Т Е Х НИ К А Г И С Т О Л О Г И Ч Е С К И Х И С С Л Е Д О В А НИ Й
П ракт и кум
В оронеж 2005
2
С О Д Е РЖ АН И Е
В в едение… … … … … … ..… … … … … … … … … … … … … … … … … … … … .. 4
Т ема1. Ф иксац ия тканей … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … . 4
1.1 .О бщ ие прав илафиксац ии… … … … … … … … … … … … … … … … 5
1.2 . Ф иксирую щ ие средств аи их применение… … … … … … … … … 5
1.3 . П рактическое з адание I … … … … … … … … … … … … … … ......... 7
Т ема2. П ромы в ание и обез в ож ив ание … … … … … … … … … … … … … … ... 7
2.1. П ромы в ание гистологического материала. .… … … … … … … … 7
2.2. О без в ож ив ание гистологического материала… … … … … … … ... 8
2.3. П рактическое з адание II … … … … … … … … … … … … … … … … .. 8
Т ема3. Залив каматериалав плотны е среды . П риготов ление
гистологических красителей … … … … … … … … … … … … … … … .. 9
3.1. Залив кав парафин .… … … … … … … … … … … … … … … … … … .. 9
3.2. П риготов ление блоков … … … … … … … … … … … … … … … … .. 10
3.3. П рактическое з адание III ...… … … … … … … … … … … … … … … 10
Т ема4. П риготов ление гистологических срез ов … … … … … … … … … … . 11
4.1. П риготов ление срез ов изгистологических блоков .… … … … ... 11
4.2. Ф иксац ия срез ов напредметном стекле .… … … … … … … … … . 11
4.3. П рактическое з адание IV … … … … … … … … … … … … … … … ...11
Т ема5. О краш ив ание и з аклю чение гистологических срез ов … … … … ... 12
5.1. П риготов ление красителей и окраш ив ание … ..… … … … … … .. 12
5.2. Заклю чение срез ов в смолы … … … … … … … … … … … … … … ...13
5.3. П рактическое з адание V … … … … … … … … … … … … … … … ..14
Т ема6. Анализгистологических препаратов … … … … … … … … … … … … ..14
6.1. П рактическое з адание VI … … … … … … … … … … … … … … .....14
П рилож ение 1 … … … … … … … … … … … … … … … … … … … ... 15
П рилож ение 2 … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … .15
Л итература… … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … .. 15
4
ВВЕ ДЕ Н И Е
Т Е М А 1. Ф И К С А Ц И Я Т К А НЕ Й
Х лороформ 30 мл
Л едяная уксусная кислота 10 мл
Кусочки толщ иной до 5 мм фиксирую тв течение от30 минутдо 1 часа(в
зав исимости от толщ ины объ екта). П осле фиксац ии кусочки сраз
у переносят в
абсолю тны й спирт. Е сли фиксатор бы л приготов лен на96 % спирте, то кусочки
следует ополоснуть 2 – 3 раз а в спирте той ж е конц ентрац ии; в случае
необх одимости материалмож но остав итьв спирте на2 – 3 часа.
П римеч ание. Н еобх одимо, чтобы материал нах одился в фиксаторе не
дольш е, чем это нуж но для его пропиты в ания, так как удлинение фиксац ии
усилив аетсж атие и уплотнение объ екта.
Т Е М А 2. П РО М Ы В А НИ Е И О Б Е З В О Ж И В А НИ Е
О борудов ание и реактив ы : термостат, стеклянны е бю ксы и стаканчики,
пинц еты , стеклянны е или фарфоров ы е сита, марля, нитки, этанол, диоксан.
подв еш ив аю т з
а нитку в сосуд, наполненны й в одой . В ерх сосуда з акры в аю т
марлей и проделы в аю т в ней небольш ое отв ерстие. К в одопров одному крану
присоединяю т рез инов ы й ш ланг или прив яз ы в аю т ш нур (полоску бинта),
св ободны й конец которого пропускаю тчерезмарлю в сосуд и пускаю тпо нему
не сильную струю в оды . П ри небольш ом количеств е материалакаж ды й кусочек
промы в аю тв отдельной посуде. С реднее в ремя промы в ания 20 – 24 часа.
Т Е М А 3. З А Л И В К А М А Т Е РИ А Л А В П Л О Т НЫ Е С РЕД Ы
П РИ Г О Т О В Л Е НИ Е Г И С Т О Л О Г И Ч Е С К И Х К РА С И Т Е Л Е Й
О борудов ание и реактив ы : термостат, скальпель, пинц ет, ш патель,
бумаж ны е фильтры , спец иальны е дерев янны е блоки, фарфоров ы е круж ки с
носиком, спец иальны е формочки, предметны е стекла, стеклянны е емкости для
красителей , мерны е ц илиндры , стеклянны е в оронки, парафин, в оск, эфир,
этанол, гематоксилин, эоз ин, х лоралгидрат, глиц ерин, й одат натрия (NaJO3),
лимонная кислота, калий ны е кв асц ы , ледяная уксусная кислота, тимол,
формалин, куриное яй ц о.
3.1. Залив кав парафин
Д ля приготов ления в ы сококачеств енны х гистологических препаратов
необх одимы рав номерно тонкие срез ы с исследуемого объ екта. Д ля их
получения кусочки тканей надо пропитать и з алить такой средой , которая
прев ратила бы их в х орош о реж ущ ую ся массу. Н аиболее употребительны ми
для этих ц елей материалами яв ляю тся парафин, ц еллоидин и ж елатин.
П арафин при комнатной температуре – тв ердое гомогенное в ещ еств о, он
плав ится при 54 – 56оС . Д ля эластичности к нему следует прибав ить чисты й
пчелины й в оск в количеств е 2 – 5%.
Залив кав парафин требуетсоблю дение дв ух основ ны х услов ий : перв ое –
материал долж ен бы тьполностью обез в ож ен, в торое – он не долж ен содерж ать
спирт. П ерв ое услов ие обеспечив ается в проц ессе обез в ож ив ания и уплотнения
в батарее спиртов пов ы ш енной конц ентрац ии.
Д ля удаления спиртаи подготов ки к пропиты в анию парафином материал
обрабаты в аю т одним израств орителей парафина, обладаю щ им способностью
в ы теснять спирт. К таким в ещ еств ам относятся х лороформ, бенз ол, толуол,
ксилол, диоксан, сероуглерод и др. Чащ е использ ую т диоксан, х лороформ и
бенз ол. Т олуоли ксилолделаю ткусочки ткани более тв ерды ми.
В тех случаях , когда по услов иям работы необх одимо сократить в ремя
приготов ления парафинов ы х блоков , мож но применять ускоренную з алив ку.
П ри этом кусочки ткани толщ иной 1,5 – 2 мм помещ аю т в абсолю тны й (или
96%) спирт, ац етон или диоксан для фиксац ии и обез в ож ив ания на1 – 2 часаи
произ в одится однократная сменафиксатора.
10
Т Е М А 4. П РИ Г О Т А В Л Е НИ Е Г И С Т О Л О Г И Ч Е С К И Х С РЕ З О В
О борудов ание и реактив ы : термостат, микротом, электростолик для
суш ки парафинов ы х срез ов , чаш ки П етри, кисточки, препаров альны е иглы .
Д ля приготов ления гистологических срез ов определенной толщ ины
использ ую тспец иальное мех аническое устрой ств о – микротом.
В нимание! С ост ры м ножом микрот ома обращ ат ься с
ост орожност ью.
Т Е М А 5. О К РА Ш И В А НИ Е И З А К Л Ю Ч Е НИ Е Г И С Т О Л О Г И Ч Е С К И Х
С РЕ З О В
О борудов ание и реактив ы : термостат, пинц еты , колбы , стеклянны е
стаканы , мерны е ц илиндры , в оронки, «батарея» спиртов , ксилол, толуол,
готов ы е красители – гематоксилин и эоз ин (долж ны бы ть приготов лены на
занятии № 3), канадский бальз ам.
Т Е М А 6. А НА Л И З Г И С Т О Л О Г И Ч Е С К И Х П РЕ П А РА Т О В
О борудов ание и реактив ы : микроскопы , готов ы е гистологические
препараты , иммерсионное масло.
Д анная тема яв ляется итогов ой , определяется качеств о гистологических
препаратов . С туденту необх одимо использ ов ать з нания, полученны е на
лабораторны х занятиях по курсу «Г истология».
Л И Т Е РАТ У РА
__________________________________________________________________
Заказ№ … .. от… … … 2005 г. Т ираж 50 экз
. Л аборатория оператив ной полиграфии В Г У .