LABORATORIO LÍPIDOS

Luisa María Bravo, Ana Sofía Alfonso, Yisela Escobar

Microbiología Industrial
13/05/20

1. RESULTADOS Y ANÁLISIS:

● Proponga el orden de migración esperado de las muestras en cada una de las

cromatoplacas (orden ascendente). Suponga que el frente de corrida del disolvente
fue 5 cm. Proponga el Rf obtenido para las cuatro muestras. De acuerdo a la
investigación que hace sobre la composición del aceite de lorenzo, cuáles serían los
Rf obtenidos para el aceite. Tenga en cuenta la estructura química de los lípidos
separados y explique claramente los resultados propuestos con base en la polaridad
de los compuestos, el carácter polar de la fase estacionaria y de los solventes.

Las muestras que fueron tomadas para analizar corresponden a fosfatidil serina,
trioleina, trierucato, colesterol y el aceite de Lorenzo. El análisis se realizó en dos
cromatoplacas:
- Cromatoplaca #1: Solvente de 75% hexano y 25% acetato de etilo.
Para proponer un orden de migración entre los 5 compuestos anteriormente
nombrados es necesario organizarlos según su polaridad, como se muestra a
continuación, en orden ascendente de polaridad:
1. Trierucato
2. Aceite de Lorenzo
3. Trioleina
4. Colesterol
5. Fosfatidil serina
Teniendo este orden es pertinente realizar el siguiente análisis.
Un compuesto con mayor polaridad va a realizar el recorrido mucho más lento
debido a que tiene una afinidad mucho más fuerte por la fase estacionaria
(sílica gel), por esto, generalmente éstos compuestos tendrán un valor de Rf
menor que los compuestos menos polares. Teniendo en cuenta esto, se
propone el siguiente orden de migración teniendo en cuenta los valores de Rf.
1. Fosfatidil serina … Rf = 0,1
2. Colesterol … Rf = 0,2
3. Trioleina … Rf = 0,3
4. Aceite de lorenzo … Rf = 0,4
5. Trierucato … Rf = 0,5

- Cromatoplaca #2: Solvente de 25% hexano y 75% acetato de etilo.

Al usar un solvente más polar se puede observar que el orden no varía entre
las muestra pero que si variarán los valores de Rf para cada una, esto debido a
 que al usar un solvente polar, este se complementa con la polaridad de sílica
gel y permite un recorrido mucho más rápido, es decir que el orden de
migración y valores de Rf propuestos son los siguientes:
1. Fosfatidil serina … Rf = 0,6
2. Colesterol … Rf = 0,7
3. Trioleina … Rf = 0,8
4. Aceite de lorenzo … Rf = 0,9
5. Trierucato … Rf = 0,95

● Mencione las diferencias que espera encontrar en cada uno de los solventes y
sustente su respuesta.

El primer solvente a utilizar fue de 75% hexano y 25% acetato de etilo, teniendo en
cuenta que el hexano es apolar y el acetato de etilo es polar, se puede afirmar que en
la mezcla realizada con estos porcentajes el solvente va a tender hacia un polaridad
baja, lo que nos ayuda a sospechar que el recorrido va a ser un poco más lento por
parte de las muestras, ya que un solvente polar favorece la rapidez en la migración.
Por el contrario, el segundo solvente a utilizar fue de 25% hexano y 75% acetato de
etilo, es decir, la mezcla eluyente preparada con estos porcentajes tendrá una
polaridad alta, lo que va a favorecer la migración de las muestras y darán valores de
Rf mucho más altos.

● En caso de que tuviera que separar una mezcla formada por 4 clases diferentes de
fosfolípidos, ¿cuál fase móvil elegiría para la separación y porque?

Teniendo en cuenta que lo que se quiere separar son fosfolípidos, lo más correcto
sería utilizar una fase móvil con una alta polaridad, como la cromatografía de
intercambio iónico, ya que es una técnica de separación analítica que permite separar
físicamente distintos componentes de una solución por adsorción selectiva de
constituyentes de una mezcla. Este proceso permite la separación de iones y
moléculas polares, basándose en propiedades de la carga de las moléculas, se puede
usar en proteínas grandes, se emplea a menudo en purificación de proteínas.

● También se puede usar la solución reveladora (H2SO4-Vainillina) para la sílica,

utilizando un atomizador. Investigue sobre este tipo de revelado.

Es un revelador de uso genérico para fenoles, esteroides, entre otros, este método se
usa también ampliamente para la cuantificación de proantocianidinas (taninos
condensados) que existen en frutas y granos. Sin embargo este ensayo es específico
para flavan-3-ol, dihidrochalconas y proantocianidinas, que tienen un enlace simple
en su posición 2,3, también poseen grupos hidroxilos en la posición meta del anillo B.
 Como uso frecuente en el ensayo de vainillina, se usa la catequina (flavan-3-ol
monomérico). Como disolvente para el ensayo de la vainillina es usado el metanol,
pero este puede afectar cinética de reacción de la catequina y taninos con vainillina
diferencialmente.

Es un medio útil para la detección y cuantificación de taninos condensados en plantas,

gracias a su sensibilidad y simplicidad, así mismo debe ser considerada una
posibilidad de interferencias con dihidrochalconas y antocianinas, también se puede
usar para cuantificar taninos condensados en intervalo de 5_500 g con precisión y
exactitud mayores a 1 g.

Es un método basado en la condensación de la vainillina con proantocianidinas en una

solución acidificada. La Vainillina protonada hace reacción con el anillo del
flavonoide de posición 6 u 8. El producto se deshidrata fácilmente dando color rosa
ligero a un rojo cereza, la estabilidad del color vainillina-tanino puede incrementarse
cuando la luz, es excluida y la temperatura de reacción es controlada, obteniendo
resultados exactos y reproducibles.

● Investigue el porqué se le llama aceite de Lorenzo y su aplicación médica.

Este aceite recibe este nombre debido a que sus desarrolladores Augusto y Michaela
Odone, lo hicieron debido a que a su hijo Lorenzo le diagnosticaron ALD
(adrenoleucodistrofia). Por esta razón este aceite se utiliza como un método
preventivo de dicha enfermedad debido a que esta mezcla de aceites reduce los
niveles de ácidos grasos de cadena muy larga, que es la causa principal de la ALD.
Esto en consecuencia de la inhibición de la enzima que se encarga de degradar dichas
moléculas anteriormente mencionadas, o por un aumento en la producción de ácidos
grasos de cadena corta.