н+.
Алкалоз –сдвиг реакции крови в щелочную сторону, обусловленный уменьшением
протонов и накоплением гидроксильных ионов ОН-.
В организме человека всегда имеются условия для сдвига активной реакции крови в
сторону ацидоза или алкалоза, которые могут привести к изменению рН крови. В
клетках тканей постоянно образуются кислые продукты. Накоплению кислых
соединений способствует потребление белковой пищи. Напротив, при усиленном
потреблении растительной пищи в кровь поступают основания. Поддержание
постоянства рН крови является важной физиологической задачей и обеспечивается
буферными системами крови и физиологическими механизмами – деятельностью
легких и выделительной системой почек.
Буферные системы нейтрализуют значительную часть поступающих в кровь кислот и
щелочей, тем самым препятствуя сдвигу активной реакции крови. В организме в
процессе метаболизма в большей степени образуется кислых продуктов. Поэтому
запасы щелочных веществ в крови во много раз превышают запасы кислых, и эти
194 щелочные запасы рассматривают как щелочной резерв крови.
IV. Буферные системы крови
Буферная система - это смесь слабой кислоты и ее соли (сопряженного сильного
основания). Попадание в плазму сильной кислоты вызывает реакцию буферных
систем, в результате которой сильная кислота превращается в слабую. То же
происходит при воздействии сильного основания, котрое аналогично превращается в
слабое . Вследствие этого изменения рН не происходит или оно будет минимальным.
Н2О + СО2
Бикарбонатная буферная система по своей мощности занимает второе место. Она
представлена угольной кислотой (Н2СО3) и бикарбонатом натрия или калия (NaНСО3,
КНСО3) в пропорции 1/20.
Если в кровь поступает кислота, более сильная, чем угольная, то в реакцию вступает,
например, бикарбонат натрия. Образуются нейтральная соль и слабодиссоциированная
угольная кислота. Угольная кислота под действием карбоангидразы эритроцитов
распадается на Н2О и СО2, последний выделяется легкими в окружающую среду:
Н+ + NaНСО3 Н2СО3
Метаболический ацидоз.
Вызывается поступлением в кровь больших количеств органических и неорганических
кислот, при этом способность химических буферов нейтрализовать протоны падает.
Причины:
избыточное введение протонов с пищей или лекарствами;
кетоацидоз (сахарный диабет, голодание, лихорадка, печеночная кома, шок,
послеоперационный период);
лактатный ацидоз (кардиогенный шок, отек легких, травматический шок, тяжелая
физнагрузка, нарушение водно-электролитного обмена при заболеваниях ЖКТ);
повышенная потеря бикарбоната натрия через кишечник (диарея, при острой
дизентерии или холере, болезни Аддисона);
почечный ацидоз (при нефрите - ограничение выведение кислот с мочей, при
гломерулонефрите - нарушение выведения сульфатов и фосфатов из организма,
нарушение секреции протонов и реабсорбции бикарбонатов);
применение диуретиков - ингибиторов карбангидразы (обязателен контроль)
Для купирования метаболического ацидоза применяют бикарбонат натрия, трисамин
или лактат натрия (противопоказания - печеночная недостаточность).
196
Дыхательный (респираторный) ацидоз.
Это нарушение КЩР, сопровождающееся повышением рСО2 артериальной крови.
Причины:
уменьшение дыхательного объема легких;
нарушение соотношения вентиляция/кровоток в отдельных участках легких, при
котором преобладает кровоток через гиповентилируемые отделы.
Наблюдается при острой дыхательной недостаточности, обусловленной отравлением
наркотиками, барбитуратами, приступом бронхиальной астмы, шоке, отеке легких, а
также при хронической дыхательной недостаточности.
3 мин 10 сек
ХIа
IХа VIIа
V Vа + Са2+ + ФЛ
IIа
ф.I фибриноген - -
ф.II протромбин I Iа
ф.III тканевой тромбопластин фибрин-мономер
ф.IV ионы кальция Са2+
ф.V проакцелерин
ф.VII проконвертин
ф.VIII антигемофильный глобулин А (ф.Виллебранда)
ф.IX антигемофильный глобулин В (ф. Кристмаса)
фибрин-полимер
ф.X ф. Стюарта-Прауэра
ф.XI ф. Розенталя
ф.XII ф. Хагемана ХIIIа
ф.XIII фибринстабилизирующий фактор
VI. Фибринолиз
Система свертывания крови в норме находится в динамическом равновесии, при
котором фибриновые сгустки все время образуются, а затем растворяются. Процесс
распада осуществляется с помощью фермента плазмина, который является сериновой
протеиназой, способной гидролизовать фибриноген, фибрин и другие белковые
факторы. В норме плазмин содержится в виде неактивного профермента –
плазминогена – гликопротеина β-глобулиновой фракции. Он активируется путем
частичного протеолиза с помощью различных тканевых и сосудистых активаторов. 201
Во многих тканях организма (кроме печени) имеются активаторы плазминогена (ТАП),
которые являются протеолитическими ферментами, неактивными в отсутствие
контакта с фибрином. При контакте с фибрином они активируются, переводят
плазминоген в активный плазмин и запускается процесс расщепления фибринового
тромба. Схема фибринолиза
тканевые актиаторы
урокиназа плазминоген плазминогена (ТАП)
стрептокиназа
пептид
пептид
плазмин
фибриновый тромб растворимые пептиды
ТАП, полученные методами генной инженерии, используются для лечения заболеваний, связанных с
тромбозам сосудов. Ферменты урокиназа (выделяют из клеток почек человека) и стрептокиназа
(бактериальный продукт) также активируют плазминоген и поэтому используются в медицинской
практике с целью лизиса тромбов и профилактики тромбозов.
Инактивация плазмина Для прекращения растворения тромбов
(т.е. инактивации плазмина) в крови
+ находится белок α2-антиплазмин,
который связывает плазмин и
плазмин α2-антиплазмин неактивный
плазмин переводит его в неактивное состояние.
Fе2+
глицин
протопорфирин IХ
сукцинил-КоА σ-АЛК- σ-АЛК
синтаза
О2
копропорфириноген III
σ-аминолевулиновая
уропорфириноген Ш
кислота
косинтаза
порфобилиноген
копро- уропорфириноген III
порфирино-
ген III уропорфириноген
NН4+
копропорфириноген III
Наследственные нарушения обмена порфиринов
Энзимопатии, связанные с дефектом ферментов синтеза
гема – порфирии – приводят к накоплению в тканях протопорфириноген III
промежуточных продуктов синтеза гема: порфиринов и их
предшественников. Характеризуются повышенной
чувствительностью к свету (вследствие усиленного протопорфирин IХ
образования активных форм кислорода), неврологическими Fе2+
нарушениями. гем-синтаза
Эритропоэтическая порфирия (болезнь Гюнтера) – дефект
уропорфириноген Ш-косинтазы, моча, зубы и кости окрашены в
красный цвет вследствие накопления нефизиологичного
уропорфириногена I.
α- и β-цепи глобина
Печеночные порфирии – характерны
неврологические нарушения,
обусловленные накоплением серотонина из-
за снижения гем-содержащего фермента
204 обмена этого биогенного амина. гемоглобин гем
Fе2+
Vit C
гем-оксидаза
глобин
биливердин
НАДФН
биливердин-
гем в составе гем в составе
редуктаза
гемоглобина вердоглобина НАДФ+
ретикуло-эндотелиальная система
(печень, селезенка, костный мозг) билирубин
печень кровь
билирубин билирубин свободный
УДФ-глюк- УДФ-глюкуронил- нерастворимый
уроновая трансфераза токсичный 75%
кислота «непрямой»
моноглюкуранид
билирубина
УДФ-глюк-
уроновая УДФ-глюкуронил-
трансфераза
кислота
диглюкуранид билирубин связанный
билирубина растворимый 25%
пирролы
нетоксичный
желчный пузырь «прямой»
диглюкуранид
билирубина
кишечник глюкуроновая
кислота
билирубин
микрофлора кишечника
мезобилирубин
мезобилиноген
почки
стеркобилиноген
кал моча
стеркобилин (300 мг в сутки) стеркобилиноген (4 мг в сутки) 205
Задания для самопроверки и самокоррекции
Задание 1
При мобилизации жира из жировых депо в кровь поступило большое количество
жирных кислот. Какими белками плазмы крови они будут транспортироваться
А. Альбуминами
В. α1–глобулинами
С. α2–глобулинами
D. β –глобулинами
Е. γ–глобулинами
Задание 2
У пациента с печеночной недостаточностью выявлено снижение показателя
остаточного азота крови. За счет какого компонента произошло снижение
этого показателя ?
А. Мочевины
В. Аммиака
С. Аминокислот
D. Билирубина
Е. Мочевой кислоты
Задание 3
Известно, что тромб в течение нескольких дней после образования
рассасывается. Какому ферменту принадлежит главная роль в этом
процессе?
А. Урокиназе
В. Стрептокиназе
С. Плазминогену
D. Плазмину
Е. Гепарину
Задание 4
После полученной травмы на голени ребенка появилась гематома, которая с
течением времени изменила свой цвет с пурпурного на желтый. Какой
процесс обусловил такое изменение окраски?
А. Связывание билирубина с альбуминами
В. Образование билирубиндиглюкуронида
С. Превращение гема в билирубин
D. Образование мезобилирубина
Е. Превращение гема в гемоглобин
Правильность решения проверьте, сопоставив их с эталонами ответов.
1-A, 3-D, 5-E
206
РАЗДЕЛ 11. БИОХИМИЯ ПЕЧЕНИ
Печень играет жизненно важную, центральную роль в промежуточном обмене
веществ. Особенности ферментативного аппарата печени и ее анатомических связей с
другими органами дает возможность печени участвовать в регуляции практически всех
видов обмена веществ и поддерживать постоянство концентрации в крови многих
жизненно важных соединений.
Печень - большая промежуточная станция между портальным кругом и общим
кровообращением организма, поэтому все вещества, всасывающиеся из кишечника,
должны пройти через печень. Основные клетки печени – гепатоциты – занимают
центральное место в реакциях промежуточного метаболизма, и в биохимическом
отношении являются как бы прототипом всех остальных клеток организма.
галактоза
глюкоза
фруктоза конверсия
глюкоза
глюкозо-6-фосфат гликоген
аминокислоты
3-фосфоглицериновый ТАГ ФЛ
альдегид
аминокислоты
лактат глюконеогенез пируват ВЖК
ацетил-КоА
глицерин
При расщеплении глюкозы в печени основное значение имеет не окисление ее до
конечных продуктов – углекислого газа и воды, а запасание метаболитов, необходимых
для синтеза высших жирных кислот и глицерина, а следовательно, синтеза ТАГ,
которые в составе ЛП транспортируются в жировую ткань. 208
II. Регуляция липидного обмена
В печени имеется комплекс ферментов, катализирующий подавляющее большинство
реакций липидного обмена. Здесь синтезируются различные липиды – холестерин
(ХС), триацилглицериды (ТАГ), фосфолипиды (ФЛ), сфингомиелин – за счет
использования метаболитов, образующихся при окислении глюкозы.
В печени образуются липопротеины очень низкой плотности (ЛПОНП) -
транспортные формы липидов для доставки синтезированных в печени ТАГ через
кровь в адипоциты.
Печень синтезирует кетоновые тела – («жировое топливо») -источник энергии для
внепеченочных тканей.
Печень участвует в переваривании, всасывании липидов (путем синтеза парных
желчных кислот из холестерина и секрецией их в составе желчи в кишечник).
одании
при гол
кетоновые
тела
желчные
кисллоты ЛПОНП
ЛПВП
аминокислоты белки
NН3
α-кетокислоты
орнитиновый экспрессия
цикл генов
ДНК, РНК
глюкоза
мочевина
ПФП
мочевая
кислота
рибозо-5-фосфат
210
IV. Обезвреживающая функция печени
Печень является основным органом. где происходит обезвреживание природных
продуктов обмена и чужерожных веществ (ксенобиотиков).
Основные реакции детоксикации:
окисление;
восстановление:
метилирование;
ацетилирование;
конъюгация;
защитные синтезы (синтез мочевины)
Обезвреживание включает две фазы:
Фаза модификации (несинтетическая) - это ферментативная модификация
структуры, в процессе которой в молекулу обезвреживаемого вещества вводятся
дополнительные функциональные группы (амино-, гидроксильная) либо разрываются
связи (гидролиз), таким образом повышается растворимость обезвреживаемого
вещества в воде и (или) появляется возможность вовлечь это вещество в фазу
конъюгации.
Фаза конъюгации (синтетическая) - образование ковалентных связей между
молекулами обезвреживаемого вещества и биомолекулами организма: глюкуроновой
кислотой, сульфатами и др. Донорами остатка глюкуроновой кислоты является ее
активная форма – УДФ-глюкуроновая кислота, донором серной кислоты является 3-
фосфоаденозинфосфосульфат (ФАФС). Не имея функциональных групп, вещество не
может пройти фазу конъюгации.
Следует отметить, что некоторые вещества обезвреживаются только в одну фазу -
первую или вторую.
В первой фазе главная роль отводится микросомальному окислению, а именно
ферментным системам мембран эндоплазматического ретикулума – микросомальным
оксигеназам (монооксигеназам). Центральный компонент этой системы - цитохром
Р-450. Имеется ряд изоформ этого ферментав в эндоплазматическом ретикулуме
гепатоцитов, которые отличаются по специфичности, т.е. могут катализировать не
только гидроксилирование, но и другие реакции. В качестве доноров водорода (протона
и электрона) в реакциях гидроксилирования выступают НАДФН. Эти ферментные
системы образуют короткие электронотранспортные цепи микросомального окисления,
компонентами которых является ФАД-содержащий флавопротеин (ФП), цитохром b5 и
концевая монооксигеназа – цитохром Р-450:
RH
НАДФН Н+ ФП(ФАД) цит.b5 цит.Р-450 О2
Н2О
RH - обезвреживаемое гидрофобное вещество
211 R-OH - гидрофильное вещество, способное к конъюгации R-OH
Задания для самопроверки и самокоррекции
Задание 1
Выберете верное завершение для данного утверждения: «Синтезированные в
печени нейтральные липиды секретируются в кровь в составе …»
А. ЛПОНП
B. ЛПНП
C. ЛПВП
D. Хиломикронов
E. В свободном виде
Задание 2
Выберите верные завершения для данного утверждения: «Причинами снижения
образования ЛПОНП и последующего жирового перерождения печени
являются …»
А. Белковое голодание
B. Недостаток в продуктах питания метионина и холина
C. Отравление гепатотоксическими ядами
D. Алкоголизм
E. Ожирение
Задание 3
Выберите биохимические показатели, характеризующие детоксицирующую
функцию печени:
A. Содержание альбуминов в сыворотке крови
B. Содержание бета-глобулинов в сыворотке крови
C. Содержание мочевины в сыворотке крови
D. Активность монооксигеназ в гепатоцитах
E. Содержание билирубина в крови
Задание 4
Выберите верное завершение для данного утверждения: «Микросомальное
окисление – это реакции …»
А. Использования кислорода в биоэнергетических процессах
Б. Использования кислорода в «пластических» процессах
В. Распада жирных кислот в организме
Г. Дезаминирования аминокислот
Д. Аэробного распада глюкозы
---Э---
Эссенциальная фруктоземия 67
Этанол 57,63
Этиловый спирт - см. этанол