Открыть Электронные книги
Категории
Открыть Аудиокниги
Категории
Открыть Журналы
Категории
Открыть Документы
Категории
УДК 573.4; 574.6; 577.1; 577.2; 577.3; 577.4; 581.5; 591.1; 631.4
ISBN 978-5-9903901-3-3
Пущино, 2013
Микробиология и вирусология
3
Микробиология и вирусология
при острой форме кишечной инфекции и у реконвалесцентных сальмонеллезных
бактерионосителей.
Распространенность известных генов секретируемых ингибиторов лизоцима: хромосомных
гомологов ivyC E. coli и K. pneumoniae, хромосомного гомолога pliC S. enterica и плазмидного
гомолога pliC K. pneumoniae, выявлялась методом ПЦР. Определение антилизоцимной активности
проводилось чашечным методом (Бухарин О.В., 1999). Лизоцимрезистентность определялась в
среде LB с добавлением динатриевой соли ЭДТА (Hiroshi N., 2003).
Показано, что хромосомные гены ivyC E.coli и pliC S.enterica имеются у всех исследованных
штаммов данных видов. Распространенность их гомологов у K. pneumoniae вариабельна:
хромосомный ген ivyC выявлен в 89,5% случаев и ген pliC, локализованный в мегаплазмиде
вирулентности определялся у 20% ivyC-позитивных штаммов.
Высокий уровень антилизоцимной активности (свыше 4 мкг/мл) стабильно выявлялся только у
штаммов клебсиелл, несущих ген pliC плазмидной локализации, штаммы сальмонелл-носителей
хромосомного гомолога pliC демонстрировали высокую вариабельность данного признака.
Уровень антилизоцимной ативности у штаммов E.coli и K. pneumoniae, не содержащих ген pliC, не
превышал 3 мкг/мл. Показано, что уровень лизоцимрезистентности всех штаммов вида K.
pneumoniae более чем в два раза превосходил МПК лизоцима, определенную у S. enterica и E. coli,
у которых данный показатель составил в среднем 0,1 мг/мл.
Таким образом, установлено, что высокий уровень антилизоцимной активности ассоциируется
с присутсвием гена pliC, но не лидирует в обеспечении лизоцимрезистентности энтеробактерий.
7
Микробиология и вирусология
БАКТЕРИЦИДНОЕ ДЕЙСТВИЕ ЭКСТРАКТА
FILIPENDULA ULMARIA (L.) MAXIM.
Башилов А.В.1, Мурылева Е.В.2, Линник И.А.2, Шутова А.Г.1
1
Центральный ботанический сад НАН Беларуси, 2Белорусский государственный
педагогический университет им. М.Танка, Минск (Беларусь)
anton.bashilov@gmail.com
Цель работы: изучить БД экстракта Filipendula ulmaria (L.) Maxim. на примере 5 культур
микроорганизмов.
Материалы и методы. Объект исследования: воздушно-сухое сырье соцветий Filipendula
ulmaria (L.) Maxim. (таволга вязолистная). Растение культивировалось в коллекции Центрального
ботанического сада НАН Беларуси, 2012 г.
Получение экстракта: 1 г растительного сырья помещали в колбу и прибавляли 8 мл
дистиллированной воды, после чего присоединяли к дефлегматору и нагревали на кипящей
водяной бане в течение 30 мин. Полученные экстракты охлаждали до комнатной температуры и
фильтровали.
Скрининг БД: проводили путем диффузии экстрактивных веществ в агар на питательной
среде. В эксперименте использовали 5 культур микроорганизмов: Sarcina lutea, Bacillus
subtilis, Bacillus polymixa, Pseudomonas putida, Pseudomonas fluorescens. Посев осуществляли
сплошным газоном. На бумажные диски диаметром 8 мм наносили по 10 мкл экстракта
(повторность четырехкратная), контроль – стерильная вода. Культивирование проводили при
комнатной температуре 4 суток. БД определяли в сравнении степени ингибирования роста
бактериальных культур в присутствии и в отсутствии экстрактов (контроль), выражали в %.
Результаты и их обсуждение. Установлено, что водный экстракт Filipendula ulmaria (L.)
Maxim. оказал БД в отношении всех использованных в эксперименте культур микроорганизмов:
Sarcina lutea, Bacillus subtilis,Bacillus polymixa, Pseudomonas putida, Pseudomonas fluorescens. БД
выявлено в большей степени для грамположительных бактерий и максимально выражено для
Bacilluspolymixa – 80%. Наиболее устойчивой к БД растительного экстракта оказалась
грамотрицательная группа микроорганизмов, а именно Pseudomonas putida и Pseudomonas
fluorescens – 20% и 30% соответственно. Уровень БД по отношению к Sarcina lutea и Bacillus
subtilis был примерно одинаковым для обеих бактериальных культур и в среднем составил 55%.
Таким образом, экспериментально установлено БД водного экстракта Filipendula ulmaria (L.)
Maxim. БД растительного экстракта выражено в различной степени, но в наибольшей для
грамположительных культур микроорганизмов. Полученные данные позволят дать некоторую
оценку БД лекарственных форм Filipendula ulmaria (L.) Maxim., а также в дальнейшем расширить
ассортимент лекарственных средств БД на основе отечественного растительного сырья.
14
Микробиология и вирусология
ИЗУЧЕНИЕ СОСТАВА ЭПИФИТНОЙ МИКРОБИОТЫ НЕКОТОРЫХ ОВОЩНЫХ
КУЛЬТУР И ТРАВ ТАМБОВСКОЙ И МОСКОВСКОЙ ОБЛАСТЕЙ
Приходько С.И.
РГАУ - МСХА им. К.А.Тимирязева, Москва (Россия)
heven2289@gmail.com
Для изучения состава эпифитных микроорганизмов, мы отобрали следующие растения:
капуста (цветная и белокочанная), кукуруза, укроп, салат; люцерна, клевер, осот. Для получения
культур бактерий мы использовали питательные среды YDC и капустный агар. Далее проводилось
выделение ДНК и постановка классической ПЦР с использованием универсальных бактериальных
праймеров с последующей детекцией ампликонов гельдокументирующей системой, определение
нуклеотидных последовательностей гена 16S рРНК на автоматическом секвенаторе. На основе
анализа полученных данных можно сказать, что микробиота филлосферы исследованных растений
представлена следующими микроорганизмами: Bacillus (B. megaterium, B. thuringiensis, B. mycoides,
B. subtilis), Micrococcus (M. flavus, M. luteus), Curtobacteriumflaccumfaciens, Pseudomonas putida,
Lysinibacillus sp.,Enterobacter cloacae.
С образцов из Московской области больше изолировано бактерий рода Bacillus, а с образцов
из Тамбовской области бактерий рода Pseudomonas. Капуста раннеспелая отличается большим
биоразнообразием микробного сообщества, нежели капуста позднеспелая. Поверхность листьев
кукурузы и трав в меньшей степени обсеменены микроорганизмами. Нам удалось изолировать
единичные штаммы с данных образцов.
С образцов молодых листьев капусты белокочанной из Тамбовской области на капустном
агаре были выделены 9 штаммов: Bacillus (B.safensis, B.pumilus), Enterobacter cloacae,
Agrobacterium tumefaciens. На старых нами было изолирован 21 штамм: Bacillus (B.megaterium,
B.pumilus, B.subtilis,B.licheniformis), Enterobacter cloacae,Curtobacterium flaccumfaciens,
Frigoribacterium sp. Штаммы бактерий, полученные с образцов молодых листьев капусты
белокочанной Московской области: Bacillus (B. pumilus, B. cereus), Micrococcus luteus,
Microbacterium (М.yannicii, М.laevaniformans, М.barkeri). Общее количество штаммов - 14. С
образцов старых листьев капусты белокачанной: Microbacterium barkeri, Bacillus pumilus. Общее
количество штаммов - 10. Штаммы бактерий, полученные на среде капустный агар, с образцов
сорного растения осот полевой: Achromobacter sp., Enterobacter cloacae, Bacillus subtilis. Общее
количество штаммов - 3. Более молодые листья одного и того же растения в меньшей степени
колонизированы микроорганизмами, нежели старые, что ярко выражено на примере образцов из
Тамбовской области.
16
Микробиология и вирусология
АДАПТАЦИЯ ШТАММА PSEUDOMONAS STUTZERI КОС6 К АНТРОПОГЕННЫМ
УСЛОВИЯМ ОБИТАНИЯ
Закирова Я.Н., Девятияров Р.М., Лайков А.В., Григорьева Т. В.
Казанский (Приволжский) федеральный университет, Казань (Россия)
yazgulen@mail.ru
Оценка микробного сообщества углеводородного шлама химического предприятия
«Казаньоргсинтез» позволила установить, что значительная часть (до 40%) культивируемых
микроорганизмов отхода представлена бактериями Pseudomonas stutzeri, поэтому штамм данного
вида был выбран в качестве объекта исследования.
Известно, что для бактерий данного вида характерен широкий спектр экологических ниш,
генетическая, морфологическая вариабельность и ряд биотехнологически ценных свойств:
возможность окислять различные органические соединения, для некоторых штаммов
продемонстрирована способность к нитрификации, денитрификации, деградации ароматических
соединений, фиксации атмосферного азота, резистентность к тяжелым металлам. Благодаря
уникальной пластичности генома псевдомонады способны адаптироваться к факторам
окружающей среды, в связи с этим оценка некоторых физиолого-биохимических особенностей
штамма бактерий Р. stutzeri, сформированных в условиях обитания в токсичных химических
отходах, явилась целью данной работы.
Для штамма P. stutzeri КОС6 наряду с широко распространенной способностью к деградации
моноароматических соединений, была выявлена и экспериментально подтверждена способность
утилизировать нафталин и его производные при культивировании штамма на жидкой минеральной
среде с ксенобиотиком в качестве единственного источника углерода и энергии. Кроме того,
деструкторские способности штамма P. stutzeri КОС6 сочетались с его галотолерантностью.
Исследуемый штамм демонстрировал рост при концентрации NaCl до 1,2 М, что позволяет отнести
его к умеренным галотолерантным бактериям. Присутствие нафталина в среде 1 г/л сужает
галотолерантность штамма до 0,5 М NaCl. Еще одним важным с точки зрения обитания в условиях
дисбаланса основных биогенных элементов (C:N) свойством выделенного штамма является
способность к биологической фиксации азота. Наряду с обнаруженными функциональными
генами (nif), азотфиксирующая активность штамма P. stutzeri КОС6, оцененная ацетиленовым
газохроматографическим методом (14,3 нмоль C2H4/ мл*ч-1), оказалась сопоставимой с таковой
истинных азотфиксаторов. P. stutzeri КОС6 можно считать уникальным представителем вида, так
как для него впервые продемонстрировано сочетание метаболических путей деградации нафталина
и фиксации молекулярного азота, а также умеренная галотолерантность, позволяющие ему
выживать в условиях сильного антропогенного загрязнения.
20
Микробиология и вирусология
структуру, были выбраны клубеньковые бактерии рода Rhizobium и фитопатогенные бактерии рода
Xanthomonas.
Целью работы явилось изучение разнообразия природных популяций бактерий родов
Rhizobium и Xanthomonas с помощью самостоятельно разработанной единой маркерной системы
бактериальной идентификации и диагностики.
Нами были разработаны маркерные ПЦР-системы на хромосомный hin-регион, специфичные
для клубеньковых бактерий рода Rhizobium и фитопатогенных бактерий рода Xanthomonas,
позволяющие изучить их на уровне вида - группы штаммов (подана заявка на патент рег. №
2011135461 от 25.08.2011 и 09.01.2013 получено положительное решение о выдаче). Также
предложен новый подход (saAFLP и hin-регион ПЦР) к изучению генетического разнообразия
данных родов бактерий на внутривидовом уровне, который превосходит аналоги по разрешающей
способности. Так нами показана эффективность разработанных техник ПЦР-фингерпринтинга при
оценке биоразнообразия штаммов рода Xanthomonas, поражающих рапс (Brassica napus) в России,
а на примере симбиотических систем Pisum satіvum и Vicia faba была обнаружена специфичность
генотипов ризобий во взаимодействии с растением-хозяином.
Данная работа проводилась в рамках договора о научном сотрудничестве между Институтом
биохимии им. А.Н. Баха и отделом микробиологии Института сельского хозяйства Крыма при
финансовой поддержке ООО “Гринвайд”.
ФИЗИОЛОГО-БИОХИМИЧЕСКАЯ И ТАКСОНОМИЧЕСКАЯ
ХАРАКТЕРИСТИКА АКТИНОМИЦЕТОВ, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ РАЗЛИЧНЫХ
РАЙОНОВ ТАТАРСТАНА
Алимова Ф.К., Болормаа Ч., Ибрагимов А.Н., Тухбатова Р.И.
Казанский (Приволжский) федеральный университет, Казань (Россия)
dysport@bk.ru
Актиномицеты являются наиболее экономически и биотехнологически ценными
прокариотами, которые способны производить широкий спектр биологически активных вторичных
метаболитов, такие как антибиотики, противоопухолевые средства, иммунодепрессанты и
ферменты. Эти метаболиты, как известно, обладают антибактериальным, противогрибковым,
противоопухолевым, противомалярийным и противовоспалительным действием.
Целью настоящей работы явилась физиолого-биохимическая и таксономическая
характеристика актиномицетов.
В ходе работы было выделено 268 изолятов актиномицетов из археологических объектов,
государственного Раифского заповедника, почв и агроценозов, антропогенных ландшафтов
Республики Татарстан. В ходе морфологической идентификации было выявлено 35 видов рода
Streptomyces. 9 видов были идентифицированы на основе данных секвенирования гена 16S рРНК.
Оценка принадлежности к определенным генетическим кластерам проводилась с использованием
депонированных последовательностей базы NCBI.
Применение консортивного подхода к изучению влияния растений и животных на
распространение позволило выявить виды, ассоциированные с ризосферой.
По полученным данным выделенные виды относятся к секции Cinereus сериям Achromogenes,
Chromogenes, Violaceus, Aureus, к секции Albus серии Albus, к секции Roseus серии Roseus, к секции
Helvolo-Flavus серии Flavusа.
По частоте встречаемости в почвах доминируют представители секции Cinereus серий
Violaceus, Achromogenes, Chromogenes, Albus.
Исследование антибиотической активности штаммов Streptomyces показало, что культура
S.achromogenes имеет высокую активность по отношению к исследованным бактериям.
Метаболиты этих штаммов подавляли рост всех исследованных тест-культур: как бактериальных
(зоны задержки роста - 13,0±0,5 - 21,0±0,5), так и грибных (19,0±0,6). Метаболиты S. olivovaribilis
обладали антимикробной активностью только по отношению к фитопатогенным бактериям и грибу
Fusarium oxуsporum (зоны задержки роста 19,0±0,6мм-21,0±0,5 соответственно). Таким образом,
данные виды в дальнейшем могут быть исследованы как возможные продуценты антимикробных
соединений.
21
Микробиология и вирусология
АНАЛИЗ МИКРОФЛОРЫ КИШЕЧНИКА СОБАК КРУПНЫХ ПОРОД В
ЗАВИСИМОСТИ ОТ РАЦИОНОВ ПИТАНИЯ
Иванова А.Ф., Ильина Л.А., Никонов И.Н., Нагорнова К.В., Латев Г.Ю.
ООО «БИОТРОФ», Санкт-Петербург (Россия)
an-21_86@mail.ru
В настоящее время рынок кормов для домашних животных предлагает огромный выбор
готовых сухих кормов, сбалансированных по питательным веществам, ориентированных на
удовлетворение максимальных потребностей животных. Важнейшим критерием выбора
оптимального корма, помимо физиологических и морфологических показателей, способствующим
оптимальному выбору продукта, является микрофлора кишечника. Необходимо отметить, что
важным условием при кормлении собак является сохранение микробиоценоза кишечника с целью
снижения риска возникновения и развития ряда патологических состояний, обусловленных
условно-патогенной микрофлорой.
Целью исследования являлось определение состава и структуры микрофлоры кишечника собак
с применением молекулярно-генетических методов анализа.
В эксперименте участвовали собаки породы «Среднеазиатская овчарка». Собаки получали
стандартный сухой полнорационный корм для взрослых собак с высокой активностью. В состав
рациона собак опытных групп вводили термостабильную форму ферментативного пробиотика
Целлобактерина-Т. Бактериальное сообщество кишечника изучали молекулярно-генетическим
методом оптимизированного для собак T-RFLP-анализа, включающего стадии выделения ДНК,
амплификацию ДНК, секвенирование.
Результаты исследований показали, что микрофлора кишечника собак в значительной степени
представлена некультивируемыми бактериями, молочнокислыми бактериями и бациллами. Наряду
с высоким содержанием полезных лактобактерий семейства Lactobacillaceae и бацилл семейства
Bacillaceae, практически не было зафиксировано бифидобактерий. Количество энтеробактерий
семейства Enterobacteriaceae у всех собак было низким. Обнаружены (в незначительных
количествах) представители бактерий семейства Clostridiaceae, бактероиды филы Bacteroidetes
(рода Bacteroides, Flavobacterium, Flexibacter, Cellulophaga, Prevotella), актинобактерии филы
Actinobacteria, и кампилобактерии (рода Helicobacter). Установлено, что ввод в рацион питания
пробиотика Целлобактерина-Т способствует повышению численности молочнокислых бактерий и
снижению и полному исчезновению условно-патогенных видов в микробиоценозе кишечника.
Таким образом, применение молекулярно-генетического метода определения микрофлоры на
основе T-RFLP-анализа позволяет выявить до 100% видов бактерий, обитающих в кишечнике
собак и определить влияние рационов на состав и структуру микробиоценозов кишечника.
23
Микробиология и вирусология
существенное влияние на способность молекулы в той или иной мере определять доступность
специфических сайтов связывания бактерий с макропартнером.
Таким образом, впервые выявлена концентрационная зависимость влияния флавоноидов на
свойства поверхности и макромолекулярную организацию ЛПС в структуре внешней мембраны
азоспирилл.
Работа выполнена при поддержке гранта РФФИ (проект 11-04-00533).
25
Микробиология и вирусология
Реконструировали биопленоки с использованием стерильных поликарбонатных фильтров,
которые помещали на поверхность агаризованной среды Е8 с гексадеканом. На фильтры наносили
30-50мкл биопленок, полученных вышеописанными способами. Чашки инкубировали при 280С в
течение 7 суток. Биопленки подвергали диспергированию в жидкой среде и высевали на плотную
среду, до получения чистых культур микроорганизмов. Таким образом, нами были получены
биопленочные микроорганизмы, представленные бактериями родов Rhodococcus и Bacillus.
27
Микробиология и вирусология
ВЫЯВЛЕНИЕ ЭФФЕКТОРОВ СИНТЕЗА БЕТА-ГАЛАКТОЗИДАЗЫ
БАКТЕРИЯМИ ARTHROBACTER SULFONIVORANS И ОПРЕДЕЛЕНИЕ СПЕКТРА
СИНТЕЗИРУЕМЫХ ИМИ ФЕРМЕНТНЫХ БЕЛКОВ
Костеневич А.А.
Институт микробиологии НАН Беларуси, Минск (Беларусь)
Bufo_bufo@tut.by
В качестве эффекторов синтеза рассматривались лактоза, являющаяся индуктором синтеза
бета-галактозидазы у большинства штаммов-продуцентов, глюкоза и галактоза как конечные
продукты гидролиза специфического субстрата, а также такие структурные аналоги лактозы как
мальтоза, мелибиоза, сахароза, трегалоза, целлобиоза и лактулоза.
Согласно полученным экспериментальным данным, максимальный положительный эффект на
образование фермента Arthrobacter sulfonivorans оказывает его природный субстрат – лактоза
(15,2 ед/мл)
Получены данные, свидетельствующие о различном влиянии глюкозы и галактозы – продуктов
гидролиза лактозы – на синтез бета-галактозидазы A. sulfonivorans в зависимости от их
концентрации и времени добавления в среду с лактозой. Показано, что галактоза, используемая в
высоких (1,5%) концентрациях, является более сильным, чем глюкоза, репрессором синтеза
ферментного белка. При этом установлено, что галактоза и глюкоза не влияют на активность бета-
галактозидазы.
Выявлен невысокий (0,05 ед/мл) уровень синтеза внеклеточного фермента также при
выращивании исследуемой культуры как в среде без углерода (0,05 ед/мл), так и в средах,
содержащих в качестве единственного источника углеводного питания структурные аналоги
лактозы – трегалозу (0,59-3 ед/мл), лактулозу (0,12-1 ед/мл), мелибиозу (0-0,8 ед/мл), сахарозу (0-
1,3 ед/мл), мальтозу (0,8-1,2 ед/мл), целлобиозу (0,07-0,83 ед/мл).
Полученные результаты дали основание предположить наличие у A. sulfonivorans
множественных молекулярных форм бета-галактозидазы.
Так, в бесклеточном фильтрате культуральной жидкости штамма A. sulfonivorans,
выращенного в среде с лактозой, выявлены по крайней мере две молекулярные формы
каталитически активной бета-галактозидазы – мажорная G-1 и минорная G-2. Причем их
количество не зависит от времени его внесения в среду. Доля выявленных молекулярных форм
фермента в общей массе внеклеточных белков бактерий в этом случае составляет около 30%.
На зимограммах внеклеточных белков, продуцируемых A. sulfonivorans в средах без источника
углерода, а также в средах, содержащих конечные продукты гидролиза лактозы или ее
структурные аналоги в качестве единственных источников углерода, обнаруживается только
минорная форма бета-галактозидазы. Эта же молекулярная форма ферментного белка, выявляется
также и в культуральной жидкости бактерий, растущих в средах с лактозой в условиях репрессии
глюкозой или галактозой.
Необходимы молекулярно-генетические исследования, на основании которых можно будет
сделать вывод о том, являются выявленные молекулярные формы бета-галактозидазы результатом
экспрессии различных генов или посттрансляционных модификаций ферментного белка.
30
Микробиология и вирусология
СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ПЛАНКТОННЫХ И БИОПЛЕНОЧНЫХ КЛЕТОК
КУЛЬТУРЫ ЦЕЛЛЮЛОЗОСИНТЕЗИРУЮЩИХ БАКТЕРИЙ
GLUCONACETOBACTER XYLINUS CALU 1629
Майкова А.С., Ткаченко А.А., Рыбальченко О.В.
Санкт-Петербургский государственный университет, Санкт-Петербург (Россия)
ann-maikova@yandex.ru
Грамотрицательные бактерии Gluconacetobacter xylinus рассматриваются в качестве модельной
системы для исследования биосинтеза бактериальной целлюлозы. По сравнению с растительной,
бактериальная целлюлоза обладает рядом значительных преимуществ и положительных свойств,
которые в настоящее время вызывают интерес у исследователей в связи с возможностью ее
практического использования.
Развивающаяся культура G. xylinus CALU 1629 представляет собой типичный пример
биопленки, формирующейся на границе раздела двух фаз жидкость-воздух. Известно, что клетки,
иммоболизированные в биопленку, и планктонные формы, содержащиеся в жидкой фазе, имеют
различный фенотип и могут отличаться по своим морфофизиологическим свойствам.
Целью настоящего исследования является сравнительный морфофизиологический анализ
планктонной и биопленочной формы клеток культуры целлюлозосинтезирующей бактерии G.
xylinus.
В ходе работы показано, что размножение и синтез целлюлозы клетками G. xylinus CALU 1629
происходит по-разному в зависимости от использования в качестве инокулята планктонных или
биопленочных клеток.
Выявлены различия планктонных и биопленочных клеток по морфологическим и
культуральным свойствам, по чувствительности к повышенной и пониженной температуре, рН и
NaCl, по способности к синтезу каротиноидных пигментов. Планктонные клетки обладают более
ярко выраженными адгезивными свойствами, более жизнеспособны при длительном хранении на
плотной питательной среде по сравнению с клетками из биопленок.
Электронно-микроскопическое исследование методом ультратонких срезов планктонных
клеток из жидкой фазы культуры показало, что на их поверхности образуются многочисленные
мембранные везикулы (блебинг-везикулы) различных размеров. В периплазматическом
пространстве таких клеток отмечено формирование электронно-плотных (осмиофильных) гранул,
по-видимому, белковой или белково-полисахаридной природы. На ультратонких срезах клеток из
биопленок подобные структуры не обнаруживались.
Таким образом, сравнительный анализ морфофизиологических свойств клеток G. xylinus
CALU 1629, образующих биопленки на границе раздела двух фаз жидкость-воздух, показал, что
существуют различия между планктонными и биопленочными формами клеток по
морфологическим и культуральным свойствам. Полученные данные оказались полезными для
оптимизации процесса получения бактериальной целлюлозы, поскольку подтверждают, что для
ускорения синтеза и повышения выхода целлюлозы целесообразно использовать инокулят,
содержащий преимущественно планктонные клетки. Полученные результаты свидетельствуют о
том, что качество инокулята необходимо учитывать как при решении экспериментальных задач,
так и в широкомасштабном производстве бактериальной целлюлозы.
32
Микробиология и вирусология
РОСТОСТИМУЛИРУЮЩЕЕ ДЕЙСТВИЕ ДЕЛЬТА-ЭНДОТОКСИНОВ BACILLUS
THURINGIENSIS
Мартьянова Д.И., Терёхина Л.Д., Ардисланова Э.Ш.
Ульяновский государственный университет, Ульяновск (Россия)
myoctopus@rambler.ru
В настоящее время все чаще говорят о применении биотехнологий в сельском хозяйстве.
Основная цель данной отрасли получение стойких жизнеспособных растений с хорошими
морфометрическими показателям и биомассой. Применение дельта-эндотоксинов Bacillus
thuringiensis один из наиболее экономически оправданных методов, из-за его относительно
простого и дешевого получения. Токсины являются безвредными для человека и эффективными в
борьбе с насекомыми и микроорганизмами, угнетающими развитие, рост и жизнь растений.
Целью исследования было изучить ростостимулирующее действие дельта-эндотоксинов
Bacillus thuringiensis и оценить его антибактериальное действие на бактерии Xanthamonas
campestris.
В работе применяли один из промышленных подвидов продуцента дельта-эндотоксинов
Bacillus thuringiensis ssp.kurstaki z-52. Тест-объектами служили фитопатогенные бактерии вида
Xanthomonas campestris. Изучали семена капусты огородной (Brassica oleracea L., 1753) – сорт
Номер первый Грибовский 147.
В исследовании рассматривались 5 вариантов опыта. В каждом варианте было по десять чашек
Петри. Повторность опыта трехкратная. В каждой чашке Петри было по 20 семян капусты
огородной. Опыт проводился в течение двух недель. По окончании опыта оценивали
морфометрические показатели капусты огородной. Все семена контрольных групп проросли.
Исследуемые проростки в среде с дельта-эндтоксинами концентрации 0,5% по всем
морфометрическим показателям превышали значения контрольных групп. Длина главного корня и
стебля оказалась больше в среднем на 45%. Растения в среде с суспензией возбудителя развивались
плохо. Корневая система развивалась плохо, стебель укорочен. Проростки в среде возбудителя и
токсина развивались динамично. Показатели длины корня стебля схожи с группам и
проращиваемыми в токсинах. В группах, в которых семена были предварительно обработаны
токсинами в течение трех часов, растения развивались хуже, чем при постоянной инкубации в
растворе дельта-эндотоксинов. Корневая система развита хорошо, но стебель укорочен. В
вариантах опыта, где постоянно присутствовал, дельта-эндотоксин развивались настоящие листья
капусты.
По результатам наших исследований, можно сделать вывод о том, что токсины малых
концентраций оказывают ростостимулирующее действие на растения и подавляют
инфицирующую способность бактерий.
33
Микробиология и вирусология
Бактериальное сообщество кишечника изучали молекулярно-генетическим методом
оптимизированного для птицы T-RFLP-анализа, включающего стадии выделения ДНК,
амплификацию ДНК, секвенирование.
Результаты исследований показали, что микрофлора кишечника бройлеров в значительной
степени представлена некультивируемыми бактериями. Установлено, что значительная часть
микроорганизмов кишечника бройлеров опытных вариантов представлена лактобактериями и
бациллами, обладающими высокой антагонистической активностью в отношении патогенных
микроорганизмов. Обнаружено, что ввод в рацион неферментированного и ферментированного
гидролизата из пера способствовало увеличению доли целлюлозолитических бактерий
(эубактерий, вейлионелл, руминококков) в 1,55 и 1,32 раза в тонком отделе кишечника, а введение
пробиотика в рацион ОР1 - в 1,14 раз. Установлено, что добавление в рацион
неферментированного и ферментированного белкового гидролизата из пера в сочетании с
пробиотиком (Целлобактерин-Т) способствало снижению уровня энтеробактерий (сальмонелл,
кишечной палочки, протеи) в тонком отделе кишечника бройлеров. Ввод в рационы бройлеров
неферментированного и ферментированного белковых гидролизатов из пера в сочетании с
Целлобактерином-Т способствовало снижению уровня актинобактерий и стафилококков в
кишечнике бройлеров по сравнению с контрольным вариантом.
Таким образом, замена рыбной муки на неферментированный и ферментиро-ванный
белковый гидролизат из пера при вводе в комбикорма Целлобактерина-Т позволяет получить не
только хорошую сохранность, высокую живую массу, но и оптимизировать микрофлору
кишечника бройлеров, снизив численность патогенных и условно-патогенных видов бактерий до
минимальных значений, и повысив численность полезной микрофлоры (молочнокислые и
целлюлозолитические бактерии).
35
Микробиология и вирусология
РОДОКОККИ КАК ОСНОВА ДЛЯ НЕФТЕОКИСЛЯЮЩЕГО БИОПРЕПАРАТА-
ФИТОСТИМУЛЯТОРА
Отрошко Д.Н., Козицын А.Е., Городисская Ю.В., Лень Н.В., Алексеенко К.П.,
Волченко Н.Н.
Кубанский государственный университет, Краснодар (Россия)
otroshko_dmitrii@mail.ru
Современные технологии биоремедиации основываются прежде всего на активности
специфических микроорганизмов-деструкторов, способных разлагать токсические поллютанты.
Среди бактерий, ассимилирующих углеводороды, перспективной группой являются представители
р. Rhodococcus, лежащие в основе ряда биопрепаратов. Целью нашей работы являлось изучение
следующих свойств нефтеокисляющих родококков коллекции кафедры генетики, микробиологии и
биотехнологии КубГУ: кинетика роста культур, возможность совместного жидкофазного
культивирования нескольких штаммов, продукция ими фитогормонов, возможность
флотационного отделения биомассы от среды роста. Способность к деструкции широкого спектра
нефтепродуктов в лабораторных и полевых условиях была показана сотрудниками кафедры ранее.
Микроорганизмы культивировались в колбах на орбитальной качалке и в ферментерё МФ-
100Т, входящим в состав модульного биотехнологического оборудования Ока-01 (производства
ИБП РАН, г.Пущино). Использовались различные варианты минеральных сред, углеводных и
углеводородных источников углерода.
Были исследованы 6 штаммов рода Rhodococcus, отличающихся по уровню гидрофобности
клеточной стенки и образующих колонии R-, S- и М-морфотипов. Из 15 бинарных комбинаций у
4 сочетаний наблюдался стимулирующий эффект, выраженный в лучшем росте, чем в
монокультурах. Оценка кинетических параметров роста этой комбинации родококков показала µ =
0,147 ч-1 и 0,378 ч-1 при культивировании бинарной культуры в колбах и ферментере
соответственно. Одним из наиболее энергоёмких этапов производства биопрепаратов является
отделение микробных клеток от водной среды роста. Оценивалась возможность флотирования
клеток, как дешевого и быстрого способа. Показано, что применение жидких флотирующих
агентов и барботажа воздухом позволяет удалить из среды роста до 90 и 75 % биомассы
соответственно.
В технологиях биоремедиации почв важнейшим критерием является восстановление их
плодородия, возможность культивирования растений, что лежит в основе этапа фиторемедиации.
Полезным свойством штаммов-нефтедеструкторов служит продукция ими фитогормонов.
Обнаружено, что среди исследуемых культур есть PGPR-штаммы, способные продуцировать
индолилуксусную кислоту при росте на сахарозе или гексадекане. Внесение триптофана как
метаболического предшественника увеличивало выход ауксина до 2 мг/мл. Всхожесть тест-
растений при обработке культуральной жидкостью увеличивалась на 30%.
Полученные результаты позволяют заложить научные основы для пилотного производства
нефтеокисляющего биопрепарата, обладающего фитостимулирующим эффектом. Исследования
выполнялись при поддержке госзадания Министерства образования и науки “Разработка научно-
обоснованных подходов к культивированию биотехнологически перспективных микроорганизмов-
нефтедеструкторов для создания регионально-адаптированных биопрепаратов”.
39
Микробиология и вирусология
АНТИМИКРОБНАЯ И АНТИАДГЕЗИВНАЯ АКТИВНОСТЬ ВНЕКЛЕТОЧНЫХ
МЕТАБОЛИТОВ NOCARDIA VACCINII ИМВ В-7405
Покора К.А., Пирог Т.П.
Национальный университет пищевых технологий, Киев (Украина)
khrystya91@ukr.net
Актуальной проблемой на сегодняшний день остается борьба с бактериозами
сельскохозяйственных растений, которая рассматривается как существенный вклад в решение
глобальных продовольственных проблем. Средствами биологического контроля над
фитопатогенами в сельском хозяйстве могут быть микробные поверхностно-активные вещества
(ПАВ). Эти продукты микробного синтеза обладают также антиадгезивными свойствами по
отношению к различным микроорганизмам, образующим биопленки на зубных протезах.
Цель данной работы – исследовать антимикробные и антиадгезивные свойства ПАВ, а также
других внеклеточных метаболитов Nocardia vaccinii ИМВ В-7405 по отношению к некоторым
бактериям и дрожжам.
Объектами исследований при определении антимикробных свойств были фитопатогенные
бактерии родов Pseudomonas, Xanthomonas и Pectobacterium, антиадгезивных – Escherichia coli
ИЭМ-1, Candida albicans Д-6. В исследованиях использовали такие препараты: препарат 1 –
супернатант культуральной жидкости содержащий ПАВ; препарат 2 – раствор ПАВ, выделенный
экстракцией смесью Фолча (из препарата 1); препарат 3 – водная фаза после экстракции ПАВ
смесью Фолча.
Установлено, что после обработки в течение 2 ч как препаратами поверхностно-активных
веществ с концентрацией 0,085 – 0,85 мг/мл, так и другими внеклеточными метаболитами N.
vaccinii ИМВ В-7405 количество клеток фитопатогенных бактерий родов Xanthomonas,
Pseudomonas и Pectobacterium снижалось на 95 – 100 %. Показано, что препарат 2 (0,12 мг/мл)
снижал количество прикрепленных на материале зубов и силиконовом базисе клеток E. coli ИЭМ-
1, C. albicans Д-6 на 80 – 90% по сравнению с необработанными препаратами ПАВ материалами.
Установлено, что даже при снижении концентрации ПАВ в препарате 2 до 0,032 мг/мл степень
адгезии исследуемых тест-культур оставалась на уровне 93%.
Таким образом, внеклеточные метаболиты штамма ИМВ В-7405 могут быть использованы как
эффективные антимикробные и антиадгезивные агенты.