AISlAMIENTO DE PARVOVIRUS PORCINO DE FETOS

MOMIFICADOS 8

ALFONSO FALCON N. b,e

MARTHA E. RODRIGUEZ V.e
DIODORO BATALLA C. d
JOSE CAMACHO M. e
ELiSEO HERNANDEZ B. d,e
ABEL CIPRIAI\I C. e,e

RESUMEN INTRODUCCION
Se trabajaron 26 fetos momificados de alrededor
de 70 dias de edad. Solo uno presento trtulos EI parvovirus porcino (PPV) es un
superiores a 1 :4096 con la prueba de hemoaglu­
tinacion (HAl. La prueba de inmunomicrosco­ agente con amplia distribuci6n en el
pia electronica revelo part Iculas virales de sime­ mundo, que produce fallas en la re­
tria icosahedrica de 25 ~~m de diametro. Se aislo
producci6n de fa cerda y se caracte­
el PPV en cultivos primarios de rinon fetal de
cerdos demostrado por el efecto citopatico V riza por muerte embrionaria y fetal
por pruebas de IHA en los sobrenadantes de sin signos cI fnicos de la madre 7 ,8 y
los cultivos celulares.
recilm se ha confirmado que PPV es
a. Recibido para su publicacion; 11 de diciembre causa comun de muerte fetal con
de 1987.
momificaci6n 14 •
b. Centro Experimental Pecuario de "Aldama",
Sector Pecuario INI FAP-SARH. Apdo. Postal
14, V. Aldama, Tamps. EI parvovirus porcino pertenece a
la familia PARVOVIRIDAE, tiene una
c. Coordinacion General de Investigacion V Estu­
dios de Postgrado, FES-Cuautitlan, UN AM_ cadena sencilla de acido desoxirribo­
Apdo. Postal 222, Cuautitlan Izcalli, Edo. de nuchHco (ADN) y es un virus desnudo
Mexico.
de simetria icosahedrica que mide de
d. Provecto de Rabia-Centro Nacional de Inves­
18 a 26 nm de diametro, es probable
tigaciones en Microbiologfa Sector Pecuario,
INIFAP-SARH, km. 15.5 Carr. Mexico-Toluca, que con 32 caps6meros; sus polipepti­
D.F.,05110. dos estructurales son por inmunolog(a
e. Provecto de Aujeszkv Centro Nacional de In­ indistinguibles 9 • Las propiedades he­
vestigacion en Microbiologia, Sector Pecuario,
moaglutinantes del virus son utilizadas
INIFAP-SARH, km. 15.5 Carr. Mexico-Toluca,
D.F. para realizar la prueba de hemoagluti­
Tee. Pee. Mex. Vol. 26, No.2 (1966)
185
naclon (HA) a partir de muestras de bumina serica bovina al 0.1% "SSF
organos colectadas de fetos momifica­ -AB"l S •
dos menores de 16 cms. de longitud 6 •
EI parvovirus porcino (PPV) y el
En Mexico, se ha detectado la pre­ antisuero homologo de referencia fue­
sencia del PPV en el 3.9% de los fetos ron proporcionados por el Dr. Hans
momificados colectados en rastros del Joo, de la Universidad de Minnesota,
Estado de Mexico por medio dela E U.A. Se utilizaron microplacas con
prueba de HA y microscop fa electro­ fondo en "U de 96 pozos, en cada
II

nica (ME)2.3, sin embargo, no se in­ pozo se colocaron 0.02 ml de SSF-AB

forma el aislamiento del virus, por 10 y en el primero se agrego 0.025 ml de
que el objetivo de este trabajo fue ais­ los sobrenadantes de h {gado 0 de pul­
tar e identificar por primera vez el mones y se realizaron diluciones do­
PPV a partir de fetos momificados bles de 1:2 hasta 1 :65, 536, luego se
en Mexico. efectuo una leve agitacion de las pla­
cas y se incubaron a 4 0 C durante 12 h.
MATERIAL Y METODOS La prueba de inhibicion de la hemo­
aglutinacion (lHA) se realizo de acuer­
Se trabajaron 26 fetos momifica­ do a Joo, Donaldson-Wood y John­
dos que fueron colectados (23) de son S •6 •
granjas y (3) del rastro de Ferrerfa,
D.F. Los fetos se lavaron y se midie­ Por otro lado, los sobrenadantes fue­
ron para determinar la edad de la ron tratados con eter y cloroformo
muerte (Fig. 1). Se tomaron el h {gado (volumen a volumen) y de acuerdo a
y los pulmones y se homogeneizaron la tecnica descrita por Vannier, Leu­
por separado con utilizacion de un tri­ nen y Tillon 1 6 , las muestras se incuba­
turador de tejidos TEN BROECK y ron a 40 C durante siete h con perlodos
una soludon salina fosfatada (pH 7.2) de agitacion de una hora y a conti­
completa de Dulbecco "SSF-D" en nuacion se les realizo la prueba de
una proporcion de 1: 10. Las celulas HA.
se destruyeron por medio de tres ci­
clos de congelacion (-700C) y descon­
gelacion (37 0C); la suspension se se­ Para la realizacion de la prueba
para por centrifugacion a 3000 X G de inmunoelectromicroscopfa (IME)
yel sobrenadante se almaceno a -700C. ,se utilizo una gota del antisuero de
Con estos sobrenadantes se realizaron PPV y una gota de la muestra sospe­
las pruebas de Hemoaglutinacion (HA) chosa, se incubo a 4 0C durante 12 h,
de acuerdo a Joo, Donaldson-Wood y despues se tineron con aeido fosfo­
Johnson 5 • Se utilizo una suspension tungstico al 1% y se observo en el
de globulos rojos de cobayo al 5% en microscopio electronico de transmi­
una solucion salina fosfatada con al­ si6n marca Jeol, modelo J EM-' OOS.

186
 FIG.l. Fetos momifieados. Arriba:Feto de 28 em
de longitud, de aprox. 100 dias de edad. Abajo:
Feto de 17 em de longitud, de aprox. 70 dfas de
edad. La ba rra representa 10 em.

CUADRO 1 Los sobrenadantes de las muestras

de pulman e h igado positivas a la HA
Titulo del HA e I HA obtenidos y a la IME se inoeularon en eultivos
en los sobrenadantes de los primarios de eelulas renales de fetos
eultivos eel ulares porcinos que fueron eoleetados del
Rastro de Ferrer fa del D. F. Los ri no­
nes fueron transportados en medio
Pasaje Titulo Titulo
de eultivo H LA (Gibeo), con antibia­
tieos (20,000 U I de penicilina/ml y
10 o o 2.0 mg de estreptomicina/ml). La
tripsinizacian se lIeva a cabo a tempe­
20 256 o ratura ambiente durante dos h, se ajus­
taron las eelulas y se eultivaron en
30 1,024 512
botellas de plastieo con medio de eul­
tivo H LA adieionado con 0.2 ml de

187
 FIG.2. Part!culas virales de simetr12
icosahedrica de aproximadamente 25 nm
de diametro. La barra representa 100
nm.

piruvato al 1.0%, 0.2 ml de L-gluta­ RESULTADOS

mina al 1.0%, 0.1 ml de bicarbonato
de sodio al 3.5% de suero fetal bovino, 1. Identificaci6n del parvovirus par
10,000 UI de penicilina/ml y 1.0 mg hemoaglutinaci6n. De los 26 fetos mo­
de estreptomicina/ml. mificados de alrededor de 70 d(as de
edad, s610 uno, que fue colectado en
Los monoestratos celulares obteni­ el rastro, fue positivo a la prueba de
dos tuvieron tres pasajes como mini­ HA con un titulo de 1 :32, 768 en hi·
mo y antes de infectarlos con PPV sos­ gado y de 1 :4, 096 en pulmon. Los
pechoso presentaron cerca del 50% de t(tulos se inhibieron hasta en 512
confluencia. Las celulas se infectaron cuando se trataron con un antisuero
con el virus durante 0.5 h a 37 0 C y se homologo y conservaron su capacidad
lavaron dos veces con SSF-D antes de hemoaglutinante cuando fueron trata­
adicionar medio fresco. Se incubaron dos con eter y cloroformo.
durante 48 h a 37 0 C, luego se realiza­
ron tres pases degos y a los sobrena­ 2. Identificacion del parvovirus por­
dantes se les realizo la prueba de HA cino por inmunoelectromicroscop(a.
y los monoeslratos celulares Sf::: tifieron La ll1it:roscopla electr6nica de trasllli·
con cristal violeta L4 • 7d 2.1 3. sian revelo part(culas virales de estruc­

188
FIG.3. Particulas virales de simetria icosahedrica,
aglutinadas con apt~suero de parvovirus porcino.
La barra representa 100 nm.
tura icosahedrica en las muestras de DISCUSION
h (gado V pUlmon tratadas con antisue­
ro homologo (Fig. 2 V 3), En este estudio se encontro que solo
uno de los 26 fetos momificados tra­
3. Aislamiento del parvovirus por­ bajados, presento alto titulo del PPV
cino. En los cultivos celulares de ri­ por 10 que estuvo involucrado en fallas
non de fetos porcinos se observo que de la reproduccion de la cerda 7 • 10 •
a partir del tercer pasaje ciego, las ce­
lulas presentaron vacuolizacion del Trabajos previos realizados en ras­
citoplasma despues del 60 V 70 d fa tros del area metropolitana de la Cd.
postinoculacion comparados con las de Mexico,2.3 demostraron la presen­
cel ulas sin infectar que conservaron cia del PPV en un 3.0% de fetos mo­
sus caracterlsticas normales. Ademas mificados. EI bajo porcentaje de PPV
presentaron corpusculos de inclusi6n encontrado en este tipo de muestras
intranucleares de color rojizo, cuando revela que otros agentes infecciosos V
se tifieron con cristal violeta. Los so­ no infecciosos que no fueron determi­
brenadantes obtenidos del segundo V nados en este trabajo, pueden estar
tercer pasaje ciego presentaron tltu­ presentes 7 .1 5 •
los de HA de 256 V 1,024, que se
inhibieron en el segundo pasaje a cero Las dificultades en el aislamiento
V del tercer pasaje a 512 cuando se del virus pueden atribuirse a que: el
trataron con un antisuero homologo. PPV requiere de cultivos primarios
/

189

------------- --------- -----_..... _ - - - ­

de celulas en constante multi plica­
cion,1,13 0 a que tal vez las particu­
las virales procedentes de tejidos mo­
mificados estaban cerca de la inacti­
vacion 11.
Desde hace ailos, los problemas de:
abortos, mortinatos, reabsorciones
embrionarias, defectos teratologicos y
momificaciones fetales se les han aso­
ciado a diferentes agentes infecciosos.
Sin embargo, a pesar de que el PPV es
la causa comun de las momificaciones
fetales 14, la magnitud del parvovirus
porcino no es bien conocido en nues­
tro paiS, de ah( la importancia de to­
mario en cuenta en el diagnostico dife­
rencial de los problemas de fallas de la
reproduccion en la cerda.
SUMMARY
Twenty six mummified pig fetuses were studied.
The fetuses corresponded approximately to 70
days of gestation; from them, only one had hemag­
glutinating titres higher than 1:4096. The immuno­
electronmicroscopy test showed viral particles of
Icosahedral simetry of 25 nm diameter. Porcine 10. MENGE LING. W.L., 1978. Prevalence of a
parvovlrus was isolated in primary fetal swine
kidney cells form the HA positive mummified fetus
as evidenced both by citopathic effect and a positive
hemagglutination-inhibition test with a known
antiserum using the cell culture supernatants.
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