Rev Cubana Farm 1998;32(2): 88-92

Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos

FORMULACIÓN Y ESTUDIO DE ESTABILIDAD

DE ACETILCOLINA 20 mg, LIOFILIZADO PARA SOLUCIÓN
OFTÁLMICA
Dinorah Granda Cortada1 y Arturo Serrano Pérez2

RESUMEN
Se desarrolló la formulación y la tecnología de fabricación de acetilcolina 20 mg, liofilizado
para solución oftálmica, producción nacional, con el objetivo de sustituir importación del
producto comercial. Se presentó el estudio de estabilidad del producto, realizado por el
método acelerado y corroborado por el estudio de vida de estante, según el método de
análisis reportado en la USP XXIII. Se demostró que el medicamento tiene la calidad farma-
céutica requerida para este tipo de preparaciones estériles y cumple con todas las especifi-
caciones de calidad de la USP XXIII. Se obtuvo una fecha de vencimiento por el método
acelerado de 3 años a temperatura ambiente, lo cual fue comprobado en el estudio de vida de
estante.

Descriptores DeCS: ACETILCOLINA; QUIMICA FARMACEUTICA; ESTABILIDAD DE

MEDICAMENTOS; LIOFILIZACION; VENCIMIENTO DE LOS MEDICAMENTOS;
CALIDAD DE LOS MEDICAMENTOS; SOLUCIONES OFTALMICAS.

La acetilcolina es un trasmisor Los fármacos de esta clase no deben

químico que presenta un amplio rango de
acciones en el organismo; sus acciones
muscarínicas fundamentales son la
actividad depresora del sistema
cardiovascular y la actividad vasodilatadora
en áreas vasculares periféricas. Estimula
el nervio vago y el sistema nervioso
parasimpático. Entre sus acciones
nicotínicas más relevantes se encuentran
la actividad estimulante del músculo
esquelético, los ganglios autónomos y la
médula adrenal.1,2
administrarse por vía intravenosa o
intramuscular porque se pierde la selecti-
vidad y aumenta la incidencia de efectos
adversos y tóxicos.3,4 En la actualidad la
acetilcolina sólo se emplea en la aplica-
ción ocular local de ciertas intervenciones
quirúrgicas del segmento anterior del ojo,
para producir miosis instantánea y de una
duración aproximada de 10 a 15 min, sin
ocurrencia significativa de efectos
tóxicos.4 Desde el punto de vista químico,
el cloruro de acetilcolina es un polvo

1
Licenciada en Ciencias Farmacéuticas. Aspirante a Investigadora.
2
Licenciado en Química. Aspirante a Investigador.

88
 blanco muy delicuescente y en solución
acuosa se descompone fácilmente por el
calor, los ácidos y los álcalis;5,6 de acuerdo
con estas características, la forma
farmacéutica más idónea para este fármaco
es el producto liofilizado.
El presente trabajo tiene como objeti-
vos fundamentales el desarrollo de la for-
mulación de acetilcolina 20 mg, liofilizado
para solución oftálmica de producción na-
cional, que reúna los requisitos de calidad
exigidos para esta forma farmacéutica, y el
estudio de estabilidad por el método ace-
lerado, mediante la técnica analítica repor-
tada en la USP XXIII, para obtener un pro-
nóstico de la fecha de vencimiento del me-
dicamento, corroborada mediante los estu-
dios de vida de estante.
MÉTODOS
Se elaboraron 3 lotes de acetilcolina
cloruro 20 mg, liofilizado para solución
oftálmica, identificados como E-068, E-122 y
E-123, para lo cual se utilizaron las materias
primas acetylcholine chloride (lote
874332, Alemania) y manitol (Merck,
Alemania) de acuerdo con el esquema
tecnológico abreviado siguiente:
- Disolver la acetilcolina y el manitol en
una cantidad adecuada de agua estéril
para inyección.
- Ajustar el pH.
- Enrasar con agua para inyección y ho-
mogeneizar. Corroborar el pH.
- Filtrar por membrana esterilizante de 0,2 µm.
- Dosificar 2 mL de la solución filtrada
en bulbos y colocar los tapones.
- Liofilizar con los parámetros de
liofilización previamente establecidos.
La producción se realizó en un área
limpia convencional, en la cual se tomaron
todas las medidas de asepsia y desinfección
necesarias.7,8 La liofilización se efectuó en
una liofilizadora Edwards, modelo L-40
(Reino Unido). La membrana filtrante
empleada fue Sartorius, acetato de celulosa
0,22 µm. Se usó un pHmetro Metrohm AG
(Suiza), calibrado con tampones de pH 4,0
y 7,0 de la misma firma.
89
89
Se emplearon bulbos de vidrio trans-
parente de calidad hidrolítica II con capa-
cidad adecuada, tapones de espiga de goma
para liofilizar y sellos de aluminio
anodizados. La dosificación de los bulbos
se realizó en un flujo laminar horizontal
GELAIRE (Italia), clase 100. Los análisis
de control de la calidad del producto ter-
minado se efectuaron según la monogra-
fía del producto terminado de la USP
XXIII.9 La determinación del contenido de
manitol se realizó por la Farmacopea
Mexicana.10
En el estudio de estabilidad se con-
feccionó un diseño analítico y un programa
de muestreo periódico para evaluar las
muestras colocadas a diferentes condicio-
nes de temperatura: 40, 50, 60 y 70 °C en
hornos Memmert y a temperatura ambien-
te, según el método de envejecimiento
acelerado. El método analítico empleado
para la valoración del principio activo fue
reportado en la USP XXIII, 9 el cual
demostró ser específico para cuantificar
el fármaco en presencia de sus productos
de degradación.
Se empleó un cromatógrafo líquido de
alta resolución, un sistema de par iónico y
detección por índice de refracción
KNAUER (Alemania); se utilizó una sus-
tancia de referencia (SR) para realizar los
cálculos por el método del estándar exter-
no. Inicialmente se valoró la concentración
del principio activo. Todos los análisis se
hicieron por triplicado. El procesamiento
de los datos y los cálculos se realizaron
por el método y la ecuación de Arrhenius
para la predicción de la fecha de
vencimiento mediante métodos cinéticos
con la ayuda del programa ARRHEN.11-13
Se efectuó la comprobación de la vida
útil del medicamento durante un período
de 4 años posteriores a la fecha de
fabricación para los lotes analizados, así
como las características organolépticas del
producto terminado, de la solución
reconstituida y la acidez.
RESULTADOS
Desde el punto de vista organoléptico
se obtuvo para los 3 lotes un producto
liofilizado blanco, uniformemente dis-
puesto en el fondo del bulbo, el cual se
reconstituyó con 2 mL de agua para inyec-
ción, ocurriendo la disolución inmediata
del sólido y formando una solución clara,
transparente, libre de partículas sin
disolver. Los 3 lotes analizados
cumplieron con los requisitos de calidad
de la USP XXIII: identificación, contenido
de agua, acidez, valoración de acetilcolina,
uniformidad de contenido y contenido de
manitol, así como en lo referente a la
esterilidad y la apirogenicidad. Los límites
especificados en la Farmacopea para la
valoración del principio activo son del 90
al 115 %.
En la tabla 1 se muestran los resulta-
dos de las determinaciones realizadas a las
diferentes temperaturas evaluadas en fun-
ción del tiempo. El orden de la reacción
se determinó por el método de la vida
media, ya que por el método gráfico el
programa no sugirió alternativas. Por el
método de la vida media se tomó como 0
el orden de la reacción. Se obtuvo un
gráfico de la ecuación de Arrhenius log K
vs. 1/T, con un coeficiente de correlación de
0,9703 y una energía de activación = 24,0 kcal/
mol. La ecuación de la recta obtenida fue log
K = 15,5462 - 5,244 x 1/T. Los resultados ob-
tenidos se representan en las figuras 1 y 2. Al
extrapolar los resultados a temperatura
ambiente (25 °C) se obtuvo una predicción
de 3,1 años de vida útil. En la tabla 2 se
muestran los resultados de la vida de es-
tante, los cuales corroboran el estudio ace-
lerado. No se observaron cambios en las
características organolépticas del
liofilizado y de la solución reconstituida
en el tiempo estudiado.

TABLA 1. Concentración de acetilcolina* en función del tiempo a 40, 50, 60 y 70 °C para el lote E-068

Temperatura (° C)
40 50 60 70
Conc. Tiempo Conc. Tiempo Conc. Tiempo Conc. Tiempo
(%) (d) (%) (d) (%) (d) (%) (d)

101,2 0 101,2 0 101,2 0 101,2 0

100,4 2 99,8 2 102,0 2 94,5 2
101,5 6 98,4 21 88,5 12 76,3 12
99,0 21 96,6 32 68,1 32 55,1 32
99,3 40 90,5 40 62,3 40 48,8 40

TABLA 2. Resultados de la valoración del principio activo y la acidez en el tiempo. Vida de estante

Tiempo
Inicial 1 año 4 años
Acidez Valoración Acidez Valoración Acidez Valoración
Ensayo (mL de NaOH) (%) (mL de NaOH) (%) (mL de NaOH) (%)

E-068 0,43 101,20 0,46 98,58 - -

E-122 0,35 100,73 0,38 99,12 0,40 100,2
E-123 0,36 100,65 0,34 100,0 0,39 102,2

Límites de la acidez: no más de 0,5 mL de NaOH 0,01 N.

90
 USP XXIII al cabo de los 40 d para las tem-
11 0
peraturas de 50, 60 y 70 °C; durante este
10 0 tiempo se produce una degradación apre-
90 ciable del medicamento por efecto de la
Concentración (%) temperatura. En la figura 1 se presentan las
80
isotermas obtenidas en función de la
70 temperatura para el ensayo E-068 y como
puede apreciarse, los valores obtenidos se
60
ajustan a la linealidad y demuestran que el
50 orden de la reacción ha sido seleccionado
40 adecuadamente.
0 10 20 30 40 En la tabla 2 se puede observar que el con-
0
Tiem po (días)
0 0 0
tenido de acetilcolina (%) se mantiene dentro
4 0C 50C 60 C 7 0C
de los límites establecidos por la USP XXIII
FIG 1. Concentración vs. tiempo a 40, 50, 60 y 70 °C
para el lote E-068.
(90-110 %), incluso a los 4 años posteriores
a la fecha de fabricación del inyectable. La
22 acidez obtenida en los ensayos evaluados
20
durante el estudio de vida de estante se
mantiene dentro de los límites (no más de
18
lo gk + 2 x 1 0

0,5 mL de NaOH 0,01 N), lo cual indica

16
que el producto de degradación ácido es infe-
14 rior al 10 %.
12 Por la corta vida media del principio acti-
10 vo en solución y el hecho de que para la aplica-
8 ción ocular se indica desechar la solución no
empleada, no se estudió la estabilidad del fár-
6
2 ,9 0 2 ,9 5 3 ,0 0 3 ,0 5 3 ,1 0 3 ,1 5 3 ,2 maco en solución, sino la observación de las
1/T x 1 000 características organolépticas y la acidez.
En conclusión, la tecnología de fabrica-
FIG 2. Ecuación de Arrhenius. Acetilcolina cloruro
20 mg, lote E-068. ción y la formulación de acetilcolina 20 mg,
liofilizado para solución oftálmica, permite
DISCUSIÓN obtener un medicamento que cumple con
todos los requisitos de calidad farmacéu-
Los resultados que se muestran en la tica según la USP XXIII. El inyectable ob-
tenido tiene buena estabilidad, 3 años a
tabla 1 demuestran que el método acelera-
temperatura ambiente, la cual ha sido co-
do es idóneo para la predicción de la fecha
rroborada mediante el estudio por vida de
de vencimiento del producto. Los valores estante. Todo lo anterior garantiza la
de concentración de acetilcolina ( %) no exitosa sustitución del similar comercial
cumplen los límites especificados por la de importación.

SUMMARY
The formulation and manufacturing technology of acetylcholine 20 mg, lyophilized for
opthalmic solution, of national production, was developed aimed at subtituting the import of
the commercial product. The product’s stability study conducted by the accelerated method

91
91
 and corroborated by the shelf life study was presented according to the method of analysis
reported in the USP XXIII. It was demonstrated that the drug has the pharmaceutical quality
required for this type of sterile preparations and that it fulfils all the quality specifications of
the USP XXIII. An expiration date was obtained by the accelerated method of 3 years at
ambient temperature, which was proved in the shelf life study.

Subject headings: ACETYLCHOLINE; CHEMISTRY, PHARMACEUTICAL; DRUG

STABILITY; FREEZE DRYING; DRUG EXPIRATION; DRUG QUALITY; OPHTHALMIC
SOLUTIONS.

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Versión 2.0. 1993. (Programa Computadorizado).

Recibido: 29 de noviembre de 1998. Aprobado: 12 de enero de 1998.

Lic. Dinorah Granda Cortada. Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos. 19 de Mayo No. 13 esquina
a Amézaga, municipio Plaza de la Revolución, Ciudad de La Habana, Cuba.

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