Вы находитесь на странице: 1из 95

Аннотация

Монография посвящена проблеме патофизиологии злокачественных


новообразований, в частности злокачественных глиом головного мозга.
Рассматриваются закономерности и особенности опухоль-ассоциированного
воспаления, способствующего росту и прогрессии глиом. Рассматривается
возможная роль опухоль-ассоциированного воспаления в превращении тоти - и
плюрипотентных клеток в клоны и их последующей прогрессии в
злокачественные опухоли. Рассмотрены некоторые аспекты мембрано -
ядерных взаимоотношений на примере лимфоцитов периферической крови у
больных с глиомами головного мозга. Впервые использован метод
поверхностного плазмонного резонанса для определения степени агрегации
клеток крови при злокачественных глиомах в сравнении с другими видами
нейрохирургической патологии. Разработаны методологические подходы к
применению наиболее оптимальных концентраций известных
антиагрегационных препаратов при перевивной глиоме крыс штамма 101.8.
Монография рекомендуется для онкологов, патофизиологов,
молекулярных биологов, биофизиков.
Содержание монографии изложено на 186 страницах и содержит 10
табл., 60 рис. и 309 источников литературы.
Предисловие

В книге рассматриваются процессы образования, роста и прогрессии


глиом головного мозга с позиций системного подхода на уровне типических
патологических процессов. Открытие опухоль-ассоциированного воспаления,
сопровождающего рост любых злокачественных опухолей в организме, в т.ч. и
глиом, дало возможность разграничить понятие злокачественной опухоли на
собственно опухолевый зачаток и воспаление. Воспаление, влияющее на
прогрессию злокачественных глиом, является компенсаторно-защитной
реакцией организма и относится к типическим патологическим процессам.
Опухолевый зачаток был представлен с современных позиций наших знаний о
стволовых клетках организма, обладающих тоти - и плюрипотентностью. В
книге выдвигается гипотиза о вероятности образования из стволовых клеток
клонов, которые в организме под действием опухоль-ассоциированного
воспаления превращаются в злокачественные опухоли. Эти предположения
подтверждаются открытием феномена обратного функционирования генов в
дифференцированных соматических клетках при клонировании овцы Долли.
Таким образом, понятие о злокачественных глиомах или любых других
опухолях переходит с тканевого уровня на условно популяционный уровень,
который и внутри организма характеризуется относительным бессмертием.
Такой подход предопределяет новый взгляд на понимание некоторых
механизмов опухолевого роста, включающий разделение иммортализации
стволовых клеток и злокачественного фенотипа, которые реализуются
различными механизмами. Так же возникло направление в рассмотрении
проблемы “части и целого” и её отображение на функционировании генома.
Авторами был создан прибор, использующий принцип поверхностного
плазменного резонанса, на котором была впервые разработана методика
определения степени агрегации на нативных клетках крови без использования
буферных систем или солевых растворов, которые могут вносить свои ошибки
с учётом открытия на мембранах клеток крови канальных ионотропных высокочувствительного метода поверхностного плазмонного резонанса.
рецепторов. В работе представлен опыт работы на приборе “Плазмон-6 ”, Изучение пролиферативной активности лимфоцитов в тесте РБТЛ также
включающий измерение степени агрегации клеток крови на более чем 6,5 свидетельствовало о главенствующей роли трансмембранного потенциала в
тысячах образцах крови. Для изучения более тонких механизмов и их отличий указанных причинно-следственных отношениях.
при различных нейрохирургических патологиях в кровь перед исследованиями В книге предложены новые принципы применения антиагрегационных
in vitro добавляли фармакопейные мембранмодифицирующие соединения, препаратов для подавления опухоль-ассоциированного воспаления при глиомах
представляющие собой известные фармпрепараты, такие как верапамил, головного мозга, основанных на патогенетических механизмах действия.
мовалис, кетамин, натрий-АТФ. Малодозовые концентрации этих препаратов Результаты ингибирования роста перевивной крысиной глиомы штамма 101.8
изменяли агрегацию клеток крови таким образом, что стало возможно показали, что противоопухолевая активность препаратов отмечалась только при
проводить дифференциальную диагностику между доброкачественными и действии определённых малодозовых концентраций, которые одновременно
злокачественными степенями глиом, между локальними черепно-мозговыми способствовали максимальному снижению степени агрегации клеток крови.
травмами и глиомами и т.д. Кроме того, применяя фармакопейные Новый взгляд на процессы патогенеза опухолевого роста, новый
мембранмодифицирующие соединения, являющиеся ингибиторами высокочувствительный метод в исследованиях агрегации клеток крови у
определённых рецепторов и каналов, удалось обозначить рецепторные мишени больных с патологиями ЦНС и новые подходы к лечению злокачественных
на мембранах клеток крови, задействованные в патогенетических процессах глиом в эксперименте, несомненно, привлекут интерес читателей к данной
подавления проявлений опухоль-ассоциированного воспаления при глиомах монографии.
головного мозга. Впервые описано влияние малодозовых концентраций Авторы выражают благодарность кандидату биологических наук,
фармпрепаратов по ингибированию активности канального NMDA - рецептора, старшему научному сотруднику Болтиной И.В., научному сотруднику
медленных кальциевых каналов L-типа, фермента циклооксигеназы-2. Драгунцовой Н.Г., младшим научным сотрудникам Веселовой О.И. и
Для более чёткого понимания причинно-следственных связей в Качур Н.В., а также лаборанту с высшим образованием Осипенко М.И. за
патогенезе злокачественных глиом были проведены исследования взаимосвязей помощь в работе над монографией.
между степенью агрегации клеток крови и количеством хромосомных и
хроматидных аберраций в лимфоцитах периферической крови. Лимфоциты
крови активно участвуют в патогенезе асептического воспалительного процесса Авторы
при опухолях головного мозга, проявляя морфогенетические функции.
Проведенные нами исследования дают возможность предположить наличие
зависимости стабильности клеточного генома от трансмембранного
потенциала, опосредованным проявлением которого является степень
агрегации клеток крови, исследованная на нативных клетках крови с помощью
Оглавление 2.2. Методы исследований степени агрегации, показателей текучести крови и
стр микрореологических параметров эритроцитов.......................................................60
Введение............................................................................................................................. 8 2.2.1. Показатели СОЭ как наиболее известный тест для определения степени
Глава 1. Опухоль-ассоциированное воспаление при глиомах головного мозга 13 агрегации клеток крови............................................................................................... 60
1.1 Эпидемиология глиом головного мозга.............................................................. 13
2.2.2. Современные методы определения степени агрегации клеток крови...... 68
1.2.Классификация глиальных опухолей.....................................................................14
Глава 3. Результаты и их обсуждение.......................................................................79
1.3. Выживаемость больных со злокачественными глиомами мозга.16 3.1 Исследование агрегации клеток периферической крови у больных с
1.4. Опухоль-ассоциированное воспаление при злокачественных опухолях.... 16 нейрохирургической патологией................................................................................ 79
1.4.1. Механизмы хронического воспаления при опухолях.................................... 16 3.2. Исследование агрегации клеток крови у крыс с перевивной глиомой
1.4.2. Особенности хронического воспаления при опухолях головного мозга.. 18 штамма 101.8 в процессе роста опухоли после перевивки..................................... 82

1.4.3 Механизмы опухоль-ассоциированного воспаления...................................... 19 3.3. Исследование клеточной плотности глиом в зависимости от их степени
злокачественности.......................................................................................................... 83
1.4.4 Влияние опухоль-ассоциированного воспаления на микроокружение
3.4. Влияние концентрационных разведений мембранмодифицирующих
опухолей........................................................................................................................... 20
препаратов на агрегацию клеток крови..................................................................... 87
1.4.5 Противовоспалительная терапия при злокачественных опухолях............... 23
3.4.1 Показатели степени агрегации крови при различных видах
1.5. Роль стволовых клеток в опухолевом росте и механизмы клонирования нейрохирургической патологии...............................................................................Ю0
соматических клеток......................................................................................................24
3.5. Исследование хромосомных аберраций в лимфоцитах периферической
1.5.1. Опухоль - болезнь стволовых клеток............................................................... 24 крови при глиомах и ЧМТ.........................................................................................118
1.5.2. При клонировании организмов животных было обнаружено, что гены
3.6. Влияние in vitro верапамила и кетамина на цитогенетические показатели у
могут функционировать обратимо..............................................................................27 больных с опухолями головного мозга................................................................... 122
1.5.3. Особенности роста эмбриональных стволовых клеток в виде клонов..... 30
3.6.1. Характеристика цитогенетических показателей, которые применяются в
1.5.4. Тоти- и плюрипотентные свойства стволовых клеток...................................31 данном исследовании.................................................................................................125
1.6 Эпигенетический эффект воспаления и метилирование клеточного генома 34 3.6.2. Влияние фармпрепаратов верапамила и кетамина на цитогенетические
1.7 Иммуносупрессия....................................................................................................36 показатели у больных с нейрохирургической патологией.................................. 128

1.8 Эксайтотоксичность............................................................................................ 38 3.7. Влияние концентрационных разведений ФГА на пролиферативную


1.8.1. Ионотропные рецепторы................................................................................... 39 активность лимфоцитов.............................................................................................Иб

1.9. Регуляция NMDA - рецепторов их антагонистами........................................... 45 3.8. Влияние верапамила и кетамина на рост перевивной глиомы 101.8......... 141
1.10 Глутаматные рецепторы иммунокомпетентных клеток......................... 49 Заключение.................................................................................................................. 147
1.11 Митохондриальная пора...................................................................................... 49 Общие выводы............................................................................................................ 154
Литература................................................................................................................... 156
1.12. Общая стратегия лечения глиом.........................................................................51
Глава 2. Объект и методы исследований...................................................................55
2.1. Объект исследования...........................................................................................55

6 7
Введение стимулировании прогрессии злокачественных опухолей, в т.ч. и

Всем, кто занимается исследованием механизмов опухолевого роста, злокачественных глиом головного мозга, показало, что новообразование - это

хорошо известно, что нет ни одного общеизвестного показателя, который бы не совокупность двух процессов, в которой типическим патологическим

изменял своих параметров при различных опухолях, будь то генетический, процессом является только воспаление.

биохимический, биофизический или любой другой маркер. Это многообразие Воспаление способствует появлению опухолевого зачатка и

изменений показателей имеет один существенный недостаток: до сих пор не сопровождает его дальнейший рост и прогрессию. Воспалительная реакция -

ясно, что же является главным звеном в патогенезе злокачественных это защитно-компенсаторная реакция организма. Почему же она не только не

новообразований? Мы попытались в нашей работе указать на круг проблем, защищает организм от опухоли, но ещё и стимулирует её рост, вызывая гибель

решение которых хотя бы приблизит нас к пониманию главного звена в организма? Здесь уместно вспомнить слова И.И. Мечникова о том, что

патогенезе опухолевого роста и, следовательно, в дальнейшем появится воспаление обеспечивает выживание популяции, жертвуя отдельными особями.

возможность проводить разработки патогенетических принципов лечения Выживание популяции в эволюции является более важным фактором, чем

злокачественных опухолей. выживание индивидуальных особей. Известно, что организмы на более низких

Одним из главных препятствий в исследованиях механизмов уровнях эволюции перед своей- гибелью оставляют, как правило,

опухолевого роста является отсутствие четких представлений о причинно- многочисленное потомство (например, это чётко прослеживается у растений,

следственных связях. Для того чтобы иметь объективное представление о том, образующих множество клонов). Можно сделать парадоксальное

является показатель причиной или следствием в патогенезе опухолевого роста, предположение, что гибель индивидуумов в конечном итоге способствует

следует рассмотреть сам процесс на системном уровне или на уровне увеличению популяции. Проведя экстраполяцию по отношению к организму

типического патологического процесса. человека можно также предположить, что старый, ослабленный или больной

Известно, что опухоль чаще возникает в тканях, в которых флогогенные организм, подобно организмам, находящихся на более низкой ступени

факторы (факторы, вызывающие воспаление) способствуют развитию эволюции, будет склонным к размножению путём клонирования соматических

длительных хронических воспалительных процессов. Появление некрозов, клеток. Однако в организме человека такой клон, образованный

особенно в быстро растущих опухолях, способствует активации т.н. опухоль - тотипотентными и мультипотентными стволовыми клетками экстраутеринно,

ассоциированного воспаления, которое сопровождает рост, прогрессию и не сможет развиваться до полноценного организма. О многочисленных

метастазирование опухолей вплоть до гибели организма - опухоленосителя. попытках такого рода свидетельствуют папилломы, полипы и другие

Например, в такой быстрорастущей, рано метастазирующей и высоко доброкачественные опухоли, часто возникающие в старческом возрасте. При

злокачественной опухоли, как меланома, некрозы появляются в центре опухоли неблагоприятном стечении обстоятельств рост клона может приобретать

уже в то время, когда она имеет размер диаметра всего около 3-5 мм. патологический характер, и под влиянием факторов воспаления перерождаться

Принято считать, что опухоль - это типический патологический в злокачественную опухоль. Мы попытаемся выяснить, какие механизмы

процесс. Открытие роли опухоль-ассоциированного воспаления в способствуют появлению клонов и какую роль при этом играет опухоль-
s
ассоциированное воспаление. Можно провести аналогию между человеческой первичная альтерация (повреждение) клеток организма за счёт внешних и, в
популяцией и клонированием экстраутеринных зародышей в условиях меньшей степени, внутренних факторов (например, камнеобразование в почках
целостного организма. Известно, что популяционный уровень характеризуется или жёлчном пузыре). Вторичная альтерация клеток организма происходит за
потенциальным бессмертием, в отличие от уровня индивидуального организма. счёт медиаторов воспаления, образующихся в организме в ответ на первичную
В организме-опухоленосителе “клонированные организмы” можно также альтерацию, с которой они составляют I стадию воспалительного процесса.
рассматривать в статусе условного “популяционного” уровня, бессмертие Процессы агрегации и экссудации клеток крови представлены во II стадии
которого определяется и поддерживается иммортализованными стволовыми воспаления, а клеточная пролиферация и дифференцировка наблюдаются в
клетками и наличием опухоль-ассоциированного воспаления. завершающей, III стадии воспалительного процесса. К защитно-
Это предположение могло бы носить гипотетический характер, если компенсаторным реакциям организма относятся вторичная альтерация,
бы не одно событие, зафиксировавшее факт очень редкого явления, относящаяся к I стадии, II и III стадии воспаления. Первичная альтерация, или
потрясшего медицинскую общественность. Нейрохирурги США во время некротическая гибель опухолевых клеток, является причиной активации
операции по удалению опухоли мозга у трёхдневного младенца обнаружили в опухоль-ассоциированного воспаления. Следовательно, стимуляция
его голове крошечную ступню. Также в голове у маленького Сэма Эскибела опухолевого роста во многом будет зависеть от защитно - компенсаторных
врачи нашли и рудименты другой ступни, кисти и бедра. По словам медиков, реакций организма и поэтому изучение механизмов некроза в опухолевой ткани
этот случай - «уникальный, просто неслыханный» (газета «Пульс Киева», - должно стать одним из ключевых моментов в исследовании патогенеза
22.12.09г.- “ Аномалия // Нога из головы”). Вероятно, стволовые клетки плода злокачественных опухолей. Существует предположение, что воспаление во
с плюрипотентными свойствами в условиях отсутствия воспаления взрослом организме постоянно поддерживает жизнеспособность первичной
образовали в головном мозге другие органы. Однако развитие воспаления у опухоли за счёт постоянной стимуляции её роста [40]. Одним из классических
трёхдневного младенца привело к одновременному появлению опухолевого определений понятия ’’опухоли” является рост опухоли “самой из себя”,
зачатка из этих органов. Только ранний возраст позволил наблюдать такое который не зависит от общего плана строения организма. Только эмбрион в
уникальное явление как развитие в головном мозге ребёнка экстраутеринного организме может расти “сам из себя”, реализуя свою собственную

организма. генетическую программу, не согласующуюся с потребностями организма. При


Следует ещё раз подчеркнуть, что опухолевый процесс развивается не этом иммунные клетки в рамках воспалительного процесса специализированы
сам по себе, а в рамках существующих, генетически запрограммированных на уничтожение тканей и органов экстраутеринного зародыша по принципу их
защитно-компенсаторных реакций, которые вносят в патогенез опухолевого гистосовместимости. Вероятно, это относится и к опухолям, которые состоят в
процесса очень весомый вклад и без которых опухолевый процесс в организме основном из клеток тех тканей, в которых они возникли, что и привело к
протекал бы иначе. Поэтому необходимо отдифференцировать процессы, ошибочному представлению о них, как о “злокачественных тканях”. Следует
присущие опухоль-ассоциированному воспалению, от процессов, относящихся учитывать также и клеточные взаимосвязи стволовых клеток, процессы
к опухолевому зачатку. Активатором воспалительного процесса является индукции и интеграции, формирующие в итоге ткани и органы зародыша из
11
плюрипотентных клеток. Разрушение межклеточных связей зародыша во профилактику рецидивов злокачественных опухолей и, в частности,
взрослом организме под воздействием факторов вторичной альтерации и злокачественных глиом головного мозга. При этом должны использоваться
антигенов главного комплекса гистосовместимости приводит к глобальному фармпрепараты, которые оказывают эффективное противовоспалительное
изменению функций стволовых клеток, которые необходимо изучать, действие, и при длительном применении не обладают генотоксичностью и
моделируя условия “части и целого”. побочными эффектами. Кроме того, они должны обладать селективным
С учетом вышесказанного, представляется актуальным изучение воздействием на мишени, которые прямо или опосредованно связаны с
опухоль-ассоциированного воспалительного процесса при злокачественных опухолевым ростом, не затрагивая при этом здоровые клетки и ткани. В работе
глиомах головного мозга на системном уровне. Как уже было сказано, одним из поставлена также задача разработки экспериментальных подходов для
ранних системных показателей воспаления является изменение степени наиболее оптимального применения этих препаратов в клинических условиях с
агрегации клеток крови (II стадия воспаления), которая зависит, в первую целью получения выраженного противоопухолевого эффекта.
очередь, от величины трансмембранного потенциала [73]. Глава 1. Опухоль-ассоциированное воспаление при глиомах
Поэтому главной научной задачей мы поставили изучение головного мозга
закономерностей и особенностей механизма агрегации клеток крови при 1.1 Эпидемиология глиомТоловного мозга
воспалении, сопровождающего рост и прогрессию глиом головного мозга.
Нейродегенеративные заболевания и злокачественные опухоли являются
Существует мнение, что среди многих факторов онтогенеза взаимосвязь между
главной причиной заболеваний и смертности в западном полушарии. В
уровнем клеточного заряда и функционированием клеточного генома является
настоящее время во всём мире отмечается рост числа новообразований.
одним из основных методологических подходов к решению проблем старения и
Количество опухолей головного мозга среди них не столь велико ( 0 ,7 - 1,5%), но
опухолевого роста [70]. В свете этих научных интересов актуальной задачей
высокая инвалидизация больных и летальность, а также значительный
является сопоставление исследований количества аберраций хромосом в
социальный, экономический и моральный ущерб определяет тяжесть этих
лимфоцитах периферической крови при воспалении и при различных степенях
заболеваний. На современном этапе развития нейроонкологии не существует
прогрессии глиом головного мозга с агрегацией клеток крови при аналогичных
регламентированных мер профилактики заболеваемости опухолями головного
условиях. Коррекция воспалительного процесса может способствовать
мозга, в связи с этим по всем прогнозам в ближайшем будущем реальных
увеличению продолжительности жизни опухолевого больного. Известны
перспектив относительно снижения заболеваемости опухолями мозга не
работы, использующие для подавления воспалительного процесса при
предвидится.
злокачественных опухолях гормоны (дексаметазон), аспирин, различные
Самая большая группа новообразований объединяет нейро­
антибиотики. Все они, как правило, при длительном применении оказывают
эктодермальные опухоли. Наибольшую долю среди опухолей головного мозга
неблагоприятное воздействие на организм, вызывая разнообразные
имеют глиальные опухоли (56,4% среди мужчин и 37,4% среди женщин). Из
осложнения. Коррекция опухоль-ассоциированного воспаления является
глиальных опухолей наиболее велика доля глиобластом (20 ,8% у мужчин и
длительным процессом, направленным в послеоперационном периоде на
12 13
13,6% у женщин), а также астроцитом (22,1% у мужчин и 14,8% у женщин), медленно растущие (Low-grade) и быстрорастущие (High-grade).
причем злокачественные формы астроцитом преобладают над Гистологическая градация злокачественности астроцитарных опухолей
доброкачественными в 1,3 раза среди лиц мужского пола и в 2 раза среди различает 4 степени:
женщин. Наибольший процент заболевших приходится на возраст от 40 до 54
I - пилоцитарные астроцитомы;
лет (30,8%) и от 55 до 69 лет (31,4%). Более половины (62,2%) всех больных с
опухолями головного мозга - лица в возрасте от 40 до 69 лет. Удельный вес II - диффузные астроцитомы (хорошо дифференцированные медленно

лиц старческого (старше 70 лет) и детского (до 9 лет) возраста - значительно растущие доброкачественные опухоли);

меньше (3,2% и 6,2% соответственно). Число больных женщин в возрасте Ш - анапластические астроцитомы;
старше 40 лет в 1,5 -1,8 раза больше, чем мужчин [68 ].
IV - глиобластомы (быстро растущие, низко дифференцированные,
1.2.Классификация глиальных опухолей
злокачественные опухоли [186]).
По классификации Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) Глиобластомы (глиомы IV ст. зл.), образовавшиеся в результате
(Лион, 2000 г.) к глиомам следует относить астроцитомы и прогрессии из глиом предыдущих стадий (II и III ст. зл.), относятся к группе
олигодендроглиомы разной степени злокачественности. Среди первичных вторичных глиобластом. Первичные глиобластомы не имеют переходных
опухолей головного мозга приблизительно 60% являются злокачественными, степеней злокачественности. Вероятно, их источник происхождения отличается
40% - доброкачественными. Такое разделение носит условный характер и от такового при вторичных глиомах.
основывается на клинико-морфологических сопоставлениях. Наиболее часто Классификация злокачественных астроцитарных опухолей основана на
встречаются менингиомы (22-23%), глиобластомы (24-25%) и определении степени целлюлярности, ядерного или клеточного полиморфизма,
анапластические астроцитомы (20%). Глиомы составляют около 50-55% всех эндотелиальной пролиферации, митозов и некрозов. Одна их общепринятых
первичных внутримозговых злокачественных опухолей нейроэпителиального классификаций учитывает 4 основных критерия злокачественности
происхождения. Среди всех злокачественных опухолей различных органов и астроцитарной опухоли: атипизм ядра, митозы, эндотелиальная пролиферация
систем человека на опухоли головного мозга приходится около 1,4% случаев. и некрозы [125]. Три из четырёх критериев отображают пролиферативную
Имеет место тенденция постепенного увеличения заболеваемости опухолями активность клеток опухолей и сосудов эндотелия, и только один из них -
ЦНС, при этом за последние годы возрастает процент заболеваемости среди клеточную гибель. В нашей работе внимание обращено на механизмы
молодого населения. возникновения некрозов, которые являются активаторами опухоль-
Глиомы - это опухоли, происходящие из клеток глии. По ассоциированного воспаления при глиомах.
классификации (ВОЗ, 1993 г.) все глиальные опухоли разделяют от Глиомы головного мозга практически не метастазируют, но являются
предполагаемой клетки-источника [45]. Астроцитарные опухоли по очень интересным объектом для изучения механизмов прогрессии, т.е.
классификации ВОЗ в зависимости от агрессивности их роста подразделяют на постепенного перехода от более доброкачественных форм роста (глиомы II ст.

14 15
зл.) к злокачественным (глиомы III и IV ст. зл.). Кроме того, неизвестны повышает риск возникновения злокачественных опухолей, индуцируя синтез
различия в происхождении первичных и вторичных глиом, что также медиаторов воспаления: свободных радикалов, альдегидов, цитокинов,
представляет актуальную научно-исследовательскую задачу. факторов роста, таких ключевых ферментов воспаления, как циклооксигеназа-2
и индуцибельная NO-синтаза, различных транскрипционных факторов
1.3. Выживаемость больных со злокачественными глиомами
(например, ядерный фактор к(3), эйкозаноидов [144] и многих других
мозга
медиаторов. Чем продолжительнее воспалительный процесс, тем больше риск
Выживаемость больных с дифференцированными, медленно растущими
возникновения опухоли [260]. Было показано, что блокада NFk(3 сигнального
глиомами колеблется от 32 до 68 % (5 лет) и от 19 до 39% (10 лет).
пути в клетках глиобластомы, дифференцирующихся in vitro и in vivo, приводит
Выживаемость больных с анапластическими, быстро растущими
к остановке репликации и старению этих клеток [218]. Факторы вторичной
астроцитомами составляет до 1 года - 85,5% больных, до 2 лет - 70,9%, до 3 лет
альтерации влияют на контроль экспрессии онкогенов и генов-супрессоров при
- 27,3%. При глиобластомах средняя продолжительность жизни составляет до 1
воспалительном процессе, способствуя образованию различных опухолей.
года - 68,1%, до 2 лет - 23,7%, до 3 лет - 4,3% [53].
Клетки воспалительного процесса, такие как макрофаги и нейтрофилы,
1.4. Опухоль-ассоциированное воспаление при злокачественных
высвобождают против инфекционных агентов высокореактивные элементы
опухолях оксигены и нитрогены, повреждающие молекулы ДНК [251]. Долгое время
Как стало известно, хроническое воспаление и злокачественные полиамины считали маркерами опухолевого роста, однако путресцин,

опухоли - это два взаимосвязанных процесса: спермидин и спермин являются, в первую очередь, сигнальными молекулами
1) хроническое воспаление вызывает предрасположенность разрушения структур ДНК, а уже во вторую очередь активизируют фермент

индивидуума к заболеванию опухолями; орнитиндекарбоксилазу, что приводит к повышению пролиферативного


2 ) развивающаяся опухоль индуцирует микро-/или макроокружение в потенциала клеток [245]. Вероятно, этот механизм также осуществляется через
виде хронического воспаления, ассоциированного с усилением роста опухоли и воспалительный процесс. При хроническом воспалении повышенный уровень

появлением метастазов. повреждений ДНК, наряду с ускоренным синтезом и увеличением повреждений


1.4.1.Механизмы хронического воспаления при опухолях ферментов репарации, торможением апоптоза, стимуляцией ангиогенеза и
Ещё в XIX в. была впервые осознана взаимосвязь между раком и клеточной пролиферации, относят к предраковым состояниям [161].
воспалением. Наличие проявлений хронических воспалительных реакций при А септические воспалительные процессы также способствуют появлению
различных опухолях наблюдал Р. Вирхов, а также в более позднее время и злокачественных опухолей. Мало кто обращал внимание на тот факт, что
Ю. Конгейм. В последние годы интерес к этой проблеме значительно возрос индукцию злокачественных опухолей с помощью разнообразных канцерогенов

[86]. в основном проводили и продолжают проводить на животных, а не в клеточной


Эпидемиологическими исследованиями было показано, что хроническое культуре. Оказывается, индуцировать канцерогеном опухоль в условиях in vitro
воспаление предваряет развитие многих форм рака. Хроническое воспаление Удаётся очень редко. Введение же канцерогена в организм сопровождается
16 17
развитием хронического асептического воспаления, на фоне которого часто цитотоксические Т-клетки и др. [80]. Как обнаружилось, в процессе роста
появляются опухолевые зачатки. внутримозговых опухолей происходит разрушение гемато-энцефалического
1.4.2. Особенности хронического воспаления при опухолях барьера (ГЭБ) и погибающие опухолевые клетки выделяют в прилежащие
головного мозга. кровеносные сосуды массу биологически активных факторов, которые
Головной мозг, как известно, является забарьерным органом. Одно способствуют миграции клеток крови из кровеносных сосудов в опухолевый
время предполагали, что гемато - энцефалический барьер (ГЭБ) защищает очаг. Кроме того, из костного мозга происходит миграция стволовых клеток
ткани мозга от воспалительных процессов. Однако связь между черепно­ гематогенного происхождения, которые могут дифференцироваться в нейроны
мозговыми травмами (ЧМТ) и опухолями головного мозга известна давно. и глию, замещая дефекты в тканях опухолевого и неопухолевого генеза [78, 97 ,
Описаны случаи возникновения глиом после огнестрельных ранений и 108, 120]. Вероятно, все эти клетки посредством факторов роста, которые они
механических непроникающих травм черепа [248]. У 24% больных с глиомами синтезируют, способствуют восстановлению опухолевой массы, стимулируя её
головного мозга в анамнезе отмечено наличие черепно-мозговых травм. В разрастание, васкуляризацию, инвазию в прилежащие соседние ткани и т.д.,
среднем опухоли головного мозга возникали через 3 месяца - 12 лет после выполняя защитно-компенсаторную функцию в ответ на частичную гибель
ЧМТ, а в некоторых случаях опухоли возникали и через 15-20 лет после травмы опухолевой массы. Известно, что тромбоцитарный фактор роста, кислый и
[132, 188]. Каких-либо серьёзных концепций, объясняющих эти наблюдения, не основной факторы роста фибробластов, а также некоторые другие ростовые

существует. факторы стимулируют пролиферацию глиом. Макрофаги, инфильтрирующие


В головном мозге, который является иммунологически опухоль, вырабатывают эпидермальный фактор роста, который стимулирует
привилегированным органом, воспалительные процессы имеют свои рост многих злокачественных опухолей, в том числе и глиом [269]. Следует
характерные особенности. Клетки микроглии, активные участники предположить, что одним из стимулов для последующего роста и прогрессии
внутримозгового воспалительного процесса, в отличие от других клеток мозга, глиом может стать хронический асептический воспалительный процесс.
образуются в костном мозге и мигрируют в головной мозг в позднем 1.4.3 Механизмы опухоль-ассоциированного воспаления
эмбриональном периоде. Среди многих молекул, клетки микроглии К сожалению, большинство работ ограничивается установлением связи
вырабатывают хемоаттрактанты, их рецепторы, и несут адгезивные молекулы между хроническими воспалительными заболеваниями и злокачественными
[7], которые активно участвуют в процессе воспаления. Характерно, что опухолями, не раскрывая патогенетических механизмов этих процессов [84, 98,
воспалительные процессы в головном мозге, ассоциированные с ростом глиом, 120, 138, 161, 170, 204, 260]. Кроме того, ранее онкологами не разделялись
как правило, не обнаруживаются общепринятыми системными механизмы, принадлежащие сугубо опухолевому росту, и сопровождающим
гематологическими показателями, такими как СОЭ, С-реактивный белок и др. этот рост защитно-компенсаторным реакциям.
Однако, в эксперименте на животных было показано, что внутримозговую Помимо воспалительного процесса, вызванного различными
глиому С6 после перевивки инфильтрируют, кроме клеток микроглии, также и этиологическими факторами, способствующего новообразованию опухолей,
клетки периферической крови: лимфоциты, макрофаги, фибробласты, существует также воспалительный процесс, вызываемый исключительно
18 19
некрозом клеток уже существующих опухолей. А.Н. Лучником впервые в [84, 85, 117, 196]. Так, в обзоре [9] подробно описана роль клеток иммунной
2000 г. был сформулирован общий принцип поддержания злокачественного системы в формировании микроокружения опухоли и влияния на её свойства.
роста во всех типах опухолей [40]. Его сущность заключается в том, что Автор приводит сведения об усилении роста опухоли клетками
опухоль жертвует небольшим количеством погибающих клеток ради микроокружения и их влияния на активацию иммуносупрессирующих
стимуляции пролиферации остальных клеток опухоли за счёт развития воздействий. Среди факторов, важных для формирования МкО различных
воспалительного процесса, и получившего название “синдром незаживающей солидных опухолей, центральное место занимает гипоксия или оксидативный
раны”. В этом обзоре впервые было обращено внимание на воспаление, как на стресс [203, 204]. При гипоксии в опухолях индуцируется фактор транскрипции
механизм “самоподдержания” опухолевого микроокружения. Следует генов (HIF), обеспечивающих адаптацию клеток к гипоксии и стимуляцию
подчеркнуть, что, вероятно, механизмы развития опухолей и поддержания ангиогенеза [145, 258]. HIF регулирует частоту апоптоза, влияет на скорость
опухолевого микроокружения могут быть различными. Мы предполагаем, что в клеточного цикла, контролирует гликолиз, внутриклеточный pH, клеточную
первом случае воспалительный процесс стимулирует образование опухолей инвазию и миграцию, а также некоторые другие важные процессы в МкО. HIF
через механизм потери гетерозиготности в ядерных хромосомах, а во втором является сильным промотором опухолевого роста. На экспрессию HIF
случае - путём непосредственного воздействия на клетки опухоли медиаторов существенно влияет система ядерного фактора транскрипции NF-kappa В [258,

воспаления. 267]. Мишенями указанных факторов являются гены VEGF-A, ангиопоэтина-2 ,


Идею А.Н. Лучника поддержала П.М. Шварцбурд [74, 256, 257], которая цитокинов, флогогенных белков, ферментов ЦОГ -2 и синтазы оксида азота
развила представления предыдущего автора анализом механизмов [290]. Микроокружение солидных опухолей характеризуется также реактивной
дисрегуляции, способствующих индукции предракового микроокружения стромой с избытком медиаторов воспаления и лейкоцитов, дисрегуляцией
(ПРМ). В работе были обобщены современные данные о сравнительном сосудов и протеолитических энзимов. Опухоль-ассоциированные макрофаги
влиянии острого и хронического воспаления на индукцию ПРМ и конкретные играют существенную роль во взаимосвязи между воспалением и опухолью,
механизмы, поддерживающие состояние ПРМ в перманентном режиме. Т.обр., суммируя общее количество функций (ускорение пролиферации клеток
воспалительный процесс, вызванный гибелью клеток опухоли, носит характер опухоли и ангиогенез, непрерывный матричный кругооборот, подавление
эндогенного хронического асептического микровоспаления и отличается от адаптивного иммунитета), и существенно стимулируя опухолевую прогрессию
других видов воспаления влиянием на микроокружение опухоли (МкО). [269]. Современные исследования направлены на выяснение молекулярных
1.4.4 Влияние опухоль-ассоциированного воспаления на путей, связывающих опухоль и воспаление [117]. В опухолевом
микроокружение опухолей. микроокружении хроническое воспаление вносит свой вклад в пролиферацию и
Впервые учение о микроокружении опухоли (МкО) было выживание злокачественных клеток, развитие ангиогенеза, метастазов,
сформулировано S.Paget и I.Filder [139]. Существует мнение, что в снижение адаптивного иммунитета, понижение чувствительности к гормонам и
перифокальной зоне любой опухоли процессы носят воспалительный характер химиотерапевтическим препаратам [117, 269]. Современные исследования
[74 ], которое в последнее время получило экспериментальное подтверждение подтверждают тот факт, что опухоль-ассоциированное воспаление индуцирует
20 21
генетическую нестабильность за счёт медиаторов воспаления, что приводит к блокируя завершающую стадию процесса (синдром “незаживающей раны”).
накоплению генетических альтераций в опухолевых клетках [117]. Два Нестабильность генома опухолевых клеток приводит к распаду молекул ДНК и
сигнальных пути связывают воспаление и рак: внутренний сигнальный путь, РНК, к нарушению синтеза белка в клетках и других жизненно важных
при котором активация различных классов онкогенов способствует экспрессии клеточных функций, а также к нарастанию выраженности процессов
взаимосвязанных с воспалением программ, приводящий к реконструкции микровоспаления. Всё это, в итоге, способствует усугублению процессов
воспалительного микроокружения; и внешний сигнальный путь, создающий опухолевой прогрессии. Механизмы этих процессов в настоящее время мало
условия для стимуляции развития опухолей [203, 204]. Ключевым регулятором изучены, и со временем, возможно, будут использованы в качестве новых
в точке пересечения этих двух путей являются транскрипционные факторы мишеней для целенаправленной противоопухолевой терапии в практической
(NFkB и др.), цитокины (TNF и др.), и хемокины. Т.о., воспаление является медицине.
главным компонентом МкО, и клетки опухолей генерируют те же медиаторы 1.4.5 Противовоспалительная терапия при злокачественных
воспаления, поддерживая персистирование МкО. Кроме этого, следует опухолях
отметить, что воспалительный процесс, сопровождающий рост опухолей, во Несмотря на достижения современной онкологии, полное излечение
многом обусловлен взаимодействием гормональных перестроек в метаболизме опухолей достигнуто только при некоторых локализациях рака (молочной
эстрогенов, андрогенов, инсулина и изменений в энергетическом обмене [267]. железы, кожи, желудка и др.). Успехов в лечении опухолей других локализаций
При хроническом панкреатите [276] в клетках поджелудочной железы и, в частности, злокачественных глиом головного мозга, пока не достигнуто.
обнаруживаются мутации гена CFTR, кодирующего белки в анионных каналах, Известны литературные данные о том, что комбинированное воздействие
что особенно важно при функционировании протоков клеток поджелудочной цитостатиков и ангиостатическая терапия оказывают более выраженное
железы. Указанный ген контролирует поток хлоридов и бикарбонатов через эти влияние на опухоли при условии применения противовоспалительных
каналы, регулируя выделение секреции клетками железы. Поэтому нарушение препаратов [227, 240]. Так, авторы одного из обзоров [88], посвящённого этой
функции этого гена приводит к избыточному накоплению ферментов проблеме, подчеркивают существенную значимость применения методов
поджелудочной железы, особенно после активации трипсинов, что может стойкого подавления воспалительных процессов при опухолевом росте,
повышать риск возникновения панкреатитов и рака pancreas [297, 138]. приводя примеры о снижении частоты опухолевого роста на фоне длительного
По сравнению с воспалительными процессами, вызывающими рост приёма аспирина и других нестероидных противовоспалительных средств.
опухолей, которые могут иметь инфекционную природу, микровоспаление, Известно, что длительное применение аспирина снижает риск возникновения
асоциированное с ростом практически всех видов опухолей, включая и опухоли колоректального рака [88]. Опубликованы также данные о большом количестве
головного мозга, является асептическим. Естественно, что асептическое нозологий, которые можно лечить с помощью длительного приёма аспирина
микровоспаление при опухолевом росте отличается от такового при раневом [123]. Селективные ингибиторы циклооксигеназы-2 также можно отнести в
происхождении. При опухолях стволовые клетки и другие эмбриональные группу многообещающих противоопухолевых соединений [123]. Сочетанное
клетки вступают в антагонистические отношения с микровоспалением. применение СОХ- и LOX-ингибиторов, которые применяются при лечении
22 23
воспалительных процессов, в настоящее время исследуются в качестве Ранее опухоль изучали как патологическую ткань, содержащую
потенциальных противоопухолевых лекарств. Их применение теоретически злокачественные клетки, которые являются потомками нормальной клетки,
обосновано, так как недавними исследованиями было показано, что изменения мутировавшей под воздействием различных канцерогенов. Все дальнейшие
метаболизма арахидоновой кислоты тесно связаны с механизмами теоретические и практические предпосылки по изучению механизмов
канцерогенеза [149]. Использование аспирина при различных формах рака опухолевого роста базировались на этом убеждении. Тем не менее,
показало его эффективность в группах больных, не злоупотребляющих некоторые вопросы было невозможно трактовать, исходя из этого постулата.
курением [88 ]. Препараты, снижающие уровень холестерина в организме, Так, например, В.Я. Фель [69] отметил, что в тканях опухолей,
особенно в комбинации с противовоспалительными препаратами, могут расположенных в печени, находятся антигены не только печёночного
тормозить рост некоторых форм злокачественных опухолей, что предполагает происхождения, но и принадлежащие тканям почек (т.н. антигенная
использование статинов в качестве противоопухолевых фармпрепаратов [239]. дивергенция клеток опухолей). Злокачественные опухоли, образовавшиеся
Вероятно, сочетанное применение препаратов, ингибирующих ферменты СОХ - из нормальных клеток любой ткани, кроме нервной ткани, по каким-то
2 [133], LOX [264] и NOS [122, 290], сможет оказывать более выраженное причинам начинают синтезировать чужие для них белки, которые характерны

противоопухолевое действие. только для нервных клеток [124]. Кроме того, в некоторых опухолях находят
белки, типичные для тканей плаценты, а на начальных стадиях канцерогенеза
1.5. Роль стволовых клеток в опухолевом росте и механизмы
формируются структуры, имеющие внешнее сходство с морулой, бластулой
клонирования соматических клеток
и гаструлой [15, 151]. Опыты по клонированию животных, а также открытие
Для понимания механизмов опухоль-ассоциированного воспаления, технологий получения iPS клеток свидетельствуют о том, что теория
которое способствует росту и прогрессии злокачественных опухолей, мутационного онкогенеза требует основательного пересмотра.
необходимо на современной уровне рассмотреть концепцию онкогенеза. С С овременны й уровень наш их знаний позволяет констатировать, что
появлением знаний о природе стволовых клеток она существенно изменила практически все известные маркеры рака обнаруживаются в эмбриональных
привычные взгляды на опухолевый процесс. тканях на определённых стадиях развития эмбриона. Сходство в поведении
1.5.1. Опухоль - болезнь стволовых клеток эмбриональных и злокачественных клеток было отмечено учеником Р.
Опухоли всё с большей достоверностью начинают рассматривать как Вирхова - Ю. Конгеймом, который создал “теорию эмбриональных зачатков
болезнь стволовых клеток, что выдвигает задачи выяснения изменений при опухолевом росте” [118]. Эта теория не потеряла своего значения и в
нормальных процессов регуляции, вовлечённых в канцерогенез. наши дни.

Сопоставление фенотипа эмбриональных стволовых клеток (ЭСК) и По мнению современных исследователей, эмбрионализация -
тотипотентных клеток привело Пирса к гипотезе о том, что многие опухоли обязательный компонент процесса малигнизации, а эмбриональные свойства -
возникают как ошибки созревания региональных стволовых клеток [232]. неотъемлемый атрибут опухолевых клеток [77]. Таким образом, получил

24 25
признание научный факт определённого сходства между ростом опухоли и 1.5.2. При клонированииорганизмов животных было
развитием эмбриона на ранних стадиях [15]. обнаружено, что гены могут функционировать обратимо
Позже X. Рибберт объединил “теорию хронического раздражения” Р.
В дальнейшем рассматриваемые механизмы опухолевого роста
Вирхова с “ теорией эмбриональных зачатков” Ю. Конгейма. Дальнейшее
интересно сопоставить с глобальными открытиями, полученными в результате
развитие теория Ю. Конгейма получила в работах исследователей, считавших,
клонирования организмов животных, что привело к необходимости более
что причиной злокачественной трансформации соматической клетки является
детально рассмотреть эту проблему в нашем обзоре.
её оплодотворение. Э. Клебс одним из первых высказал предположение, что
Клон (klon) - в переводе с греческого языка означает “ веточка, побег,
оплодотворение происходит путём слияния, гибридизации соматических
отпрыск”. Термин “клонирование” подразумевает популяцию клеток или
клеток. Он полагал, что раковая клетка является результатом слияния
организмов, произошедших от общего предка путём бесполого размножения и
эпителиальной клетки с лейкоцитами. В.Р. Поттер является автором тезиса:
генетически идентичными своему предку.
“онкогенез есть блокированный онтогенез”, который на сегодня серьёзно
Естественным клонированием можно считать любой процесс
никем не оспаривается [237]. В случае развития опухоли онтогенез
вегетативного размножения у растений. Клетки растений, в отличие от клеток
блокирован на участке, лежащем между двумя крайними точками
животных, в процессе дифференцировки не теряют своей тотипотентности.
эмбриогенеза: тотипотентная зародышевая клетка - эмбрион.
Поэтому практически любая клетка растения может дать клон, или развитие
Как известно, зигота является первой стволовой клеткой в жизни
нового организма. Появление идентичных близнецов у животных и человека
человека. Благодаря способности создавать целостный организм, она является
также относится к процессу естественного клонирования.
тотипотентной клеткой. Тотипотентные клетки находят на первых стадиях
Для понимания механизмов естественного клонирования, которое
развития эмбриона (3 -4 -й день жизни), когда у эмбриона насчитывается от 16
происходит спонтанно в организмах растений и животных, необходимо
до 32 клеток. При развитии эмбриона тотипотентность клеток снижается,
провести небольшой экскурс в историю искусственного клонирования.
размножающиеся стволовые клетки приобретают признаки плюрипотентности
Впервые попытка искусственного клонирования была сделана окола
[284]. У новорожденного большинство стволовых клеток являются
100 лет назад зоологом Московского Университета А. Тихомировым на
мультипотентными. Клетки костного мозга даже у взрослых людей не
примере тутового шелкопряда. Ему удалось индуцировать
утрачивают плюрипотентности, реализуя при различных тканевых
партеногенетическое оплодотворение тутового шелкопряда в результате
повреждениях свой трансдифференцировочный потенциал [174]. В дальнейшем
химических и физических воздействий, что привело к развитию эмбрионов,
в процессе морфогенеза соматические клетки дифференцируются, в результате
которые в дальнейшем оказались нежизнеспособными.
этого часть генома репрессируется.
История клонирования позвоночных началась в 40-е годы XX в.,
когда Г. Лопашовым на лягушках был разработан метод пересадки ядер,
который в различных модификациях используют все современные методики

26 27
по клонированию. В 1962 г. Дж. Гёрдон в опытах с южноафриканскими взаимоотношения между опухолевыми и зародышевыми клетками. Опыт
лягушками впервые использовал в качестве донора ядер заключался во встраивании клетки тератокарциномы мыши одной
специализировавшиеся клетки эпителия кишечника головастика. Выживших генетической линии в бластоцисту здоровой мыши другой линии. В
клонов было не более 2 %, у них были различные генетические дефекты. результате из бластоцисты развилась здоровая особь, при этом она и её
Однако это стало прорывом в разработках технологий по клонированию потомство унаследовали признаки мышей обеих линий. Следовательно,
млекопитающих, апофеозом которого явилась клонированная овца Долли опухолевая клетка содержит наследственную информацию об организме ее
[300]. носителя. Использовавшаяся опухолевая клетка являлась клеткой
Попытки создать полноценные клоны теплокровных животных эмбриокарциномы. Но результаты экспериментов последних лет по
предпринимались ещё до успеха с Долли. Среди таких — получение овец клонированию показали, что наследственную информацию об организме
Меган и Мораг, созданных той же группой исследователей. Но, в отличие от носителя содержат не только половые, но и любые соматические клетки.
Долли, эти овцы были получены из эмбриональных, а не зрелых клеток [110]. Следовательно, наследственную информацию должна содержать и опухолевая
Ранее работы М. ди Бернардино и Н. Хоффер, проведенные в 1983 г., клетка любого гистогенеза. Впоследствии аналогичные эксперименты были
показали, что цитоплазма ооцитов амфибий содержит факторы, проведены с клетками аденокарциномы молочной железы, плоскоклеточного
восстанавливающие тотипотентность ядер взрослой клетки крови до стадии ороговевающего рака и хондросаркомы [231, 232, 233, 234].
головастика. Те же ядра, но пересаженные в икринки, развивались только до В результате получения таких знаний бластоцисты животных уже
стадии ранней гаструлы. начали использовать для репрограммирования генома и возвращения
В процессе клонирования овцы Долли Я. Вилмутом и К. Кемпбелом тотипотентности региональным стволовым клеткам человека. Как показали
впервые на млекопитающих было показано, что зрелая дифференцированная многочисленные исследования, указанные в обзоре [62], бластоциста является
клетка может развиваться обратимо, вплоть до тотипотентной клетки, природным миниинкубатором для репрограммирования ДНК более
исходной для всех организмов. Т. обр., в экспериментах по клонированию специализированных клеток к тотипотентности [295].
животных впервые было показано, что гены могут функционировать Мы, со своей стороны, полагаем, что помещение клеточного ядра с

обратимо. опухолевой ДНК в бластоцисту или в матку помогает избежать воздействия на


Эти факты являются прорывом в науке не только в области ядро медиаторов воспалительного процесса, что позволяет клону развиваться
клонирования, но и, вне всяких сомнений, в понимании механизмов До стадии нормального эмбриона. В эмбриональном организме процессы
опухолевого роста. клеточной пролиферации настолько интенсивны, что из одной клетки
В 1975 году Б. Минц доказала, что введение предимплантационных возникает организм весом в среднем от 3,5 до 4 кг всего за 9 календарных
зародышей мыши или крысы в любую ткань вне матки (экстраутеринно) ведет месяцев. Вполне очевидно, что злокачественность опухолей является свойством
к образованию опухоли из части клеток зародыша (эмбриокарцином). В не столько интенсивной клеточной пролиферации, сколько следствием их
дальнейших исследованиях Б. Минц [209, 165] были выявлены интересные
29
гибели, и не связана с ними общим механизмом, а реализуется через механизм 1.5.4. Тоти- и плюрипотентные свойства стволовых клеток

опухоль-ассоциированного воспаления. Тотипотентные свойства оплодотворённой яйцеклетки реализуются


Чем выше уровень специализации клеток, тем меньше их благодаря способности к диверсивной дифференцировке развивающихся из
тотипотентность. Причины, по которым ядра некоторых клеток взрослых неё клеток, из которых формируются зародышевые и внезародышевые органы
животных остаются тотипотентными, пока точно не установлены. Эти и ткани. Образование эмбриона из тотипотентной клетки контролируется
факторы реактивируют репрессированные участки генома. регуляторными генами, которые, в свою очередь, регулируют транскрипцию
1.5.3. Особенности роста эмбриональных стволовых клеток в других генов [254, 255].

виде клонов При эмбриогенезе ген Oct4 экспрессируется во всех бластомерах


Как известно, рост эмбриональных стволовых клеток (ЭСК) в [229]. Предположительно, ген Oct4 является ключевым регулятором
культуре идёт клонами [62, 275]. В отличие от обычного экспоненциального плюрипотентности и дифференцировки стволовых клеток [216, 217, 230, 274].
размножения клеток в культуре, клон не растет, а самообновляется. Только в Согласно гипотезе, что эмбриональные гены экспрессируются в опухолях,
клоне сохраняется микроокружение, позволяющее стволовым клеткам экспериментально была также обнаружена и экспрессия Oct4 в опухолях
удерживать необычно высокую плюрипотентность. Эти особенности клеток человека, отсутствующая в нормальных соматических тканях [213].
сохраняются и воспроизводятся только в плотной сфере. Каждая культура ЭСК Аналогично эмбриональным стволовым клеткам, функции опухолевых клеток
имеет варьирующую долю клеток в суспензионных агрегатах (сферах). могут контролироваться регуляторами, подобными Oct4 .
Одиночные клетки, покидая клон, неизбежно дифференцируются. Лишь Сигнальные пути Wnt и Hedgehog (Hh) давно известны как
агрегаты составляют суммарное пространство плюрипотентных клеток, регуляторы роста в эмбриогенезе. Недавними исследованиями была показана
остальные клетки специализируются под влиянием микроокружения. роль этих сигнальных путей в регуляции стволовых клеток, вовлечённых в
Большинство новых фенотипов возникает по периферии клонов. В каждом процессы репарации и регенерации взрослых тканей, а также в развитии
клоне клетки одновременно дифференцируются в разные фенотипы, некоторых видов рака [278, 184, 185, 140, 305]. Трудно сказать в настоящее
подтверждая важность микроокружения. Когда клеточные агрегаты достигали время, являются ли источником опухолей исключительно герминативные
размера 30-50 клеток, наступало равновесие между пролиферацией и клетки, или любые другие клетки организма. Исходя из последних

апоптозом, о чём сказано в обзоре [62]. достижений техники клонирования животных и человека, вероятность
Известно, что в первичной культуре эмбриобласта (эпибласта) участия в эмбриогенезе соматических клеток организма является более чем
обязательно сохраняют первичные агрегаты клеток при получении линий ЭСК вероятной. Опухолевая клетка, развившаяся из дифференцированной
[283]. Одноклеточные суспензии эпибласта/эмбриобласта зародышей человека соматической клетки, принципиально не может быть идентичной
и обезьяны практически не выживали в первичной культуре. Мультиклеточны? тотипотентной зародышевой клетке. В зародышевой клетке присутствует 50%
сфероиды, состоящие из агрегированных клеток, характерны и для опухолей генетической информации от отца и 50% - от матери. Кроме того,

[214, 276]. тотипотентная клетка, развившаяся из дифференцированной соматической


зо 31
клетки, принципиально не может обладать всеми функциями тотипотентной тератомах нейронального компонента коррелирует с повышенной
зародышевой клетки ещё по одной причине. Так, хорошо известно, что в активностью трансфицированных генов Nanog и Oct4 [308. 141]. Поскольку
процессе онтогенеза происходит последовательное распределении именно находящиеся под контролем этих факторов гены обеспечивают
цитоплазмы яйца между клетками, которое сопровождается постепенным воспроизведение состояния плюрипотентности, их гиперэкспрессия
сужением ее морфогенетических потенций. Следовательно, для того, чтобы закономерно противодействует дифференцировке.
герминативная клетка была абсолютно идентична тотипотентной При дедифференцировке соматических клеток состояние их
зародышевой клетке, необходима полная идентичность цитоплазм этих собственного генома серьёзно изменяется. Никаких мутаций не наблюдается,
клеток. Однако если это условие будет соблюдено полностью, то эта клетка iPS клетки сохраняют нормальный кариотип, а все изменения хроматина
может утратить свои злокачественные характеристики и превратиться в относятся к категории эпигенетических [198, 221, 225, 266]. Среди
тотипотентную зародышевую клетку. Спонтанная дифференцировка ЭСК in эпигенетических изменений хроматина в процессе такой трансформации
vitro приводит к образованию эмбриоидных тел, трёхмерных структур, в наиболее выражены изменения уровня метилирования ДНК.
которых в случайном соотношении представлены ткани, производные всех Деметилирование хроматина - один из ключевых процессов при
трёх зародышевых листков. Эмбриоидное тело похоже на зародыш, репрограммировании соматических клеток [159, 194, 306]. Важнейшим
формирование которого было нарушено в онтогенезе [169, 301]. Этим ЭСК событием процесса дедифференцировки клеток является деметилирование
отличаются от любых других стволовых клеток [242]. Последние при CpG-островков в промоторах их собственных генов плюрипотентности Oct4,
дифференцировке in vitro также способны формировать трёхмерные Sox2, NANOG, что приводит к их активации. Индукция плюрипотентности
структуры из разных клеток, но коммитированных в каком-то одном включает в себя не только смену паттерна работающих генов, но и изменение
направлении. В культурах iPS клеток при их спонтанной дифференцировке состояния Х-хромосомы в целом. Индукция дедифференцировки
образуются структуры, аналогичные эмбриоидным телам. Индуцированные сопровождается реактивацией хромосомы, а потом, как и в эмбриогенезе,
плюрипотентные клетки - iPS, были получены в лаборатории Yamanaka, где одна из двух работающих Х-хромосом блокируется [105, 201].
при увеличении уровня экспрессии 4-х генов Oct4, Sox2, с-Мус, Klf4 сумели Следует обратить внимание на тот факт, что воспаление и ранний
превратить фибробласты в плюрипотентные клетки [279, 280], подобные эмбриогенез - это процессы, которые происходят в разные временные
ЭСК. интервалы. В первой половине эмбриогенеза, когда воспалительные реакции
Превращение дифференцированных клеток в плюрипотентные - это не наблюдаются по причине отсутствия сформировавшейся сосудистой
не одномоментное событие, а процесс, всегда развивающийся в нескольких системы, злокачественные опухоли не возникают. Нами были проделаны
последовательных поколениях клеток. Это принципиальное отличие эксперименты по инокуляции клеток глиомы 101.8 в головной мозг плодов
индукции клеток от трансплантации ядер в ооциты при клонировании, когда крыс (14-16-е сут эмбрионального развития). После рождения мозг крысят
репрограммирование заканчивается ещё до первого деления изъяли для гистологических исследований. Следов жизнеспособных клеток
реконструированной зиготы. Отсутствие в образованных iPS клетками лиомы 101.8 в тканях, при наличии раневого канала, обнаружено не было
зз
[28]. У плодов второй половины беременности, новорожденных и детей гиперметилирование CpG островков при гастрите, вызывая рак желудка [285].
раннего возраста опухоли, как правило, доброкачественные и хорошо Продукты разрушения цитозина могут влиять на эпигенетический контроль,
поддаются комбинированному лечению. Максимум опухолей приходится на изменяя взаимодействие ДНК с белками, контролирующими метилирование
взрослое население, особенно на пожилой возраст, когда появляется много паттернов и регуляцию генов. Такой механизм влияния продуктов цитозина,
ишемических очагов в тканях, но, поскольку функции воспалительного возможно, является связующим звеном между воспалением и опухолями
процесса уже угасают, злокачественные опухоли приобретают вялотекущий [288]. Паттерны метилирования цитозина в клетках человека являются
характер. важными элементами в клеточной координации экспрессии генов.
1.6 Эпигенетический эффект воспаления и метилирование Метилирование цитозина у эукариот совпадает с пострепликативным
клеточного генома энзиматическим процессом. Нарушение процесса метилирования часто
сопровождается развитием у человека опухолей [137]. Метилирование
Опухоль-ассоциированное воспаление, взаимодействуя со
опухолевой ДНК регулируется также митохондриями [304]. Группа
стволовыми клетками, также изменяет свои характеристики. Воспаление
исследователей предполагает, что роль повреждений ДНК в развитии
может обладать эпигенетическим эффектом [160]. Описаны изменения
опухолей не лимитируется только мутагенезом. Многие формы повреждений
метилирования ДНК при воспалительных заболеваниях: эзофагите [133],
ДНК нарушают взаимодействие ДНК - белок. Так, продукты повреждения
гастрите [172], циррозе печени [178, 179, 262], хронических сердечно -
цитозина тормозят связывание метил-связывающих белков и DNMT 1-
сосудистых заболеваниях [271], язвенном колите [167] и т.д.
опосредованного метилирования цитозина в CpG - динуклеотидах [289]. Одна
Эпигенетические изменения под воздействием воспаления способствуют
из форм повреждения ДНК является особо важной в этом контексте:
патологическому гиперметилированию CpG островков в тканях, создавая
галогенирование цитозиновых остатков. Исследования показали, что бромид
условия для появления неоплазий [180, 236, 286], а гипометилирование ДНК
может замещать метиловые группы в тимине при взаимодействии ДНК -
способствует снижению уровня мутаций [113]. Тем не менее, изучение
белок [106]. Галогенирование нуклеиновых кислот, вероятно, является
взаимоотношений между воспалением и метилированием находится довольно
отличительной формой повреждений ДНК в живом организме [298]. В зоне
далеко от заключительного этапа [183, 157, 287]. Аберрантное
воспаления НОС1 из активированных нейтрофилов и НОВг из
гиперметилирование CpG островков при хроническом воспалении и
активированных эозинофилов, как известно, реагируют с ДНК, образуя, среди
предраковых состояниях часто объясняют инактивацией генов-супрессоров
других продуктов, 5-хлороцитозин и 5-бромоцитозин [83, 158, 299]. Эти
опухолей [277]. У пациентов с воспалением снижен уровень соотношения Нра
исследования подтверждают потенциальную роль галогенированных остатков
II/Msp I, свидетельствующий о полном гиперметилировании CpG островков
Цитозина в изменении метилирования, что свидетельствует о связи между
[271]. Сурерэкспрессия ДНК - метилтрансферазы (DNMT1) ассоциируется с
воспалением и опухолями. Метил-связывающие белки не различают
метилированием CpG островков, подавлением экспрессии генов-супрессоров
метилированную и галогенированную ДНК, связываясь с обеими с высокой
и повышением риска появления опухолей. Н. pylory индуцирует
степенью аффинности. Формирование и персистирование остатков 5-
34 35
галоцитозина в CpG - динуклеотидах ДНК при воспалительном процессе а наиболее благоприятный фон для экспансии многих клеток с супрессорной

организме приводит к аберрантному метилированию de novo. Исследования активностью создаётся в микроокружении опухоли, особенно при

показали, что продукты распада при воспалении могут ингибировать вы р аж ен н ой гипоксии. Современные данные, связанные с изучением

метилирование, или способствовать аберрантному метилированию, иммуносупрессии, позволяют говорить о нескольких механизмах её развития,

вызывающему появление новообразований. что, как правило, обусловлено активацией различных клеток иммунитета [9 ].

1.7 Иммуносупрессия А.Г. Бабаевой впервые была показана неизвестная ранее функция
иммунной системы, заключающаяся в регуляции и контроле
Проводя параллели между онкогенезом и ранним эмбриогенезом,
пролиферативной активности клеток в организме [6 ]. Сложные механизмы
следует обратить внимание на состояние иммунной системы, которое
взаимодействия злокачественной опухоли и иммунной системы организма-
свидетельствует о наличии выраженной иммуносупрессии. Более 30 лет назад
опухоленосителя могут представлять собой регулирование процессов
был обнаружен иммуносупрессивный статус при глиомах, когда заметили, что
регенерации и размножения клеток. Сравнительный анализ
лимфоциты периферической крови снизили свой пролиферативный потенциал
иммунологических механизмов в развитии опухоли и эмбрионов проводил
в ответ на воздействие ФГА [302]. Современные исследования одним из
В.И. Говалло, что привело к созданию метода иммуноэмбриотерапии (ИЭМ),
механизмов супрессии считают модулирование стволовыми клетками глиом
благодаря которому был получен положительный эффект у некоторых
роли сигнального трансдуктора и активатора транскрипции STAT3 [303].
больных с запущенными формами рака [20]. Учитывая плюрипотентность
Были проведены исследования экспрессии мРНК цитокинов и антигенов
стволовых клеток опухоли, становится понятным механизм иммуносупрессии,
HLA, которые показали, что почти 60% глиом головного мозга
который идентичен таковому при беременности.
экспрессировали мРНК трансформирующего фактора роста-В и Ил-10,
Таким образом, давно известная взаимосвязь между раком и
ответственных за Т-супрессию, что может также свидетельствовать об
хроническим воспалительным процессом, недавно получившая признание
угнетении клеток иммунной системы. В то же время экспрессия мРНК HLA-
роль Hedgehog и Wnt сигнальных путей при регенерации тканей, обновление
А1 и HLA-DRa была повышенной [38]. Многоклеточный онкосфероид в силу
стволовых клеток и опухолевый рост - всё вместе дает возможность
низкой иммуногенности и отсутствия анатомических связей с тканями
предположить, что канцерогенез развивается благодаря соответствующим
организма может “ускользать” из-под иммунного надзора либо оставаться
гомеостатическим механизмам, которые управляют тканевой репарацией и
длительное время на аваскулярной стадии развития [93, 94]. Существует
восстановлением популяции стволовых клеток [91,78, 87].
представление о том, что опухоль индуцирует иммуносупрессию, которая
По всей вероятности, следует ожидать новых изысканий, опираясь на
может проявляться в широком диапазоне: от слабого иммунного ответа до
гипотезу о том, что взаимодействие двух процессов, воспаления и развития
анэргии [9, 52]. Развитие иммуносупрессии с последующей стимуляцией
тотипотентных и плюрипотентных клеток в экстраутеринных местах,
роста опухоли может происходить на различных этапах опухолевого процесса
изначально не имеющих заведомо злокачественных свойств, и составляет
и во многом зависит от биологических особенностей опухоли. Однако
сущность опухолевого роста.
37
Как было сказано ранее, некроз клеток тканей является пусковым продуцируют высокий уровень глутамата, который стимулирует рецепторы N-
механизмом воспалительного процесса, что вызывает актуальный интерес при меТйл- 0 -аспартата (NMDA) [202]. Превышение концентрации глутамата в
изучении его патогенеза. Другие виды клеточной гибели, включая апоптоз, в сИНапсе более 1 мМоль будет способствовать процессам эксайтотоксичности.
данном обзоре не рассматриваются, так как апоптоз не является активатором впервые негативное воздействие глутамата было отмечено японским
воспаления, и при глиомах головного мозга он встречается приблизительно в исследователем Тошио Хаяши в 1954 г. Лукас и Ньюхаус в 1957 году
1% случаев [65]. По теме апоптоза написано большое количество обзоров. обнаружили гибель нейронов сетчатки при кормлении мышей глутаматом
1.8 Эксайтотоксичность натрия. Джон Олни в 1969 году обнаружил проявления эффекта
В процессе развития нервной системы глутамат регулирует процессы эксайтотоксичности на структурах ЦНС. Он также предположил, что
пролиферации, миграции [187], выживания нейронов [96, 173] и многие др. эксайтотоксичность можно купировать антагонистами глутамата. Однако при
Исследованиями последних лет была открыта экспрессия глутаматных чрезмерном использовании NMDA-антагонисты могут вызывать
рецепторов в опухолевых клетках различного генеза [176]. На клеточных специфическое повреждение мозга - так называемые “лезии Олни” [223], хотя
культурах было показано, что глиомы могут высвобождать в большом избытке пока нет опубликованных данных о выраженности этой патологии у приматов,
глутамат, который in vivo вызывает опухоль-ассоциированные припадки и 1.8.1. Ионотропные рецепторы
способствует нейрональной смерти [307]. Избыток глутамата может привести к Глутаминовая кислота (глутамат) обеспечивает передачу возбуждения
острой дегенерации нейронов - процессу, обычно относящемуся к между нейрональными клетками. Глутаматэргические механизмы
эксайтотоксичности. Авторы продемонстрировали, что высвобождаемый из представлены в 40% нейронов от их общего количества, а серотонин,

клеток опухоли глутамат стимулирует рост глиом, который способствует ещё ацетилхолин, допамин и др. медиаторы - в 60% нейронов. Существуют
большему высвобождению глутамата. Возможный механизм пролиферации ионотропные и метаботропные глутаматные рецепторы. Ионотропными
клеток глиом, индуцированный глутаматом, заключается в том, что секреция рецепторами являются NMDA-рецепторы, АМРА-рецепторы и каинатные
глутамата глиомами способствует опухолевой экспансии путём повышения рецепторы. Ионотропные рецепторы соединены с ионными каналами и
воспалительного процесса в опухолевом микроокружении [200]. Takano et. al. открывают их после активации соответствующими молекулами - лигандами
открыли новые характеристики экспериментальных опухолей, которые могут (глутамат и аспарагиновая кислота). Возникающие при этом потоки ионов
объяснить быстрый рост глиом, и, что более важное, обеспечили путеводной вызывают изменения трансмембранной разности потенциалов и электрической
нитью к новому терапевтическому прорыву [281]. активности нейрона. Для активации NMDA-рецепторов также необходим
Эксайтотоксичность - пусковой механизм некротической я глицин. NMDA-рецепторы представляют собой тетрамерный комплекс,
апоптотической нейрональной смерти под воздействием нейромедиаторов. Формируемый комбинацией двух субъединиц: NR 1 и NR 2 [191]. Каждая из
способных гиперактивировать NMDA- и АМРА-рецепторы при многй? Убъединиц NMDA-рецептора представлена рядом изоформ, возникающих в
неврологических нарушениях, таких как травма, инсульт, нейродегенеративны* РезУльтате альтернативного сплайсинга. Различные их комбинации формируют
заболевания и опухоли ЦНС. Лишенные кислорода нервные клет# Р Ц пторы, различающиеся по фармакологическому профилю,
38 39
чувствительности к ионам Mg2+ и свойствам каналов [272]. Ионный канал( бл0кирУеТ калиевые каналы. На этой же постсинаптической мембране
образованный субъединицами, высоко проницаем для ионов К +, Na+, Са2+ [206] метаботропные рецепторы групп II и III блокируют потенциалзависимые Са2+-
и заблокирован ионом Mg2" потенциалзависимым способом [219], каналы [265]. Таким образом, возбуждение клетки, вызванное ионотропными
Деполяризация постсинаптической мембраны (от -50 до -30 мВ), вызванная ецепторами синаптического контакта, контролируется метаботропными
активацией других глутаматных ионотропных рецепторов, устраняет рецепторами этих же синаптических мембран. Активация протеинкиназы С и
“магниевый блок” и приводит к открытию канала. Ионофор NMDA-рецепторов подавление К+- каналов удерживают деполяризацию мембраны, тем самым
является участком связывания так называемых “канальных блокаторов” препятствуя связыванию магния с NMDA-рецепторами и поддерживая их
(декстрометорфана, фенциклидина, кетамина, мемантина, МК-801) [126, 206]. сродство к медиатору. Вероятно, именно благодаря этому избыточное
АМРА-рецептор [151] - ионотропный рецептор глутамата, селективно возбуждение метаботропных рецепторов вызывает токсический эффект
связывающий альфа-аминометилизоксазолпропионовую кислоту (АМРА), а NMDA-рецепторов.

также каинат и квисквалат. Структурно АМРА-рецептор - тетрамер. Известно При высвобождении глутамата в межсинаптическую щель среди всех
4 типа субъединиц, образующих АМРА-рецептор ( Glu 1-4). АМРА-рецепторы, рецепторов, взаимодействующих с ним, наиболее активны каинатные и АМРА-
имеющие в составе 01 и-112-субъединицы, относятся к непроницаемым для рецепторы. Они открывают соответствующие ионные каналы, через которые
кальция рецепторам, а не имеющие - к проницаемым для кальция [181, 162]. натрий проникает внутрь клетки, образуя возбуждающий потенциал. В
Рецепторы последнего типа обнаружены только в спинальных мотонейронах. покоящемся нейроне NMDA-рецепторы связаны с ионами магния и неактивны.
АМРА - рецепторы блокируются CNQX, NBQX. Каинова кислота является При деполяризации мембраны комплекс рецептора с магнием распадается, и
активатором каинатных рецепторов [5]. рецептор начинает связывать глутамат. NMDA—зависимые ионные каналы
Метаботропные рецепторы [273] структурно не связаны с ионными начинают пропускать внутрь клетки натрий и кальций, а К" - покидать клетку,
каналами, они управляют метаболическими процессами в клетке через что способствует возбуждению мембраны и активации кальций-зависимых
специальные сигнальные молекулы, контролируя активность ионотропных клеточных реакций [126]. В отличие от других рецепторов, NMDA-рецептор
рецепторов [101]. Метаботропные глутаматные рецепторы относятся к одновременно восприимчив к лигандам и к изменению мембранного
семейству G-связанных белков, участвующих в активации сигнальных потенциала. Будучи поглощённым клетками астроглии, глутамат больше не
клеточных путей. На пресинаптической мембране при возбуждении приводит к повреждению нейронов. Фармакологический препарат
метаботропные рецепторы групп II и III подавляют высвобождение глутамата. глутаминовой кислоты оказывает умеренное психостимулирующее,
Напротив, метаботропные рецепторы группы I стимулируют этот процесс. Их энергизирующее, возбуждающее и отчасти ноотропное действие.
действие инициируют арахидоновая кислота (АА) и диацилглицерин (DAG), В патологии нейронов большая роль отведена ионотропным NMDA-
которые высвобождаются при активации фосфолипазы С (PLC) рецепторам [10, 114]. В физиологических условиях NMDA-рецепторы
метаботропными рецепторами группы I на постсинаптической мембране. ктивируются миллимолярными концентрациями глутамата, который
Второй регулятор, диацилглицерин, активирует протеинкиназу С, которая присутствует в синаптической щели в течение нескольких миллисекунд [116].
40 41
При патологической импульсации рецепторы активируются микромолярнымц дособствует торможению клеточной миграции и хемотактической инвазии.
концентрациями, но в течение значительного большего времени [147, 148]. § Такое торможение снимается при добавлении экзогенного глутамата. Важно
результате происходит увеличение концентрации ионов С а + в клетках ц отметить, что клетки глиомы освобождают глутамат в необходимом количестве
накопление ионов К+ во внеклеточном пространстве. “Кальциевая перегрузка” для активации собственных АМРА-рецепторов или таковых у соседних клеток.
нейронов и активация Са2+ -зависимых процессов (повышение активности Длительное торможение системного Хс- и АМРА-рецепторных субъединиц
протеаз, киназ, эндонуклеаз, липооксигеназ, фосфолипазы А2 и др. ферментов) пр иводи ло к уменьшению инвазивности клеток человеческой глиомы в
ведёт к значительным изменениям в метаболизме и генетическом аппарате ксенотрансплантатах на scid-мышах. Эти данные свидетельствуют, что инвазию
клетки, неконтролируемому действию свободных радикалов и может привести глиом можно эффективно подавить путем ингибирования аутокринной
к необратимой клеточной гибели [115, 82]. В настоящее время считается, что глутам атной сигнальной петли сульфасалазином, доступным клиническим
поступление ионов Са2+ внутрь клетки через каналы NMDA-рецепторов препаратом [199].
является ключевым событием в реализации токсических эффектов глутамата Показано, что тетраметилпиразин ингибирует рост глиомы и защищает
[81]. Так, установлено, что эквивалентный подъём внутриклеточной нейроны от индуцированной глиомой токсичности. Авторы считают, что
концентрации Са2+, поступающего через потенциал-зависимые кальциевые идеальным терапевтическим средством при глиомах может стать снижение
каналы, приводит к меньшим нейрональным повреждениям [127], инфлюкса кальция в клетках глиомы и защита нейронов от эксайтотоксичности.
Дополнительным результатом активации NMDA-рецепторов является Антагонисты рецепторов NMDA могут представить наиболее обещающий
внутриклеточная продукция активных форм кислорода, прежде всего новый терапевтический подход к лечению глиом, включающий защиту
супероксид-аниона и гидроксид-радикала. В условиях избыточного нейронов от глиома-индуцированной эксайтотоксичности и хорошей
образования различных радикалов возможно взаимодействие вторичного проницаемости ГЭБ [143].
мессенджера - оксида азота и супероксида с образованием пероксинитрита, Клетки глиобластомы могут освобождать и использовать глутамат для
обладающего исключительно высоким окислительным потенциалом [152]. пролиферации и миграции аутокринным или паракринным путём через Са 2 -
Глутамат, высвобождающийся глиомами, убивает окружающие проницаемые глутаматные рецепторы АМРА-типа. Кальциевый сигнальный
опухоль клетки головного мозга, создавая свободное пространство дл* путь, опосредованный АМРА-рецепторами, регулирует рост и подвижность
опухолевой экспансии. Освобождение глутамата происходит через системный клеток глиобластомы через активацию Akt. Показано, что Akt функционирует
Хс-, Na+ - независимый цистин-глутаматный обменник. Сам по себе глутамат как эффектор, тормозящий кальциевый сигнальный путь, опосредованный
вероятно, не влияет на усиление роста клеток глиомы in vitro. Влияние АМРА-рецепторами в клетках глиобластомы. Активация глутамат - АМРА-
глутамата на прогрессию глиом опосредовано через МкО [249]. Показано, чт< рецептор - Akt сигнального пути способна внести своё участие в высокую
освобождение глутамата происходит как существенны! степень анаплазии и инвазивного роста глиобластомы человека [168].
аутокринный/паракринный сигнал, способствующий клеточной инвазии Глиобластома секретирует больш ое количество глутамата, который
Применение блокаторов системного Хс- S(4) - CPG или сульфасалазий2 инициирует А М РА -рецепторы . Это приводит к увеличению проницаем ости для
42 43
ионов Na+ и Са2+ внутрь клеток и последующей эксайтотоксической смерти 1.9. Регуляция NMDA - рецепторов их антагонистами
окружающих нейронов. Проводили исследования, каким образом клетки ^ ГЛ 4
г г г неконкурентного антагониста NMDA-рецепторов глутамата
С вой ствам и
глиобластомы выживают в глутамат-обогащённой среде. Обнаружено, что „
обладаю т препараты магния. В эксперименте на крысах показан
мРНК экспрессия АМРА-рецепторных субъединиц Glu-1, 2 и 4 быЛа „ , ,
нейропротекторн ы и эффект магния сульфата: его введение в течение 2 или 6
существеннее ниже по сравнению с взрослым и фетальным уровнями -
часов после эмболизации правой среднемозговой артерии уменьшало объём
экспрессии мРНК. Кроме того, обнаружена ошибочная локализация
м озгового инфаркта, а при введении в течение 2 часов улучшало выживаемость
экспрессии этих рецепторов. Следовательно, снижение функции АМРА-
ж ивотны х [293].По данным литературы [64], препараты магния оказались
рецепторов способствует выживанию клеток глиобластомы в условиях высокой , ,
безопасны м и и эффективными, особенно при ишемическом инсульте.
глутаматной нагрузки, вызывающей эксайтотоксичность в клетках ЦНС [292].
Выраженные побочные эффекты существенно затрудняют клиническое
Вератридин и 4-аминопиридин использовали по отношению к клеткам ,
использование высокоаффинных конкурентных антагонистов NM DA-
глиомы С6 для индуцирования высвобождения из них глутамата. Антагонисты
рецепторов. Позже было обнаружено, что препараты с низким сродством к
кальциевых каналов (нифедипин, флунаризин, хлорид никеля) и натриевых
NMDA-рецепторам так же, как соединения, обладающие специфическим
каналов (карбамазепин и лидокаин) также использовали по отношению к _
сродством к JNК2В-суоъединице этого рецептора, соответствуют критериям
клеткам глиомы С 6 с целью повышения эффекта высвобождения из клеток
безопасности при назначении пациентам. Предполагается, что следующие
глутамата вератридином и 4-аминопиридином. Комбинированный эффект этих
соединения могут быть эффективными: противокашлевой препарат
лекарственных препаратов был выше, чем отдельно взятое вещество, при
декстрометорфан, противопаркинсонические препараты мемантин, амантадин и
освобождении глутамата из клеток глиомы С6 [309]. fivTimT1ITj „ _
оулипин, противоэпилептическии - срелбамат, что, однако ещё не
Приток глютамата и инфлюкс ионов кальция в нейроны приводит к
подтверждено клиническими испытаниями [224], 2,3-бензодиазепин [246].
повреждению типа ишемии. Астроциты в месте повреждения пролиферируют и л „UT№niiTi хтл л
Другим антагонистом NMDA-рецепторов является кетамин [10, 261].
уменьшают индуцированное глютаматом и ионами кальция повреждение гте
перспективность его использования для лечения больных с тяжелой ЧМТ и
нейронов путём удаления избытка глютамата и ионов кальция через NMDA- гемопп
r J геморрагическими инсультами, сопровождающимися коматозным состоянием,
рецептор и кальциевые каналы L-типа,соответственно. Фибробласты оп ™ ^ , ,
р деляется не только способностью блокировать эффекты глутамата, но и в
обыкновенно мигрируют в повреждённые ткани, способствуя субнапкотн_
у пефкотических дозах стимулировать ретикулярную формацию головного
восстановительному процессу. Важно отметить, что фибробласты мо
lD1J* К-етамин и его метаболит норкетамин способны неконкурентно
экспрессируют кальциевые каналы L-типа, а не специфические для ЦНС блокиооият*. м\/ггчл
бривать NMDA-рецепторы коры головного мозга и спинного мозга с
глютаматные рецепторы. Значительная экспрессия мРНК NMDA рецепторов в высокой , ,
^ ии степенью аффинности. Кетамин может оказывать
фибробластах после 24-часового воздействия электротоком была противовпгпа
оспалительныи эффект на уровне ЦНС путём дозозависимого
продемонстрирована с помощью метода RT-PCR. Воздействие верапамилоМ блокировя«ист ~ ,
r r г р^илния синтеза и секреции фактора некроза опухолей альфа после
полностью ингибировало эту экспрессию. [222 ].
44 45
введения мышам эндотоксина или кальциевого ионофора А23187 [282] р о т и в о су д о р о ж н о е и противогипоксическое действие в дозах 5-10 раз
индуцированную ФНО-а лейкоцит-эндотелиальную адгезию [208], подавлять еньш их, чем мемантин. Аркаин в 5 раз менее токсичен по сравнению с
продукцию оксида азота макрофагами и макрофагоподобными клетками [263] м ем антином . Бис-адамантильное производное ИЭМ-1490 в 100-150 раз
Эти противовоспалительные эффекты кетамина связаны с блокадой экспрессии п р ев осходи т мемантин по активности и имеет в 139 раз более высокий
ядерного комплекса NF-kB, ответственного за активацию транскрипции генов терапевти ческий индекс [19].
ряда провоспалительных цитокинов, в частности ФНО-альфа. Кетамин Эндогенные полиамины спермин и спермидин обладают
достоверно снижает индуцированную эндотоксином экспрессию фактора множественными эффектами на тканях ЦНС и могут быть отнесены к
транскрипции NF-kB в клетках человеческой глиомы и клетках интактного нейр отрансм и ттер ам или нейромодуляторам. Метаболизм полиаминов изучен
мозга мышей [247]. Перспективными являются клинические испытания этого при глиомах головного мозга [136, 268], а также при других патологиях [294].
препарата в качестве нейропротектора, поскольку он обладает сразу Одним из очень важных эффектов полиаминов является их способность
несколькими позитивными качествами: блокада NMDA-рецепторов, блокада регулировать активность субъединицы рецептора NMDA. Эффект полиаминов
синтеза провоспалительных цитокинов, высокая способность к проникновению на функции NMDA-рецептора проявляется комплексно, предполагая
через ГЭБ [13]. Исследование защитного эффекта блокатора NMDA-рецепторов п р исутствие одного или более полиамин-связывающих сайтов на рецепторе
кетамина и блокатора кальциевых каналов - верапамила у крыс при глутаматного канала. Электрофизиологические исследования показали, что
воздействии на них оксида углерода (СО) показало, что кетамин оказал гораздо полиамины повышают индуцированный NMDA ток путем снижения
более выраженный защитный эффект на некоторые физиологические амплитуды единичных электрических каналов или путем блокирования
показатели у животных, чем верапамил [228]. открытых каналов. Современные молекулярно-биологические исследования
В опытах на интактных мышах и крысах моноаммониевые адамантил- показали, что полиамины влияют на NMDA каналы путем взаимодействия с
содержащие соединения - мемантин, амантадин и N-пропильный аналог многочисленными NMDAR-субъединицами и представляют структурный базис
амантадина ИЭМ-1958 блокируют NMDA-рецепторы, оказывают для регуляции полиаминами NMDAR канал [244].
противосудорожное и противогипоксическое действие при системном введении Комплекс NMDA рецептора с инотропным каналом состоит из
в дозах, близких к токсическим. Их острая токсичность при внутрибрюшинном специфических сайтов распознавания для эндогенных лигандов, включающих
введении у мышей проявляется в дозах, превышающие минимально сайты связывания для глутамата, глицина, ионов магния, цинка и полиаминов.
эффективные всего в 2-8 раз. По сравнению с монокатионными соединениями Эндогенный полиамин спермин способен повышать магнитуду NMDA-
бис-катионы, содержащие две идентичные катионные группы - аркаин, ИЭМ- индуцированного тока в клетке в присутствии насыщающих концентраций
1464 и ИЭМ-1490 отличаются более высокой активностью и безопасность# глицина (глициннезависимое стимулирование), повышение аффинности
применения, которая может объясняться их способностью блокирован рецепторов для глицина (глицинзависимое стимулирование) и ингибирование,
полиаминный участок NMDA-рецептора. Блокатор полиаминного участк* зависимое от напряжения. Обнаружено, что эффекты спермина по-разному
аркаин и ИЭМ-1464 блокируют NMDA-рецепторы, оказываю Регулируются субъединицами NR2 в гетеромерных NR1/NR2 рецепторах.
46 47
Субъединица NR2 контролирует и стимулирующий, и тормозящий эффекты 1.10 Глутаматные рецепторы иммунокомпетентных клеток
спермина на NMDA рецепторы. Стимулирующий, но не тормозящий эффе1ст
NMDA- рецепторы, как известно, ответственные за молекулярные
спермина был обнаружен на NR1/NR2 рецепторах в присутствии
м ех ан и зм ы памяти, метаботропные рецепторы вовлечены в процессы
экстрацеллюлярных ионов магния. Стимуляция, обнаруживаемая в присутствии
нейропластИЧНОСТИ [ Ш ] ’ ^ ем неожиданнее оказались факты, указывающие на
физиологических концентраций ионов кальция и магния, вероятно, является
возм ож н ое присутствие глутаматных рецепторов не только в нейрональных
предоминантным эффектом полиаминов на NMDA-рецепторы в интактной
клетках [67], но и в лимфоцитах [32, 23], а также во многих других органах. Их
нервной системе [299].
активаци я в лимфоцитах грызунов приводит к росту в клетках свободных ионов
Спермин и спермидин, агонисты полиаминов, повышают связывание
кальция и активных форм кислорода, в результате чего активируется каспаза 3
блокаторами открытых каналов, в то же время путресцин, антагонист
[99]. Следовательно, NMDA-рецепторы в лимфоцитах влияют на регуляцию
полиаминов, снижает связывание блокаторами открытых каналов. При высоких
иммунокомпетентной системы клетки. Кроме NMDA-рецепторов, в
концентрациях спермин способствует потенциалзависимому снижению в
лимфоцитарной мембране имеются и метаботропные рецепторы группы П1. Как
рецепторе NMDA проводимости одиночных каналов и усредняет время
и в нейрональных клетках, они выступают регуляторами ионотропных
открытия канала. В то же время, спермидин снижает проводимость одиночного
рецепторов. Вероятно, присутствие ионотропных и метаботропных рецепторов
канала этого рецептора в высоких концентрациях. Путресцин способствует
глутамата на мембранах лимфоцитов делает их чувствительными к тем же
потенциалзависимому снижению в NMDA рецепторе току в целой клетке и
самым сигнальным молекулам, которые управляют активностью нейронов.
снижению проводимости в одиночном канале и усредняет время открытия
К ром е того, наличие этих рецепторов на мембранах клеток крови лишний раз
канала, даже при отсутствии агонистов полиаминов [245].
свидетельствует об общности происхождения нервной и гематологической
Результаты работы свидетельствуют о том, что существуют быстрые и
тканей, а также из взаимопревращаемость на уровне стволовых клеток в
медленные компоненты к антагонизму вызванной NMDA деполяризации
зависимости от их локализации и репаративных потребностей организма [134,
полиаминами, оба из которых могут вовлекать проникание полиаминов в- или
97]. Полученные экспериментальные данные прямо доказывают, что глутамат в
через NMDA каналы. Освобождение полиаминов в мозге может модулировать
кровяном русле способствует регуляции активности клеточного иммунитета.
чувствительность к ионам магния по отношению к NMDA. Изменения в общем
Наличие глутаматных рецепторов в клетках иммунной системы позволяет
содержании эндогенных полиаминов не объясняет развивающиеся различия в
считать глутамат одновременно нейро - и иммунномедиатором.
чувствительности, вызванной NMDA деполяризации к ионам магния [104].
1.11 Митохондриальная пора
Открыты модуляции NMDA рецепторов полиаминами путём отмены
MRT (mitochondrial permeability transition, или митохондриальная пора)
ингибирования протонов и функционирование этих соединений в качестве
является одной из основных причин клеточной смерти от различных причин.
внутреннего очистительного фактора для К+- каналов [175].
Например, это один из ключевой фактор при клеточной смерти от
эксайтотоксичности, при которой избыточная активация глутаматных

48 49
рецепторов вызывает массовый вход ионов кальция внутрь клетки. Клетки Митохондриальная пора является неселективным, сверхпроводимым
подвергшиеся обработке токсическими количествами кальциевых ионофор0в аналом с множеством макромолекулярных компонентов. В митохондриях
также проходят стадию МРТ и смерти от некроза [193]. Впервые Hunter et а| нервны х клеток высокая концентрация ионов кальция способствует открытию
[164] открыли механизм транзиторной проницаемости митохондриальной митохондриальной поры. Это возможно, так как ионы кальция связываются и
мембраны, получивший название митохондриальной поры (МРТ), которые активирую т места связывания на сайтах связывания матрикса рецепторов
оказался ключевым механизмом, определяющим смерть клеток через некр0з м и тохон дри ал ьн ой поры [155]. Присутствие свободных радикалов, еще один
или апоптоз. Митохондриальная пора состоит из 30 кДа - транслокатора результат избыточной внутриклеточной концентрации ионов кальция, также
адениновых нуклеотидов, 32 кДа-потенциал-зависимого анионного канала сп особст в ует открытию митохондриальной поры [166]. Как известно, для
(порина) и 18 кДа - бензодиазепинового рецептора внешней мембраны реализации клеточной смерти через апоптоз требуется достаточная
митохондрий [121, 238, 95]. С нею ассоциированы также другие белки: члены концентрация АТФ [243, 192, 135]. При недостаточной концентрации АТФ
семейства Вс1-2 , циклофилин Д и ферменты энергетического метаболизма. апоптоз блокируется и клетки погибают в результате некроза.
гексокиназа и креатинкиназа. При связывании ионов Са2+ этот комплекс 1.12. Общая стратегия лечения глиом
образует мембранную пору диаметром 2 ,6 -2 ,9 нм, способную пропуская Современная терапия злокачественных глиом головного мозга
низкомолекулярные вещества с Мг < 1500, что приводит к быстром) базируется на удалении опухолевого узла с помощью разнообразных
освобождению Са2+, снижению мембранного потенциала р нейрохирургических технологий и на подавлении роста злокачественных
высокоамплитудному набуханию митохондрий [ 121,238, 95, 166]. клеток многочисленными цитостатическими и цитолитическими методами.
Открытие поры стимулируется рядом факторов, в том числ! Результатом этих вмешательств является усиление или появление в организме
неорганическим фосфатом, прооксидантами, ионами Са2+, щелочным pH воспалительного процесса, который в дальнейшем способствует стимуляции
активными формами кислорода (ROS), SH-реагентами, истогцента рецидивов глиом. Поэтому в основу общей стратегии лечения должны быть
митохондриального пула АТР. Блокируют открытие МРТ иммуносупрессивньв положены принципы стойкого подавления воспалительных процессов в
препараты, циклоспорин А [99], адениновые нуклеотиды [121, 165] сочетании с восстановлением способности пораженного органа к
антиоксиданты, спермин [190], ионы Mg2+ [220], низкое pH, ингибитора функционально полноценной репарации. Многочисленные сообщения о
фосфолипаз, включая трифлюоперазин, дибукаин, кинакрин и др. [182, 107] снижении частоты опухолевого роста на фоне длительного приёма аспирина и
Открытие неспецифической Са2+-зависимой поры рассматривается как один и Других нестероидных противовоспалительных средств подтверждают важность
путей эффективного вывода катиона из митохондрий млекопитающих 1 подавления хронического воспалительного фона и избыточной
условиях, когда концентрация свободного Са2+ достигает высоких величин пролиферативной активности для профилактики и лечения онкопатологии [59 ].
как ключевое событие в запуске реакций апоптоза [63, 121; 166; 153] и некро3 Однако этой терапии недостаточно для эффективного противодействия
животных клеток [181, 182]. Рецидивированию, потому что при этом не учитываются особенности стадии
адьтерации при опухоль-ассоциированном воспалении. Для патогенетической
50 51
терапии глиом актуальное значение приобретают блокаторы NMDA - и АМРд опго
r oJlO BH Ui мозга были проведены исследования агрегации клеток крови у
- рецепторов в клетках злокачественных глиом и клетках крови, которые будут 5 льных с менингиомами и метастазами рака в головной мозг, у доноров, у
способствовать уменьшению нейрональной гибели, и, как результат больных с черепно-мозговыми травмами и спинальными грыжами. Показатели
подавлению воспалительного процесса, ассоциированного с ростом глиом. хепени агрегации клеток крови исследовали совместно с изменениями
Возможность контролировать активность NMDA-рецепторов и других аберраций лимфоцитов у нейрохирургических больных. Изучали также
ионотропных рецепторов на практике, таким образом, находится в фокусе особенности пролиферативного ответа лимфоцитов в ответ на различные
нейронаук. концентрации ФГА. Исследовали изменение степени агрегации клеток крови
Особенностью опухоль-ассоциированного воспаления является тесный под воздействием различных концентраций фармпрепаратов, включающих
контакт с эмбриональными тканями, который отсутствует при развитии блокаторы кальциевых каналов, ингибиторы глутаматных NMDA-рецепторов,
обычного воспалительного процесса. Опыт использование стволовых клеток нестероидные противовоспалительные соединения. Результаты этих
при репарации органов и тканей взрослого организма свидетельствует о исследований были использованы при разработке новых принципов подавления
наличии антагонистических отношений между репарацией с помощью опухоль-ассоциированного воспаления, апробированных при перевивных
стволовых клеток и репараций за счёт воспаления. Это выражается в штаммах глиом головного мозга у крйс.
отсутствии рубцовой ткани, что характерно для репарации за счёт
На основе изложенных материалов можно сделать следующие
воспалительного процесса. Поэтому опухоль-ассоциированное воспаление -
выводы:
это - микровоспаление, особенно при глиомах головного мозга, которое на
1. Ранее онкологами не разделялись механизмы, принадлежащие
системном уровне слабо выражено, что требует применения новых методик для
сугубо опухолевому росту, и сопровождающим этот рост защитно­
его изучения. Воспалительный процесс активируется распадом тканей опухоли
компенсаторным реакциям;
и сопровождает опухолевый рост до гибели организма - опухоленосителя.
2. На сегодня стало известно, что опухоль состоит из двух процессов,
Эффективное и продолжительное подавление проявлений микровоспаления
среди которых типическим патологическим процессом является
при злокачественных опухолях, в т.ч. и при глиомах головного мозга, может
только воспаление;
способствовать увеличению продолжительности жизни онкобольных, а в
3. Опухоль-ассоциированное воспаление сопровождает рост,
перспективе, возможно, и их излечению.
прогрессию и метастазирование злокачественных опухолей
Изучение особенностей опухоль-ассоциированного воспаления при
человека вплоть до его гибели;
злокачественных глиомах головного мозга проведено с использованием
4. Некротические процессы являются важным звеном в патогенезе
прибора, сконструированного с применением принципов нанотехнологий,
опухолевого роста;
который позволяет исследовать степень агрегации клеток крови, как один из
5. В раннем эмбрионе опухоль не возникает, а имплантированные
ранних показателей развития воспалительного процесса. Для обнаружен^
клетки глиомы погибают в тканях эмбриона;
особенностей этого системного показателя при злокачественных глиома*
52 53
6 Клонирование животных показало возможность превращен^ Глава 2. Объект и методы исследований
зрелой соматической клетки в тотипотентную, что имеет важн0е 2.1. Объект исследования
оНЯ1тртттте для понимания механизмов опухолевого роста, ,
значение для иимимап ' Объектом исследования явились клетки периферической крови
7 ррпяпяпия с помощью стволовых клеток находится g
/. репарации с тл» нейрохирургических больных, взятых при поступлении в клинику до
антагонистических отношениях с репарацией за счёт ия, ^ в е д е н и я лечения, а также клетки периферической крови крыс с перевивной
8. О б н а р у ж е н ы и о н о т р о п н ы е рецепторы на мембранах кл р вии Ю1.8 (с условием выполнения всех норм Комитета по биоэтике).

злокачественных глиом, г еПаринизированную венозную кровь, взятую у больных до начала лечения,


9. Ионотропные рецепторы играют важную роль мах разделяли путем центрифугирования (3000 об. /мин в теч. 15 мин.) на
патогенеза некрозов при злокачественных глиом , клеточные элементы крови и плазму. Гепарин, как известно, не влияет на
10. Противовоспалительные препараты при длительн р ии агрегации клеток крови. Клеточную фракцию использовали для
подавляют рост злокачественных опухолей, определения сдвига минимума кривой поверхностного плазмонного резонанса
И . Противовоспалительныепрепараты обладаю (ППР) в градусах, отображающего степень агрегации клеток крови. У больных,
действием при их длительном применении, проходивших курс комплексного лечения в ГУ “Институт нейрохирургии им.
12. Отсутствуют рекомендации подлител му пр акад. А. П. Ромоданова НАМИ Украины”, исследовали показатели степени
ппотивовоспалительных препаратов без побочных действий Не
противовиышлшс.иоптЛ у г агрегации клеток крови и клеточной плотности глиом до начала
основе патогенетического подхода для подавления опухоль- „
основе ucuuictitin терапевтических и хирургических воздействии, а также у больных с
ягготтиигюванного воспаления при злокачественных опухолях. _
ассоциировавши о ? продолженным ростом опухоли, которые были госпитализированы в клинику
для проведения повторных операций. Перед началом исследований в образцы
крови добавляли препараты верапамила, кетамина, мовалиса, АТФ-натрия,
ФГА (фитогемагглютинина). Один из контрольных образцов оставался
интактным, в другой добавляли 20 мкл безионной воды, которую использовали
Для различных разведений фармакапейных мембранмодифицирующих
препаратов. Исследование влияния этих препаратов на степень агрегации
клеток крови проводили при разведении препаратов в 10"', 10 ‘2, 10'3, 10'4, 10‘5
раз в соотношении объёмов 20 мкл к 200 мкл крови. В качестве контроля
аналогичный забор крови проводили у здоровых доноров, прошедших
клиническое обследование в пункте переливания крови. В группу сравнения
°шли показатели, полученные у больных с черепно-мозговой травмой (ЧМТ)

54 55
средней степени тяжести и со спинальными грыжами, при которые К л ет о ч н у ю плотность глиом II - IV ст. зл. определяли, проводя
воспалительный процесс не связан с ростом опухоли, а также менингиомы I Ст рфологическую обработку биоптического материала тканей мозга и
зл. и метастазы рака в головной мозг как примеры доброкачественного й л ухол ей (по 15 образцов в каждой группе) с помощью системы анализа
злокачественного процессов, при которых воспалительный процесс развивается зображений IBAS - 2000 фирмы KONTRON (Germany). Измеряли по 30
за пределами гемато-энцефалического барьера. Исследуемые группы расстояний между ядрами клеток (в микрометрах) в каждом образце при
составляли при условии отсутствия сопутствующих воспалительных увеличении светового микроскопа в 200 раз. Условным контролем служил
заболеваний. Так, общепринятые клинические исследования крови (показатель биоптический материал, полученный в смежных с патологическим очагом
СОЭ, С - реактивный белок, количества клеточных элементов крови) показали участках мозга, подлежащих удалению при хирургическом лечении
отсутствие воспалительного процесса у больных с глиомами II - IV ст. зл. н еоп ухол евой патологии (инсульт, черепно-мозговая травма и др.). Размеры

Больных, имеющих патологии, сопровождающиеся изменениями процессов глиом определяли с помощью ЯМР-томографа “SOMATOM CR” (фирма
агрегации клеток крови (гипопротеинемия, аутоиммунные заболевания и Siemens, Germany), используя показатели диаметра и объема глиом (в см и см3).
заболевания, требующие применения салицилатов), в группы обследуемых не Для изучения влияния динамики роста глиомы 101.8 на степень
включали. В таблице 1 указано количество обследованных здоровых лиц и агрегации клеток крови эксперимента проводили на крысах линии Вистар (18
больных с нейрохирургической патологией. жив.). Животным в возрасте 2-3 недель проводили перевивку суспензии 1млн.
Таблица 1, клеток глиомы штамма 101.8 в физиологическом растворе хлористого натрия в
левую теменную долю головного мозга (штамм 101.8 был получен в Институте
Количество обследованных здоровых лиц и больных
морфологии человека РАН, г. Москва, РФ). Глиома 101.8 по своим
с нейрохирургической патологией
биологическим характеристикам близка к глиобластоме человека, имеет
Диагноз Количество обследованных
выраженный злокачественный фенотип и на 3 - 4 неделю после перевивки
лиц
приводит к 100% летальности экспериментальных животных. С целью забора
здоровый 52
крови крыс декапитировали, кровь помещали в пробирку с гепарином.
Глиома II ст. зл. 52
Исследования показателей ППР проводили на клетках крови на 3 -и, 7 -е, 10-е и
Глиома III ст. зл. 103
13-е сутки после перевивки глиомы 101.8. В каждой группе было по 5
Глиома IV ст. зл. 84
животных, в качестве контроля использовали группу интактных крыс (5 жив.).
Метастазы Mt 32
С Целью подбора наиболее оптимальных концентраций, тормозящих
ЧМТ 73 процессы воспаления, проводили исследования фармакопейных
Менингиомы 18 Мембранмодифицирующих соединенй на степень агрегации клеток крови в
Спинальные грыжи 22 °нцентрационном градиенте от 10 до 100.000 раз, разбавляя препараты: 0,25%
Всего: 436 Р створ верапамила-гидрохлорида, кетамина гидрохлорид (500 мг/ 10 мл),
56 57
мовалиса (15 мг/1,5 мл), 0,25% раствор натрия-АТФ и ФГА (во флаконах no j аТелями степени агрегации клеток крови. Получение препаратов

мг). (табл. 2 . сокращения в таблице следующие: зд-здоровые лица; П-глиомы Ij еТафазнЫХ ХР0М0С0М и анализ равномерно окрашенных хромосом с

ст. зл.; Ill-глиомы III ст. зл.; IV-глиомы IV ст. зл.; Mt-метастазы рака ъ улповым кариотипированием проводили согласно общепринятым методам,
учиты вали все структурные аберрации хроматидного и хромосомного типов,
головной мозг; ЧМТ-черепно-мозговые травмы.)
Таблица 2 числовые аберрации (анеуплоидные и полиплоидные клетки). Изучали
распр еделение анеуплоидных клеток на гипоплоидные (количество хромосом в
Количество исследованных проб крови с добавлением верапамила,
метафазе составила меньше 44) и гиперплоидные (количество хромосом в
кетамина, мовалиса, NaATF и фитогемагглютинина (ФГА)
метафазе была больше 48). Культивирование лим ф оцитов и приготовление
у здоровых лиц и больных с различной нейрохирургической патологией
--------- ,-------- ------- препаратов хромосом было проведено стандартным полумикрометодом [163] с
модиф икациями, принятыми в лаборатории мутагенеза. Отбор метафазных
пластинок для цитогенетического анализа, классификация и учет аберраций
хром осом были общепринятыми [25]. При подсчете количества анеуплоидных
клеток учитывали метафазы гипоплоидные - от 29 до 42 хромосом и
гиперплоидные - более 49 хромосом [11].
Мультиаберрантными считали клетки, в которых было 3 и более
повреждений. На каждую экспериментальную точку и для каждого больного
анализировали от 100 до 200 метафаз.
Проводили модификацию реакции бласттрансформации лимфоцитов
(РБТЛ) in vitro 0,25% раствором верапамил-гидрохлорида (в разведении
1:1000), 1%-ным раствором натрия АТФ (в разведении 1:1000) и раствором
кетамина (50мг/мл) в разведении 1:1000. Все рабочие растворы готовили
непосредственно перед культивированием и вносили по 10 мкл каждого
препарата в культуру лимфоцитов периферической крови больных. Поскольку
некоторые соединения могли препятствовать делению клеток, их добавляли
после того, как клетки пройдут стадию Go, то есть через 36 часов после начала
культивирования лимфоцитов.
Проводили исследование влияния фармакопейных
1 7 ..... i„ ■, ■-■■■ ■............. — М ем бр анм оди ф и ци рую щ и х соединений на продолжительность жизни 48
Цитогенетические показатели лимфоцитов периферической
животных с перевивной крысиной глиомой 101.8. Пяти группам животных
исследовали с целью изучения взаимосвязи стабильности клеточного геноМ
59
верапамил (10'3и 10‘4) и кетамин (10'2и 10'4) вводили внутрибрюшинно на ц оную и жидкую фракции значительно ускоряется при наличии разных
клет°ч ^
сут после перевивки глиомы в объёме 50 мкл один раз в сут ежедневно д0 болеваний. Но только с начала 20-х годов прошлого века Альф Вестергрен

признаков агонии у животных. Контрольным животным вводили раствор длож ил удобный способ измерения СОЭ в целостной крови в вертикально

хлористого натрия при тех же условиях эксперимента. стаНОВл ен н о м капилляре длиной 200 мм и диаметром 2,5 мм [296]. Этот метод
Статистическую обработку полученных данных проводили с начали широко применять в клинике. Значение СОЭ превышает пределы
использованием критериев Стьюдента [4]. нормы При острых воспалительных процессах, беременности, анемии, инфаркте

2.2. Методы исследований степени агрегации, показателей миокарда, при заболеваниях щитовидной железы, при наличии
текучести крови и микрореологических параметров эритроцитов злокачественны х опухолей [2, 29]. Однако «нормальные» значения СОЭ иногда
можно наблюдать в терминальных стадиях заболевания (последних стадиях
В настоящее время все большую актуальность приобретают задачи,
развития болезни), а при достаточно легких заболеваниях СОЭ в отдельных
связанные с совершенствованием методов диагностики состояния
случаях может быть достаточно высокой. Поэтому, несмотря на широкое
функциональных систем организма. Поскольку кровь является внутренней
приложение, тест на СОЭ считают таким, который имеет ограниченное
средой организма, то даже небольшие изменения ее гомеостатических
диагностическое значение. С другой "стороны, в медицинской литературе есть
характеристик имеют существенное диагностическое и прогностическое
указания на то, что диагностические возможности этого метода используются
значение. Это в полной мере относится к комплексу показателей текучести
далеко не полностью [2].
крови и микрорео логическим параметрам эритроцитов. К показателям
2.2.1.1. Процесс оседания клеток крови
микрореологии эритроцитов относятся их деформируемость и агрегацш.
Несмотря на длинную историю использования метода СОЭ и его
Последняя характеристика микрореологии эритроцитов представляет собой
простоту, доныне не существует единственной теории, которая объясняла бы
тонкий индикатор состояния организма в целом. Анализ научно-технической
механизм оседания клеток крови. А.Л. Чижевский, который много лет посвятил
литературы, посвященной способам определения степени агрегацш
изучению этого явления, констатировал: «Теоретические основы механизма
эритроцитов, показал, что большинство используемых методов и медицинских
оседания эритроцитов не только не разработаны, но даже и не выражены в той
устройств обладает низкими показателями точности, требует достаточно
мере, которая необходима для элементарного понимания явления. В то же
продолжительного времени для получения результатов, а также имеет ря^
время есть достаточные основания считать, что оценивание СОЭ таит в себе
других недостатков [12]. большие потенциальные возможности, умение пользоваться которыми будет
2.2.1. Показатели СОЭ как наиболее известный зависеть
тест ДЛ * глубины экспериментально-теоретического анализа этой сложной и
от
определения степени агрегации клеток крови интересной проблемы» [68]. В современных работах также отмечается, что,
Определение СОЭ - самый распространенный тест для определен!11Невзирая на интенсивные исследования, суть процессов, которые происходят в
степени агрегации клеток крови в лабораторной клинической практике. Еше1ХоДе оседания крови, пока не имеет однозначного толкования [16].
1894 г. польский врач Эдмунд Биернаки заметил, что расслоение крови *0*■
60 61
Как причину начального ускорения оседания эритроцитов следу^ оциты должны в нужное время легко ассоциировать, а при необходимости
назвать их способность к агрегации. Еще в 1859 г. Джозеф Листер наблюду быстро распадаться на отдельные клетки. При многих патологических
что в размещенной между стеклянными пластинами капле крови человек стояниях эритроциты теряют нормальные свойства ассоциации и
эритроциты образуют структуры характерной формы - «монетные столбики» ссоциации. Обычно в таких случаях повышается агрегация эритроцитов в
которых клетки прилегают друг к другу своими плоскими поверхностями. „ « как следствие, растут показатели СОЭ.
КрОВИ " I
В большинстве современных моделей, которые описывают механизм Почему же эритроциты собираются в достаточно стойкие структуры, хотя
оседания эритроцитов, начальное ускорение их оседания объясняют тем, они заряжены негативно и должны отталкиваться один от другого?
сразу после набора крови в капилляр эритроциты представлены в виде С огл асн о наиболее распространенной в наше время теории, ассоциация
отдельных клеток, которые медленно оседают в вязкой среде плазмы. Не эритроцитов обеспечивается макромолекулярными «мостиками» между ними.
клетки постепенно агрегируют, и с увеличением размеров агрегатов скоросц В соответствии с этой концепцией агрегация эритроцитов происходит тогда,
их оседания повышается, поэтому растет скорость оседания эритроцитов ; когда сцепление между клетками, которое возникает за счет адсорбции на них
целом. Спустя некоторое время за счет уплотнения клеточной массы оседащ макромолекул, преодолевает электростатическое отталкивание [16]. Поэтому в
эритроцитов замедляется. На данный момент есть много указаний на то, чп 20-е годы прошлого столетия быЛа выдвинута гипотеза о «склеивании»
существует высокая корреляция между способностью эритроцитов к агрегацщ негативно заряженных эритроцитов.
и скоростью их оседания. При многих патологических состояниях, когд К основным факторам, которые предопределяют ассоциацию
эритроциты легко агрегируют, показатели СОЭ, как правило, значителш эритроцитов, принадлежат свойства самих эритроцитов, в первую очередь
возрастают. заряд их мембран. Снижение этого заряда повышает агрегацию эритроцитов и
Агрегация клеток - далеко не тривиальное явление. Выявление еп является одним из основных факторов, влияющим на оседание эритроцитов
тонких механизмов необходимо не только для объяснения процесса оседаю; [16].
эритроцитов, но и для понимания многих особенностей физиологии кров? Для организма не безразлично значение электростатического заряда
потому что агрегация и дезагрегация имеют место в циркулирующей кров! эритроцитов [73]. Больше того - эта величина является одной из важнейших
Агрегация эритроцитов в «монетные столбики» и в структуры высшего порядк характеристик транспортно-обменной работы всего кровяного русла. При
является ключевой в процессе оседания столбика клеток в заполненном кровЫ достаточном количестве зарядов, которые имеют эритроциты, достаточным
капилляре. Когда в крови, которая течет в микрососудистой систем! является и электрораспор между ними. Это определяет величину пути, по
образуются «монетные столбики», вязкость крови снижается, что особей*1 которому плазма выполняет функцию доставки к поверхности эритроцита
важно для ее нормальной циркуляции в организме человека. При это питательных материалов, которые эритроцит относит дальше к месту их
«монетные столбики» легко передвигаются в сосудистой системе за счет » 0тДачи. Значение электрораспора обуславливает и обратный процесс отбора
скольжения в центре сосуда по слою плазмы, что разделяет стенки сосуД2 °тработанных материалов. Все это способствует нормальному обмену веществ.
клетки крови. Для обеспечения нормального кровотока и тканевого дыхаН1 При недостаточности заряда на поверхности эритроцита распор является
62 63
недостаточным, в результате чего транспортно-обменная функция снижает^ мозга эти показатели практически не отличаются от нормы, что видно из
Поэтому, влияя на трансмембранный потенциал эритроцитов, следует ожида^ таблицы 3.
изменение в поведении эритроцитов и показателей СОЭ.
Таблица 3.
На СОЭ влияет также и форма эритроцитов. Так, резкое снижение С03 Средние показатели клинических исследований крови
происходит при эхиноцитозе за счет изменения нормальной формь, Концентрация
эритроцитов. Показатель
В работе [16] отмечено, что изучение механизмов СОЭ нужно проводить Диагноз Лейкоциты Тромбоциты Лимфоциты
СОЭ (мм)
в динамике, то есть во времени. В медицине считается, что высокие показатели
( 109/л) ( 109/л) ( 109/л)
СОЭ свидетельствуют о наличии воспалительных процессов или процессов
распада тканей в организме. Однако по результатам теста СОЭ тяжесть той или Глиомы II ст. зл. 6,9 7 194,5 2
другой патологии не всегда определяется однозначно. На основе
Глиомы II-III ст. зл. 6,8 7 201,7
исследовательских данных о немонотонном характере оседания крови, который 1,9

связывается с сохранением метаболической активности форменных элементов Глиомы III ст. зл. 9Д Г- 9,1 230 1,9
крови на протяжении длительного времени после забора пробы у пациента, Глиомы III-IV ст.
9,8 8,1 324 1,9
впервые проведен детальный анализ динамики оседания крови. Этот анализ зл.
позволил ввести ряд новых параметров процесса оседания и выявлять, за
Глиомы IV ст. зл. 10,7 9,4
совокупностью динамических параметров СОЭ, патологии даже в тех случаях, 272,3 1,9
когда это не удается по результатам стандартного теста СОЭ. Метастазы (Mt) 16 9,7 212 1,5
Следует заметить, что в работе [16] анализ динамических показателей ........ 1
СОЭ проводился для крови без добавления фармпрепаратов. В дальнейшем Примечание: ст. зл. - степень злокачественности.
будет показано, что добавление определенных соединений в кровь значительно Наряду с этим, оценка агрегации эритроцитов может осуществляться
повышает диагностическую ценность СОЭ. Это обусловлено наличием в на основе регистрации нескольких последовательно идущих значений
клетках крови ионных каналов и ионотропных рецепторов, как и в клетках показателя СОЭ для построения СОЭ-граммы и дальнейшего определения угла
паренхиматозных органов, в т.ч. и в клетках головного мозга. В данном случа* наклона кривой по показателям скорости оседания эритроцитов. Для этого
речь идет о распознавании воспалительных процессов при глиомах различны? Регистрируют в течение 90 минут каждые 5 минут при температуре +37°С
степеней злокачественности и локальными воспалительными процессами и затем строят график динамики оседания клеток крови в зависимости от
вызванными черепно-мозговыми травмами средней тяжести. времени их оседания. Для сравнительной характеристики групп с различной
Проведенный нами анализ общепринятых клинических показателей СО- патологией гематокрит искусственно доводили до 35%. Данный способ
и количественного состава клеток крови показал, что при глиомах головной °ЗВОляет повысить достоверность диагностики по сравнению с клиническими
64 65
показателями СОЭ, которые определяют на 60-й мин с момента постанов^ э, вызывающих агрегацию эритроцитов, является величина заря
капилляров в штатив Панченкова. Существует достаточно новый вари ^ ^ембраны. При ее снижении возрастает показатель агрегации эритроцитов.
оценки агрегации эритроцитов, основанный на исследован^ Измерение потенциала Дорна позволяет определить электрокинетическую
микроскопической картины оседания эритроцитов в гематокритном капилляру характеРистикУ осеДания эритроцитов. Общим существенным недостатком
с регистрацией скорости оседания клеток. Однако круглое сеченц? обоих методов определения СОЭ для анализа агрегации эритроцитов является
капиллярной трубки не позволяет точно сфокусировать изображение клеток зависимость скорости оседания клеток от плотности среды (вязкости плазмы) и
или их агрегатов. Следовательно, точность определения агрегации эритроцитов от концентрации клеток (гематокрита), а также от объединения клеток в
этим методом будет заметно ограничена. комплексы-агрегаты, что заставляет сомневаться в точности и достоверности
Известно о существовании трёх автоматических метода;, метода.
исследования показателей СОЭ в динамике: Предложенный нами способ модификации СОЭ для определения
1. Кондуктометрический метод; отличий между группами нейрохирургических патологий позволил впервые
2. Электрокинетический метод; обнаружить системный воспалительный процесс при наличии патологии в
3. Фотометрический метод. забарьерном органе - головном мозге*(рис. 1).
Показатель СОЭ, мм
Кондуктометрический метод регистрации СОЭ базируется hi
измерении сопротивления крови с постоянно оседающими эритроцитами
Электрический ток, проходящий через кровь, крайне мал - примерно 0,2 мА
напряжение 0,25 В, частота 10 кГц. Эритроциты при данной частот!
практически являются диэлектриками. Вследствие этого электрическа
сопротивление крови между электродами при оседании эритроцитов на да
ячейки увеличивается, причем степень этого увеличения зависит от количеств
осевших эритроцитов. Электрическое сопротивление крови регистрируется
динамике и определяется как разность между сопротивлениями в данной точк
(через 5, 10, 30 и 60 мин.) и начальным сопротивлением крови. Одна* Рис. 1. Показатели модифицированного метода СОЭ у больных с
исследования показали, что данный метод является менее чувствительным, че1 различной нейрохирургической патологией
ручной метод Панченкова [56], и не позволяет оценивать агрегат Кроме искусственно доведенного до 35 % гематокрита, модификация
эритроцитов и служит только для измерения суспензионной стабильно^ заключалась в проведении методики при температуре +37° С на протяжении 90
крови. За основу электрокинетического метода взят эффект Дорна [8]. *■ Мин, при этом показатели фиксировали через каждые 5 мин. С целью
заключается в том, что при движении заряженных частиц в неподвюкйс Уменьшения ошибки в определении гематокрита этот показатель определяли
столбе жидкости в ней возникает разность потенциалов. Известно, что одним через cv
сУт после начала постановки методики модифицированного СОЭ.
66 67
Результаты анализировали с помощью разработанной канд. техн. ца^ ^отой и доступностью, что объясняет его широкое применение в
Тарасовым A.J1. компьютерной программы. ^йнической практике.
Из рисунка 1 видно, что по сравнению с контрольными данными (грунПа Все фотометрические методы можно классифицировать по
здоровых лиц) показатели СОЭ закономерно возрастают при увеличении рактеристике регистрируемого светового потока:
степени злокачественности глиом и становятся максимальными в группах с 1 Исследование в проходящем световом потоке.
метастазами рака в головной мозг и у больных с черепно-мозговыми травмами 2 И сследован ие в отраженном световом потоке.
(ЧМТ). Следовательно, увеличение степени агрегации клеток крови происходи Интенсивность света, прошедшего через слой суспензии эритроцитов,
последовательно от более доброкачественных глиом к высоко злокачественным изменяется в соответствии с их агрегатным состоянием, которое выражается в
глиомам. Учитывая показатели СОЭ при ЧМТ видно, что опухоль- размерах и плотности образующихся агрегатов. Возможности измерения
ассоциированное воспаление носит характер микровоспаления, что требует прозрачности крови практически ограничены слоями толщиной 2-3 мм. Так как
применение высокочувствительных методов для его обнаружения. исследуемая проба крови представляет собой суспензию взвешенных
2.2.2. Современные методы определения степени агрегации эритроцитов, то на интенсивность прошедшего светового потока будут
клеток крови оказывать большое влияние рассеивающие свойства агрегатов эритроцитов.
В настоящее время разрабатываются новые современные методы При измерении в суспензии взвешенных эритроцитов интенсивность
определения агрегации клеток крови [49, 90]. Известен способ измерения прош едш его светового потока зависит не только от размеров и формы
степени агрегации эритроцитов, основанный на оценке светопропускания через эритроцитов, но и от их объемной концентрации и функционального состояния
пробу цельной крови или суспензии эритроцитов в агрегирующей среде [253]. гемоглобина. В связи с этим более широкое применение получили методы
Он базируется на измерении интенсивности светопропускания в зависимости от исследования суспензии эритроцитов в отраженном световом потоке.
агрегатного состояния крови. Более высокая степень агрегация клеток крови Для изучения агрегации эритроцитов применяют метод
характеризуется повышенной интенсивностью прохождения света через «силлектрометрии», сущность которого состоит в уменьшении
образец крови, и наоборот. Способ позволяет проводить регистрацию агрегация светорассеивания после прекращения перемешивания в процессе дезагрегации-
эритроцитов в условиях покоя, а также после приложения высоких или низкШ агрегации клеток [37 ].
напряжений сдвига. 2.2.2.1. Новый метод определения агрегации клеток крови с
Фотометрический метод является наиболее распространенным методов помощью явления поверхностного плазмонного резонанса
исследования агрегационных свойств эритроцитов. С его помощью возможна Изучение начальных процессов агрегации клеток крови стало доступным
осуществление количественной оценки агрегатного состояния крови - размере1 ПРИ использовании достижений нового направления биосенсорики,
и плотности микроагрегатов эритроцитов. Кроме этого, фотометрически’ спользующего эффект поверхностного плазмонного резонанса (ППР) [100,
анализ отличается от других методов (биомикроскопии, микрофотограф#1 ’ 146, 154, 177, 195, 235, 241]. Спектрометр плазмонного резонанса
^лазмон - 6», разработанный в Институте физики полупроводников имени
68 69
В. Е. Лашкарева НАН Украины, в режиме реального времени отобра^ беспечивает два параллельных идентичных оптических канала биосенсора.
процессы агрегации клеток крови и не требует для своей работы радиоактивц^ £ налы расположены параллельно на расстоянии 7.5 мм один от другого.
или флюоресцентной метки. При конструировании прибора использовал^
принципы нанотехнологий, что позволяет регистрировать межклето^
взаимодействие на наноразмерных расстояниях (порядка 200-300 нм).
Принцип работы прибора состоит в том, что коллимированцы
поляризованный луч источника оптического возбуждения, попадая со сторож
стекла на напыленный через промежуточный адгезионный слой хрома (l.j,
нм), наноразмерный слой золота (45-50 нм) может при определенных уп^
падения возбуждать в слое золота плазмонные колебания. Факт и параметр
возбуждения плазмонных колебаний можно фиксировать, определяя параметрь
отраженного от золотой пленки света. Условия возбуждения плазмонньс
колебаний существенно зависят от среды, контактирующей с пленкой золот; Рис. 2. Оптическая схема прибора ПЛАЗМОН-6
Любые изменения этой среды приводят к изменению угла падения света, npi Использование ретропризмы позволило сконструировать оптический блок
котором происходит возбуждение плазмонных колебаний. В наши в виде завершенного сменного конструктива, который включает источник
исследованиях с поверхностью золотой пленки контактировали, в частностЕ излучения (полупроводниковый лазер), светоделительное устройство, рабочие
клетки крови. детекторы-фотодиоды, дополнительные фотоприемники контроля
Пластинки с золотым покрытием сменные и могут легко заменятьс интенсивности лазерного луча и системы точной калибровки угла падения
новыми или использоваться повторно в зависимости от конкретны света на рабочую грань призмы. В нем также установлены усилители, схемы
особенностей работы. Так, в процессе работы с клетками крови пластинк стабилизации и модуляции лазерного излучения, коммутации сигналов и тому
использовались многократно после промывки деионизированной водой. подобное. Такой подход является уникальным и позволяет существенно
Упрощенная оптическая схема биосенсора «Плазмон — 6» показана £ уменьшить и упростить весь биосенсор. Размеры прибора 215x100x100, масса
рис. 2. Монохроматический поляризованный параллельный луч лазерног менее 3 кг (рис. 2).

излучателя падает на стеклянную ретропризму полного внутреннего отражен» Наличие двух идентичных каналов позволяет проводить исследования
[22] и, после отражения от верхней (рабочей) и зеркальной задней гране' ВУХ разных проб одновременно, или работать по дифференциальной схеме,

выходит из призмы. Отразившись от поворотного зеркала, луч попадает пользуя один из каналов как опорный. Дифференциальные измерения
рабочий детектор (на рисунке справа). Благодаря тому, что угол между верхй! ачИтельно повышают реальную чувствительность прибора благодаря
и задней гранями призмы составляет точно 90°, входной и выходной ЛУ Клт°чению влияния многих внешних факторов, таких, как, например,
Температура>
параллельны друг другу при любых углах падения света. Оптический
70 71
являть точную калибровку угла падения света на плазмон-
0су№е
п0ДДеР*йВаЮЩаЯ С Л 0 Й '

Приборы серии «ПЛАЗМОН» является универсальными приборами,


редн азн ачен н ы м и для применения в разных отраслях и исследованиях,
ботают под управлением ПК и имеют универсальное программное
обеспечение. Разработанное программное обеспечение позволяет максимально
использовать возможности приборов при работе в лабораторных условиях.
Программное обеспечение с высокой точностью высчитывает угловое
полож ение плазмонного резонанса и строит кинетику изменения этого
полож ения. При этом используются разные алгоритмы, которые позволяют
значительно уменьшить шум кинетики и повысить чувствительность
Рис. 3. Биосенсор Плазмон-6. биосенсора [75]. Программное обеспечение имеет встроенные средства
На верхнюю грань ретропризмы через иммерсионную прокладку контроля и юстировки прибора.
устанавливается стеклянная пластина с нанесенной плазмон-поддерживающей Биосенсор дает возможность сопоставлять измерения плазмонного
тонкой пленкой или золота или золота с серебром [26] и проточная иле
резонанса с одновременными флуоресцентными, электрохимическими, и тому
открытая кювета. Плазмон-поддерживающая пленка формирует сенсорную подобными измерениями, благодаря тому, что он имеет дополнительный
поверхность, где поляризованный лазерный свет возбуждает колебание измерительный канал для подключения внешних сигналов и синхронного
электронной плазмы (поверхностный плазмон), а кювета обеспечивает контаю отображения их с кинетикой плазмонного резонанса.
плазмон-поддерживающей золотой пленки с исследуемой жидкостью иле
Метод плазмонного резонанса имеет существенное преимущество перед
газом. В свою очередь, ретропризма установлена на поворотной платформе, всеми остальными методами по определению степени агрегации клеток крови.
которая может вращаться вокруг оси, расположенной вблизи точки паденш Это преимущество заключается в реальной возможности проводить
света на плазмон-поддерживающую пленку, изменяя, таким образом, уг°' исследования на нативных клетках крови без добавления растворов хлорида
падения света. Поворотная платформа через прецизионный редуктор [76 натрия или различных буферных систем, как того требуют условия
связана с шаговым двигателем. Максимальный угол сканирования 17°. Врем* определения клеточной агрегации при других методах. Открытие ионных
одного полного сканирования не больше 2,5 секунд. каналов и ионотропных рецепторов на клетках крови было сделано в последнее
Дополнительный детектор имеет узкую щелевую диафрагму и п озволяет1
Десятилетие. Многие методы определения агрегации или дзета-потенциала
достаточно высокой точностью фиксировать угол, при котором на него посЛ1 ^бран клеток крови к тому времени уже были разработаны и широко
отражения от прозрачной стеклянной пластинки попадает свет, отраженны °льзовались. Исследователи даже не подозревали, что буферные растворы,
передней гранью ретропризмы. Этот канал позволяет с высокой точность1, д РЖащие различные соли-электролиты, влияют на показатели
72 73
трансмембранного потенциала и на агрегацию клеток крови, блокиру^
разнообразные каналы и изменяют активность ионотропных рецептору
Поэтому результаты исследований по определению степени агрегации клет0
крови с использованием солевых растворов или буферных систем могут це
соответствовать действительности.
Показателем ППР будем считать сдвиг резонансной кривой Пцр
измеренный в градусах. Повторим, что спектрометр “Plasmon” чувствителен
только к тонкому слою (порядка 200-300 нм) примыкающему к золоту
Поэтому показатель ППР зависит не только от количества клеток крови в
пробе, нанесенной на слой золота, но и от общей площади мембран этщ
клеток, непосредственно взаимодействующих с плазмоном. Как известно, при
агрегации или агглютинации клеток крови уменьшается отношение
поверхности клеточных частиц к их объему, при этом общее количество клеток
по сравнению с контролем, может быть больше, а площадь соприкосновения с
золотой пленкой меньше, что приводит к уменьшению сдвига показателей Рис. 4. Визуализация с помощью прибора процесса растворения
сахарозы
ППР [150]. Полученные результаты измерялись и обрабатывались прибором с
программным пакетом, также разработанным в Институте физию: На первой минуте в концентрированный раствор сахарозы

полупроводников им. В.Е. Лашкарева НАН Украины, с выводом результатов е добавляется дополнительное количество воды и показатель максимально
повышается, фиксируя появление огромного количества вновь образованных
графическом и численном виде на монитор компьютера.
Ранее с помощью метода поверхностного плазмонного резонанс! молекул сахарозы из кристаллов. Затем на 2-й минуте дополнительно
проводили исследования по реакции моноклональные антитела - антигены добавили новую порцию растворённой сахарозы, что также фиксируется
прибором в виде повышения сигнала ППР (рис.4).
позже стали появляться работы по определению механизмов сворачиваемое^
крови и некоторые другие методики. Метод по определению степени агрегаци; Частицы латекса используются в лабораторной диагностике с целью

клеток крови ранее никем не использовался и впервые разработан авторам определения поглотительной способности нейтрофилов. Диаметр
использованных частиц латекса в эксперименте составил 0.8 мкм.
монографии [150].
В качестве примеров использования биосенсора Плазмон на рисунках 4 Концентрация частиц латекса в воде вначале опыта составила 50%, а в конце
опыта -85% (рис. 5).
5 приведены кинетики растворения сахарозы и латекса в воде.

74 75
Рис. 6. Действие тритона на кровь, измеренное с помощью метода
поверхностного плазмонного резонанса
Рис. 5. Растворение частиц латекса в воде. С увеличением Клетки крови (рис. 7, a-d) представлены округлыми образованиями,
концентрации частиц латекса увеличивается показатель
заполняющими почти всё поле зрения микроскопа. На рис. 7 (b-е) эритроциты
отклонения угла лазерного луча почти на два градуса.
имеют внешний вид, напоминающий ’’монетные столбики”, характерный для

Тритон Х-100 является сильным детергентом, который разрывам многих патологий, в частности при опухолях и воспалении, а также при
клеточные мембраны, в результате чего содержимое клеток выходит наружу добавлении 3% раствора хлористого калия, что было представлено на фото.
Прибор фиксирует образование большого числа молекул, вышедших из клето! 3%-ный раствор хлористого калия значительно увеличивает степень агрегации
в результате разрыва клеточной мембраны при добавлении к клеткам кров) клеток крови, в результате чего эритроциты тесно прилегают друг к другу
своими двояковогнутыми поверхностями, образуя картину «монетных
тритона Х-100 (рис. 6).
столбиков». Этот процесс является обратимым. При добавлении к клеткам
кР°ви цоликлона А, который используется при определении групп крови
Человека, клетки крови агглютинируют и этот процесс является необратимым.

76 77
Рис. 8. Показатели 111IP, полученные на клетках крови здорового
человека, на клетках крови после добавления 3%-ного
раствора хлористого калия и на клетках крови после
воздействия цолоКЛона А.

Рис. 7. Топология клеток крови (ув. х 200), взятых: a-d - у здоровоп


Глава 3. Результаты и их обсуждение
донора; b-е - эритроциты, расположенные в виде «монетам
столбиков», характерных для многих видов патологий, i
3.1 Исследование агрегации клеток периферической крови у
также образующихся при добавлении 3% раствора хлористол
больных с нейрохирургической патологией
калия; c-f - клетки крови после воздействия на них цоликлок
А. Активация процессов воспаления в организме начинается с уменьшения
Как видно, площадь стекла, на котором расположены клетки крови, имее электрического заряда клеток крови, в результате чего повышается их
больше пустых участков, при равном объёме крови, нанесенной на стекло! агрегация. В норме эритроциты несут отрицательный заряд и отталкиваются
предыдущим препаратом (a-d). На рис. 7 (c-f) представлены клетки крови пой ДРУГ от друга. Степень агрегации повышается при снижении активности
воздействия на них цоликлона А, который агглютинирует клетК градиент-создающих мембранных ферментных систем и увеличении
соответствующей группы крови. Как видно, площадь пустых участков на это! концентрации в плазме крови так называемых белков острой фазы - маркеров
стекле ещё больше, по сравнению с предыдущим препаратом (b-е). А-В*^ Воспалительного процесса (фибриногена, С-реактивного белка,
схематическое обозначение расположения мембран клеток крови на стекле. Церулоплазмина, сиаловых кислот, иммуноглобулинов и др.). Мы
Показано, что чем больше площадь незаполненных клетками кро{ предположили, что процессы хронического асептического воспаления могут
влиять
участков, тем больше степень агрегации (агглютинации) клеток крови и ^ на прогрессию глиом головного мозга и показатель степени
меньше сигнал II11P (рис. 8).
78 79
злокачественности глиом как за счёт увеличения клеточной пролиферации ь
опухолевом очаге, так и в результате длительной миграции клеточны).
элементов периферической крови и стволовых клеток гематогенного
происхождения. Экспериментальное доказательство взаимосвязи процессов
роста глиальной опухоли в головном мозге с изменениями агрегации клеток
крови изучали в экспериментах на крысах с перевивной глиомой 101.8.
Целью настоящих исследований явилось обнаружение взаимосвязи
Рис. 9. Показатели агрегации клеток крови (значение углового сдвига
между показателями уровня агрегации клеток периферической крови больных ц
ППР в градусах) у больных с глиомами различной степени
степенью злокачественности глиом головного мозга.
злокачественности. Обозначения: контроль - образцы крови
Исследование показателей ППР на клетках крови выявило статистически
без добавления препаратов;
значимые (р < 0,05) различия между группой здоровых лиц Е
зд-здоровые лица; П-глиомы II ст. зл.; Ш-глиомы III ст. зл.;
нейроонкологических больных с глиомами II - IV ст. зл. (рис. 9). Уменьшение
IV-глиомы IV ст. зл.; Mt-метастазы рака в головной мозг;
эффекта ППР на клетках крови может свидетельствовать о повышении уровня
ЧМТ-черепно-мозговые травмы.
агрегации клеток крови и, косвенно, о снижении их электрического заряда на
Эти результаты отличаются большим разбросом данных в группе
клеточных мембранах, что характерно для начальных этапов развития
здоровых лиц, что свидетельствует о разбежности данных в зависимости от
воспалительного процесса. Следует отметить, что тенденция к сниженик
возраста исследуемых (рис.9). Нами ранее были проведены исследования
показателей ППР на клетках периферической крови при глиомах II-IV ст. зл
показателей степени агрегации клеток крови (по данным ППР), которые
происходит постепенно, при этом минимальные показатели установлены у
показали, что в возрастных группах здоровых людей (20-40 лет, 41-60 лет, 61-
пациентов с глиомами высокой степени злокачественности (IV ст. зл.). Однакс
80 лет) обнаружены статистически достоверные отличия [21]. С увеличением
по сравнению с показателями в группах пациентов с ЧМТ, они остаются бол»
возраста показатели агрегации клеток крови повышались, соответственно
высокими, что может свидетельствовать о наличии подостроП
показатели ППР уменьшались. Однако такого не произошло с показателями
воспалительного процесса или микровоспаления. У этих же больных был
агрегации у больных с глиомами головного мозга. При глиомах и при ЧМТ у
исследованы показатели СОЭ в нашей модификации (общеприняты;
больных показатели агрегации клеток крови изначально были повышены и
показатель СОЭ почти не изменяется при слабо выраженном воспалительно!
статистически значимые возрастные отличия отсутствовали. Поэтому все наши
процессе), который косвенно характеризует величину трансмембранног
Дальнейшие исследования были проведены на различных группах больных без
потенциала и степень агрегации эритроцитов. Они носили аналогичны
Разделения на возрастные группы.
характер, подтверждая эту закономерность двумя различными методами (рис.
Повышение уровня клеточной агрегации (по показателям ППР) в
и 9).
пРоцессе прогрессии глиом отмечено также при исследованиях у больных с

80 81
продолженным ростом опухолей, которые были госпитализированы в клинику
для проведения повторных операций. При этом степень злокачественности
глиом при рецидивировании процесса увеличивалась по сравнению с
исходной, что было верифицировано гистологически.
3.2. Исследование агрегации клеток крови у крыс с перевивной
глиомой штамма 101.8 в процессе роста опухоли после
перевивки
С целью доказательства наличия взаимосвязи между ростом глиомы и
увеличением степени агрегации клеток крови проведен эксперимент на крысах
Рис. 10. Влияние роста перевивной глиомы 101.8 крыс на показатели ППР
линии Вистар с перевивной глиомой 101.8. В динамике роста опухоли 101.8 у
в различные сроки после перевивки (в сут.).
животных проводили определение показателей ППР на клетках крови,
сравнивая их с показателями в группе интактных животных (рис. 10). 3.3. Исследование клеточной плотности глиом в зависимости от
Результаты эксперимента показали, что рост глиомы 101.8 в головном мозге их степени злокачественности
сопровождается тенденцией к постепенному снижению уровня показателей Для выяснения вопроса о том, какие опухолевые параметры коррелирует
ППР и, следовательно, повышению степени агрегации клеток крови. Так, со степенью злокачественности глиом, были проведены исследования уровня
повреждение костей черепа и тканей головного мозга инъекционной иглой при клеточной плотности глиом головного мозга человека, а также определены
перевивке клеточной суспензии глиомы 101.8 привело к снижению показателя величины объёмов опухолевых тканей по данным ЯМР-томографии.
ППР на 3-и сутки после перевивки. Последующее снижение уровня показателя Анализируя показатели расстояний между клеточными ядрами глиом на
ППР на 7-е, 10-е и 13-е сут. после перевивки отображает рост опухоли штамма гистологических срезах, отмечено, что они статистически достоверным
101.8 в головном мозгу экспериментальных крыс, сопровождающегося способом (р<0,05) снижаются, при этом максимальные показатели отмечены
нарастанием уровня агрегации клеток крови. Гомогенат глиомы IV ст. зл., при условном контроле и высокодифференцированных глиомах, а
добавленный к клеткам крови здорового человека, вызвал снижение показателя минимальные - при глиомах IV ст. зл. (рис. 11). Эти данные подчёркивают
ППР, что свидетельствует о роли некротических факторов в повышении существенное значение показателей тканевой плотности глиом для
степени агрегации эритроцитов и адгезии лейкоцитов. поддержания состояний плюрипотентности стволовыми клетками, которые
О степени чувствительности прибора “Plasmon” в этом эксперименте сохраняются и воспроизводятся только в плотной сфере. Вероятно, с
свидетельствует тот факт, что даже на незначительное повреждение тканей Увеличением клеточной плотности глиом количество в них плюрипотентных
инъекционной иглой от инсулинового шприца во время перевивки опухоли стволовых клеток будет возрастать, коррелируя со степенью злокачественности
прибор отреагировал снижением показателей ППР в результате повышения глиом. Изменения клеточной плотности в тканях организма могут приводить к
агрегации клеток крови у крыс (рис. 10, второй столбик). Серьёзным нарушениям гомеостаза, что подтверждено экспериментально и в
82 83
клинических исследованиях. Так, в исследованиях in vitro [54] был обнаружен сосудов возрастает по мере увеличения степени злокачественности глиом, а их
эффект торможения митохондриального дыхания в клеточных суспензиях при диаметр уменьшается.

повышении их плотности, которая непосредственно зависит от межклеточного


электростатического взаимодействия. С помощью видеомикросъёмки было
установлено [31], что трансформированные фокусы в клеточной культуре
образуются не за счет локального размножения одиночных клеток, а в
результате агрегации многих измененных клеток, которые появляются в разных
участках клеточного монослоя.

Рис. 12. Микрофото гистологических срезов глиом II ст. зл. (в), глиом III
ст. зл. (а и б), глиом IV ст. зл. (г).
Рис. 11. Расстояния между клеточными ядрами в глиомах различной Известно, что существует тесная корреляция между изменениями
степени злокачественности характеристик мембран клеток крови и клеточных мембран внутренних органов
Проявления гипоксии и оксидативного стресса с увеличением клеточной [22,46]. Этот факт позволяет использовать мембраны клеток периферической
плотности в тканях глиом также нарастают, формируя МкО, о чём было сказано крови в качестве модели для исследования общих характеристик функций
выше. “ “ ток паренхиматозных органов, включая и клетки растущих опухолей.
На гистологических препаратах тканей глиом под микроскопом (ув. X Какая-либо закономерность между размерами опухолевого “очага”, по
200) в разрезе видны сосуды и краевое стояние лейкоцитов (рис. 12). Более Данным магнитно-резонансной томографии (ЯМР), и степенью
плотно клетки глиом располагаются возле ядросодержащих клеток кровй) злокачественности глиом, а также корреляция между опухолевыми объемами и
которые мигрировали из сосудов в ткань глиом. Отмечено, что количество Изменениями показателей 111IP на клетках крови не выявлена.

84 85
Результаты проведенных исследований показали, что существует тесца^ начинающиеся с увеличения агрегации клеток периферической крови, с
взаимосвязь между увеличением агрегации клеток периферической крови ь м еханизм ам и опухолевой прогрессии глиом. Это открывает перспективу
увеличением клеточной плотности, которая во многом определяет степещ дальн ей ш и х исследований по диагностике ранних рецидивов глиом и

злокачественности глиом. разработке новых методов комплексной терапии с целью ингибирования


Увеличение степени агрегации клеток крови при глиомах различной м еханизм ов прогрессии глиом. С этой целью были проведены исследования
степени злокачественности (уменьшение показателя ILLJLP) является раннц^ влияния некоторых фармакопейных мембраномодифицирующих соединений в

показателем при росте опухолей, свидетельствующем о наличии в опухолях различных разведениях на степень агрегации клеток крови в экспериментах in
некротических участков ткани, которые активируют воспалительный процесс в vitro для максимально эффективного подбора препаратов для проведения
организме опухоленосителя. Степень агрегации клеток крови коррелирует со противоопухолевой терапии.
степенью злокачественности глиом и повышением клеточной плотности 3.4. Влияние концентрационных разведений мемб
опухолевой ткани, свидетельствуя об участии опухоль-ассоциирорванного модифицирующих препаратов на агрегацию клеток крови
воспаления в прогрессии глиом. Накоплен значительный объём клинических данных, на основании
Изменения показателей ППР на клетках крови можно использовать в которых можно утверждать, что изменения реологических свойств крови
качестве одного из дополнительных критериев прогнозирования скорости являются важным звеном в цепи нарушений, развивающихся при различных
прогрессии глиом. патологических состояниях (сердечно - сосудистые расстройства, опухолевый
Выводы: рост и др.) [17]. Лекарственные препараты и сигнальные молекулы, попав в
кровоток, могут оказывать влияние на агрегацию клеток крови [57].
1. Разработан новый, высокочувствительный метод определения агрегации
В работе исследовали влияние препаратов: верапамила, кетамина,
нативных клеток крови с помощью прибора “Plasmon”,
мовалиса, АТФ-натрия и ФГА (фитогемагглютинина) в различных разведениях
сконструированного с использованием эффекта поверхностного
деионизированной водой в условиях in vitro на степень агрегации клеток крови
плазмонного резонанса на основе применения нанотехнологий.
У больных с нейрохирургической патологией. Изучали роль концентрационного
2. Впервые установлено, что повышение уровня агрегации клеток крови градиента указанных препаратов на степень агрегации клеток крови, а также её
является закономерным процессом, сопровождающим рост и профессию зависимость от вида нейрохирургической патологии.
опухолей головного мозга и свидетельствует о наличии в организме Целью исследования стал выбор оптимальных доз препаратов, которые
опухоль-ассоциированного воспаления, что отображается на снижении Максимально снижают уровень агрегации клеток крови, для их использования
показателей НИР. ПРИ подавлении опухоль-ассоциированного воспаления.
На приведенных графиках отмечены изменения степени агрегации клеток
Перспективы дальнейших исследований. Результаты проведений
кРови под воздействием соединений, получивших название мембран-
исследований позволили связать ранние процессы воспалительного генезэ»
МоДифицирующих соединений, т.к. они действуют на клеточную мембрану,
86 87
изменяя показатели трансмембранного потенциала, которые, в свою очередь 05)- Разведение в 10' 1 раз по сравнению с разведением в 10'2 раз достоверно

влияют на функции остальных мембранных функциональных комплексов овьШ1ал° уровень агрегации клеток крови (р<0,05) (рис. 13) . Отмечается общая
включающих канальные рецепторы, белковые рецепторы, полипептидные и ецДеНЦИЯ в гРУппе доноров и больных с патологией к снижению агрегации
белковые ферменты и т.д. ^еток крови под воздействием малодозовых концентраций верапамила.
Показатель ППР в градусах
Верапамил, как известно, относится к блокаторам Са2+-каналов группы
феяилалкил аминов. Точкой приложения в кальциевом канале для
фенялалкиламинов находится внутри канала - это V- и D-сегменты аг
субъединицы. Поэтому препараты этого класса оказывают фармакологическое
действие при открытых L-каналах, что необходимо для достижения этими
препаратами участков связывания, которые находятся внутри канала. По-
в е р .1 0 вер.Ю’2 вер.Ю'3 вер.Ю 4 B e p .lO ^ B e p .Iff6 к о н ц е н т р а ц и я вер ап ам и л а
видимому, поэтому фенилалкиламинам и бензодиазепинам свойственно
Рис. 13. Влияние концентрационного градиента верапамила на
антиаритмическое действие, в то время как дигидропиридины таковым, как
уровень агрегации клеток крови у здоровых лиц (доноров)
правило, не обладают. Верапамил сохраняет в своей структуре дескрипторный
( 1), у больных со спинальными грыжами (2 ), у больных с
центр - аминный азот, от которого до арильного заместителя имеются цепочки
метастазами рака в головной мозг (3 ).
из 2 и 4 углеродных атомов. Верапамил используется как препарат выбора при
В группе здоровых лиц разведение верапамила от 10*1 до 10'6 раз
лечении стенокардии и инфаркта миокарда. Было показано, что верапамил и
показало, что достоверно снижают уровень агрегации клеток крови разведения
дилтиазем не повышали риск осложнений у больных, перенесших инфаркт
верапамила в 10'4 и 10'5 раз (р < 0.05), по сравнению с контрольным уровнем
миокарда [30]. В последние годы дискутируется вопрос о неблагоприятном
(контроль - пробы с добавлением в кровь деионизированной воды, нулевая
влиянии антагонистов кальция на возникновение онкозаболеваний. Однако
линия). Разведение верапамила в 10' 1 раз способствует повышению степени
критический анализ данных о лечении гипертонической болезни этими
агрегации клеток крови по сравнению с контрольными показателями. Разведения
препаратами позволил экспертам ВОЗ сделать заключение о необоснованности
в 10' , 10'3, 10'6 раз почти не отличаются показателей исходного разведения
таких сведений [30, 48]. Кроме того, было показано, что при введении в
(рис. 13). В группе больных с черепно-мозговой травмой верапамил при всех
°рганизм животных некоторых канцерогенов (7,12-диметилбензантрацен)
разведениях эффекта не оказал. В группе больных со спинальными грыжами
Вераламил подавлял возникновение опухолей у крыс [270]. Другими
верапамил при разведении в 10*3 и 10'6 раз эффективно снижал степень агрегации
исследователями было показано отсутствие канцерогенной активности
клеток крови по сравнению с контрольными показателями (рис. 13). В группе
Верапамила при длительных воздействиях на крысах [131].
больных с метастазами раковых клеток в головной мозг верапамил способствует
Верапамил при глиомах II ст. зл. в разведении 10'1 раз достоверно
снижению показателя агрегации клеток крови по сравнению с контрольными
°вышает степень агрегации клеток крови (р<0 ,01 ) по сравнению с
показателями: в разведениях в 10"3 раз (р<0,05), в 10'4 раз (р<0.01) и в 10'4 Р&3

88 89
контрольными показателями. При остальных разведениях он не оказыв^ действии на степень агрегации клеток крови рост опухолевых клеток может
действия на показатели степени агрегации клеток крови (рис. 14). сТйМУлиР°ваться (повышение агрегации) или угнетаться (снижение агрегации).
Показатель ППР в градусах
Кетамин относится к низкоаффинным канальным блокаторам. Так как
цсихомиметическне свойства кетамина хорошо известны, клиническая
безопасность канальных блокаторов, очевидно, определяется не только
аффинностью, но и кинетикой взаимодействия вещества с местом связывания.
Тем не менее, такие вещества как кетамин и др. остаются исключительно
полезными как инструменты исследования [10, 99]. Концепция использования

в ер .10 1 вер.10'2 вер.10‘3вер.10",вер.10'5вер.10‘6 концентрация верапамила канальных блокаторов основывается на их способности связываться с участком
Рис. 14. Влияние различных концентраций верапамила на агрегацию внутри канала только в условиях активации NMDA-рецептора, т.е. когда канал

клеток крови у больных с глиомами II ст. зл. (1), III ст. зл. открыт. Такой механизм действия канальных блокаторов дал основания
(2), IV ст. зл. (3) предположить, что они будут особенно эффективны в условиях патологической
В группе больных с глиомами III ст. зл. верапамил в разведении в 10' раз активации NMDA-рецепторного комплекса [265]. Повышенная активность
способствует достоверному повышению агрегации клеток крови (р<0,05). При NMDA-рецепторного комплекса может быть следствием либо избыточной
остальных разведениях верапамил не влиял на показатель клеточной агрегации. стимуляции NMDA-рецепторов, либо устойчивых изменений на рецепторном
В группе больных с глиомами IV ст. зл. верапамил при разведении в 10'1 или пострецепторном уровне.
раз способствует повышению степени агрегации клеток крови (рис. 14). При Гипотеза о повышенной эффективности канальных блокаторов в
разведениях в остальных случаях существенно снижает степень агрегации условиях патологии основывается на убеждении, что в подобных условиях
клеток крови по сравнению с контролем: при разведении в 10'2 раз (р <0.05), 10' NMDA- рецепторы активируются большими концентрациями глутамата, чем в
раз (р<0.05), 10"4, 10_i и 10‘6раз (р<0.01). физиологических условиях. Однако эти предположения не соответствуют
Отмечено наиболее эффективное действие малодозовых концентраций действительности. В физиологических условиях NMDA-рецепторы
верапамила на агрегацию крови у больных с глиомами IV ст. зл. по сравнению с активируются миллимолярными концентрациями глутамата, которые
глиомами II и III ст. зл. сохраняются в течение лишь нескольких миллисекунд [116]. В то же время
Эти данные могут объяснить разногласия исследователей по поводу Даже в условиях острой ишемии нервной ткани NMDA-рецепторы активируются
противоопухолевой активности верапамила. Вероятно, полученные нами йизкими микромолекулярными концентрациями глутамата, но в течение
результаты по концентрационной зависимости влияния верапамила на степень значительно более длительных периодов времени. Если бы аффинность к
агрегации клеток крови могут свидетельствовать о различном влияний Анальном)' участку была единственным параметром, определяющим
верапамила на рост опухолей. В зависимости от концентрации верапамила и его фармакологическую активность канальных блокаторов, то эффекты этих
Веществ были бы более выражены в физиологических условиях, чем при
90 91
патологии. Однако они способны покидать место связывания в условиях Отмечено наиболее эффективное действие малодозовых концентраций
сильной деполяризации [226]. NMDA- рецепторы, в отличие от других кеТаМИна на агрегацию клеток крови у больных с метастазами рака в головной
рецепторов, одновременно восприимчивы к лигандам и к изменению Зг по сравнению с показателями при ЧМТ и спинальных грыжах.
мембранного потенциала (voltage-dependent). На основании этого было
выдвинуто предположение, что канальные блокаторы наиболее эффективны в
условиях длительной стимуляции NMDA-рецепторов невысокими
концентрациями глутамата, что, вероятно, является одним из ключевых
механизмов патогенеза многих нейродегенеративных расстройств [246, 226].
Кетамин во всех разведениях не влиял на показатели агрегации клеток
крови у доноров. Рис. 16. Влияние кетамина на агрегацию клеток крови у больных с
глиомами II ст. зл. (1), с глиомами III ст. зл. (2), с глиомами
IV ст. зл. (3), с менингиомами I ст. зл. (4)
В группе больных с глиомами ~Н ст. зл. кетамин в разведении в 10"1 раз
способствовал повышению степени агрегации клеток крови, в разведении в 10°
раз достоверно (р<0,05) понижал степень агрегации (рис. 16).
Рис. 15. Влияние кетамина на показатели агрегации клеток крови у В группе с глиомами III ст. зл. кетамин во всех разведениях, кроме 10'!
больных с ЧМТ (1), у больных со спинальными грыжами раз, достоверно снижал степень агрегации клеток крови. При разведении в 10'2,
(2) и при метастазах (Mt) рака в головной мозг (3) 10'3 и 10'5 раз - с достоверностью (р<0,01), при разведении в 10'4 раз - с
В группе больных с ЧМТ кетамин во всех разведениях, кроме 104 , достоверностью (р<0,05) (рис. 16).
показал эффект снижения агрегации клеток крови (рис. 15). При разведениях в В группе больных с глиомами IV ст. зл. кетамин при всех разведениях,
10"1, 10'2 и 10'3 раз - с достоверностью (р<0,05), а при разведении в 10'5 раз - с кроме 10'1, достоверно снижал степень агрегации клеток крови при разведении в
достоверностью (р<0,01). Ю2 (р<0,01), при разведениях в 10'3, 10"4 и 10'5 (р<0,001).
В группе больных со спинальными грыжами кетамин достоверно снижал При менингиомах I ст. зл. кетамин только при разведении в 10'5 раз
агрегацию клеток крови: при разведении в 10_1раз (р<0,05), в 10'4 раз (р<0,01), в способствовал снижению степени агрегации клеток крови (р<0,05).
10‘5 раз (р<0,01) (рис. 15). Показано, что малодозовые концентрации кетамина более эффективно
При метастазах рака в головной мозг кетамин достоверно способствовал СнИжают степень агрегации клеток крови при высоко злокачественных степенях
снижению агрегации клеток крови при всех разведениях (р<0,05) (рис. 15). *Иом, чем при доброкачественных глиомах и менингиомах (рис. 16).

92 93
В группе с ЧМТ мовалис с одинаковой степенью достоверно^ является стабилизирующее влияние на мембраны лизосом посредством
(р<0,05) способствовал снижению степени агрегации клеток крови прц торможения фосфодиэстеразы и накопления цАМФ. В результате такого
разведениях в 10'1раз, в 10'2 раз и в Ю ' 5 раз (рис. 17). ^ембраностабилизирующего действия препаратов данной группы
При метастазах рака мовалис в разведениях в 10-4 раз и в 10'5 Предотвращается выход лизосомальных ферментов (пероксидазы, кислой
способствовал снижению степени агрегации клеток крови с одинаково^ фосфатазы, b-глюкуронидазы), что приводит к торможению клеточных реакций
степенью достоверности (р<0,05) (рис. 17). на болевые раздражения [66].
Препарат незначительно угнетает деятельность циклооксигеназы-1
(ЦОГ-1). Этот фермент отвечает за образование простагландинов в слизистой
оболочке желудка, где они выполняют защитную функцию. Поэтому при
приеме мовалиса побочные эффекты со стороны желудочно-кишечного тракта
развиваются гораздо реже, чем при использовании других НПВС. Благодаря
своему избирательному действию мовалис почти не уменьшает склеивание
(агрегацию) тромбоцитов и не увеличивает продолжительность кровотечений,
как это делают другие лекарства из этой фармакологической группы. Также в
Рис. 17. Влияние мовалиса на агрегацию клеток крови при ЧМТ (1) и
отличие от некоторых НПВС препарат не разрушает хрящевую ткань, что очень
метастазах рака в головной мозг (2).
важно для пациентов с заболеваниями суставов и позвоночника. Все препараты
Знаменитый аспирин, появившийся более 100 лет назад, стал самым
этой группы обладают побочным эффектом - раздражение слизистой облочки
первым противовоспалительным нестероидным препаратом в мире. Сегодня
ЖКТ и кровоточивость. Этот побочный эффект при приёме мовалиса
семья таких препаратов разрослась. И многие из них пользуются необычайной
проявляется гораздо слабее.
популярностью. Однако даже среди них мовалис особо выделяется, прежде
всего, гораздо меньшими побочными эффектами, которые он дает. Мовалис —
один из наиболее эффективных нестероидных противовоспалительных
препаратов (НПВП). Этот препарат широко применяется при лечении
заболеваний опорно-двигательной системы. Действующим веществом

препарата является мелоксикам, благодаря которому мовалис оказывает


Рис. 18. Влияние мовалиса на степень агрегации клеток крови при
противовоспалительное, обезболивающее и жаропонижающее действие.
глиомах IV ст. зл.
Мелоксикам снижает выработку фермента циклооксигеназы-2 (ЦОГ-2) и таким
При глиомах IV ст. зл. мовалис во всех разведениях достоверно снижал
образом подавляет образование простагландинов — веществ, которые
степень агрегации клеток крови по сравнению с контрольными показателями:
принимают участие в развитии воспаления. Характерным для НПВП действия

94 95
при разведении в 10'1 10'2 10‘3 раз (р<0.05), при разведении в 10'4 и в 10'5 раз ^ овообр ащ ен и е. Ранее относительно широко применяли АТФ при
(р<0,01) (рис. 18). иронической коронарной недостаточности. В последние годы установлено, что
Аденозинтрифосфорная кислота, или аденозинтрифосфат (АТф) д^ф может быть с успехом использоваться для купирования пароксизмов
является естественной составной частью тканей организма человека и лзджелудочковых тахикардий. Полагают, что действие обусловлено
животных. Свойства АТФ как нейротрансмиттера были обнаружены 0бразующимся при распаде АТФ аденозином, подавляющим автоматизм
сравнительно недавно. Она является нейротрансмиттером в автономных синусно-предсердного узла и сердечных проводящих миоцитов (волокон
нейромышечных соединениях и ганглиях. АТФ занимает прочное место в ряду Цуркинье). Частично эффект связан с блокадой мембранных кальциевых
нейромедиаторов центральной и периферической нервной систем [109]. АТф каналов, увеличением проницаемости мембран миокарда для ионов калия.

способна активировать как ионотропные, так и метаботропные рецепторы.


Блокаторы потенциал-управляемых кальциевых каналов, такие как кадмий,
никель и верапамил уменьшали АТФ-индуцированные кальциевые транзиенты
на 15-35%, что может свидетельствовать об опосредованном АТФ
активировании потенциал-управляемых каналов [92]. Она образуется при
реакциях окисления и в процессе гликолитического расщепления углеводов.
Особенно богаты ею мышцы из поперечнополосатой гладкой мышечной ткани.
Ее содержание в скелетных мышцах достигает 0,3 %. АТФ участвует во многих Рис. 19. Влияние концентрации NaATF на степень агрегации клеток
процессах обмена веществ. При взаимодействии с актомиозином она крови при ЧМТ (1) и метастазах рака в головной мозг (2).
распадается на аденозиндифосфорную кислоту (АДФ) и неорганический В группе больных с ЧМТ АТФ-натрия достоверно снижал степень
фосфат, при этом освобождается энергия, значительная часть которой агрегации крови в разведениях 10'3 и 10'5 (р<0,01) (рис. 19).
используется мышцами для осуществления механической работы, а также В группе больных с метастазами рака АТФ-натрия в разведениях 10'2 раз,
синтетических процессов (синтез белка, мочевины и промежуточных продуктов Ю'3 раз и 10'5 раз с одинаковой степенью достоверности (р<0,05) способствовал
обмена веществ). При дистрофических процессах в мышцах наблюдается снижению агрегации клеток крови (рис. 19).
уменьшение ее содержания в мышечной ткани или нарушение процессов ее В группе больных с IV ст. зл. АТФ-натрия способствовал во всех
ресинтеза. АТФ рассматривается как один из медиаторов возбуждения в Разведениях, кроме 10'1, снижению степени агрегации клеток с достоверностью:
аденозиновых (пуринергических) рецепторах. Кроме того, он участвует в при разведении в 10'2 раз -( р<0,05), при разведениях в 10‘3, 10"4 , 10‘5 раз
передаче нервного возбуждения в адренергических и холинергических (Р<0,01) (рис. 20).
синапсах, облегчает проведение возбужиения в вегетативных узлах и в В группе больных с менингиомами I ст. зл. АТФ-натрия в разведениях
передаче возбуждения с блуждающего нерва на сердце. Экспериментальные раз, 10"3 раз и 10'4 раз с одинаковой степенью достоверности (р<0,05)
данные показывают, что АТФ усиливает мозговое и коронарное способствовал снижению агрегации клеток крови (рис.20).
96 97
рссти аккумуляции калия [43], аминокислот, уридина, увеличение
а1СТЙвности K/Na - Mg - зависимой ФТФазы.
Вероятно, это является результатом перестройки мембраны типа фазового
перехода. Так, увеличение концентрации калия необходимо для усиления
белкового синтеза. При БТЛ происходит также активация мембранных
ферментов, в первую очередь циклазы. Данных по влиянию ФГА на агрегацию
клеток крови в доступной нам литературе не обнаружено.
Рис. 20. Влияние концентрации NaATF на степень агрегации крови прц В группе с Mt рака в головной мозг ФГА при разведении в 10"5 раз
глиоме IV ст. зл. (1) и при менингиомах I ст. зл. (2). достоверно снижал степень агрегации клеток крови (р<0,05) (рис. 22).
Показано, что малодозовые концентрации натрий-АТФ более эффективно 1
снижают степень агрегации клеток крови при высоко злокачественных глиомах,
чем при доброкачественных менингиомах (рис.20).
Фитогемагглютинин (экстракт из красных бобов Phaseolus vulgaris) для i
бласттрансформации лимфоцитов (БТЛ) впервые применили Хьюгерфорд иI

Новелл (1959, 1960).


В группе с глиомами III ст. зл. ФГА в разведении 10'2 раз достоверно |
повышал степень агрегации клеток крови (р<0,05). При разведении в 10'5 раз - Рис. 22. Влияние концентрации ФГА на степень агрегации клеток крови
с достоверностью (р<0,01) снижал степень клеточной агрегации (рис. 21). при метастазах рака в головной мозг.
На рис. 9 показано, что при всех указанных видах патологии степень
агрегации клеток крови существенно отличается от контрольных показателей у
здоровых лиц. Повышение степени агрегации клеток крови свидетельствует о
наличии воспалительного процесса при различных патологических процессах
нейрохирургического профиля, исследованных в нашей работе. Несмотря на то,
Нто головной мозг является забарьерным органом, при его патологиях
Рис. 21. Влияние процентной концентрации ФГА на степень а г р е га ц и й
воспалительный процесс носит также и системный характер, который можно
крови при глиоме III ст. зл.
исследовать методом ППР.
ФГА может инициировать БТЛ только через клеточную м ем брану
Полученные результаты свидетельствуют о влиянии концентрационных
Одним из ранних результатов действия ФГА на мембрану является увеличение
Различий использованных мембранмодифицирующих соединений на степень
Легации клеток крови. Чаще всего большие разведения (малодозовые

98 99
концентрации) соединений способствуют уменьшению агрегации клеток крови равнению с воспалительным процессом при ЧМТ, показатели агрегации клеток
Высокодозовые разведения веществ (разведение в 10'1 раз), как правило фОРИ в группах опухолевых больных выше, что может свидетельствовать о
способствуют увеличению степени агрегации клеток крови. Кроме того, есть Лтгагоприятном воздействии таких разведений верапамила на глиомы (рис. 23).

индивидуальные отличия в действии соединений на степень агрегации клето^


крови, зависящие от мишеней и механизма их действия на эти мишенц
локализующиеся на клеточных мембранах, а также от вида нейрохирургической
патологии. Эти данные показывают, что подбор антиагрегационных препаратов
следует проводить индивидуально, с учётом их концентрационного диапазона а
механизма действия.
3.4.1 Показатели степени агрегации крови при различных видах
нейрохирургической патологии
Для сравнительной характеристики действия мембранмодифицирующих
соединений в зависимости от вида патологии и их концентрационного градиента Рис. 23. Влияние верапамила (10'1) на показатели агрегации клеток крови
приведены нижерасположенные рисунки. при различных нейрохирургических патологиях.
Практически все показатели степени агрегации клеток крови повышены Примечание: * - (р<0.05), ** - (р<0.01), *** - (р<0.001).
при использовании верапамила в разведении 10'1 раз, хотя степень повышения Разведение верапамила в 10‘2 раз способствовало недостоверному
неодинакова при различных патологиях. На рис. 23 показано, что при указанных снижению уровня агрегации в группах здоровых лиц, со спинальными травмами,
выше нейрохирургических патологиях верапамил максимально способствует в группах с ЧМТ, с глиомами всех степеней злокачественности и при метастазах
увеличению степени агрегации клеток крови при глиомах II ст. зл. Этот рака в головной мозг. На показатели агрегации клеток крови в группе больных с
результат может быть использован для проведения дифференциальной менингиомами I ст. зл. данное разведение верапамила действия практически не
диагностики между II и IV ст. зл. глиом в дооперационном периоде с целью оказало. Следовательно, уменьшение концентрации препарата верапамила в 10
решения вопроса о расширении операционного поля. Кроме глиом II ст. зл., раз способствовало незначительному снижению степени агрегации клеток крови
существенное повышение агрегации отмечено при глиомах III ст. зл. и Mt рака почти во всех исследуемых группах.
в головной мозг. Разведение верапамила в 10~3 раз способствовало дальнейшему снижению
В отличие от этих видов патологии, у здоровых лиц, при менингиомах 1 ^епени агрегации клеток крови в группе здоровых лиц, у больных со
ст. зл., у больных с ЧМТ и при глиомах IV ст. зл. показатели степени агрегац и й Финальными грыжами, значительно повысило показатель в группе с
клеток крови повышены незначительно. Верапамил способствовал коррекции Менингиомами I ст. зл., зато незначительно снизило при ЧМТ. Показатели при
показателя агрегации клеток крови при глиомах IV ст. зл. к уровню этого Гл:Иомах II ст. зл. снизило незначительно, при глиомах IV ст. зл. - снизило в
показателя у здоровых лиц, что также может быть использовано в практике. П° большей степени, а при метастазах в головной мозг произвело достоверное
101
снижение показателя агрегации клеток крови по сравнению с разведение^
препарата в 10'2раз (р<0.05) (рис. 24).

Рис. 25. Влияние верапамила (10‘4) на показатели агрегации клеток крови


при различных нейрохирургических патологиях.
При разведении верапамила в 10‘5 раз степень агрегации клеток и
снизилась во всех группах, при этом максимальное снижение
Рис. 24. Влияние верапамила (10'3) на показатели агрегации клеток крою наблюдается в группе больных со спинальными грыжами и глиомами IV
при различных нейрохирургических патологиях. ст. зл. (р<0.01), а минимальное снижение - в группе с глиомами II ст. зл.
(рис. 26).
При разведении верапамила в 10"* раз степень агрегации клеток кро!
максимально отличается между собой в группах больных с глиомами I I , IV с
зл. и метастазами рака в головной мозг, что может лечь в осно!
дифференциальной диагностики (рис. 25). Кроме того, разведение верапамила
10'4 раз отличается от предыдущих разведений по отношению к показател
степени агрегации клеток крови снижением показателя в группе здоровых Л]
почти в 3 раза, в группе больных со спинальными грыжами и глиомами IV
зл. - почти в 2 раза.
Такое разведение верапамила неблагоприятно воздействует на агрегаШ*
крови при глиомах II ст. зл. (рис. 25).
Рис. 26. Влияние верапамила (10'5) на показатели агрегации клеток крови
при различных нейрохирургических патологиях.

102 103
При разведении верапамила в 10' раз существенное повышение величины разведения препарата. При этом длина волны короче, если группы
агрегации отмечено в группе здоровых лиц, а снижение - в группе больных я относятся к здоровым лицам или неопухолевым патологиям (ЧМТ, спинальные

ЧМТ. Остальные показатели остались практически без изменений (рис. 27). грыжи) и длина волны больше, если в группы входят больные с глиомами

различной степени злокачественности или метастазами рака в головной мозг.


При разведении кетамина в 10'1 раз при всех видах патологии, кроме
глиом II ст. зл., показатели степени агрегации клеток крови снижаются, по

сравнению с аналогичными показателями при воздействии верапамила в таком

Же разведении. Отмечаются различия степени агрегации при глиомах II ст. зл.


Показатели агрегации клеток крови достоверно снижены при спинальных
грыжах (р<0.01), ЧМТ (р<0.05) и метастазах (р<0,05) (рис. 28).
-1
Рис.27. Влияние верапамила (10‘6) на показатели агрегации клеток кров кетамин 10
при различных нейрохирургических патологиях.
Полученные результаты показывают, что при использовании мембра!
модифицирующих препаратов для улучшения микрореологии крови следу!
учитывать их концентрацию в каждом индивидуальном случае, а также в:
I
нейрохирургического заболевания. Препараты, за исключением верапамила,
влияют на степень агрегации клеток крови у здоровых лиц, в то же время р

Г
увеличением степени злокачественности глиом или при метастазах они прщ
различных разведениях изменяют степень агрегации клеток крови. При
воспалительных процессах, злокачественных глиомах и метастазах кетамин К
верапамил в малодозовых концентрациях наиболее активно влияют на снижен! Рис. 28. Влияние кетамина (10 ) на показатели агрегации клеток крови

агрегации клеток крови, чем остальные препараты, вероятно потому, что oi при различных нейрохирургических патологиях.

ингибируют активность NMDA-рецепторов. Увеличение степени разведен! Однако такое разведение кетамина неблагоприятно воздействует на кровь

препаратов оказывает более выраженное влияние на снижение показателе^ пРи глиомах II ст. зл.

агрегации клеток крови при всех патологиях, за исключением глиом II ст. зл. ; При разведении кетамина в 10'2 раз все показатели агрегации клеток

Создаётся впечатление, что концентрационный градиент нос! кРови уменьшаются, по сравнению с контрольными показателями, при этом

волнообразный характер. Так, на примере разведений препарата верапамила ■ Показатели при глиомах II ст. зл. остаются более высокими по сравнению с

100 тыс. раз (от 10'1до 10'6 раз) можно видеть, что показатели степени агрегаЦ® °Стальными показателями, что свидетельствует о нежелательном воздействии

клеток крови плавно снижаются и плавно повышаются в зависимости ^Ких разведений кетамина при глиомах II ст. зл. Отмечены достоверные
105
отличия между глиомами контрольными показателями, глиомами II, III и IV с? дифференциальной Диагностики между этими двумя видами патологии с
зл. (р<0,01) и метастазами (р<0.05), что может лечь в основу для разработок по использованием показателя агрегации клеток крови (рис. 31).
дифференциальной диагностике (рис. 29). Достоверное снижение агрегаций
отмечено также при менингиомах I ст. зл. (р<0.01).

Рис. 30. Влияние кетамина (10‘3) на показатели агрегации клеток крови


при различных нейрохирургических патологиях.

Рис. 29. Влияние кетамина (10" ) на показатели агрегации клеток крови


при различных нейрохирургических патологиях.
При разведении кетамина в 10'3 раз показатели степени агрега]
эритроцитов и лейкоцитов крови снижаются, по сравнению с разведением в 10'
раз. Достоверное снижение показателей степени агрегации клеток кронр
отмечено в группах с ЧМТ (р<0.05), особенно выраженно в группах с глиомами
III и IV ст. зл. и менингиомами I ст. (р<0.01), а также при метастазах рака р
головной мозг (р<0.05) (рис. 30).
При разведении кетамина в 10-4 раз повышается степень агрегации пр0
ЧМТ, а в группах здоровых лиц практически не изменяется. Достоверно®
снижение агрегации клеток крови отмечено при спинальных грыжа*»
менингиомах и глиобластома (р<0.01), а также при глиомах III ст. зл. 0 Рис. 31. Влияние кетамина (Ю*4) на показатели агрегации клеток крови
метастазах рака в головной мозг (р<05). Отмечены статистически достоверны6 при различных нейрохирургических патологиях.
отличия между показателями ППР у больных с ЧМТ и глиомами IV ст. & При максимальном разведении кетамина в 10 5 раз показатели агрегации
(р<0.01). Эти данные могут лечь в основу по разработке метод0! клеток крови достоверно отличаются от контроля при спинальных грыжах и
107
метастазах рака в головной мозг (р<0.05), а также при ЧМТ, глиомах II, III, IV
ст. зл. (р<0.01). В отличие от верапамила, кетамин в разведениях 10'4 и 10‘5 раз
максимально снижает уровень агрегации клеток при глиомах IV ст. зл., что даё
основание предположить о взаимосвязи между ингибированием NMDA
рецепторов и степенью клеточной агрегации. Малодозовое разведение
кетамина наиболее оптимальным способом влияет на повышение показателей
микрореологии крови во всех группах исследуемых больных и у здоровых лиц
(рис. 32).
При разведении препарата мовалиса в 10 раз степень агрегации клеток
Рис. 33. Влияние мовалиса (10' ) на показатели агрегации клеток крови
крови повышается только в группе с глиомами II ст. зл.
при различных нейрохирургических патологиях.

Рис. 32. Влияние кетамина (10'5) на показатели агрегации клеток крови


Рис. 34. Влияние мовалиса (10'2) на показатели агрегации клеток крови
при различных нейрохирургических патологиях.
при различных нейрохирургических патологиях.
При остальных видах патологий агрегация снижается, наи более
При разведении мовалиса в 1000 раз разрыв в показателях между
существенно в группе с ЧМТ и глиомами IV ст. зл. (р<0.05). Однако такое
ГлИомами II и III ст. зл. увеличивается за счёт повышения агрегации клеток
разведение мовалиса неблагоприятно воздействует на агрегацию клеток кровй
кРови при глиомах II ст. зл. Степень агрегации клеток крови при этом
при глиомах II ст. зл. (рис. 33).
Максимально отличается между собой в группах больных с глиомами I I , IV ст.
При разведении мовалиса в 10'2 раз при всех заболеваниях агрегаЦИ*
Зл- и метастазами рака в головной мозг, что может лечь в основу
клеток крови снижается, при этом максимальное снижение наблюдается пр*1
ЛиФференциальной диагностики. Достоверно снижается степень агрегации
менингиомах, ЧМТ и глиомах IV ст. зл. (р<0.05), а минимальное - при глиома*
Клеток крови при глиомах IV ст. зл. (р<0.05). Такое разведение мовалиса
II ст. зл. (рис. 34).
108 109
неблагоприятно воздействует на микрореологию крови при глиомах II ст. 3jj,

(рис. 35).

Рис. 37. Влияние мовалиса (10') на показатели агрегации клеток крови


при различных нейрохирургических патологиях.
Рис. 35. Влияние мовалиса (10'3) на показатели агрегации клеток крови ]
При разведении натрия-АТФ в 10 и 100 раз агрегация повышается при
при различных нейрохирургических патологиях.
глиомах II ст. зл. и у больных со спинальными грыжами. Максимальное
При разведениях мовалиса в 10'4 и 10"5 раз по-прежнему сохраняете!
снижение агрегации наблюдается при глиомах IV ст. зл. и Mt рака в головной
разрыв между показателями глиом II и IV ст. зл., при этом он более выражен
мозг (р<0.05). Такое разведение натрия-АТФ неблагоприятно воздействует на
при разведении мовалиса в I0"5 раз. При малодозовых концентрациях мовалиса
степень агрегации клеток крови при глиомах II ст. зл. (рис. 38, 39).
достоверно снижается агрегация при ЧМТ и метастазах рака (р<0.05), и пр!
глиомах IV ст. зл. (р<0.01) (рис. 36, 37). -

Рис. 38. Влияние натрий-АТФ (1 0 ') на показатели агрегации клеток


Рис. 36. Влияние мовалиса (10 ) на показатели агрегации клеток крови крови при различных нейрохирургических патологиях.
при различных нейрохирургических патологиях,

но in
Рис. 39. Влияние натрий-АТФ (10"2) на показатели агрегации клеток
Рис. 41. Влияние натрий-АТФ (10'4) на показатели агрегации клеток
крови при различных нейрохирургических патологиях.
крови при различных нейрохирургических патологиях.
При разведениях натрия-АТФ в 10‘3 раз максимальное снижение
При разведении натрия-АТФ в 10’5 раз существенное снижение степени
агрегации по сравнению с контрольными показателями наблюдается в группа*
агрегации клеток крови наблюдается в группах больных с ЧМТ и глиомами IV
больных с ЧМТ и глиомами IV ст. зл. (р<0.01) и при метастазах рака в головной
ст. зл. (р<0.01), а также при метастазах рака в головной мозг (р<0.05). При
мозг (р<0.05) (рис. 40).
таком разведении наименьший эффект наблюдается в группе больных с
глиомами II ст. зл. (рис. 42).

Рис. 40. Влияние натрий-АТФ (10'3) на показатели агрегации клеток


крови при различных нейрохирургических патологиях. Рис. 42. Влияние натрий-АТФ (10'5) на показатели агрегации клеток
При разведении натрия - АТФ в 10'4 раз наиболее выраженное крови при различных нейрохирургических патологиях.
снижение степени агрегации клеток крови наблюдается в группе больных с При разведении ФГА в 10 раз наибольшее уменьшение степени
глиомами IV ст. зл. и менингиомами I ст. зл. (рис 41). агрегации отмечается в группе больных с менингиомами I ст. зл. (р<0.01), при
112 из
остальных видах патологии степень агрегации клеток крови почти не меняется Разведение ФГА в 10'3 раз существенно снижает степень агрегации при
(рис. 43). менингиомах I ст. зл. (р<0.01). Показатели агрегации в других группах
ФГА 10'1 практически не изменяются (рис. 45).

Рис. 43. Влияние ФГА (10'1) на показатели агрегации клеток крови при
различных нейрохирургических патологиях.
Рис. 45. Влияние ФГА (10'3) на показатели агрегации клеток крови при
При разведениях ФГА в 10'2 раз степень агрегации при менингиомах и
различных нейрохирургических патологиях.
глиомах III ст. зл. существенно увеличивается (р<0.05). Разведение ФГА в 10"2
По-прежнему наблюдается максимальное снижение уровня агрегации
раз неблагоприятно влияет на показатели микрореологии крови в группа*
эритроцитов и лейкоцитов при менингиомах I ст. зл. при разведениях ФГА в 10'
больных с опухолями, что достоверным образом отличает их от групп здоров*
раз (р<0.001). Вероятно, изменения степени агрегации клеток крови при
лип и с воспалением (ЧМТ, спинальные грыжи (рис. 44).
Действии различных разведений ФГА при менингиомах I ст. зл. может
послужить основой для дальнейших разработок по их дифференциальной
Диагностике (рис. 46).

Рис. 44. Влияние ФГА (10‘2) на показатели агрегации клеток крови


Рис. 46. Влияние ФГА (10'4) на показатели агрегации клеток крови при

I
различных нейрохирургических патологиях.
различных нейрохирургических патологиях.
115
При разведении ФГА в 10'5 раз отмечается существенное снижение 3. Разведения кетамина в 10'1 раз помогают достоверно различать по
агрегации клеток крови при менингиомах и метастазах рака в головной мозг, а показателям агрегации клеток крови глиомы II ст. зл. от ЧМТ и
также менее выраженное снижение агрегации при глиомах III ст. зл. (рис. 47). Я метастазов в головной мозг (р<0.05), также от глиобластом (р<0.01).
4. Разведения кетамина в 10‘4 раз могут по показателям агрегации
отличать ЧМТ от глиом IV ct. зл. (р<0,01). В то же время остальные
показатели агрегации при ЧМТ и глиомах IV ст. зл. мало между
собой отличаются, что может свидетельствовать в пользу усиления
воспалительного компонента при глиомах IV ст. зл., в отличие от
глиом II ст. зл.
5. Разведения мовалиса в 10'1 и 10'3 раз могут способствовать
проведению дифференциальной диагностики между глиомами II ст.
зл. и ЧМТ (р<0.05), а также между глиомами II ст. зл. и IV ст. зл.
Рис. 47. Влияние ФГА (10“5) на показатели агрегации клеток крови при
(р<0.05).
различных нейрохирургических патологиях.
6. Разведение натрий-АТФ в 10'1 раз, в 10'2 раз и в 10"4 раз могут по
В этих исследованиях мы применили методический приём, с помощью
показателям агрегации клеток крови способствовать различиям
которого удалось разделить показатели 111IP, полученные на образцах крови
между глиомами II и IV ст. зл. (р<0.05 при разведении 10'1, 10"2) и
при различных нейрохирурических патологиях (рис. 9), путём добавления^
(р<0,01 при разведении 10'4). Разведение натрий-АТФ в 10"2 раз
различных концентраций мембранмодифицирующих фармпрепаратов.
может способствовать дифференциальной диагностике между
Выводы:
глиомами II ст зл. и метастазами в головной мозг (р<0.05).
1. Экспериментально обнаружено, что применение
7. При разведении ФГА в 10"2 раз можно проводить дифференциальный
мембранмодифицирующих соединений в малодозовых
диагноз по показателям агрегации клеток крови между
концентрациях улучшает показатели реологию крови У
менингиомами I ст. зл. и ЧМТ (р<0.05), а также между глиомами III
нейрохирургическуих больных;
ст. зл. и ЧМТ (р<0.05).
2. Разведения верапамила в 10‘3 и 10'4 раз могут быть использованы Щ
8. При разведении ФГА в 10"3 раз можно проводить достоверные
качестве основы для разработок методов дифференциальной
различия между менингиомами и глиомами II ст. зл. с
диагностики по показателям агрегации клеток крови между глиомаМ!
достоверностью в (р<0,01), а при разведении ФГА в 10'4 раз - с
II и IV ст. зл. (р<0.01), также между глиомами II ст. зл. и Mt р а к а *
достоверностью в (р<0,001).
головной мозг (р<0.05).
9. Впервые получены результаты по влиянию различных разведений
препаратов, исследованных в условиях in vitro, показали, что при
иб 117
малодозовых концентрациях препаратов уменьшается степень счёте, приведёт к неудаче при попытках клинического применения. Кроме того,
агрегации клеток крови, что следует взять за основу при дальнейших эксп ресси я генов в опухолях носит хаотический характер, которые в высокой

исследованиях по разработке методов противовоспалительной степени гетерогенны, и в которых имеются обширные зоны некроза. Следует

терапии при опухолях ЦНС. Основным принципом такой терапии учитывать также и тот факт, что ткань опухоли инфильтрирована клетками
должен стать индивидуальный подход к подбору препаратов и их крови, участвующими в воспалении, и поэтому утверждение о принадлежности
концентраций для эффективного подавления рецидивов глиом. каких-то молекулярных событий именно к механизму опухолевого роста
3.5. Исследование хромосомных аберраций в лимфоцитах является, по меньшей мере, преждевременным. Метод лазерной диссекции

периферической крови при глиомах и ЧМТ. позволяет вычленять отдельные фрагменты ткани и анализировать чистые
популяции опухолевых клеток молекулярно-генетическими методами, но он
С увеличением степени злокачественности глиом увеличивается
применяется очень редко и только в лабораторных условиях. Поэтому
количество нарушений в геноме опухолевых клеток, что было показано при
методологические ошибки, несмотря на обнаружение существенного числа
исследованиях частоты аберраций хромосом и уровня экспрессии генов глиом
молекулярно-генетических аномалий в злокачественных клетках, приводят к
[1711. Нестабильность генома, как известно, характерна для всех
тому, что попытки применения этих знаний в клинической практике пока не
злокачественных опухолей организма, а изменения количества хромосом и их
дали ожидаемого результата [59].
структуры могут служить в качестве показателя этого процесса [128, 129].
Я При изучении особенностей опухоль-ассоциированного воспаления
Генетическая нестабильность рассматривается на двух уровнях: нуклеотидном
при глиомах исследования геномных аберраций лимфоцитов периферической
и хромосомном.
крови становится привлекательным методом ввиду отсутствия указанных
Проведенные за последние десятилетия многочисленные молекулярно-
недостатков.
генетические исследования в различных опухолях пока не проанализированы
Мы уже упоминали о тесной корреляции между изменениями
до уровня определённой концепции. Современные исследования направлены на
характеристик мембран клеток крови и клеточных мембран внутренних органов
поиски тканеспецифических маркеров, которые наиболее часто встречаются
[20, 46]. Этот факт позволяет использовать мембраны клеток периферической
при определённых видах опухолей и отсутствуют при других. Это стало
крови в качестве модели для исследования общих характеристик функций
базисом для развития нового направления - таргетной терапии. Несомненна
клеток паренхиматозных органов, включая клетки пролиферирующих
польза таргетной терапии для диагностики и прогноза заболевания отдельного
°пухолей. При этом существенный интерес представляет исследовательский
конкретного вида опухолевой болезни. Однако главное звено в патогенезе
Поиск взаимосвязи между зарядовыми характеристиками мембран клеток крови
злокачественного роста, которое до сих пор неизвестно, имеет решающе®
и Уровнем аберраций хромосом лимфоцитов периферической крови у больных
значение и является базисом для патогенетического подхода к лечению
с глиомами, что можно использовать в качестве модельной системы для
опухолей. Оно должно присутствовать при любом виде опухоли. ПоэтоМУ
Рзсщифровки некоторых механизмов прогрессии глиом и повышения
таргетная терапии уводит от поиска главного звена патогенеза, и, в конечно»
^стабильности клеточного генома.
118 119
Представляют интерес исследования взаимосвязи между показателями (III та IV ст. зл.), при этом контрольные показатели составляли 1,7±0,2 %
агрегации клеток крови и уровня аберраций хромосом лимфоцитов (рис.З). Таким образом, наблюдается тенденция к увеличению частоты
периферической крови при глиомах головного мозга различной степени аберраций хромосом в лимфоцитах периферической крови исследованных
злокачественности. больных на глиомы в зависимости от степени их злокачественности. Кроме
Результаты цитогенетических исследований лимфоцитов этого, процент аберраций хромосом у больных с опухолями превышает 3%, что
периферической крови показали, что среднегрупповая частота анеуплоидных не противоречит данным литературы [30, 95].
клеток в группе больных со злокачественными глиомами (III-IV ст. зл.) была Анализ частоты основных типов аберраций хромосом лимфоцитов у
статистически достоверно более высокой (22,0+0,9%), по сравнению с больных с глиомами показал, что их спектр смещён в сторону хроматидных
аналогичными показателями у больных с более доброкачественными глиомами аберраций и составляет: 90 % при глиомах II ст. зл., и 82,9 % - при глиомах III
(II ст. зл.) (14,41+0,9%), и у здоровых лиц (7,8±0,5%) (рис.48).
_1 и IV-ro ст. зл. У практически здоровых лиц этот показатель равен 63,8%.
Среди аберраций хромосомного типа преобладающее большинство
представляют парные фрагменты. Их количество в три раза ниже в группе с
глиомами, чем в контрольной группе: 8,0%; 9,5% и 8,5% по сравнению с
36,2%. На кольцевые и дицентрические хромосомы приходится до 2,0%; 7,4% и
2,1% в группе с глиомами головного мозга, и 4,3% - в контрольной группе.
Полученный на клетках крови больных с глиомами головного мозга и в
группе больных с ЧМТ показатель сдвига ППР в градусах достоверно
понижался в сравнении с контролем (группа здоровых лиц).
Рис. 48. а) Количество анеуплоидных клеток и б) частота регистраци!
В лаборатории акад. В.В. Фролькиса [70] был открыт важный
хромосомных аберраций в лимфоцитах периферической крови У
общефизиологический механизм связи между активностью клеточного генома
больных с глиомами различной степени злокачественности.
и состоянием клеточной мембраны. В исследованиях с электрическим током
Диапазон индивидуальных колебаний частоты анеуплоидии также было достигнуто увеличение електрического заряда мембран клеток, при этом
увеличивался в зависимости от степени злокачественности глиом: повышался уровень активного хроматина, синтез РНК и белков. При
минимальный разброс наблюдался у здоровых лиц (4,0-14,0%), средний - я °пухолевом процессе под влиянием онкогенных факторов активация
группе больных с глиомами II степени злокачественности (10,0-24,0%)» генетического аппарата в условиях одновременного нарушения мембраны
максимальный - в группе больных со злокачественными глиомами (III-IV) Д° с°провождается выключением мембранных механизмов регуляции
лечения (14,0-39,5%) (рис. 48). генетической активности, отсутствием гиперполяризации, торможением
Частота аберраций хромосом лимфоцитов периферической крови щ биосинтеза белков, а также нарушается взаимосвязь между электрическим
больных с глиальными опухолями составила: 3,4±0,5% (II ст. зл.) и 4,75±0,5^1 3аРядом клетки и её делением.
120 121
I
Современными исследованиями показана тесная взаимосвязь между [89]. Деполяризация мембраны, вызванная хлористым калием или аналогом
мембранным потенциалом митохондрий и механизмом апоптоза клеток нейротрансмиттера никотином, активирует программу генной экспрессии,
организма [139, 130]. При этом уменьшение заряда в митохондриальной ила отличающуюся от программы, активированной фактором роста нервов или
клеточной мембране приводит к нарушению структуры и функции ядерной эпидермальным фактором роста. Фармпрепараты, влияющие на степень
ДНК. Эффект деполяризации мембраны влияет на экспрессию человеческого агрегации клеток крови и на уровень трансмембранного потенциала, могут
гена проэнкефалина [291]. Эти данные могут свидетельствовать о регуляторной оказывать воздействие на состояние клеточного генома или обладать
роли трансмембранного потенциала при функционировании клеточного генома. генотоксичностью.
В проведенных исследованиях на модели клеток периферической крови Было показано, что верапамил не способствует хромосомным или
была обнаружена взаимосвязь между уровнем показателей степени агрегации хроматидным разрывам при совместном культивировании с клеточной линией
клеток крови (ППР) и количеством аберраций хромосом лимфоцитов яичников китайских хомячков [197]. При исследованиях in vitro верапамил не
периферической крови больных с глиомами различной степени индуцировал хромосомных аберраций в лимфоцитах [252]. Верапамил
злокачественности. Эти показатели коррелировали со степей повышал противоопухолевый эффект блеомицина и пепломицина [250]. При
злокачественности глиом, при этом уровень показателей степени arperai совместном культивировании верапамила и кальциевого ионофора А23187,
увеличивался (показатель ППР уменьшался)), а уровень хромосомш который вызывает повышение уровня внутриклеточного кальция, верапамил
аберраций лимфоцитов увеличивался параллельно увеличению степени способствовал снижению количества хромосомных аберраций [142]. При
злокачественности. Учитывая исследованную нами взаимосвязь между реакции бласттрансформации добавление в культуру верапамила
степенью агрегации клеток крови и количеством аберраций хромосом в способствовало увеличению количества метафазных пластинок с
лимфоцитах периферической крови болыГых с нейрохирургической патологией хромосомными аберрациями у пациентов с суправентрикулярной тахикардией.
логично было провести исследования по изучению возможности стабилизаций При этом пациенты получали верапамил per os по 80 мг 3 раза в день в течение
клеточного генома с помощью мембранмодифицирующих соединений. недели, а затем без перерыва ещё внутривенно от 5 до 10 мг верапамила [142].
3.6. Влияние in vitro верапамила и кетамина на Известны данные, касающиеся качественных и количественных
цитогенетические показатели у больных с опухолями головного особенностей формирования радиационно-индуцированных перестроек
мозга. Хромосом в соматических клетках человека под воздействием верапамила.
Цитогенетические исследования онкологических больных в последнее Комутагенный эффект верапамила на хромосомном уровне лимфоцитов
время получили довольно большое распространение [24, 41, 47, 60, 61, 79, 102* Периферической крови прояаляется при действии относительно высоких доз
103,210]. °блучения и за счёт аберраций хромосомного типа, в том числе дицентрических
Существование связи между уровнем стабильности генома хромосом (7/100 метафаз). Комбинированное действие ионизированной
трансмембранным потенциалом подтверждено в работе, в которой показа Радиации и верапамила угнетает пролиферативный потенциал лимфоцитов
механизм регуляции генной экспрессии в зависимости от показателей Периферической крови здоровых лиц за счёт малых доз радиации (0,3 Гр).
122 123
Недостатком работы является отсутствие данных по влиянию различных 3.6.1. Характеристика цитогенетических показателей, которые

концентраций верапамила на пролиферативный потенциал лимфоцитов. применяются в данном исследовании.

Блокаторы кальциевых каналов могут проявлять эффект подавления Хромосомные изменения являются индивидуальными сигнальными

роста опухолевых клеток, или стимулировать индукцию образования опухолей генетическим и проявлениями изменчивости клеток, и их частота в опухоли

in vivo с помощью известных канцерогенов [205]. В качестве блокатора отображает сложность одновременных изменений многих структурных и

кальциевых каналов верапамил может быть потенциальным супрессором функциональных особенностей генов. Исходя из этого, делается вывод, что

апоптоза. Однако действие его при этом неоднозначно и зависит от условий хромосомные аберрации - это маркеры генных изменений. Принято считать,

эксперимента [205]. Пока остаётся не ясным, каким образом верапамил в одних что хромосомные перестройки в индукции канцерогенеза играют более

случаях способствует опухолевому росту [215], а в других случаях при значимую роль, чем генные мутации. Это основано на отсутствии способности

совместном введении с известными канцерогенами препятствует появлению некоторых канцерогенов вызывать генные мутации [79].

опухолей. Цитогенетические тесты in vitro направлены на то, чтобы

В отношении кетамина в литературе представлены данные в очень продемонстрировать индукцию хромосомных нарушений в культивируемых

небольшом количестве и также являются противоречивыми. Известно, что клетках, в данном случае лимфоцитов периферической крови (ЛПК), которые

комбинация препаратов, входящих в стандартную программу тотальной равномерно распределены и находятся в одной фазе клеточного цикла (Go).

внутривенной анестезии (атропин, димедрол, диазепам, кетамин, фентанил), а Возможности этих тестов довольно высоки. В частности, при цитогенетическом

также их комбинация с сомбревином, обладают способностью повреждать обследовании людей мы можем исследовать следующие показатели: частота

целостность генетических структур, что выражается в повышении числа аберраций хромосом, количество анеуплоидных, полиплоидных и

аберраций хромосом (в среднем в 2-4,5 раза), подавлении митоза и появлении мультиаберрантных клеток, а также - ПАК (поврежденность аберрантной
клетки).
клеток с микроядрами [44]. К сожалению, автор не представила эти данные для
каждого конкретного препарата, поэтому неизвестно, какой из препаратов
Нестабильность хромосом человека изучается с помощью хромосомного
анализа (мета- и анафазного), микроядерного теста, определения частоты
обладает указанной генотоксичностью.
Учитывая результаты наших исследований и зависимость действия Сестринских хромосомных обменов (СХО). Наиболее информативным является

верапамила и кетамина в определённом концентрационном градиенте на Метод изучения хромосом на стадии метафазы, поскольку он позволяет

степень снижения агрегации клеток крови, мы провели п о д б о р разведений


асследовать весь спектр структурных и количественных нарушений хромосом.

указанных преператов для исследования их действия на клеточный геном * Кроме того, это один из наиболее отработанных, стандартизированных и

культуре лимфоцитов (РБТЛ). С учётом объёма культуральной среДЫ Широко распространенных методов, что дает возможность достаточно

препараты были разведены в 10'3раз. °°ьективно сравнивать полученные результаты с данными других авторов.
Основной показатель, который используется всеми исследователями - частота
а^ерраций хромосом [156].
125
124
Bonassi S. с соавторами [94] при обследовании 1455 пациентов Полиплоидия, являясь крайним проявлением дисбаланса хромосом, у
обнаружили значительное увеличение коэффициента риска развития рака у человека приводит к остановке онтогенеза на ранних этапах [65]. Выявлена
пациентов, в лимфоцитах которых было среднее и высокое количество положительная корреляционная связь между общим количеством аберрантных,
хромосомных аберраций. При цитогенетическом анализе культур J1I1K 70 полиплоидных, гиперполиплоидных клеток и количеством, а, главное -
больных злокачественными лимфомами Э.А. Дёминой обнаружено достоверное характером клонов аномальных клеток в лимфоцитах периферической крови,
повышение уровня аберраций хромосом (в 2 раза и больше) по сравнению со типом и стадией опухолевого процесса у больных раком молочной железы и
среднепопуляционным уровнем [24]. желудочно-кишечного тракта [211, 212]. М. М. Виленчик [14] связывает
То есть, данные цитогенетических исследований лимфоцитов полиплоидию с уменьшением митотического потенциала при делении. Кроме
периферической крови могут быть одним из критериев при формировании того, И. А Знаевской [27] при исследовании детей было выявлено, что частота
групп повышенного риска возникновения разных заболеваний, в том числе и полиплоидных клеток является маркером радиационного действия - показатель
онкологических [41, 51, 61, 72, 191, 192]. достоверно превышал контрольные значения и положительно коррелировал со
Геномные мутации - анеуплоидия и полиплоидия - привлекают все сложившимся радиационным фоном: с увеличением радиационной нагрузки
большее внимание исследователей ввиду большого влияния этих нарушений на росла частота полиплоидных клеток.
развитие различных патологических состояний. Экстраполируя наблюдаемые Ц Еще один цитогенетический показатель, на который следует обратить
раннем онтогенезе эффекты анеуплоидии в область соматических мутаци» внимание - мультиаберрантные клетки. Возникновение мультиаберрантных
индуцируемые уже в постнатальном периоде, можно предположить, что клеток может привести к активации протоонкогенов, а также свидетельствует
числовые хромосомные нарушения могут оказаться более значимыми для об изменениях в системе репарации. [58].
развития патологических состояний человека, чем, индуцируемые генные Но есть клетки, в которых повреждены 2 хромосомы. Степень
мутации или структурные хромосомные аберрации [65,239]. поврежденное™ аберрантной клетки отображает другой показатель, который
Кроме того, корреляция числовых нарушений определенных хромосом с определяется как среднее количество аберраций на аберрантную клетку, или
опухолевыми фенотипами свидетельствуют об огромном значении данных ПАК (поврежденность аберрантной клетки). Цитогенетические критерии
аномалий и в канцерогенезе [50, 71, 129, 259]. Следует упомянуть и про Частоты аберраций хромосом, количество аберраций на аберрантную клетку
анеугены - большой класс преимущественно химических мутагенов, которые (ПАК) и поклеточные распределения хромосомных аберраций могут
могут и не вызывать генных мутаций или структурных хромосомны* ХаРактеризовать разные стороны индуцируемого мутагенеза. Некоторые
аберраций, а действуют в иной манере, затрагивая различные ком поненты мУтагены способны сильнее влиять на частоту клеток с аберрациями, в то
аппарата сегрегации хромосом [65, 259]. Другими словами, анеуплоидия моясет вРемя как другие способны индуцировать новые повреждения в уже
являться не только следствием генетической нестабильности, котор3* Г1°йрежденных клетках [18, 36]. Рост частоты аберраций не всегда
возникает в результате генной соматической мутации (протоонкогенов йЛ# с°провождается аналогичными изменениями среднего количества аберраций на
опухолесупрессоров), а непосредственно ее причиной [65, 239]. аберрантную клетку; и - наоборот, при почти неизменных значениях частоты
126 127
аберраций может наблюдаться рост количества аберраций на аберрантную Таблица 4

клетку [18, 34, 35, 36, 39]. В других работах показано, что повышение частоты Общие цитогенетические показатели в группах с модификацией

клеток из аберрациями, индуктируемое у-облучением и тиофосфамидом, фармакологическими препаратами in vitro

сопровождалось ростом количества аберраций хромосом на клетку [3, 42].


Группы
При проведении математической обработки в подгруппах Без С добавлением in vitro
Показатели
добавок — Натрия
мужчины/женщины статистически достоверных различий по цитогенетическим Верапамила Кетамина
контроль АТФ
показателям не наблюдалось, поэтому деления по подгруппам не производили Частота аберраций, % 7,87 ± 0,49 6,48 ±0,61 7,63 ± 0,96 8,47 ± 1,15
Анеуплоид­ 16,13 ± 11,86 ± 14,47 ± 12,91 ±
[33].
Коли­ ных 0,67 1,33* 1,28 0,83*
3.6.2. Влияние фармпрепаратов верапамила и кетамина на чество Полиплоид­
0,70 ±0,15 0,24 ±0,12* 1,02 ±0,41 0,26 ±0,19
клеток, ных
цитогенетические показатели у больных с нейрохирургической
% Мультиабер­ 1,84 ±0,49
1,73 ±0,24 1,15 ±0,26 3,05 ± 0,71
патологией. рантных
Обмены, % 0,53 ±0,13 0* 0,85 ± 0,38 0,26 ±0,19
Из данных табл. 8 видно, что во всех группах частота аберраций
ПАК (поврежденность 2,18 ±0,60
хромосом находится на уровне 6,48 - 8,47 % и превышает спонтанный уровень 2,00 ± 0,25 1,90 ±0,33 1,97 ±0,50
аберрантной клетки)
(который не должен быть больше 3,0 %) в 2 - 2,8 раза, что подтверждается Примечание: * - Р < 0,05 по сравнению с группой без добавок (контроль)

данными других цитогенетиков [51, 58]. Наименьшая частота аберраций ПАК -это показатель поврежденности аберрантной клетки. Самые низкие

хромосом при модификациях соответствует группе с добавлением в кровь значения ПАК - в группе больных с модификацией верапамилом, что также

верапамил-гидрохлорида в разведении в 10'3 раз. может свидетельствовать о положительной тенденции влияния этого

При действии верапамила и кетамина (разведение каждого препарата в фармпрепарата.

10"3 раз) наблюдается достоверное снижение частоты анеуплоидных клеток в Верапамил в экспериментальном исследовании проявляет

группе больных, что может свидетельствовать о стабилизации генома


стабилизирующие свойства, что подтверждается достоверным снижением ряда

лимфоцитов этими препаратами. Верапамил in vitro достоверно сниж ает


Цитогенетических показателей (количество анеуплоидных и полиплоидных

количество полиплоидных клеток. Спектр аберраций представлен в основном


клеток, а также обменов) и наименьшими значениями относительно частоты

одиночными и парными фрагментами (делециями). Но надо отметить й аберраций хромосом, количества мультиаберрантных клеток и степени

присутствие аберраций типа обменов, количество которых д остовер н о


поврежденности аберрантных клеток.

снижается при модификации верапамилом (табл. 4). Частота аберраций хромосом при модификации фармпрепаратами

Наличие мультиаберрантных клеток может свидетельствовать об °тображена в табл. 5.

изменениях в системе репарации. Следует отметить, что достоверного В контрольном варианте (без добавок) (табл. 5) мы обнаружили

снижения этих клеток нет ни в одной из групп, модифицированных разн ы М Й


Статистически достоверную разницу между частотой аберраций у больных с

препаратами, но наименьшее их количество - при воздействии верапамилом. | - ГлИомами II ст. зл. и глиомами III-IV ct.
129
зл ., что наблюдалось в предыдущих
исследованиях [11]. Верапамил достоверно снижает частоту аберрац* деления происходит экспрессия потенциальных повреждений клеточного
хромосом у больных с глиомами III-IV ct. зл . Следует отметить, что у больных аппарата, который отвечает за расхождение хромосом, то есть накопленные
с глиомами II ст. частота аберраций хромосом также снижается, хотя и не клетками in vivo потенциальные повреждения реализуются в числовые
достоверно. Возможно, это вызвано недостаточностью выборки. нарушения хромосом [65].
Корреляция числовых нарушений определенных хромосом с
Таблица 5.
опухолевыми фенотипами свидетельствуют о существенном значении этих
Частота аберраций хромосом (%) при действии фармпрепаратов у
аномалий в канцерогенезе [50, 51, 71, 128, 129, 211, 212, 259]. В табл. 6
больных с опухолями
представлены данные относительно количества анеуплоидных клеток.
Больные с опухолями
Показатели Таблица 6
Глиомами III-IV ctJ
Глиомами II ст. зл.
зл. Количество анеуплоидных клеток (%) при действии фармпрепаратов у

Без добавок 6,24±0,73 8,80±0,65* больных с опухолями

Верапамилом 5,90±0,95 6,83±0,75й Больные с опухолями


Показатели Глиомами III-IVct.
Модификация Натрий АТФ 6,50±1,23 8,89±1,50 Глиомами II ст. зл.
зл.
Кетамином 7,83±1,77 8,89±1,50
Без добавок 13,30±1,03 17,75±0,87*
Примечание:
Верапамилом 11,15±1,27 12,17±2,16“
* - Р < 0,05 по сравнению с данными по доброкачественным опухолям
Модификация Натрий АТФ 14,44±1,85 14,50±1,76
а - Р < 0,05 по сравнению с данными без добавления фармпрепаратов
Кетамином 11,67±1,69 13,94±1,07“
Следовательно, наиболее низкая частота аберраций хромосом
П римечание:
соответствует группе, которая была модифицирована верапамилом.
* ~ Р < 0 ,0 5 п о ср ав н ен и ю с дан н ы м и п о д о б р о к а ч е ст в е н н ы м оп у х о л я м
Сохранение диплоидного хромосомного набора является необходимы**
а ~ Р < 0 ,0 5 п о с р а в н ен и ю с д а н н ы м и б е з д о б а в о к ф ар м п р еп ар атов
условием нормальной жизнедеятельности соматической клетки. Этот процесс
Д ан н ы е о т н о си т ел ь н о к ол и ч еств а а н е у п л о и д н ы х к л еток у бол ь н ы х с
обеспечивается специальной генетической программой, которая направлена на
Д оброкачественны м и и зл ок ач еств ен н ы м и о п у х о л я м и д о с т о в е р н о отли ч аю тся,
предупреждение преждевременного расхождения хромосом - причину
410 н е п р от и в ор еч и т ли тер атур н ы м д ан н ы м [5 0 , 7 1 , 1 29, 2 1 1 , 2 1 2 ,2 5 9 ] .
образования анеуплоидного кариотипа клетки [1]. Главной причиной
С тати сти ч еск и д о с т о в е р н о е с н и ж е н и е к ол и ч еств а а н е у п л о и д н ы х клеток
анеуплоидии является нерасхождение и утрата хромосом вследствие
Набл ю д ает ся у б ол ь н ы х с гл и ом ам и III-IVct. зл. п р и д ей ст в и и верап ам и ла и
запоздания анафазы, то есть анеуплоидия свидетельствует о генетической
Кетам ина, ч то т р е б у е т д о п о л н и т е л ь н ы х и с с л ед о в а н и й о т н о с и т ел ь н о св ой ств
нестабильности клетки. Это обусловлено тем, что в анеуплоидных клетка*
Этйх п р еп ар атов, с п о с о б с т в у ю щ и х стаби л и зац и и ге н о м а л и м ф о ц и т о в (т а б л .6).
изменяется последовательность нормального синтеза ДНК. Скорее всего, в ХОД®

130 131
Полиплоидия, являясь крайним проявлением дисбаланса хромосом, J Таблица 8.
а
человека приводит к остановке онтогенеза на ранних этапах [65]. Выявлена Количество мультиаберрантных клеток (%) при действии
положительная корреляционная связь между общим количеством аберрантщ фармпрепаратов у больных с опухолями
полиплоидных, гиперполиплоидных клеток и количеством, а, главное,
Больные с опухолями
характером клонов аномальных клеток в лимфоцитах периферической крови,
Показатели Глиомами III-IVct.
Глиомами II ст. зл.
типом и стадией опухолевого процесса у больных раком молочной железы и зл.
Без добавок 1,38±0,35 1,94±0,32
желудочно-кишечного тракта [211, 212]. М. М. Виленчик [14] связывает
Верапамилом 0,77±0,27 0,98±0,40
полиплоидию с уменьшением митотического потенциала при делении. Модификация Натрий АТФ 1,67±0,67 2,00±0,70
Количество полиплоидных клеток отображено в табл. 7. Кетамином 2,78±0,87 3,48±1,21
Примечание:
Таблица 7 * - Р < 0,05 по сравнению с данными по доброкачественным опухолям
Количество полиплоидных клеток (%) при действии фармпрепаратов у d - Р < 0,05 по сравнению с данными без добавок фармпрепаратов
больных с опухолями Из данных таблицы 8 видно, что верапамил снижает количество
Больные с опухолями мультиаберрантных клеток в 2 раза и при глиомах II ст. зл., и при глиомах III-
Показатели Глиомами III-IV ct. ;
Глиомами II ст. зл. IVct. зл. Спектр аберраций хромосом представлен у обследуемых больных в
зл.
Без добавок 0,31±0,13 1,19±0,33* i основном одиночными и парными фрагментами (делениями). Но показатель,
Верапамилом 0,16±0,16 0,29±0,17“ отображенный в табл. 9 - количество обменов, достоверно снижается при
Модификация Натрий АТФ 0,56±0,39 1,00±0,50
Кетамином СЦ56±0,39 1,74±0,86 J действии верапамила.
Примечание:
Таблица 9.
* - Р < 0,05 по сравнению с данными по доброкачественным опухолям
Количество обменов (%) при действии фармпрепаратов у больных с
а - Р < 0,05 по сравнению с данными без добавок фармпрепаратов
опухолями
Из данных таблицы 7 видна статистически достоверная разница между
Больные с опухолями
количеством полиплоидных клеток у больных с глиомами II ст. зл. и глиомамй
Показатели Глиомами III-IVct.
Глиомами II ст. зл.
III-IVct. зл. зл.
i-___ _Без добавок 0,37±0,18 0,63±0,18
Верапамил достоверно снижает количество полиплоидных клеток при
Верапамилом 0* 0а
глиомах III-IVct. зл. При глиомах II ст. зл. самые низкие значения этого Модификация Натрий АТФ 0,56±0,39 1,00±0,50
Кетамином 0,28±0,28 1,74±0,86
показателя также в группе больных с модификацией верапамилом.
Наличие мультиаберрантных клеток свидетельствует об и зм ен ен и я х £
" Р < 0,05 по сравнению с данными по доброкачественным опухолям
системе репарации [58] -табл. 8.
а " Р < 0,05 по сравнению с данными без добавок фармпрепаратов

133
Степень поврежденности аберрантной клетки отображает другл Таким образом, верамапил и кетамин в экспериментальном исследовании
показатель, который определяется как среднее количество аберраций щ прИ определённом концентрационном градиенте, отображающем самую
аберрантную клетку, или ПАК (поврежденность аберрантной клетки) (табл. Ю) н и зкую степень агрегации клеток крови, проявляют стабилизирующее действие
Цитогенетические критерии частоты аберраций хромосом, количество на геном лимфоцитов. Подтверждением этому служит достоверное снижение
аберраций на аберрантную клетку (ПАК) и поклеточные распределения ряда цитогенетических показателей (частоты аберраций хромосом, количество
хромосомных аберраций могут характеризовать разные стороны анеуплоидных и полиплоидных клеток и обменов) и низкие показатели
патологического процесса. Некоторые мутагены способны сильнее влиять на количества мультиаберрантных клеток и степени поврежденности аберрантных
частоту клеток с аберрациями, в то время как другие способны индуцировать клеток. Изменения генома лимфоцитов при ЧМТ свидетельствуют о том, что
новые повреждения в уже поврежденных клетках [18, 36]. Рост частоты они не являются сугубо опухолевым проявлением и отображают уровень
аберраций не всегда сопровождается аналогичными изменениями среднего повреждения генома медиаторами воспаления. Для препятствия развития
количества аберраций на аберрантную клетку; и, наоборот, при почта процессов воспаления и прогрессии глиом следует проводить
неизменных значениях частоты аберраций может наблюдаться рост количества профилактические мероприятия с использованием препаратов,
аберраций на аберрантную клетку [34, 35]. В других работах показано, что стабилизирующих ядерно-мембранные структуры клеток крови и глиальных
повышение частоты клеток с аберрациями, индуцируемых у-облучением и опухолей.
тиофосфамидом, сопровождалось ростом количества аберраций хромосом на С целью изучения механизма взаимосвязи между степенью агрегации
клетку [3, 42]. Показатель ПАК отображен в табл. 10. клеток крови и пролиферативной активностью лимфоцитов были проведены
Таблица 10 исследования с различными разведениями ФГА в тесте РБТЛ.
Показатель ПАК (повреаденность аберрантной клетки) при действии Выводы.
фармпрепаратов у больных с опухолями 1. Экспериментально обнаружено, что при добавлении верапамила к
Больные с опухолями _____ лейкоцитам переферической крови достоверное снижение следующих
Показатели Глиомами III-IV ct.
Глиомами II ст. зл. показателей у больных со злокачественными глиомами: частоты аберраций
зл. __-
Без добавок 1,90±0,41 2Д0±0,32___ хромосом, количества анеуплоидных и полиплоидных клеток, а также обменов.
Верапамилом 1,70±0,53 1,80±0,40_^>
2. Достоверное снижение количества анеуплоидных клеток у больных
Модификация Натрий АТФ 1,81±0,70 1,92±0,68___ -
Кетамином 1,84±0,70 2,78±1,08__ J с глиомами III-IVct. зл. наблюдали при модификации кетамином.
* ~ Р < 0,05 по сравнению с данными по доброкачественным опухолям 3. При модификации верапамилом во всех группах наблюдали самые
а - Р < 0,05 по сравнению с данными без добавок фармпрепаратов Низкие значения количества мультиаберрантных клеток и ПАК
Из данных таблицы 10 видно, что самые низкие показатели ПАК Щ
(поврежденности аберрантной клетки).
модификации верапамилом крови больных и с глиомами II ст. зл., и с глйомящ
III-IV ct. зл.

134 135
3.7. Влияние концентрационных разведений ФГА
пролиферативную активность лимфоцитов

Результаты исследований показали влияние различных концентраций


ФГА на уровень пролиферативной активности лимфоцитов в клеточной
культуре. Градиент концентраций ФГА влияет на степень агрегации клеток
крови, поэтому можно связать уровень трансмембранного потенциала с
пролиферацией лимфоцитов. Некоторые авторы утверждают, что величина
мембранного потенциала является решающим фактором, определяющим Рис. 49. Показатели степени агрегации клеток крови (ППР) и количества
возможность пролиферации клеток [119]. Кроме того, мембранный заряд бластов (РБТЛ) в группе здоровых лиц в зависимости от степени
влияет на уровень стабилизации клеточного генома, что свидетельствует о разведения.
причине появления аберраций в геноме лимфоцитов при воспалении и
прогрессии глиом под воздействием медиаторов воспаления. Верапамил и
кетамин способствуют стабилизации генома лимфоцитов опосредованно через
понижение степени агрегации клеток крови и, соответственно, повышение
уровня трансмембранного потенциала.
ФГА разводили в пределах концентрационного градиента от 10'1 до 10
раз. Предварительно клетки крови (без сыворотки) инкубировали с различными
концентрациями препарата в теч 20 мин при температуре +37° С. Контролем
Рис. 50. Показатели степени агрегации клеток крови (НИР) и количества
служил исходный раствор ФГА. Затем добавляли питательную среду RPMI,
бластов (РБТЛ) в группе больных с ЧМТ в зависимости от
антибиотик и культивировали клетки согласно общеизвестной методике РБТЛ.
степени разведения.
В группе здоровых лиц показатели степени агрегации клеток крови й
В группе больных со спинальными грыжами показатели степени
количества бластов соотносятся между собой прямо пропорционально, кроме
агРегации клеток крови и количества бластов соотносятся между собой прямо
разведения ФГА в 10‘2 раз. При этом разведении повышение степени агрегаций
пропорционально при всех разведениях ФГА (рис. 51).
клеток крови (снижение показателей ППР) происходит параллельно сниж ению
В группе больных с глиомами II ст. зл. показатели степени агрегации
количества вновь образованных бластов из лимфоцитов периферической кров®
клет°к крови и количества бластов соотносятся между собой прямо
(рис. 49).В группе больных с ЧМТ показатели степени агрегации клеток кроя*
Пропорционально при всех разведениях ФГА, кроме разведения в 10*3 раз
и количества бластов соотносятся между собой прямо пропорционально ЯР
(Рис. 52).
всех разведениях ФГА (рис. 50).

137
136
пропорционально при всех разведениях ФГА, кроме разведений в 10"4 раз
(рис. 54).

Рис. 51. Показатели степени агрегации клеток крови (ППР) и количества


бластов (РБТЛ) в группе больных со спинальными грыжами в
зависимости от степени разведения. Рис. 53. Показатели степени агрегации клеток крови (ППР) и количества
бластов (РБТЛ) в группе больных с глиомами III ст. зл. в
зависимости от степени разведения

Рис. 52. Показатели степени агрегации клеток крови (ППР) и количества


бластов (РБТЛ) в группе больных с глиомами II ст. зл в
зависимости от степени разведения.
Рис. 54. Показатели степени агрегации клеток крови (ППР) и количества
В группе больных с глиомами III ст. зл. показатели степени агрегаций бластов (РБТЛ) в группе больных с глиомами IV ст. зл. в
клеток крови и количества бластов соотносятся между собой прямо зависимости от степени разведения.
пропорционально при разведениях ФГА в 10'1 и 10'5, и обратй0
В группе больных с менингиомами I ст. зл. показатели степени агрегации
пропорционально при разведениях ФГА в 10'2, 10'3, 10"4 раз (рис. 53).
Клеток крови и количества бластов соотносятся между собой прямо
В группе больных с глиомами IV ст. зл. показатели степени агрегаЯ*!
пропорционально при всех разведениях ФГА, кроме разведений ФГА в 10~2 раз
клеток крови и количества бластов соотносятся между собой прЯ**°
(рис. 55).

138 139
снижались (показатели ППР возрастали), при этом снижалась и
пролиферативная активность лимфоцитов.
Следовательно, существуют определённые особенности в соотношениях
между показателями степени агрегации клеток крови (показатели ППР) и
пролиферативной активностью лимфоцитов при воспалительных процессах при
qMT и спинальных грыжах, с одной стороны, и при воспалительном процессе,
ассоциированном с ростом и прогрессией глиом, с другой стороны. Эти
результаты свидетельствуют о возможности более тонкой регуляции
Рис. 55. Показатели степени агрегации клеток крови (ППР) и количества
пролиферативной активности лимфоцитов различными
бластов (РБТЛ) в группе больных с менингиомами I ст. зл. в
мембранмодифицирующими соединениями при различных патологиях ЦНС.
зависимости от степени разведения
3.8. Влияние верапамила и кетамина на рост перевивной глиомы
Результаты исследований взаимосвязи между степенью агрегации клеток
101.8
крови (показатели ППР) и пролиферативной активностью лимфоцитов
Известно, что блокаторы кальциевых каналов в комбинации со
(количество бластов) в группах здоровых лиц, больных с ЧМТ, со спинальным!
стандартными противоопухолевыми препаратами помогают преодолевать
грыжами и с менингиомами I ст. зл. (доброкачественными опухолями)
резистентность опухолевых клеток к этим химиопрепаратам. Известно про
продемонстрировали, в основном, прямо пропорциональную зависимость
эффект самих блокаторов кальциевых каналов на опухолевые клетки. Так,
между указанными показателями. В группах больных с ЧМТ и со спинальными
верапамил обладает цитотоксическим действием на клетки глиом [252].
грыжами прямая зависимость была отмечена при всех разведениях ФГА
-2 В работе [252] был исследован эффект верапамила на человеческие линии
Обратно пропорциональная зависимость отмечена при разведении ФГА в 10'
клеток: глиомы, медулобластомы, пинеалобластомы и нейробластомы,
раз в группах здоровых лиц и при менингиомах I ст. зл.
полученных от пациентов детского возраста. 10 мкм верапамила ингибировало
При глиомах различной степени злокачественности соотношения между
10% клеток. 100 мкм верапамила оказало 100% ингибирование клеток. 50%
показателями степени агрегации клеток крови и пролиферативной активностью
клеток ингибировали верапамилом в концентрации от 25 до 50 мкм.
лимфоцитов характеризовались преимущественно прямо пропорциональной
Ингибирование роста клеточных линий сопровождалось дозо-зависимым
зависимостью, кроме глиомы III ст. зл. Обратная зависимость наблю далась
снижением синтеза ДНК, РНК и белков, что было отмечено уже через
при разведениях ФГА в 10'3 раз (глиома II), при разведении ФГА в 10'2’ Ю'3 0
Несколько минут после добавления верапамила. Методом проточной
10'4 раз (глиома III ст. зл.) и при разведении ФГА в 10'4 раз (глиома IV ст. зл.)*
ФлЮорометрии было показано, что верапамил блокирует клетки указанных
При обратно пропорциональной зависимости увеличение степени разведен#*
°пУХолей в G l-фазе клеточного цикла. Верапамил не влиял на
ФГА совпадало с увеличением степени злокачественности глиом. Прй
предшественники нуклеиновых кислот или на кальциевый инфлкжс в клетках
максимальных разведениях ФГА показатели степени агрегации клеток кров*
Человеческой медуллобластомы.
140 141
Эффект верапамила и нимодипина исследовали на первичной культуре ядерного комплекса N F -k p , ответственного за активацию транскрипции генов

клеток человеческой глиобластомы [189]. Обнаружено, что верапамил (Ю-4^. ряда провоспалительных цитокинов, в частности ФНО-а. Кетамин достоверно

10'5 М) и нимодипин (1СГ4 - 10'6 М) значительно ингибировали включение [ЗН]. сниж ает индуцированную эндотоксином экспрессию фактора транскрипции

thymidine в зависимости от дозы. NF-kp в клетках человеческой глиомы и клетках интактного мозга мышей [247].
Верапамил в малых концентрациях не оказывает побочных явлений прц Перспективными являются клинические испытания этого препарата в качестве
длительном применении у пациентов с сердечной аритмией. Следовательно, нейропротектора, поскольку он обладает сразу несколькими положительными
этот препарат можно использовать для профилактики рецидиве» качествами: блокада NMDA-рецепторов, блокада синтеза провоспалительных
злокачественных глиом, что также требует длительного применения. цитокинов, высокая способность к проникновению через ГЭБ [13].
Крысам линии Вистар (4-6 недель) в правую теменную область Показано, что препараты верапамил и кетамин в разведении в 10‘3 и 10‘4
перевивали 1 млн. клеток глиомы 101.8. Препараты верапамила, кетамина, раз способствовали достоверному увеличению продолжительности жизни
мовалиса, натрия-АТФ в разведениях в 10'3, 10-4 раз вводили ежедневно животных. Так, верапамил в разведении в 10'3 увеличивал продолжительность
внутрибрюшинно (50 мкл) на 8-е сут после перевивки глиомы 101.8 (рис.56-59). жизни крыс на 5 сут., что составило 25% от продолжительности жизни
Контрольным животным внутрибрюшинно вводили раствор хлористого натрия контрольных животных (рис. 56).
в том же объёме.
Кетамин не был исследован на возможные побочные действия при
длительном применении. Кроме того, он включен в список наркотических
препаратов, однако в работе он был использован для раскрытия механизма
противоопухолевого действия противовоспалительных препаратов, которые

снижали степень агрегации клеток крови опосредованно через ингибирование

глутаматных NMDA-рецепторов.
Кетамин и его метаболит норкетамин способны неконкурентно

блокировать NMDA-рецепторы коры головного мозга и спинного мозга с


высокой степенью аффинности. Кетамин может оказывав
противовоспалительный эффект на уровне Ц Н С путём дозозависим ог0
блокирования синтеза и секреции фактора некроза опухолей-альфа посЛ Время, сутхи - *” * вер, 10'3

введения мышам эндотоксина или кальциевого и о н о ф о р а А23187 [282]>


^ЙС- 56. Влияние верапамила (10'3) на продолжительность жизни животных с
индуцированную Ф Н О -а лейкоцит-эндотелиальную адгезию [208], подавл#1*
перевивной глиомой штамма 101.8.
продукцию оксида азота макрофагами и макрофагоподобными клетками [2бЗ)«
Эти противовоспалительные эффекты кетамина связаны с блокадой экспресс^
142 143
Концентрация кетамина не влияла на поведение животных, изменение
мышечных реакций не отмечалось.
Верапамил в разведении в 10‘4 раз способствовал увеличению
продолжительности жизни животных на 3 сут., что составило 20% от
продолжительности жизни контрольных животных. Следовательно, подбор
концентраций препаратов следует производить индивидуально с учётом массы
животного (рис. 57).

Рис.58. Влияние кетамина (10'3) на продолжительность жизни животных


с перевивной глиомой штамма 101.8.

Рис. 57. Влияние верапамила (1 0 ') на продолжительность жизни животных с


перевивной глиомой штамма 101.8.

На рис. 58, 59 представлены данные по увеличению продолжительности


жизни животных под действием разных концентраций кетамина. Разведение
кетамина в 10‘3раз способствовало увеличению жизни животных на 8 сут., что
составляет 40% от продолжительности жизни контрольных животных-
Разведение кетамина в 10'4 раз способствовало увеличению продолжительности
жизни животных на 4 сут., что составляет 20% от продолжительности жизИИ Рис- 59. Влияние кетамина (10'4) на продолжительность жизни животных с

контрольных животных. перевивной глиомой штамма 101.8.


144 145
Заключение.
Воспаление - это типический патологический процесс, который
присутствует, в той или иной мере, почти при всех патологических процессах,
при условии, что они сопровождаются некротической гибелью клеток
организма. Наличие некрозов очень характерно для опухолевых тканей,
поэтому опухоль-ассоциированное воспаление в последнее время привлекает
внимание многих исследователей. Понятие ’’злокачественная ткань”, или
“опухоль” сформировалось довольно давно, и многочисленные исследования
проводились с учётом клеточно-тканевого уровня этой патологии. Однако
некоторые исследователи указывали на эмбриональную природу опухолевого
зачатка, идентифицируя его с экстраутеринным плодом или, по крайней мере,
Рис. 60. Малодозовое (10-4) и высокодозовое (1 0 ') действие кетамина на разрабатывали меры лечения опухолей с учётом этих представлений [15,20] и
продолжительность жизни крыс с перевивной глиомой 101.8. добиваясь при этом существенных успехов [20]. Ещё Ribbert объединил
“теорию хронического раздражения” Вирхова с “теорией эмбриональных
Как видно из рисунка, более высокая концентрация кетамина не
зачатков” Конгейма. Дальнейшее развитие теория Конгейма получила в
способствовала увеличению жизни экспериментальных животных, в то же
работах исследователей, считавших, что причиной злокачественной
время более низкая концентрация кетамина способствовала увеличению про
трансформации соматической клетки является её оплодотворение. Если
продолжительности жизни животных «а 5 сут больше, чем при высокой
принять гипотезу о том, что взрослый организм может содержать некоторое
концентрации кетамина.
количество зародышей (клонов) экстраутеринного происхождения, то можно
Полученные результаты свидетельствуют, что противоопухолевый
предположить, что опухоли представляют собой не тканевой, а условно
эффект препаратов верапамила и кетамина коррелирует со степенью сниж ения
популяционный уровень, потому что такие клоны никогда не превратятся во
агрегации клеток крови.
взрослый организм. Популяционный уровень, как известно, обладает
Проведенные нами исследования показали, что степень агрегации клеток
потенциальным бессмертием, несмотря на то, что индивидуальные особи
крови является одним из фундаментальных системных показателей, влияюЩй* лишены бессмертия. Наличие в опухоли иммортализованных стволовых клеток
на прогрессию злокачественных глиом. Противоопухолевый эффе1СГ и развитие опухоль-ассоциированного воспаления обеспечивает бессмертный
верапамила и кетамина зависит от их влияния на степень агрегации клето
статус опухоли в живом организме. Именно эти два фактора являются главной
крови. Чем ниже этот показатель, тем выше противоопухолевое действйе пРичиной того, что проблема злокачественных опухолей в медицине и
препаратов. биологии является одной из самых сложных.

146 147
Вследствие того, что клоны не защищены никакими барьерами, патогенезе злокачественных опухолей. Однако можно подвергнуть сомнению

иммунные клетки и другие клетки воспалительного генеза смогут разрушить их главенствующую роль в онкогенезе. Ведь большинство генетических

часть клеток, которые не соответствуют гистогенезу тех тканей, в которых они аномалий в опухолях встречаются с недостоверной частотой и, как было

возникли. Известно, что клетки зародышей созревают под регуляторным показано в наших исследованиях, даже при воспалительных процессах. И

воздействием сигналов, исходящих от соседних клеток, т.к. регуляторные только одна хромосомная аномалия может претендовать на роль пускового

системы: нервная, эндокринная, иммунная начинают функционировать гораздо механизма развития опухолевого процесса. Это - потеря гетерозиготности в

позже. Следовательно, разагрегированные части целого клона не смогут хромосомах или частота хроматидных аберраций, как было показано в наших

получить сигналы от его отсутствующих частей, а соответствующие сигналы исследованиях на лимфоцитах периферической крови. Частота этой аномалии

взрослого организма могут не восприниматься ими, т.к. отличаются от близка к 90-100 %.

сигналов, присущих эмбриональному периоду развития. В результате этого Анализируя эти данные, можно гипотетически предположить, что

будут нарушены естественные механизмы пролиферации и дифференцировки потеря гетерозиготности (LOH) и микросателлитная нестабильность могут

экстраутеринных клонов. Как только клоны, образованные тотипотентными способствовать гибридизации двух отличающихся по нуклеотидному составу

клетками, помещают в закрытое пространство - бластоцисту или в матку, они хромосом, что даст мощный пролиферативный толчок к росту эмбриона,

начинают нормально развиваться вплоть до целостного организма. аналогично тому, как это происходит при оплодотворении. Кроме этого

Исследователи [207] указывают также и на тот факт, что количество механизма, мы уже рассмотрели возможный механизм возврата соматических

опухолевых прогностических маркеров, которые признаны клинически клеток взрослого организма в тотипотентное состояние, открытие которого

полезными, к сожалению, невелико, несмотря на десятилетия усилий и было сделано при клонировании животных, что также может способствовать

средства, вложенные в исследования. Причинами считаются исследования возникновению аномального клона. Следует, тем не менее, подчеркнуть, что

недостаточной мощности, бедный дизайн многих из них, использование опухолевый процесс, включающий в себя и опухоль-ассоциированное

различных и подчас несоответствующих задаче статистических м етодов воспаление, является вероятностным событием, в котором картину

анализа, различия в методах определения конечных результатов исследования злокачественного роста составляет совокупность всех процессов, так или иначе

[55]. взаимосвязанных между собой. Процессы, рассматриваемые на клеточном

На наш взгляд, сегодняшнее неудовлетворительное состояние дел в Уровне, не являются опухоль - специфическими, а характеризуются наличием

молекулярной биологии рака состоит не только в этих причинах, но и в иммортализованных клеточных клонов. Только на уровне целостного

отсутствии понимания сущности опухолевого процесса. Если и в дальнейш ем п°стнатального организма проявляется картина злокачественного роста, так как

полагать причиной канцерогенеза только мутации в соматических клетках» Разрушительное действие медиаторов воспаления, которое приобрело

соотношение между онкогенами и генами-супрессорами, то процесс излечения Отологическое течение, напрямую не связано с механизмами тотипотентности,

раковых заболеваний растянется ещё на многие десятилетия. Нельзя отрицать Характерной чертой которых является иммортализации клонов.

что генетические и хромосомные аномалии являются неоспоримыми фактами ®^


149
В наших иссследованиях получены результаты, свидетельствующие 0 пропорциональна при воспалительных процессах, а обратно пропорциональная
наличии закономерностей и особенностей некоторых стадий воспалительного зависимость коррелирует как со степенью злокачественности глиом, так и со
процесса, ассоциированного с ростом глиом головного мозга. степенью разведения ФГА. Верапамил и кетамин показали также возможность
Исследованше степени агрегации клеток крови показало наличие стабилизации генома лимфоцитов в культуре в реакции РБТЛ. Такая
фундаментальных закономерностей, связанных с уменьшением возможность способствует дальнейшим разработкам по стабилизации генома
трансмембранного» потенциала мембран клеток крови во всех исследованных клеток крови с целью воздействия на реакции воспалительного генеза.
группах нейрохирургических больных. Добавление в кровь в условиях in vitro Мы можем предположить, что нестабильность генома при различных
мембранмодифицшрующих фармпрепаратов свидетельствовало о том, что опухолях является, действительно, характерным признаком, однако
изменения степенш агрегации клеток крови под их воздействием тесно связано предшествующим процессом выступает повреждение клеточной мембраны,
с видом нейрохирургической патологии. При таком методическом подходе приводящее к снижению трансмембранного потенциала или клеточного заряда.
появляется возможность разработки методов дифференциальной диагностики Косвенным отображением этого процесса является уровень агрегации клеток
между воспаление;м (ЧМТ) и глиомами IV ст. зл., между глиомами различных крови. Следовательно, нестабильность генома является следствием, а не
степеней злокачественности и остальными видами патологий в причиной в мембрано-ядерных взаимоотношениях.
дооперационном периоде. Это заранее позволит определить объёмы Значительные отличия между экспрессией нормальных и опухолевых
операционного вшешательства и виды дооперационного терапевтического клеток подтверждают тот факт, что главное звено патогенеза следует искать
воздействия в нейрохирургической практике. Кроме того, результаты показали, среди механизмов, в которых показатели не столь лабильны. Многие
что в болышшстше случаев разведение фармпрепаратов в 10'4 и 10‘5 раз исследователи полагают, что генетическая природа рака не вызывает никаких
способствовало уменьшению степени агрегации клеток крови, в то время как сомнений. Однако любой патологический процесс можно рассматривать, как
разведения в 10'11 и 10‘2 раз, наоборот, приводило к увеличению степени нарушение реализации генетической программы развития организма в процессе
агрегации клеток: крови. Эти новые знания позволят проводить подбор его жизнедеятельности. Тем не менее, многие из типических патологических
наиболее эффективных антиагрегационных препаратов в определённом процессов не относятся к генетическим нарушениям.
концентрационном градиенте. Полученные данные необходимы для разработки Полученные в работе данные можно использовать при планировании
методов противовооспалительной терапии при глиомах головного мозга с целью Дальнейших исследований причин возникновения и увеличения уровня
профилактики проогрессии глиом и их рецидивов. Нестабильности генома при опухолевом процессе, а также при поиске и
При изученши аберраций хромосом лимфоцитов периферической крови Применении препаратов и других методов воздействия, которые способны
при глиомах была 1 обнаружена зависимость количества геномных абер р ац и й от восстанавливать биоэлектрический потенциал клеточных мембран и
степени агрегацши клеток крови, во многом зависящей от величины Репарировать ДНК.
трансмембранногт потенциала. Влияние ФГА на пролиферативную активное# Рассуждая о роли воспаления, сопровождающего рост злокачественных
лимфоцитов покеазало, что эта зависимость в большей степени пр*^° гДиом и любых других опухолей, мы можем подчеркнуть его роль в повышении
150 151
клеточной плотности глиом, в результате чего происходит замена процессов не стало совершенным процессом, выработанным эволюционным путём, в
репарации в тканях на процессы регенерации, которые у низших организмов результате чего человеческая популяция расплачивается жизнью
осуществляются в полном объёме, т.е. идёт процесс клонирования нового индивидуальных особей за своё бессмертие.
организма. Вероятно, длительный воспалительный процесс, который не Комплексное лечение глиом включает хирургическое вмешательство,
способен к завершению репарации в тканях и органах, активизирует эти лучевую терапию, химиотерапию, иммунокорригирующую терапию. В
процессы иным образом - с помощью стволовых клеток. На начальных этапах некоторых клиниках это лечение дополняется лазеротерапией, генотерапией,
процесса заживления это даёт положительный эффект, т.к. при таком виде специфической противоопухолевой иммунотерапией. Современные методы
репарации в тканях не происходят процессы образования рубцовой ткани, что лечения злокачественных глиом головного мозга являются неэффективными, о
является характерным при воспалении. Репарация с помощью стволовых чем свидетельствуют показатели продолжительности жизни у
клеток способствует восстановлению цитоархитектоники тканей головного нейроонкологических больных.
мозга или других органов, препятствуя образованию рубца, что предотвращает В свете вышесказанного подход к лечению злокачественных опухолей
развитие посттравматических осложнений. В паренхиматозных органах эти головного мозга может состоять из двух подходов: местного (эмпирического,
процессы в ограниченном объёме происходят без риска возникновения не патогенетического) и системного (патогенетического). При первом
опухолей. Другая картина проявляется при последующих этапах воспаления, несомненная роль принадлежит в удалении опухолевого узла с применением
когда медиаторы воспаления способствуют активизации процессов регенерации разнообразных современных технологий, включая нейрохирургические
вплоть до появления тотипотентных клеток и последующего образования оперативные вмешательства, химио-, радио-, лазеро-, иммуно-, генотерапию и
клонированных организмов. В этом аспекте становится понятным появление др. Подавление опухоль-ассоциированного воспаления сможет повысить
морфологического разнообразия в наиболее злокачественной глиоме - эффективность вышеуказанных видов противоопухолевой терапии. Системный
глиобластоме (глиома IV ст. зл.), в результате чего она получила название подход должен быть профилактическим уже на стадиях хронических
мультиморфной. У высших организмов в постнатальном периоде процесс воспалительных процессов, а также производиться с учетом особенностей
заживления путём регенерации заблокирован, по крайней мере, тремя опухоль-ассоциированного воспалительного процесса, изучением механизмов
механизмами: разделением во времени эмбриогенеза и воспаления, его развития и течения, а также мероприятиями по его предотвращению.
генетической программой клеточной гибели (апоптозом), а также двойным

набором хромосом в клеточном геноме. На всех стадиях эмбриогенеза


процессы клеточной гибели происходят за счёт механизма апоптоза. Можно
представить исключительную важность этого процесса, если организмам 9

процессе эволюции понадобилось создать столь сложную генетическую


программу клеточной гибели. Создание такой программы обесп еч и л 0

существование и поддержание самого процесса эволюции. Воспаление, одна*0»


152 153
Общие выводы. нецелесообразным их применение при лечении больных с
1. Разработан новый, высокочувствительный метод определения доброкачественными глиомами.
агрегации нативных клеток крови с помощью прибора “Plasmon”,
7. Впервые обнаружено, что степень агрегации клеток крови повышается с
сконструированного с использованием эффекта поверхностного
увеличение степени злокачественности и уровня клеточной плотности
плазмонного резонанса на основе применения нанотехнологий.
глиом, что может коррелировать с увеличением содержания стволовых
2. Впервые установлено, что повышение уровня агрегации клеток крови клеток с плюрипотентными свойствами в тканях глиом.
является закономерным процессом, сопровождающим рост и
8. Показано, что количество аберраций клеточного генома в лимфоцитах
прогрессию опухолей головного мозга и свидетельствует о наличии в
периферической крови повышается с увеличением степени
организме опухоль-ассоциированного воспаления.
злокачественности глиом и при черепно-мозговых травмах.
3. Рост перевивной глиомы 101.8 в головном мозге крыс сопровождается
9. Фармакопейные мембранмодифицирующие препараты (верапамил и
повышением степени агрегации клеток крови вплоть до гибели
кетамин) способствуют стабилизации клеточного генома при
животных.
культивировании лимфоцитов периферической крови в тесте РБТЛ при
4. Впервые обнаружено, что применение фармакопейных мембран­ малодозовых концентрациях.
модифицирующих препаратов влияет на степень агрегации клеток крови
10. Показатели степени агрегации клеток крови показывают прямо
при глиомах головного мозга с учётом их механизма действия на
пропорциональную зависимость с пролиферативной активностью
мембранные мишени. Высокедозовые разведения препаратов
бластов в тесте РБТЛ у здоровых лиц и при патологиях воспалительного
способствуют повышению агрегации клеток крови, а малодозовые
генеза (ЧМТ и спинальные грыжи), и обратно пропорциональную
разведения - снижению агрегации клеток крови.
зависимость у больных с глиомами при малодозовых разведениях ФГА.
5. Экспериментально доказано, что применение фармакопейных мембран­
11. Установлена эффективность малодозовых концентраций мембран-
модифицирующих препаратов даёт возможность проводить
модифицирующих соединений при подавлении роста перевивной
дифференциальную диагностику по показателям агрегации клеток
глиомы штамма 101.8 у экспериментальных животных.
крови, определяемым методом ППР, между опухолевыми й
воспалительными процессами в головном мозге, а также меЖДУ 12. Разработан новый методологический подход к применению препаратов с
доброкачественными и злокачественными глиомами. антиагрегационным действием для лечения и профилактики рецидивов
при злокачественных глиомах головного мозга.
6. Фармакопейные мембранмодифицирующие препараты повышаю1
степень агрегации клеток крови при глиомах II ст. зл., что д ел а # 1

155
Литература. 11. Болтина И.В. Метод подсчета анеуплоидных клеток при метафазном
1. Акифьев А.П., Худолей Г.А. Мутагенез и генетический гомеостаз у анализе аберраций хромосом в культуре лимфоцитов периферической
высших организмов // Вестник РАМН. - 1993. - №1. - С. 3-9. крови человека// Свидетельство о государственной регистрации прав
2. Алмазов В. А. Оседание эритроцитов. Большая медицинская автора № 8745, заяв. 15.07.2003; опубл. 16.09.2003.
энциклопедия // М.: Советская энциклопедия, 1981. - Т. 17.- С. 1306— 12. Вдовин В.А., Муравьёв А.В., Певзнер А.А. Способ определения степени
1311. агрегации клеток крови // Ярославский педагогический вестник. —2012. —
3. Асташева Н.П., Храмцова Л.К. Закономерности образования аберраций № 3. - Том III (Естественные науки) - С. 151.
хромосом в лимфоцитах крупного рогатого скота in vitro // Радиационная 13. Верещагин Е.И. Современные возможности нейропротекции при острых
биология. Радиоэкология. - 2002. - Т. 42, № 3. - С. 251 - 253. нарушениях мозгового кровообращения и черепно-мозговой травме
4. Атраментова Л.А., Утевская Л.А. Статистические методы в биологии. (обзор литературы)// Журнал интенсивной терапии.- 2006. - №3.-С.4-28.
Учебник для студентов высших учебных заведений // Горловка: Лихтар, 14. Виленчик М.М. Нестабильность генома и отдельные последствия
2008.-2 47с.-С .- 4. воздействия излучений // М: Энергоиздат, 1987. - 192 с.
5. Ашмарин И.П., Ещенко Н.Д., Каразеева Е.П. Нейрохимия в таблицах и 15. Винницкий В.Б., Мосиенко М.Д., Глинский Г.В. и др. Биология маркеров
схемах.// М.: “ Экзамен”, 2007. - 144 с. рака и беременности //Киев: Наук. Думка.- 1990. - 252 с.
6. Бабаева А.Г. Регенерация и система иммуногенеза //М.: Медицина, 1985.- 16. Воейков В.Л. Физико-химические и физиологические аспекты реакции
255 с. оседания эритроцитов. // Успехи физиологических наук. - 1998. - Т. 29,
7. Белоцкий С.М., Авталион P.P. Воспаление. Мобилизация клеток и № 4 .- С . 55-73.
клинические эффекты. //М.: Издательство БИНОМ.-2008.-240 с. 17. Ганнушкина И.В., Лебедева Н.В. Гипертоническая энцефалопатия.- М.,
8. Бердников, А. В., Семко М.В., Широков Ю.А. Медицинские приборы, 1987.-224 с.
аппараты, системы и комплексы. Часть I. Технические методы и аппараты 18. Гераськин С.А, Дикарев В.Г., Дикарева Н.С., Спирин Е.В. Влияние
для экспресс-диагностики // Учебное пособие: изд-во Казан, гос. техн. ун- раздельного радиоактивного и химического загрязнения на выход
та, г. Казань.-2004. - 176 с. цитогенетических нарушений в интеркалярной меристеме ярового ячменя
9. Бережная Н.М. Роль клеток системы иммунитета в микроокружений // Радиационная биология. Радиоэкология. - 2002. - Т. 42, № 4. - С. 364 -
опухоли. I. Клетки и цитокины - участники воспаления // Онкология. - 368.
2009. -т .1 1, №1. - С. 6 - 17. 19. Гмиро В.Е., Сердюк С.Е. Сравнительный анализ NMDA-блокирующей
10. Беспалов А.Ю., Звартау Э.Э.Нейрофармакология антагонистов NMDA- активности и безопасности моно-катионных и бис-катионных соединений
рецепторов. //Inrtemet version by timmy@mail.sochi.ru.- С.- Пб. - 2000. ' в опытах на животных // Экспериментальная и клиническая
297 с.- С.- 29. фармакология.-2000.- Т.63, №6. -С.3-8.
20. Говалло В.И. Иммунология репродукции // М.: Медицина, 1987.- 302 с.
156 157
21. Гридина Н.Я., Болтана И.В., Ушенин Ю.В., Лапина А.В. и др. Возрастные 30. Карпов Ю.А., Соболева Г.Н. Антагонисты кальция: препараты первой
аспекты связи между агрегацией клеток крови и хромосомными линии в современной кардиологии. II ч. //Терапевт. Архив.-1997. - №1. -
аберрациями в лимфоцитах периферической крови у больных с глиомами С.74-78.
головного мозга //Пробл. старения и долголетия.-2008.-Т.17, №3.-С.328- 31. Квитко О.В., Конева И.И., Шейко Я.И. Видеомикроскопия живых клеток
337. в изучении неопластической трансформации // Материалы III съезда
22. Гунина Л.М., Кабан О.П., Коробко В.Б. Влияние in vitro натрия сукцината онкол. и радиол. СНГ. - Минск.- 2004.- С. 345.
на мембраны эритроцитов при химиотерапии больных раком желудка // 32. Костанян И.А., Наволоцкая Е.В., Нуриева Р.И. и др. Взаимодействие L-
Онкология.- 2003.- Т.5, № 3.- С. 200-203. глутаминовой кислоты с Т-лимфоцитами человека // Биоорг. хим.-1997.-
23. Давыдова О.Н., Болдырев А.А. Глутаматные рецепторы в клетках Т.23.-С. 805 - 808.
нервной и иммунной систем //Анналы клинической и экспериментальной 33. Кузнецов А.И., Кружалов А.И., Илюшенко В.Г. и др. Возрастно-половая
неврологии.-2007.-Т.1, № 4.- С.28-34. зависимость спонтанной частоты хрососомных аберраций и аберрантных
24. Дёмина Э.А. Аберрации хромосом в лимфоцитах периферической крови клеток в лимфоцитах периферической крови //Генетика.-1980.-Т.16, №7.-
онкологических больных // Клинич. онкология. - 1991. - вып. 11. - С.1284-1293.
С. 112-114. 34. Куцеконь Н.К., Безруков В.Ф., Лазаренко Л.М., Рашидов Н.М.,
25. Захаров А.Ф., Бенюш В.А., Кулешов Н.П., Барановская Л.И.//Хромосомы Гродзинский Д.М. Количество аберраций на аберрантную клетку как
человека: атлас. М.: Медицина, 1982. - 264 с. - С. 28. параметр хромосомной нестабильности 1. Характеристика дозовых
26. Зиньо С.А., Самойлов А.В., Суровцева О.Р., Ширшов Ю.М. Детектор зависимостей // Цитология и генетика. - 2003. - № 4. - С. 2 0 -2 5 .
поверхностного плазмонного резонанса; Патент 46512 А Украина // Бюл. 35. Куцеконь Н.К., Лазаренко Л.М., Безруков В.Ф., Рашидов Н.М.,
№ 5; Заявл 31.07.2001; Опубл. 15.05.2002. Гродзинский Д.М. Количество аберраций на аберрантную клетку как
27. Знаевская И.А. Особенности цитогенетического эффекта в ли м ф оц и тах параметр хромосомной нестабильности 2. Сравнительный анализ
периферической крови детей, которые подверглись влиянию некоторы х влияния факторов различной природы // Цитология и генетика. - 2004. -
мутагенных факторов физической и химической природы малой № 1 .-С . 5 5 -6 2 .
интенсивности //Дис. к-та. мед. наук.- К., 1997 - 146 с. 36. Лазаренко Л.М. Цитогенетическая оценка мутабильности Allium
28. Зозуля Ю.А., Г р и д и н а Н.Я., Семёнова В .М ., Стайно Л .В . В заи м одей стви е fistulosum L. (Liliacea, Magnoliophyta) при старении семени //Дис. канд.
между эмбриональной нервной тканью и глиальной опухолью при их биол. наук - К., 1999 - 120 с.
совместном культивировании и трансплантации в мозг //Экспер. онкол. ' 37. Левтов В. А., Левкович Ю.И., Потапова И. В. и др. Об исследовании
1997.-Т.19, №1.- С.37- 43. агрегационных свойств крови // Физиология человека. - 1978. - № 3. -
29. Исследование системы крови в клинической практике // Под ред. С. 504-513.
Козинца и В.А. Макарова. - М.: Триада-Х, 1997. - 480 с.
158 159
38. Лисяный Н.И., Любич Л.Д. Исследование in vitro влияния супернатанта рака в желудочно-кишечном тракте //Вопросы онкологии. —1993. —Т.39,
клеток незрелого мозга на экспрессию цитокинов и антигенов HLA № 6 .- С . 1 8 4 - 188.

клетками опухолей мозга и мононуклеарами периферической крови 48. Мохорт Н.А., Серединская Н.Н., Бобкова Л.С. Антагонисты кальция:
человека //Трансплантология.-2007.-Т.9, №1.-С. 156-159. перспективы создания новых препаратов (обзор литературы) // Журн.
39. Лучник Н.В. Хромосомный цикл ДНК // Радиационная биология. АМН Украины.- 2003.- Т. 9, №1,- С. 15-27.

Радиоэкология. - 1996. - Т. 36. - вып.6. - С. 774-779. 49. Муравьёв А.В., Певзнер А.А. Способ определения степени агрегации
40. Лучник А.Н. Общее звено в механизме самоподдержания клеток крови // Ярославский педагогический вестник. - 2012. - Том III,
злокачественного роста: синдром незаживающей раны // Онтогенез. - № 3 (Естественные науки). - С. 151.

2000. -Т.31, №3. - С.227-231. 50. Назаренко С.А. Тимошевский В.А. Сравнительный анализ частоты
41. Мазник НА. Цитогенетические исследования лимфоцитов анеуплоидии в покоящихся и делящихся клетках человека при
периферической крови при профессиональном облучении медицинских воздействии вредных внешнесредовых факторов // Генетика. —2005. —Т.
радиологов //Цитология и генетика. - 1987. - Т.21, № 6. - С. 437 - 440. 41, №3. - С. 391 -3 9 5 .

42. Малашенко А.М., Бескова Т.Б. Изучение межлинейных различий у 51. Несина И.П. Цитогенетический анализ лимфоцитов периферической
мышей по чувствительности к ТиоТЭФ: опыт с рекомбинантными крови у больных на гиперплазию и рак эндометрия // Автореф. канд.

линиями //Генетика. - 1995. - Т. 31, № 7. - С. 965 - 970. дис.- Киев. - 1993. - 20 с.

43. Маленков А.Г. Ионный гомеостаз и автономное поведение опухоли //Изд- 52. Олейник Е.К. Характеристика функциональных и фенотипических

во “Наука”: Москва, 1976. - 172 с. изменений лимфоцитов периферической крови у онкологических

44. Мамедова Наиля Раиз кызы. Профилактика генотоксических эффектов больных // Дис. на соиск. степени д-ра биол. наук: Петрозаводск, 2005.-

тотальной внутривенной анестезии при операции кесарево сечение 247 с.

(клинико-экспериментальное исследование) // Автореф. канд. дисс.-2002. 53. Олюшин В.Е. Комплексное лечение больных со злокачественными

- С. 24. глиомами полушарий большого мозга // VII Международный симпозиум

45. Мацко Д.Е., Коршунов А.Г. Атлас опухолей центральной нервной “Новые технологии в нейрохирургии”: Материалы симпозиума. - СПб,

системы //СПб., 1998. -186 с. 2004.- С . 164-165.

46. Михайлович В.А., Марусанов В.Е., Бичун А.Б., Доманская И.А- 54. Орловский А.А., Залеток С.П., Бурлака А.П., Тодор И.Н., Яниш Ю.В.

Проницаемость эритроцитарных мембран и сорбционная способность Зависимое от концентрации клеток торможение митохондриального

эритроцитов - оптимальные критерии тяжести эндогенной интоксикации дыхания в суспензиях клеток асцитных опухолей // Матер. III съезда

//Анестезиология и реаниматология.-1993.- №5.- С.66-69. онкол. и радиол. СНГ, Минск. - 2004.- С. 345.

47. Монахов А.С., Гуляев А.В. Цитогенетическое и медико-генетическое


исследование в семьях с высокой предрасположенностью к разви тию

161
55. Осинский С.П., Глузман Д.Ф., Клифф Й,, Гизе Н.А., Фрисс Г. 64. Скворцова В.И. Ишемический инсульт: патогенез ишемии,
Молекулярная диагностика опухолей: фундаментальные основы и терапевтические подходы // Неврологический журнал. — 2001. — Т. 6,
практическое применение / /Под ред. Чехуна В.Ф. - Киев.- 2007.- 247 с. № З .- С . 4-9
56. Панченков Т.П. Определение ускорения оседания эритроцитов при 65. Тимошевский В.А., Назаренко С.А. Биологическая индикация
помощи микрокапилляра // Врачебное дело. - 1924. - № 16. - С. 895. мутагенных воздействий и генетической нестабильности у человека
57. Петроченко Е.П., Тихомирова И.А., Михайлова С.Г., Петроченко А.С. путем учета числовых хромосомных нарушений // Вестник ВОГиС. -
Влияние фармакологических препаратов на микрореологические 2006. - Т. 10, № 3. - С. 530 - 539.
свойства эритроцитов в норме и при нарушении кровообращения // 66. Тринус Ф.П., Бухтиарова Т.А. Фармакологический анализ участия
Материалы VII междун. конф. “Гемореология и микрорциркуляция (от моноаминергических систем в механизме анальгезирующего действия
функциональных механизмов в практику”) - Ярославль,- 2009.- С.63. НПВП // Фармакология и токсикология.-1989.- Т.24. - С.89-92.
58. Пилинская М.А., Шеметун А.М., Дыбский С.С., Дыбская Е.Б., Педан 67. Тунева Е.О., Бычкова О.Н., Болдырев А.А. Влияние NMDA на
Л.Р., Шеметун Е.В. Цитогенетический мониторинг лиц, пострадавших от продукцию АФК лимфоцитами человека //Бюлл. эксп. биол. и мед.-2003.-
аварии на Чернобыльской АЭС // Цитология и генетика. - 1994. - Т. 28, № Т.136.-С.184-186.
З .- С . 1 8 -2 4 . 68. Улитин А.Ю. Эпидемиология первичных опухолей головного мозга
59. Полетаев А.Б., Арапов Н.А. Рак: альтернативный взгляд // Российский среди населения крупного города и пути совершенствования организации
онкологический журнал.- 2009.- №3.- С.53-56. медицинской помощи больным с данной патологией (на модели Санкт-
60. Полищук Л.З. Наследственный рак, онкогенетические синдромы и Петербурга)// Автореф. дис. канд. мед. наук. - СПб., - 1997. - 26 С.
принципы генетической профилактики злокачественных 69. Фель В.Я. Антигенная дивергенция опухолевых клеток, обусловленная
новообразований // Doctor. - 2003. - № 4. - С. 46 - 49. экспрессией гетероорганных антигенов, как проявление
61. Полищук Л.З., Несина И.П. Структурные аберрации хромосом в дисдифференцировки при канцерогенезе // Цитология. -1990. -Т.32, №5. -
лимфоцитах периферической крови у больных предраком и раком С.407-421.
эндометрия // Цитология и генетика. - 1995. - Т.29, № 3. - С. 17 - 24. 70. Фролькис В.В. Старение и увеличение продолжительности жизни ПЛ.:

62. Репин B.C., Ржанинова А.А., Шаменков Д.А. Эмбриональные стволовые Наука, 1988.- 237 с.
клетки: фундаментальная биология и медицина //М., -2002.- Реметэкс.- 71. Худолей В.В., Мизгирев И.В. Пути развития и перспективы
225 с. экологической онкологии // Вопросы онкологии. - 1997. - Т. 43, № 1. - С.
63. Самуилов В.Д., Олескин А.В. Программируемая клеточная смерть Н 116-119.
Биохимия,- 2000. -Т.65.- Вып. 8.- С.1029-1046. 72. Цитологическая реактивность онкологического больного// Под редакцией
К. П. Ганиной. - К.: Наукова думка, 1995. - 150 с.

162 163
73. Чижевский А.Л. Электрические и магнитные свойства эритроцитов// 81. Bading H., Ginty D.D., Greenberg M.E. Regulation of gene expression in
К.: Наукова думка, 1973. - 9 5 с. hippocampal neurons by distinct calcium signaling pathways //Science.-1993.-
74. Шварцбурд П.М. Хроническое воспаление повышает риск развития V.260.- P.181-186.
эпителиальных новообразований, индуцируя предраковое 82. Bading H., Greenberg M.E. Stimulation of protein tyrosine phosphorylation by
микроокружение: анализ механизмов дисрегуляции// Вопросы онкологии. NMDA receptor activation //Science.-1991.-V.253.-P.912-914.
-2006. -Т.52, №2. - С. 137-144. 83. Badouard C., Masuda М., Nishino H. et al. Detection of chlorinated DNA and
75. Ширшов Ю.М., Венгер Е.Ф., Прохорович А.В., Ушенин Ю.В., RNA nucleosides by HPLC coupled to tandem mass spectrometry as potential
Мацас Е.П., Чегель В.И., Самойлов А.В. Способ детектирования и biomarkers of inflammation //J. Chromatogr. B. Anal. Technol. Biomed. Life
определения концентрации биомолекул и молекулярных комплексов и Sci.-2005.-V.827.-P.26-31.
устройство для его осуществления Патент 46018 Украина // Бюл. № 5; 84. Balkwill F., Charles K.A., Mantovani A. Smoldering and polarized
Заявл. 22.10.1997; Опубл. 15.05.2002. inflammation in the initiation and promotion of malignant disease //Cancer
76. Ширшов Ю. М., Самойлов А. В., Христосенко Р. В., Ушенин Ю. В., Cell.-2005.-No.7.-P.211-217.
Мирский В. М. Анализ и численное моделирование ППР-спектрометров с 85. Balkwill. Targeting Cancer-Related Inflammation//Cancer Microenvironment.-

механической разверткой по углу: алгоритм определения угловой 2009.-V.2.-Suppl. 1.-P.S40.

позиции минимума // Регистрация, сохранение и оброботка данных.- 86. Balkwill F., Mantovani A. Inflammation and cancer: Back to Virchow?

2004.-Т. 6, № 3.- С. 3-18. //Lancet.-2001.-V.357,- P.539-545.

77. Эренпрейс Я.Г. Эмбриональные свойства опухолевых клеток: факты и 87. Bapat S.A., Mali A.M., Koppikar C.B., Kurrey N.K. Stem and progenitor-like

гипотезы// Эксперим. онкология.-1982.-Т.4, № 6.- С.13-18. cells contribute to the aggressive behavior of human epithelial ovarian cancer

78. Abody K.S., Brown A., Rainov N.G., Bower К.А. et al. Neural stem cells //Cancer Res.-2006.-V.65. - P.3025-3029.

display extensive tropism for pathology in adult brain: Evidence from 88. Bardia A., Ebbert J.O., Vierkant R.A. et al. Assotiation of Aspirin and Non

intracranial gliomas // Proc.Natl. Acad. Sci. USA. - 2000. - V. 97, N. 23. - P- aspirin Nonsteroidal Antiinflammatory Drugs With Cancer Incidence and

12846- 12851. Mortality // J. Natl.Cancer Inst.-2007.-V.99, No.l 1,- P.881-889.

79. Appley A.J., Fitzgibbons, P. Chandrasoma P. Multiparameter flow cytometric 89. Bartel D.P., Sheng М., Lau L.F., Greenberg E. Growth factors and membrane

analysis of neoplastomes of the central nervous system // Neurosurgery. ' depolarization activate distinct programs of early response gene expression

1990.-V o l. 2 7 .- P . 8 3 -9 6 . dissociation of fos and jun induction//Genes&Dev.-1989.-No.3.-P.304-311.

80. Badie B., Schartner J.M., Paul J., Bartley B.A., Vorpahl J., Preston J.K- 90. Baskurt О. K., Uyuklu М., Sebahat O., Meisel-man H. J. Measurement of red

Dexamethasone-induced abolition of inflammatory response in an blood cell aggregation in disposable capillary tubes. // Clinical Hemorheol. and

experimental glioma model: a flow cytometry study // J. Neurosurg.- 2000. " Microcirculation. - 2011. - Vol. 47. - P.295-305.

N. 9 3.- P . 634-639.
164 165
91. Beachy Ph. A., S.S.Karhadkar, D.M.Berman. Review article Tissue repair and 102. Bonassi S., Abbondatedolo A, Camurri L. Are chromosome aberrations in
stem cell renewal in carcinogenesis //Nature.-2004.-V.432.- P.324-331. circulating lymphocytes predictive of future cancer onset in humans?
92. Bean B.P. Pharmacology and electrophysiology of ATP-activated ion channels Preliminary results of an Italian cohort study // Cancer Genetics and
//Trends Pharmacol. Sci.-1992.-V.13,- P.87-90. Cytogenetics. - 1995. - Vol. 79. - P. 133 - 135.
93. Beard J. Embryological aspects and etiology of carcinoma // Lancet-1902.- 103. Bottomley R.H., Trainer A.L., Condit P.T. Chromosome studies in a ‘cancer
N.1.-P.1758-1761. family’ //Cancer.-1971.- V.28,N 2.-P.519-528.
94. Beard J. The action of trypsin upon living cells of the Jensen sarcoma //Brt. 104. Bowe M.A. Bowe M.A., Nadler J.V. Polyamines antagonize N-methyl-D-
Med. J.-1906.-N.1.- P.140-141. aspartate-evoked depolarizations, but reduce Mg2+ block //European Journal of
95. Bemardi P. Mitochondrial Transport of Cations: Channels, Exchangers, and Farmacology.-1995.-V.278, N.I.- P.55 - 65.
Permeability Transition // Physiological Reviews.-1999.-V.79, N.4.- P. 1127- 105. Brambrink Т., Foreman R., Welstead G. et al. Sequential expression of
1155. pluripotensy markers during direct reprogramming of mouse somatic cells //
96. Bhave S.V., Ghoda L., Hoffman P.L. Brain-derived neurotrophic factor Cell Stem Cells.-2008.-V.2.- P.151-159.
mediates the anti -apoptotic effect of NMDA in cerebellar granule neurons: 106. Brennan C.A., Van Cleve M.D., Gumport R I. The effect of base analogue
signal transduction cascades and site of ethanol action // J. Neurosci.-1999.- substitutions on the methylation by the EcoRI modification methylase of
V.19.- P.3277-3286. octadeoxyribonucleotides containing modified EcoRI recognition sequences
97. Bjorson Ch.R.R., Rietze R.L., Reynolds B.A., Magli M.C., Vescovi A.L. //J. Biol. Chem.-1986.-V.261.-P.7279-7286.
Turning Brain into Blood: A Hematopoietic Fate Adopted by Adult Neural 107. Broekemeier K.M., Schmid P.C., Schmid H.H., Pfeiffer D.R. Effects of
Stem Cells in Vivo // Science. - 1999. - N. 283. - P. 534-536. phospholipase A2 inhibitors on ruthenium red-induced Ca2+ release from
98. Blaser M.J. Linking Helicobacter pylory to gastric cancer //Nature Med. - mitochondria //J. Biol.Chem.-1985.-V.260. - P. 105-113.
2000.-V.6.-P.376-377. 108. Bucala R., Donnelly S.C. Macrophage migration inhibitory factor: a probable
99. Boldyrev A.A., Kazey V.I., Leinsoo T.A. et al. Rodent lymphocytes express link between inflammation and cancer // Immunity.-2007.-V.26, No.3.- P.281-
functionally active glutamate receptors //Biochem. Biophys. Res. Commun.- 285.
2004.-V.324.- P .133-139. 109. Bumstock, G. Co-transmission//Arch. Int. Pharmadyn. - 1990.-V.304.- P.7-33.
100. Bondeson K., Frostell-Karlsson A., Fagerstam L., and Magnusson G. Lactose 110. Campbell K.H.S., McWhir J., Ritchie W.A., Wilmut I. Sheep cloned by
Repressor-Operator DNA Interactions: Kinetic Analysis by a Surface Plasmon nuclear transfer from a cultured cell line //Nature.- 1996.- N. 6569.- PP. 64-66.
Resonance Biosensor// Analyt. Biochem. -1993. - V . 214.- P. 245-251. 111. Carpenter D. NMDA receptors and the molecular mechanisms of
101. Bonsi P., Cuomo D., De Persis C. et al. Modulatory action of metabotropic excitotoxicity, in Oxidative Stress at Molecular, Cellular and Organ Levels /
glutamate receptor (mGluR) 5 on mGluRl function in striatal cholinergic Eds P. Johnson, A.Boldyrev. Research Signpost, Trivandrum, - 2002.- P.77-88.
intemeurons //Neuropharmacology.- 2005.-V.49.- Suppl.l.- P.104-113.
166 167
112. Chegel V., Shirshov Yu., Avilov S. et al. A novel aldehyde dextran sulfonate 124. Darnell R.B. Onconeural antigenes and the paraneoplastic neurologic
matrix for affinity biosensors //J. Biochem. Biophys. Methods.-2002.-V.50.- disorders: at the intersection of cancer, immunity, and the brain //Proc. Nat.
P.201-216. Acad. Sci. USA.-1996.-Vol.93.-P.4529-4536.
113. Chen R.Z., Petersson U., Beard C. et al. DNA hypomethylation leads to 125. Daumas-Duport C., Scheithauer B., O’Tallon J., Kelly P. Grading of
elevated mutation rates // Nature. - 1998. - V.395, N.6697.- P.89 - 93. satrocytomas. A simple and reproducible method // Cancer (Philad.). - 1988.-
114. Choi D.W., Rothman S.M. The Role of Glutamate Neurotoxicity in Hypoxic- Vol. 62.-P.2152-2165.
Ischemic Neuronal Death //Annu. Rev. Neurosci.-1990.- V.13.- P. 171-182. 126. Dingledine R., Borges K., Bowie D., Traynelis S.F. The glutamate receptor ion
115. Choi D.W. Glutamate neurotoxicity in cortical cell culture is calcium channels //Pharmacol.-Rev.-1999.-V.51.-P.7-61.
dependent //Neurosci. Lett.-1985.-V.58. - P.293-297. 127. Dubinsky J.M., Rothman S.M. Intracellular calcium concentrations during “
116. Clements J.D., Lester R.A.J., Tong G., Jahr C.E., Westbrook G.L. The time chemical hypoxia” and excitotoxic neuronal injury //J. of Neuroscience.-1991.-
course of glutamate in the synaptic cleft // Science.-1992.-V.258. - P.1498- V .ll.- P.2545-2551.
1501. 128. Duesberg P., Rasnick D. Aneyploidy, the somatic mutation that makes cancer a
117. Colotta F., Allavena P., Sica A., Garlanda C., Mantovani A. Cancer-related species of its own // Cell Motility and Cytoskeleton. - 2000. - V. 47. - P. 81 -
inflammation, the seventh hallmark of cancer: links to genetic instability // 107.
Carcinogenesis.-2009.- V.30, No.7.- P. 1073 - 1081. 129. Duesberg P., Rausch Ch., Rasnick D. et al. Genetic instability of cancer cells in
118. Cohnheim I. Vorlesungen uber ellgemine Pathologie // Berlin: Hirschwald.- proportional to their degree of aneuploidy//Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-1998.-
1877-1880. -V .2.-P.691. V.95.-P. 13692- 13697.
119. Cone C.D., Jr. Unified theory on tHe basic mechanism of normal mitotic 130. Dukhanin A.S., Patrashev D.V. Estimation of transmembrane potential of
control and oncogenesis //J, Theoret. Biol.- 1971.-V.30, No.l - P. 151-181. thymic lymphocytes during dexamethasone-induced apoptosis //Bulletin of
120. Coussens L.M., Werb Z. Inflammation and cancer // Nature.-2002.-V.420. - Experimental Biology and Medicine.-1999.-V. 127, Is.l.- P.106-109.
P.860-867. 131. Dunn A. J., Faust J., Krowech G. Evidence on the carcinogenicity of verapamil
121. Crompton M. The mitochondrial permeability transition pore and its role in //OEHHA.-2004.- P.45).
cell death//Biochem. J.-1999.-V.341.-P.233-249. 132. Dvorak H.F. Tumors: wounds that do not heal. Similarities between tumor
122. Crowell J.A., Steele V.E., Sigman C.C., Fay J.R. Is inducible nitric oxide stroma generation and wound healing // New Engl. J.Med.-1986.-V.315.-
synthase a target for chemoprevention? //Mol. Cancer Ther.-2003.-No.2.- P.1650-1659.
P.815-823. 133. Eads C.A., Lord R.V., Kurumboor S.K. et al. Fields of aberrant CpG island
123. Dannenberg A.J., Lippman S.M., Mann J.R. et al. Cyclooxygenase-2 and hypermethylation in Barret’s esophagus and assotiated adenocarcinoma
epidermal growth factor receptor: pharmacologic targets for chemoprevention //Cancer Res.-2000.-V.60.- P.5021-5026.
//J/Clin.Oncol.- 2005. - V.23. - P. 254-266.
168 169
134. Eglitis M.A., Mezey E. Hematopoietic cells differentiate into both microglia 145. Galanis A. et al. Reactive oxygen species and HIF-1 signalling in
and macroglia in the brains of adult mice // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - cancer//Cancer Lett.-2008.-V.266, N1.- P. 12-20.
1997. - N. 94. - P. 4080-4085. 146. Gaus K., Hall E.A.H. Surface plasmon resonance sensor for heparin
135. Eguchi Y., Shimizu S., Tsujimoto Y. Intracellular ATP levels determine cell measurments in blood plasma // Biosensors & Bioelectronics. - 1998. - N. 13.
death fate by apoptosis or necrosis // Cancer Res.-1997.-V.57.- P. 1835-1840. -P.1307- 1313.
136. Emestus R.I., Rohn G.M., Schroder R. et al. Polyamine metabolism in gliomas 147. Globus M.Y.-T., Busto R., Dietrich W.D.et al. Effect of ischemia on the in
//J.Neurooncol.-1996.- V.29, N.2.- P.167-174. vivo release of striatal dopamine, glutamate, and gamma-aminobutyric acid
137. Esteller M. Aberrant DNA methylation as a cancer-inducing mechanism// studied bybintracerebral microdialysis //J.Neurochem.- 1988. -V.51.- P. 1455-
Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol.-2005.-V.45.- P.629-656. 1464.
138. Farrow B., Evers B.M. Inflammation and the development of pancreatic cancer 148. Globus M.Y.—Т., Busto R., Dietrich W.D.et al. Intraischemic extracellular
//Surg. Oncol.-2002.-V. 10.- P.153-169. release of dopamine and glutamate is associated with striatal vulnerability to
139. Filder I.J. et al. The role of the organ microenvironment in the biology and ischemia //Neurosci. Lett. - 1988. - V.91. - P. 36-40.
therapy of cancer metastasis // J.Cell Biochem .-2007.-V .101.-№ 4.- P.927-936. 149. Goossens L., Pommery N., Henichart P.J. COX-2/5-LOX dual acting Anti-
140. Finkelstein J.Z., Ekert H., Isaakcs H.Jr., Higgins G. Bone marrow metastases Inflammatory drugs in cancer chemotherapy // Current Topics in Medical
in children with solid tumors //Am. J.Dis. Child.-1970.-V.119.-P.49. Chemistry.-2007.-V.7, No.3.-P.283 - 296.
141. Fourse S.D., Shen Y. et al. Promoter CpG Methylation contributes to ES cell 150. Gridina N., Dorozinsky G., Khristosenko R., Maslov V., Samoylov A.,
gene regulation in parallel with Oct4/Nanog, PcG complex, and histone H3 Ushenin Yu., Shirshov Yu. Surface Plasmon Resonance
K4/K27 trimethylation//Cell Stem Cells.- 2008 .- V.2.- P.160-169. Biosensor//Sensors&Transducers.- 2013. - V. 149, Issue 2.- PP. 60-68.
142. Friedman J., Shabtai F., Sandowski U., Baharav E., Halbrecht I. Ca antagonist 151. Gurchot Ch. The trophoblast theory of cancer (John Beard, 1857-1924)
verapamil and tumor promoter 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate (TPA) revisited // Oncology.-1975. - V.31, N.5/6.-P. 310-333.
induce chromosomal aberrations in human lymphocytes // Mutat. Res. -1990.- 152. На H.C., Snyder S.H. Poly (ADP-ribose) polymerase-1 in the nervous system
V.244, N2. - P.135-139. //Neurobiol. Dis.- 2000.-V.7, N.4.- P.225-239.
143. Fu Y.S., Lin Y.Y., Chou S.C., et al. Tetramethylpyrazine inhibits activities of 153. Halestrap A.P., McStay G.P., Clarke S.J. The permeability transition pore
glioma cells and glutamate neuroexcitotoxicity: Potential therapeutic complex: another view // Biochimie.-2002.-V.84, N.2-3.- P.153-166.
application for treatment of gliomas //Neuro-0ncology.-2008.- N.10.- P.139- 154. Hansson K.M., Vikinge T.P., Ranby М., Tengvall P., Lundstrom I., Johansen
152. K., Lindahl T.L. Surface plasmon resonance (SPR) analysis of coagulation in
144. Funk C.D. Prostaglandins and leukotrienes: advances in eicosanoid biology whole blood with application in prothrombin time assay // Biosensors &
//Science.-2001.-V.294.- P. 1871 -1875. Bioelectronics. - 1999.- N. 14.- P . 671-682.

170 171
155. Haworth R.A., Hunter D.R. The Ca2+ -induced membrane transition in 165. Illmensee K., Mintz B. Totipotency and normal differentiation of single
mitochondria II. Nature of the Ca2+ trigger site //Archives of Biochemistry and teratocarcinoma cells by injection into blastocysts //Proc. Natl. Acad. Sci.
Biophysics. - 1979. - V.195, N . 2.- P.460-467. USA.-1976.-V.73. - P.549-553.
156. Heimers A. Chromosome aberration analysis in Concorde pilots // Mutat. Res. 166. Ichas F., Mazat J.P. From calcium signaling to cell death: two cobformations
-2000. - V. 467.- P . 1 6 9 - 176. for the mitochondrial permeability transition pore. Switching from low- to
157. Herman J.G., Baylin S.B. Gene Silencing in Cancer in Association with high-conductance state //Biochimica et Biophisica Acta.- 1998.-V.1366, N .l-
Promoter Hypermethylation //The New England Journal of Medicine -2003.- 2,- P.33-50.
V.-349, N. 21.- P. 2042-2054. 167. Issa J.P., Ahuja N., Toyota M. et al. Accelerated age-related CpG island
158. Henderson J.P., Byun J., Williams M.V. et al. Production of brominating methylation in ulcerative colitis //Cancer Res.- 2001.-V.61.- P. 3573 - 3577.
intermediates by myeloperoxidase. A transhalogenation pathwayfor generating 168. Ishiuchi S., Yoshida Y., Sugawara K. et al. Ca2+ - Permeable AMPA
mutagenic nucleobases during inflammation //J. Biol. Chem. -2001.-V. 276. - Receptors Regulate Growth of Human Glioblastoma via Akt Activation //The
P.7867-7875. Journal of Neuroscience.-2007.-V.27, N.30.- P.7987-8001.
159. Hochedlinger K., Jaenisch R. Nuclear transplantation, embryonic stem cells, 169. Itskovitz-Eldor J., Schuldiner М., Karsenti M. et al. Differentiation of human
and the potential for cell therapy. Review //New Engl. J.Med.- 2003. - V. 349. embryonic stem cells into embryoid bodies compromising the three embryonic
- P. 275 - 286. germ layers //Mol. Med.-2000.-V.6.- P.- 88-95.
160. Hodge D.R. et al. Interleukin-6 Supports the Maintenance of p53 Tumor 170. Itzkowitz S.H., Yio X. Inflammation&cancer IV. Colorectal cancer in
Suppressor Gene Promoter Methylation //Cancer Res.-2005.-V.65.- P.4673- inflammatory bowel disease: the role of inflammation // Amer. Gastrointest.
4682. Liver Physiol.-2004.-V.287.- P.G7-G17.
161. Hofseth L.J, Wargovich M.J. Inflammation, Cancer, and Targets of Ginseng 171. James C.D., Collins V.P. Glial tumors //Genetic of nervous system tumors/
//J.Nutr.-2007. -V.137. - P. 183S-185S. Eds: A.J.Levine, H.H.Schmidek.-New-York-Chichester-Brislane-Toronto-
162. Honore Т., 1982] Honore Т., Lauridsen J., Krogsgaard-Larsen P. The binding Singapore: Wiley-Liss., Inc., 1993.-P.241-248.
of [3H] AMP A, a structural analogue of glutamic acid, to rat brain membranes 172. Jang T.J., Kim D.I., Shin Y.M., et al. pl6[INK4a] Promoter hypermethylation
//Journal of Neurochemistry.-1982,- N.I.- P.173-178. of non-tumorous tissue adjacent to gastric cancer is correlated with glandular
163. Hungerford D.A. Leucocytes cultured from small inoculate of whole blood and atrophy and chronic inflammation //Int. J.Cancer.- 2001.- V.93.- P.629 - 634.
preparation metaphase chromosomes by treatment with hypotic KC1 // Stain 173. Jiang X., Tian F., Mearow K. et al. The excitoprotective effect of N-methyl-D-
Techn. - 1965. - Vol. 40. - P. 333 - 338. aspartate receptors is mediated by a brain-derived neurotrophic factor autocrine
164. Hunter D.R., Haworth J.H., Southard J.H. Relationship between configuration, loop in cultured hippocampal neurons //J.Neurochem.-2005.-V.94.- P.713-722.
function, and prrmeability in calcium-treated mitochondria //J. Biol. Chem.- 174. Jiang Y., Jahagirdar B.N., Reinhardt R.L., et al. Pluripotency of mesenchymal
1976.-V . 251.- P.5069 - 5077. stem cells derived from adult marrow // Nature. -2002.-V.418.- P.41-49.
172 173
175. Johnson T.D. Modulation of channel function by polyamines //Trends 186. Kleihues P., Cavenee W.K. Pathology and Genetics Tumours of the Nervous
Pharmacol. Sci.-1996.-V.17.- N.1.-P.22-27. System//Lyon.-2000.- P.9-71.
176. Kalariti N., Pissimissis N., Koutsilieris M. The glutamatergic system outside 187. Komuro H., Rakic P. Modulation of neuronal migration by NMDA receptors
the CNS and in cancer biology // Expert C)pin.Investig.Drugs.-2005.- V.14.- //Science.-1993.-V.260.-P.95-97.
P. 1487-1496. 188. Kudravi S.A., Reed M.J. Aging, cancer, and wound healing //In vivo.-2000.-
177. Kambhampati D.K, Knoll W. Surfase-plasmon optical techniques // Curr. V.14.-P.83-92.
Opin. in Colloid &Interface Sci. -1999. - N . 4. - P. 273-280. 189. Kunert-Radek J., Stepien H., Radek A. et al. Inhibitory effect of calcium
178. Kanai Y., Ushijima S., Tsuda H. et al. Aberrant DNA methylation precedes channel blockers on proliferation of human glioma cells in vitro //Acta
loss of heterozygosity on chromosome 16 in chronic hepatitis and liver Neurologica Scandinavica.-2009.-V.79, N.2. - P. 166-169.
cirrhosis //Cancer Lett.-2000.-V. 148,- P.73-80. 190. Lapidus R.G., Sokolov P.M. The mitochondrial permeability transition.
179. Kanai Y. Alterations of DNA methylation and clinicopathological diversity of Interactions of spermine, ADP and inorganic phosphate //J. Biological Chem.-
human cancers //Pathology Intemational.-2008.-V.58, N.9.- P.544-558. 1994.-V. 269.-P . 1-6.
180. Kang G.H., Lee H. J., Hwang K.S. et al. Aberrant CpG island hypermethylation 191. Laube B., Kuhse J., Betz H. Evidence for a tetrameric structure of recombinant
of chronic gastritis, in relation to aging, gender, intestinal metaplasia, and NMDA receptors // J. Neurosci.-1998.-V.18.- P.2954-2961.
chronic inflammation// Am. J. Pathol.-2003.-V. 163.- P.1551-1556. 192. Leist М., Single B., Castoldi A.F., et al. Intracellular adenosine triphosphate
181. Kim D.Y., Kim S.H., Choi H.B. et al. High abundance of GluRl mRNA and (ATP) concentration: a switch in the decision between apoptosis and necrosis
reduced Q/R editing of GluR2 in individual NADPH-diaphorase neurons //J. Exp. Med.-1997.-V.185.- P.1481-1486.
//Mol. Cell. Neurosci.-2001.-V.17, N.6.- P.1025-1033. 193. Lemasters J.J., Nieminen A.L., Qian Т., Trost L.C. et al. The mitochondrial
182. Kim J.-S., He L., Lemaster J.J. Mitochondrial permeability transition: a permeability transition in cell death: A common mechanism in necrosis,
common pathway to necrosis and apoptosis // Biochemical and Biophysical apoptosis and autophagy //Biochimica et Biophysica Acta.- 1998. - V. 1366.
Research Communications.-2003.-V.304.- P. 463-470. N. 1-2.- P.177-196.
183. Kim J., Kim J.-Y., Issa J.-P. J. Aging and DNA Methylation // Current 194. Levitzky М., Yamanaka S. Reprogramming somatic cells toward pluripotency
Chemical Biology.-2009.-V.3.- P. 321-329. by defined factor. Review // Current Opinion Biotechnology.-2007,- V.18.-
184. Kimura H, Ng JMY, Curran Т.: Transient inhibition of the Hedgehog pathway P.467-473.
in young mice causes permanent defects in bone structure // Cancer Cell - 195. Liedberg B., Nylander C., Lundstrom I. Biosensing with surface plasmon
2008.-V. 13. - PP. 249-260. resonance - how it all started // Biosens. Bioelec. - 1995. -N . 10.- P. 1-10.
185. Kimura H, Ng JMY, Curran Т.: Transient inhibition of the Hedgehog pathway 196. Liotta L.A., Kohn E. The environment of the tumor-host interface // Nature.-
in young mice causes permanent defects in bone structure // Cancer Cell - 2001.-V.411.- P.375-379.
2008.-V.13.-PP. 249-260.
174 175
197. Liu Y.C., Huang H. Involvement of calcium-depenent protein kinase С in 208. Miller L.S., Morita Y., Rangan U., Kondo S., Clemens M.G., Bulkley G.B,
arsenite-induced genotoxicity in Chinese hamster ovary cells //J. Cell Suppression of cytokine-induced neutrophil accumulation in rat mesenteric
Biochem.-1997.-V.64, N. 3.- P.423-433. venules in vivo by general anesthesia //International Journal oi
198. Lowry W.E., Richter L., Yachechko R. et al. Generation of human induced Microcirculation, Clinical and Experimental.-1996.-V.16.- P. 147-154.
pluripotent stem cells from dermal fibroblasts // PNAS.-2008.-V.105.- P.2883- 209. Mintz B., Illmensee K. Normal genetically mosaic mice produced from
2888. malignant teratocarcinoma cells //Proc. Nat. Acad. Sci. USA.-1975.-V.72,
199. Lund-Johansen М., Bjerkvig R , Humphrey P.A. et al. Effect of epidermal N.9.- P.3585-3589.
growth factor on glioma cell growth, migration, and invasion in vitro //Cancer 210. Mitelman F. Clinical impact of solid tumor cytogenetic // Int. J. Oncology. -
Res. - 1990. - N. 50. - P. 6039-6044. 1997.-V o l. 11.- P . 110.

200. Lyons S.A., Chang W.J., Weaver A.K. et al. Autocrine Glutamate Signaling 211. Monakhov A. V. Semiglazov V., Bregneva T. Cytogenetic markers in 100 %
Promotes Glioma Cell Invasion // Cancer Res. - 2007.—V.67.- P. 10624. of blood lymphocytes in three members of the family with high predisposition
201. Maherali N., Sridharan R., Xie W. et al. Global epigenetic remodeling in to cancer development // J. Exp. Clin. Cancer Res. - 1995. - Vol. 14. - P. 265
directly reprogrammed fibroblasts // Cell Stem Cell.-2007.- V.I.- P.55-70. -2 6 9 .

202. Manev H., Favaron М., Guidotti A., Costa E. Delayed increase of Ca2+ influx 212. Monakhov A., Gulyaev A. et al. Medicogenetic and cytogenetic study of a
elicited by glutamate: role in neuronal death //Molecular Pharmacology.-1989,- family with high predisposition to malignant diseases in gastrointestinal tract

V.36, N.1.-P.106 -112. // J. Exp. Clin. Cancer Res. - 1997. - Vol. 16. - P. 385 - 388.

203. Mantovani S.E.A. et al. Tumour immunity: effect response to tumour and role 213. Monk М., Holding C. Human embryonic genes re-expressed in cancer cells
of the microenvironment // Lancet.-2008.-V.371(9614).- P.771-783. //Oncogene.-2001.-V.20,- P.8085-8091.

204. Mantovani A., Allavena P., Sica A. et al. Cancer-related inflammation 214. Mueller-Klieser W. Multicellular spheroids, a review on cellular aggregates in

/Nature.-2008.- V.454.- P.436-444. cancer research //J.Cancer Res. and Clin. Oncol.-1987.-V.l 13, N.2.- P.101-

205. Mason R.P. Effect of calcium channel blockers on cellular apoptosis: 122.

implications for carcinogenic potential //Cancer.-1999a.-V.85.-N.10.-P.2093- 215. Nito S. Enhancement of cytogenetic and cytotoxic effects on multidrug-

2102 . resistant (MDR) cells by a calcium antagonist (verapamil) //Mutant Res V.227.

206. McBain C.J., Mayer M.L. N-methyl-D-aspartic acid receptor structure and N.2.- P.73-79.

function // Physiol. Rev. - 1994. - Vol. 74, N 3. - P. 723-760. 216. Niwa H. Molecular mechanism to maintain stem cell renewal of ES cells //

207. McShane L.M., Altman D.G., Sauerbrei W. Identification of clinically useful Cell Str.& Func.-2001.- V.26.- P.137-148.

cancer prognostic factors: what are we missing? //J. Natl. Cancer. Inst-2005.- 217. Niwa H., Miyazaki J., Smith A. Quantitative expression of Oct-3/4 defines

V.97.- P.1023-1025. differentiation, dedifferentiation or self-renewal of ES-cells //Nat. Genet.-


2000.-V.24.-P.372-376.
176 177
218 Nogueira L. et al. Blockade of the NF kB pathway drives differentiating 228. Penney D.G., Chen К. NMDA receptor-blocker ketamine protects during acute
glioblastoma-initiating cells into senescence both in vitro and in carbon monoxide poisoning, while calcium channel-blocker verapamil does
vivo//0ncogene.-2011.-V.30, No.32.-PP.3537-3548. not. //Journal of applied toxicology.-1996.-V. 16, N.4.- P.297-304.
219. Nowak L., Bregestovski P., Ascher P. et al. Magnesium gates glutamate- 229. Pesce М., Scholer H. Oct4: gatekeeper in the beginnings of mammalian
activated channels in mouse central neurones // Nature. - 1984. - Vol. 307, N development//Stem Cells.-2001.-V.19.- P.271-278.
5950.- P . 462-465. 230. Pesce М., Scholer H. Oct4: control of totipotency and germline determination
220. Novgorodov S.A., Gudz T.I., Brierley G.P., Pfeiffer D.R. Magnesium ion //Mol.Rep. Dev.-2000.-V.55,- P.452-457.
modulates the sensitivity of the mitochondrial permeability transition pore to 231. Pierce, G.B. & Wallace, C. Differentiation of malignant to bening cells
cyclosporine A and ADP //Archives of Biochemistry and Biophysics.-1994.- //Cancer Research.-1971.-Vol. 31.- PP. 127-134.
V.311, N.2.- P.219-228. 232. Pierce, G.B. & Speers, W.C. Tumors as caricatures of the process of tissue
221. Okita K., Ichisaka Т., Yamanaka S. Generation of germline-competent induced renewal: prospects for therapy by directing differentiation// Cancer Research.-
pluripotent stem cells without Мус from mouse and human // Nature 1988,- Vol. 48,- PP. 1996-2004.
Biotechnology.-2008.-V.26. - P .l01-106. 233. Pierce, G.B. & Vemey, E.L. (1961). An in vitro and in vivo study of
222. Okutsu S., Hatakeyama H., Kanzaki М., Tsubokawa H., Nagatomi R. Electric differentiation in teratocarcinomas// Cancer Research.-1961.- Vol. 14.-PP.127-
pulse stimulation induces NMDA glutamate receptor mRNA in NIH3T3 134.
mouse fibroblasts //Tohoku J.Exp.Med.- 2008. - V.215, N.2.- P.181-187. 234. Pierce G.B. Teratocarcinoma //Cancer markers.-Clifton; New Jercy:
223. Olney J.W. Brain lesions, obesity, and other disturbances in mice treated with HUMANA press, 1980.- P. 1-36.
monosodium glutamate //Science.-1969.- V.164 (880).- P.719-721. 235. Piscevic D., Lawall R., Veith М., Liley М., Okahata Y., Knoll W.
224. Palmer G.C. Neuroprotection by NMDA-receptor antagonists in a variety of Oligonucleotide hybridization observed by surface plasmon optical techniques
neuropathologies //Curr. Drug. Targets.-2001.-V.2, N.3.- P.241-271. // Appl.Surf. Sci. - 1995. - N. 90. - P. 425-436.
225. Park I.H., Zhao R., West J. et al. Reprogramming of human somatic cells to 236. Pogribny I.P., Poirier L.A., James S.J. De novo methylation of the pl6INK4A
pluripotency with defined factors // Nature.-2008.-V.451.- P.141-147. gene in early preneoplastic liver and tumors induced by folate / methyl
226. Parsons C.G.,Danysz W., Bartmann A., Spielmanns et al. Amino-alkyl- deficiency in rats //Cancer Letters. -20002.-V.187, N.1-2.-P.69-75.
cyclohexanes are novel uncompetitive NMDA receptor antagonists with strong 237. Potter V.R. Recent trends in cancer biochemistry: the importance of studies on
voltage-dependency and fast blocking kinetics: in vitro and in vivo fetal tissue //Canad. Cancer Conf.-1968.- N8.-P. 9-30.
characterization //Neuropharmacology.-1999.-V.38.- P.88-108. 238. Pozzan Т., Rizzuto R. The renaissance of mitochondrial calcium transport II

227. Paterlini М. Комбинированное лечение химиорезистентных опухолей/ЛЬе Europ. Journal of Biochemistry.-2000.-V.267, N.17.-P. 5269-5273.
LANCET Oncology. - 2008. - №2. -С . 10-11. 239. Radjagopalan H., Lengauer C. Aneuploidy and cancer. // Nature. - 2004. - V.
432.- P . 338-341.
178 179
240. Reddy В.S., Simi В., Patholla J et al. Chemoprevention of colon cancer by 249. Savaskan N.E., Seufert S., Hauke J., Trankle C., Eyupoglu I.Y., Hahnen E
Celecoxib in combination with omega-3 fetty acid rich diet: Strategies to Dissection of mitogenic and neurodegenerative actions of cystine am
improve the clinical efficacy of celective COX-2 inhibitors //Proc.Amer. glutamate in malignant gliomas //Oncogene.-201 l.-V. 30.-PP.- 43-53.
Assoc.Cancer Res. -2005.-V.46.- P.582. 250. Scheid W., Oppermann B., Traut H. The cytogenetic efficiency of thi
241. Rengevich O.V., Shirshov Y.M., Ushenin Y.V., Beketov A.G. Separate antitumor agents bleomycin and peplomycin is enhanced by the heart druj
determination of thickness and optical parameters by surface plasmon verapamil (isoptin) // Experientia . - 1984.-V.40, N7.- P.746-747.
resonance: accuracy consideration // Semiconductor physics, quantum 251. Schetter A.J., Heegaard N.H.H., Harris C.C. Inflammation and cancer
electronics and optoelectronics. - 1999. - Vol.2,№2. - P.28-35. interweaving microRNA, free radicak, cytokine and p53 pathways /
242. Reya Т., Morrison S.J., Clarke M.F., Weissman I.L. Stem cells, cancer, and Carcinogenesis. -2010.-V.31, No.l.- P. 37-49.
cancer stem cells //Nature.- 2 0 0 1 N.414 - P. 105-111. 252. Schmidt W.F., Huber K.R., Ettinger R.S., Neuberg R. W. Antiproliferativ<
243. Richter C., Schweizer М., Cossarizza A., et al. Control of apoptosis by the effect of verapamil alone on brain tumour cells in vitro// Cancer Res.-1988.
cellular ATP level //FEBS Lett.-1996.-V.378.- P.107-110. V.48. -P.3617-3621.
244. Rock D.M., MacDonald R.L. Spermine and relative polyamines produce a 253. Schmid-Schonbein H., Barcard B., Hilbrand E. Erythrocyte aggregation
voltage-dependent reduction of N-methyl-D-aspartate receptor single-channel causes, consequences and methods of assesment // Tijdschr. NVKC. - 1990-
conductance // Mol. Pharmacol.-1992.-V.42. - P.157-164. Vol. 1 5 .-P. 88-97.

245. Rock D.M., MacDonald R.L. Polyamine Regulation of N-Methyl-D-aspartate 254. Scholer H., Ruppert S., Suzuki N., Chowdhury K., Grass P. New type of POL
Receptor Channels //Annual Rewiew of Pharmacology and Toxicology.-1995.- domain in germ line-specific protein Oct4 // Nature. -1990.-V.344. - P.435'

V.35.- P.463-482. 439.

246. Rogawski M.A. Therapeutic potential of excitatory amino acid antagonists: 255. Scholer H. Octamnia: the POU factors in murine development //Trends Genet-
channel blockers and 2,3-benzodiazepines //Trends Pharmacol. Sci.-1992.- 1991.-V.7.- P.323-329.

V.14.- P.325-331. 256. Schwartsburd P.M. Chronic inflammation as inductor of pro-cancel

247. Sakai Т., Ichiyama Т., Whitten C.W., Giesecke A.H., Lipton J.M. Ketamine microenvironment: Pathogenesis of dysregulated feedback control // Cancer &
suppresses endotoxin-induced NF-kappa|3 expression //Can. J. Anaesth.-2000.- Metastasis Reviews.-2003.-V.22.- P.95-102.

V.47, N.10.-P.1019-1024. 257. Schwartsburd P.M. Age-promoted creation of procancer microenvironment Ъу

248. Salvati М., Caroli E., Rocchi G., Frati A., Brogna Ch., Orlando E.R. Post- inflammation: Pathogenesis of disregulated feedback control //Mech. Aging

traumatic glioma. Report of four cases and review of the literature // Tumori.- Develop.-2004.-V. 125.- P.581-590.

2004.-V.90.- P.416-419. 258. Semenza G.L. HIF-1 and tumor progression: pathophysiology and therapeutics
// Trends Mol.Med.-2002.~ V.8.- P.562-567.

180 181
259. Sen S. Aneuploidy and cancer // Curr. Opinion Oncology. - 2000. - V. 12. - P. 269. Solinas G., Germano G., Mantovani A., Allavena P. Tumor-associat<
8 2 -8 8 . macrophages (TAM) as major players of the cancer-related inflammatic
260. Shacter E., Thun M. Chronic Inflammation Linked to Cancer // Oncology - //Journal of Leukocyte Biology -2009. - V . 86. - P. 1065-1073.
2002.-V. 16.-N0.2 - P.217-229. 270. Soybir G., Koksoy F., Koyuncu H., Yalcin O., Kose H., Topuzlu (
261. Shapira Y J. , Lam A.M., Eng C.C., Lahoaprosit V., Michel M. Therapeutic Chemoprevention of DMBA-induced mammary gland carcinogenesi
time window and dose-response of the beneficial effects o f ketamine in preventive effects of free oxygen radical scavengers //Brest Cancer Res. Treal
experimental head injury //Stroke.- 1994,- V.25.- P. 1637-1643. 1998.-V.50, N 2.- P.193-199.
262. Shen L., Ahuja N., Shen Y. et al. DNA methylation and environmental 271. Stenvinkel P., Karimi М., Johansson S. et al. Impact of inflammation с
exposures in human hepatocellular carcinoma //J. Natl. Cancer Inst.- 2002. - epigenetic DNA methylation - a novel risk factor for cardiovascular disease
V.94.- P.755-761. //J. Intern. Med.-2007.-V.261,- P.488-499.
263. Shimaoka М., Iida Т., Ohara A., Taenaka N., et al. Ketamine inhibits nitric 272. Sucher N.J., Awobuluyi М., Choi Y.B., Lipton S.F. NMDA receptors: froi
oxide production in mouse-activated macrophage-like cells //Br. J. Anaesth.- genes to channels // Trends Pharmacol. Sci.- 1996.- V.17.- P.348-355.
1996.-V.77, N.2.-P.238-242. 273. Sugiyama H., Ito I., Hirono C. A new type o f glutamate receptor linked t
264. Shureiqi I., Chen D., Lee J.J. et al. 15-LOX-l: a novel molecular target of inositol phospholipid metabolism //Nature.-1987.-V.325, N.6104.- P.531-533.
nonsteroidal anti-inflammatory drug-induced apoptosis in colorectal cancer 274. Surani M.A., Hayashi K., Hajkova P. Genetic and epigenetic regulators с
cells //J. Natl. Cancer Inst.-2000.-V.92.-P.l 136-1142. pluripotency. Review// Cell.-2007.-V.128.- P.747-762.
265. Skeberdis V.A.,Lan J., Opitz T. et al. “mGluRl-mediated potentiation of 275. Sutherland R.M., Durand R.E. Growth and cellular characteristics o f multice
NMDA receptors involves a rise in intracellular calcium and activation of spheroids //Recent Results Cancer Res.-1984.-V.95.- P.24-49.
protein kinase С //Neuropharmacology.-2001.-V.40, N.7.- P.856-865. 276. Sutherland R.M. Cell and environment interactions in tumor microregions: Th
266. Slamon D.I., Cline M J. Expression of cellular oncogenes during embryonic multicell spheroid model //Science.-1988.-V.240, N.4849.- P.177-184.
and fetal development of the mouse //Proc. Nat. Acad. Sci USA.-1984.-V.81, 277. Suzuki H., Toyota М., Kondo Y., Shinomura Y. Inflammation-Relate
N.22.- P.7141-7145. Aberrant Patterns o f DNA Methylation: Detection and Role in Epigeneti
267. Slattery M.L., Fitzpatrick. Convergence of Hormones, Inflammation, and Deregulatiopn of Cancer Cell Transcriptome //Methods in Molecular Biology,
Energy-Related Factors: A Novel Pathway of Cancer Etiology // Cancer 2009.-V.512.-P. 55-69.
Prevention Research.-2009.- N.2.- P. 922. 278. Taipale J., Beachy P. A.The Hedgehog and Wnt signalling pathways i
268. Snyder S.H., Shaskan E.G., Harik S.I. Poliamine disposition in central nervous cancer//Nature.-2001.- V. 411.- PP. 349-354.
system //Poliamine in normal and neoplastic growth / Ed.D.H.Russell.-New 279. Takahashi K., Yamanaka S. Induction of pluripotent stem cells from mous

York Raven Press, 1973.- P.199-213. embryonic and adult fibroblast cultures by defined factors //Cells.-2006
V.126.- P.663-676.
182 183
280. Takahashi К., Yamanaka S., Tanabe K. et al. Induction of pluripotent stem 290. Vane J.R., Mitchell J.A., Appleton L. et al. Inducible isoform <
cells from adult human fibroblasts by defined factors //Cell.-2007.-V.131.- cyclooxygenase and nitric-oxide synthase in inflammation // Ibid.-1994.-V.91
P.861-872. P. 2046-2050.
281. Takano Т., Lin J.H.C., Arcuino G. et al. Glutamate release promotes growth of 291. Van Nguyen Т., Kobierski L., Comb М., Hyman S.E. The effect <
malignant gliomas //Nat. Med.-2001.-V.7.- P.1010-1015. depolarization on expression of the human proenkephalin gene is synergist
282. Takenaka I., Ogata М., Koga K., et al. Ketamine suppresses endotoxin-induced with cAMP and dependent upon a cAMP-inducible enhancer//The Journal ■
*
tumor necrosis factor alpha production in mice //Anesthesiology.-1994.-V.80.- Neuroscience.-1990.-V. 10, N8.-P.2825-2833.
P.402.-408. 292. Van Vuurden D.G., Yazdani M, Bosma I. et al. Attenuated AMPA Recepti
283. Talbot NC, Garrett WM. Ultrastructure of the embryonic stem cells of the 8- Expression Allows Glioblastoma Cell Survival in Glutamate-Ri<
day pig blastocyst before and after in vitro manipulation: development of Environment // PLoS One.-2009.-V.4, N.6.- P.5953.
junctional apparatus and the lethal effects of PBS mediated cell-cell 293. Vereschagin E.I. Method of Brain Protection and Treatment of Apall
dissociation.// AnatRec. 2001.-V. 264,N .I.-PP. 101-113. Syndrome //The Immune Consequences of Trauma, Shock and Sepsis
284. Tiedemann H., Asashima М., Grunz H., Knochel W. Pluripotent cells (stem Munich, 2000,- P.55-60.
Cells) and their determination and differentiation in early vertebrate 294. Wallace H.M., Fraser A.V., Hughes A. A perspective of polyamii
embryogenesis //Dev. Growth Differ. -2001.-V. 43.- P.469-502. metabolism //Biochem. J. -2003.-V.376 (Pt.l).- P.l-14.
285. Touru N., Tetsuya Т., Takeshi T. et al. Inflammatory processes triggered by 295. Wemig М., Meissner A., Foreman R. et al. In vitro reprogrammed fibroblas
Helicobacter pylori infection cause aberrant DNA methylation in gastric have a similar developmental potential as ES cells and an ES cell-lil
epithelial cells //Cancer Res.-2010.-V.70, N.4.-P. 1430-1440.[264]. epigenetic state //Nature.-2007.-V.448.- P.318-324.
286. Toyota М., Issa J.-P.J. CpG island methylator phenotypes in aging and cancer 296. Westemgren A. Studies on the suspension stability of the blood in pulmonai
//Sem. Cancer Biol.-1999.-V.9.- P.329-357. tuberculosis // Med. Scand. - 1921. - V. 54. - P. 247-281.
287. Valinluck V., Tsai H.H., Rogstad D.K. et al. Oxidative damage to methyl-CpG 297. Whitcomb D.C. Inflammation and Cancer V. Chronic pancreatitis ar
sequences inhibits the binding of the methyl-CpG binding domain (MBD) of pancreatic cancer // Am. J.Physiol. Gastrointest Liver Physiol.-2004.-V.28'
MeCP2 //Nucleic Acids Res. -2004.-V.32.- P.4100-4108. P.G315-G319.
288. Valinluck, Sowers L.C. Inflammation-Mediated Cytosine Damage: a 298. Whiteman М., Jenner A., Halliwell B. Hypochlorous acid-induced ba
Mechanistic Link between Inflammation and the Epigenetic Alterations in modifications in isolated calf thymus DNA //Chem. Res. Toxicol.-1997.-V. 1(
Human Cancers //Cancer Res.-2007.-V.67, N. 12,- P.5583-5586. P. 1240-1246.
289. Valinluck V., Sowers L.C. Endogenous cytosine damage products alter the site 299. Williams K., Zappia A.M., Pritchett D.B., Shen Y.M., Molinoff P.]
selectivity of human DNA maintenance methyltransferase DNMT1 //Cancer Sensitivity of the N-methyl-D-aspartate receptor to polyamines is controlled 1
Res.-2007.-V.67.-P.946-950. NR2 subunits //M ol. Pharmacol.-1994.-V.45.-N.5.- P.803-809.
184 185
Нина Яковлевна Гридина окончила Киевск
300. Wilmut, I., Schnieke, A.E., McWhir, J., Kind, A.J., Campbell, K.H.S. Viable медицинский институт им. А.А. Богомольца
offspring derived from fetal and adult mammalian cells // 1997.- N. 6619.- PP. 1976 году. После его окончания работала
Институте проблем онкологии, где в 1980 гс
810— 813. защитила кандидатскую диссертацию в облас
301. Wobus A.M., Boheler K.R. Embryonic stem cells: prospects for developmental онкологии. С 1992 года и по настоящее вре
работает в Институте нейрохирургии им. ак
biology and cell therapy. Review //Physiol. Rev.-2005.-V.85.-P.635-678. А.П. Ромоданова НАМН Украины в должное
302. Wood G.W., Morantz R.A.: In vitro reversal of depressed T-lymphocyte зав. лабораторией экспериментальной ней)
хирургии. Является автором 2 монографий, 6 o j
function in the peripheral blood of brain tumor patients //J.Natl. Cancer Inst.- 200 научных статей и патентов.
E-mail: gridinanina@ukr.net
1982.-V.68, Nl.-PP. 27-33.
303. Wu A., Wei J., Kong L.-Y., Wang Y., Priebe W. et al. Glioma cancer stem
cells induce immunosuppressive macrophages/microglia//Neuro-Oncology.- Юрий Валентинович Ушенин в 1971 году оконч
физический факультет Киевского Государственнс
2010.-V.12, N .ll.- PP.1113 - 1125. университета, получив специальность "Оптическ
304. Xie Ch.-hui, Naito A., Mizumachi Т., Evans T.T., et al. Mitochondrial приборы и спектроскопия". С 1973 г. работает
Институте физики полупроводник
regulation of Cancer Assotiated Nuclear DNA Methylation //Biochem. им. В.Е Лашкарёва НАН Украины в должное
Biophys. Res. Commun.-2007.-V.364, N.3.- P.656-661. старшего научного сотрудника. В последние го,
разработал конструкции и изготовил 10 тип
305. Yamanaka S. Strategies and new developments in the generation of patients- сенсоров на основе эффекта поверхностнс
specific pluripotent stem cells. Review //Cell Stem Cells.-2007.-V.l.- P.39-49. плазмонного резонанса. Автор 40 статей и
патентов.
306. Yamanaka Y., Ralston A., Stephenson R.O., Rossant J. Cell and molecular E-mail: ushyury@mail.ru
regulation of the mouse blastocyst // l5ev. Dyn. -2006.-V.235. - P.2301-2314.
307. Ye Z.C., Sontheimer H. Glioma cells release excitotoxic concentrations of Владимир Петрович Маслов в 1969 году оконч
glutamate //Cancer Res.-1999.-V.59.- P.4383-4391. Московский инженерно-физический институт,
1973г. защитил кандидатскую диссертацию, а
308. Yu J., Vodyanik M.A., Thomson J.A. Induced pluripotent stem cell lines 2008 г. докторскую диссертацию. В настояш
derived from human somatic cells //Science.-2007.- V.318.- P.1917-1920. время занимает должность заведующего отдел»
Института физики полупроводников им. В.
309. Zakir Hossain S.M., Shinohara H., Kitano H. Drug Assessment Based on Лашкарёва НАН Украины. Заслужены
изобретатель Украины, Лауреат государственн
Detection of L-Glutamate Released from C6 Glioma Cells Using an Enzyme-
премии Украины в области науки и техники.
Luminescence Method //Anal. Chem.-2008.-V.80, N.10.- P. 3762 - 3768. E-mail: vladmaslov@mail.ru

187

186